3,3-Diamino-4,4-dihidroxiarsenobenceno.

Sntesis 1.

El 3-amino-6-hidroxiazobenceno (I) es obtenido de anilina diazotisada y 4-monoacetilaminofenol.

Una suspensin de 21.32g de azo-compuesto en 1500mL de agua a 80C es trada a una solucin
por la adicin de 35mL de cido clorhdrico y diazotisada con 100mL de solucin de nitrito de
sodio. El lquido es vaciado a una solucin de 500mL al 10% de arsenito de sodio, 750mL de
solucin normal de hidrxido de sodio, y 1200mL de agua. La mezcla es agitada rpidamente,
desarrollndose lentamente nitrgeno; se requieren tres horas para completar la reaccin.
Despus de veinticuatro horas, se aade cido clorhdrico hasta que el producto es alcalino,
entonces la masa es acidificada con cido actico, calor hasta ebullicin, y el producto es filtrado
mientras esta caliente. Se aade cido clorhdrico al filtrado hasta que el cido se convierte en rojo
Congo, cuando, se enfra, el cido 4-hidroxi-3-bencenazofenilarsinico (II) es separado.

Este es purificado por filtracin y secado, luego se disuelven 16g en una solucin de 45g de
bicarbonato de sodio en 800mL de agua, se calienta a 65C, se filtra y se pasa por dixido de
carbono, que precipita la sal monosdica en placas de brillo bronce desde el filtrado. Esta sal se
convierte en el cido libre mediante HCl en solucin de metanol, y el producto se recristaliza en el
metanol diluido. Para reducir la acidez, 6.4g son suspendidos en 100mL de agua y se disuelven por
la adicin de 22mL de solucin normal de carbonato de sodio. 25g de hidrosulfito de sodio y 7g de
cloruro de magnesio en 150mL de agua son aadidos y luego todo se calienta a 60C, se agita, y se
pasa dixido de carbono. El azo-compuesto se descompone y la mezcla se decolora, luego el 3,3-
diamino-4,4-dihidroxiarsenobenceno (III) se separa como un precipitado voluminoso y amarillo.
Cuando se completa la reduccin, la base cruda se separa por filtracin en una atmsfera de
dixido de carbono y se suspende mientras est todava hmeda en alcohol metlico, pasando a la
solucin soluciones de anilina y de cido sulfuroso. La base se disuelve ahora en un 10% de cloruro
de hidrgeno y alcohol metlico en una atmsfera de dixido de carbono hasta que se vuelve
dbilmente cida a rojo Congo, luego la solucin se vierte en una corriente fina en ter seco,
cuando se precipita el diclorhidrato. Este se separa por filtracin, se lava con ter y se seca en un
desecador en una atmsfera de dixido de carbono.

Sntesis 2.

El p-Nitro-o-aminofenol (I) en solucin de cloroformo que contiene piridina, es condensado con etil
cloroformato danto el uretano (II). La reduccin de este por hidrosulfito alcalino resulta en p-
amino-o-carbetoxiaminofenol (III), su diazotisacin y adicin de arsenito de sodio produce cido 3-
carbetoxiamino-4-hidroxifenilarsinico (IV). Este compuesto se cristaliza en agua como agujas
incoloras, se descompone alrededor de los 200C, es soluble en alcohol, escasamente soluble en
agua fra e insoluble en ter, benceno y cloroformo. El cido hipofosforoso reduce IV al uretano de
la base requerida V. El uretano es un producto amarillo plido fcilmente soluble en lcali diluido,
poco soluble en cidos, insoluble en ter, benceno y cloroformo. Con el lcali concentrado da sales
escasamente solubles. Por hidrlisis alcalina en una atmsfera de hidrgeno se convierte el
uretano en base Salvarsan (VI)

Sntesis 3.

Otro mtodo de obtencin del Salvarsan y el ms usado en general depende de la reduccin del
cido 3-nitro-4-hidroxifenilarsino. Esto puede llevarse a cabo directamente o en etapas,
obtenindose el cido 3-amino-4-hidroxifenilarsnico y el 3-amino-4-hidroxifenilarsenoxido en
caso de reduccin progresiva. El siguiente es un mtodo de reduccin directa, especialmente
diseado para evitar el uso de alcohol metlico y ter, que son fisiolgicamente peligrosos e
inflamables:

A 220 gramos de cloruro de magnesio y 1100 gramos de hidrosulfito sdico/diotonita

sdica/Na2S2O4 en 5500 mL de agua se aade cido 3-nitro-4-hidroxifenilarsnico (85 gramos), en
290 mL de hidrxido de sodio 2N y 1700 mL de agua, adicin. La mezcla se mantiene por debajo de
40 C. Y cuando la materia en suspensin parece estar a punto de asentarse, el lquido se filtra
rpidamente y la solucin se mantiene a 50 a 60 C. Durante unas dos horas. El
diaminodihidroxiarbenzeno amarillo se separa y se lava con agua helada, se suspende en 400 ml de
agua y se disuelve mediante la adicin de aproximadamente 150 ml de hidrxido sdico 2 N,
mantenindose los materiales a 0C durante el proceso. La solucin, despus de filtrar a travs un
filtro anaerbico, se mezcla con 150 ml de cido clorhdrico (1: 1), despus se diluye con 1700 mL
con agua destilada helada. De esta solucin el clorhidrato se precipita por agitacin en 3250 ml de
cido clorhdrico (1: 1), el producto obtenido se seca a vaco sobre cloruro clcico e hidrxido
sdico. Despus de doce horas, se introduce hidrgeno en el desecador de vaco para igualar la
presin. El Salvarsan se tritura y se seca nuevamente hasta obtener un peso constante,
obtenindose un rendimiento de aproximadamente el 75%.

La reduccin directa del cido 3-nitro-4-hidroxifenilarsnico por medio de hidrosulfito sdico. En

una solucin acuosa constantemente agitada (13 litros) de cloruro de magnesio cristalizado (513 g)
e hidrosulfito sdico/diotonita sdica/Na 2S2O4 (2950 g del 80%), se introduce lentamente una
solucin fra del cido arsnico anterior (197 g = 0.75 mol) en agua (4.5litros) y suficiente sosa
custica (135mL solucin) para formar una sal disdica, y reduccin completa efectuada mediante
agitacin vigorosa a 55-60 C durante 1h: 30min a 2 horas.

Se deja sedimentar el precipitado amarillo resultante de la base de arsfenamina, se extrae el

lquido sobrenadante, se transfiere el residuo a embudos de succin y se lava con agua destilada
en una atmsfera de gas inerte hasta que los lavados ya no presentan reaccin cida. Luego se
aspira lo ms seco posible, se prensan sobre placas porosas y finalmente se secan al vaco sobre
cido sulfrico. El 3,3'-diamino-4,4'-dihidroxi-arsenobenceno crudo est contaminado con ceniza
mineral y pequeas cantidades de compuestos arsnicos que contienen azufre, la mayor parte de
los cuales se elimina cuando la base se convierte en su diclorhidrato.

Ehrlich ha afirmado que el cloruro de magnesio utilizado en combinacin con el hidrosulfito de

sodio en la reduccin anterior limita la formacin de compuestos de arsnico-azufre.

Segn la modificacin de Kober, se permite que la mezcla del cido arsnico y las soluciones de
hidrosulfito se mantenga a temperatura ambiente o se calienta en un bao de agua a 40C hasta
que la suspensin formada por primera vez parece aglutinar y est a punto de asentarse cuando
est Se filtra rpidamente, y el filtrado se digiere en un bao de agua a 50-60 C durante 2h-
2h:30min.
Otro mtodo consiste en hervir el cido 3-nitro-4-hidroxifenilarsnico (20 g) con cido
hipofosforoso al 25% (100 ml) y cido actico glacial (70 ml), redisolviendo el precipitado de 3,3'-
dinitro-4,4'-dihidroxialenobenceno por ir aadiendo yoduro de potasio (12 g) y finalmente
precipitando la base de arsfenamina por neutralizacin con sosa. Este mtodo puede modificarse
por ebullicin del cido arsnico anterior (20 g) con 100 ml de agua, 60 g de cido fosforoso
cristalino, 80 ml de cido actico glacial y 20 g de yoduro de potasio.

El mismo compuesto nitro puede reducirse en etapas sucesivas formando primero el cido 3-
amino-4-hidroxifenilarsnico, despus el xido de 3-amino-4-hidroxifenilarsino y finalmente la
base de arfenamina. Se aade amalgama de sodio (28.8 g de Na al 4%) a una solucin del xido de
arsino (4.98 g) en agua (30 ml) y cido actico al 2N (32 ml), y el conjunto se agita de vez en
cuando a temperatura ambiente. Cuando se ha utilizado completamente la amalgama, se realiza
una adicin adicional de 25 ml de cido 2N-actico y 28.8 g de amalgama de sodio y se repite el
tratamiento anterior hasta que se completa la reduccin, como se muestra comprobando una
porcin del filtrado con hidrosulfito sdico (prueba del hudrosulfito para arsfenamina). El
precipitado es disuelto en 60mL de alcohol metlico, la cantidad calculada de cido clorhdrico
metil-alcohlico al 0.75molar es aadida, y el hidrocloruro de salvarsn es precipitado aadiendo
ter a la solucin filtrada; el precipitado se colecta y seca al vaco o en una atmsfera inerte, el
rendimiento terico es del 56-82%. Se descompone y ennegrece a 185-195C

El arsinxido anterior tambin puede reducirse con cido hipofosforoso exactamente de la misma
manera que el correspondiente cido nitroarsnico.

El cido 3-amino-4-hidroxifenilarsnico produce el compuesto arseno puro directamente al

calentar con cido hipofosforoso y una pequea cantidad de yoduro de potasio a 60 C durante
dos horas en una atmsfera de dixido de carbono y precintando con un ligero exceso de 10%
Solucin de carbonato sdico.

Finalmente, la base de arsfenamina se obtiene condensando 3-amino-4-hidroxifenilarsina con una

cantidad equimolar de 3-amino-4-hidroxifenil-fenol-xido en solucin de cido clorhdrico etil-
alcohlica.

Sntesis 4.

El ltimo mtodo para reducir el cido 3-nitro-4-hidroxifenilarsnico a Salvarsan es someter el cido

a electrlisis en presencia de cido clorhdrico, usando un ctodo de mercurio, y llevando a cabo la
operacin en dixido de carbono. Segn que el cido clorhdrico est por encima o por debajo de
4.7 N, se produce Salvarsan o clorhidrato de 3-amino-4-hidroxifenilarsina.

El cido 3-nitro-4-hidroxifenilarsnico puede reducirse tambin mediante zinc y cido actico a una
temperatura de 25 a 35 C, y luego en solucin de cido clorhdrico a 50 hasta 60 C, en presencia
de una pequea cantidad de cido sulfuroso. Este ltimo parece impedir que la reduccin vaya
ms all del arsenocompuesto. Usando cido 3-amino-4-hidroxifenilarsnico, la reduccin tambin
puede realizarse fcilmente como sigue:

Se disuelven 5 gramos del aminocido en una solucin que contiene 25 mL de cido hipofosforoso,
25 mL de agua y 0.1 g de yoduro de potasio la solucin, despus se calienta a 60 C en una
atmsfera de dixido de carbono durante dos horas, se enfra, se hace ligeramente alcalino con
carbonato de sodio acuoso al 10%, se elimina el precipitado y se lava bien con agua. La base as
obtenida se convierte en el hidrocloruro por medio de cloruro de hidrgeno metilalcohlico, se
precipita con ter seco, se filtra y se seca a vaco. Rendimiento, 3-7 gramos.

