1. 2.

INTRODUCCIN Sin la intervencin de los microorganismos no podra llevarse a

cabo los ciclos del carbono, nitrgeno, azufre y oxgeno, y la atmosfera de la tierra
tendra una composicin de gases muy diferente a la actual Una clula con
deficiencias a nivel de biosntesis, es incapaz de convertir los precursores biosintticos
en biopolmeros, es llamada AUXTROFA.
2. 3. Las sustancias capaces de sustituir estas deficiencias metablicas y que por lo
tanto favorecen su crecimiento se les llama FACTORES DE CRECIMIENTO. Una
clula que no requiere de factores de crecimiento es PROTTROFA Los
microorganismos QUIMIOORGANOTRFICO O HETEROTRFICOS satisfacen sus
requerimientos de energa, donador inicial de electrones y carbono a partir de una
misma molcula orgnica (azucares o aminocidos)
3. 4. Se clasifican en Simples Monosacridos * Glucosa * Fructosa * Galactosa
Disacridos * Sacarosa * Maltosa * Lactosa Complejos Complejos * Almidn *
Celulosa
4. 5. ENZIMA Mas de 100 aa, masa: 100 KDa, Diametro: 25 amstrongs Afectan la
velocidad de la reaccion sin participar como reactantes ni aparecer en los resultados
Pueden ser inhibidas Se ocupan cantidades minimas Alta especificidad
Modifican la estructura qumica del sustrato No alteran el equilibrio de la reaccin
5. 6. POLISACARIDOS: formados por azucares unidos por enlaces glicosdicos.
CELULOSA: es el compuesto orgnico ms abundante en la naturaleza, es muy
importante en el ciclo biogeoqumico de el carbono, es insoluble en agua y slo los
microorganismos que producen CELULASAS pueden hidrolizarla ALMIDN: es un
homopolosicrido que es degradado por las amilasas que producen al disacrido
maltosa
6. 7. PROTENAS unidos por enlaces peptdicos. Proteasa: Capaces de hidrolizar
parcialmente las protenas a pptidos y estos a su vez ser degradado a aminocidos
por otras enzimas llamadas peptidasas Algunas bacterias pueden utilizar lpidos
animales y vegetales, especialmente los triglicridos que estn compuestos de una
molcula de glicerol esterificada con tres molculas de cidos grasos Protena
Proteasa Peptidos Peptidasas Aminocido s
7. 8. TRIGLICRIDOS: Las bacterias que degradan triglicridos producen enzimas
extracelulares llamadas Lipasas que hidrolizan los enlaces ster. El glicerol y los
cidos grasos resultantes son transportados por las clulas y utilizados como unidades
para la biosntesis de material celular nuevo bien, son oxidados para obtener energa
8. 9. FOSFOLIPASAS: Pueden degradar fosfolpidos. Algunas hemolisinas bacterianas
son fosfolipsas que rompen eritrocitos de la sangre por que destruyen la integridad de
la membrana celular. Muchas enzimas extracelulares de microorganismo patgenos
son considerados factores de patogenicidad ya que facilitan la entrada y utilizacin de
sustratos, etc.
9. 10. Objetivos: Comprender los diferentes procesos metablicos de los
microorganismos mediante el montaje de ensayos y pruebas de degradacin de
polmeros a travs de enzimas extracelulares microbianas. Y con base en sto,
identificar sus requerimientos nutricionales y su clasificacin fisiolgica
10. 11. MATERIAL Tubos de 13x 100mm con gelatina al 4% Tubos de 13x100 mm
con leche tornasolada Cajas Petri divididas en sectores con: a) Agar almidn b)
Gelosa gelatina c) Agar leche descremada d) Agar yema de huevo e) Gelosa sangre
HgCl2 12.5% Solucin de Lugol Bao de hielo Cultivos de: Escherichia coli,
Klebsiella pneumoniae, Bacillus subtilis, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa,
Salmonella typhi, Shigella flexneri y Staphylococcus aureus
11. 12. Medio diferencial. La gelatina es el producto desnaturalizado parcial del colgeno,
y muestra la propiedad de gelificar cuando se disuelve en agua caliente y solidificar en
ambientes fros. Sus productos de la hidrlisis carecen de esta propiedad.
12. 13. PROTEASAS Y PEPTIDASAS Para utilizar la gelatina muchos microorganismos
producen gelatinasa, una exoenzima que la hidroliza. Este proceso ocurre en dos
etapas: Primera, se liberan polipptidos Segunda, una mezcla de aminocidos.
13. 14. Componentes del almidn El almidn es un homopolisacarido, su monmero es
el -D-glucosa que estn unidos por puentes -glucosidicos. Amilosa lineal (10-20%) y
amilopectina ramificada (80-90%) La hidrolisis enzimtica ocurre en las uniones -1-
4-acetal y -1-6- acetal.
