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MINISTRIO DA EDUCAO

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE


PR-REITORIA DE PS-GRADUAO E PESQUISA
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM AGRICULTURA E BIODIVERSIDADE

INFLUNCIA DA IDADE DA PLANTA NA COMPOSIO


QUMICA DO LEO ESSENCIAL DE Lippia alba E DE UM
CICLO DE SELEO RECORRENTE NA ATIVIDADE
FORMICIDA

VANDERSON DOS SANTOS PINTO

2017
MINISTRIO DA EDUCAO
UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE
PR-REITORIA DE PS-GRADUAO E PESQUISA
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM AGRICULTURA E BIODIVERSIDADE

VANDERSON DOS SANTOS PINTO

INFLUNCIA DA IDADE DA PLANTA NA COMPOSIO QUMICA DO LEO


ESSENCIAL DE Lippia alba E DE UM CICLO DE SELEO RECORRENTE NA
ATIVIDADE FORMICIDA

Dissertao apresentada Universidade


Federal de Sergipe, como parte das exigncias
do Curso de Mestrado em Agricultura e
Biodiversidade, rea de concentrao em
Agricultura e Biodiversidade, para obteno
do ttulo de Mestre em Cincias.

Orientador
Prof. Dr. Arie Fitzgerald Blank

SO CRISTVO
SERGIPE BRASIL
2017
FICHA CATALOGRFICA ELABORADA PELA BIBLIOTECA CENTRAL
UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE

Pinto, Vanderson dos Santos


P659i Influncia da idade da planta na composio qumica do leo essencial de Lippia
alba e de um ciclo de seleo recorrente na atividade formicida/ Vanderson dos
Santos Pinto; orientador Arie Fitzgerald Blank So Cristvo, 2017.
53f.: il.

Dissertao (Mestradoem Agricultura e Biodiversidade) Universidade


Federal de Sergipe, 2017.

Orientador: Prof. Dr. Arie Fitzgerald Blank

1. Erva-cidreira. 2. Essnciais e leos essenciais. 3. Plantas - Composio. 4.


Plantas Melhoramento gentico. I. Blank, Arie Fitzgerald Blank, orient.
II. Ttulo.

CDU: 582.929.4
VANDERSON DOS SANTOS PINTO

INFLUNCIA DA IDADE DA PLANTA NA COMPOSIO QUMICA DO LEO


ESSENCIAL DE Lippia alba E DE UM CICLO DE SELEO RECORRENTE NA
ATIVIDADE FORMICIDA

Dissertao apresentada Universidade


Federal de Sergipe, como parte das exigncias
do Curso de Mestrado em Agricultura e
Biodiversidade, rea de concentrao em
Agricultura e Biodiversidade, para obteno
do ttulo de Mestre em Cincias.

APROVADA em: 31/07/2017.

Prof. Dr. Alisson Marcel Souza de Oliveira Prof. Dr. Marcelo da Costa Mendona
PPGAGRI/UFS UNIT

Prof. Dr. Arie Fitzgerald Blank


UFS
(Orientador)

SO CRISTVO
SERGIPE BRASIL
Aos meus pais, namorada, ao
GPMACOe amigos
Dedico
AGRADECIMENTOS

Agradeo Universidade Federal de Sergipe e ao CNPq pela oportunidade de


ingressar na vida acadmica de financiarem todas as pesquisas que desenvolvi desde a
graduao at o mestrado.
A Deus, por me proporcionar pacincia e foras para conseguir executar todos os
projetos que me foram destinados at hoje e de ter-me dado foras para vencer todas as
dificuldades por que que passei desde minha infncia at a vida adulta.
Aos meus pais, por toda educao que me deram durante esses anos, que foi
importante para minha formao como homem. Ao meu irmo Diego, por toda amizade e
companheirismo nas horas difceis.
A minha namorada Juliana, por toda fora emocional, acadmica e psicolgica que
vem me dando desde a graduao at hoje. A toda sua famlia, por me ter acolhido to bem
comomembroe a todas as ajudas que me ofereceram nos momentos difceis.
Aos meus professores do ensino bsico, fundamental, mdio e superior que
contriburam de forma siginificativa para o ser humano tico e educado que sou hoje, como
tambm, o incentivo em todos os momentos de desnimo na minha vida.
A todos os membros do grupo GPMACO nesses anos de amizade, em especial
Elizangela, Camila, Mercia; a minha amiga Jessika Andreza pelo apoio de sempre; Alea,
Larissa, Hyrla, Faby, Lucas, Katily, Tais, Juliana Oliveira, Ianca, Luiz Fernando, Carlos,
Leticia e todos os membros que passaram pelo grupo e que contriburam nesse trabalho.
Ao meu orientador, Arie Fitzgerald Blank, pela confiana nesses quase sete anos de
trabalho, que sempre acreditou na minha capacidade e colocou sobre minha responsabilidade
projetos que pensei que no iria conseguir executar, mas que suas sabias palavras sempre me
motivaram a continuar avanando e estudando para atingir as metas.
Aos meus co-orientadores, Magna, Alisson, Rodrigo e Thiago, pela amizade e
ensinamentos durante esses anos desde a graduao.
Aos funcionrios da Fazenda Experimental Campus Rural da UFS pela amizade e
ajuda de sempre nos meus experimentos.
A todos os alunos da turma 2010 de Engenharia Agronmica da UFS, pela amizade e
cumplicidade durante esses cinco anos de curso, em especial, meus grandes amigos (a) Ane,
Morgana, Alexandre, Abrao, Jeffersonmeu irmo de graduao, Jean, Tlio, Ancelmo e
Pedro Rabelo pela amizade e experincias compartilhadas na rea durante esse tempo.
A todos os integrantes do laboratrio de cultura de tecidos, em especial, a professora
Ftima que sempre me recebeu muito bem e foi atenciosa em tirar minhas dvidas.
A todos os professores e funcionrios do programa de ps-graduao em Agricultura e
Biodiversidade.
A todos que contriburam direta ou indiretamente na realizao desse trabalho.

Obrigado
BIOGRAFIA

VANDERSON DOS SANTOS PINTO, filho de Ivonete Francisca do Santos Ferreira


e Valdir Gabriel Pinto, nasceu em So Caetano do Sul no Estado de So Paulo e mudou-se
para Sergipe no ano de 2001, onde reside at o momento.
Cursou o ensino fundamental na Escola EstadualGilson Amado e ensino mdio na
Escola Joo Batista da Rocha/SESI em Estncia-SE, onde concluiu no ano de 2009. Ingressou
no curso de Engenharia Agronmica pela Universidade Federal de Sergipe no ano de 2010,
concluindo em 2015 a graduao.
Durante a graduao, desenvolveu projetos de conservao de germoplasma de Lippia
alba (2011) e o programa de melhoramento de Ipomoea batatas (2012 a 2015) como bolsista
de iniciao cientfica e tecnolgica sob orientao do professor Dr. Eng. Agr. Arie Fitzgerald
Blank-UFS.
Participou da organizao de eventos na UFS como: o 1 dia de campo do GEBOL,
Seminrio de recursos genticos da UFS e o 2 dia de campo do Campus Rural da UFS.
Foi monitor voluntrio nas disciplinas de entomologia agrcola 1: geral e entomologia
agricola 2: manejo de pragas durante a graduao por dois perodos.
Foi coordenador de relaes pblicas e presidente da Associao de Estudante
Federais da cidade de Estncia-SE (ASEFE) nas gestes de 2012 e 2015. Tornou-se pioneiro
na elaborao e incio do projeto de biblioteca pblica e sala de aula para pessoas analfabetas
na cidade, alm disso, criou o programa de transparncia financeira e reduo da
indadimplncia na instituio.
Ingressou no mestrado no programa de ps-graduao em Agricultura e
Biodiversidade (PPGAGRI) no ano de 2015, onde foi membro do colegiado como
representante discente dos alunos de mestrado do PPGAGRI no perodo 2016/2017.
SUMRIO

Pgina
LISTA DE FIGURAS ..................................................................................................... i
LISTA DE TABELAS .................................................................................................... ii
RESUMO ........................................................................................................................ iii
ABSTRACT .................................................................................................................... iv
1.INTRODUO ............................................................................................................ 1
2.REVISO DE LITERATURA ..................................................................................... 2
2.1 Botnica, origem e usos ......................................................................................... 2
2.2 Aspectos morfolgicos de L. alba ......................................................................... 2
2.3 Diversidade qumica nos leos essenciais de plantas aromticas .......................... 6
2.4 Melhoramento gentico de espcies aromticas .................................................... 9
2.5 Atividade formicida de leo essencial ................................................................... 11
2.6 Carvona e sua atividade inseticida ......................................................................... 12
3.REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS .......................................................................... 14
4. CAPTULO 1: A IDADE DA PLANTA AFETA O TEOR E COMPOSIO
QUMICA DOS LEOS ESSENCIAIS DE GENTIPOS DE Lippia alba .................. 21
RESUMO ..................................................................................................................... 21
4.1 Introduo .............................................................................................................. 22
4.2 Material e Metodos ................................................................................................ 23
4.2.1 Material vegetal e delineamento experimental ................................................... 23
4.2.2 Extrao e anlise do leo essencial ................................................................... 23
4.2.3 Anlise estatstica ............................................................................................... 24
4.3 Resultados .............................................................................................................. 24
4.4 Discusso ............................................................................................................... 26
4.5 Referncias............................................................................................................. 28
5. CAPTULO 2: A SELEO RECORRENTE RESULTA EM
ALTERAESMORFOAGRONOMICAS E AUMENTO DA ATIVIDADE
FORMICIDA EM Lippia alba ......................................................................................... 37
RESUMO ......................................................................................................................... 37
5.1 Introduo .............................................................................................................. 38
5.2 Material e Mtodos ................................................................................................ 39
5.2.1 Material vegetal .................................................................................................. 39
5.2.2 Obteno das prognies ...................................................................................... 39
5.2.3 Produo das mudas e sua multiplicao ............................................................ 39
5.2.4 Ensaio de competio ......................................................................................... 40
5.2.5 Variveis avaliadas ............................................................................................. 40
5.2.6 Atividade formicida ............................................................................................ 41
5.2.7 Anlise estatstica ............................................................................................... 42
5.3 Resultados .............................................................................................................. 42
5.4 Discusso ............................................................................................................... 43
5.5 Referncias Bibliogrficas ..................................................................................... 46
6. CONSIDERAES FINAIS ....................................................................................... 52
ANEXOS ......................................................................................................................... 54
i

LISTA DE FIGURAS

Figura Pgina
2.1 Estruturas vegetais da Lippia alba. A: Planta de Lippia alba. B: Fitotaxia
oposta de folhas. C: Folhacom borda serreada. D: Inflorescncia.................. 3
2.2 Tipos de inflorescncias de espcies do gnero Lippia. A: espiga cilndrica
deLippia augustifolia. B: espiga cilndrica de Lippia laxibracteata. C: espiga
capituliforme de Lippia lupulina. D: espiga capituliforme de Lippia alba. E e
F: representao de inflorescncias ................................................................ 4
2.3 Variao de cores em inflorescncia de Lippia alba. A: Flores antes da
fecundao. B: Flores aps fecundao .......................................................... 5
2.4 A. mellifera em inflorescncia de Lippiaalba ................................................. 6
2.5 Representao de estruturas moleculares responsveis pela cor da flor de
Lippiaalba ....................................................................................................... 6
2.6 Formiga quenqun (Acromyrmex sp.) ............................................................. 11
4.1 Agrupamento dos acessos de Lippia alba com um ano de idade (A) e 10 anos
(B) com base no mtodo de agrupamento de Ward ........................................ 34
4.2 Distribuio dos constituintes qumicos dos leos essenciais de Lippia alba
em relao aos dois componentes principais atravs da anlise de
componente principal (ACP) com um ano (A) e 10 anos de idade (B). ......... 35
4.3 Mdias com erros padro da mdia, dos constituintes qumicos dos leos
essenciais dos grupos I e II de Lippia alba com um ano e 10 anos de idade.. 36
5.1 Efeito da mortalidade de A. balzani para as concentraes 0.01 e 0.3 L L-1
para parentais e prognies do primeiro ciclo de seleo recorrente ............... 51
ii

LISTA DE TABELAS

Tabela Pgina
2.1 Atividade biolgica da carvona em pragas agrcolas ..................................... 13
4.1 Identificao e origem de 18acessosda coleo de Lippia albado Banco
Ativo de Germoplasma de Plantas Medicinais e Aromticas da Universidade
Federal de Sergipe, municpio de So Cristvo, Estado de Sergipe, Brasil . 32
4.2 Mdia dos constituintes qumicos de 18 acessos da coleo de Lippia alba
do Banco Ativo de Germoplasma de Plantas Medicinais e Aromticas da
Universidade Federal de Sergipe, com 1 e 10 anos de idade ......................... 33
4.3 Coeficientes de correlao para os constituintes qumicos dos leos
essenciais de acessos de Lippia alba com um e 10 ano de idade de planta.... 38
5.1 Resumo da anlise de varincia para variveis morfoagronmicas,
composio qumica e atividade formicida de gentipos do primeiro ciclo de
seleo recorrente de Lippia alba Federal de Sergipe, municpio de So
Cristvo, Estado de Sergipe, Brasil. ............................................................. 50
5.2 Valores mdios para altura de planta (AL), hbito de crescimento (HC), rea
foliar (AF), massa seca de folha e inflorescncia (MSF), concetrao de leo
essencial (OE), atividade formicida sobre Acromyrmex balzani e principais
compostos qumicos detectados na anlise qumica entre parentais e
prognies do programa de melhoramento de Lippia albada UFS, So
Cristvo, Sergipe, Brasil ............................................................................... 51
iii

RESUMO
PINTO, Vanderson dos Santos. Influncia da idade da planta na composio qumica do
leo essencial de Lippia alba e de um ciclo de seleo recorrente na atividade formicida.
So Cristvo: UFS, 2017. 54p. (Dissertao Mestrado em Agricultura e Biodiversidade).*

A erva-cidreira-brasileira [Lippia alba (Mill.) N. E. Brown] uma espcie medicinal e


aromtica que apresenta vrios quimiotipos. O leo essencial rico em carvona possui
atividade inseticida sobre pragas de interesse agrcola. Diante disso, o objetivo do trabalho foi
avaliar a influncia da idade da planta nos leos essenciais de acessos de L. alba e de um ciclo
de seleo recorrente na atividade formicida. Os ensaios foram conduzidos na Fazenda
Experimental Campus Rural da UFS. Para o primeiro ensaio foram testados 18 acessos de
L. alba, que foram colhidos quando as plantas estavam com um ano de idade (fevereiro/2006)
e dez anos (fevereiro/2016). No segundo experimento foi realizado um ciclo de seleo
recorrente com trs acessos com alto teor de carvona no seu leo essencial. Para o ensaio de
competio de prognies foi implantado um ensaio testando 11 prognies e os trs parentais.
A idade da planta influenciou na produo e composio qumica dos leos essenciais dos
acessos de L. alba testados. Observou-se maior aumento doteor de leo essencial para os
acessos LA-41 (0,69-2,48%) e LA-53 (0,76-2,84%). Com o envelhecimento das plantas
notou-se maior variao nos leos essenciais para os compostos p-cimeno (0,00-5,12%),
limoneno (0,00-11,08%) e elemol (0,00-10,54%). No segundo experimento a maior produo
de massa seca da parte area foi observada para o gentipo LA-56 (57,54 g planta-1). O teor
de leo essencial foi superior na prognie LA-57-10 (2,844%) e o parental LA-57 (2,644%).
A carvona foi superior para o LA-57 (59,02%) com diferena significativa em comparao as
progenies avaliadas. Entre as prognies, o maior teor foi observado para a prognie LA-56-04
(57,78%) e o menor para o LA-57-01 (17,71%) e LA-57-02 (17,27%). Um ciclo de seleo
recorrente resultou no aumento da atividade formicida de algumas prognies.Maior
mortalidade de Acromyrmex balsani foi causada pelos essenciais das prognies LA-56-04 e
LA-70-03.

Palavras-chave: erva-cidreira-brasileira, metabolismo secundrio, melhoramento vegetal,


atividade inseticida.

___________________
* Comit Orientador: Arie Fitzgerald Blank UFS (Orientador), Thiago Matos Andrade UFS (co-orientador).
iv

ABSTRACT
PINTO, Vanderson dos Santos. Influence of plant age on the chemical composition of the
essential oil of Lippia alba and of a recurrent selection cycle on formicidal activity. So
Cristvo: UFS, 2017. 54p. (Thesis - Master of Science in Agriculture and Biodiversity).*

Brazilian lemon balm (Lippiaalba (Mill.) N. E. Brown) is a medicinal and aromatic species
widely used to fight diseases. Its essential oil, rich in carvone, has insecticidal activity on
pests of agricultural interest. Cutting ants cause severe economic damage to forest and
horticultural species and hinder cultivation worldwide. Plant aging is one of the main factors
that alter the biological activity of essential oils. The objective of this work was to evaluate
the influence of plant age on the essential oil of L. alba accessionsand of a recurrent selection
cycle onformicidal activity. The experiments were carried out at the Experimental Farm -
Campus Rural UFS.The experiment consisted of a randomized blocks design with three
replications. For the first experiment, 18 L. albaaccessions were used at two plant ages: one-
year-old plants (February2006), and ten-year-old plants (February 2016). In the second
experiment, a recurrent selection cycle was carried out with three accessions of the
limonene/carvonechemotype. For the progeny competition experiment, three parent genotypes
and 11 progenies were taken to the field. In the first experiment, plant age influenced the
essential oil production and the chemical composition.The highest essential oil content
increase was observed for accessions LA-41 (0.69-2.48%) and LA-53 (0.76-2.84%). The
compounds with the greatest variation in the second harvest were p-cymene (0.00-5.12%),
limonene (0.00-11.08%), and elemol (0.00-10.54%), because of plant aging. In the second
experiment, the highest dry weight of aerial part was observed for parental LA-56 (57.54 g
plant-1). The essential oil content was higher in the progeny LA-57-10 (2.844%) and the
parental LA-57 (2.664%). Carvone concentration was higher for LA-57 (59.02%), with a
significant difference when compared with the evaluated progenies. Among the progenies, the
highest carvone concentration was observed for LA-56-04 (57.78%) and the lowest for LA-
57-01 (17.71%) and LA-57-02 (17.27%).One recurrent selection cycle resulted in increased
formicidal activity of some progenies. Higher mortility of Acromyrmex balsani was caused by
the essential oils of the progenies LA-56-04 and LA-70-03.

Key words: Brazilian lemon balm, secondary metabolism, plant breeding, insecticidal
activity.

