Reporte No.

6
Determinacin de protena por el mtodo de
Biuret.

Centro de Ciencias Bsicas.

Departamento de Qumica.
Academia de Bioqumica.
Lic. Anlisis Qumicos Biolgicos.

Materia: Bioqumica I
Profesor: M.C. Javier Martnez Rodrguez.
Alumnas:
Joselyn Georgina Flores Ibarra.
Dulce Mara Palos Dueas.
Alejandra Ramos Hernndez.

Fecha: 05/Octubre/2017
OBJETIVO
Determinar espectrofotomtricamente la concentracin de la protena en una solucin
problema, usando la curva estndar (curva patrn o de calibracin).
INTRODUCCIN
Las protenas son cadenas polipeptdicas que se diferencian de los oligopptidos en el
nmero de aminocidos que contienen, en su carcter funcional y sobre todo en que son el
resultado del proceso de expresin gentica. La conformacin de una protena hace
referencia a la disposicin espacial de la misma, aspecto de vital importancia, pues va a
estar directamente relacionado con la funcin que desempean. Segn su conformacin
las protenas pueden clasificarse en fibrosas y globulares. Las protenas fibrosas poseen
las cadenas polipeptdicas ordenadas de modo paralelo a lo largo de un eje, forman
materiales fsicamente resistentes e insolubles en agua, siendo elementos bsicamente
estructurales como por ejemplo la -queratina del pelo, la fibroina de la seda o el colgeno
de los tendones. Por su parte, las protenas globulares, estn constituidas por una o varias
cadenas polipeptdicas plegadas de modo que puedan adoptar una conformacin esfrica
o globular, desempeando diferentes funciones, entre ellas:
Protenas transportadoras (mioglobina)
Catalizadores (enzimas) protectora (anticuerpos)
Receptoras de seal (rodopsina)
Reserva (albumina)
La conformacin que presenta una protena va a depender directamente de los distintos
niveles estructurales que posee, pudindose observar hasta cuatro niveles estructurales,
denominados estructura primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria.( Garrido,2006).
Las protenas son un grupo de biopolmeros constituidos de aminocidos que exhiben una
amplia gama de estructuras y funciones. Las protenas como un grupo de biomolculas,
desempean una gran variedad de funciones, algunas participan en la contraccin muscular
y sirven para dar soporte estructural, otras trasportan y almacenan molculas pequeas.
Los anticuerpos (molculas que sirven para como proteccin inmunolgica) son protenas
al igual que las enzimas (catalizadores biolgicos) y algunas hormonas. Las protenas
pueden llevar a cabo funciones tan diversas por la enorme posibilidad de combinaciones
en la composicin y secuencia de aminocidos.
Las protenas tambin se clasifican segn su composicin, las que se forman solo de
residuos de aminocidos y no tienen otras biomolculas son PROTENAS SIMPLES; no
todas las protenas son solubles en agua, de hecho las protenas insolubles son esenciales
para dar soporte y mantener la integridad estructural de las clulas y organismos.
La determinacin cuantitativa de la concentracin de protenas es una de las pruebas que
ms frecuentemente deben hacerse en el laboratorio de bioqumica. Primitivamente, la
cantidad de protenas se evaluaba midiendo la cantidad total de nitrgeno proteico, y
teniendo en cuenta que este elemento representa aproximadamente el 16% del peso de
una protena. Este era un mtodo largo y laborioso y con poca sensibilidad. La aparicin de
mtodos calorimtricos ha permitido solventar estos dos inconvenientes.
Existen diversos mtodos que permiten cuantificar la concentracin de protenas presente
en muestras biolgicas, basados especficamente en las propiedades que muestran las
protenas en solucin. Los mtodos ms usuales son: Compuestos que tienen dos o ms
uniones peptdicas (pptidos y protenas) al reaccionar con el reactivo de Biuret (sulfato de
cobre alcalino) se forma un complejo de color prpura. Este color es el resultado de la
coordinacin de los tomos de nitrgeno del enlace peptdico con el Cu+2. La intensidad
del color y la cantidad de producto depende de la concentracin de protenas. Este mtodo
es reproducible pero poco sensible. El rango de sensibilidad de este mtodo es de 0,25
200 mg de protenas por mL de solucin, y el tiempo que toma realizar la prueba es de
aprox 20-30 min y el mtodo de lowry que es un mtodo ms sensible que el de Biuret
pudiendo detectar muy bajas concentraciones (hasta 5 ug). El principio de la deteccin es
el mismo que el de Biuret con la diferencia en que se utiliza un segundo reactivo: la solucin
de Folin Ciocalteau (fosfomolbdato-fosfotungstato) en un medio cprico alcalino, el cual
se le agrega para incrementar la intensidad del color. Este incremento en la intensidad se
debe a la reduccin del reactivo Folin Ciocalteau por los residuos de tirosina y triptofano
presentes en las protenas. El producto coloreado de la reaccin es leda en un
espectrofotmetro a 750 nm.( Herrera,2003).
Mtodo de Biuret
El nombre de la reaccin procede del compuesto coloreado formado por la condensacin
de dos molculas de urea con eliminacin de amonaco, por lo tanto detecta la presencia
de compuestos con dos o ms enlaces peptdicos y sirve para todas las protenas y pptidos
cortos.
Al formar complejos los iones cpricos con los enlaces peptdicos de las protenas se
produce un color violeta-morado bajo condiciones alcalinas. La absorbancia del color
producido es leda a 540 nm. La intensidad del color (absorbancia) es proporcional al
contenido proteico de la muestra. Permite la determinacin de protenas totales y albmina
srica. El fraccionamiento salino separa la albmina de las globulinas.
Es importante elaborar una curva estndar de concentracin vs. Absorbancia utilizando
albmina de suero de bovino (BSA) o de un estndar para la comparacin con la muestra
bajo estudio.
Ventajas del mtodo de Biuret
Menos costoso que el mtodo de Kjeldahl.
Rpido (se puede completar en menos de 30 min).
Es el mtodo ms simple de anlisis de protenas.
No es frecuente encontrar derivaciones de color.
Pocas substancias no proteicas interfieren con la reaccin de Biuret.
No detecta nitrgeno de fuentes no proteicas o no peptdicas.
Desventajas del mtodo de Biuret
No es muy sensible comparado con el mtodo de Lowry.
Requiere, al menos, 2 a 4 mg de protena por prueba.
Las concentraciones altas de sales de amonio y glicerol interfieren con la reaccin.
Puede ocurrir opalescencia en la solucin final si estn presentes altas
concentraciones de lpidos o carbohidratos.
 MATERIALES REACTIVOS
6 Tubos de ensaye de 18x150nm Solucin patrn de protena
1 Gradilla para tubos de ensaye Solucin de NaCl al 0.9%
1 Pinzas para tubo de ensaye Reactivo de Biuret
1 Bao Mara Solucin Problema
1 Pipeta 1 mL
1 Celdilla de plstico de 3.5 mL
1 Espectrofotmetro

