Cromatografia

Cromatografa de gases (fid) fundamento

La cromatografa de gases es una tcnica muy utilizada para separar los diferentes
compuestos voltiles de una muestra. La fase mvil es un gas inerte, (nitrgeno o
helio) que transporta la muestra volatilizada en el inyector a travs de la columna
cromatogrfica. La fase estacionaria generalmente est constituida por una
columna de metil polisiloxano, o derivados de ste. Los diferentes compuestos se
separan en funcin de su grado de volatilidad (punto de ebullicin, peso molecular)
y su afinidad por la fase estacionaria. Entre los detectores ms utilizados caben
mencionar el detector FID (ionizacin de llama) que por su alta versatilidad, hace
posible la deteccin de un elevado tipo de compuestos. APLICACIONES: Esta
tcnica esta indicada para la separacin de compuestos orgnicos voltiles. Rango
de trabajo para muestras lquidas: g L-1 - mg L-1 Rango de trabajo para muestras
slidas: g Kg-1 - g g-1 EQUIPOS Cromatgrafo de gases VARIAN 3900
Columnas disponible: DB5. polixilosano (30mx0,25mm x0.25m) Detector FID
Inyector split/splitless Automuestreador TIPO DE MUESTRAS:Aguas, suelos,
alimentos..etc (para cualquier tipo de matriz contactar con el laboratorio).
GC con detector de conductividad trmica (GC-TCD)
Cromatografa de gases El detector de conductividad trmica o GC-TCD es una
tcnica utilizada para analizar gases inorgnicos (argn, nitrgeno, hidrgeno,
dixido de carbono, etc.) y pequeas molculas de hidrocarburos. El TCD compara
la conductividad trmica de dos flujos de gases: el gas portador puro (de referencia)
y la muestra. Los cambios en la temperatura de los hilos del detector, calentados
elctricamente, son afectados por la conductividad trmica del gas que fluye a su
alrededor. Los cambios en esta conductividad trmica se detectan como un cambio
en la resistencia elctrica y se miden.

Como es habitual tambin en otras tcnicas de cromatografa de gases, se necesita

un gas portador con pocas impurezas de agua y oxgeno, ya que el agua y el
oxgeno pueden interactuar con la fase estacionaria y provocar problemas
significativos, como un elevado ruido de lnea base y purga de la columna en el
cromatograma de gases de salida, lo que reducira la sensibilidad del analizador y
la vida til de la columna. Adems, las impurezas de oxgeno y de agua en el gas
del detector pueden afectar al TCD porque pueden producir oxidacin en los cables
del detector.
Cromatografia captura de electrones
El detector de captura de electrones ha llegado a ser uno de los detectores ms
ampliamente utilizados para el anlisis de muestras medioambientales, debido a su
selectividad para detectar compuestos que contienen halgenos, tal es el caso de
los pesticidas y de los bifenilos policlorados (PCBs). Incluso a concentraciones muy
bajas (ppm y ppb) este detector es efectivo. Este tipo de detector opera casi del
mismo modo que un contador proporcional para la medida de rayos X. El eluyente
de la columna pasa sobre un emisor , normalmente 63Ni. Un electrn del emisor
provoca la ionizacin del gas portador y la produccin de una rfaga de electrones.
De este proceso de ionizacin, en ausencia de especies orgnicas, resulta una
corriente constante entre un par de electrodos. Sin embargo, la corriente disminuye
significativamente en presencia de molculas orgnicas que tienden a capturar
electrones. La respuesta no es lineal, a no ser que el potencial a travs del detector
se aplique en forma de impulsos. El detector de captura de electrones es de
respuesta selectiva, siendo muy sensible a las molculas que contienen grupos
funcionales electronegativos tales como halgenos, perxidos, quinonas, y grupos
nitro; en cambio, no es sensible a grupos funcionales como aminas, alcoholes e
hidrocarburos. Una aplicacin importante del detector de captura de electrones es
la deteccin y determinacin de insecticidas clorados. Los detectores de captura de
electrones son altamente sensibles y tienen la ventaja de no alterar la muestra de
manera significativa. Por otra parte, su intervalo de respuesta lineal se limita a uno
o dos rdenes de magnitud. Un aspecto importante para el detector ECD es el gas
portador. El detector ECD necesita un flujo de gas alto para funcionar con eficacia.
Como generalmente se emplean con columnas capilares que originan un flujo de
gas bajo, se conecta un gas make-up de flujo auxiliar para aumentarlo. Por otra
parte, el detetector ECD es muy sensible al agua por lo que el gas portador debe
estar completamente seco, adems su contenido en compuestos halogenados debe
ser del orden de ppb. Para generar electrones libres el detector ECD necesita
nitrgeno, helio o metano, este ltimo usado como mezcla metano/argn. Todos
ellos usados tanto como gases portadores como gases de deteccin. La seleccin
del gas as como de una correcta instalacin, es fundamental para preservar la
sensibilidad del mtodo, los lmites de deteccin y reproducibilidad del detector.
Como toda analtica cromatogrfica, la cromatografa de gases es un mtodo
relativo, por lo que requiere de calibracin interna con mezclas precisas. En un
primer anlisis es necesario el uso de una mezcla de calibracin certificada,
posteriormente los componentes de la muestra son determinados por medidas
comparativas. De este modo los componentes son identificados en proporcin y
concentracin.
Espectrometra ultravioleta-visible
La espectrometra ultravioleta-visible o espectrofotometra UV-Vis implica la
espectroscopia de fotones en la regin de radiacin ultravioleta-visible. Utiliza la luz
en los rangos visible y adyacentes (el ultravioleta (UV) cercano y el infrarrojo (IR)
cercano.
En esta regin del espectro electromagntico, las molculas se someten a
transiciones electrnicas.
Esta tcnica es complementaria de la espectrometra de fluorescencia, que trata
con transiciones desde el estado excitado al estado basal, mientras que la
espectrometra de absorcin mide transiciones desde el estado basal al estado
excitado.
La espectrometra UV/Vis se utiliza habitualmente en la determinacin cuantitativa
de soluciones de iones metlicos de transicin y compuestos orgnicos muy
conjugados.
Los compuestos orgnicos, especialmente aquellos con un alto grado de
conjugacin, tambin absorben luz en las regiones delespectro electromagntico
visible o ultravioleta. Los disolventes para estas determinaciones son a menudo el
agua para los compuestos solubles en agua, o el etanol para compuestos orgnicos
solubles. Los disolventes orgnicos pueden tener una significativa absorcin de UV,
por lo que no todos los disolventes son adecuados para su uso en espectrometra
UV. El etanol absorbe muy dbilmente en la mayora de longitudes de onda. La
polaridad y el pH del disolvente pueden afectar la absorcin del espectro de un
compuesto orgnico. La tirosina, por ejemplo, aumenta su mximo de absorcin y
su coeficiente de extincin molar cuando aumenta el pH de 6 a 13, o cuando
disminuye la polaridad de los disolventes.

