FERMENTACIN DE RESIDUOS DE CANGREJO Y CAMARN PARA LA

OBTENCIN DE QUITINASES EN MEDIO SLIDO

LVARO ALBERTO DE ARAJO* (alvaro@ufs.br); Lilian M. Costa;

Emerson. C. Muniz; Allisson J. Nascimento; Lucia F. H. Loureno; Rosangela Bergamasco
NEAL Ncleo de Engenharia de Alimento, UFS, Campus Universitrio de So Cristvo,
CEP 49100-000 So Cristvo SE Brasil

ABSTRACT

The consumption in natura of seafood, in Northeast of Brazil, such as prawns, crab and
lobster has increased the agro industrial wastes, such as crab and prawns shells. These shells
are discarded in the nature and no value is done for these shells. This work has its principal
source os studies these disposal shells. These shells were used, via solid state fermentation, as
substrate for production of quitinase, using this substrate which is composed of chitin.

Key-words: chitin, chitinase, Trichoderma harzianum.

1 INTRODUCCION
El cultivo de microorganismos en medio slido ha sido exhaustivamente estudiado en
las ltimas dcadas para la produccin de los ms variados bioproductos, entre ellos:
protenas, bioplaguicidas, enzimas, cidos orgnicos, entre otros. El medio slido permite la
utilizacin de residuos agroindustriales como substrato, material este existente en gran
cantidad en la regin nordeste.
Debido a la inadecuada disposicin de estos residuos surgi el inters de aprovchalos
como medio de cultura para hongos filamentosos que debidamente manipulados producen
protenas y enzimas a travs de procesos fermentativos. En este sentido, el presente trabajo
tuvo como objetivo investigar el potencial de produccin de enzimas a partir de los residuos
de cangrejo (conchas de cangrejo), que es largamente producido en nuestra regin. Se
pretende estudiar tambin las condiciones mximas de produccin de quitinazas y de esa
forma resolver el problema de la inadecuada disposicin de los residuos y obtener una
alternativa para la produccin de bioproductos.

* - A quin la correspondencia deber ser enviada

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 2 MATERIALES Y MTODOS

Fueron estudiados los residuos de conchas de cangrejo y de camarn como substrato e

obtenidos en industrias del estado de Sergipe e Par. Las cepas de Trichoderma harzianum ,
denominadas CBMAI 10, CBMAI 84, CBMAI 99, CBMAI 179 e CBMAI 180 de la
Coleccin Brasilera de Microoganismos de Ambiente y de Industria (UNICAMP/SP) fueron
mantenidas en placas de Petri conteniendo el medio PDA (Potato-Dextrose-Agar) bajo
refrigeracin en el Laboratorio de Bioqumica de Alimentos (Departamento de Ingeniera
Qumica UFS-SE).
Fue utilizada suspensin de esporos con (8.0 1.2) x 107 esporos mL-1 para
inoculacin de las muestras. Estas fueron incubadas en estufa bacteriolgica a 36C y
realizados estudios cinticos a lo largo de 4 y 11 das de fermentacin.
Posteriormente los microorganismos fueron inoculados en los residuos y despus de la
incubacin fueron realizados los anlisis de la concentracin de azcares, de protenas, de
actividad de la enzima quitinaza, del pH y de la humedad en diferentes tiempos de cultivo.
Las metodologas utilizadas fueron:
1. Humedad: fue determinada pesando la muestra del residuo y seca hasta obtener peso
constante y calculada por la frmula: 100 * (masa del residuo hmedo masa del residuo
seco) / masa del residuo hmedo.
2. pH: fue utilizado un pHmetro y su elctrodo, despus de su calibracin con las soluciones
patrones.
3. Cantidad de azcares reductores presentes en estos residuos: fue determinada por el
mtodo DNS (mtodo de Miller - 1959).
4. Cantidad de protena presente en estos residuos: fue determinada por el mtodo de biuret
(Cooper, 1977)
5. Para la determinacin de la actividad de la quitinaza, todos los quito-oligmeros,
quitobiose e NAcGlic que fueran liberados durante la degradacin de la quitina utilizando
quitina coloidal como substrato y esta actividad fue detectada colorimetricamente.

En relacin a la cintica de la fermentacin en medio slido para la seleccin de la

cepa, las cinco cepas fueron testadas cuanto a la produccin de quitinaza a lo largo del
tiempo. Las conchas de cangrejo CCG (fueron submetidas a un tratamiento qumico para
reducir el elevado contenido de minerales presentes) y las conchas de camarn CCM fueron
los substratos slidos del proceso fermentativo.