PROCEDIMIENTO

1. Preparar los tubos de 2. Calentar los tubos en

3. Enfriar los tubos con
ensaye como se indica el bao mara (50 C)
agua corriente.
en la tabla anexa. durante 10 minutos.

5. Determinar la
4.Calibar el absorbancia a 540nm de
6. Determinar la
espectofotmetro de cada uno de los tubos
absorbanciaa a 540 nm
cero de absorbancia a que contienen
concentraciones del tubo problema (tubo
540 nm usando el tubo
6)
blanco (tubo 1). conocidas de protenas
(tubos del 2-5).

7. Tabule las
concentraciones de las
protenas (mg/ML) de
los tubos 2-5 con sus
respecivas
absorbancias.

RESULTADOS
Tabla 1 resultados de las concentraciones obtenidas de protena en cada tubo y las absorbancias
determinadas por el espectrofotmetro

No. de Concentracin
Absorbancia
Tubo Protena
1 0 mg 0
2 2 mg 0.086
3 4 mg 0.144
4 6 mg 0.202
5 8 mg 0.371
6 2.94 mg 0.156
Tabla 2 Curva patrn de protenas expresados a travs de una grfica de regresin lineal, el punto naranja
muestra en donde se encuentra el tubo problema.

Curva Patrn de Protena

0.4

0.35 y = 0.0858x - 0.0968

R = 0.9485
0.3

0.25
Absorbancia

0.2

0.15

0.1

0.05

0
0 1 2 3 4 5 6
-0.05
Concentracin de la protena (mg/ml)

Clculos para la obtencin de la concentracin de la protena de la solucin problema a

