Cromatografa lquida de alta eficacia

Qu es la cromatografa de lquidos?
La historia de la cromatografa lquida (CL) se inici a principios del siglo XX. En 1906, un botnico
ruso Mikhail Tswett invento CL para separar varios pigmentos de plantas. El inyecto el extracto
de una planta y ter de petrleo a travs de una columna de vidrio lleno de carbonato de calcio.
Dado que esto fue hecho en una columna de vidrio, fue capaz de observar los cambios dentro de
la columna. Al principio, slo vio una capa de pigmento en la parte superior de la columna (figura
1.a). Pero a medida que pasa el tiempo, el pigmento se divide en cuatro capas de colores
diferentes (Figura). La investigacin descubri ms tarde que las cuatro capas eran (i) de color
verde azulado, clorofila a, (ii) de color verde amarillento, clorofila b, (iii) de color amarillo, xantina,
y (iv) de color naranja; caroteno. Todo el proceso de separacin dur varias horas y por lo tanto
no era un mtodo muy prctico. Este tiempo largo de anlisis fue una de las razones que la CL
no se convirti en una herramienta analtica popular hasta 1970, medio siglo despus de la
invencin de Mikhail Tswett.
A continuacin se presenta algunos de los trminos utilizados en el anlisis de cromatografa. La
cromatografa es una tcnica de separacin y la palabra cromatografa se origin de la
palabra chroma que significa color y graphein que significa escribir. Cromatgrafo es el
equipo de separacin y cromatograma es el grfico obtenido en el anlisis.

La cromatografa lquida de alta eficacia o high performance liquid chromatography (HPLC) es

un tipo de cromatografa en columna utilizada frecuentemente en bioqumica y qumica
analtica. Tambin se la denomina a veces cromatografa lquida de alta presin o cromatografa
lquida de alta resolucin (high pressure liquid chromatography) (HPLC), aunque esta
terminologa se considera antigua y est en desuso. El HPLC es una tcnica utilizada para separar
los componentes de una mezcla basndose en diferentes tipos de interacciones qumicas entre
las sustancias analizadas y la columna cromatogrfica.

Cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC)

En la HPLC isocrtica el compuesto pasa por la columna cromatogrfica a travs de la fase
estacionaria (normalmente, un cilindro con pequeas partculas redondeadas con ciertas
caractersticas qumicas en su superficie) mediante el bombeo de lquido (fase mvil) a alta
presin a travs de la columna. La muestra a analizar es introducida en pequeas cantidades y
sus componentes se retrasan diferencialmente dependiendo de las interacciones qumicas o
fsicas con la fase estacionaria a medida que adelantan por la columna. El grado de retencin de
los componentes de la muestra depende de la naturaleza del compuesto, de la composicin de
la fase estacionaria y de la fase mvil. El tiempo que tarda un compuesto a ser eluido de la
columna se denomina tiempo de retencin y se considera una propiedad identificativa
caracterstica de un compuesto en una determinada fase mvil y estacionaria. La utilizacin de
presin en este tipo de cromatografas incrementa la velocidad lineal de los compuestos dentro
de la columna y reduce as su difusin dentro de la columna mejorando la resolucin de la
cromatografa. Los disolventes ms utilizados son el agua, el metanol y el acetonitrilo. El agua
puede contener tampones, sales, o compuestos como el cido trifluoroactico, que ayudan a la
separacin de los compuestos. Una mejora introducida en la tcnica de HPLC descrita fue la
variacin en la composicin de la fase mvil durante el anlisis, conocida como elucin en
gradiente. Un gradiente normal en una cromatografa de fase reversa puede empezar a un 5%
de acetonitrilo y progresar de forma lineal hasta un 50% en 25 minutos. El gradiente utilizado
vara en funcin de la hidrofobicidad del compuesto. El gradiente separa los componentes de la
muestra como una funcin de la afinidad del compuesto por la fase mvil utilizada respecto a la
afinidad por la fase estacionaria. En el ejemplo, utilizando un gradiente agua/acetonitrilo los
compuestos ms hidroflicos eluirn a mayor concentracin de agua, mientras que los
compuestos ms hidrofbicos eluirn a concentraciones elevadas de acetonitrilo. A menudo,
hace falta realizar una serie de pruebas previas con tal de optimizar el gradiente de forma que
permita una buena separacin de los compuestos.