___________________
* Supervising Committee: Arie Fitzgerald Blank UFS (Advisor), Thiago Matos Andrade UFS (Co-advisor).
1

1. INTRODUO GERAL

A Lippia alba uma planta nativa brasileira, pertence a famlia Verbenaceae e que
pode ser encontrada em diversos estados e biomas. A espcie possui grande popularidade
devido seu uso na medicina popular para a cura de enfermidades como dores de barrigas e
insnia. Sua ao medicinal proporcionada pela produo de leos essenciais em resposta a
interao gentipo x ambiente, como forma de defesa a fatores biticos (patogenos) e
abiticos (estresses hdricos e trmicos) que comprometem a sobrevivncia da planta no
ecossistema (SANTOS e CARLESSO, 1998; VIANA e SOUZA, 2002).
A L. alba caracterizada por ser uma planta produtora de leo essencial, sua ampla
diversidade qumica foi comprovada atravs de estudos realizados por Blank et al. (2015),
avaliando gentipos do Banco de Germoplasma da Universidade Federal de Sergipe, que
observaram a presena de seis grupos qumicos: Grupo 1 (linalol, 1,8-cineol e xido de
cariofileno); Grupo 2 (linalol, geranial, neral, 1,8-cineol e xido de cariofileno); Grupo 3
(limoneno, carvona e sabineno); Grupo 4 (Carvona, limoneno, g-muurolene e mirceno);
Grupo 5 (neral, geranial e xido de cariofileno); Grupo 6 (geranial, neral, o-cimeno, limoneno
e xido de cariofileno), destacando-se como compostos mais abundantes o 1,8-cineol, linalol,
mirceno, limoneno, carvona, geranial e neral.
Os leos essenciais possuem ao bioativa sobre insetos pragas. As formigas
cortadeiras, principalmente os gneros Acromyrmex e Atta, provocam danos milionrios em
cultivos agrcolas e florestais. Esses gneros so responsveis pelo desfolhamento e uso no
cultivo do fungo Leucoagaricus gongylophorus, alimento das formigas. Como alternativa ao
controle qumico, o uso de plantas aromticas torna-se vivel por ser menos danoso ao
ecossistema e na gerao de renda para pequenos e mdios produtores rurais (SANCHES et
al., 2003; NEHRING et al., 2015).
O potencial bioativo da L. alba trouxe interesse de instituies de pesquisas em
estudar e caracterizar materiais genticos nativos para introduo em programas de
melhoramentosque visam o desenvolvimento de cultivares adaptadas a regies produtoras e
que possuam alto teor de compostos qumicos majoritrios com ao comprovada na literatura
como a carvona (PEIXOTO et al., 2015). No entanto, a exposio da planta a fatores
ambientais pode favorecer alteraes morfolgicas e fisiologicas na planta que alteram a
composio e composio do leo essencial na espcie.
O processo de envelhecimento vegetal um dos principais fatores que contribui com
as alteraes na composio qumica da planta. Segundo Pandel et al. (2012), a produo de
leo essencial em folhas oriundas de segmentos nodais mais desenvolvidos reduzem o
contedo de constituintes majoritrios como a carvona, neral, geranial e linalol. Esse efeito foi
comprovado em experimento realizado com a Lippia sidoides por Santos et al. (2015), que
observaram a reduo do composto timol em plantas com oito anos de idade.
O objetivo do trabalho foi avaliar a influncia da idade da planta nos leos essenciais
de gentipos de L. alba e de um ciclo de seleao recorrente na atividade formicida.
2

2. REVISO DE LITERATURA

2.1. Botnica, origem e usos

A familia Verbenaceae apresenta cerca de 40 gneros e 1035 espcies, entre eles, o


gnero Lippia. Este gnero foi inicialmente descrito pelo botnico Carolus Linnaeus em 1728,
possui aproximadamente 254 espcies encontradas na Argentina, no Brasil e Paraguai
(PIMENTA et al., 2007). Estas espcies encontram-se, algumas mais estudadas, com
aplicao em pesquisascomo: Lippia alba, L. dulcis, L. filifolia, L. florida, L. gracilis, L.
multiflora, L. oreganoides e L. sidoides (SOUZA, 2008; BLANK et al., 2015).
A L. alba (Mill.) N. E. Br. uma espcie aromtica com origem na Amrica do Sul
(BIASI e COSTA, 2003). Foi descrita em 1768 pelo botnico ingls Phillip Miller e adotam a
nomenclatura binomial Lantana alba (MILLER, 1768; MUNIR, 1993).
Segundo o banco de dados internacional de plantas, The Plant List, a L. alba foi
classificada por Nicholas Edward Brown e sofreu mudana passando do gnero Lantana para
o Lippia em 1928 (PLANT LIST, 2017).
A espcie possui uma ampla distribuio global nos ecossistemas, com relatos de
ocorrncia desde a Amrica do Norte (mais precisamente na regio sul dos Estados Unidos)
at o Norte da Argentina na America do Sul. Exemplares de L. alba foram encontrados
tambm na Europa, Oceania e sia (HENNEBELLE et al., 2008; AQUINO et al., 2010).
Considerado um dos principais centros de diversidade de L. alba do mundo, o Brasil,
devido a distino na vegetao, relevo e clima, possui uma expressiva variao gentica e
qumica dentre os pases de ocorrncia natural. No pas, a L. alba pode ser encontrado em
abundncia em biomas como Caatinga, Cerrado e Mata Atlntica nas regies Nordeste,
Sudeste e Centro-Oeste (GOMES et al., 2011).
So atribudas atividades calmantes, antiespasmdica, analgsica, sedativa e
ansioltica aos fitoterpicos derivados da L. alba. (JANNUZZI et al., 2011). O uso industrial
associado espcie, dentre eles, a aplicao como antioxidante natural em produtos periciveis
como carnes e seus derivados tem sido associado complexidade de compostos qumicos
presentes no leo essencial. Alm disso, uma fonte importante para a indstria, servindo
como matria prima para diversos produtos, tais como: Cosmticos, remdios, perfumaria,
higiene pessoal, dentre outros produtos (CRAVEIRO & QUEIROZ, 1993; LEO et al.,
2017).
As plantas do quimiotipo limoneno-carvona esto entre as mais estudadas pela
atividade biolgica associada ao leo essencial. O limoneno utilizado indutrialmente como
solvente em produtos de limpeza, alimentcios e cosmticos. A carvona usada como
flavorizante e como carminativo (antiflatulento) em medicamentos e alimentos (SANTOS et
al., 2004).

2.2. Aspectos morfolgicos de L. alba

O processo de caracterizao de germoplasma ex situ importante na seleo de


gentipos de uma determinada espcie, pois permite avaliar caracteres altamente herdveis
em programas de melhoramento. Os descritores morfolgicos so controlados normalmente
por poucos genes e expressam comumente caractersticas fenotpicas independente do
ambiente de ocorrncia (BURLE e OLIVEIRA, 2010)
A caracterizao morfolgica atua na diferenciao de materiais genticos, atravs de
descritores padronizados e uniformes, capazes de fornecer informaes importantes para a
classificao, manejo e seleo de plantas em bancos de germoplasma de plantas aromticas e
medicinais (BURLE e OLIVEIRA, 2010).
A L. alba uma planta perene, porte subarbustivo, muito ramificado e com aspecto
esbranquiado. Os ramos podem atingir 280 cm de comprimento dependendo das condies
3

climticas e nutricionais do solo. Sua copa apresenta dimetro variando entre 60-474 cm entre
ramificaes opostas (MARCHESE et al., 2010; CAMLO et al., 2011).
As folhas possuem filotaxia oposta, com formas elpticas ou lanceoladas, bordas
serreadas e ausncia de estipula na base do pecolo (Figura 2.1) (AGUIAR e COSTA, 1998;
DE ROMERO et al., 2010). De acordo com estudo de diversidade morfolgica com 48
gentipos de L. alba oriundos de Estados localizados nas cinco regies do Brasil [Centro-
Oeste (18), Nordeste (21), Norte (1), Sudeste (6) e Sul (2)], o comprimento da folha sofre
variao de 3,0-9,30 cm, com superioridade de mdia para gentipos das regies Centro-
Oeste e Nordeste. No entanto, a largura da folha que apresenta intervalo entre 1,91-5,70 cm
no mostrou influncia da origem para essa varivel, mas sim, o efeito da interao Gentipo
X Ambiente (CAMLO et al., 2011).

Figura 2.1. Estruturas vegetais da Lippia alba. A: Planta de Lippia alba. B: Fitotaxia oposta
de folhas. C: Folha com borda serreada. D: Inflorescncia.

A interao de fatores genticos e ambientais provoca alteraes em caractersticas


morfolgicas na planta, comprovadas por trabalho realizado com gentipos em Juiz de
Fora/MG, que avaliou a influncia da luminosidade no desenvolvimento da L. alba em
campo. Os resultados mostraram uma maior plasticidade fenotpica, que corresponde
variao de um gentipo em funo das mudanas no ambiente, com expresso de maior
altura da planta, comprimento do entren, rea do limbo foliar e no nmero de flores abertas,
demonstrando, portanto, sua flexibilidade de adaptao mudana no ambiente de ocorrncia
natural (MONTANARI et al., 2004).
Sua biologia floral composta por flores dispostas em inflorescncias do tipo
capituliforme, a distncia entre essas varia em funo da idade da planta, atingindo at 5 mm,
com dimenses de 15 mm de altura e 10 mm de dimetro (Figura 2.2). Cada inflorescncia
pode conter at 45 flores distribudas ao longo do eixo floral, que se desenvolvem entre as
brcteas, apresentando flores mais jovens no pice e as velhas na parte basal (MUOZ et al.,
2007).
4

Figura 2.2. Tipos de inflorescncias de espcies do gnero Lippia. A: espiga cilndrica


deLippia augustifolia. B: espiga cilndrica de Lippia laxibracteata. C: espiga capituliforme de
Lippia lupulina. D: espiga capituliforme de Lippia alba. E e F: representao de
inflorescncias (Fonte: DE ROMERO et al., 1998)

De acordo com Pimenta et al. (2007) a sazonalidade um fator importante na florao


da L. alba, uma vez que perodos de maior ocorrncia de chuva estimulam a fase vegetativa
da espcie e reduzem a produo de flores nas plantas em condies naturais, no entanto,
estaes do ano com altas temperaturas e baixa precipitao estimulam as gemas laterais a
entrarem em fase reprodutiva.
As flores so hipginas (ovrio acima da regio do receptculo floral), diclamdeas
(flor coberta por duas spalas), zigomorfas (possuem simetrias bilaterais) e hermafroditas
(apresentam androceu e gineceu na mesma flor). Essas possuem quatro anteras unidas
corola, sendo um par na parte superior com filamentos longos e um par com filamentos curtos
na parte inferior (MUOZ et al., 2007).
Os frutos so do tipo drupa globoso com colorao rseo-arroxeados aps formao, e
marrom quando seca (LORENZI & MATOS, 2004). As sementes possuem dormncia
tegumentar, o que dificulta o processo germinativo da espcie em campo e contribui para a
formao de bancos de sementes no solo, no entanto, o processo de escarificao mecnica ou
qumica auxilia na propagao via semente, pois removem parte do tegumento favorecendo a
entrada de gua necessria na germinao (PIMENTA et al., 2007).
As flores possuem um papel fundamental na manuteno e sobrevivncia das espcies
vegetais no ecossistema. Sua importncia est na atrao de insetos polinizadores,
responsveis pela coleta e fecundao em plantas que apresentam polinizao cruzada,
conhecidas cientificamente como algamas (BRITTAIN et al., 2010). A transferncia de
plen entre plantas favorece o fluxo gnico (migrao de genes de uma populao para outra)
que fundamental para manter a variabilidade gentica e garantir adaptao s mudanas
edafoclimticas (KENNEDY e ELLE, 2008).
Para que ocorra a manuteno no ecossistema, tornam-se necessrias atraes de
polinizadores s flores da planta. Dentre os meios responsveis pelo reconhecimento e
localizao desses no ambiente natural, destacam-se a atrao qumica e colorao das flores.
A atrao qumica realizada atravs da sntese de metabolitos secundrios volteis nas flores
conhecidos como leos essncias, essas substncias so complexas e possuem compostos
qumicos com baixo ponto de ebulio, que em contato com a temperatura ambiente,
volatilizam e guiam os insetos at as flores (NOGUEIRA et al., 2001).
Outro mecanismo de atrao a saturao de cor das flores, que atravs de espectros
de radiao provoca um direcionamento e seleo dos insetos polinizadores presentes no
meio. Alm disso, a diferena de cor existente entre a borda das flores e o centro demonstra
uma correlao positiva com o nmero de visitas desses insetos na mesma, ou seja, quanto
5

maior a diferena de cor na mesma flor, maior o nmero de indivduos que iro frequent-la
(BRISCOE e CHITTKA, 2001; BARNIO et al. 2016).
A L. alba uma das espcies que apresenta maior longevidade floral e variabilidade
de cores na corola em relao a outras espcies do mesmo gnero (MUOZ et al., 2007).
Suas flores apresentam particularidade na saturao de cores, pois, as bordas das ptalas
apresentam colorao que varia de roxo a rosa, entretanto, a regio central prxima da antera
apresenta colorao amarelada com variao em sua tonalidade (Figura 2.3) (RZEDOWSKI
et al., 2002).
O estigma da flor permanece vivel por trs dias aps a fecundao, as flores alteram
sua colorao para tonalidades prximas do roxo na regio central das flores para indicar aos
polinizadores que a flor no est disponvel para receber o gro de plen. Apesar disso, a L.
alba apresenta florao contnua, sendo influenciada por fatores climticos e ecolgicos
(Figura 2.3) (VENNCIO, 2010).

A A
B

Figura 2.3. Variao de cores em inflorescncia de Lippia alba. A: Flores antes da


fecundao. B: Flores aps fecundao.

A polinizao das flores da L. alba realizada com maior frequncia por insetos como
Apis mellifera (Abelha africanizada), Paratetrapedia sp. (Abelhas silvestres) e Ceratina sp.
(Abelhas solitrias) (Figura 2.4). Apesar da ocorrncia de outras espcies de maneira
ocasional, o principal polinizador a A. mellifera que apresenta um amplo perodo e horrio
de forrageamento das flores (VENNCIO, 2010). Um estudo realizado pela universidade de
Helsnquia na Finlndia, que avaliou a interao das cores da flor com A. mellifera, mostrou
que a espcie possui uma ampla preferncia pela cor amarela na coleta de nctar e plen, alm
disso, cores prximas do azul causam repelncia na espcie, o que provavelmente explica a
mudana de cor nas flores da L. alba aps sua fecundao (GRUTER et al., 2011).
A formao das cores na flor resultado da interao existente entre o gentipo e o
ambiente, no entanto, a variao na intensidade dessa justificada pela dominncia de um
alelo sobre o outro no genoma da planta. Um ensaio com a espcie Phlox drummondii foi
realizado com objetivo de avaliar a influncia de genes na expresso das cores das flores. O
experimento contou com a realizao de hibridizaes em plantas com flores claras e escuras
da espcie e posterior avaliao das prognies. Com isso, observou-se que a expresso de
cores mais escuras na planta resultado de alelos dominantes, o que proporcionou um maior
nmero de prognies com essas caractersticas, no entanto, a baixa ocorrncia de plantas com
flores claras indica recessividade nos genes responsveis por sua expresso (KOPKINS e
RAUSHER, 2012).
6

Figura 2.4. A. mellifera em inflorescncia de Lippia alba

Essa mudana de cores est relacionada sntese de pigmentos do grupo dos


flavonides (Produto do metabolismo secundrio em plantas), dentre esses, a antocianina
um sal solvel em gua, que atua como defesa dissipando calor produzido na fotossntese
(Figura 2.5). O pigmento responsvel tambm pela expresso de cores como azul ou roxo e
seus derivados nas flores. A produo de tons avermelhados em flores oriunda da sntese de
betacianina, um pigmento responsvel pela cor vermelha das flores, sua saturao sofre
influncia do pH celular, quanto mais cida mais intensa a cor roxa nas ptalas
(GROTEWOLD, 2006; TANAKA et al., 2008). A cor amarela a expresso fenotpica da
sntese de carotenides, um pigmento terpnico responsvel pela captao de radiao
luminosa e transferncia de eltrons para a fotossntese e dissipao de calor, que atravs de
sua quantidade na flor pode resultar em tonalidades mais escuras ou claras do amarelo
(WESSINGER, 2015).

Figura 2.5. Representao de estruturas moleculares responsveis pela cor da flor de Lippia
alba.