partir de la ecuacin de la recta.
Y=0.0858X-0.0968
Y=Absorbancia=0.156

X= 0.156-0.0968 = 2.94
0.0858

1 2 3 4 5 6

Ilustracin 1 En la imagen de muestran los tubos con diferentes concentraciones de protenas, se puede
observar como la intensidad de la coloracin va en aumento del tubo 1 al tubo 5, adems de como en el tubo 6
la coloracin es baja, mostrando entre cuales concentraciones se podra encontrar.
DISCUSIONES
JOSELYN GEORGINA
La presencia de protenas en una mezcla se puede determinar mediante la reaccin del
Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solucin acuosa alcalina (gracias a la
presencia de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin de un compuesto de color
violeta, debido a la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los
pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces
peptdicos. La reaccin debe su nombre al Biuret, una molcula formada a partir de dos de
urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la ms sencilla que da positiva esta reaccin, comn a
todos los compuestos que tengan dos o ms enlaces peptdicos consecutivos en sus
molculas
La producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ya que se debe a la
presencia del enlace peptdico (- CO- NH -) que se destruye al liberarse los aminocidos.
Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado, se forma una
sustancia compleja denominada Biuret. Debido a dicha reaccin fue que observamos que
al agregar el reactivo de sulfato de cobre ms solucin de protena precipit una coloracin
violeta. Quedando en el fondo del tubo una tonalidad azul cielo reaccin positiva.
Precipitando a una coloracin amarilla la reaccin nos torna negativa al no haber presencia
de protenas.
El mtodo evaluado en el presente trabajo se basa en la reaccin de Biuret. En un
experimento anterior donde se us el mtodo de Biuret con desproteinizacin, los autores
observaron que la intensidad del color del complejo protena-Biuret era similar para las
diferentes fracciones proteicas.
El complejo se basa en la descomposicin de los grupos amida para formar el enlace de
cobre (II) o por el establecimiento de un enlace coordinado entre el metal y los pares e
electrones libres de los tomos de oxgeno y de nitrgeno del pptido. El mtodo de Biuret
es la tcnica ms simple para la determinacin de las protenas solubles. Las sustancias
que poseen dos o ms enlaces peptdicos forman un complejo coloreado purpura con sales
de cobre alcalinos. El desarrollo del color es diferente para cada protena. Existen
pocas interferencias en esta determinacin: entre las que ms se encuentran la presencia
del ion amonio el cual altera el desarrollo del color, algunos pigmentos absorben a la misma
longitud de onda algunos carbohidratos y lpidos capaces de formar complejos con el ion
coordinado.
Efectivamente, aplicando el mtodo Biuret se puede determinar la concentracin de
protena en una o varias muestras problema. El mtodo de Biuret es el ms utilizado para
la cuantificacin de protenas, es un mtodo rpido, sencillo y eficiente, y sobre todo
didctico Es importante conocerlo puesto que en la vida profesional puede ser til, ya que
como una carrera de investigacin, es posible enfrentarse a trabajar con la presencia de
soluciones de concentraciones desconocidas para saber cmo se deben manejar. Una
manera fcil concisa para conocer la concentracin de la protena es por medio de anlisis
como este. En el mtodo de Biuret, con el uso de la espectrofotometra es posible conocer
las concentraciones de la muestra problema, esto comparando con la grfica que se
construye a partir de las absorbancias ledas, entonces se reforz la construccin de curvas
de calibracin relacionando la absorbancia y la concentracin, y a partir de esto se pudo
identificar por medio de la interpolacin, la concentracin de la muestra problema.
DULCE MARA
Para la determinacin de de protenas, que en este caso fue la albumina de huevo se us
el mtodo de Biuret el cul segn Pratt C. Cornely K. (2012) El mtodo comprende un
ensayo colorimtrico de un paso donde se cuantifica la formacin de un complejo estable
entre protenas y cobre (II). El complejo presenta un color violeta caracterstico, que se
puede observar a 310nm o 540-560nm, el cual se da por la coordinacin de un tomo de
