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1Instituto Nacional de Salud, Direccin de Investigacin en Salud Pblica, Grupo Salud Ocupacional y del Ambiente,
Avenida Calle 26 # 51 20 Zona 6 CAN, Bogot, Colombia.
*Autor para correspondencia: cramirezg@ins.gov.co.
Revista
Colombiana
Recibido: agosto 11 de 2013 Aceptado: diciembre 4 de 2013 de
Qumica
Este artculo describe la metodologa de This article describes the methodology of the Este artigo descreve a metodologia de
validacin para la tcnica de identificacin validation about the identification of total validao da tcnica de identificao de
de mercurio total en muestras de sangre por mercury in blood samples by Zeeman atomic mercrio total em amostras de sangue por
espectrofotometra de absorcin atmica absorption spectrophotometry RA-915+ with espectrofotometria de absoro atmica
Zeeman RA-915+ con el mdulo de pirlisis the module of Pyrolysis PYRO-915+, suitable RA-915+ Zeeman com mdulo de pirlise
PYRO-915+, adecuada para la determinacin for the direct determination of total mercury PYRO-915+, adequado para a determinao
directa de las concentraciones de mercurio total concentrations in various matrices, that direta das concentraes de mercrio total em
en varias matrices, la cual no necesita un pre- unlike other atomization techniques (graphite vrias matrizes, em comparao com outras
tratamiento de la muestra, a diferencia de otras furnace, cold vapor or hydride generator) tcnicas de atomizao (forno de grafite,
tcnicas de atomizacin (horno de grafito, vapor does not require a sample pre-treatment. vapor frio oude geradores de hidretos) no
fro o generador de hidruros). Su aplicacin en la With the application of this validation, is requer um pr-tratamento da amostra. Com
realizacin de los anlisis brinda la confiabilidad provided the reliability in the results. Most a aplicao desta validao na realizao dos
necesaria para la obtencin y emisin de los of the validation parameters were subjected anlises se atinge a confiabilidade exigida na
resultados. La mayora de parmetros de la to analysis of variance ANOVA with a obteno e emisso dos resultados. A maioria
validacin se sometieron a anlisis de varianza confidence level of 95%. It was obtained a dos parmetros de validao foram submetidos
tipo ANOVA con un nivel de confianza del 95%. detection limit of 2.16 g/L, a quantitation a anlise de varincia tipo ANOVA com um
Se obtuvo un lmite de deteccin de 2,16 g/L, limit of 5.54g/L and linearity in the range nvel de confiana de 95%. Foi obtido um
un lmite de cuantificacin de 5,54 g/L y una of 5.54 g/L to 100 g/L; in addition, the limite de deteco de 2,16 g/L, um limite de
linealidad en el rango de 5,54 g/L a 100 g/L; precision and accuracy was evaluated, quantificao de 5,54 g/L e uma linearidade
adicionalmente, se evaluaron la exactitud y obtaining favorable results in the analysis. The no intervalo de 5,54 g/L a 100 g/L; alm
la precisin de la metodologa, obteniendo calculation of the expanded uncertainty for disso, a preciso e a exactido foi avaliada,
resultados favorables para el anlisis. El this method was 0.610 g/L. obtendo-se resultados favorveis para o
clculo de la incertidumbre expandida para anlise. O clculo da incerteza expandida
este mtodo fue 0,610 g/L. para este mtodo foi 0,610 g/L.
Palabras clave: mercurio, validacin de Keywords: mercury, analytical Palavras-chave: mercrio, validao de
mtodos, espectrofotometra de absorcin methods validation, atomic absorption mtodo analtico, espectrofotometria de
atmica. spectrophotometry. absoro atmica.
Rev.
Rev.Colomb.
Colomb.Quim.
Quim.2013,
2013,4242(3),
(1),11-16.
13-21. 11
Ramrez, C.; Olarte, E.; Tllez, E.; Palma, M.
Con el clculo de porcentaje de recuperacin se obtuvo una t stu- Linealidad del mtodo
dent experimental de 1,18, que es menor a 1,66, valor crtico de t para
un nivel de confianza del 95%, n-1 de 74, con hiptesis nula (Ho) del
100% de recuperacin. Lo anterior indica que, bajo el parmetro de ex- La linealidad del mtodo puede observarse en el grfico de los resul-
actitud, este mtodo presenta un buen comportamiento, pues se opti- tados de los ensayos en funcin de la concentracin del mensurando
miza a medida que aumenta la concentracin. (Figura 2); fue calculada a partir de la ecuacin de la regresin lineal
determinada por el mtodo de los mnimos cuadrados. El coeficiente de
correlacin lineal es usado para indicar cuanto puede ser considerada
Precisin adecuada la recta como modelo matemtico.