Tipos de HPLC

Cromatografa de fase normal

La cromatografa de fase normal o normal phase HPLC (NP-HPLC) fue el primer tipo de sistema
HPLC utilizado en el campo de la qumica, y se caracteriza por separar los compuestos sobre la
base de su polaridad. Esta tcnica utiliza una fase estacionaria polar y una fase mvil apolar, y
se utiliza cuando el compuesto de inters es bastante polar. El compuesto polar se asocia y es
retenido por la fase estacionaria. La fuerza de adsorcin aumenta a medida que aumenta la
polaridad del compuesto y la interaccin entre el compuesto polar y la fase estacionaria polar
(en comparacin a la fase mvil) aumenta el tiempo de retencin. La fuerza de interaccin no
slo depende de los grupos funcionales del compuesto de inters, sino tambin en factores
estricos de forma que los ismeros estructurales a menudo se pueden diferenciar el uno del
otro. La utilizacin de disolventes ms polares en la fase mvil disminuye el tiempo de retencin
de los compuestos mientras que los disolventes ms hidrofbicos tienden a aumentar el tiempo
de retencin. La NP-HPLC cay en desuso a los aos 1970 con el desarrollo del HPLC de fase
reversa o reversed-phase HPLC debido a la falta de reproductibilidad de los tiempos de retencin
puesto que los disolventes prticos cambiaban el estado de hidratacin de la silica o almina de
la cromatografa.

Cromatografa de fase inversa (o reversa)

La HPLC de fase inversa (RP-HPLC) consiste en una fase estacionaria apolar y una fase mvil de
polaridad moderada. Una de las fases estacionarias ms comunes de este tipo de cromatografa
es la silica tratada con RMe2SiCl, donde la R es una cadena alquil tal como C18H37 o C8H17. El
tiempo de retencin es mayor para las molculas de naturaleza apolar, mientras que las
molculas de carcter polar eluyen ms rpidamente. El tiempo de retencin aumenta con la
adicin de disolvente polar a la fase mvil y disminuye con la introduccin de disolventes ms
hidrofbicos. La cromatografa de fase reversa es tan utilizada que a menudo se lo denomina
HPLC sin ninguna especificacin adicional. La cromatografa de fase reversa se basa en el
principio de las interacciones hidrofbicas que resultan de las fuerzas de repulsin entre un
disolvente relativamente polar, un compuesto relativamente apolar, y una fase estacionaria
apolar. La fuerza conductora en la unin del compuesto a la fase estacionaria es la disminucin
del rea del segmento apolar del analito expuesto al disolvente. Este efecto hidrofbico est
dominado por el aumento de la entropa, y la consecuente disminucin de la energa libre,
asociada con la minimizacin de la interfase compuesto-disolvente polar. El efecto hidrofbico
disminuye con la adicin de disolvente apolar a la fase mvil. Esto modifica el coeficiente de
particin de forma que el compuesto se mueve por la columna y eluye.

Las caractersticas del compuesto de inters juegan un papel muy importante en la retencin.
En general, un compuesto con una cadena alquil larga se asocia con un tiempo de retencin
mayor porque aumenta la hidrofobicidad de la molcula. Aun as, las molculas muy grandes
pueden ver reducida la interaccin entre la superficie del compuesto y la fase estacionaria. El
tiempo de retencin aumenta con el rea de superficie hidrofbica que suele ser inversamente
proporcional al tamao del compuesto. Los compuestos ramificados suelen eluir ms
rpidamente que sus ismeros lineales puesto que la superficie total se ve reducida. Aparte de
la hidrofobicidad de la fase inmvil, otras modificaciones de la fase mvil pueden afectar la
retencin del compuesto; por ejemplo, la adicin de sales inorgnicas provoca un aumento lineal
en la tensin superficial, y como que la entropa de la interfase compuesto-disolvente est
controlada precisamente por la tensin superficial, la adicin de sales tiende a aumentar el
tiempo de retencin. Otra variable importante es el pH puesto que puede cambiar la
hidrofobicidad del compuesto. Por este motivo, la mayora de mtodos utilizan un tampn como
el fosfato de sodio para controlar el valor del pH. Estos tampones controlan el pH, pero tambin
neutralizan la carga o cualquiera resto de silica de la fase estacionaria que haya quedado
expuesta y actan como contraiones que neutralizan la carga del compuesto. El efecto de los
tampones sobre la cromatografa puede variar, pero en general mejoran la separacin
cromatogrfica. Las columnas de fase reversa se echan a perder con menor facilidad que las
columnas de silica normales. Aun as, muchas columnas de fase reversa estn formadas por silica
modificada con cadenas alquil y no se deben utilizar nunca con bases en medio acuoso puesto
que stas podran daar el esqueleto de silica subyacente. Las columnas se pueden utilizar en
cidos en medio acuoso pero no deberan estar expuestas demasiado tiempo al cido porque
puede corroer las partes metlicas del aparato de HPLC.