2.3. Diversidade qumica nos leos essenciais de plantas aromticas

O leo essencial uma mistura de substncias lipoflicas, tambm conhecidas como


metabolito secundrio, possue caractersticas odorferas e estado lquido, sendo volteis e
solveis em solventes orgnicos. So sintetizados por rotas metablicas especficas, diferindo
das rotas de produo de compostos primrios como produo de protenas e carboidratos.
Para a ocorrncia da sntese de compostos secundrios como o leo essencial, importante
que haja uma relao entre as rotas primrias que fornecem precursores para as rotas
secundrias produzirem esses produtos (TAVARES et al., 2011).
7

As vias de produo dos compostos secundrios so dvidas em trs rotas:


Chiquimato, Mevalonato e Malonato (CORRAZA, 2002). Os terpenides so sintetizados a
partir do mevalonato, sendo formados pela condensao de unidades de isoprenos. Esses so
classsificados de acordo com o nmero de unidades de isoprenos (5 carbonos), sendo os mais
abundantes os monoterpenos (10 carbonos) com duas unidades de isoprenos e os
sesquiterpenos (15 carbonos) com trs unidades de isoprenos (CASTRO et al., 2004).
Em espcies pertencentes ao gnero Lippia, a secreo de compostos volteis na
planta est associada aos tricomas glandulares que so apndices originados da epiderme do
tecido vegetal. A planta possui em suas folhas trs tipos de tricomas que so responsveis por
secreo de substncias lipdicas (SANTOS et al., 2004).
A L. alba uma espcie que tem como caracterstica marcante a diversidade
fitoqumica nos grupos terpnicos. O uso do leo essencial como fitoterpico est associado
ao quimiotipo, que sofre influncia da interao gentica e ambiente. Em trabalho de
caracterizao qumica de gentipos do Banco Ativo de Germoplasma (BAG) de L. alba da
UFS, Blank et al., (2015) avaliaram a composio qumica de 48 gentipos do BAG e
observaram a presena de seis grupos de quimitipos: Grupo 1 (linalol, 1,8-cineol e xido de
cariofileno); Grupo 2 (linalol, geranial, neral, 1,8-cineol e xido de cariofileno); Grupo 3
(limoneno, carvona e sabineno); Grupo 4 (Carvona, limoneno, g-muurolene e mirceno);
Grupo 5 (neral, geranial e xido de cariofileno); Grupo 6 (geranial, neral, o-cimeno, limoneno
e xido de cariofileno), destacando-se como compostos mais abundantes on1,8-cineol, linalol,
mirceno, limoneno, carvona, geranial e neral.
Tavares et al. (2005), que atravs de extrao e identificao dos compostos,
determinaram a existncia de trs qumiotipos principais na espcie o qumiotipo 1 (Citral), o
qumiotipo 2 (carvona) e o qumiotipo 3 (linalol). No entanto, pesquisa realizada por Jannuzzi
et al. (2010) com anlise de cromatografia gasosa em leo essencial de 16 gentipos do
centro-oeste brasileiro, definiram a existncia de cinco compostos majoritrios: carvona
(46,9%), citral (neral e geranial) (56,7%), limoneno (36%), linalol (89,8%) e mirceno
(47,6%), entretanto, a ausncia de grupamentos dos gentipos impossibilita o uso do mesmo
em futuros programas de melhoramento.
Lorenzo et al. (2001), atravs de anlises testando gentipos de L. alba com finalidade
ornamental no Uruguai, observaram a presena de indivduos com altos teores de limoneno e
linalol, com teores de 55% e 99% respectivamente, caracterizando a presena de novo
quimiotipo.
Lopez et al. (2011), avaliando a composio qumica de gentipos do campo
experimental de L. alba da Universidade Industrial de Santander campus Bucaramanga
Colombia, observaram maior presena de monoterpenos oxigenados (70,5%), tendo como
principais compostos o geranial e o neral com teores de 33% e 25% respectivamente.
Dentre os compostos qumicos presentes no leo essencial da espcie, os
monoterpenos carvona, limoneno e citral destacam-se por apresentarem grande proporo em
grupos qumicos especficos. O carvona uma cetona insaturada, que devido presena de
um centro quiral na molcula, pode ser biossintetizado em seus enantimeros R-(-)-carvona
ou S-(+)-carvona. O limoneno um hidrocarboneto monoterpenico que pode ser
biossintetizado em R-(+)-limoneno sendo a forma mais encontrada em espcies vegetais e S-
(-)-limoneno. O citral uma mistura de duas molculas de aldedo isomricos acclicos
monoterpeno geranial (trans-citral, A) e neral (cis-citral, citral B) que possui aroma
caracterstico de limo (PEIXOTO et al., 2015).
Apesar da existncia de qumiotipos em plantas aromticas, a composio qumica e o
teor dos compostos no leo essencial podem sofrer variaes dependendo de fatores biticos e
abiticos do ambiente. Dentre os principais fatores esto: adubao, poca de colheita, estao
do ano e idade da planta (NASS & PATERNIANI, 2000).
A realizao de colheita de plantas de L. alba em poca mais precoce (90 dias) pode
reduzir os teores de compostos principais como o limoneno e a carvona no leo essencial, no
8

entanto, o uso de adubao orgnica base de esterco, aumenta o teor dos compostos em
colheita aos 120 dias aps o plantio. A adoo das duas prticas pode render uma
produtividade aproximada de 11 L ha-1 de leo essencial rico em carvona e limoneno para
usos comerciais e experimentais (SANTOS e INNECCO, 2004).
Barros et al. (2009) comprovaram a influncia da estao do ano no teor e rendimento
do leo essencial de L. alba.Os resultados demonstraram que a presena de chuva durante a
colheita reduz significativamente os teores do leo, com perda de aproximadamente 20% em
relao s pocas mais secas. Com isso, as maiores mdias de teores foram obtidas em
colheita realizada no vero (0,67%), com precipitao acumulada de aproximadamente 100
mm de chuva e temperatura mdia de 25,7C.
A variao climtica no ambiente ocasiona distino nas classes de compostos
presentes no leo essencial da espcie. Barros et al. (2009) observaram tambm que a colheita
realizada no ms de janeiro proporciona uma maior biossintese de compostos sesquiterpnicos
(C15) em relao aos monoterpnicos (C10), no entanto, mesmo com a reduo de
monoterpenos, a presena em climas mais frios e chuvosos aumenta significativamente.
Alguns compostos como o (E)-carveol, linalol, mirceno e oxido de cariofileno sofrem
redues nos teores na presena de chuva, entretanto, compostos como sabineno, limoneno,
1,8-cineol, (E)-cariofileno, germacreno D, germacreno B e germacreno-D-4-ol tm aumento
expressivo nos teores. Alm disso, compostos como a-pineno, cnfora, pinocarvona, borneol,
B-elemene, -humuleno, -muuruleno, cubebol e -cadinol passam a ser biossintetizados
como composto minoritrio com variaes de 0,9 a 0,2% no leo essencial.
A idade da planta mostra-se um dos principais fatores na alterao da composio
qumica em plantas do gnero Lippia.Um experimento realizado por Santos et al. (2015) foi
conduzido com objetivo de avaliar a influncia da idade da planta na composio qumica de
gentipos de Lippia sidoides com dois e oito anos de idade do banco de germoplasma da
espcie na Universidade Federal de Sergipe. O envelhecimento das plantas provocou a
reduo no teor do composto majoritrio timol e p-cimeno, como tambm, o aumento no teor
de compostos minoritrios nos gentipos avaliados.
Pandel et al. (2012) observaramque o envelhecimento vegetal tem influncia gentica
na biossintese do linalol, carvona e citral (neral/geranial) que so regulados pela expresso de
trs genes LaTPS12 (linanol) LaTPS23 (carvona) e LaTPS25 (citral). A expresso desses
genes ocasiona a sntese de enzimas responsveis pela produo de cerca de 120 aminocidos
na planta, entretanto, o envelhecimento foliar reduz os teores dos trs compostos no oitavo
segmento nodal com teores de 15% (citral), 21% (carvona) e 12% (linalol). A obteno de
leo em folhas do quarto segmento nodal demonstra aumento significativo no teor dos
compostos qumicos com mdias de 47% (citral), 66% (carvona) e 36% (linalol) superiores as
mdias em folhas mais velhas (PANDEL et al., 2012).
Cui et al. (2011) verificaram que plantas mais velhas expressam genes presentes nos
tricomas glandulares, apndices epidrmicos unicelulares ou multicelulares que so
responsveis pela sntese e secreo de metabolitos secundrios em resposta a estresses
biticos e abiticos, sendo importantes na produo e armazenamento de leo essencial na
planta.
De acordo com Liu et al. (2015), o desenvolvimento foliar altera radicalmente a
composio qumica nas glndulas excretoras, a exemplo da espcie Populus euphratica, que
apresenta uma maior atividade fotossinttica em folhas em desenvolvimento e maduras com
aumento significativo no nmero de compostos e resistncia a estresses como a seca e insetos
pragas.
9

2.4.Melhoramento gentico de espcies aromticas

No mundo existem cerca de 422.000 espcies de plantas documentadas em herbrios


em diversos pases, sendo que cerca de 10% desse total so consideradas plantas com
propriedades medicinais comprovadas. Essas plantas foram importantes para movimentao
de pesquisas e usos como medicamentos e pesticidas industriais, sendo que 25% dos que
chegam as prateleiras para o consumidor so derivados ou sintticos de compostos de plantas
aromticas (RAO et al., 2004).
O processo de introduo de germoplasma em Banco Ativo de Germoplasma (BAG)
pode ser caracterizado como um mtodo de pr-melhoramento, que visa caracterizar as
potencialidades e caractersticas de interesse dos gentipos que esto sendo introduzidos. A
busca por gentipos superiores em produo e resistncia a pragas vem aumentando o
interesse de pesquisadores e empresas por materiais melhorados, que buscam a partir de
gentipos selvagens ou variedades locais, como principais fontes doadoras de alelos (NASS
& PATERNIANI, 2000)
A variabilidade gentica existente entre as espcies aromticas e dentro das mesmas
caracteriza-se como a fonte primria das pesquisas e estudos. As diferenas genticas foram
importantes para que as plantas conseguissem superar fatores ambientais que limitam seu
crescimento e desenvolvimento no ambiente como estresses trmicos, estresse hdrico,
suscetibilidade a insetos e patgenos. A diversidade existente resultado de processos de
recombinaes, mutaes e hibridaes naturais. Essas diferenas podem ser avaliadas a partir
dos aspectos fenolgicos como variao na composio qumica do leo essencial, morfologia
e produtividade dos gentipos contidos nos bancos de germoplasma, como tambm, o estudo
dos genes mutantes, cromossomos e uso de marcadores moleculares como PCR,
microssatlites e isoenzimas (PINTO et al., 2011).
Algumas instituies de pesquisa trabalham no processo de pr-melhoramento de
espcies aromticas, com processo de caracterizao dos gentipos para futuros programas de
melhoramento. Camlo et al. (2011) realizaram trabalhos com objetivo de caracterizar
morfologicamente os gentipos de L. alba do Banco de Germoplasma da Universidade
Federal de Sergipe e observaram ocorrncia de diferena para as variveis: comprimento de
ramo, dimetro da copa, cor do caule, das folhas e ptalas. Os gentipos possuem
variabilidade para colorao apresentando cores marrons no caule e folhas verde-escuras,
podendo tambm ser encontrados caules e folhas verdes. Alem disso, observou diversidade
fenotpica tambm para a colorao das ptalas das flores, sendo encontrada maior proporo
para a cor lils, podendo ocorrer presena de ptalas brancas.
O estudo da diversidade qumica entre os gentipos de uma espcie importante do
ponto de vista da utilizao em atividades biolgicas e usos industriais, que a partir desses
resultados possibilita sua aplicao na obteno de cultivares com alto teor de compostos
qumicos de interesse (JANNUZZI et al., 2010).
Dentre os estudos de diversidade qumica, Nizio et al. (2015) demonstraram em seus
estudos que a planta aromtica Varronia curassavica Jacq. apresentou em seu leo essencial
cerca de 73 compostos e desses, 53 compostos foram possveis de serem identificados. A
partir dos resultados, foi observadaalta diversidades das plantas coletadas em locais
diferentes, sendo possvel o agrupamento dos indivduos em cinco grupos qumicos separados
de acordo com os compostos majoritrios: Grupo 1 (Turmerona e E-cariofileno); Grupo 2
(tricyclene e camphene); Grupo 3 (-zingiberene e sesquiphellandrene); Grupo 4 (E-
caryophyllene and/or 7-cyclodecen-1-ona, 7-methyl-3-methylene-10-(1-propyl)); Grupo 5 (7-
cyclodecen-1-ona,7-methyl-3-methylene-10-(1-propyl)).
Devido grande variabilidade de gentipos e quimiotipos existentes em plantas
aromticas, algumas instituies vem trabalhando em programas de melhoramentos tendo
como finalidade o desenvolvimento de novas cultivares para atender a necessidade indstriais
e de pequenos e mdios produtores rurais. Dentre os mtodos de melhoramento que so
10

utilizados na gerao de novas cultivares, os mais utilizados so ahibridizao, Bulk e seleo


recorrente.
A hibridao em espcies algamas caracteriza-se como a fuso de gametas
geneticamente diferentes que resulta em indivduos hbridos heterozigotos. Nesse mtodo de
melhoramento, o objetivo explorar a natureza heterozigtica dos gentipos de interesse no
programa, em que se valorizam os aspectos quantitativos da espcie como o teor e rendimento
de compostos no leo essencial (BORM & MIRANDA, 2005).
O Instituto Agronmico de Campinas (IAC), atravs de estudos de Schocken (2007),
iniciou estudos visando obteno de hbridos da espcie com objetivo de realizar
recombinaes e obter novos parmetros genticos para composio de leo essencial, com
tambm a obteno de novos quimiotipos com potencial industrial. Em seus estudos, foi
realizada uma caracterizao prvia da espcie de parmetros como morfologia, composio
qumica do leo, germinao das sementes e sistema de reproduo da espcie.
Aps essa caracterizao, foram feitos cruzamentos dirigidos para obteno de novos
gentipos. Atravs dos cruzamentos foram obtidos os hbridos de L. alba: IAC-8 X IAC-17
(linalol e citral), IAC-2 X IAC-20 (mirceno e citral), IAC-17 X IAC-13 (limoneno, carvona e
citral), IAC-6 X IAC-13 (linalol, limoneno e carvona) (Schocken, 2007).
A Universidade Federal de Sergipe possui programa de melhoramento de Ocimum
basilicum L. conhecido popularmente como manjerico.Ensaios de hibridao foram
realizados por ALVES et al., (2012) objetivando avaliar caractersticas agronmicas e
qumicas eobservaram que as caractersticas altura de planta, massa seca de folha e teor de
1,8-cineol e linalol apresentaram alta herdabilidade. J altura de planta e massa seca de folha
apresentaram alta heterose, em que os hbridos apresentaram mdias superioress dos pais.
A universidade Federal de Sergipe, atravs de trabalhos de Blank et al. (2007),
realizou o desenvolvimento da cultivar Maria Bonita atravs do mtodo de melhoramento
Bulk em Ocimum basilicum, sendo realizado a seleo de indivduos com base no teor e
redimento do leo essencial e teor do composto Linalol. As plantas promissoras das geraes
S0 a S3 foram cobertos por gaiola para que fosse realizado a autofecundao e obtendo a
gerao S1 e S2. As prognies da S2 foram avaliadas em dois anos agrcolas de 2004/2005 e
2005/2006 em ensaios de competio de clones com linhagens destacando-se a cultivar Maria
Bonita apresentando 262,06% de produo a mais que a testemunha e mdia de 4,96% de leo
essencial.
Um dos mtodos de melhoramento mais utilizado em espcies alogamas o de seleo
recorrente, esse mtodo visa aumentar a frequncia de alelos desejveis para caractersticas
quantitativas como teor e rendimento de leo essencial em plantas aromticas. O
desenvolvimento de novas cultivares a partir desse mtodo obtido seguindo trs etapas:
obteno, avaliao e recombinao. A obteno do material ocorre aps processo de
caracterizao e seleo das plantas matrizes, em seguida, so levados para rea de
cruzamento para que ocorra permuta gnica e formao das sementes. Aps esse processo, as
prognies so levadas para reas de competio junto s plantas matrizes para que sejam
avaliadas e selecionadas. As melhores prognies so novamente recombinadas em sucessivos
ciclos de seleo at que haja acumulo de alelos favorveis (BORM & MIRANDA, 2005).
O Instituto Agronmico de Campinas, atravs de programas de melhoramento de L.
alba, vem utilizando a seleo recorrente para obteno de indivduos meio-irmos com alto
potencial de produo de leo essencial. Dentre os trabalhos, Rufino (2008) avaliou prognies
de meio irmos de L. alba e observou que a seleo foi eficiente com obteno de materiais
com alto teor do composto majoritrio linalol, sendo prognies provenientes da gerao S1.
Bottignon (2011) utilizando uma populao recombinante de 20 plantas de cinco
quimitipos, obteveram 30 prognies de meios irmos do quimitipo linalol. Com isso, foi
realizada caracterizao agronmica com avaliao de massa seca de folhas, rendimento do
leo essencial e produo de leo por planta. Os resultados concluram que as prognies IAC
11

1, IAC 2, IAC 4 e IAC 8 possuem mdias superiores para as caractersticas avaliadas e


potencial para posteriores recombinaes.

2.5. Atividade formicida de leo essencial

As formigas cortadeiras trazem grandes prejuzos agricultura em todo o mundo. O


Brasil, por ser um pas tropical, apresenta grande diversidade de espcies que provocam
desfolhamentos em culturas agrcolas e plantas ornamentais, o que reduz o valor comercial e a
produtividade. Esses insetos possuem adaptao a climas midos e quentes, como as regies
tropicais do Brasil. (BOLLAZZI e ROCES, 2010).
As folhas so cortadas por formigas operrias que transportam para cmaras
especificas nos ninhos e servem como substrato para multiplicao de fungos da espcie
Leucoagaricus gongylophorus. Esses microorganismos so utilizados na alimentao das
larvas e adultos das formigas, o que promove um perodo contnuo de desfolhamento de
plantas em torno do ninho para cultivo desses no interior das cmaras (RANDO e FORTI,
2005).
Os principais gneros de importncia econmica so a Atta e Acromyrmex. As
espcies pertencentes ao gnero Atta, popurlamente conhecido como savas, possuem como
caracterstica anatmica principal a presena de trs pares de espinhas dorsais, j espcies do
gnero Acromyrmex com nome popular quenqum, diferem por possuir quatro a cinco pares
de espinhos na regio dorsal do exoesqueleto (ABREU e DELABIE, 1986; NEHRING et al.,
2015) (Figura 2.6).

Espinhos

Figura 2.6. Formiga quenqun (Acromyrmex sp.)(Fonte: SANTOS et al., 2016).

O gnero Acromyrmex possui uma caracterstica particular em relao ao ninho. Essas


formigas, diferentemente da Atta (que possui milhares de cmaras subterrneas), possuem
poucas cmaras em tamanhos menores e de difcil localizao no terreno, no entanto,
possuem uma complexidade maior de regies para cultivo do fungo utilizado na alimentao.
Existem espcies desse gnero que podem apresentar uma variao de 1 a 29 cmaras, o que
aumenta o forrageamento da formiga e os danos dessas s culturas agrcolas prximas do
ninho (SANTOS et al., 2016).
O sistema de castas em formigas desse gnero um dos mais complexos dentre os
insetos sociais. No ninho, cada inseto possui uma funo pr-determinada que contribua para
o funcionamento desses, ou seja, insetos operrios maiores tm a misso de carregar as folhas
que so cortadas na planta para dentro do ninho. No entanto, a funo de forrageamento que
est atrelada ao corte da folha pode ser executada por operrias de diferentes tamanhos no
ninho. J as operrias menores tm a funo de repicar as folhas que chegam ao ninho para
que sejam usadas no cultivo do fungo simbitico (FORTI et al., 2004)
Os danos causados por espcies de Acromyrmex chegam a milhes de reais todos os
anos, estima-se que um formigueiro pode forragear cerca de 1000 kg de folha fresca em
cultivos agrcolas e florestais (RANDO e FORTI, 2005). Segundo estudo realizado por
12

Nickele et al. (2009), que estudou a densidade de formigueiros em reas de cultivo de pinus
recm-plantadas, concluiu que as formigas possuem uma grande capacidade de multiplicao
na rea agrcola, pois, essas apresentam mais de duas rainhas no ninho e aps o manejo
inadequado multiplicam-se atingindo densidade de at 16 formigueiros.ha-1 causando corte
de plntulas e poda de parte rea em mudas recm-plantadas.
A principal estratgia de controle para formigas cortadeiras envolve o uso de
inseticidas qumicos sintticos. Atualmente no sistema de agrotxicos fitossanitrios
(AGROFIT), sistema vinculado ao ministrio da agricultura, aproximadamente 27 produtos
sintticos esto registrados para controle de 28 espcies de formigas do gnero Acromyrmex,
entretanto, o uso indiscriminado desses produtos pode provocar danos ao meio ambiente e
resistncia do inseto praga por presso de seleo (SANCHES et al., 2003; AGROFIT, 2017).
Como alternativa ao controle qumico, o uso de plantas aromticas torna-se vivel por
ser menos danoso ao ecossistema e proporcionar a gerao de renda para pequenos e mdios
produtores rurais. Algumas espcies possuem atividade biolgica contra formigas cortadeiras,
dentre elas, o Sambacait (Hyptis pectinada) apresenta toxicidade para as espcies
Acromyrmex balzani e Atta sexdens rubropilosa com concentrao letal (CL50) que variam
entre 3,48 a 8,18 g.mg-1 do leo essencial (FEITOSA-ALCANTARA et al., 2017).
Oliveira et al. (2017) verificaramque o leo essencial da espcie Aristolochia tribata
possui atividade formicida sobre a espcie de formiga cortadeira A. balzani e Atta sexdex nas
vias de exposio fumigao e contato. Os principais compostos relacionados ao
inseticida foram o p-cimeno (LC50 5,75 L L-1), limoneno (2,40 L L-1) e linalol (2,18 L L-1)
que so majoritrios na planta.
Jung et al. (2013) observaram que concentraes de 1,25, 2,5 e 5% do leo essencial
de pitanguera (Eugenia uniflora) possuem potencial para uso no controle alternativo da
formiga cortadeira Atta laevigata.