3 RESULTADOS Y DISCUSIN
Los testes iniciales utilizando las CCG tratadas, las CCM y el medio base como
substrato para FMS (Fermentacin en Medio Slido) indicaron que el microorganismo no
consigui se desarrollar en el medio de crecimiento, no asimilando la quitina disponible en
ese residuo. De esta forma, un co-substrato fue adicionado al medio slido para favorecer el
crecimiento del hongo. El co-substrato seleccionado fue la glucosa.
La adiccin de la glucosa favoreci el crecimiento del microorganismo el cual se
desarroll uniformemente a travs del medio slido. El microorganismo tambin se adapt en
condiciones de pH alcalino (pH natural del substrato), estando apto para producir quitinaza
an en valores elevados de pH.
Los azcares reductores iniciales fueron consumidos totalmente durante las primeras
doce horas de fermentacin y la actividad enzimtica mxima fue detectada despus de 24
horas de fermentacin, conforme muestra la Figura 1.

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 Las variables estudiadas mostraron tendencias de comportamiento semejantes para
todas las cepas estudiadas. La actividad quitinoltica fue mxima en el primer da de
fermentacin disminuyendo despus de ese perodo. A las 48 horas de fermentacin ocurri
una disminucin con promedio de 55% de la actividad quitinoltica, comparado al valor
ptimo obtenido.
El tenor de protenas present crecimiento estacionario constante durante los primeros
das alcanzando el valor mximo a los cinco das de fermentacin, presentando posterior
disminucin hasta el 11 da de fermentacin. Cuanto al pH hubo reduccin en su mximo
durante los 5 primeros das de fermentacin y posterior aumento hasta el final del proceso.
Este comportamiento puede haber ocurrido por la accin de las proteasas secretadas
por el microorganismo durante la fermentacin. La disminucin de la actividad de quitinaza
fue debida a la desnaturalizacin catalizada por la proteasa y la reversin en el
comportamiento el pH fue debida a la proteolisis que caus el aumento del valor del pH.
Suresh e Chandrasekaran (1999) encontraron resultados semejantes em sus estudios
con FMS utilizando residuos de trigo. La actividad quitinoltica presentada por el hongo
Beauveria bassiana fu mxima en las primeras 44 horas de fermentacin. Despes de 72
horas el decrscimo en la actividad enzimtica era de 60% comparado al valor ptimo
obtenido.
A respecto de las conchas de camarn CCM, el microorganismo asimil la quitina
disponible en los residuos, sin necesidad de la adicin de carbohidratos simples y se adapt al
pH alcalino del residuo (pH 7,70) durante la fermentacin y la formacin de esporos fue
visualizada despus de 5 das.
Para todas las cepas los valores de pH subieron lentamente alcanzando valores
prximos de 8,9 despus de 13 das de fermentacin. La actividad enzimtica y el tenor de
protenas total tuvieron la misma tendencia de comportamiento aumentando a lo largo del
tiempo y alcanzando sus valores mximos en el mismo da, excepto para una de las cepas
analizadas.
RATTANAKIT et al. (2002) observ un aumento de la actividade enzimtica hasta el
sptimo da en su FMS utilizando conchas de camarn (Penaeus monodon). Despes de ese
perodo la actividad quitinoltica tuvo una pequea disminucin o no cambi
significativamente.

La Figura 1 muestra la cintica de FMS utilizando como substrato la CGC.

Cintica de FMS utilizando CCG

Actividad enzimtica (U/gSSI) Protenas (mg/gSSI)
50 6

40
actividad
4 enzimtica(U/gSSI)
30
pH
20
2 protenas(mg/gSSI)
10

0 0
0 1 2 3 4 5 7 9 11
Tiempo (das)

Figura 1 - Cintica de FMS utilizando CCG de la cepa CBMAI 99

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 4 CONCLUSIN
Al ser inoculado en el substrato concha de camarn el hongo asimil la quitina, nica fuente
de carbono presente en ese substrato. Sin embargo, en la fermentacin slida utilizando
conchas de cangrejo fue necesaria la adicin de una fuente de carbono ms simples, en ese
caso, la glucosa, para inducir el crecimiento inicial del microorganismo; todos los valores de
actividad enzimtica mxima fueron obtenidos despus de 24 horas de fermentacin cuando
el substrato concha de cangrejo fue fermentado. La CBMAI 99 fue la que ms produjo la
enzima quitinaza y el valor obtenido fue de 47,04 U/gSSI; cuando se utiliz las conchas de
camarn como substrato de la fermentacin slida la actividad quitinoltica mxima
observada vari de 42,17 a 46,48 U/gSSI. La actividad mxima detectable gener valores
muy prximos entre las cepas estudiadas, no ocurriendo diferencia significativa entre los
valores obtenidos.

5 REFERNCIAS
BORZANI, W Biotecnologia Industrial. 1 ed. So Paulo: Edgard Blucher, 2001.
MILLER, G.L. 1959. Anal. Chem. 31.
NIEHAUS, F. et al. Appl. Microbiol. Biotechnol. (1999)
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