14. 15. -amilasa La -amilasa La -amilasa cataliza la hidrolisis de las uniones -1,4-
glucosidicas. La amilosa es degradada por completo por la amilasa. La hidrolisis
completa del almidn requiere de otra enzima, que acta en los puntos de
ramificacin.
15. 16. LUGOL La amilosa, forma hlices donde se juntan las molculas de yodo,
formando un color azul oscuro a negro. La amilopectina, forma hlices mucho ms
cortas, obtenindose un color entre naranja y amarillo Al romperse o hidrolizarse el
almidn en unidades ms pequeas de carbohidrato, el color azul-negro desaparece.
16. 17. MTODOS I HIDRLISIS DE LA GELATINA a) Prueba de licuefaccin de la
gelatina en tubo Sembrar MOS por picadura en los tubos de medio gelatina Incubar a
37C durante 24-48 h Pasar los tubos a 4c o un bao de hielo durante 1 hora Si
despus del enfriamiento el contenido del tubo es liquido la prueba es + si el tubo
solidifica, la prueba de hidrolisis es negativa Slido (-)Lquido (+)
17. 18. b) Prueba de la digestin de la gelatina y la casena en caja Marcar las cajas Petri
con gelosa gelatina y agar leche descremada Etiquetar cada sector con el nombre de
el MO a inocular Sembrar los microorganismos por estra abierta Incubar los cultivos
de 28C a 30C durante 48 h Anadir HgCl2 a las placas para observar los halos
trasparentes de hidrolisis
18. 19. II. HIDRLISIS DE ALMIDN Marcar y sembrar las placas de gelosa almidn
Incubar a 37C durante 48 h. Aadir solucin de Lugol a las placas Observar los halos
de hidrlisis Zonas trasparentes que rodean a las bacterias que dan la prueba positiva
sobre fondo azul Sin halo (-)Halo (+)
19. 20. CUESTIONARIO 3- Explique el significado de los trminos REQUERIMIENTO
NUTRICIONAL: Los requerimientos nutricionales de cada grupo microbiano estn
dados por la composicin qumica de las clulas que los constituyen y por sus
caractersticas genticas las que determinan sus propiedades fisiolgicas y su
capacidad para utilizar y transformar los compuestos que se encuentran en el
ambiente en que se desarrollan FACTOR DE CRECIMIENTO: sustancias capaces
de sustituir deficiencias metablicas. Autotrfico: cuando su nutricion es enteramente
inorganica, la unica fuente de carbono es el acido carbonico del aire, el agua
suministra el H2, los NO3, NO2, etc. Auxtrofos: presentan deficiencias a nivel
biosntesis (incapaces de convertir precursores biosintticos con biopolmeros),
requieren factores de crecimiento.
20. 21. Heterotrfico: satisfaces sus niveles de energa, donadores iniciales de
electrones y carbono a partir de una misma molcula como azucar o aminoacidos.
Horottrofos: no requieren de factores de crecimiento. 4- Hidrolitico: Reaccin qumica
en la que el agua reacciona doblemente con otro compuesto, pasando el hidrgeno a
uno de los compuestos y el hidroxilo a otro. las enzimas hidrolticas son aquellas que
rompen los enlaces covalentes por hidrlisis, es decir por el agregado de una molcula
de agua (H2O). Son esenciales para mltiples funciones. Digestin, regulacin,
degradacin, diferenciacin, etc. 5- las enzimas extracelulares que rompen protenas
se llaman PROTEASAS, las que rompen polisacridos GLICOSIDASAS, y las que
rompen lpidos son las LIPASAS
21. 22. 7- un ejemplo de polisacarido estructural es CELULOSA. Un ejemplo de
polisacarido nutricional es GLUCOSA, ALMIDN- GLUCGENO 8- La caseina es la
proteina de origen HETEROPROTEINA- ANIMAL(LECHE), y la gelatina es de origen
PROTEINA- ANIMAL (HIDRLISIS PARCIAL DEL COLAGENO DE LA PIEL) 9- La
descomposicion de los alimentos por degradacion de trigliceridos provoca ENZIMAS
EXTRACELULARES LLAMADAS LIPASAS 6- conteste falso (F) o verdadero (V) V-
Muchas enzimas extracelulares son hidroliticas, pero o tiodas las enzimas hidrolticas
son extracelulares F- Las peptidasas son enzimas extracelulares que hidrolizan
proteinas de alto peso molecular V- Las glicosidasas hidrolizan enlaces ester en
polisacaridos F- las membranas biologicas son sensibles a las lipasas