Un procedimiento anterior consisti en reducir el cido 3-amino-4-hidroxifenilarsnico al 3-amino-

4-hidroxifenilarsenoxido, saturndolo con dixido de azufre y mezclndolo con 3-amino-4-
hidroxifenilarsina en alcohol y cido clorhdrico, precipitndose el arsenobenceno. Ms
recientemente, se airea el hidrocloruro de 3-amino-4-hidroxifenilarsenoxido, obtenido a partir del
cido arsnico correspondiente por reduccin en una solucin de cido clorhdrico con yoduro de
hidrgeno y dixido de azufre para eliminar el dixido de azufre. El licor se reduce luego con cido
hipofosforoso y el clorhidrato de Salvarsan precipitado por vertido en cido clorhdrico (1: 1).

Otro punto de partida en la preparacin de Salvarsan es el cido p-dimetil-aminofenilarsinico. El

cido (23.5 gramos) se pulveriza finamente y se suspende en 300 mL de cido actico glacial y 9.8g
de cido ntrico al 62% aadido a temperatura ambiente, obtenindose una solucin completa. Se
aaden unos 20 mL de anhdrido actico y en pocos segundos el conjunto solidifica hasta una masa
cristalina, con evolucin de calor. Despus de permanecer una hora en el bal de hielo, los cristales
se filtran a menudo y se lavan con ter. Rendimiento, 20 gramos. La recristalizacin en agua
produce placas amarillas brillantes de cido 3-nitro-4-dimetilaminofenilarsnico.

Este compuesto se transforma en cido 3-nitro-4-hidroxifenilarsnico calentando 12 gramos con

30mL de hidrxido sdico al 40% a 85 C. por tres a cuatro horas. La mezcla se diluye luego con 70
gramos de hielo y se acidifica con 25mL de cido clorhdrico, separndose rpidamente el cido
requerido. La reduccin puede entonces llevarse a cabo mediante uno de los procedimientos
anteriores.

El 3,3'-diamino-4,4'-dihidroxialenobenceno es un polvo amarillo plido, soluble en hidrxidos

alcalinos acuosos como hidrxido sdico, insoluble en carbonato de sodio acuoso, enteramente
soluble en agua, bicarbonato de sodio, cido sulfrico diluido, cido clorhdrico diluido o ter. Se
precipita de una solucin alcalina por neutralizacin con cidos o por dixido de carbono, por esta
razn una solucin alcalina de arsfenamina se vuelve turbia al quedar expuesta al aire. En
teraputica se utiliza en forma de su diclorhidrato, que tiene una frmula aproximada a
C12H12O2N2As2, 2HCl, 2H2O.

Preparado de acuerdo con el mtodo anterior en el que no se usa alcohol metlico o ter, los
especmenes muy puros son prcticamente incoloros y no se funden cuando se calientan
lentamente, pero oscurecen gradualmente a partir de 160 C y a 180 C comienzan a carbonizar.

Cuando se humedece con agua, el compuesto se vuelve amarronado y se disuelve en 5 partes de

agua para formar un gel o una solucin gelatinosa, de acuerdo con la temperatura. Se disuelve
fcilmente en agua caliente o tibia, es ligeramente soluble en alcohol metlico, escasamente
soluble en alcohol etlico e insoluble en ter o benceno. Cuando se usan alcohol metlico y ter en
la preparacin de Salvarsan, este ltimo puede contener alcohol metlico en una cantidad que vara
de 0 a 1.4%, y cuando se precipita a partir de una solucin de alcohol metlico con acetona, el
producto contiene una proporcin molecular de acetona. Se ha demostrado que las preparaciones
de alcohol metlico contienen dos molculas de agua de cristalizacin. El derivado diacetil resulta
cuando se reduce el cido 3-acetilamino-4-hidroxifenilarsinico.
El Salvarsan comercial siempre contiene una cierta proporcin de azufre, que no est indicado en
la frmula dada, diferentes especmenes que muestran de 0.4 a 3%, de acuerdo con el mtodo de
preparacin. Se ha demostrado que el Salvarsan preparado a partir de un aminocido tiene el
contenido de azufre ms bajo, a partir de un nitrocido en las condiciones ms favorables un
contenido de azufre ligeramente superior, mientras que a partir de un nitrocido en las
condiciones menos favorables el contenido de azufre es el ms alto A partir de estas observaciones
es obvio que el azufre debe ser introducido durante la reduccin del compuesto nitrohidroxi a
travs del agente reductor empleado. La reduccin del nitro-grupo mediante hidrosulfito de sodio
es extremadamente rpida y no es fcil de controlar, pero se ha demostrado que la formacin de
productos con alto contenido de azufre no se debe a las impurezas en el hidrosulfito de sodio
comercial.

Por lo tanto, se sugiri que el azufre en Salvarsan podra estar presente como un sulfocido, y este
es realmente el caso. El sulfocido principal presente es 3:3'- diamino -4:4'- dihidroxi -5
-sulfosarsobenceno

Oxidacin de Salvarsan. Aunque el arsenobenceno slido se combina con el oxgeno tan

vigorosamente que frecuentemente explota, esta propiedad disminuye en los derivados sustituidos
del arsenobenceno, y Salvarsan, Salvarsan sodico, Salvarsan Glucido y Salvarsan plata adsorben
slo una pequeo proporcin de oxgeno. Este gas se absorbe cuantitativamente cuando los
productos se calientan suavemente al vaco. El diclorhidrato de Salvarsan es extremadamente
estable hacia el oxgeno atmosfrico, pero la adicin de lcali conduce a un rpido aumento de la
velocidad de oxidacin. El diclorhidrato en 6 a 10%, la solucin acuosa absorbe oxgeno molecular
muy lentamente sin que se produzca ningn cambio de color, sino se observa en la viscosidad de la
solucin. En el caso de soluciones alcalinas, la tasa de absorcin de oxgeno aumenta mucho a
medida que aumenta la alcalinidad, la solucin se convierte en materia oscura y slida
separndose. A pesar de que esta oxidacin se debe principalmente a los grupos amino e hidroxilo
vicinales, el arseno-grupo entra en cierta medida, como un 7%, el rendimiento de cido 3-amino-4-
hidroxifenilarsnico puede ser aislado.

La oxidacin con yodo o perxido de hidrgeno convierte salvarsan en cido 3-amino-4-hidroxi-

fenilarsinico, siendo el rendimiento terico aproximadamente 66.5%. Aunque estables en estado
seco cuando se mantienen en recipientes cerrados, el salvarsan se descompone en soluciones
acuosas, metil-alcohlicas y especialmente alcalinas, incluso en ausencia de aire. Estos lquidos se
vuelven rojos, depositando finalmente precipitados intensos de color rojizo que tienen
propiedades completamente nuevas. Es importante darse cuenta de que estos cambios
representan las fases posteriores de un proceso de descomposicin. Las etapas ms tempranas
apenas pueden ser detectadas por medios fsicos y qumicos. Las pruebas biolgicas y
toxicolgicas, sin embargo, son capaces de detectar la menor alteracin en salvarsan por un
aumento en la toxicidad de la preparacin. Las propiedades txicas varan considerablemente e
inesperadamente. El color no es un criterio de seguridad para cuando se ensayan en conejos, las
muestras de color amarillo claro a veces han demostrado ser tan txicas que los animales
experimentales han sucumbido durante la inyeccin.
Propiedades fsico-qumicas de Soluciones de Salvarsan. Estas soluciones muestran las
propiedades caractersticas de los coloides, dilisis a travs de una membrana muestra ligera
difusin, mientras que en solucin de alcohol metlico la difusin tiene lugar ms fcilmente. La sal
disdica difunde unas cuatro veces ms rpidamente que el hidrocloruro libre.

La viscosidad de las soluciones acuosas de Salvarsan aumenta desde el momento de la preparacin

hasta que se alcanza un valor aproximadamente constante. Este valor es mucho mayor que el valor
inicial. A medida que aumenta la concentracin de la solucin, se afecta la velocidad inicial de
aumento de viscosidad y el valor final, y la presencia de cido o lcali tambin tiene un efecto
marcado. Con el aumento de la temperatura, la viscosidad alcanza ms rpidamente su valor
mximo, pero este valor disminuye. La viscosidad de las soluciones diluidas disminuye en el
almacenamiento. El valor de pH de Salvarsan es 7.60; del diclorhidrato, 2.41; del
monohidrocloruro, 3.00; de la sal monosdica, 10.88; y de la sal disdica, 11.43. Se indica la
presencia de un punto isoelctrico a un pH de aproximadamente 3.4.

Dihidrocloruro de 3,3 '- diamino - 4,4' - dihidroxiarbenzeno. La base de arsfenamina (366 partes)
se suspende en alcohol metlico (3000 partes) y se disuelve mediante la adicin de cido
clorhdrico etlico al 25% (292 partes). La solucin se filtra, se introduce en diez volmenes de ter
absoluto fro con agitacin vigorosa y el precipitado resultante del diclorhidrato se filtra, se lava
con ter y se seca completamente al vaco sobre cido sulfrico. Estas operaciones se realizarn en
la medida de lo posible bajo exclusin del aire.

Otro mtodo consiste en filtrar el precipitado de la base [obtenido por reduccin del cido 3-nitro-
4-hidroxifenilarsnico con hidrosulfito de sodio], primer lavado con agua, despus suspendido en
agua destilada a 0 C y finalmente disolucin en la menor cantidad de 2N-sosa custica a la misma
temperatura. Despus de filtrar a travs de un filtro anaerbico, la solucin se trata con cido
clorhdrico 1: 1 (150 ml) a 0C, el lquido resultante se diluye a 1700 ml con agua destilada y se
introduce lentamente con agitacin vigorosa en cido clorhdrico 1: 1 (3250 ml) a 0 C.

El precipitado as obtenido, despus de sedimentar durante una hora, se separa por filtracin y se
seca al vaco sobre cloruro clcico y sosa custica slida.

El aislamiento intermedio de la base de arsfenamina puede evitarse mediante la reduccin directa

del cido 3-amino-4-hidroxifenilarsnico. El cido puro (23 g) se mezcla con agua (736 ml),solucin
al 50% de cido hipofosforoso (138 ml) y solucin de yoduro de potasio al 3% (11.5 ml) y la mezcla
se mantiene a 55-60C durante 1 h: 30 min. Despus de enfriar la solucin de color amarillo oscuro
resultante a 10C, el diclorhidrato se precipita vertiendo en cido clorhdrico 1: 1 (1640 ml) a 2C
mientras se agita vigorosamente.

El dihidrocloruro de arsfenamina es un polvo amarillo claro, que se ha obtenido con un color gris
por Kober y Fargher. Es estable cuando se seca y se conserva al vaco o en un gas inerte; Es soluble
en agua, alcohol metlico, etilenglicol o glicerina, moderadamente soluble en alcohol etlico y muy
escasamente en cido actico glacial, acetona, ter o cidos minerales concentrados. Su solucin
acuosa de color amarillo verdoso reacciona fuertemente cido al tornasol y no est visiblemente
afectada por cidos fosfricos concentrados o cidos minerales diluidos, excepto el cido sulfrico
diluido.
La base de arsfenamina se reprecipita completamente de una solucin acuosa de la sal aadiendo
dos moles de lcali custico, un tercer mol redisuelve el precipitado formando un fenolato
monosdico, mientras que un cuarto mol produce una sal disdica.

Recientemente se ha demostrado que una solucin acuosa de este ltimo es ms eficaz en el

tratamiento de la sfilis que la sal monosdica. Cuando una solucin de la sal disdica se expone al
aire, se vuelve ms txica debido a una oxidacin parcial a xido de 3-amino-4-hidroxifenilarsino,
que segn Ehrlich es veinte veces ms txico que la arsfenamina, pero segn Myers, es slo seis o
siete veces ms txico.

La base anterior tambin se puede obtener a partir de la sal por tratamiento con carbonato o
acetato sdico; no se redisuelve, sin embargo, en un exceso de estos reactivos.