Aunque los complejos de transferencia de carga tambin dan lugar a colores, stos
son a menudo demasiado intensos para ser usados en mediciones cuantitativas.

La ley de Beer-Lambert establece que la absorbancia de una solucin es

directamente proporcional a la concentracin de la solucin. Por tanto, la
espectrometra UV/VIS puede usarse para determinar la concentracin de una
solucin. Es necesario saber con qu rapidez cambia la absorbancia con la
concentracin. Esto puede ser obtenido a partir de referencias (las tablas de
coeficientes de extincin molar) o, con ms exactitud, determinndolo a partir de
una curva de calibracin.

El espectrofotmetro UV/Vis puede utilizarse como detector para la Cromatografa

Lquida de Alta Resolucin (CLAR). La presencia de un analitico da una respuesta
que puede ser proporcional a la concentracin. Para resultados precisos, la
respuesta del instrumento analtico debe compararse con la respuesta a un
estndar, lo que es muy similar al uso de curvas de calibracin. La respuesta (por
ejemplo, el pico de altura) para una concentracin particular se conoce como factor
de respuesta.
Detector de ndice de refraccin
Detector RI mide el cambio en el ndice de reflejo. Una celda de vidrio se divide en
dos cmaras (las clulas). El efluente de la columna LC flujo a travs de la clula
de muestra, en tanto que otra clula llamada clula de referencia est lleno de
solo fase mvil. Cuando el efluente va a travs de la celda de muestra no contiene
ningn analito, el disolvente en el interior de ambas clulas son los mismos (Figura
1A). Cuando un haz es irradian en las clulas, el haz observada ser recta en este
caso. Sin embargo, en un caso en el efluente contiene algn otro componente
que la fase mvil; flexin del haz incidente se produce debido a la diferencia de
ndice de reflexin entre los dos disolventes (Figura 1B). Mediante la medicin de
este cambio, la presencia de componentes se puede observar.
Detector RI tiene una menor sensibilidad en comparacin con detector UV, y esa es
la razn principal por la RI no es tan comn como los rayos UV. Sin embargo, hay
algunas ventajas sobre detector UV.
Es adecuado para la deteccin de todos los componentes. Por ejemplo, las
muestras que no tienen absorcin UV, tal como azcar, alcohol, o iones inorgnicos,
obviamente, no puede ser medida por un detector de UV. En contraste, el cambio
en el ndice de reflexin se produce en todos los analitos, por lo tanto un detector
de RI que se puede utilizar para medir todos los analitos. Es aplicable para el uso
con el disolvente que tiene la absorbancia UV. Un detector de UV no se pueden
usar con el disolvente que tiene la absorbancia UV. A veces, el disolvente orgnico
utilizado para el anlisis GPC absorbe UV, y por lo tanto detector UV no se pueden
usar. Se proporciona una relacin directa entre la intensidad y la concentracin del
analito. La cantidad de UV absorbida depende de cada analito, por lo tanto la
intensidad de pico detector UV no proporciona informacin sobre la concentracin
de analito. Mientras tanto la intensidad observada por un detector RI es comparable
a la concentracin del analito. Debido a estas ventajas, RI se utiliza a menudo para
la deteccin de azcares y para el anlisis SEC.

Cromatografia: Detector de Fluorescencia

La ventaja del mtodo de fluorescencia es su alta sensibilidad para determinados
grupos de compuestos a ~ nivel fg. Mediante el uso de una longitud de onda
especfica, tomos de analito son excitados y luego emitir la seal de luz
(fluorescencia). La intensidad de esta luz emitida se controla para cuantificar la
concentracin del analito. La mayora de los productos farmacuticos, productos
naturales, muestras clnicas, y los productos derivados del petrleo tienen
absorbancia fluorescente. Para algunos compuestos que no tienen absorbancia
fluorescencia o absorbancia baja, pueden ser tratados con derivados de
fluorescencia tales como dansylchloride. El sistema es fcil de manejar y
relativamente estable.