2.6. Carvona e sua atividade inseticida

A carvona (p-menta-6,8-diene-2-ona) uma substncia cetnica monoterpnica que


apresenta um centro de quiralidade em sua molcula e d origem a duas formas
enantiomricas: (S)-(+)-carvona e (R)-(-)-carvona. Algumas espcies apresentam diferentes
formas do composto como majoritrio, o Cuminum cyminum ((S)-(+)-carvona) e a Mentha
spicata ((R)-(-)-carvona), apesar da presena da carvona, diferem entre si quanto proporo
das formas da substncia e o odor do leo essencial (TOXOPEUS e LUBBERTS, 1994;
NUNES et al., 2013)
De acordo com a base de dados EssOilDB (Essential oil data-base), aproximadamente
196 espcies so responsveis pela biossntese da carvona no leo essencial, no entanto, o teor
desse composto varia significativamente. Dentre as plantas produtoras de carvona, a L. alba
destaca-se por apresentar em sua composio qumica alto teor do composto, entretanto, a
espcie possui gentipos que varia seu teor entre 39,58 a 77% de carvona em relao aos
demais compostos (BLANK et al., 2015; NIPGR, 2017)
Alguns trabalhos demonstram a ampla variao dessa substncia na composio
qumica da espcie, dentre eles, o trabalho realizado por Peixoto et al. (2015) avaliando a
composio qumica de gentipos do banco de germoplasma de L. alba da UFS, encontraram
teores de 52,94% da carvona no leo essencial. J Niculau et al. (2013) observaram teor de
54,8% da carvona.
A variao da carvona na planta sofre influncia de diversos fatores ambientais e
biolgicos, no entanto, trabalho realizado por Ehlert et al. (2013) avaliando a influncia do
horrio de colheita na composio qumica da carvona em plantas de L. alba, demonstraram
que a biossntese pode variar ao longo do dia. Colheitas realizadas s 8h da manh
apresentaram teor de 49,48%, entretanto, aps duas horas, o teor aumentou para 51,41% e
sofreu reduo significativa para 26,66% ao meio dia. Aps esse horrio, o composto teve
13

novamente sua biossntese aumentada para 54,91% s 14h.Esses resultados demonstram que a
presena do composto majoritrio aumenta ou diminui de acordo com a temperatura diria.
Apesar da variao no teor, o composto tem apresentado atividade biolgica em
pragas agrcolas de importncia econmica (Tabela 1). Atualmente, plantas como Anethum
graveolens, Mentha spicata, L. alba e Origanum vulgare possuem potencial para
desenvolvimento de pesticidas naturais para controle de caros, fitopatgenos e insetos
fitfagos que trazem prejuzo para agricultura em regies tropicais (KEDIA et al., 2014;
PEIXOTO et al., 2015).
Outra importante aplicao da carvona na agricultura est relacionada inibio de
brotaes de batata durante o armazenamento. De acordo com experimento realizado por
Hartmans et al. (1995),a carvona proporciona inibio de brotaes a longos perodos de
armazenamentos, aliados a baixas temperaturas, com efeito superiores a produtos comerciais
testados como padro. Alm disso, a presena da carvona reduziu a incidncia de fungos
como Fusarium sp. e Rhizoctonia sp. que degradam e reduzem a qualidade do produto antes
de chegar a mesa do consumidor.

Tabela 2.1. Atividade biolgica da carvona em pragas agrcolas


Atividade Espcie Fonte Cultura Autor/Ano
Rhipicephalus microplus Lippia alba Milho Peixoto et al. (2015)
Acaricida Tetranychus cinnabarinus Mentha spicata Morango Sertkaya et al. (2010)
Tetranychus urticae Sinttico Curcubitaceas Badawy et al. (2010)
Alternaria sp Lippia scaberrima Arroz Regnier et al. (2010)
Aspergillus terreus Origanum vulgare - Kadoglidou et al. (2011)
Colletotrichum gloeosporioides Lippia scaberrima Pimento Regnier et al. (2010)
Colletotrichum nymphaeae Anethum graveolens Morango Karimi et al. (2016)
Fusarium oxysporium Sinttico Quiabo Marei et al. (2012)
Fungicida
Lasiodiplodia theobromae Lippia scaberrima Manga Regnier et al. (2010)
Penicillium digitatum Lippia javanica Laranja Combrinck et al. (2011)
Penicillium expansum Mentha spicata - Combrinck et al. (2011)
Rizoctonia solani Sinttico Soja Marei et al. (2012)
Verticillium dalhiae Origanum vulgare - Marei et al. (2012)
Agrotis ipsilon Sinttico Tomate Sharaby e El-Nujiban (2015)
Bemisia tabaci Sinttico Hortalias Chae et al. (2014)
Callosobruchus chinensis Mentha spicata Feijo Kedia et al. (2014)
Drosophila melanogaster Mentha spicata Morango Franzios et al. (1997)
Inseticida
Sitophilus zeamais Lippia alba Milho Peixoto et al. (2015)
Spodoptera frugiperda Lippia alba Milho Niculau et al. (2013)
Spodoptera littoralis Sinttico Curcubitaceas Pavela (2014)
Tribolium castaneaum Lippia alba Milho Peixoto et al. (2015)

O valor agregado a compostos monoterpnicos oxigenados como a carvona maior


em relao a outros compostos que possuem apenas carbono e nitrognio na sua estrutura.
Essa substncia possui ampla aplicao na indstria alimentcia, cosmtica e de perfumaria e
aumenta seu potencial industrial como importante matria-prima natural para a sntese de
produtos com aplicao na agricultura orgnica e convencional (ANTUNES, 2005)
14

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21

4. CAPTULO 1
A IDADE DA PLANTA AFETA O TEOR E COMPOSIO QUMICA DOS LEOS
ESSENCIAIS DE ACESSOS DE Lippia alba.

RESUMO

A Lippia alba (Mill.) N. E. Br uma planta aromtica com origem no continente americano e
com ampla distribuio no mundo. O potencial farmacolgico e pesticida est associado
produo de leo essencial que possui diversos compostos qumicos que em sinergismo
proporciona atividade superior a produtos sintticos comerciais, no entanto, o envelhecimento
vegetal altera a dinmica fotossinttica e pode alterarqualitativamente sua produo. Com
isso, o objetivo do trabalho foi avaliar a influncia da idade da planta na constituio qumica
de acessos de L. alba. O experimento foi conduzido na fazenda experimental Campus Rural
da UFS. As colheitas foram realizadas em fevereiro de 2006 e fevereiro de 2016. Para a
extrao leo essencial, as plantas foram cortadas a 20cm do solo e desfolhadas
posteriormente. As folhas e inflorescncias passaram por secagem a 40C por cinco dias em
estufa de circulao de ar forado. O leo essencial foi obtido por hidrodestilao e
posteriormente analisado em cromatografia gasosa (CG/EM-DIC). Os resultados
demonstraram um aumento significativo no nmero de compostos na segunda colheita da
planta para os acessos LA-02 (0,00-11,08%), LA-44 (0,00-10,54%), LA-29 (0,00-7,65%) os
compostos mirceno, p-cimeno, -terpineno e elemol que passaram ser biossintetizado na
planta. No foi detectada diferena entre os acessos dentro de cada idade para a concentrao
de leo, no entanto, verificou-se maiores variaes entre as idades para os acessos LA-10
(0,97-2,25%), LA-37 (0,83-2,38%), LA-53 (0,76-2,84%) e LA-41 (0,69-2,48%), que
aumentaram o teor com o envelhecimento vegetal.

Palavras-chave: Biossntese, planta aromtica, metabolismo vegetal.


22

4.1. Introduo

A espcie Lippia alba (Mill.) N. E. Br. (Verbenaceae) uma planta aromtica com
porte subarbustivo originria da Amrica e com ampla distribuio em continentes como:
Amrica, sia, frica e Europa (Aguino et al., 2010; Salimena e Mlgura, 2015). O Brasil
um dos principais centros de diversidade gentica da espcie e apresenta grande variabilidade
em todo territrio nacional (Gomes et al., 2011).
A L. alba comumente conhecido como erva-cidreira-brasileira em diversos pases e
tornou-se popular pela aoantiespasmdica, analgsica, ansioltica, calmante e sedativana
medicina. O uso medicinal est associado biossntese de leo essencial nos tricomas foliares
e favoreceu o uso da espcie como matria-prima na indstria farmacolgica e cosmtica
(Jannuzi et al., 2011; Baldissera et al., 2016).
A diversidade qumica encontrada na espcie ocasionada pela interao de fatores
genticos e ambientais, que conferem maior ou menor proporo de substncias presentes no
leo essencial. Atualmente seis grupos qumicos so descritos para a L. alba considerando os
principais compostos: Grupo 1 (linalol, 1,8-cineol e xido de cariofileno); Grupo 2 (linalol,
geranial, neral, 1,8-cineol e xido de cariofileno); Grupo 3 (limoneno, carvona e sabineno);
Grupo 4 (Carvona, limoneno, g-muurolene e mirceno); Grupo 5 (neral, geranial e xido de
cariofileno) e Grupo 6 (geranial, neral, o-cimeno, limoneno e xido de cariofileno) (Blank et
al., 2015)
Apesar da existncia de grupos qumicos em plantas aromticas, sua composio
qumica pode sofrer variao no teor de compostos presentes no leo essencial em resposta a
diversos fatores. Dentre os eles a poca de colheita, sazonalidade e idade planta apresentam-se
como fatores significativos na biossntese de metabolitos em plantas aromticas, pela
exposio da planta a variaes climticas e alteraes morfofisiolgicas da planta (Cui et al.,
2011; Pandelo et al, 2012).
Santos et al. (2015) avaliando a composio qumica de plantas de Lippia sidoides
Cham. com dois e oito anos de idade, observaram que o envelhecimento e fatores genticos
influenciaram na proporo dos constituintes do leo essencial. Essas alteraes no contedo
qumico podem afetar diretamente a atividade biolgica e prejudicar a aplicao da espcie na
produo de pesticidas naturais e fitoterpicos a nvel industrial.
A biossintese de compostos qumicos regulada pela ao de enzimas responsveis
por catalizar as reaes entre unidades isoprnicas e monoterpenicas derivadas da rota
metablica na planta. As enzimas possuem faixa de temperatura ideal para sua atividade,
entretanto, a exposio da planta a condies climticas por longos perodos pode afetar a
atividade enzimtica e a produo de monoterpenos nos tricomas glandulares (Barros et al.,
2009; Ramak et al., 2014).
Tian et al. (2017) observaram que a produo de leo essencial na planta
influenciada por fatores geneticos e que a expresso de genes especficos na planta
responsvel pela sintese de enzimas que agemnos tricomas glandulares, sendo responsveis
pela produo de leo essencial. Na L. alba, a produo de compostos qumicos
intermediada pela expresso de trs genes especficos: LaTPS1, LaTPS2 e LaTPS3 que
controlam a biossntese de compostos majoritrios na planta, no entanto, no se tem
conhecimento, atualmente, sobre a influncia da idade na composio qumica e no contedo
do leo essencial aps o envelhecimento (Barros et al., 2009; Pandel et al., 2012).
O objetivo desse estudo avaliar a influncia da idade da planta no teor e composio
qumica do leo essencialde acessos da coleo de L. alba do Banco Ativo de Germoplasma
de Plantas Medicinais e Aromticas da Universidade Federal de Sergipe.
23

4.2. Material e Mtodos

4.2.1. Material vegetal e delineamento experimental

O experimento foi conduzido na fazenda experimental Campus Rural da UFS,


localizado no municpio de So Cristvo, Estado de Sergipe, Brasil (1100S e 3712W).
Foram testados 18acessos (LA-02, LA-09, LA,10, LA-22, LA-24, LA-29, LA-30, LA-
36, LA-37, LA-39, LA-40, LA-41, LA-42, LA-44, LA-53, LA-61, LA-68 e LA-69) da
coleo de Lippia alba do Banco Ativo de Germoplasma de Plantas Medicinais e Aromticas
da Universidade Federal de Sergipe (UFS), oriundos de municpios brasileiros localizados nos
estados da Bahia, Distrito Federal, Gois, Minas Gerais, Paran e Sergipe (Tabela 4.1).
As estacas oriundas dos 18 acessos foram utilizadas na produo de mudas em
bandejas de poliestireno expandido com 72 clulas contendo substrato (terra preta + esterco
bovino) na proporo 3:1. As bandejas permaneceram em casa de vegetao com sombrite
70%, contendo sistema de irrigao e nebulizao. O plantio das mudas em campo ocorreu
em outubro de 2005.
O experimento foi conduzido em delineamento em blocos casualizados, em esquema
de parcela subdividida no tempo, com duas repeties. Cada repetio foi composta por trs
plantas em espaamento de cultivo de 1,5 m x 1,5 m. Foi realizada adubao de cobertura a
30 cm de distncia do caule da planta com 5L de esterco bovino a cada seis meses para suprir
necessidades nutricionais da planta, alm de irrigao por gotejo e tratos culturais quando
necessrios.

4.2.2. Extrao e anlise do leo essencial

A colheita do material foi realizada em duas pocas de corte em fevereiro de 2006 e


2016, com plantas contendo um e 10 anos de idade, respectivamente.
As plantas foram colhidas no perodo da manh, realizando corte das plantas a 20 cm
do solo. O material foi levado para o laboratrio de fitotecnia da Universidade Federal de
Sergipe e realizado o desfolhamento manual para separao das folhas e inflorescncia do
caule. As folhas e inflorescncias foram levadas para estufa de secagem com circulao de ar
forado a 40C por cinco dias (Ehlert et al., 2006).
O leo essencial foi extrado utilizando o processo de hidrodestilao com aparelho do
tipo Clevenger modificado. Foram pesados 50g de matria seca de folhas e inflorescncias em
balana semi-analticas e transferidas para bales de vidro em triplicata com volume de 3000
mL com acrscimo de 2000 mL de gua destilada. Aps processo de condensao do vapor o
material permaneceu por 120 min at completa extrao do leo essncia. O contedo da
extrao foi transferido para frascos mbar e armazenado em freezer a -20C de temperatura
at analise (Ehlert et al., 2006; Blank et al., 2015).
Para calcular a concetrao de leo essencial (%) obtido de cada amostra, utilizou-se a
seguinte equao:

= ( ) 100

Onde, v= volume de leo essencial extrado da amostra; m= massa seca de folhas da amostra.

As anlises foram realizadas utilizando um CG/EM/DIC (GCMSQP2010 Ultra,


Shimadzu Corporation, Kyoto, Japo) equipado com um amostrador com injeo automtica
AOC-20i (Shimadzu). As separaes foram realizadas em uma coluna capilar de slica
fundida Rtx-5MS Restek (5%-difenil-95%-dimetilpolisiloxano) 30 m x 0,25 mm de
dimetro interno, 0,25 m de espessura de filme, em um fluxo constante de Hlio 5.0 com
taxa de 1,0 mL min-1. A temperatura de injeo foi de 280 C, 1,0 L (10 mg mL-1) de
amostra foi injetado, com uma razo de split de 1:30. A programao de temperatura do forno
24

iniciou-se a partir de 50 C (isoterma durante 1,5 min), com um aumento de 4 C min-1, at


200 C, em seguida, a 10 C min-1 at 300 C, permanecendo por 5 min. Para o CG/EM as
molculas foram ionizadas por ionizao por eltrons com energia de 70 eV. Os fragmentos
analisados por um sistema quadrupolar programado para filtrar fragmentos/ons com m/z na
ordem de 40 a 500 Da e detectados por um multiplicador de eltrons. O processamento de
dados foi realizado com software CGMS Postrun Analysis (Labsolutions- Shimadzu).O
processo de ionizao para o CG/DIC foi realizado pela chama proveniente dos gases
hidrognio 5.0 (30 mL min-1) e ar sinttico (300 mL min-1). As espcies coletadas e a corrente
eltrica gerada foramamplificadas e processadas. O processamento de dados foi realizado
utilizando o software CG Postrun Analysis (Labsolutions- Shimadzu).
A identificao dos constituintes foi realizada com base na comparao dos ndices de
reteno da literatura (ADAMS, 2007). Para o ndice de reteno foi utilizando a equao de
Van den Dool e Kratz 1963 em relao a uma srie homloga de n-alcanos (nC9- nC18).
Tambm foram utilizadas trs bibliotecas do equipamento WILEY8, NIST107 e NIST21 que
permite a comparao dos dados dos espectros com aqueles constantes das bibliotecas
utilizando um ndice de similaridade de 80%.