Cromatografa de exclusin molecular

La cromatografa de exclusin molecular, tambin conocida como cromatografa por filtracin

en gel, separa las partculas de la muestra en funcin de su tamao. Generalmente se trata de
una cromatografa de baja resolucin de forma que se suele utilizar en los pasos finales del
proceso de purificacin. Tambin es muy til para la determinacin de la estructura terciaria y
la estructura cuaternaria de las protenas purificadas. La cromatografa de filtracin molecular
es un mtodo de cromatografa en columna por el cual las molculas se separan en solucin
segn su peso molecular, o ms precisamente, segn su radio de Stokes. En esta cromatografa,
la fase estacionaria consiste en largos polmeros entrecruzados que forman una red
tridimensional porosa. A los fines prcticos, la columnas se empaquetan con pequeas
partculas esferoidales formadas por esos polmeros entrecruzados. En consecuencia, estas
partculas son porosas, y el tamao de los poros es tal que algunas molculas (las demasiado
grandes) no podrn ingresar a esos poros, en tanto que otras (las suficientemente pequeas)
podrn pasar libremente. Los poros quedan conectados formando una malla o red, lo cual
determina una serie de caminos a ser recorridos por las molculas que acceden al interior de
esta.

Cromatografa de intercambio inico

En la cromatografa de intercambio inico, la retencin se basa en la atraccin electrosttica

entre los iones en solucin y las cargas inmovilizadas a la fase estacionaria. Los iones de la misma
carga son excluidos mientras que los de carga opuesta son retenidos por la columna. Algunos
tipos de intercambiadores inicos son: i) Resinas de poliestireno, ii) intercambiadores inicos de
celulosa y dextranos (geles) y iii) Silica porosa o vidrio de tamao de poro controlado. En general
los intercambiadores inicos favorecen la unin de iones elevada carga y radio pequeo. Un
incremento en la concentracin del contrain (respecto a los grupos funcionales de la resina)
reduce el tiempo de retencin. Un incremento en el pH reduce el tiempo de retencin en las
cromatografas de intercambio catinico mientras que una disminucin del pH reduce el tiempo
de retencin en las cromatografas de intercambio aninico. Este tipo de cromatografa es
ampliamente utilizado en las siguientes aplicaciones: purificacin de agua, concentracin de
componentes traza, Ligand-exchange chromatography, Ion-exchange chromatography of
proteins, High-pH anion-exchange chromatography of carbohydrates and oligosaccharides, etc.

Cromatografa basada en bioafinidad

Este tipo de cromatografa se basa en la capacidad de las sustancias biolgicamente activas de

formar complejos estables, especficos y reversibles. La formacin de estos complejos implica la
participacin de fuerzas moleculares como las interacciones de Van der Waals, interacciones
electrostticas, interacciones dipolo-dipolo, interacciones hidrofbicas y puentes de hidrgeno
entre las partculas de la muestra y la fase estacionaria