Con solucin de cido fosfotngstico el dihidrocloruro de arsfenamina produce un precipitado gris

sucio insoluble en exceso del reactivo, pero soluble en una solucin de color azul oscuro en
carbonato de sodio o amonaco; Con una solucin de cido fosfomolibdico se produce una
reaccin de color similar al acidular con cido clorhdrico despus de la adicin del lcali; Mientras
que con el reactivo de Millon se obtiene un precipitado amarillo. 4-Dimetilaminobenzaldehdo
aadido a la dilucin de la solucin de arsfenamina en HCl produce primero una coloracin naranja
y finalmente un precipitado del mismo color.

Esta reaccin, distinta incluso en diluciones considerables, se hace ms por la adicin de cloruro
mercrico, y es conveniente para detectar arsfenamina en tejidos animales. Cuando se trata con
nitrito de sodio en solucin diluida de cido clorhdrico, el derivado de arseno anterior forma un
compuesto diazoico que tiene una fluorescencia amarillo verdosa, y produce una coloracin violeta
con alcohol alfa-naftilmina, de color marrn claro con alcohol beta-naftilamina , y un color rojo
intenso con una solucin alcalina recin preparada de resorcinol.

Bibliografa: A text-book of Inorganic Chenistry volumen XI. Part II Derivates of arsenic. by

Archibald E. Goddard. Editado por: J. Newton Friend. London Charles Griffin & Company. Gran
Bretaa 1930. (371-377pp)

Raiziss George, Gavron Joseph. Organic arsenical compounds. American Chemical Sociey.
Monograph series. The chemical Catalog Company Inc. 1923. (185-188pp)

Morgan Gilbert. Organic Compounds of Arsenic & Antimony.Longmans, Green and Co. Great
Britain 1918. (224-227pp)

Los productos del tipo salvarsan no pueden ser controlados nicamente por medios qumicos, sino
que requieren ser examinados biolgicamente por toxicidad y actividad teraputica. Las pruebas
generalmente empleadas actualmente se llevan a cabo en ratones o ratas infectadas con
Trypanosoma equiperdum.

Salvarsan y su derivado neutro ms empleado, neosalvarsan, han sido empleados en la terapia de

la sfilis por inyeccin intravenosa o, en algn caso, subcutneo o intramuscular. Se considera que
la administracin oral de estos productos carece de valor, siendo los efectos curativos
insignificantes y aumentando considerablemente el riesgo de efectos secundarios txicos, gastritis,
ictericia, etc. Sin embargo, Ravaut, en una publicacin reciente, ha reportado consistentemente
buenos resultados obtenidos en el tratamiento de la disentera amebiana por administracin oral
de salvarsan, y sugiere su empleo como profilctico y agente curativo. Se afirma que es bien
tolerado en dosis de desde 0.2 hasta 1.0 g. por da.

El empleo del stovarsol por va oral en el tratamiento de la disentera amebiana propuesto por
primera vez por el Dr. Marchoux, del Instituto Pasteur de Pars, ha tenido resultados prometedores,
y el stovarsol parece ser casi igual, si no exactamente igual a emetina, hasta ahora el frmaco ms
eficiente empleado en el tratamiento de la enfermedad.

Debe observarse que la cantidad de stovarsol que constituye un curso de tratamiento asciende a
aproximadamente 7 g. distribuidas en un intervalo de una semana solamente, y hay un consenso
general de opinin, corroborado por la creciente popularidad de la droga para este propsito
particular, que no se producen secuelas desagradables de su uso en esta manera, pero que el
frmaco tiene un efecto tnico bien marcado sobre el sistema en general y es extremadamente
bien tolerado por el paciente bajo tratamiento.

Adems, hay que recordar que Stovarsol, cuando se administra oralmente, ha sido demostrado por
Levaditi y sus colaboradores, por tener una accin profilctica o preventiva bien marcada contra la
infeccin sifiltica, no slo en conejos, sino tambin en el sujeto humano. De nuevo, en la serie
muy exhaustiva de trabajos de Brown y Pearce sobre la accin de la tryparsamida, tambin se
menciona la administracin oral de este compuesto.

De estos, parece que, mientras que las dosis de 1 g. Y 1.25 g. por kilo en el conejo produjo
sntomas de envenenamiento arsenical tardo, dosis de 0.75 g. por kilo fueron bien tolerados y
fueron eficaces para curar una infeccin grave de Tr. Brucei en un conejo, e infecciones de
Treponema pallidum en otros. Sin embargo, el nmero de experimentos era demasiado pequeo
para llegar a una conclusin definitiva sobre el valor de este modo de administracin.

PRUEBAS DE TOXICIDAD Y TERAPUTICA EFICIENCIA

Como es bien sabido, todas las preparaciones arsenicales empleadas para el tratamiento de la
sfilis, tales como salvarsan, neo-salvarsan, y los productos manufacturados del mismo tipo,
denominados de diversas maneras, deben ser probados biolgicamente antes de su emisin.

Se someten a prueba por un departamento especial creado para el propsito por el Consejo de
Investigacin Mdica, pruebas de toxicidad que se lleva a cabo en ratones normales, mientras que
la eficacia teraputica se determina por su accin curativa sobre ratones infectados con
Trypanosoma equiperdum, un organismo que la experiencia ha demostrado da indicaciones
consistentes de la actividad de tales preparaciones y constituye una base fiable de comparacin.

Con el fin, por tanto, de determinar las dosis curativas mnimas, se emplearon ratones infectados
con una cepa de Trypanosoma equiperdum. La cepa se mantiene en ratas que se alojan a cierta
distancia de los laboratorios con el fin de evitar cualquier posible absorcin accidental de arsnico
que podra tender a aumentar la resistencia del parsito a los derivados del arsnico en general.
Los ratones son infectados por una inyeccin intraperitoneal de 0.1mL de sangre diluida de una
rata infectada, la dilucin se hace con 1% de solucin de citrato de sodio, de manera que el
recuento es del orden de 56,000 tripanosomas por milmetro cbico. Despus de 48horas se
examinan los ratones y se emplean para los ensayos aquellos que muestran una infeccin de
100,00 a 200,000 de tripanosomas por mL de sangre.
El frmaco bajo investigacin se administra entonces a la dosis requerida y la sangre es examinada
24, 48 y 72 horas. Para que el frmaco pueda haber efectuado una "curacin", la sangre debe estar
libre de tripanosomas antes o al final de este perodo de tiempo. Como regla, para cada dosis
investigada, se emplean cinco ratones, y se considera que se ha efectuado una curacin cuando la
sangre perifrica de los cinco ratones est completamente liberada de los tripanosomas al cabo de
setenta y dos horas. Variando la dosis se puede determinar la cantidad mnima requerida para
efectuar una "curacin" bajo las condiciones anteriores. Cabe sealar que en la mayora de estas
"curas", las recadas ocurren despus de varios intervalos de tiempo.

Las pruebas por inyeccin intravenosa se llevan a cabo inyectando una solucin del producto en la
vena de la cola ms prominente del ratn. La inyeccin se facilita calentando la cola por inmersin
en agua a aproximadamente 40C.

Las pruebas por inyeccin subcutnea se realizan inyectando lentamente una solucin del
compuesto bajo la piel de la espalda. La resistencia de la solucin empleada para la inyeccin se
ajusta de tal manera que slo una fraccin de 1mL se emplea para la dosis requerida.

Para la administracin oral, la cantidad requerida del producto slido se pesa y se transfiere a un
platillo pequeo. Un poco de agua y unos 0.6 mg. de miga de pan son aadidas, y el conjunto se
transforma en una masa ms o menos homognea. Se coloca, con un ratn infectado, en una jaula
separada que est bastante limpia y libre de aserrn, etc. Se permite veinticuatro horas para el
consumo de la comida, y normalmente no hay dificultad en asegurar que el material se coma
dentro de este perodo. Los ratones se mantienen bajo observacin exactamente como se ha
descrito anteriormente.

Los ensayos de toxicidad se llevan a cabo exactamente de la misma manera, excepto que en estos
casos normalmente se emplean para las pruebas orales que se mantienen con hambre durante
veinticuatro a treinta y seis horas antes de la administracin para asegurar el consumo de las dosis
frecuentes necesarias. Al menos cuatro ratones de los cinco deben sobrevivir consistentemente
durante siete das con la dosis mxima tolerada.

Tabla 1. Resultados obtenidos de la administracin oral de arseno compuestos.

M. T. D. M. C. D. M. T. D. /M. C.
Base mg/g mg/g D.
4,4' diamino arsenobenceno 0.1 0.02 5
4-amino-4'-acetilamino arsenobenceno 0.3 0.02 15
4,4'-diacetilamino arsenobenceno 1.5 0.1 15
3-amino-4,4'-dihidroxi arsenobenceno 0.4 0.02 20
3,3'-diamino-4,4'-dihidroxiarsenobenceno (salvarsan) 0.9 0.03 30
3-amino-3'-acetilamino-4,4'-dihidroxiarsenobenceno
(acetil salvarsan) 4 0.05 80
3,3'-diacetilamino-4,4'-dihidroxiarsenobenceno (diacetil
salvarsan) 8 0.08 100
5,5'-diamino-2,2'-dihidroxiarsenobenceno 0.15 0.02 7.5
5-amino-5'-acetilamino-2,2'-dihidroxiarsenobenceno 0.2 0.02 10
5,5'-diacetilamino-2,2'-dihidroxiarsenobenceno 7 0.02 350
3,3'-diamino-4,4'-dihidroxi-5-acetilamino arsenobenceno 1.5 0.06 25
3,3'-diamino-4,4'-dihidroxi-5,5'-diacetilamino
arsenobenceno 1.2 >1 <1.2
4-glicinamida-4'-hidroxi-3'-amino arsenobenceno 1.5 0.08 19
4-glicinamida-4'-hidroxi-3'-acetilamino arsenobenceno 6 0.15 40
3,3'-dihidroxi-6,6'-arseno-1,4-benzisoxazol 1 0.05 20

Bibliografa: Erwins A. J., Everett J. G. Comparative studies in organic arsenic derivates. Br J Vener
Dis.1927 3:1-11pp. http://sti.bmj.com/content/3/1/1.citation

USOS TERAPUTICOS Y FORMAS DE ADMINISTRACIN.

Salvarsan se dispensa en tubos de vaco sellados que contienen 0.6 de un gramo. Debe disolverse
inmediatamente en solucin salina recin destilada y recin hecha, y la solucin resultante debe
ser absolutamente clara. Se dice que muchos de los sntomas adversos que se han atribuido a la
droga se deben al uso de agua que contiene impurezas. La dosis vara de 0.2 a 0.6 de un gramo. Su
uso debe estar precedido por el hallazgo de una espiroqueta pallidium o de una reaccin positiva
de Wassermann. Est contraindicado en la enfermedad grave no sifiltica de los riones, el sistema
nervioso, el ojo, la circulacin y los pulmones.

La administracin de salvarsan es a veces seguida de nuseas y vmitos con diarrea, y se han

reportado sntomas ms graves. Despus de su uso el paciente debe mantenerse en la cama y
vigilado cuidadosamente. No se puede decir que este remedio tome el lugar del mercurio y de los
yoduros, sino que es una gran adicin a nuestro armamento para el tratamiento de la sfilis.
Finalmente se ha decidido que el mtodo intravenoso es el mejor.

Despus de que se introduzca la aguja en una vena, primero se debe inyectar una pequea
cantidad de solucin salina normal para asegurarse de que todo se mueve suavemente, ya que la
inyeccin de una pequea cantidad de salvarsan en el tejido subcutneo producir un
desprendimiento decidido. Ha demostrado ser especialmente valioso en el tratamiento de las
lesiones primarias, en la curacin de las primeras erupciones cutneas secundarias y, en algunos
casos, tambin de las manifestaciones posteriores en el ojo. Se han publicado varios informes
favorables con respecto a su uso en la ataxia locomotora cuando hay un resultado positivo. La
reaccin de Wassermann. La administracin de la droga requiere entrenamiento especial, y debe
ser dado solamente por los expertos en su uso.

Usos locales del arsnico.- por el dentista para destruir los nervios; para destruir tejidos malignos,
como en epitelioma pequeo.