4.2.3. Anlise estatstica

Foram utilizados dois mtodos de anlise multivariada: anlise de componente


principal (ACP) e anlise de agrupamento baseado na similaridade de indivduos e
distribuio dos constituintes. Posteriormente, foi criada uma matriz de dissimilaridade com
base na constituio qumica dos leos essenciais de cada acesso com base em suas distncias
euclidianas. A matriz de dissimilaridade foi simplificada com dendrogramas usando mtodo
de agrupamento de Ward, utilizando o programa Statstica verso 7.0.
As mdias dos teores do leo essencial foram submetidos anlise de varincia e
quando significativos foi aplicado o teste de Scott-Knott (p0,05)
.
4.3.Resultados

Os resultados mostraram que o contedo do leo essencial de L. alba no


variousignificativamente entre os gentipos para cada faixa etria (Tabela 4.2). Em plantas de
um ano de idade, o teor de leo essencial variou entre 0,60% a 2,54%. Nas plantas com dez
anos de idade, observou-se teor entre 0,61% a 2,59%.
A concentrao do leo essencial foi comparada entre as idades dos gentipos (um e
dez anos), verificou-se diferena significativa entre as duas idades para a maioria dos acessos
avaliados, com maiores teores para plantas contendo dez anos de idade (Tabela 4.2). As
maiores variaoes foram detectadas para os acessos LA-10 (0,97-2,25%), LA-37 (0,83-
2,38%), LA-53 (0,76-2,84%) e LA-41 (0,69-2,48%).
Os principais constituintes encontrados nas duas idades foram o linalol, neral e
geranial (Tabela 4.2). Entre os acessos com um ano de idade, as maiores mdias do
compostolinalol foram detectadas para os acessos LA-09 (80,33%), LA-22 (83,94%) e LA-24
(80,12%). O acesso LA-44 (38,62%) teve o maior contedo de neral no leo essencial. O
geranial apresentou maior contedo para todos os acessos, com exceo para os acessos
contendo linalol. Nas plantas com dez anos de idade, apenas o acesso LA-22 (86,00%) foi
significativamente diferente dos demais acessos. O maior contedo de neral foi observado
para o acesso LA-68 (35,31%). O geranial no variou em funo do acesso para plantas mais
velhas.
A anlise comparativa entre as idades (um e dez anos de idade) verificou que o
contedo de linalol, neral e geranial foi maior para plantas com dez anos de idade. Osacessos
LA-42 (0,00-1,99%), LA-53 (0,00-1,58%) e LA-68 (0,00-1,56%) apresentaram os
25

maioresaumentos no linalol com base na idade da planta. A maior variao foi observada para
o acesso LA-24 para os compostos neral (0,00-9,43%) e geranial (0,00-8,08%).
Para os compostos secundrios mirceno, p-cimeno, limoneno, 1,8-cineol, elemol e
xido de cariofileno houve diferena significativa dentro e entre as idades de plantas (Tabela
4.2). Em plantas com um ano de idade, o maior contedo foi registrado para os seguintes
acessos: mirceno no LA-29 (10,40%); p-cimeno para os acessos LA-29 (7,21%), LA-41
(3,96%), LA-40 (2,29%), LA-09 (1,32%), LA-53 (1,11%) e LA69 (1,40%); limoneno para o
LA-39 (29,75%), LA-36 (15,85%), LA-24 (11,66); 1,8-cineol no LA-09 (11,24%); o elemol
no foi detecdado em plantas com um ano de idade; xido de cariofileno no LA-37 (8,60%).
Nas plantas com dez anos de idade, foi verificado variao significativca nos acessos: LA-29
(0,63%) para o mirceno; LA-02 (5,14%), LA-36 (5,97%), LA-37 (4,22%), LA-69 (3,38%) e
LA-41 (3,70%) para o limoneno; LA-09 (7,98%) para o 1,8-cineol; LA-02 (11,08%) para o
elemol e LA-44 (10,54%) para o composto xido de cariofileno.
Entre as idades de um e dez anos, detectou aumento sigificativo dos compostos p-
cimeno, limoneno, 1,8-cineol, elemol e xido de cariofileno para acessos com dez anos de
idade. O composto mirceno foi maior em plantas com um ano de idade. Os maiores aumentos
foram observados para os acessos: LA-37 (0,00-4,40%) e LA-41 (0,00-4,06%) no p-cimeno;
LA-02 (0,00-5,14%), LA-61 (0,00-4,02%) e LA-69 (0,00-3,28%) para o limoneno; LA-22
(0,00-6,60%) e LA-24(0,0-4,18%) no 1,8-cineol; LA-02 (0,00-11,08%), LA-36 (0,00-8,28%)
e LA-10 (0,00-2,31%) para elemol e LA-44 (0,00-10,54%) e LA-29 (0,00-7,65%) para o
composto xido de cariofileno (Tabela 4.2).
A anlise de grupamento dos constituintes qumicos para as duas idades de plantas de
acessos de L. alba mostrou que o envelhecimento vegetal, aliado a fatores genticos da planta,
proporcionou um aumento na variabilidade de constituintes qumicos no leo essencial. A
primeira colheita realizada em fevereiro/2006 resultou na biossntese de treze compostos
qumicos e a formao de dois grupos, dos quais, os compostos majoritrios foram
responsveis pela caracterizao do agrupamento. No entanto, foi observado um aumento no
nmero de compostos no leo essencial de plantas colheitas em fevereiro/2016 para os
acessos avaliados e reduo significativa no teor dos compostos majoritrios encontrados em
plantas com um ano de idade e aumento no nmero de compostos minoritrios (Figura 4.1).
O grupo I de acessos de L. alba com foi representado pelos acessos LA-02, LA-36,
LA-10, LA-30, LA-39, LA-40, LA-37, LA-41, LA-61, LA-69, LA-29, LA-44, LA-42, LA-53
e LA-68 e o grupo II foi representado pelos acessos LA-09, LA-22 e LA-24 (Figura 4.1).
Ambas as idades de plantas apresentaram dois grupamentos qumicos sem alterao dos
acessos na idade de 10 anos.
Os constituintes qumicos encontrados para o grupo I (mirceno, p-cimeno, limoneno,
linalol, neral, geranial e xido de cariofileno) e grupo II (limoneno, 1,8-cineol e linalol) foram
observados em ambas as idades das plantas, no entanto, os compostos -terpineno e elemol
(grupo I) e neral, geranial e xido de cariofileno (grupo II) que anteriormente no foram
detectados no leo essencial em plantas com um ano de idade, contriburam para a formao
dos grupos em plantas com 10 anos de idade (Figura 4.3).
De acordo com a anlise de componente principal para os acessos com um ano de
idade, o componente principal primrio representou 27,14% da varincia total e foi
relacionado positivamente com os compostos linalol (r=0,97 e negativamente com neral (r= -
0,94) e geranial (r=-0,97). O componente principal secundrio representou 21,91% da
varincia total e foi relacionado positivamente com mirceno (r=0,91) e sabineno (r=0,86)
(Figura 4.2).
Em acessos com dez anos de idade, o componente principal primrio representou
32,80% da varincia total e relacionou positivamente com neral (r=0,97) e geranial (r=0,96) e
negativamente com o 1,8-cineol (r=-0,97) e linalol (r=-0,98). J o componente principal
secundrio representou 18,83% da varincia total e foi relacionado positivamente com p-
26

cimeno (r=0,82), (E)-b-ocimeno (r=0,77), sabineno (r=0,74) e g-terpineno (r=0,73) (Figura


4.2).
A correlao existente para plantas com um ano de idade entre os compostos sabineno
e mirceno (r=0,82), 6-metil-5-hepten-2-ona e mirceno (r=0,73), limoneno e (E)--ocimeno
(r=0,82), neral e geranial (r=0,95) foi muito forte e positiva. Os compostos neral e geranial
correlacionaram-se negativamentecom o composto 1,8-cineol (-0,51 e -0,49 repectivamente) e
muito forte com o linalol (-0,95) (Tabela 4.3). Em plantas com dez anos, a correlao foi
muito forte e positiva entre neral e geranial (0,99) e linalol e 18-cineol (0,98). Correlao
forte e positiva entre -terpineno e p-cimeno, (E)--ocimeno e p-cimeno (0,79) e xido de
cariofileno e germacreno D (0,70). Correlaes negativas e muito fortes foram verificadas
entre neral e geranial com o 1,8-cineol (-0,98 e -0,97) e neral e linalol (-0,98) e moderada
entre p-cimeno e linalol (-0,53) (Tabela 4.3).
Os constituintes qumicos majoritrios no grupo I foram neral e geranial e no grupo II
foi linalol (Figura 4.3). Em plantas do grupo I com 10 anos de idade observou-se uma reduo
dos teores de mirceno, p-cimeno e limoneno, um aumento do teor de xido de cariofileno e o
aparecimento dos novos compostos -terpineno e elemol (Figura 4.3). J em plantas do grupo
II com 10 anos de idade houve o aparecimento dos compostos novos neral, geraniale e xido
de cariofileno, e desaparecimento de limoneno (Figura 4.3).

4.4.Discusso

Os principais compostos comumente relatados na literatura para a L. alba so carvona


(0,33 - 77,20%),geranial (39,39 54,63%), limoneno (3,86 19,35%), linalol (0,17 -
84,73%), 1,8-cineol (0,93 9,17%), neral (11,51 36,14%), o-Cimeno (4,49 11,50%) e
xido de cariofileno (5,05 19,89%) (Jannuzzi et al., 2010; Parra-Garcs et al., 2010; Lopez
et al., 2011; Sette-de-Souza et al., 2014; Blank et al., 2015, Peixoto et al., 2015; Baldissera et
al., 2016). No presente trabalho, ambas as colheitas identificaram como principais
constituintes o mirceno, p-cimeno, limoneno, 1,8-cineol, linalol, neral geranial e xido de
cariofileno, entretanto, novos compostos passaram a compor o metabolismo secundrio da
planta como o g-terpineno, germacreno D e elemol como majoritrios no leo essencial.
Resultado distinto foi encontrado para espcie do mesmo gnero por Santos et al.
(2015), que no observaram alteraes na composio qumica de L. sidoides avaliando
plantas com 2 e 8 anos de idade, com base nos dados, os acessos mantiveram os mesmos
constituinte aps o envelhecimento. Outros trabalhos observaram resultados semelhantes a
esse para Origanum onites L. (Ozkan et al., 2010), Ocimum basilicum (Kakaraparthi et al.,
2015) e Mentha x piperita var. citrata (Oliveira et al., 2012), em quea idade no proporcionou
significativas mudanas na composio qumicados leos essenciais.
Alguns compostos qumicos minoritrios passaram a ser biossintetizados com maiores
mdias aps envelhecimento da planta e contriburam para varincia total como o p-cimeno
(0,90-4,40%), (E)--ocimeno (0,14-0,93%), sabineno (0,20-1,26%) e -terpineno (0,41-
3,23%), no entanto, os compostos que contriburam com o maior teor para a caracterizao
como componentes principais primrios foram neral (9,43-35,21%), geranial (8,08-51,82%),
linalol (1,30-86,00%) e o 1,8-cineol (4,18-7,98). O aumento da produo de compostos em
planta com dez anos pode ser observado entre os grupos II de ambas as idades (um e dez anos
de idade) com o aumento do 1,8-cineol e biossntese de neral e geranial que antes no
apareciam entre os principais compostos qumicos.
Com base na anlise de correlao, alguns compostos qumicos relacionam-se de
forma muito forte e positiva como o neral e geranial (r=0,95) que ambos participam da mesma
rota metablica na biossntese de compostos terpnicos (Dewick, 2008). A presena do
composto linalol no leo essencial reduz o teor dos compostos neral (r=-0,95) e geranial (r=-
0.90) devido correlao muito forte e negativa existente entre eles, esse fenmeno pode ser
observado no grupo I da primeira e segunda colheita em que o valor mdio observado para o
27

linalol (0,43% e 0,89%) inferior ao encontrado para o neral (29,62% e 31,58%) e geranial
(37,00% e 45,78%), no entanto, para o grupo II de ambas as colheitas, a presena do linalol
(81,46% e 77,78%) expresso em maior quantidade no leo essencial reduz significativamente
o teor do neral (3,14%) e geranial (2,69%).Resultado semelhante foi observado por Tomazoni
et al. (2017) caracterizando o leo essencial deEucalyptus globuluse Cinnamomum
camphoraque verificou reduo do teor de linalol (0,96 e 89,9%, respectivamente) na
presena de neral (16,20 e 0,00%).
Fahnrich et al. (2012) sugerem que os genes responsveis pela biossntese de
compostos como mirceno, limoneno, sabineno e -terpineno so os mesmos, pois, ambos
derivam da converso metablica do ction a-terpenyl atravs de enzimas sintases que
aumentam significativamente da concetrao do composto -terpineno quando expressos na
planta, reduzindo as mdias dos compostos limoneno e mirceno em plantas mais velhas.
A biossintese do xido de cariofileno em plantas com 10 anos pode estar relacionado
expresso gnica do gene QHS1 nos tricomas glandulares de gentipos de L. alba. Esse gene
encontrado em plantas da espcie Artemisia annua e responsvel pela produo da enzima
-cariofileno sintase que catalisa a converso de molculas de geranyl difosfato, responsvel
pela biossintese de geranial na planta, em xido de cariofileno nas plantas do grupo II com 10
anos de idade (YANG et al., 2016).
A relao existente entre os compostos majoritrios pode indicar o maior ou menor
teor de alguns compostos no leo essencial. A correlao entre os compostos neral e geranial
(citral) com o composto linalol tem 95% de probabilidade de chances que a presena do
linalol reduza os teores dos compostos biossntetizados. A baixa produo do neral/geranial
no grupo II pode estarrelacionada atividade enzimtica no mesmo stio de ao para ambas
as molculas terpnicas, o que explica a reduo de sua produo nos grupos qumicos II e III
(Volz et al., 2009; Portilla-Zuiga et al., 2016).
A biossintese desses compostos inicia-se com uma reao de condensao de duas
molculas de acetil-CoA (C2) tendo como produto o acetoacetil-CoA (C4). O acetoacetil-CoA
reage com uma terceira molcula de acetil-CoA por condensao obtendo o -hidroxi--
metilglutaril-CoA (HMG-CoA) com cinco carbonos (C5), essa molcula reduzida por reao
com trs molculas de NADPH e produz o cido mevalnico (C5). Esse intermedirio
fosforilado pela adio de trs molculas de ATP formando o isopentenyl difosfato
(isopentenyl PP) (C5), conhecidos comurmente como unidade de isoprenos. O isopentenyl PP
reage com uma molcula de cinco carbonos o dimetilalil difosfato (dimetilalil PP)
biossintetizado na rota MEP (Dewick, 2008).
A formao de molculas monoterpnicas (C10) ocorre com a condensao das
molculas isoprnicas (C5) em uma molcula de geranyl difosfato (geranyl PP) (C10) que
fosforilada em linalyl PP e posteriormente sofre ciclizao enzimtica em neryl PP. As
molculas geranyl PP (geranial, citronelal e geraniol), linalyl PP (b-mirceno e linalol) e neryl
PP (neral e nerol) so as responsveis pela formao dos demais compostos monoterpnicos e
sesquiterpnicos que formaro o leo essencial de plantas de L. alba. A maior produo de
linalol pode estar reduzindo a quantidade de molculas de geranyl PP e neryl PP disponveis
para a sntese de geranial e neral;esse fenmeno reduz o teor desses compostos e derivados
qumicos, no entanto, o acesso LA-24 apresentou, aps envelhecimento, biossntese de neral
(0,00-9,43%) e geranial (0,00-8,08%) como majoritrios, o que pode estarrelacionado
reduo do linalol (80,12-68,77%) entre as idades.Esse fenmeno indica que a reduo dos
compostos majoritrios na planta favorece o surgimento de novos constituintes que possuem
fortes correlaes entre si (Dewick, 2008; Ramak et al., 2014).
Apesar dos fatores climticos contriburem significativamente para a mudana na
composio qumica em plantas de L. alba,o envelhecimento vegetal pode ser um dos
principais fatores na mudana na concetrao do leo essencial entre as duas idades, em que,
o envelhecimento da planta proporcionou valores maiores entre as idades das plantas no
presente trabalho. Segundo ensaio realizado por Pandel et al. (2012) observaram uma
28

reduo na concetrao de leo nos tricomas e dos compostos majoritrios geranial/neral


(15%), carvona (66%) e linalol (36%) associados menor capacidade fotossinttica foliar e
maior nmero de tricomas, que aumentam a biossintese de compostos minoritrios e a
capacidade de armazenamento de leo nessas estruturas. Alm disso, Liu et al. (2015)
observaram aumento no metabolismo secundrio na espcie Podulus euphratica e
consequente aumento no nmero de compostos qumicos em plantas submetidas a estresses
ambientais e biticos.
Tian et al. (2017), em estudo de expresso gnica de espcie produtoras de metablitos
secundrios no desenvolvimento de tricomas glandulares, verificaram que a formao desses
apndices influenciada siginificativamente pelo genotipo na planta. Espcies do gnero
Arabidopsis possuem genes como GL3, EGL3, TTG1, MYN23 e G2 que controlam o
aparecimento de tricomas em fases especficas da planta e alteram a biossintese dos
compostos qumicos no leo essencial com o envelhecimento.
A influncia do envelhecimento vegetal na expresso de genes responsveis pela
biossintese de compostos majoritrios foi comprovada por Wang et al. (2013) que avaliaram a
produo de artemisinina na espcie Artemisia annua. Verificou-se que durante o
envelhecimento do tecido formador dos tricomas gladulares na presena de promotores
especficos na clula vegetal, ocorrem alteraes em pares de bases nitrogenadas formadores
de genes responsveis pela sintese de novas enzimas que reduzem a concentrao do
composto majoritrio no leo essencial. Esse fenmeno comprova o surgimento dos
compostos neral e geranial no acesso LA-24 que pode estar relacionado expresso de novos
genes e atividade enzimtica nos tricomas glandulares na L. alba, que reduzem a produo de
linalyl PP e favorece a biossntese de derivados de geranyl PP e neryl PP.
A biossintese do elemol ocorre com a converso da molcula geranyl difosfato (GPP)
em farnesil difosfato (FPP) atravs de processos de ionizao. O FPP ento transformado
em -humuleno e posteriormente em (E)--cariofileno pela ao da enzima -cariofileno
sintase. O composto (E)--cariofileno isomerizado e posteriormente convertido em
germacreno A que sofre rotao dos carbonos C2 e C3 com atividade enzimtica do
germacreno A sintase e origina o -elemeno, que o precursor do elemol na rota
biossintetica. A ativio das enzimas -cariofileno sintase e/ou germacreno A sintase nos
tricomas pode explicar o aparecimento do composto elemol aps o envelhecimento de alguns
gentipos de L. alba (Barros et al., 2009).
O estudo comprovou que a idade da planta influncia na produo e a constituio
qumica do leo essencial.

Agradecimentos

Os autores agradecem ao CNPq, FAPITEC/SE, CAPES e FINEP pelo suporte financeiro dado
para realizao deste trabaho.