En la determinacin de la linealidad del mtodo, se tomaron 15 me-
didas por cada concentracin de la curva, de la cual se obtuvo el coefici-
Repetibilidad ente de correlacin, intercepto y pendiente de la curva lineal, los cuales
Se analizaron 20 muestras para tres niveles de concentracin: bajo (5,00 se encuentran en la Tabla 2.
g/L), medio (25,0 g/L) y alto (100 g/L), a partir de los cuales se de- Como se observa en la Tabla 2, el coeficiente de correlacin es may-
termin la desviacin estndar relativa. Los resultados obtenidos fueron or de 0,997, lo cual permite concluir que cumple con los parmetros
18,7%, 9,70% y 9,60%, respectivamente. Segn la Food and Drug Ad- establecidos segn la FDA (15). Para el ANOVA de la regresin, se en-
ministration - FDA (11), la desviacin estndar relativa debe ser menor contr que p < 0,05 lo que indica que existe una relacin directamente
del 20% para concentraciones de nivel bajo, y menor del 15% para las proporcional entre la respuesta del equipo y la concentracin de mercu-
concentraciones medias y altas. Por lo tanto, se concluye que para los rio, con un nivel de confianza del 95%.
tres niveles se cumplen las especificaciones y el mtodo es repetible bajo
las condiciones dadas.
Lmites de deteccin y cuantificacin
Precisin intermedia
Este parmetro puede determinarse con la repeticin de las medidas El lmite de deteccin se determin con el anlisis de 20 repeticiones del
sin modificar el procedimiento pero adicionando una variacin (12), blanco (solucin preparada bajo las mismas condiciones que la curva
que para este caso fue el cambio de analista. Los dos operadores pre- sin adicin de solucin stock, es decir de concentracin cero para mer-
pararon las muestras por aparte y las analizaron en el equipo Lumex. curio) y posteriormente se calcul con la ecuacin 2 (16):
Para determinar la precisin intermedia se analiz por triplicado cada
una de las concentraciones, como lo plantea la Gua de Validacin de LOD = X + (3*SD) [ec. 2]
Mtodos Analticos del Ministerio de Salud y Proteccin Social (13),
posteriormente se determin el porcentaje de recuperacin y se realiz
la comparacin entre los resultados de los analistas para un n total de Donde X es la media de la respuesta instrumental del blanco y SD es
30, obtenindose un coeficiente de variacin de 9,60%. Esto indica que la desviacin estndar de la respuesta instrumental del blanco.
es posible realizar el procedimiento con diferentes analistas utilizando
las mismas condiciones analticas.
Estabilidad
Tabla 1. Respuesta del equipo para una solucin de 100 g/L analizada en diferentes Figura 2. Curva de la regresin lineal.
tiempos.
2,84x10 3
2,91x10 3
2,87x10 3 Coeficiente de correlacin 0,999
Rev.
Rev. Colomb.
Colomb. Quim.
Quim. 2013,
2013, 42
42 (3),
(1), 11-16.
13-21. 13
Ramrez, C.; Olarte, E.; Tllez, E.; Palma, M.
El lmite de cuantificacin se determin a partir de los mismos re- Esta incertidumbre corresponde a la incertidumbre mxima del
sultados de las mediciones de blanco con las que se estableci el lmite mtodo analtico validado; dicho valor corresponde a la incertidumbre
de deteccin, y se calcul con la ecuacin 3 (17): en el nivel 5 de la curva de calibracin (100 g/L).
La incertidumbre expandida se hall de la siguiente forma:
LOQ = X + (10*SD) [ec. 3]
U = K*U Analito [ec. 5]
En la Tabla 3 se encuentran los resultados de la desviacin estndar,
lmite de deteccin y cuantificacin. donde K es el factor de seguridad o de cobertura; K = 2 para un nivel
de confianza del 95%.
Finalmente, para el mtodo de determinacin de mercurio en san-
Incertidumbre gre por absorcin atmica con pirlisis, realizado bajo las condiciones del
laboratorio se obtuvo una incertidumbre expandida U = 0,610 g/L.
Instrumental (I)
2 2
=
RSD1 =
RSDcc 5,12 x107 Curva de calibracin (CC)
Micropipetas (Micro)
8
RSDMicro 2 = RSDEMP 2
Sx/y = Desviacin estndar de los residuales o error tpico. m= Pendiente curva de calibracin. p= Rplicas de la curva de calibracin. q= Nmero de niveles de la curva de calibracin.
X0 = Concentracin a la cual se evalu la incertidumbre. X = promedio de las concentraciones de la curva de calibracin. A= Tolerancia certificado calidad.
n = nmero de repeticiones para evaluar repetibilidad del material volumtrico.
Figura 3. Concentracin de mercurio en muestras de sangre provenientes de participantes del Proyecto de la Mojana.
Rev.
Rev. Colomb.
Colomb. Quim.
Quim. 2013,
2013, 42
42 (3),
(1), 11-16.
13-21. 15
Ramrez, C.; Olarte, E.; Tllez, E.; Palma, M.
Article citation:
Ramrez, C.; Olarte, E.; Tllez, E.; Palma, M. Validacin del mtodo analtico para la determinacin de mercurio total en sangre humana por
espectrofotometra de absorcin atmica Zeeman RA-915+ con el mdulo de pirlisis PYRO-915+. Rev Colomb Quim. 2013. 42(3): 11-16.