Usos generales del arsnico.- en el tratamiento de la anemia, la leucemia, etc., el arsnico es el

mejor frmaco que tenemos.

Tambin es de algn valor en la clorosis cuando la afeccin es ms o menos crnica. En ciertas

enfermedades crnicas de la piel, como el eccema, el acn y la psoriasis, el arsnico internamente
es muy til.

En la anemia perniciosa la solucin de Fowler se puede dar en el aumento hace hasta que hay
trastorno del tracto gastrointestinal o hinchazn bajo los prpados en la maana, cualquiera de los
cuales indica la retirada del frmaco. El arsnico no parece ser curativo en la anemia perniciosa, y
debe continuar casi indefinidamente. Si la alteracin del estmago se produce por atoxyl, como
antes mencionado, puede ser administrado por la boca o hipodrmicamente.

En el tratamiento de la malaria crnica es til combatir la anemia secundaria y tambin,

probablemente, tiene una accin directa sobre el plasmodio; se administrar en dosis cada vez
mayores. El arsnico se ha utilizado con aparentemente un buen efecto en las formas peridicas de
neuralgia y en el reumatismo crnico.

En la corea crnica en nios puede administrarse la solucin de Fowler, aumentando una gota al
da, hasta que se produzca intolerancia o se controle la afeccin. Como tnico general al sistema
nervioso cuando hay anemia, puede combinarse con estricnina y hierro. Aparentemente es til a
veces para aumentar el peso corporal en pacientes de tuberculosis, en ancianos y en estados de
agotamiento nervioso. Pero nuestro conocimiento de la accin fisiolgica del arsnico es tan
indefinido que su uso en la enfermedad es en gran parte emprico. La solucin de Fowler se
prescribe comnmente de la siguiente manera:

Licor Potassi Arsenitis

Dos gotas en agua 3 veces al da, aumentando dirigido.

Bibliografa: Hoyt Daniel. Practical Therapeutics.2 ed. Saint Lous C. V. Mosby Company. 1914.
(102-104pp)

PREPARACIONES TERAPEUTICAS USPO2047275 14/JULIO/1936. William Lott y Alfred Jurist.

En el tratamiento de varias condiciones patolgicas en las que se indican arsenicales,

especialmente sfilis y angina de Vincent; el dihidrocloruro de 3,3'-diamino-4,4'-dihidroxi-
arsenobenceno ha sido reconocido como excelente para la pureza, uniformidad y actividad, pero
ha sido indebidamente restringido en su uso debido a que su solucin acuosa no slo tarda mucho
tiempo en preparar sino que es tan txico que no se puede utilizar con seguridad como tal, y el
hidrocloruro debe convertirse en su sal sdica, cuya solucin, sin embargo, es tan diluida que tiene
que ser administrada en cantidades excesivamente grandes. Adems se consumen entre 30 y 45
minutos para convertir la solucin de hidrocloruro en la solucin de sal sdica.

Como consecuencia de estos obstculos, el uso de dihidrocloruro de 3-3'-diamino-4,4'-dihidroxi

arsenobenceno ha disminuido de manera constante, a pesar de su eficacia potencial.

El dihidrocloruro de 3,3'-diamino-4,4'-dihidroxi-arsenobenceno se ha comercializado en solucin

acuosa alcalina, pero tales preparaciones son muy susceptibles a la oxidacin, que est
acompaada por un aumento de la toxicidad; Y estas disoluciones alcalinas acuosas son inestables
incluso cuando se mantienen en condiciones anaerbicas, las soluciones amarillas se vuelven
gradualmente rojas, presumiblemente debido a la polimerizacin.

Es el objeto de esta invencin proporcionar soluciones comparativamente estables que, si es

necesario, se pueden diluir con agua en un grado considerable sin precipitacin y que posibilitarn
la administracin eficiente de 3,3'-diamino-4,4 '-dihidroxi arsenobenceno en una concentracin
relativamente alta.

En la prctica de esta invencin, se disuelve el 3,3'-diamino-4,4'-dihidroxi-arsenobenceno en un

disolvente seleccionado del grupo consistente de etilenglicol y mezclas de glicerina con beta-
hidroxi-dietil-ter, con dietilenglicol y con trimetilenglicol; Preferiblemente se aade un coloide
protector no proteico; Preferiblemente tambin, la disolucin se efecta anaerobiamente, como
operando bajo nitrgeno en recipientes cerrados, y las soluciones as preparadas se emplean con
fines teraputicos.

Ejemplo 1. El 3,3'-diamino-4,4'-dihidroxi arsenobenceno se disuelve fcilmente en etilenglicol a

temperatura ambiente para formar una solucin al menos 4%, que es de color amarillo claro y
mvil, y puede diluirse con aproximadamente la mitad de su volumen de agua antes de que ocurra
la precipitacin.

Ejemplo2. Una mezcla de 25 g de glicerina y 15 g de betahidroxi-dietil-ter disuelve fcilmente al

menos 1.5 g de 3,3'-diamino-4,4'-dihidroxi arsenobenceno, diluir con agua para dar una dispersin
coloidal.

Ejemplo 3 Una mezcla de 1207.5 g de glicerina y 517.5 g de beta-hidroxi-dietil-ter disuelve 51.7 g

de 3,3'-diamino-4,4'-dihidroxi arsenobenceno a temperaturas ordinarias.

Ejemplo4. Una mezcla de 191 g de glicerina y 81.9 g de beta-hidroxi-dietilo disuelve 16.3 g de 3,3'-
diamino-4,4'-dihidroxi arsenobenceno a temperatura ordinaria. La disolucin que es ms lenta que
cuando se emplean concentraciones ms pequeas puede acelerarse por agitacin.

Ejemplo5. 0.4 g de acacia en polvo se calienta con 40 g de glicerina a 120-130 C hasta que se
completa la disolucin. Despus de que la solucin se haya enfriado a temperatura ambiente, se
aade una solucin de 2.4 g de 3,3'-diamino-4,4'dihidroxi arsenobenceno en 40 g de dietilenglicol.

Se obtiene una solucin algo turbia que puede convertirse, por dilucin gradual con agua, en una
dispersin coloidal que no sedimenta durante varias horas. La solucin turbia se vuelve
brillantemente clara tras la adicin de 8 cm 3 (8mL) de agua y el calentamiento a 45-50 C durante
aproximadamente 45 minutos, y una dilucin adicional forma una dispersin coloidal en la que la
floculacin no ocurre durante varias horas.

Ejemplo 6 Se disuelven 1 g de cetil sulfato de sodio en 40 g de glicerina caliente y se aade una

solucin de 2.4 g de 3,3'-diamino-4,4'-dinidroxi arsenobenceno en 40 g de dietilenglicol. La
disolucin transparente as obtenida puede diluirse con agua, formando una dispersin coloidal en
la que no se produce floculacin durante varias horas.

Ejemplo7. Al menos 1.2g de 3,3-diamino-4,4-dihidroxi arsenobenceno se disuelve fcilmente en

una mezcla de 15g de glicerina y 25g de trimetilen-glicol, y la solucin al ser diluida da una
dispersin coloidal.

AMINO-HIDROXI ARSENO-BENZENO. USP2232659 18/FEBRERO/1941. Alfred Fehrle, Walter

Herrmann, Paul Fritzsche y Hans Hilmer.

La presente invencin se refiere a la fabricacin de compuestos de hidroxialquilamino-

arsenobenceno-formaldehdo-bisulfito por condensacin de un cido hidroxialquilamino-benceno-
arsnico con un cido aminobenceno-arsnico que tambin puede contener un residuo
hidroxialquilo para producir un derivado asimtrico de arsenobenceno e introducir el residuo
formaldehdo-bisulfito en uno de los grupos amino.
En lugar de los cidos arsonicos pueden utilizarse sus productos de reduccin, a saber, un dicloruro
de arsina o arsinxido y una arsina, respectivamente.

La invencin se refiere adems a la fabricacin de los mismos compuestos condensando

proporciones moleculares de hidroxialquilamino-arsenobenceno ya simtrico con un amino-
arsenobenceno simtrico que tambin puede contener un resto hidroxialquilo con el
correspondiente arsenobenceno asimtrico y haciendo que ste reaccione con formaldehido-
bisulfito sdico. La fabricacin tambin puede comenzar a partir de un compuesto simtrico amino
-arsenobenceno - formaldehdo - bisulfito que luego se condensa con un hidroxialquilamino
arsenobenceno simtrico. Los productos as obtenidos corresponden a la siguiente frmula
general:

R1:-CH2.CHOH.CH2OH y CH2CH2OH
R2:-H,CH2.CHOH.CH2.OH y CH2.CH2OH
X: H o CH3.CO.NH-
Y:-H o un residuo hidroxialquilo, por ejemplo, un residuo hidroxietilo o un residuo hidroximetilo.
Los productos son polvos amarillos, solubles en agua, insolubles en ter, acetona y benceno y
eficaces contra las espiroquetas.

Ejemplo 5. Con 43.9 gramos del dihidrocloruro de 3,3'-diamino-4,4 '-dihidroxiarsenobenceno,

preparado como se indica en la Patente de Estados Unidos N 986148 y 58.7gramos del
diclorhidrato de 3, 3'-bis- (dihidroxipropil) amino-4,4 '- dihidroxiarseno benceno, preparado de una
manera correspondiente a partir del cido 3 (dihidroxipropil) amino 4 hidroxibenceno 1 arsnico
en 500mL de agua y la solucin se calienta a aproximadamente 80C.

Mediante agitacin de alcohol etlico en la solucin, el hidrocloruro de 3- (dihidroxipropil) amino 4

hidroxi 3 'amino 4' hidroxi arsenobenceno se separa en forma de un precipitado amarillo que se
filtra por succin y se transforma, bajo ciertas condiciones, por medio de formaldehdo-bisulfito de
sodio en el 3-(dihidroxipropil)-amino-4-hidroxi-3'-amino-4'-hidroxiarsenobenzeno-formaldehdo-
bisulfito. Los productos obtenidos por los diferentes mtodos tienen el mismo producto qumico y
propiedades farmacolgicas.

MECANISMO DE ACCIN.

Los ms importantes compuestos arsenicales orgnicos son derivados del cido bencenarsonico y
la presencia o ausencia de varios sustitutos sobre el anillo de benceno no solo determinan la
solubilidad de la droga sino tambin la habilidad de penetrar las membranas celulares del
organismo parasito y del hospedero. Independientemente de si el arsnico introducido en el
cuerpo es trivalente o pentavalente, la mayor toxicidad o acciones quimioteraputicas pueden ser
atribuidas a las especies trivalentes.

El efecto resulta de la inhibicin de las enzimas que contienen grupos sulfhidrilo y parece que el
metal no se combina significativamente con otro grupo qumico. La selectividad de los rgano-
arsenicales por parsitos ms que por los hospederos puede atribuirse a:

1) Los arsenoxidos pueden ser capases de penetrar al parasito ms fcilmente que dentro de
los tejidos de los mamferos.

2) Los grupos sulfhidrilo de las enzimas de los parsitos son ms susceptibles. Los
tripanosomas ms sensibles tienen un metabolismo ms simple casi sin rutas
convergentes.

3) Los tejidos de los mamferos pueden oxidar el arsnico intracelular a in cido arsonico
inactivo ms fcilmente que los parsitos. Algunos tripanosomas estn virtualmente
desprovistos de sistemas metablicos aerbicos y por lo tanto carecen de los medios
necesarios para oxidar la forma trivalente.

El desarrollo de la resistencia parece relativo al decremento en la permeabilidad y no

necesariamente se extiende a otros compuestos arsenicales, pero puede incluso conferir
resistencia a compuestos no arsenicales.

Bibliografa: UMin Soe. Studies of the pharmacodynamics and modes action of anthelmintic
drugs. A thesis presented of the requirements for the degree of doctor of phylosophy. University
of Massey. 1977. (24-26pp)

De los tres tipos de arsnicos utilizados en el tratamiento de enfermedades espiroquetas y

protozoarias, slo los compuestos de arsnico tienen una actividad parasiticida directa, siendo
activos los cidos arsonicos y compuestos de arsnico debido a su conversin a compuestos de
arsnico en el husped animal.