4.5.Referncias

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31

Tabela 4.1
Identificao e origem de 18 acessos da coleo de Lippia albado Banco Ativo de
Germoplasma de Plantas Medicinais e Aromticas da Universidade Federal de Sergipe,
municpio de So Cristvo, Estado de Sergipe, Brasil.
Acesso Municpio, Estado, Pas Procedncia Cdigo no herbario
LA-02 Araguana, Tocantins, Brasil UNB 14785
LA-09 Braslia, Distrito Federal, Brasil UNB 14786
LA-10 Braslia, Distrito Federal, Brasil UNB 13495
LA-22 Lavras, Minas Gerais, Brasil UNB 13476
LA-24 Luzinia, Gois, Brasil UNB 13477
LA-29 Planaltina de Gois, Gois, Brasil UNB 13485
LA-30 Posse, Gois, Brasil UNB 13454
LA-36 Braslia, Distrito Federal, Brasil UNB 13472
LA-37 Braslia, Distrito Federal, Brasil UNB 13455
LA-39 Braslia, Distrito Federal, Brasil UNB 13497
LA-40 Braslia, Distrito Federal, Brasil UNB 13456
LA-41 Curitiba, Paran, Brasil UNB 13484
LA-42 Braslia, Distrito Federal, Brasil UNB 13444
LA-44 Braslia, Distrito Federal, Brasil UNB 14788
LA-53 Telha, Sergipe, Brasil UFS 13446
LA-61 Rio Real, Bahia, Brasil UFS 13479
LA-68 Santana do So Francisco, Sergipe, Brasil UFS 14789
LA-69 Gararu, Sergipe, Brasil UFS 13467
32
Tabela 4.2
Mdia dos constituintes qumicosde 18 acessos da coleo de Lippia alba do Banco Ativo de Germoplasma de Plantas Medicinais e Aromticas da
Universidade Federal de Sergipe, com 1 e 10 anos de idade.
Composto -pineno sabineno 6-metil-5-hepten-2-ona mirceno p-cimeno limoneno 1,8-cineol (E)--ocimeno -terpineno
IR 932 969 981 988 1020 1024 1026 1032 1054
Acesssos 1 ano
LA-02 0,00 bA 0,00 bB 0,00 dA 10,79 dA 0,00 bB 0,00 bB 0,00 bA 0,00 cA 0,00 aB
LA-09 0,00 bA 1,32 aA 0,00 dA 0,00 hA 0,00 bA 0,00 bA 11,24 aA 0,42 bA 0,00 aA
LA-10 0,00 bB 0,00 bB 0,00 dA 0,98 gA 0,00 bB 0,00 bB 0,00 bA 0,00 cA 0,00 aB
LA-22 0,00 bA 0,00 bB 0,00 dA 0,00 hA 0,00 bA 0,00 bA 0,00 bB 0,00 cA 0,00 aA
LA-24 0,00 bA 0,00 bB 0,00 dA 0,00 hA 0,00 bA 11,66 aA 0,00 bB 0,00 cA 0,00 aA
LA-29 10,40 aA 7,21 aA 0,00 dA 25,79 bA 0,00 bA 0,00 bA 0,00 bB 0,00 cB 0,00 aA
LA-30 0,00 bA 0,00 bB 0,00 dA 0,00 hA 0,00 bB 0,00 bA 0,00 bA 0,00 cB 0,00 aB
LA-36 0,00 bA 0,94 aA 0,75 cA 0,46 hA 7,31 aA 15,85 aA 0,00 bA 0,00 cA 0,00 aB
LA-37 0,00 bA 0,00 bB 0,00 dA 1,01 gA 0,00 bB 0,00 bB 0,00 bA 0,00 cB 0,00 aB
LA-39 0,00 bA 0,00 bB 0,00 dA 0,00 hA 8,29 aA 29,75 aA 0,00 bA 4,12 aA 0,00 aB
LA-40 0,00 bB 2,29 aA 0,96 bA 9,45 eA 0,00 bB 0,00 bB 0,00 bA 0,00 cB 0,00 aB
LA-41 0,00 bB 3,96 aA 8,24 aA 30,31 aA 0,00 bB 0,00 bB 0,00 bA 0,00 cB 0,00 aB
LA-42 0,00 bA 0,00 bB 0,00 dA 8,68 fA 0,00 bB 0,00 bA 0,00 bA 0,00 cB 0,00 aB
LA-44 0,00 bB 0,00 bB 0,00 dA 8,75 fA 0,00 bA 0,00 bA 0,00 bA 0,00 cA 0,00 aB
LA-53 0,00 bA 1,11 aA 0,00 dA 0,00 hA 9,17 aA 0,00 bA 0,00 bA 0,00 cB 0,00 aB
LA-61 0,00 bB 0,00 bB 0,00 dA 13,80 cA 0,00 bB 0,00 bB 0,00 bA 0,00 cB 0,00 aB
LA-68 0,00 bA 0,00 bB 0,00 dA 0,00 hB 16,37 aA 0,00 bA 0,00 bA 0,00 cB 0,00 aB
LA-69 0,00 bB 1,40 aA 0,00 dA 0,00 hB 20,77 aA 0,00 bB 0,00 bA 0,00 cB 0,00 aB
10 anos
LA-02 0,00 fA 0,26 aA 0,00 bA 0,00 cB 1,70 aA 5,14 aA 0,00 eA 0,00 iA 1,31 aA
LA-09 0,00 fA 1,26 aA 0,00 bA 0,00 cA 0,00 bA 0,00 bA 7,98 aB 0,36 fB 0,00 bA
LA-10 0,36 bA 0,46 aA 0,00 bA 1,65 bA 0,81 aA 2,18 aA 0,00 eA 0,00 iA 0,41 aA
LA-22 0,00 fA 0,35 aA 0,00 bA 0,00 cA 0,00 bA 0,00 bA 6,60 bA 0,00 iA 0,00 bA
LA-24 0,00 fA 0,54 aA 0,00 bA 0,63 cA 0,00 bA 0,00 bB 4,18 cA 0,00 iA 0,00 bA
LA-29 0,63 aB 0,20 aB 0,00 bA 1,66 bB 0,00 bA 0,00 bA 0,22 dA 0,14 hA 0,00 bA
LA-30 0,00 fA 0,50 aA 0,00 bA 0,11 cA 2,48 aA 0,10 aA 0,00 eA 0,51 dA 0,82 aA
LA-36 0,00 fA 0,37 aB 0,00 bB 0,12 cA 1,79 aB 5,97 aB 0,00 eA 0,00 iA 1,45 aA
LA-37 0,21 dA 0,67 aA 0,00 bB 0,25 cB 4,40 aA 4,22 aA 0,00 eA 0,93 aA 3,23 aA
LA-39 0,00 fA 0,42 aA 0,00 bB 0,11 cA 3,33 aB 0,40 aB 0,00 eA 0,83 bB 1,04 aA
LA-40 0,27 cA 1,24 aB 0,21 aB 0,30 cB 4,11 aA 0,45 aA 0,00 eA 0,88 aA 1,46 aA
LA-41 0,19 dA 0,62 aB 0,00 bB 0,28 cB 4,06 aA 3,70 aA 0,00 eA 0,61 cA 3,19 aA
LA-42 0,00 fA 0,42 aA 0,00 bA 2,89 aB 0,90 aA 0,00 bA 0,00 eA 0,56 cA 0,14 aA
LA-44 0,12 eA 0,30 aA 0,00 bA 0,20 cB 0,00 bA 0,00 bA 0,00 eA 0,00 iA 0,00 bA
LA-53 0,00 fA 0,42 aB 0,00 bA 3,26 aA 1,73 aB 0,00 bA 0,00 eA 0,48 dA 0,47 aA
LA-61 0,13 eA 0,48 aA 0,00 bA 0,16 cB 1,93 aA 4,02 aA 0,00 eA 0,29 gA 0,90 aA
LA-68 0,00 fA 0,35 aA 0,00 bA 2,63 aA 1,53 aB 0,00 bA 0,00 eA 0,41 eA 0,35 aA
LA-69 0,20 dA 0,43 aB 0,00 bA 0,23 cA 3,48 aB 3,28 aA 0,00 eA 0,44 eA 1,30 aA
CV-a (%) 1,70 19,68 2,09 2,25 12,17 4,45 6,46 6,20 11,10
CV-b (%) 2,88 12,09 2,09 10,65 9,02 2,68 9,36 9,77 6,17
Mdias seguidas da mesma letra minscula entre os acessos e maiscula entre as idades das plantas, no diferem pelo teste de skott-knott (p < 0,05). IR: ndice de reteno
33
Tabela 4.2
Continuao...
Composto (%) linalol neral geranial (E)-cariofileno germacreno D elemol xido de cariofileno OE (%)
IR 1095 1235 1264 1417 1484 1548 1582
Acesssos 1 ano
LA-02 0,00 dB 31,92 dA 40,11 aB 0,00 bB 0,00 aA 0,00 aB 0,00 fA 1,12 aB
LA-09 80,33 aA 0,00 kA 0,00 bA 0,90 aB 0,00 aA 0,00 aA 0,00 fB 2,54 aA
LA-10 0,00 dB 34,46 bA 48,16 aA 0,96 aB 0,00 aB 0,00 aB 2,43 cA 0,97 aB
LA-22 83,94 aA 0,00 kA 0,00 bA 0,00 bB 0,00 aB 0,00 aA 0,00 fB 2,46 aB
LA-24 80,12 aA 0,00 kB 0,00 bB 0,00 bB 0,00 aA 0,00 aA 0,00 fB 1,62 aB
LA-29 0,00 dB 27,34 hB 23,12 aB 0,00 bB 0,00 aA 0,00 aA 0,00 fB 1,53 aB
LA-30 0,00 dB 30,36 eB 30,82 aB 0,00 bB 0,00 aB 0,00 aB 0,00 fB 1,18 aB
LA-36 1,07 cA 28,37 fB 39,68 aB 0,00 bB 0,00 aA 0,00 aB 0,00 fA 2,47 aA
LA-37 0,00 dB 30,39 eA 47,84 aA 1,36 aB 0,00 aA 0,00 aA 8,60 aA 0,83 aB
LA-39 0,00 dB 22,23 jB 27,83 aB 0,00 bB 0,00 aB 0,00 aB 0,00 fB 1,87 aB
LA-40 5,46 bA 25,53 iB 37,13 aB 3,48 aA 0,00 aB 0,00 aB 5,38 bA 0,60 aA
LA-41 0,00 dB 25,22 iB 28,83 aB 0,00 bB 0,00 aB 0,00 aA 0,00 fB 0,69 aB
LA-42 0,00 dB 26,02 iB 29,88 aB 1,48 aA 0,00 aB 0,00 aB 1,75 dB 1,41 aB
LA-44 0,00 dB 38,62 aA 45,42 aB 0,00 bB 0,00 aA 0,00 aB 0,00 fB 0,70 aB
LA-53 0,00 dB 33,37 cA 43,33 aB 0,00 bB 0,00 aB 0,00 aB 1,09 eB 0,76 aB
LA-61 0,00 dB 31,35 dA 37,94 aB 0,00 bB 0,00 aB 0,00 aA 0,00 fB 0,72 aA
LA-68 0,00 dB 28,26 fB 33,59 aB 0,00 bB 0,00 aA 0,00 aA 0,00 fB 1,23 aB
LA-69 0,00 dB 30,81 eA 41,38 aB 0,40 aB 0,00 aA 0,00 aA 2,65 cA 1,18 aB
10 anos
LA-02 0,72 dA 27,90 gB 45,52 aA 0,20 aA 0,00 iA 11,08 aA 0,00 gA 2,16 aA
LA-09 78,57 bA 0,00 iA 0,00 bA 2,35 aA 0,00 iA 0,00 dA 1,01 fA 2,38 aA
LA-10 1,30 dA 34,30 bA 45,57 aB 1,99 aA 1,71aA 2,31 cA 2,42 eA 2,25 aB
LA-22 86,00 aA 0,00 iA 0,00 bA 1,48 aA 0,97 cA 0,00 dA 1,08 fA 3,39 aA
LA-24 68,77 cB 9,43 hA 8,08 bA 2,28 aA 0,00 iA 0,00 dA 1,54 fA 2,04 aA
LA-29 0,72 dA 33,48 cA 47,36 aA 3,99 aA 0,00 iA 0,00 dA 7,65 bA 2,51 aA
LA-30 0,80 dA 31,32 eA 45,03 aA 2,19 aA 0,39 fA 0,17 dA 2,39 eA 2,59 aA
LA-36 0,90 dA 29,81 fA 45,54 aA 0,23 aA 1,24 bA 8,28 bA 0,00 gA 2,20 aB
LA-37 0,42 dA 30,59 fA 42,13 aB 4,70 aA 0,00 iA 0,00 dA 3,89 dB 2,38 aA
LA-39 0,79 dA 30,30 fA 44,32 aA 1,79 aA 0,40 fA 0,24 dA 2,08 eA 2,53 aA
LA-40 1,08 dA 29,94 fA 40,42 aA 1,88 aB 0,42 fA 0,21 dA 2,06 eB 0,82 aA
LA-41 0,39 dA 29,91 fA 43,47 aA 5,62 aA 0,50 dA 0,00 dA 3,55 dA 2,48 aA
LA-42 1,99 dA 32,61 dA 51,81 aA 0,95 aB 0,33 gA 0,62 dA 2,14 eA 1,90 aA
LA-44 0,50 dA 33,67 cB 46,60 aA 4,03 aA 0,00 iA 0,27 dA 10,54 aA 2,81 aA
LA-53 1,58 dA 32,62 dA 50,28 aA 1,26 aA 0,46 eA 0,74 dA 2,30 eA 2,84 aA
LA-61 0,34 dA 31,59 eA 43,47 aA 6,49 aA 0,31 gA 0,00 dA 5,25 cA 0,61 aA
LA-68 1,56 dA 35,31 aA 50,59 aA 1,11 aA 0,00 iA 0,00 dA 1,36 fA 1,64 aA
LA-69 0,31 dA 30,96 eA 44,67 aA 4,83 aA 0,21 hA 0,00 v 5,77 cA 1,82 aA
CV-a (%) 9,40 1,04 3,45 6,91 4,90 4,62 7,23 12,51
CV-b (%) 9,84 1,75 2,45 3,69 9,28 5,36 15,55 7,33
Mdias seguidas da mesma letra minscula entre os acessos e maiscula entre as idades das plantas, no diferem pelo teste de skott-knott (p < 0,05). IR: ndice de reteno
34
Tabela 4.3
Coeficientes de correlao para os constituintes qumicos dos leos essenciais de acessos de Lippia alba com plantas de um e 10 anos de idade.
Compostos (%) sabineno 6-metil-5-hepten-2-ona mirceno p-cimeno limoneno 1,8-cineol (E)--ocimeno -terpineno linalol neral geranial (E)-cariofileno germacrenoo D elemol xido de cariofileno
1 ano
-pineno 0,82 -0,07 0,53 -0,13 -0,13 -0,06 -0,06 -0,11 0,06 -0,12 -0,13 -0,13
sabineno 0,41 0,73 -0,08 -0,17 0,04 -0,13 -0,14 0,03 -0,11 0,04 -0,07
6-metil-5-hepten-2-ona 0,65 -0,14 -0,07 -0,07 -0,08 -0,13 0,02 -0,01 -0,05 -0,09
mirceno -0,37 -0,27 -0,16 -0,18 -0,30 0,22 0,06 -0,03 -0,15
p-cimeno 0,19 -0,13 0,18 -0,25 0,21 0,24 -0,22 -0,04
limoneno -0,10 0,82 0,04 -0,19 -0,14 -0,22 -0,22
1,8-cineol 0,04 0,53 -0,51 -0,49 0,12 -0,13
(E)--ocimeno -0,06 -0,10 -0,10 -0,12 -0,14
linalol -0,95 -0,90 -0,06 -0,22
neral 0,95 0,01 0,22
geranial 0,15 0,42
(E)-cariofileno 0,72
10 anos
a-pineno -0,03 0,22 0,07 0,05 0,03 -0,29 0,02 0,10 -0,32 0,34 0,26 0,47 0,07 -0,21 0,55
sabineno 0,59 -0,22 0,32 -0,08 0,40 0,50 0,23 0,31 -0,39 -0,41 0,02 -0,05 -0,24 -0,38
6-metil-5-hepten-2-ona -0,12 0,37 -0,14 -0,11 0,40 0,14 -0,11 0,07 0,03 -0,10 0,02 -0,09 -0,09
mirceno -0,24 -0,39 -0,26 0,04 -0,35 -0,24 0,37 0,39 -0,30 0,03 -0,17 -0,04
p-cimeno 0,44 -0,52 0,79 0,86 -0,53 0,43 0,42 0,29 -0,03 -0,04 -0,08
limoneno -0,34 -0,08 0,67 -0,36 0,25 0,28 0,20 0,23 0,64 -0,13
1,8-cineol -0,28 -0,40 0,98 -0,98 -0,97 -0,14 -0,05 -0,19 -0,30
(E)--ocimeno 0,55 -0,33 0,27 0,27 0,20 -0,26 -0,43 -0,05
-terpineno -0,42 0,30 0,30 0,38 0,01 0,14 -0,06
linalol -0,98 -0,98 -0,16 -0,02 -0,19 -0,32
neral 0,99 0,16 0,03 0,11 0,37
geranial 0,07 0,03 0,19 0,31
(E)-cariofileno -0,27 -0,51 0,70
germacrenoo D 0,23 -0,31
elemol -0,42
35

Figura 4.1. Agrupamento dos acessos de Lippia alba com um ano de idade (A) e 10 anos (B)
com base no mtodo de agrupamento de Ward.
36

Figura 4.2. Distribuio dos constituintes qumicos dos leos essenciais de Lippia alba
em relao aos dois componentes principais atravs da anlise de componente principal
(ACP) com um ano (A) e 10 anos de idade (B).
37

Figura 4.3. Mdias com erros padro da mdia, dos constituintes qumicos dos leos
essenciais dos grupos I e II de Lippia alba com um ano e 10 anos de idade.
38

5. CAPTULO 2
A SELEO RECORRENTE RESULTA EM ALTERAES
MORFOAGRONMICAS E AUMENTO DA ATIVIDADE FORMICIDA EM Lippia
alba

RESUMO

O mtodo de seleo recorrente eficiente na obteno e seleo de prognies com alta


freqncia de alelos favorveis para as caractersticas quantitativas, entre estas, a atividade
formicida. Dentre as principais formigas, a Acromyrmex balzani destaca-se por causar
desfolhas severas planta e comprometer a produo das culturas em campo. O objetivo do
presente trabalho foi avaliar caractersticas morfoagronmicas e a atividade formicida do leo
essencial de prognies de gentipos de Lippia albacom alto teor de carvona. O experimento
foi implantando na Fazenda Experimental Campus Rural da UFS em delineamento de
blocos casualizados, com trs repeties, sendo quatro plantas por parcela.O espaamento
entre plantas usado foi de 0,80x0,80 m. Foi realizada avaliao morfolgica plena florao
para anlise de colorao. As plantas foram coletadas aos 180 dias do plantio e posteriormente
desfolhadas e secas em estufa com circulao de ar forado. O leo essencial foi extrado em
aparelho clevenger e posteriormente analisado sua composio qumica e testado a toxicidade
em formigas da espcie A. balzani. Os resultados mostraram que as prognies LA-56-03 e
LA-57-10 que apresentam folhas maiores (5,65-7,3 cm), concentrao de leo essencial (2,22-
2,84%) e alta atividade formicida (31-26,2%) possuem potencial para realizao de um novo
ciclo de seleo recorrente.