Cromatografa lquida de alta eficacia en condiciones desnaturalizantes

(DHPLC)
Se trata de un mtodo que se emplea para el rastreo de mutaciones (ya casi totalmente en
desuso debido al auge de la secuenciacin), que permite detectar la presencia de variaciones en
el ADN aunque no se determinan especficamente cules. En este caso, se utiliza la tcnica
cromatogrfica para la deteccin de heterodplex de ADN, en lugar de utilizar un gel para correr
las molculas de cidos nucleicos. El procedimiento consiste en desnaturalizar (aumentando la
temperatura normalmente) una muestra que contenga tanto el ADN problema como un ADN
control, que no es ms que el mismo ADN problema pero en su versin silvestre o normal (sin
mutaciones). Luego se procede a renaturalizar (disminuyendo la temperatura), de manera que
aquellas cadenas de ADN que vuelvan a unirse con sus respectivas complementarias (cadena "a"
silvestre con cadena "b" silvestre; o bien cadena "a" mutante con cadena "b" mutante) no
presentarn diferencia con el estado original; sin embargo, si por ejemplo una cadena "a"
silvestre hbrida con una cadena "b" mutante, aquella regin (ms o menos amplia) en la que
exista mutacin no complementar, formndose un bucle u horquilla, es decir, una regin en la
que las bases nitrogenadas no son complementarias y no establecen las uniones caractersticas
por puentes de hidrgeno en la doble hlice de ADN. Dichas estructuras son los denominados
heterodplex (dplex de ADN hbridos). Estos heterodplex migran de forma diferente a los
homodplex en la columna de cromatografa de fase reversa(al igual que lo hacen en un gel de
agarosa o acrilamida). La separacin se realiza en condiciones desnaturalizantes variables,
detectndose las molculas de ADN midiendo la absorbancia a 260 nm. Esto origina un pico de
elucin a un tiempo caracterstico. A medida que se incrementan las condiciones
desnaturalizantes los heterodplex migran por delante de los homodplex, apareciendo los
picos correspondientes a heterodplex antes en el grfico resultante, el cromatograma. De esta
manera, como los heterodplex se desnaturalizan a temperaturas distintas a los homodplex,
ambas molculas dan lugar a picos de elucin distintos. Previo al proceso inicial de
desnaturalizacin se suele llevar a cabo una PCR para la amplificacin del ADN molde en
fragmentos de unas 150-450 pb. Con este sistema pueden detectarse fcilmente sustituciones
de una base, inserciones o deleciones, con un coste reducido y de manera rpida
(aproximadamente 16 minutos).

Parmetros
Dimetro interno

El dimetro interno de una columna de HPLC es un aspecto crtico que determina la cantidad
de muestra que se puede cargar a la columna y tambin influye en su sensibilidad. Las
columnas de dimetro interno ms grande (>10mm) se utilizan normalmente en la purificacin
de compuestos para su utilizacin posterior. En cambio, las columnas de dimetro interno
menor (4-5 mm) se utilizan en el anlisis cuantitativo de las muestras, y se caracterizan por el
aumento la sensibilidad y la minimizacin del consumo de disolventes que conllevan. Estas
columnas se suelen denominar columnas de rango analtico y normalmente estn asociadas a
un detector UV-VIS. Aparte, existen otros tipos de columnas, como las de tipo capilar, con un
dimetro inferior a 0.3 mm, utilizadas principalmente en espectrometra de masas.

Medida de las partculas

La mayora de HPLC tradicionales se realizan con una fase estacionaria unida al exterior de
partculas esfricas de silica. Estas partculas pueden tener diferentes medidas, siendo las de
5\mum de dimetro las ms utilizadas. Partculas ms pequeas ofrecen una mayor superficie
y una mejor separacin, pero la presin que se requiere por obtener una velocidad lineal
ptima aumenta de forma inversamente proporcional al cubo del dimetro de la partcula.
Esto significa que disminuir la medida de las partculas a la mitad, aumentara la resolucin de
la columna, pero a la vez, aumentara la presin necesaria en un factor de ocho.

Tamao de poro

Muchas fases estacionarias son porosas para proporcionar una mayor superficie. Los poros
pequeos proporcionan una mayor superficie mientras que los poros de mayor medida
proporcionan una cintica mejor, especialmente para los compuestos de tamao ms grande;
por ejemplo, una protena que sea ligeramente ms pequea que el tamao de los poros
puede entrar, pero difcilmente saldr con facilidad.

Presin del sistema

La presin de las bombas es variable segn el modelo y fabricante, pero su rendimiento se

mide en su habilidad para generar un flujo constante y reproducible. La presin puede lograr
valores de hasta 40 MPa (o unas 400 atmsferas). Los aparatos ms modernos de HPLC
incorporan mejoras para poder trabajar a presiones ms altas y, por lo tanto, poder utilizar
partculas de tamao ms pequeo en las columnas (< 2 micrmetros). Estos nuevos aparatos,
denominados ultra performance liquid chromatography (UPLC) pueden trabajar con valores de
hasta 100 MPa de presin (unas 1000 atmsferas). (Hay que tener en cuenta que las siglas
UPLC son una marca registrada de Waters Corporation aunque a veces se utilizan de forma
general para designar este tipo de aparatos).

Fabricantes de aparatos de HPLC

 HITACHI
KONIK GROUP
Agilent Technologies (antiguamente Hewlett-Packard)
Beckman Coulter, Inc.
Dionex Corporation
Eksigent Technologies
Gilson, Inc.
Micro-Tech Scientific
PerkinElmer, Inc.
Proxeon Biosystems A S/
Shimadzu Scientific Instrumentos
Thermo Electron Corporation
Waters Corporation
Knauer
JASCO
YOUNG LIN
Varian

Los Componentes de HPLC

Tpicamente el sistema HPLC consta de lo siguiente (Figura ). Los detalles de cada uno se
explican abajo.