El arsenicobenzeno no sustituido fue uno de los compuestos parasiticidas ms txicos y activos en

toda la serie probada, sin accin selectiva demostrable entre los organismos estudiados.

A) La sustitucin con un nico grupo -CH3, -NO2, -Cl, -NH2, -OH, o -F no afect significativamente
la toxicidad o actividad parasiticida del arsenicobenceno parental, o redujo ambos al mismo grado
leve.

B) Los sustituyentes cidos disminuyeron notablemente tanto la accin parasiticida directa como la
txica del arsenicobenceno. La forma ionizada era generalmente inactiva, el ingrediente altamente
activo de la invencin, y el efecto del pH sobre la actividad parasiticida podra estar relacionado
con su efecto sobre la disociacin. Sin embargo, hubo excepciones importantes a la inactividad
general de los compuestos ionizados (por ejemplo, el 3-NO2-4-COOH y p- (CH2) 3COOH
arsenenosobencenos); Varios compuestos de esta serie son de inters teraputico distinto.

C) Los sustitutos de amida usualmente causaron una ligera disminucin en la actividad

treponemicida y tripanocida, pero una notable disminucin en la toxicidad. Como clase, son
teraputicamente el grupo ms prometedor de compuestos arseniosos hasta ahora estudiados. La
sustitucin en los hidrgenos de amida usualmente disminuye su efecto favorable sobre la
toxicidad, excepciones que se observan en grupos que tambin reducen la toxicidad del
arsenicobenceno cuando estn directamente sobre el anillo de benceno (por ejemplo, - C2H4OH,
-C6H4NHCOCH3).

D) A diferencia de la amidificacin, la esterificacin de sustituyentes cidos dio lugar a compuestos

que se aproximaban al arsenicobenceno en su alta toxicidad y accin parasiticida general. Muchos
de estos compuestos se hidrolizan fcilmente en solucin acuosa, correspondiendo su actividad
biolgica a la del cido libre.

E) El efecto de los sustituyentes complejos se determin usualmente por la naturaleza del grupo
terminal en el sustituyente (por ejemplo, (CH2) 3CONH2; CON (CH3) 2).

F) Dos grupos sustituyentes tenan un efecto que no poda predecirse de los de los sustituyentes
tomados aisladamente. A diferencia del caso de los sustituyentes individuales, en estos
compuestos disustituidos la posicin en el anillo de benceno modific profundamente la actividad
del compuesto.

G) Tanto la toxicidad como la actividad parasiticida directa de los tioarsenitos fueron algo menores
que las del arsenicobenceno correspondiente; En el tratamiento de la sfilis de conejo y la
tripanosomiasis de ratn, el ndice teraputico no era mejor que el del compuesto original.

Existen varios casos de compuestos de arsnico con un ndice teraputico en una infeccin
particular que supera ampliamente el de compuestos qumicamente estrechamente relacionados
(por ejemplo, "mapharsen", "xido de melarsen", cido p-arsenicfenobutrico). Estas excepciones
hacen hincapi en la falta de fiabilidad de las generalizaciones con respecto al efecto de un tipo
dado de sustituyente sobre la actividad biolgica del arsenicobenzeno.

Existen pruebas considerables que apoyan la opinin de que la toxicidad y la actividad teraputica
de los compuestos de arsnico estn determinadas por las cantidades que entran en combinacin
con componentes celulares. La actividad ampliamente variable de un solo compuesto de arsnico
contra diferentes organismos, y de una serie de tales compuestos contra el mismo organismo, est
relacionada con la cantidad de arsnico unido.

Es una hiptesis de trabajo razonable que los compuestos arseniosos se combinan reversiblemente
con grupos sulfhidrilo en protenas enzimticas esenciales, y que su efecto citotxico se debe a esa
combinacin. Muchas enzimas esenciales contienen grupos sulfhidrilo y la mayora de tales
enzimas pueden ser inactivadas por compuestos de arsnico y reactivadas por sulfhidrilo u otros
agentes que pueden competir con la protena enzimtica para el arsnico.

La accin altamente selectiva de determinados compuestos arsnicos contra determinadas clulas

podra explicarse a partir de la afinidad variable de diferentes enzimas para el mismo arsnico o de
diferentes compuestos arsnicos para la misma enzima o las diferencias en la permeabilidad de
una clula dada a diferentes compuestos arsenicales. Si bien la evidencia no es concluyente, esta
ltima hiptesis parece ser la mejor para explicar los datos disponibles.

Adems, numerosos estudios han intentado comprender los mecanismos de accin. Como se ha
indicado anteriormente, el arsnico tiene una alta afinidad por el azufre y, por tanto, es reactivo
con molculas que contienen azufre tales como tioles reducidos con un tomo de azufre disponible
tienen una tendencia significativa a la unin al arsnico. In vivo, el arsnico puede modular las
funciones de varias protenas clave (enzimas, transportadores de iones, etc.).

Puede reaccionar con mono- y ditioles, particularmente este ltimo cuando dos tioles estn
situados en estrecha proximidad, actuando para reticular los tioles entre s. As 2O3 pareca tener
selectividad particular para lneas celulares de leucemia promielocitica (APL) (por ejemplo, lnea
celular NB4); Esta selectividad fue primero relacionado con una regulacin negativa de la expresin
de Bcl-2 y una modulacin de PMLRARa / PML protenas. De hecho, varias investigaciones han
demostrado que As2O3 acta sobre numerosos dianas intracelulares incluyendo varias vas de
transduccin de seales, que parece ser dependiente o independiente de PML-RARa.

Uno de los objetivos clave podran ser el sistema redox intracelular glutatin. Comparado con otras
clulas leucmicas que son menos sensibles a As2O3, las clulas NB4 contienen niveles de
glutatin peroxidasa (GPx), glutatin-S-transferasa y catalasa y relativamente ms altos de perxido
de hidrgeno intracelular (H2O2), lo que sugiere que NB4 clulas desintoxicar As 2O3 y catabolizar
H2O2 de manera menos eficiente.

Adems, el arsnico trivalente unido a un fenil es capaz de formar enlaces cruzados covalentes
mucho ms estables con los residuos de cistena en comparacin con el arsnico en pequeas
molculas como el cido arsenioso o arsenito.

Como el melarsoprol sigue estando disponible para el tratamiento de la tripanosomiasis, la droga

aromtica AsIII se estudi en detalle para el tratamiento de enfermedades hematolgicas. Los
resultados han demostrado que el melarsoprol fue ms potente que As2O3 a concentraciones
equimolares pero no afect la localizacin nuclear de PML-RARa. En estudios comparativos con
trixido de arsnico, el melarsoprol mostr un amplio y potente efecto antileucmico contra las
lneas linfticas crnicas linfoides y mieloides.

Bibliografa: Jaouen G., Metzeler-Nolter N. Medical Organometallic Chemistry. Volumen 32.

Topics in organometallic chemistry. Springer-Verlag Berlin Heidelberg 2010.

El cido monometilarsnico (MMA (V)) y el cido dimetilarsnico (DMA (V)) son metabolitos de
arsnico inorgnico, formados intracelularmente en mamferos, principalmente en el hgado. El
proceso metablico de la conversin de arsnico inorgnico se conoce como biotransformacin y
parece aumentar la excrecin de arsnico del cuerpo, implicando la formacin de compuestos
metilados de arsnico trivalente como intermedios. El metabolismo implica la reduccin a un
estado trivalente y la metilacin oxidativa a un estado pentavalente. Adems, las reductasas
presentes en las clulas y otras reacciones facilitan la reduccin del cido arsnico [As (V)] a la
forma arseniosa [As (III)] que incluye la metilacin de la forma arseniosa, principalmente a travs
del hgado, para producir mono-, di - y las especies trimetiladas. La principal enzima involucrada en
la metilacin de As (III) es la arsnico metiltransferasa (As3MT) que requiere glutatin (GSH) para
promover la reaccin y un ciclo de redox sistema tal como thioredoxin para desintoxicar
compuestos que contienen arsnico.

Muchas especies animales convierten los compuestos inorgnicos que contienen arsnico en
especies de arsnico mono-, di- y tri-metiladas que en su mayora son secretadas en la orina. Esto
se debe a que las formas metiladas no son tan bien absorbidas por las clulas en comparacin con
las formas inorgnicas, aunque tienen una citotoxicidad mucho mayor si entran en las clulas.
El metabolismo reductor del arsnico tiene un papel importante en su toxicidad. Los compuestos
trivalentes que contienen arsnico, incluidas las formas orgnicas metiladas, tienen una potencia
mucho mayor que los compuestos pentavalentes que contienen arsnico como citotxicos y
carcingenos.

Inhibidores del metabolismo energtico: efectos sobre la gluclisis y la fosforilacin oxidativa

A nivel bioqumico, el arsnico inorgnico en estado pentavalente (As (V), arsenato, AsO4) se
asemeja a un grupo fosfato (PO4) en su estructura y puede reemplazar al fosfato en muchas
reacciones. La mitocondria es un importante sitio intracelular donde el arseniato es metabolizado,
tomado como As (V), reducindolo rpidamente, y exportando el producto As (III) de nuevo en el
citosol. La ubicacin especfica de los sitios para la reduccin de arsnico en las mitocondrias an
no se ha definido. Sin embargo, el arseniato puede afectar la fosforilacin oxidativa mediante la
unin a la Fo / F1 ATP sintasa. El arseniato puede ser utilizado por la ATP sintasa ms
eficientemente que el fosfato en funcin de los niveles de Ca 2 +, la produccin de ADP-arseniato
que a diferencia de ATP se convierte rpidamente en hidrolizado e incapaz de formar compuestos
de alta energa estable. Se sugiere que la estructura y las similitudes de carga de PO43-, AsO43-, y
SO42- resultan en la unin indiscriminada a en al menos dos sitios ubicados en la matriz
mitocondrial. En un sitio, la ocupacin por cualquiera de estos tres aniones da como resultado una
proteccin contra el desacoplamiento del gradiente de protones mitocondrial por K +; En el
segundo sitio, en el Fo / F1 ATP sintasa, AsO43- y SO42- compiten por la unin contra PO43-, lo que
conduce a la inhibicin de la produccin de ATP.

Interconversin de As (III) As (V) en las clulas.

Bajo condiciones de alta respiracin mitocondrial dentro de las clulas, es posible que los arsnicos
trivalentes que inducen una produccin significativa de ROS como radicales superxido, perxido e
hidroxilo tambin pueden resultar en oxidacin para producir especies inicas de arsenato
(AsO43-). En consecuencia, el impacto que tendrn los compuestos de arsnico en una clula
determinada depender muy probablemente del estado de la respiracin celular y de la
produccin de especies reactivas de oxgeno (ROS) que afecten la especiacin del arsnico y de si
la clula depende de la glucolisis versus la respiracin mitocondrial para su ATP sntesis.
Glyceraldehyde-3-phosphate deshydrogenase (GAPDH), la enzima glicolitica abundante encontrada
en todas las clulas y especialmente las clulas de sangre y el hgado, es un arsenato reductasa
intracelular importante que requiere GSH, NAD, y sustrato glicolitico. Dado que los niveles y la
actividad especfica de GAPDH es mucho mayor en las clulas malignas que en las clulas
normales, esto podra contribuir a la rpida reduccin de las especies As (V) en su citosol en
formas ms txicas As (III). En la reaccin GAPDH, la reduccin de As (V) puede tener lugar durante
o como consecuencia de la escisin arsenoltica de la unin tioster formada entre el residuo
Cys149 de la enzima y el residuo 3-fosfogliceroilo del sustrato.