Palavras-chave:A. balzani; melhoramento; erva-cidreira; planta aromtica.


39

5.1. Introduo

A Lippia alba (Mill.) N. E. Br. uma espcie aromtica pertencente famlia botnica
Verbenaceae e com origem na Amrica do Sul. A planta possui ampla plasticidade fenotpica
adaptando-se a diferentes climas e regies no mundo como Europa e sia (Biasi e Costa,
2003; Montanari et al., 2004). O Brasil possui grande diversidade da espcie e considerado
um dos principais centros de diversidade no planeta, podendo esta espcie ser encontrada em
todo territrio nacional e com maior frequncia de ocorrncia nas regies centro-oeste,
nordeste e sudeste do pas (Gomes et al., 2011).
A espcie uma planta perene, com porte subarbustivo, muito ramificado e com aspecto
esbranquiado no caule. As folhas possuem filotaxia oposta com formas elpticas ou
lanceoladas e bordas serradas (De Romero et al., 2010). Suas flores so hermafroditas, com
alta frequncia de alogamia, dispostas em inflorescncia do tipo capituliforme. Suas sementes
possuem dormncia tegumentar que necessitam de processos de escarificao mecnico ou
qumico para favorecer sua germinao (Muoz et al., 2007, Pimenta et al., 2007).
Sua popularidade no Brasil foi motivada pela utilizao das folhas como chs, extratos e
macerado com aes calmantes, antiespasmdica, analgsica, sedativa e ansioltica. Essas
atividades foram importantes para incluso da espcie nas indstrias farmacuticas e
cosmticas. A ao fitoterpica proporcionada pela produo de metabolitos secundrios
como os leos essenciais na planta (Jannuzi et al., 2011, Sette-de-Souza et al., 2014).
Os leos essenciais so substncias terpnicas composta por diversos compostos
qumicos biossintetizadas em resposta interao gentipo x ambiente (Barros et al., 2009). A
L. alba possui diversos constituintes qumicos j descritos na literatura. Segundo Blank et al.
(2015) a espcie descrita quimicamente pela formao de seis grupos qumicos em razo
dos compostos majoritrios (carvona, linalol, neral/geranial e 1,8-cineol) que aparecem em
maiores teores no leo essencial.
Dentre os compostos majoritrios encontrados na L. alba, a carvona destaca-se pelo uso
na indstria alimentcia e agrcola como flavorizante e inibidor de brotaes no
armazenamento de batata (Solanum tuberosum), no entanto, seu potencial biolgico a torna
uma alternativa ao uso de pesticidas sintticos na agricultura e pecuria (Hartmans et al.,
1995; Niculau et al. 2013; Nunes et al., 2013).
O desenvolvimento de pesquisas tem comprovado o alto potencial do composto no
controle fitossanitrio de pragas agrcolas. Peixoto et al. (2015) comprovou a toxicidade do
leo essencial rico em carvona em pragas de armazenamento como Sitophilus zeamais e
Tribolium castaneaum que trazem grandes prejuzos ao armazenamento de gros como Arroz,
Feijo, Milho, Soja e Trigo. Uma das principais pragas em cultivos agrcolas so as formigas
cortadeiras.Esses insetos trazem prejuzos em todo o mundo devido a alta densidade
populacional e a fcil disseminao na rea agrcola. Os principais gneros considerados
pragas no Brasil e no mundo so a Acromyrmex e Atta. A Acromymex considerada de difcil
controle e causadora de danos severos ao cultivo agrcola por serem ninhos pequenos e com
grande densidade por rea. As desfolhas causadas pelas formigas operrias reduzem
drasticamente o processo fotossinttico da planta e diminui a produtividade na colheita
(Feitosa-Alcantara et al., 2017).
O uso de plantas aromticas no controle de pragas agrcolas apresenta vantagens em
relao aos produtos sintticos, comercialmente utilizado em cultivos agrcolas
convencionais. A complexidade qumica encontrada no leo essencial auxilia a quebra de
resistncia das pragas a substncias encontradas nesses produtos e reduz a presso de seleo
que provoca gradativamente o surgimento de indivduos tolerantes nas reas produtoras. Esse
efeito traz benefcio ecolgico ao meio ambiente, pela reduo no uso de substncias
causadoras de doenas em humanos e a organismos nos agroecossistemas (Chae et al.,
2014;Feitosa-Alcantara et al., 2017)
40

O objetivo do trabalho foi avaliar as prognies de um ciclo de seleo recorrente e seus


parentais na atividade formicida dos leos essenciais de L. alba.

5.2. Material e Mtodos

5.2.1. Material vegetal

Os materiais genticos usados neste ensaio foram as prognies do primeiro ciclo de


seleo recorrente (LA-56-01, LA-56-03, LA-56-04, LA-57-01, LA-57-02, LA-57-03, LA-
57-07, LA-57-09, LA-57-10, LA-70-01 e LA-70-03) e seus parentais (LA-56, LA-57 e LA-
70) todos classificados como qumiotipo limoneno-carvona (Blank et al., 2015).
O experimento foiconduzido na Fazenda Experimental Campus Rural da UFS,
localizado no municpio de So Cristvo, Sergipe, Brasil (latitude 1100S e longitude
3712W).

5.2.2.Obteno de prognies

Para o cruzamento dos gentipos LA-56, LA-57 e LA-70 foi utlizado o mtodo de
melhoramento por seleo recorrente entre meios-irmos.Foram coletadassete estacasdas
plantas-matrizes de cada parentaloriundos do Banco de Germoplasma da UFS e produzidas
mudas com substrato contendo terra preta + esterco curtido na proporo 3:1. As plantas
foram distribudas em espaamento 1,0 x 1,0 m na rea de cruzamento e cada gentipo
possuam quatro plantas de gentipos diferentes aos seus lados para aumentar a probabilidade
de polinizao cruzada.
As infrutescncias foram coletadas secas e com colorao marrom, acondicionadas em
sacos de papele identificadas com o cdigo da planta-me e o nmero correspondente a
prognie (LA-56-01, LA-56-03, LA-56-04, LA-57-01, LA-57-02, LA-57-03, LA-57-07, LA-
57-09, LA-57-10, LA-70-01 e LA-70-03). As sementes foram extradas com macerao
manual das infrutescncias em bandejas de plstico e posteriormente peneiradas em peneira
de malha fina. Para separao das impurezas foi usado um soprador de semente at completa
remoo de sementes secas e restos de infrutescncias.

5.2.3. Produo das mudas e sua multiplicao

Para a produo das mudas das prognies, as sementes foram escarificadas


mecanicamente com auxilio de uma lixa no lado oposto ao hilo. As sementes foram semeadas
a 0,5 cm em vasos de plantio com volume de 1 L usando substrato contendo terra preta + p-
de-coco + esterco bovino curtido na proporo 3:1:1. Estas mudas das prognies foram usadas
como matrizes para retirar estacas que foram usadas para produo das mudas para o ensaio
de competio.
Aps a semeadura, as plantas foram multiplicadas em vasos usando o mesmo
substrato.Para a produo das mudas foram utilizados estacas dos gentipos recombinantes e
prognies contendo de 3 a 4 entrens e realizado corte em bisel na base das estacas, aps o
preparo, foram transferidos para tubetes com 12 cm de comprimento e volume de 55 cm 3 com
o substrato contendo terra preta + esterco bovino curtido na proporo 3:1. As mudas
permaneceram em casas de vegetao com sistema de nebulizao e irrigao por 30 dias at
completo enraizamento e brotao das estacas.
41

5.2.4. Ensaio de competio

O preparo do solo foi realizado com arao e gradagem mecnica. A adubao de


fundao foi composta com uso de 5 L de esterco bovino curtido. As mudas foram
transplantadas no incio de junho/2016 e permaneceram em campo por 180 dias at a colheita.
O delineamento experimental utilizado foi em blocos casualizados com trs repeties.
Cada parcela experimental foi composta por quatro plantas em espaamento 0,8 m x 0,8 m.
Foi utilizado como bordadura o gentipo LA-03. Foi realizado adubao de cobertura com 1
L de estercoacrescido de 15 g de NPK com formulao 6-24-12 por planta aps 60 dias do
transplantio para campo. Capinas foram realizados sempre que necessrio.

5.2.5. Variveis avaliadas

A avaliao das variveis morfolgicas ocorreu aos 120 dias aps o transplantio das
mudas para o campo. Para a avaliao, as plantas estavam em plena florao. Foram avaliadas
as variveis:
-Altura de planta: As plantas foram medidas da regio do colo at o maior ramo de cada
planta com auxilio de uma fita mtrica. Os resultados foram expressos em centmetros (cm);
-rea Foliar: foram coletadas 10 folhas da quarta e quinta regio nodal e foimedida a rea da
folha em um medidor de rea foliar LI-COR modelo LI-3100c (cm2);
-Habito de crescimento: O habito de crescimento foi medido usando uma escala de notas de
1 a 5 [1: Plantas eretas; nenhum galho toca no solo; 2: Plantas com 25% dos galhos tocando o
solo; 3: Plantas com 50% dos galhos tocando o solo; 4: Plantas com 75% dos galhos tocando
o solo; 5: Plantas com 100% dos galhos tocando o solo] (Camlo et al., 2011)
A avaliao das variveis agronmicas ocorreu aos 180 dias aps o plantio, em
dezembro de 2016. As plantas foram cortadas a 30 cm do solo e posteriormente foi realizada a
desfolha do material separando as folhas e inflorescncias do caule. Aps a colheita foram
analisadas as seguintes variveis:
-Massa seca de folhas e inflorescncias: As folhas e inflorescncias foram secas em estufa
de circulao de ar forado por 40C1 por cinco dias e pesado em balana para obteno da
massa seca de folhas. O resultado foi expresso em gramas (g planta-1).
-Concentrao de leo essencial: Para o processo de extrao do leo essencial, as folhas e
inflorescncias secas foram pesadas em balana e 50g foram transferidos para bales com
volume de 3000 mL e foi acrescido 2000 mL de gua destilada. O leo essencial foi extrado
por hidrodestilao em aparelho tipo Clevenger modificado por aproximadamente 120 min
aps o incio da ebulio, para completa extrao do leo essencial.Para calcular o teor (%)
obtido de cada amostra, utilizou-se a seguinte equao:

= ( ) 100

Onde, v= volume de leo essencial extrado da amostra; m= massa seca de folhas da amostra.

-Composio qumica dos leos essenciais:

Para anlise qumica, 151mg do leo essencial foram pesados em balana de preciso
TECNAL BG 400 em frascos do tipo Vials e diludos com 1 mL de acetato de etila em trs
repeties. As triplicatas foram encaminhadas para o departamento de qumica da UFS para
injeo em cromatografia gasosa.
As anlises foram realizadas utilizando um CG/EM/DIC (GCMSQP2010 Ultra,
Shimadzu Corporation, Kyoto, Japo) equipado com um amostrador com injeo automtica
AOC-20i (Shimadzu). As separaes foram realizadas em uma coluna capilar de slica
fundida Rtx-5MS Restek (5%-difenil-95%-dimetilpolisiloxano) 30 m x 0,25 mm de
dimetro interno, 0,25 m de espessura de filme, em um fluxo constante de Hlio 5.0 com
42

taxa de 1,0 mL min-1. A temperatura de injeo foi de 280 C, 1,0 L (10 mg mL-1) de
amostra foi injetado, com uma razo de split de 1:30. A programao de temperatura do forno
iniciou-se a partir de 50 C (isoterma durante 1,5 min), com um aumento de 4 C min-1, at
200 C, em seguida, a 10 C min-1 at 300 C, permanecendo por 5 min. Para o CG/EM as
molculas foram ionizadas por ionizao por eltrons com energia de 70 eV. Os fragmentos
analisados por um sistema quadrupolar programado para filtrar fragmentos/ons com m/z na
ordem de 40 a 500 Da e detectados por um multiplicador de eltrons. O processamento de
dados foi realizado com software CGMS Postrun Analysis (Labsolutions- Shimadzu).O
processo de ionizao para o CG/DIC foi realizado pela chama proveniente dos gases
hidrognio 5.0 (30 mL min-1) e ar sinttico (300 mL min-1). As espcies coletadas e a corrente
eltrica gerada foram amplificadas e processadas. O processamento de dados foi realizado
utilizando o software CG Postrun Analysis (Labsolutions- Shimadzu).
A identificao dos componentes foi realizada com base na comparao do ndice de
reteno (Vandendool e Kratz, 1963) para uma srie homloga de n-alcanos obtidas por co-
injeo de amostras de petrleo com uma mistura de hidrocarbonetos lineares, bem como
atravs da comparao com os bancos de dados e NIST21 e NIST107 da biblioteca CG / EM
e espectros de massa publicados (Adams, 2007).

5.2.6. Atividade formicida

Para o bioensaio de toxicidade do leo essencial das prognies de L. alba e seus


parentais, utilizou-se formigas da espcie Acromyrmex balzani, que foram coletadas no
campus So Cristvo da Universidade Federal de Sergipe(latitude 1054S e longitude
3704 W). Os insetos foram coletados momentos antes da implantao dos experimentos no
Laboratrio de Entomologia Agrcola da UFS.
A toxicidade do leo essencial das prognies e seus parentais foram avaliados pela via
de exposio por fumigao (Oliveira et al., 2017). Para determinar a eficincia dos materiais,
foram realizados testes preliminarespara determinao das concentraes que foram usadas no
ensaio de competio das prognies.
No bioensaio de fumigao o delineamento experimental foi inteiramente casualizado
com seis repeties. Foramtestadas as concentraes 0,01 L.L-1 e 0,3 L.L-1dos leos
essenciais dos trs parentais (LA-56, LA-57 e LA-70) e 11 prognies do primeiro ciclo de
seleo recorrente (LA-56-01, LA-56-03, LA-56-04, LA-57-01, LA-57-02, LA-57-03, LA-
57-07, LA-57-09, LA-57-10, LA-70-01 e LA-70-03) de L. alba. Foramutilizados frascos de
vidro (250 mL) e seu fundo revestido com papel filtro ( de 5,5 cm) umedecido com 0,5 L
de gua destilada para manter a umidade para as formigas dentro do frasco. Cada frasco
recebeu sete soldados de A.balzani. No tratamento controle aplicou-se 1 L.L-1 do solvente
acetona no papel filtro (1 cm2) de cada frasco.
Os leos essenciais de cada gentipo foram diludos em solvente acetona (Panreac,
UV-IR, HPLC-GPC PAI-ACS, 99,9% de pureza). Foi aplicada uma alquota da 1 L.L-1 da
soluo estoque utilizando uma microseringa Hamilton (10 L) para cada concentrao dos
tratamentos testados em um papel filtro (1 cm2) suspenso a 4cm do fundo do recipiente, por
um fio de nylon no centro da tampa de plstico para evitar contato direto do inseto com o
papel tratado. Os recipientes foram lacrados com as tampas plsticas e vedados com papel
filme de PVC e posteriormente colocados em incubadora BOD a 251C, umidade relativa
>70% e com fotoperodo de 12h de luz. Os insetos foram avaliados 48h aps a implantao
do bioensaio, com a contagem de indivduos vivos e mortos em cada frasco.
Para a comparao dos gentipos quanto a mortalidade das formigas usou-se os dados
da concentrao de 0,3 L.L-1de leo essencial por volumede ar.
43

5.2.7. Anlise estatstica

Os dados foram submetidos anlise de varincia e as mdias foram agrupadas pelo


teste de Scott-Knott (p 005) de probabilidade utilizando o software estatstico Sisvar.
A mortalidade foi corrigida em relao ao controle, utilizando-se a formula de Abbott
(1925). Os dados foram expressos em grfico de barras, utilizando o Statistical Analysis
System (SAS) e comparados usando o erro padro da mdia.

5.3. Resultados

A partir do desdobramento dos tratamentos na anlise de varincia observaram-se


diferenas significativas (p 0,05) entre parentais e prognies para as variveis alturas de
planta, rea foliar, massa seca de folhas e inflorescncias, concentrao de leo essencial,
mirceno, limoneno, carvona e muurolone. Entre os parentais as variveis reas foliar, massa
seca de folhas e inflorescncias, mirceno, limoneno, carvona e
muuroloneapresentaramsignificativas diferenas. Entre as prognies apenas a varivel altura
no diferiu estatisticamente (Tabela 5.1).
Os maiores valores para altura de planta foram obtidos pelos gentipos LA-56 e LA-
56-03 (Tabela 5.1). Quando comparado apenas entre as prognies LA-56-03 (139,63 cm),
LA-57-01 (123,22 cm), LA-57-03 (150,30 cm), LA-57-09 (121,97 cm) e LA-70-01 (135,27
cm) diferiram estatisticamente das demais prognies (Tabela 5.2).
O hbito de crescimento indicado por escala de notas que variam entre 1 a 5, sendo
ereto plantas que obtm nota 1 e prostrado para notas 5. As prognies que apresentam portes
eretos foram o LA-56-01, LA-56-04 e LA-57-07, LA-57-09 e LA-57-10 que diferiram
estatisticamente das demais prognies e parentais avaliados. Os demais gentipos
apresentaram notas que variaram de 2,33 a 3,33 (Tabela 5.2).
A rea foliar demonstrou grande variao entre os genitores e prognies testadas. A
maior rea foliar foi observada para a prognie LA-70-03 (12,94 cm2) que foi superior
estatisticamente ao genitor LA-70 (3,43 cm2) (Tabela 5.2), embora se percebaque o genitor
LA-70, obteve valor de altura de planta intermedirio quando comparada aos demais
genitores. Para o genitor LA-56 (4,09 cm2), que dentre os genitores atingiu maior altura de
plantas, gerou a prognie LA-56-03 que foi superior em rea foliar (5,64 cm2). J o genitor
LA-57 (2,92 cm2), apesar de apresentar menores valores quando comparados com os demais
genitores, expressou maiores mdias do que todas as suas prognies, LA-57-01 (3,11 cm2),
LA-57-02 (3,73 cm2), LA-57-03 (6,09 cm2), LA-57-07 (7,73 cm2), LA-57-09 (3,76 cm2) e
LA-57-10 (7,30 cm2).
A maior produo de massa seca por planta foi observada para o parental LA-56
(57,45 g planta-1), tanto em relao as prognies LA-56-01 e LA-56-03 quando comparado
aos demais tratamentos (Tabela 5.2). Para o LA-57 (42,57 g planta-1), no foi observado
diferena entre as suas prognies LA-57-01 (45,18 g planta-1) e LA-57-03 (48,15 g planta-1),
para as suas demais prognies houve decrscimo na massa seca de planta. As prognies LA-
70-01 (28,72 g planta-1) e LA-70-03 (28,73 g planta-1) foram estatisticamente semelhantes ao
LA-70 (31,87 g planta-1). Entre as prognies, o LA-56-03 (50,42 g planta-1), LA51-01 (45,18
g planta-1) e LA-57-03 (48,15 g planta-1) tiveram as maiores mdias para essa varivel(Tabela
5.2).
Para a concentrao de leo essencial, a maior produo de leo foi observada para a
prognie LA-57-10 (2,844 %) (Tabela 5.2), embora no tenha diferido estatisticamente dos
parentais LA-57 (2,644 %) e LA-70 (2,733 %). As prognies expressaram menores valores
para a concetrao de leo essencialcom exceo das prognies LA-56-03 e a j citada LA-
57-10, que no diferiram de seus genitores.
Foi observado diferena significativa (p 0,05) para os principais compostos qumicos
identificados na anlise qumica do leo essencial das prognies e parentais de L. alba. Os
44