cobre con cuatro tomos de nitrgeno. El complejo se basa en la desprotonacin de los
grupos amida para formar el enlace con el cobre (II) o por el establecimiento de un enlace
coordinado entre el metal y los pares de electrones libres de los tomos de oxgeno y de
nitrgeno del pptido. Despus de la adicin del reactivo de cobre se requiere de tiempo
para desarrollar una coloracin de Biuret estable; es necesario considerar la posible
influencia de aminocidos libres que forman buffer en configuracin tris y amoniaco. Se
basa en la formacin de un complejo coloreado entre el Cu 2+ y los grupos NH de los enlaces
peptdicos en medio bsico. 1Cu 2+ se acompleja con 4 NH. La intensidad de coloracin es
directamente proporcional a la cantidad de protenas (enlaces peptdicos) y la reaccin es
bastante especfica, de manera que pocas sustancias interfieren. La sensibilidad del
mtodo es muy baja y slo se recomienda para la cuantificacin de protenas en preparados
muy concentrados.
De acuerdo con lo anterior y sabiendo que la albumina de huevo al ser protena contiene
carios grupos aminos los cuales se pueden desprotonar y as el nitrgeno enlasarce con el
ion Cu2+ y as formar el complejo estable para posteriormente por medio de la colorimetra
espectrofotometra las cuales dependen una de la otra determinar la concentracin de la
protena en cada una de las muestras por medio del color que tomo cada una de las
muestras. Entre mayor era la intensidad del color azul que llego a ser purpura la muestra
con mayor concentracin de albumina mayor eran los iones de cobre que normalmente son
azules que se enlazaban con el nitrgeno e intensificando el color de la muestra y as por
medio de las longitudes de onda de los colores emitidos por el complejo, y la absorcin de
estas longitudes de onda, se determina la concentracin de sta protena por medio del
espectrofotmetro.
Es as como con ayuda de las muestras con valores conocidos, el espectrofotmetro que
nos da valores de absorcin, y por la de la curva patrn de la protena, se pudo obtener el
valor de concentracin de la albumina de la muestra problema, la cual los valores de
absorcin se enconraba entre la muestra 2 y 3, que con lo ya las ayudas mencionadas se
logr calcular su concentracin la cual fue de 2,94 mg/mL de solucin, comprobando as
que efectivamente se encuentra entre estas muestras, comparando tambin con sus
concentraciones (vase en la seccin de resultados).
Todo lo dicho del espectrofotmetro, la absorbancia, las longitudes de onda y todo lo
mencionado en los dos prrafos anteriores, se justifica brevemente en la siguiente cita.
El espectrofotmetro1 es un instrumento con el que se apoya la espectrofotometra para
medir la cantidad de intensidad de luz absorbida despus de pasar a travs de una solucin
muestra. Un espectrofotmetro es un instrumento usado en el anlisis qumico que sirve
para medir, en funcin de la longitud de onda, la relacin entre valores de una misma
magnitud fotomtrica relativos a dos haces de radiaciones y la concentracin o reacciones
qumicas que se miden en una muestra. Este instrumento tiene la capacidad de proyectar
un haz de luz monocromtica a travs de una muestra y medir la cantidad de luz que es
absorbida por dicha muestra. Esto le permite al operador realizar dos funciones:
a) Dar informacin sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra,
 b) Indicar indirectamente qu cantidad de la sustancia que nos interesa est
presente en la muestra.
(Escalona M. 2009)
ALEJANDRA
El objetivo de la prctica fue determinar la concentracin de protena de una solucin
problema, usando una curva estndar y realizando la determinacin de dicha concentracin
espectrofotomtricamente
Durante la primera sesin de laboratorio se llev a cabo la parte experimental, que consisti
en aplicar el mtodo de Biuret con el fin de obtener varios pares de datos que seran
graficados posteriormente en la segunda sesin. Los pares de datos consistan en la
absorbancia de una determinada muestra, la cual dependa de la concentracin de la
protena albumina srica en dicha muestra.
Algunos mtodos de determinacin de protenas se basan en que las protenas dan
reacciones de color con algunos reactivos, como el mtodo de Biuret. Garrido (2006), indica