La hidrlisis del 1-arseno-3-fosfoglicerato es al menos 2000 veces ms rpida que la hidrlisis del
sustrato normal 1,3-difosfoglicerato en las mismas condiciones. Por lo tanto, GAPDH se propone
como una de las principales enzimas de conversin celular para la reduccin de As (V) a As (III).La
otra clase principal de As (V) reductasas en las clulas son las transferasas de glutatin S y de stas,
la forma omega o GSTO1 parece ser la ms importante. Por lo tanto, GSTO1 puede reducir el
arseniato a arsenito, MMA (V) a MMA (III) y DMA (V) a DMA (III) y la delecin del gen GSTO1 en
ratones redujo el grado de biotransformacin en un 30-80% en la mayora de los tejidos
examinado.

Estructura y reactividad de compuestos que contienen arsnico con tioles reducidos

El arsnico tiene una alta afinidad por el azufre y por lo tanto, las molculas reactivas que
contienen azufre, tales como tioles reducidos con un tomo de azufre disponible, tienen una
propensin significativa a la unin al arsnico. Los compuestos que contienen el As (III) existen
como estructuras piramidales trigonales y sta es tambin la estructura formada por la unin de
iones arsnicos y protenas celulares in vivo donde los tomos de azufre de los grupos tiolato
actan como ligandos de coordinacin. Los enlaces arsnico-tiol resultantes son principalmente
responsables de la capacidad del arsnico para modular la funcin de varias molculas clave,
enzimas y transportadores de iones dentro de las clulas. Los compuestos que contienen arsnico
reaccionan con mono- y ditioles, particularmente este ltimo cuando dos tioles estn situados en
estrecha proximidad, actuando para reticular los tioles entre s.

Existe cierto debate sobre las estructuras y especiacin de los compuestos que contienen arsnico
(tanto inorgnico como orgnico) en solucin. En ausencia de sulfuro, los complejos de hidrxido
de As (III) son las principales especies que contienen arsnico y estas estructuras probablemente
adopten una estructura piramidal trigonal con el tomo de arsnico en el pice. Esta estructura
piramidal trigonal proporciona el potencial de As (III) para coordinar los enlaces con varios grupos
tiol proximales. Se cree que este es el caso en sistemas de enzimas bacterianas tales como la
protena represora ArsR donde es probable que se unan tres tomos de Cys. As, en las formas ms
txicas, el estado trivalente (As (III)) inorgnico y orgnico (metilado) arsnico reacciona con tioles
crticos en las protenas, inhibiendo su funcin, como es el caso con la protena ArsR bacteriana.
Por ejemplo, se demostr que As (III) se diriga al grupo sulfhidrilo reactivo en el sitio activo de
tiolasa implicada en la cetognesis a partir de acetil Coenzima A.

Los compuestos rgano-arsnicos trivalentes son ms permeables a la membrana que las especies
pentavalentes. Adems, el arsnico trivalente unido a un anillo de fenilo es capaz de formar
enlaces cruzados covalentes mucho ms estables con los residuos de cistena en comparacin con
el arsnico en molculas pequeas tales como cido arsenioso o arsenito.

En las clulas, las especies reactivas ms comunes que estn disponibles para la interaccin con el
arsnico son los abundantes residuos tiol libres en el tripptido glutatin (Glu-Cys-Gly, GSH) y el
aminocido libre, cistena. Por lo tanto, los frmacos basados en arsnico pueden reaccionar
coordinando la unin a grupos tiol libres (reducidos) tales como los de la cistena, particularmente
los de la tiorredoxina y el glutatin como las principales especies tiol intracelulares importantes en
la regulacin redox celular. Se observ tempranamente que el arsenito y el xido de fenilarsina en
particular, pero no el arseniato, reaccionaban con los grupos tiol vicinales sobre las protenas. Dado
que la demostracin de que el xido de fenilarsina era particularmente eficaz en la reticulacin de
los tioles vicinales en el sitio activo de las fosfatasas de tirosina, el intervalo de residuos de cistena
vicnicos que contienen protenas con el que reacciona el xido de fenilesina est aumentando.
Ejemplos recientes incluyen la pequea familia de protenas Rho que se une a GTP y el
transportador mitocondrial de carnitina / acilcarnitina. El xido de fenilarsino, como un fuerte
inhibidor de tirosina fosfatasas, aumentara los niveles de fosforilacin de tirosina de las enzimas
en las vas de sealizacin del crecimiento celular. No est claro si la inhibicin de tirosina
fosfatasas y otras enzimas contribuye a los efectos txicos de compuestos que contienen arsnico
en clulas normales, pero es probable que sea un factor importante que contribuye a su
citotoxicidad general, lo que hace que el xido de fenilarsina no sea adecuado para la terapia del
cncer.

El anlisis de las interacciones de As (III) con glutatin o cistena in vitro en soluciones acuosas para
el equilibrio de la unin y uso de tcnicas biofsicas incluyendo resonancia magntica nuclear
(RMN), espectroscopa electrnica y potenciometra revel que As (III) se une a glutatin o cistena
con constantes de equilibrio similares . Sin embargo, varios estudios analticos por espectroscopa
de masas han revelado que el arseniato y el arsenito no forman complejos fcilmente con glutatin
o cistena, prefieren reaccionar con los tioles en las molculas de tiorredoxina reducidas.

Los estudios con tiorredoxina reductasa (TxR) purificada a partir de hgado de ratn mostraron que
los compuestos que contenan arsnico con As (III) y arsinotioles (complejos de As (III) con GSH o L-
cistena) eran inhibidores extremadamente potentes de esta enzima. El xido de metil-arsenico (III)
era el ms potente como inhibidor competitivo irreversible. Los efectos sobre la glutatin
reductasa purificada (GR) mostraron que los niveles de inhibicin no fueron tan marcados con
xidos inorgnicos de As (III) y As (V).

El principal mecanismo de accin de los compuestos que contienen arsnico: la modificacin de la

funcin mitocondrial y la regulacin redox de la produccin de especies reactivas del oxgeno Las
mitocondrias son una fuente principal de ROS en las clulas. La tiorredoxina (TRX), NADPH y la
tiorredoxina reductasa (TxR) comprenden el sistema de tiorredoxina que tiene mltiples funciones
en las clulas incluyendo la sealizacin redox a travs de interacciones con otras protenas, en la
regulacin transcripcional, control del entorno redox intracelular reducido, crecimiento celular,
defensa contra estrs oxidativo y control de la apoptosis. El sistema de tiorredoxina es muy
sensible a los frmacos basados en arsnico y puede ser la base de uno de los mecanismos
importantes para sus acciones en la induccin de la muerte de clulas cancerosas.

El sistema TRX funciona como una reaccin de intercambio de tiol-disulfuro. TRX1 y TRX2 son
isoenzimas reguladoras clave que catalizan la reduccin de puentes disulfuro de protena. Son
cofactores de la quinasa reguladora de la seal de apoptosis 1 (ASK1) que media la citosina de TNF
y la apoptosis inducida por el estrs oxidativo a travs de la ruta dependiente de la mitocondria.
En sus formas reducidas, la TRX1 citoslica y TRX2 mitocondrial contienen cada una dos grupos tiol
vicinales en su secuencia de sitio activo como -C-G-P-C-. TRX 1 en el citosol y TRX2 en las
mitocondrias se unen a Cys 250 y Cys 30, respectivamente, en el dominio N-terminal regulador de
ASK1 y pueden mantener cooperativamente la enzima en el estado inhibido.

Sin embargo, la activacin por TNF dando como resultado una produccin aumentada de ROS y
conduce a la oxidacin del grupo de ditiol TRX a un disulfuro. Bajo estas condiciones, las
tiorredoxinas ya no se unen a ASK1 y la prdida de unin a TRX2 a ASK1 localizada mitocondrial
puede conducir a una apoptosis de una manera independiente de JNK (Jun-quinasas N-terminales),
mientras que la ASK1 citoslica despus de la prdida de unin a TRX1 se activa como MAPKKK
(proten-cinasas activadas por mitogeno o EKK kinasas reguladas por seal extracelular) resultando
en activacin de JNK, clivaje Bid y translocacin de Bax (protenas proapoptticas) en las
mitocondrias. Dado que se sabe que las tiorredoxinas son blancos principales de compuestos que
contienen arsnico, puede predecirse que la unin oxidativa mediada por arsenito a las
tiorredoxinas inducir un resultado similar al de la sealizacin del TNF, que conduce a la liberacin
y activacin de ASK1 ya la induccin de apoptosis.

Otra protena asociada a la tiorredoxina de importancia en la regulacin redox mediada por tiol en
las mitocondrias es la tiorredoxina peroxidasa II (TPX-II, tambin conocida como peroxiredoxina III,
Prx-III), una enzima abundantemente expresada en las mitocondrias de las clulas cancerosas que
protege a las clulas de estrs oxidativo. PrxIII es un importante antioxidante que acta en
conjuncin con TRX2 / TXR en la mitocondria para eliminar los perxidos como el H2O2 y
compensar los efectos inducidos por la apoptosis debido al aumento de los niveles de H2O2. Sin
embargo, PrxIII contiene tres residuos Cys, dos de los cuales estn implicados como sitios redox
activos en la formacin de un dmero unido a una intersubunidad disulfuro estable, que es
entonces reducido por tiorredoxina al monmero. PrxIII fue una protena de unin al arsnico ms
abundantemente expresada cuando se compararon clulas resistentes al arsnico a clulas
normales mediante cromatografa de afinidad con xido de fenilarsina. Por lo tanto, PrxIII es muy
probable que sea otra protena cuya funcin es inhibida por los compuestos que contienen
arsnico que conducen a la promocin de la apoptosis.

Cada vez es ms evidente que los ditioles que contienen protenas redox, en particular los
presentes en las mitocondrias, actan como sensores de control durante las respuestas a los
cambios en la redox celular. Muchas protenas tiol redox contienen un par vicinal o ms de los
grupos tiol reactivos capaces de unirse con compuestos que contienen arsnico de una manera
similar a los del sistema de tiorredoxina. Los ms importantes de estos se encuentran en las
mitocondrias, un punto de extrema sensibilidad a los compuestos que contienen arsnico, cuyas
acciones culminan en el desencadenamiento de las vas apoptticas mediante la induccin de
especies reactivas de oxgeno, lo que lleva a la muerte de las clulas cancerosas.

Otra protena mitocondrial dirigida por compuestos que contienen arsnico con un grupo ditiol
vicinal es la protena reguladora "Factor B." La adicin del factor B recombinante a las partculas
submitocondriales bovinas agotadas de esta actividad de acoplamiento de energa restaurada de la
protena. De este modo, se reactiv la transferencia inversa de electrones desde el succinato al
complejo I permitiendo la reduccin de NAD +, la funcin de la cadena de transporte de electrones
y el intercambio de fosforilacin oxidativa / 32Pi-ATP del complejo ATP sintetasa, as como la
actividad de intercambio aumentada del complejo V. As, la F0-Fi ATPasa requiere Factor B
acoplado a l para la activacin completa. Sin embargo, el factor B contiene seis tioles y Cys 92 y
Cys 94 en la forma bovina se demostr que se unen al xido de fenilarsina y el xido de fenilarsina
o arsenito inhiben la actividad de copulacin del factor B. De todos estos estudios, se hace
evidente que los cambios redox a los tioles vicinales afectan a la regulacin de la funcin
mitocondrial y que estos tioles son tambin objetivos principales para la inhibicin por los
compuestos que contienen arsnico.

Un canal formado por la asociacin de dos protenas, el canal aninico dependiente de voltaje
(VDAC) en la membrana externa mitocondrial y el transportador de nucletidos de adenina (ANT)
en la membrana mitocondrial interna, es un complejo implicado en la induccin de la apoptosis
activada a travs de la va mitocondrial . Los dos componentes de este complejo forman parte del
poro de transicin de permeabilidad mitocondrial (MPTP), un mega canal que media la liberacin
de molculas de la mitocondria activando la apoptosis. Una permeabilidad rpidamente
aumentada de la membrana mitocondrial interna (transicin de permeabilidad mitocondrial)
conduce a la apoptosis que est mediada por el MPTP.