Bomba
En la primera etapa del desarrollo del HPLC, la bomba fue la parte ms importante del sistema.
El desarrollo del HPLC se puede decir que fue dado por el desarrollo del sistema de bombeo. La
bomba se colocaba en lo ms alto del sistema CL y generaba un flujo del reservorio del disolvente
al sistema. En esta etapa el requisito ms importante del sistema era poder generar una alta
presin. Sin embargo, hoy en da, la generacin de alta presin es normal y lo que ms preocupa
ms hoy en da es proporcionar una presin constante en cualquier condicin, para proporcionar
un caudal controlable y reproducible dado que el cambio en la proporcin del flujo puede influir
el anlisis en gran medida. La mayora de las bombas utilizadas en los sistemas LC actuales
generan el flujo con un movimiento de vaivn de un pistn de motor (bombas de pistn). Debido
a este movimiento del pistn, se produce pulsos. Ha habido grandes mejoras del sistema para
reducir esta pulsacin y las bombas recientes crean un pulso muy inferior a las antiguas bombas.
Sin embargo, los anlisis actuales requieren una sensibilidad muy alta para cuantificar una
pequea cantidad de analitos, e incluso un pequeo cambio en la velocidad del flujo puede influir
en el anlisis. Por lo tanto, las bombas necesarias para el anlisis de alta sensibilidad tienen que
ser muy precisas.

Inyector
Un inyector se coloca al lado de la bomba. El mtodo ms simple es utilizar una jeringa, y la
muestra se introduce en el flujo de eluyente. Ya que la precisin de la medicin por CL tiene
mucho que ver con la reproducibilidad de la inyeccin de la muestra, el diseo de los inyectores
es un factor importante. El mtodo de inyeccin ms utilizado se basa en lazos de muestreo. El
uso de muestreador automtico (auto-inyector) del sistema tambin es ampliamente utilizado
ya que permite una serie de inyecciones repetitivas en un tiempo programado.

Columna
La separacin se lleva a cabo dentro de la columna, por lo tanto, se puede decir que la columna
es el corazn de un sistema de CL. La teora de la cromatografa en columna no ha cambiado
desde la poca de Tswett, sin embargo ha habido una continua mejora en el desarrollo de la
columna. Las columnas recientes suelen estar preparados en una carcasa de acero inoxidable, en
lugar de columnas de vidrio utilizadas en el experimento de Tswett. En general, el material de
relleno que se utiliza es de gel de slice o de polmeros en comparacin con el carbonato de calcio
utilizado por Tswett. El eluyente utilizado para la CL vara de cido a solventes bsicos. La mayora
de la cubierta de la columna es de acero inoxidable y es tolerante a una gran variedad de
disolventes. Sin embargo, para el anlisis de algunos analitos como las biomolculas y los
compuestos inicos, el contacto con el metal no es deseable, por lo tanto columnas con cubierta
de politer ter cetona (PEEK) se utiliza en su lugar.

Detector
La separacin de los analitos se realiza dentro de la columna, mientras que un detector se utiliza
para observar la separacin obtenida. La composicin del eluyente es consistente cuando no hay
analito est presente, en cambio la presencia del analito cambia la composicin del eluyente. Lo
que el detector hace es medir estas diferencias. Esta diferencia se observa como una forma de
seal electrnica. Hay diferentes tipos de detectores disponibles. Diferentes tipos detector y se
explican en la leccin 6.

Registracin de Datos
El cambio en eluyente detectado por un detector es una forma de seal electrnica, y as no es
visibles a nuestros ojos. En otros tiempos, la pluma- papel-registrador grfico se utilizaba muy
popularmente. Hoy en da, una computadora con un posesor de base de datos (integrador) es
ms comn. Hay varios tipos de procesadores de datos, e incluye un sistema simple que consiste
en construir la impresora y el procesador de textos, y un tipo de computadora personal que
consta de monitor, teclado e impresora. Tambin hay programas que estn diseados
especficamente para el sistema LC. Ofrece no slo la adquisicin de datos, pero tambin
caterticas como mximo de ajuste, la correccin de lnea base, el clculo automtico de la
concentracin, la determinacin del peso molecular, etc Los componentes introducidos hasta el
momento son los fundamentos del sistema LC. A continuacin se presentan algunos equipos
opcionales se utiliza con el sistema bsico de LC.