que en el mtodo de Biuret, el nombre de la reaccin procede del compuesto coloreado
formado por la condensacin de dos molculas de urea con eliminacin de amonaco, por
lo tanto detecta la presencia de compuestos con dos o ms enlaces peptdicos y sirve para
todas las protenas y pptidos cortos.
El reactivo empleado en este mtodo es una solucin de sales de cobre, generalmente
sulfato de cobre, el mtodo se basa en la formacin de un complejo coloreado entre el Cu2+
y los grupos NH de los enlaces peptdicos en medio bsico. Al formar complejos los iones
cpricos con los enlaces peptdicos de las protenas se produce un color violeta-morado
bajo condiciones alcalinas. La absorbancia del color producido es leda a 540 nm y la
intensidad del color es proporcional al contenido proteico de la muestra (libro, X). La
informacin anteriormente mencionada concuerda con lo observado durante la prctica,
puesto que para llevar a cabo el mtodo de Biuret, se prepararon 6 tubos de ensaye
agregando a cabo tubo cantidades diferentes de la solucin patrn de protena, solucin de
cloruro de sodio y el reactivo de Biuret, excepto en los tubos 1 y 6, en el tubo 1 no se agreg
solucin patrn de protena debido a que este tubo sera el tubo blanco y el tubo 8,
contena un mililitro de la solucin problema de albumina srica, sin agregar de la solucin
patrn de dicha protena. Agregar cantidades diferentes de la solucin patrn de protena
se realiz con la finalidad de producir en cada tubo, una concentracin conocida de protena
en cada tubo, pero de diferente valor. A cada uno de los 6 tubos se les agregaron 3 mililitros
del reactivo de Biuret, dando cada tubo una intensidad del color violeta-azulado diferente,
tal como se menciona en la teora. Posteriormente los tubos fueron calentados a 50C
durante 10 minutos, y despus de enfriar los tubos, se procedi a leer la absorbancia de
cada tubo con el espectrofotmetro. Se calibro el espectrofotmetro a 540 nm usando el
tubo 1, debido a que este tubo no contena protenas. Las concentraciones de protena en
los tubos fueron de 2, 4, 6 y 8 mg/mL, mientras que las absorbancias ledas en el
espectrofotmetro por el equipo de trabajo fueron 0.086, 0.144, 0.202, y 0.371,
respectivamente, mientras que la muestra problema presento una absorbancia de 0.156.
Se utilizaron los datos de las concentraciones de protena con cada una de sus
absorbancias ledas para graficarlas y, a partir de estas, poder realizar la curva estndar.
Debido a que en el mtodo de Biuret, la intensidad de coloracin es directamente
proporcional a la cantidad de protenas (enlaces peptdicos) se utiliz este principio para
poder realizar una grfica en la que en el eje de las abscisas se coloc la concentracin de
la protena, debido a que esta es la variable independiente, en el eje de las ordenadas, se
coloc la absorbancia de las muestras, debido a que esta variable depende del valor de la
concentracin de protena en la muestra. La grafica se realiz de una manera sencilla
utilizando el software Excel, en el cual solo se tabularon los datos para cada una velas
variables y al seleccionar la opcin de grfica, el programa arroj la grfica
automticamente.
Analizando el valor de la concentracin de la muestra problema obtenido en base a la curva
de calibracin, el cual fue de 2.94 mg/mL, este valor no se aleja mucho del valor de la
concentracin real de la protena, lo que nos indica que el mtodo de Biuret es un mtodo
til para la determinacin de la concentracin de protenas en una solucin problema. Las
posibles discrepancias entre los valores experimentales y el valor real de la concentracin
de la protena se pudieron deber principalmente a errores de la medicin de la absorbancia,
pues durante la prctica se realiz la medicin de dicha variable en dos ocasiones al mismo
tubo y con la misma muestra, y sin embargo, en ambas mediciones el espectrofotmetro
arrojo valores diferentes, aunque cercanos los valores unos de otros, estos valores no
fueron idnticos.
CONCLUSIONES
JOSELYN GEORGINA
Es importante el anlisis de protenas para: la determinacin de la actividad biolgica en
alimentos ejemplos: pectinasas durante la maduracin de frutos; investigacin sobre
propiedades funcionales. Ejemplos: gliadina y gluteninas para la elaboracin del pan; para