El arsenito induce la apoptosis por un efecto directo sobre la MPTP y VDAC se ha demostrado que
desempean un papel esencial en la apertura de la permeabilidad poro y la liberacin del
citocromo c inducida por trixido de arsnico, que tambin caus VDAC homodimerizacin.
Adems, se ha demostrado que el compuesto reactivo tiol 4,4'-diisotiocianostilbeno-2,2'-
disulfonato (DIDS) bloquea el canal VDAC e inhibe la liberacin de citocromo c a travs de VDAC
mediada por ROS. Por lo tanto, los datos indican que el VDAC contiene residuos crticos de Cys que
pueden sufrir reticulaciones intermoleculares mediadas por reaccin con arsnico.

El anlisis de la actividad del canal inico de las bicapas lipdicas contenedoras de ANT purificadas
tambin revel que el tratamiento con As2O3 [30 M] alteraba las propiedades electrofisiolgicas
del canal ANT. Curiosamente, el agotamiento del glutatin que conduce al aumento de ROS que
puede desempear un papel importante en la accin del trixido de arsnico. Mientras que en las
clulas normales y cancerosas, la glutatin S transferasa (GST) se encuentra para interactuar con
ANT, durante la fase de induccin de la apoptosis, GST se disocia de la ANT sugiriendo que GST /
GSH puede actuar como un represor de MPTP y la apertura de los poros ANT. Esto es apoyado por
la observacin de que el aumento de la expresin de la enzima GSTP1 en las clulas leucmicas de
Jurkat y Raji las hace ms resistentes a la apoptosis inducida por trixido de arsnico a niveles
clnicamente relevantes [1-2 M]. La expresin de GSTP1 en estas clulas tambin se acompaa de
la acumulacin de menor los niveles de produccin de H2O2.

Ambas protenas de mamfero, VDAC y ANT, contienen dos o ms residuos de Cys en su estructura
proporcionando as grupos tiol reactivos cuya modificacin afecta su funcin. Se ha establecido
que el estado redox de los grupos reactivos tiol es importante para la activacin de la transicin de
permeabilidad mitocondrial. En consecuencia, los reticulantes de tiol tales como el DIDS, diamida y
xido de fenilarsina [20-100 M] afectan la funcin del canal VDAC y ANT y la activacin de la
transicin de permeabilidad mitocondrial. Muchos resultados publicados, tales como
experimentos de reticulacin, estequiometria de protena / inhibidor, dmeros quimricos,
ultracentrifugacin analtica o dispersin de neutrones, indican que el portador de ANT acta
como un dmero y este o ms oligmeros estn implicados en la transicin de permeabilidad a la
membrana.

Haciendo frente a la matriz mitocondrial, ANT tiene tres regiones de bucle expuestas que
contienen una estructura de repeticin conservada con un residuo Cys en cada bucle. Estos
residuos de Cys son importantes para el proceso de dimerizacin de ANT, pero no est claro cmo
funciona y si los restos Cys forman enlaces disulfuro intermoleculares o no. Sin embargo, la cobre-
o-fenantrolina es capaz de dimerizar ANT mediante reticulacin intermolecular de Cys 56 (en el
primer bucle de matriz). Adems, el xido de fenilarsina, la eosina 5-maleimida y la diamida
forman entrecruzamientos intramoleculares entre Cys 160 y Cys 257 en los otros dos bucles de
matriz, restringiendo la ANT en la conformacin abierta, promoviendo la transicin de
permeabilidad mitocondrial. El trixido de arsnico es mucho ms dbil que el xido de fenilsarina
al unirse a los residuos de ANT Cys y esto puede explicar la mayor sensibilidad exhibida por las
clulas APL frente al xido de fenilarsino [IC50: 0,1 M] que a As2O3 [IC50: 4 M].

Los compuestos que interactan con tioles individuales tales como N metilmaleimida (NEM)
pueden inhibir la transicin de permeabilidad mitocondrial y esto podra ser el resultado de la
interaccin directa con los restos clave de Cys en los bucles de matriz de ANT o indirectamente a
travs de reaccin con GSH e impidiendo as que GSH se oxide y catalizar el puente disulfuro entre
los grupos tiol adyacentes en los bucles ANT. NEM o monobromobimano, en el rango de 25-50M,
reaccionan preferentemente con GSH, lo que lleva a su modificacin en las mitocondrias y por lo
tanto evita que el GSH se oxide. Como resultado, NEM inhibe la activacin de la transicin de
permeabilidad mitocondrial por los compuestos reactivos tiol, diamida o hidroperxido de t-butilo,
lo que implica un papel para GSSG (glutatin oxidado) en la accin de estos agentes sobre la
transicin de permeabilidad.

Los arsenitos, aunque se requeriran concentraciones mucho mayores debido a su menor afinidad
por la interaccin glutatin, podran tener una accin similar. Por lo tanto, altos niveles de
arsenitos podran modificar e inhibir el control redox del glutatin de tal manera que las enzimas
basadas en el glutatin son incapaces de funcionar, as como mediando directamente la
reticulacin disulfuro de la ANT, dando lugar a aumentos en la produccin de ROS celular, MPTP y
apoptosis. Sin embargo, dada su baja reactividad con los sistemas de glutatin, esto parece poco
probable en comparacin con la accin indirecta a travs de los efectos mitocondriales que
conduce a un aumento de la produccin de ROS, lo que reduce los niveles de GSH celular.

La resistencia a mltiples frmacos (MRP) ha demostrado que la protena MRP1 / ABCC1 ha

transportado AsIII fuera de las clulas como un conjugado tri-GSH (As- (GSH) 3), y la glutatin S-
transferasa (GST) probablemente facilita el proceso. Esto es probable que sea parte de la clula
normal y los mecanismos de resistencia de clulas cancerosas contra los efectos citotxicos de los
compuestos a base de arsnico. Las clulas agotadas de GSH son ms sensibles a la muerte por
compuestos que contienen arsnico y la transfeccin de clulas para expresar glutatin S
transferasa las protege del arsenito que induce la muerte promoviendo el transporte de arsenito
desde las clulas y disminuyendo los niveles de ROS. En apoyo de esta propuesta, la exposicin a
largo plazo de las clulas a los compuestos que contienen arsnico indujo la expresin aumentada
de glutatin S transferasa y MRPs. Los niveles de arsnico no alcanzan niveles muy altos en el
plasma sanguneo de los pacientes, eliminndose rpidamente. Esta eliminacin probablemente se
debe a la absorcin eficiente de As- (GSH) 3 a travs de MRP2 en los tbulos proximales de los
riones como parte del proceso de desintoxicacin durante la excrecin de frmacos basados en
arsnico predominantemente en la orina. El resto se elimina principalmente por absorcin en el
hgado y secrecin como bilis. As- (GSH) 3 puede ser una parte importante del proceso metablico
para convertir As (III) inorgnico en especies metiladas durante la desintoxicacin en el hgado por
ASMT1 / Cyt19.

ESTRUCTURAS ARSNICAS ORGNICAS MODIFICADAS CON POTENCIA AUMENTADA COMO

AGENTES ANTINEOPLSTICOS

Los compuestos que contienen arsnico sustituidos con grupos orgnicos tales como xidos de
fenilarsina modificados han sido sintetizados y examinados por su efecto citotxico sobre clulas
leucmicas humanas y clulas de cncer de mama en cultivo. Se encontr que algunos de estos
compuestos exhiban una potente actividad anticancergena citotxica, particularmente contra el
cncer de mama humano y lneas celulares leucmicas, incluyendo clulas de leucemia primaria, a
concentraciones micromolares. Uno de estos compuestos, el nuevo compuesto que contiene
arsnico trivalente de pptido de glutatin para 4- [N- (S-glutatinacetil) amino] fenilarsenoxido (p-
GSAO) es prometedor como un nuevo frmaco antineoplsico y se encuentra ahora en ensayos
clnicos. El P-GSAO, como el xido de fenilarsina, inactiva el transporte ATP / ADP mediado por ANT
y desencadena la apertura MPTP dependiente de Ca2 + mediante la reticulacin de los residuos
Cys crticos de ANT. Esto conduce a una produccin aumentada de ROS celular, agotamiento de
ATP, despolarizacin mitocondrial y apoptosis de clulas endoteliales angiognicas e inhibicin del
crecimiento tumoral en ratones sin toxicidad aparente. Sin embargo, la accin de p-GSAO fue
indirecta, y no parece ser como resultado de la toxicidad selectiva de las clulas tumorales. Ms
bien, el p-GSAO inhibi in vitro las clulas endoteliales proliferantes, pero no crecientes del
crecimiento, y la angiognesis in vivo, actuando as para eliminar tumores bloqueando su
suministro sanguneo. Se demostr que la fraccin trivalente conteniendo arsnico de p-GSAO
reticula la matriz frente a los tioles Cys160 y Cys257 de ANT y bloquea eficazmente ANT en la
configuracin abierta. La inactivacin de ANT por p-GSAO provoca un aumento en los niveles de
superxido, detencin de la proliferacin, agotamiento de ATP, despolarizacin mitocondrial y
apoptosis en las clulas endoteliales que se dividen. Es probable que el resto que contenga
arsnico de p-GSAO reaccione de forma similar al arsenito con una o dos molculas de glutatin
antes de que sea removido de la clula por MRPs.

Bibliografa: Ralph J. S. Review Article. Arsenic-Based Antineoplastic Drugs and their mechanisms
of action. Agosto 2008. Metal-Based Drugs.

El mecanismo de la apoptosis inducida por As2O3. Los mecanismos apoptticos de frmacos y

para un tipo celular especifico estn asociados con la perturbacin de las funciones
mitocondriales. Este proceso da como resultado la activacin de la caspasa y la fragmentacin del
ADN, junto con cambios morfolgicos caractersticos. Hemos probado si As2O3-inducida por la
apoptosis es precedida por una disminucin del potencial de membrana mitocondrial (M). Se
encontr que en las clulas NB4, M disminuy en las 4 horas del tratamiento con 1 mol / L de
As2O3 y disminuy an ms con tiempos de tratamiento ms largos. Como se predijo a partir de la
disminucin del M, se observ la liberacin del citocromo c en el citoplasma; el grado de
liberacin fue leve 1 da despus de 1 mol / L de tratamiento con As2O3 y completo 2 das
despus. Concomitante con la mxima induccin de As2O3 para la liberacin citocromo c, la Cpp32
se activ, por la degradacin de su precursor. Esos eventos independientes de la degradacin de
Bcl-2, siguieron con la fragmentacin de DNA.

Los desarrollos recientes sugieren que varios estmulos poptoticos comparten una va mecanicista
caracterizada por la generacin de ROS y la prdida de potencial de membrana mitocondrial, con
cambios posteriores de permeabilidad de la membrana mitocondrial, liberacin de citocromo c y
activacin de caspasas. As, se ha demostrado que agentes tan diversos como la ceramida, el factor
de necrosis tumoral-, la irradiacin UV y las antraciclinas desencadenan la apoptosis mediante la
produccin de ROS. El As2O3 representa un nuevo estimulo apopttico que funciona va ROS
especficamente por la genreacin de H2O2, debido a las siguientes observaciones:

(1) El tratamiento de clulas NB4 con una concentracin apopttica de As2O3 (1 mol / l) inhibe la
actividad de GPx (glutatin peroxidasa).

(2) El mismo tratamiento da lugar a niveles elevados de H2O2 intracelular.

(3) El pretratamiento con selenita, un activador GPx, da como resultado una actividad GPx alta,
falta de acumulacin de H2O2 e inhibicin de la apoptosis.

(4) El co-tratamiento con MS (cido mercarptosuccinico), un inhibidor de GPx y, en menor medida,

con AT (aminotriazol), un inhibidor de catalasa, potencia la induccin de apoptosis por As2O3.