Desgasificador
El eluyente utilizado para anlisis con LC puede contener gases como oxgeno que son no visibles
a nuestros ojos. Cuando el gas est presente en eluyente, este se detecta como un ruido y causas
una lnea base inestable. Generalmente los mtodos que se utilizan incluye el burbujeo (burbujeo
de gas inerte), uso de bomba de vacio, sistema destilacin, y / o calentamiento y agitacin. Sin
embargo, estos mtodos no son convenientes cuando el disolvente se deja por un perodo de
tiempo determinado (por ejemplo, durante un anlisis largo). El desgasificador usa unos tubos
de membrana de polmero especial para eliminar los gases. Los numerosos pequeos poros en
la superficie del tubo de polmero permite que el aire pase a travs mientras que previene
cualquier otro lquido pasar a travs del poro. Mediante la colocacin de esta tubera bajo el
contenedor de baja presin, crea las diferencias de presin dentro y fuera de la tubera (mayor
en el interior del tubo). Esta diferencia hace que el gas disuelto se mueva a travs de los poros
y eliminar el gas. En comparacin con el tipo clsico de desgasificacin por lotes, el desgasificador
se puede utilizar on-line, es ms conveniente y eficiente. Muchos de los nuevos sistemas HPLC
contienen un desgasificador.

Horno de columna
La separacin con LC es a menudo muy influenciada por la temperatura de la columna. Con el
fin de obtener resultados repetibles, es importante mantener una temperatura constante.
Tambin para algunos anlisis, como el azcar y los cidos orgnicos, se puede obtener mejor
resolucin a temperatura elevada (50 ~ 80 C). Tambin es importante mantener una
temperatura estable para obtener resultados repetibles, incluso cuando se analiza a una
temperatura de ambiente. Hay posibilidades de que los diferentes cambios de temperatura haga
que los resultados de la separacin sean diferentes. Generalmente las columnas se mantienen
dentro del horno de columna (calentador columna).

Principios de la tcnica

En la cromatografa lquida, la fase mvil es un lquido que fluye a travs de una columna que contiene
a la fase fija. La separacin cromatogrfica en HPLC es el resultado de las interacciones especficas
entre las molculas de la muestra en ambas fases, mvil y estacionaria
A diferencia de la cromatografa de gases, la cromatografa de lquidos de alto rendimiento (HPLC, de
high-performance liquid chromatography) no est limitada por la volatilidad o la estabilidad trmica
de la muestra.
La HPLC es capaz de separar macromolculas y especies inicas, productos naturales lbiles,
materiales polimricos y una gran variedad de otros grupos polifuncionales de alto peso molecular.
Con una fase mvil lquida interactiva, otro parmetro se encuentra disponible para la selectividad,
en adicin a una fase estacionaria activa.
 La HPLC ofrece una mayor variedad de fases estacionarias, lo que permite una mayor gama de estas
interacciones selectivas y ms posibilidades para la separacin.
HPLC preparativa
Es la tcnica escogida para aislamiento y purificacin de productos de valor en las industrias qumicas
y farmacuticas as como en la biotecnologa y la bioqumica. La cromatografa preparativa
comprende un amplio rango de aplicaciones, desde el aislamiento de 1g de muestra para
identificacin espectroscpica hasta el aislamiento de un compuesto puro de una mezcla de 100 g.

Aplicaciones

Campos de Aplicacin de HPLC

Frmacos: Antibiticos, sedantes esteroides, analgsicos
Bioqumica: Aminocidos, protenas, carbohidratos, lpidos
Productos de alimentacin: Edulcorantes artificiales, antioxidantes, aflatoxinas, aditivos
Productos de la industria qumica: Aromticos condensados, tensoactivos, propulsores, colorantes
Contaminantes: fenoles, Pesticidas, herbicidas, PCB
Qumica forense: Drogas, venenos, alcohol en sangre, narcticos
Medicina clnica: cidos biliares, metabolitos de drogas, extractos de orina, estrgenos.
Algunas aplicaciones importantes de la HPLC preparativa
Separacin y purificacin de metabolitos
Separacin y purificacin de los metabolitos de las drogas procedentes de muestras de orina
Purificacin y separacin de enantimeros
Purificacin de compuestos naturales
Purificacin y caracterizacin de enzimas y protenas