el etiquetamiento nutricional del producto final, etc. Existe una gran necesidad del anlisis
de protenas con el fin de obtener el contenido proteico total, composicin de aminocidos
contenido de alguna protena particular, contenido proteico durante el aislamiento y
purificacin de una protena, nitrgeno no proteico y valor nutritivo relacionados con un
alimento especfico a analizar. El mtodo de Biuret es bastante especfico para protenas,
muestra pocas interferencias y es barato, pero tiene poca sensibilidad.
DULCE MARA
En esta prctica se logr determinar la concentracin de protena de una solucin problema
con ayuda de las muestras con valores conocidos, el espectrofotmetro que nos da valores
de absorcin, y por la de la curva patrn de la protena, se pudo obtener el valor de
concentracin de la albumina de la muestra problema, la cual los valores de absorcin se
encontraba entre la muestra 2 y 3, que con lo ya las ayudas mencionadas se logr calcular
su concentracin la cual fue de 2,94 mg/mL de solucin, comprobando as que
efectivamente se encuentra entre estas muestras, comparando tambin con sus
concentraciones. As como el uso de este aparato, la elaboracin de la curva y el uso de
datos que nos proporcionan estas tcnicas, tanto como sus clculos y usos de estas, la
importancia que tiene en el rea laboral y estudiantil de un AQB, sobre todo el rea clnica,
as como tambin se conocieron alternativas de este mtodo de determinacin, sus
ventajas, desventajas, su mecanismo y la forma de trabajo junto con el del mtodo aplicado
en esta prctica; la funcin, utilizacin, importancia y mecanismo con el que se maneja y
trabaja un espectrofotmetro, y todo lo que se lleva en la tcnica de anlisis llamadas
colorimetra y espectrofotometra.
ALEJANDRA
El objetivo de la prctica se cumpli satisfactoriamente, ya que se logr determinar
espectrofotomtricamente la concentracin de protena de una solucin problema usando
una curva patrn o curva de calibracin. Se determin la concentracin de protenas en una
solucin problema, interpolando los datos obtenidos durante la prctica para obtener la
concentracin de esta solucin, tambin se calcul la concentracin de protenas
despejando de la ecuacin de la recta proporcionada por el profesor de laboratorio que en
lo personales result ser lo ms fcil y conveniente, los datos manejados para determinar
la concentracin fueron los obtenidos y al sustituirlos se obtuvo una concentracin de
protenas ms exacta.
Se aprendi tambin a construir una curva de calibracin, y a partir de ella interpolar datos
e interpretar la forma de sta.
CUESTIONARIO
1. Investigue y escriba con detalle la reaccin bioqumica de Biuret.
El reactivo de Biuret est hecho de hidrxido potsico (KOH) y sulfato cprico
(CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC4O64H2O). El reactivo, de
color azul, cambia a violeta en presencia de protenas, y vira a rosa cuando se
combina con polipptidos de cadena corta. El Hidrxido de Potasio no participa en
la reaccin, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar. El
mtodo comprende un ensayo colorimtrico de un paso donde se cuantifica la
formacin de un complejo estable entre protenas y cobre (II). El complejo presenta
un color violeta caracterstico, que se puede observar a 310nm o 540-560nm, el cual
se da por la coordinacin de un tomo de cobre con cuatro tomos de nitrgeno. El
complejo se basa en la desprotonacin de los grupos amida para formar el enlace
con el cobre (II) o por el establecimiento de un enlace coordinado entre el metal y
los pares de electrones libres de los tomos de oxgeno y de nitrgeno del pptido.
Despus de la adicin del reactivo de cobre se requiere de tiempo para desarrollar
una coloracin de Biuret estable; es necesario considerar la posible influencia de
aminocidos libres que forman buffer en configuracin tris y amoniaco. Se basa en
la formacin de un complejo coloreado entre el Cu 2+ y los grupos NH de los enlaces
peptdicos en medio bsico. 1Cu 2+ se acompleja con 4 NH. La intensidad de
coloracin es directamente proporcional a la cantidad de protenas (enlaces
peptdicos) y la reaccin es bastante especfica, de manera que pocas sustancias
interfieren. La sensibilidad del mtodo es muy baja y slo se recomienda para la
cuantificacin de protenas en preparados muy concentrados.