La alta sensibilidad de las clulas APL NB4 a As2O3 parece residir en un patrn especfico de
expresin en las clulas de leucemia de GPx (glutatin peroxidasa) y catalasa, as como GST
(glutatin-S-transferasa ), que representa la enzima principal de desintoxicacin de As2O3. As, las
clulas NB4 tienen bajas concentraciones de GST, GPx, y actividades de catalasa relativas a otras
4 lneas celulares leucmicas no-APL, lo que sugiere que las clulas NB4 desintoxican As2O3 y
catabolizan H2O2 de manera menos eficiente.

La apoptosis inducida por As2O3 est bloqueada por el NAC y el cido lipoico, agentes que
aumentan el GSH, y se refuerza con el BSO, un agente que agota el GSH. Por lo tanto, altos niveles
de GSH, el donante de protones para la descomposicin catalizada por GPx de H2O2 y para la
destoxificacin catalizada por GST de As2O3, aseguran velocidades rpidas para estas reacciones,
confiriendo as un efecto protector. El sinergismo del cido ascrbico de la apoptosis inducida por
As2O3 en NB4 est mediado por la produccin de H2O2, porque est inhibido por la catalasa.

El As2O3 acta para aumentar los niveles de H2O2 en las clulas NB4, principalmente por la
inhibicin de la actividad de GPx, que es un principal thiol-enzima de captacin de H2O2. Los bajos
niveles de GST limitan la destoxificacin de As2O3 celular, proporcionando una mayor capacidad
de unin a As2O3 que contribuye a la inactivacin directa de GPx. Por otra parte, es posible que
As2O3 tambin incremente la produccin mitocondrial de H2O2. Tambin se debe sealar que las
peroxidasas distintas de GPx tambin pueden ser atacadas por As2O3.

La apoptosis en las clulas NB4 tratadas con As2O3 procede a travs de la va clsica descrita para
otras seales inductivas ROS. As, As2O3 provoc una rpida disminucin del potencial de
membrana mitocondrial, que precedi a la liberacin de citocromo c, la activacin de Cpp32, la
fragmentacin del ADN y la evidencia morfolgica de apoptosis. Las clulas que sobreexpresan Bcl-
2 son resistentes a la muerte celular inducida por H2O2. La apoptosis inducida por As2O3 en
clulas NB4 est bloqueada por el inhibidor de caspasa Z-VAD-FMK. Este resultado es consistente
con la observacin de que Z-VAD-FMK bloque la apoptosis inducida por As2O3 en clulas de
linfoma. La va apopttica inducida por As2O3, se representa esquemticamente en la siguiente
figura.

Bibliografa: Yongkui Jing, Jie Dai, Ruth M. E., Redman Chalmers, Tatton William, Waxman
Samuel. Arsenic Trioxide selectively induces promyelocytic Leukemia cell apoptosis via a
Hydrogen peroxide-dependent pathway. Blood vol. 94, No.6 (September 15) 1999:2102-2111pp.

Espiroquetas y espirilos.
 Son bacterias que se encuentran en el phylum bacteriano Spirochaetes. Son bacterias
gramnegativas, mviles y fuertemente enrolladas, de forma alargada y flexible. Se clasifican en 8
gneros segn su hbitat, patogenia, filogenia y caractersticas morfolgicas y fisiolgicas, como se
muestra en la siguiente tabla.
Dimensiones Nmero de
Gnero Caractersticas generales Hbitat Enfermedades
(mm) endoflagelos

3-10 vueltas espirales

completas; manojo de Tubo digestivo de
Cristispira 30-150*0.5-3.0 endoflagelos visibles por >100 moluscos; no se ha -
microscopa de contraste de cultivado
fases

Anaerobio o aerobio Acutico de vida

Spirochaeta 5-250*0.2-0.75 facultativo; vueltas de espiral 2-40 libre, agua dulce y -
fuertes o flojas marina

Microaerfilo o anaerobio;
Comensal o parsito Sfilis, pian,
vueltas de espiral helicoidales
Treponema 5-15*0.1-0.4 2-32 en humanos y disentera
o planas con amplitud de hasta
animales porcina, pinta
0.5m

Fiebres
recurrentes,
Microaerfilo; 5-7 vueltas de
Humanos y otros enfermedad de
Borrelia 8-30*0.20-0.5 espiral de aproximadamente 7-20
mamferos artrpodos Lyme,
1m de amplitud
borreliosis
ovina y bovina

Aerobio, fuertemente
Vida libre o parsito
enrollado con extremos
Leptospira 6-10*0.1 2 en humanos y otros Leptospirosis
curvados o en gancho; requiere
mamferos
cidos grasos de cadena larga

Aerobio; no requiere cidos

Leptonema 6-20*0.1 2 Vida libre -
grasos de cadena larga

Intestino de animales Diarrea en

Brachyspira 7-10*0.35-0.45 Anaerobio 8-28
de sangre caliente pollos y cerdos

Microaerfilo; por anlisis de

Infeccioso para
la secuencia de rRNA 16S Sangre y tejidos de
Brevinema 4-5*0.2-0.3 2 ratones de
supone bifurcacin profunda ratones y musaraas
laboratorio
en el linaje de las espiroquetas

Tienen motilidad poco frecuente determinada por su inusual morfologa. Contienen endoflagelos
que se asemejan a los flagelos normales pero se encuentran en el periplasma de la clula. Estos
endoflagelos estn anclados a los polos de la clula y se extienden a lo largo de toda la clula.
Tanto los endoflagelos como el cilindro protoplasmtico estn rodeados por una membrana
flexible llamada vaina externa. Los endoflagelos rotan como lo hacen los flagelos bacterianos
tpicos. Cuando los endoflagelos de ambos polos rotan en el mismo sentido, el cilindro
protoplasmtico lo hace en sentido contrario y genera la torsin de la clula. Esta torsin hace que
la clula de la espiroqueta se flexione, de manera que el movimiento resultante es similar al de un
sacacorchos y permite a la clula avanzar hundindose en materiales o tejidos viscosos. (Vase la
siguiente figura)

A menudo las espiroquetas se confunden con los espirilos, estos son bacilos curvos helicoidales,
mviles gracias a sus flagelos polares. El nmero de vueltas helicoidales en un espirilo puede variar
de menos de una vuelta completa (en cuyo caso, el organismo se parece a un Vibrio) hasta muchas
vueltas. Los espirilos que se dividen por su zona terminal, como la cianobacteria Spirulina, pueden
formar largos filamentos helicoidales que se parecen superficialmente a las espiroquetas. Los
espirilos carecen de vaina externa, los endoflagelos y la motilidad de tipo sacacorchos de las
espiroquetas. Adems los espirilos suelen ser clulas bastante rgidas, mientras que las
espiroquetas son muy flexibles y finas (<0.5m).

Bibliografa: Madigan Mcihael, Martinko John, Bender Kelly, Buckley Daniel, Stahl David. Brock.
Biologa de los microorganismos. 14ed.Pearson Educacin, Madrid, 2015. (496-497pp)
Algo ms sobre el metabolismo de Treponema pallidium.
Estudios radiorrespiromtricos revelaron que la glucosa y el piruvato, pero no oleato o palmitato,
podran degradarse a CO2. El uso de glucosa marcada diferencialmente, junto con anlisis
enzimticos, indic que la glucosa se cataboliz mediante una combinacin de las vas de Embden-
Meyerhoff-Parnas y de hexosa monofosfato. El piruvato se degrad a CO2 desde slo la posicin
carboxilo, lo que sugiere la ausencia de un ciclo funcional de Krebs; esto fue corroborado por
anlisis enzimticos adicionales y experimentos radiorrespiromtricos. Oleato y palmitato se
incorporaron pero no se catabolizaron por beta-oxidacin. La glucosa, aunque catabolizada, no se
incorpor.

Aunque se considera un anaerobio, Cox y Barber han demostrado que T. pallidum consume O2. Tal
absorcin de O2 fue sensible al cianuro, lo que indica una citocromo oxidasa funcional. La
inhibicin de esta absorcin de O2 por la azida, la clorpromazina y el amytal sugiri adems un
sistema de transporte de electrones funcionando para la oxidacin del nicotinamida adenina
dinucletido reducido (NADH) a O2. Se sugiri el acoplamiento de este sistema a la fosforilacin
oxidativa. La posible naturaleza aerobia de T. pallidum fue apoyada recientemente por Baseman et
al., quienes encontraron que la degradacin de la glucosa y la sntesis proteica se desarrollaron
ptimamente en presencia de O2 a concentraciones de 10 a 20% y se inhibieron en condiciones
anaerobias.

La existencia de la va HMP proporcionara una fuente de NADPH, que es necesaria para la

biosntesis de cidos grasos. Adems, la va HMP tambin puede proporcionar intermedios, tales
como pentosa y trifosfatos, que pueden ser necesarios para la biosntesis. La va de EMP puede
servir como un camino principal de energa para el T. pallidum. La presencia de exceso de pentosa
o triosa fosfatos puede servir para regular la demanda de la va HMP, mientras que los
requerimientos energticos pueden controlar el flujo de la va EMP. La observacin de diferentes
niveles de actividad de las vas EMP y HMP durante esta investigacin puede reflejar esta actividad.

La posibilidad de que T. pallidum cataliz la descarboxilacin oxidativa de piruvato a acetato y CO2

mediante el uso de un sistema de flavoprotena-citocromo fue investigada. Tal sistema ha sido
descrito por Williams y Hager para E. coli. Sin embargo, los extractos de T. pallidum no pudieron
demostrar actividad de piruvato deshidrogenasa (citocromo) por este procedimiento de ensayo.

Los resultados de Cox y Barber sugieren que T. pallidum tiene un sistema de transporte de
electrones acoplado a O2, y por lo tanto puede derivar energa adicional de la fosforilacin
oxidativa. Se requiere investigacin adicional de un sistema de transporte de electrones terminal
en T. pallidum. Sin embargo, sin un ciclo de Krebs en funcionamiento, nuestro conocimiento de su
capacidad de rendimiento energtico seguira siendo consistente con el lento tiempo de
generacin que se ha observado para T. pallidum.
Se ha demostrado que el metabolismo de la glucosa en T. pallidum procede a travs de las vas de
Embden-Meyerhoff-Parnas y de hexosa monofosfato. El lactato, el acetato y el piruvato se
producen durante el metabolismo de la glucosa en el organismo. Los estudios han demostrado que
la cantidad de lactato y acetato producida en T. pallidum depende de la cantidad de oxgeno
disuelto en su medio de crecimiento. Aunque las enzimas glicolticas y de ciclo pentosa se
encuentran en las espiroquetas, las enzimas del ciclo TCA estn ausentes de sus genomas.

Aunque las espiroquetas, comparadas con las bacterias, son relativamente ricas en lpidos (22% de
su peso seco), carecen de todas las enzimas de la biosntesis de cidos grasos. Los estudios han
demostrado que no sintetizan cidos grasos de cadena larga y necesitan un suministro externo de
cidos grasos para su supervivencia.

En consecuencia, muchas de las reacciones consecutivas se agruparon en una nica reaccin

global. En el metabolismo fermentativo cido mixto, la glucosa se degrada a lactato y acetato. La
va de pentosa fosfato est presente en las dos espiroquetas donde la glucosa-6-fosfato se
convierte en fructosa-6-fosfato y gliceraldehdo-3-fosfato. En el proceso, se producen dos
molculas de NADPH por cada molcula de glucosa-6-fosfato que est siendo sifonada en la va de
la pentosa. En contraste con la va de pentosa fosfato, la ruta de biosntesis de cidos grasos
requiere una gran cantidad de NADPH para la condensacin de Acetil-CoA.

Bibliografa:

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Rajdeep Das, Hedi Hegyi, Mark Gerstein. Genome Analyses of Spirochetes: A study of the protein
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Brock Thomas, Smith David, Madigan Michael. Microbiologa. 4ed. Prentice Hall
Hispanoamericana. Mxico 1987