(Roca P. et. al. 2004)

2. Explique detalladamente el fundamento de la cuantificacin de un analito cualquiera
mediante espectrofotometra. Utilice el mtodo de Biuret como ejemplo en su
explicacin.
Si observamos una disolucin acuosa de Cu2+ a trasluz percibimos un color
azulado. Esta coloracin se debe a la interaccin de los iones cobre con la radiacin
 lumnica que atraviesa la disolucin. Ms concretamente, se debe a la absorcin de
algunas radiaciones lumnicas que corresponden al color complementario (en este
caso el amarillo). Las radiaciones no absorbidas son las que atraviesan la disolucin
sin obstculo alguno y llegan a nuestro ojo. En nuestro ejemplo, estas radiaciones
transmitidas corresponden al color azul. Una solucin roja absorbe la luz verde y
transmite o refleja la luz roja. En ausencia de luz, las sustancias no tienen color.
Siguiendo con el ejemplo de la solucin de cobre, si comparamos el color de dos
disoluciones de Cu2+ con diferente concentracin, observamos que a mayor
concentracin corresponde una mayor intensidad de color azul de la disolucin. Por
lo tanto podemos saber la concentracin de la sustancia segn la intensidad del
color. Esta propiedad de la interaccin de la luz con una gran cantidad de especies
qumicas nos permitir identificar y cuantificar analitos, dando lugar a una rama de
la qumica analtica denominada espectrofotometra. La espectrofotometra estudia
los fenmenos de interaccin de la luz con la materia (Arenas I. Lpez J. 2004)
3. Describa con figuras, imgenes y texto las diferencias y similitudes entre un
fotocolormetro y un espectrofotmetro.
Estos son equipos utilizados en el Laboratorio para el anlisis de muestras
fisiolgicas, basndose en el principio que cada compuesto qumico absorbe o emite
energa lumnica de diferente longitud de onda. Esta longitud puede estar en el
espectro de luz visible, o en otra parte del espectro electromagntico.
La diferencia fundamental entre un espectrofotmetro y un fotmetro o
fotocolormetro, consiste en que el fotocolormetro trabaja nicamente en el espectro
de luz visible y selecciona una longitud de onda determinada mediante filtros fijos.
En cambio, un Espectrofotmetro es capaz de trabajar, no solo con la luz visible sino
que en otras regiones del espectro electromagntico (ultravioleta e infrarroja).
Adems posee un monocromador para seleccionar la longitud de onda deseada.

(Equipos y Laboratorio. 2015)

4. Investigue y explique los fundamentos de los siguientes mtodos de cuantificacin
de protenas en muestras bilogicas:
a) Mtodo de Lowry
Combina la reaccin del Biuret con la reduccin del reactivo de FOLIN-
CIOCALTEAU por los grupos aromticos de residuos de tirosina, triptfano,
cistina cistena e histidina. Origina compuesto azul intenso Mide a 750nm.
b) Mtodo de Bradford
Se basa en la unin del reactivo Comassieblue G250 a las protenas en medio
cido. Reconoce los aa arginina, fenilalanina, triptfano y prolina. Origina color
azul intenso A=595nm
c) Mtodo de Kjeldahl
El mtodo Kjeldahl se basa en la transformacin del nitrgeno contenido en la
muestra en sulfato de amonio mediante la digestin con cido sulfrico en
 presencia de un catalizador. El ion amonio obtenido se transforma en medio
bsico en amonaco que se destila y valora con una solucin de cido patrn.
d) Mtodo de Dumas
eterminar el contenido en nitrgeno de una sustancia qumica. Se basa en un
mtodo inicialmente descrito por Jean-Baptiste Dumas en 1826.1k Se usa
comnmente para estimar el contenido de protenas de los alimentos. Los otros
componentes mayoritarios como grasas y carbohidratos y otros compuestos
estructurales como la lignina no contienen nitrgeno, pero los aminocidos de
las protenas si. Otras sustancias como las vitaminas tambin contienen
nitrgeno, pero son una parte muy pequea y tienen una influecia insignificante
en el resultado del anlisis.(Del Puerto M. 2013)
BIBLIOGRAFA
Garrido, A y Teijn, J. M. 2006. Fundamentos de bioqumica estructural. 2 edicin.
Madrid:Tbar. pp 157-160.
Herrera, C., Bolaos, N y Lutz, G. 2003. Qumica de alimentos. Manual de
laboratorio. 1edicin. Son Jos, Costa Rica: Editorial de la Universidad de Costa
Rica. pp 79-82
%20PARA%20LA%20CUANTIFICACI%C3%93N%20DE%20PROTE%C3%8DNA
S.pdf
Pratt, Charlotte W., and Cornely, Kathleen. Bioqumica. Mxico, D.F., MX: Editorial
El Manual Moderno, 2012.
Escalona Moreno, Ivn. Bioqumica. Crdoba, AR: El Cid Editor | apuntes, 2009.
ProQuest ebrary.
Roca, Pilar, Oliver, Jordi, and Rodrguez, Ana Mara. Bioqumica: tcnicas y
mtodos. Madrid, ES: Editorial Hlice, 2004
Arenas I. Lpez J. METODOS DE LABORATORIO. Maestra en ciencias
bioqumicas. INSTITUTO DE BIOTECNOLOGA. UNAM. Mxico. 2004
(Equipos y Laboratorio. 2015)
http://www.equiposylaboratorio.com/sitio/contenidos_mo.php?it=1027
Del Puerto M. BIOQUMICA. Determinacin de protena. EMA. Mxico. 2013.