compostos variaram significativamente entre as prognies e parentais, entre parentais e entre


as prognies no primeiro ciclo de seleo recorrente.
O composto mirceno teve variao de 0,98 a 12,95% no leo essencial e foi
encontrado em maior proporo na prognie LA-57-09 (12,95%) que foi superior ao parental
LA-57 (0,68%) e as demais prognies avaliadas. Entre os parentais, o maior teor para esse
composto foi observado no gentipo LA-70 (6,40%) em relao ao LA-56 (1,69%) e LA-57
(0,68%) (Tabela 5.2).
O limoneno apresentou-se como o segundo composto em maior proporo no leo
essencial (0,83-34,21%) em todos os materiais genticos testados no experimento, a prognie
LA-57-02 (34,21%) teve o composto em maior proporo no leo essencial. Para LA-56
(28,92%), nenhuma das prognies obteve mdia superior ou igual ao seu parental. A prognie
LA-57-02 (34,21%) e LA-57-10 (30,23%) foram superiores estatisticamente ao gentipo LA-
57 (29,37%). O LA-70-03 (29,87%) foi estatisticamente superior ao gentipo parental LA-70
(22,78%) (Tabela 5.2).
O composto carvonafoi superior para o gentipo LA-57 (59,02%), que obteve mdia
estatisticamente diferente a todas as prognies e gentipos testados. A prognie LA-56-04
(57,78%) teve mdia igual ao parental LA-56 (58,00%) com base no teste de mdia de Scott-
knott. As prognies oriundas dos parentais LA-57 e LA-70 foram inferiores estatisticamente,
apresentando menor produo de carvona quando comparados com os gentipos genitores
(Tabela 5.2). Entre as prognies, o maior teor foi encontrado para o LA-56-04 (57,78%) em
relao as demais prognies. Os menores teores foram observados nas prognies LA-57-01
(17,71%) e LA-57-02 (17,27%), j a prognie LA-57-09 no apresentou carvona na sua
composio (Tabela 5.2).
O muurolone obteve teor variando entre 0,34 a 4,73% no leo essencial. O maior teor
foi observado para a prognie LA-57-01 (4,73%) em relao a todos os materiais testados no
experimento. O menor teor do composto foi observado para o LA-70-03 (0,65%) (Tabela 5.2).
O leo essencial de L. alba apresentou toxicidade para formigas da espcie A.
balzaninas concentraes testadas de 0,01 e 0,3 L L-1 em 48h. Foi observada diferena
significativa entre os gentipos parentais e prognies para a concentrao 0,03 L L-1
concentrao avaliada no ensaio de toxicidade.
A mortalidade foi superior para a concentrao de 0,3 em todas as prognies e
gentipos testados em relao concentrao de 0,01 L L-1, as prognies LA-56-04 e LA-
70-03 apresentaram a maior mortalidade dentre todas as prognies e gentipos avaliados
(Figura 5.1). Todas as prognies LA-56-01, LA-56-03 e LA-56-04 apresentaram toxicidade
superior ao genitor LA-56 formigas A. balzani. Apenas a prognie LA-57-02 destacou-se em
toxicidade em relao ao parental LA-57, mas no diferiu estatisticamente da prognie LA-
57-07. O genitor LA-70 foi inferior em toxicidade em relao s prognies LA-70-01 e,
sobretudo, a LA-70-03, que se destacou pela maior mortalidade para formigas nessa
concentrao (Tabela 5.2 e Figura 5.1).

5.4. Discusso

A seleo de plantas com maior mdia de altura e rea foliar possibilta o aumento de
matria seca de folhas importantes para a extrao do leo essencial, alm disso, plantas com
hbito de crescimento eretos facilitam a introduo de colheitas mecanizadas no cultivo
agrcola em campo. A superioridade de prognies para caractersticas morfolgicas segundo
Rodrigues et al. (2013) decorrente da alta variabilidade encontrada na gerao S1 em plantas
alogamas que favorece a seleo de indivduos em programas de melhoramento de espcies
vegetais.
Zhao et al. (2016) observaram resultados semelhantes ao presente trabalho na seleo
recorrente da espcie Brassica napucom baixa heterose observada para caractersticas
agronmicas.
45

Bakoum et al. (2010) verificaram resultado distinto do presente trabalhona seleo


recorrente da espcieElaeis guineensisque resultou em prognies com altura de plantas (39,4-
53,3 cm) estatisticamente semelhantes as linhagens (48,78-52,7 cm). Gupta et al. (2016) no
observou diferena entre as prognies e linhagens no programa de melhoramento deMentha
spicata.
Camlo et al. (2011), em processo de caracterizao morfologica de gentipos de L.
alba do Banco Ativo de Germoplasma da UFS, observaram que os gentipos LA-56, LA-57 e
LA-70 comportaram-se como plantas prostradas diferindo dos resultados obtidos no presente
trabalho, esse contraste entre prognies e parentais pode estar associado a menor altura de
planta apresentada pelas prognies LA-56-01, LA-57-07 e LA57-10com variao entre 79,95
a 88,33 cm e possuindo porte ereto das plantas.
A rea foliar foi superior para a maioria das prognies estudas. O aumento do limbo
foliar importante para o aumento no nmero de tricomas glandulares responsveis pela
biossntese e armazenamento de leo essencial na planta (Tekeli et al., 2015). Jezler et al.
(2013) observaram gentipos de L. alba com rea foliar superior ao encontrado no presente
trabalho com variao de 3,73 a 12,94 cm2.
A produo de matria seca nas plantas foi superior para as prognies em estudo e
pode estar associada ao menor tamanho das plantas. Resultados semelhantes foram
encontrados por Kulkarni et al. (2002) queobservaram que progniesdeCymbopogon
flexuosusoriundos de cinco ciclo de seleo recorrente proporcionaram maiores teores de
matria seca em plantas que possuam menor tamanho de planta em relao as linhagens
estudadas.
A concentrao de leo essencial na planta no foi influenciada pelo melhoramento,
embora, o tamanho das folhas influencie o nmero de tricomas foliares, o primeiro ciclo de
seleo recorrente no aumentou a produo de leo essencial na maioria das prognies
avaliadas (Kainer et al., 2015). Resultados semelhantes foram observados por Ibrahim e
Khalid (2013) na seleo recorrente de Cymbopogon nardus com ausncia de superioridade
das prognies (2,00-2,05%) em relao s cultivares comerciais (2,46-2,66%). Preciado-Ortiz
et al. (2013) observou baixo ganho gentico para teor de leo nas sementes no primeiro ciclo
de seleo recorrente em Zea mays.
Segundo Pandovan et al. (2017),a concetrao de leo essencial influenciado pela
interao gentipo x ambiente, que pode resultar em altas ou baixas produes associadas a
constituio gentica das geraes S1, como observado no primeiro trabalho.
O baixo teor da carvona nas prognies pode estar associado ao aumento da biossntese
de limoneno e mirceno na planta. Segundo Souza et al. (2010) a carvona produzido na
planta a partir de molculas precursoras de limoneno que so convertidos por via enzimtica
em enantiomeros do composto. Pandel et al. (2012), avaliando gentipos de L. alba,
observou que o teor da carvona em 60,5%, possui forte correlao negativa com limoneno
(14,3%). O maior teor do limoneno no leo essncia sugere menor sntese de carvona nas
prognies avaliadas. Esse fenmeno observado para as prognies LA-57-02 (17,27%), LA-
57-03 (48,65%) e LA-57-10 (25,71%) para a produo da carvona. Algumas espcies
possuem carvona em teores inferiores aos encontrado no presentetrabalho como Lithrae
ternifolia(27,43-34,7%) e limoneno (21,6%) (Maestri et al., 2014) e Carum carvi (34,8-39,6%
de carvona) (Toxopeus e Lubberts, 1994), uma vez que, essas espcies apresentam potencial
para uso como alternativa no controle de pragas agrcolas.
A baixa produo de carvona nas prognies pode estar associada a menor produo de
enzimas responsveis pela converso de molculas de limoneno em carvona. Bouwmeester et
al. (1998) verificou que a carvona biossintetizada em frutos de Carum carvicom ao das
enzimas (+)-limonene-6-hydroxylase e (+)-trans-carveol dehydrogenase transformando
limoneno e trans-carveol, no entanto, baixas produo das enzimas concentram molculas de
limoneno e trans-carveol nos frutos.
46

A avaliao formicida com a espcie A. balzani identificou maior toxicidade para as


prognies que possuem em sua composio compostos carvona (48,65-57,78%) e limoneno
(10,63-23,41%) e baixos teores de mirceno na composio (2,79-10,63%). Oliveira et al.
(2017), avaliando a toxicidade do leo essencial de Aristolochia trilobata em formigas
cortadeiras, observaramaltas concentraes de mortalidade para a CL50 (Concentrao letal
para matar 50% da populao do inseto) igual a 3,76 L L-1. Feitosa-Alcantara et al. (2017)
observou CL50 de 1,82L L-1 avaliando o leo essencial da espcie Hyptis pectinata. Esses
resultados diferem do presente trabalho, principalmente para a prognie LA-70-03 que
apresentou baixa concentrao de 0,3 L L-1 de soluo; apresentou mortalidade de 38,1% da
populao de inseto.
A combinao de constituintes qumicos no leo essencial das prognies potencializa
o efeito formicidafrente aos parentais que concentram maior teor de carvona. O sinergismo da
carvona, associado a molculas qumicas, foi comprovada por Katiti et al. (2017), que
observaram que a adio de limoneno (CL50 207,5 mg/mL) e anethol (CL50 0,070 mg/mL) a
carvona reduza concentrao de mortalidade sobre Haemonchus contortuspara 0,013 mg/mL.
O primeiro ciclo foi eficiente para a incorporao de algumas caractersticas
morfolgicas importantes, como o cultivo mecanizado da futura cultivar, com plantas de porte
baixo e crescimento ereto. No entanto, no proporcionou o aumento das mdias teor de leo
essencial e carvona na planta, apesar de se obter prognies com boa atividade biolgica. O
baixo teor de carvona pode estar relacionado biossntese de compostos precursores em
maior proporo que impedem o aumento do composto de interesse.
Os resultados mostraram que a seleo recorrente eficiente no aumento da atividade
formicida do leo essencial de L. alba, pois, proporciona o aumento da variabilidade de
constituintes qumicos no leo essencial e efeito sinrgico sobre formigas A. balzani.
sugerido um novo ciclo de seleo recorrente com as prognies LA-56-03 e LA-57-10 que
apresentaram alta atividade formicida, hbito de crescimento ereto e concetrao de leo
essencial semelhante a seus parentais.

5.5. Referncias Bibliogrficas

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Zhao X, Li B, Zhang K, Hu K, Yi B, Wen J, Ma C, Shen J, Fu T, Tu J (2016) Breeding


signature of combining ability improvement revealed by a genomic variation map from
recurrent selection population in Brassica napus. Scientific Reports 6: 1-10.
50
Tabela 5.1. Resumo da anlise de varincia para variveis morfoagronmicas, composio qumica e atividade formicida de gentipos do
primeiro ciclo de seleo recorrente de Lippia alba.
QM
FV GL altura hbito de crescimento rea foliar massa seca (g planta) OE (%) mirceno limoneno carvona muurolone mortalidade corrigida
Bloco 2 - - - - - - - - - -
(Tratamento) 13 24,0381* 2,0751* 24,0381* 484,8944* 1,7794* 39,1914* 236,2015* 1163,4362* 5,0230* 391,7082*
Parentais vs Prognies 1 33,9000* 2,0267ns 33,9000* 1180,6037* 7,2528* 13,1376* 182,7349* 2424,6649* 0,6296* 77,8792ns
Entre Parentais 2 1,0253ns 0,7778ns 1,0253* 495,0260* 0,0553ns 27,9041* 40,7075* 1,4256* 4,1456* 5,6684ns
Entre Prognies 10 27,6545* 2,339* 27,6545* 413,2972* 1,5768* 44,0542* 280,6470* 1269,7154* 5,6378* 500,2991*
Resduo 26 0,0153 0,8498 0,0153 27,8745* 0,0263 0,0074 0,0614 0,0788 0,0008 43,8231
Total 41
CV(%) 2,38 39,11 2,38 10,82 10,09 2,21 1,1 0,52 1,4 29,49
*Significativo a 5% pelo teste F
ns
No significativo a 5% pelo teste F

Tabela 5.2.Valores mdios para altura de planta (AL), hbito de crescimento (HC), rea foliar (AF), massa seca de folha e inflorescncias (MSF),
concentrao de leo essencial (OE), mortalidade corrigida (%)sobre Acromyrmex balzanicom 0,3 L.L-1 de leo essencial, e o teor dosprincipais
compostos qumicos nos leos essenciais das progniese dos parentais de Lippia albaavaliados.
Mdia de MC Constituintes qumicos (%)
Gentipos AL (cm) HC AF (cm2) MSF (g planta-1) OE (%) 0,3 L.L-1 mirceno limoneno carvona muurulone
LA-56-01 80,57 b 1,67 b 2,18 k 16,97 d 0,933 d 28,6 b 0,98 j 26,49 f 54,22 d 3,65 c
LA-56-03 139,63 a 3,33 a 5,64 f 50,42 b 2,222 b 31,0 a 9,04 b 10,63 k 54,28 d 2,52 f
LA-56-04 105,80 b 1,00 b 3,34 i 19,96 d 0,822 e 38,1 a 0,43 l 23,41 g 57,78 b 3,25 e
LA-57-01 123,22 a 3,33 a 3,11 j 45,18 b 1,489 c 9,50 c 0,91 j 17,54 j 17,71 h 4,733 a
LA-57-02 107,00 b 2,33 a 3,73 h 27,9 c 1,378 c 28,6 a 5,31 e 34,21 a 17,27 h 1,74 j
LA-57-03 150,30 a 3,00 a 6,09 e 48,15 b 1,533 c 0,00 c 3,90 f 27,6 e 48,65 f 1,01 k
LA-57-07 79,95 b 1,00 b 7,73 b 18,95 d 1,089 d 21,4 b 2,52 h 20,28 i 55,71 c 2,40 g
LA-57-09 121,97 a 1,67 b 3,76 h 30,04 c 0,666 e 4,80 c 12,95 a 0,83 l 0,00 i 0,34 m
LA-57-10 88,33 b 1,67 b 7,3 c 26,48 c 2,844 a 26,2 a 5,80 d 30,23 b 25,71 g 2,04 i
LA-70-01 135,27 a 3,00 a 6,5 d 28,72 c 2,200 b 28,6 a 2,54 h 20,25 i 54,49 d 3,51 d
LA-70-03 100,30 b 2,67 a 12,94 a 28,73 c 2,444 b 38,1 a 2,79 g 29,87 b 51,73 e 0,65 l
LA-56 164,13 a 3,33 a 4,09 g 57,45 a 2,466 b 21,4 b 1,69 i 28,92 d 58,00 b 2,19 h
LA-57 117,22 a 2,33 a 2,92 j 42,57 b 2,644 a 19,0 b 0,68 k 29,37 c 59,02 a 1,77 j
LA-70 136,18 a 2,67 a 3,43 i 31,87 c 2,733 a 19,0 b 6,40 c 22,78 h 57,71 b 3,98 b
CV (%) 24,03 39,11 2,38 15,61 8,93 28,31 2,16 1,08 0,64 0,20
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferenciam pelo teste de Scott-Knott (p 0.05)
51

50
0,01 uL/L
0,3 uL/L

40
Mortalidade (%)

30

20

10

0
M 01 06 M 01 03 04 M 01 02 03 07 09 10 M 01 03
le
tro
on

LA-03 LA-56 LA-57 LA-70


C

Acessos de L. alba
Figura 5.1. Efeito da mortalidade de A. balzani para as concentraes 0.01 e 0.3 L L-1 para
parentais e prognies do primeiro ciclo de seleo recorrente de de Lippia alba (mdiaEPM).
52

6 CONSIDERAES FINAIS

A idade da planta tem influncia na concetrao de leo essencial na planta. A


exposio da espcie por longos perodos favorece alteraes genticas no genoma da planta
que poporciona aumento do nmero de tricomas glandulares responveis pela reduo de
compostos majoritrios e biossntese de novos compostos importantes para a defesa a fatores
biticos e abiticos.
O ciclo de seleo recorrente mostrou-se importante no aumento da atividade
formicida para as prognies do primeiro ciclo frente aos seus parentais. Alm disso, alteraes
na rea foliar proporcionam aumento da matria seca que importante na extrao de leo na
planta.
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ANEXOS
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Tabela 1A. Resumo da anlise de varinciado experimento avaliando a influncia da idade (um e 10 anos) de 18 acessos de Lippia alba no teor e
composio qumica de leo essencial.
QM
(E)- germacreno xido de
FV GL -pineno Sabineno 6-methyl-5-hepten-2-one mirceno p-cimeno 1,8-cineol (E)--ocimeno -terpineno linalol neral geranial cariofileno D elemol cariofileno OE (%)
Blocos 1 0,00 0,00 0,00 0,00 0,01 0,00 0,00 0,00 2,00 0,01 3,37 0,00 0,00 0,00 0,41 0,16
Gentipo 17 6,66* 3,72ns 3,80* 86,78* 48,21* 22,33* 1,28* 0,99* 3682,17* 521,82* 996,12 4,01* 0,23* 9,76* 13,52* 1,19ns
Erro 1 1 0,00 0,02 0,00 0,00 0,10 0,00 0,00 0,00 1,69 0,07 1,43 0,01 0,00 0,00 0,02 0,32
Ano 1 3,84* 4,78* 5,27* 507,32* 48,94* 3,32* 0,19* 14,31* 0,98ns 86,59* 1085,39 83,44* 2,66* 31,71* 56,44* 13,29*
Gentipo x Ano 17 92,05* 3,59* 3,75* 87,59* 38,11* 68,28* 0,82* 0,99* 9,89* 16,71* 72,36 4,55* 0,23* 9,76* 12,69* 0,54*
Erro 2 34 0,00 0,00 0,00 0,13 0,05 0,21 0,00 0,00 1,85 0,2 0,72 0,00 0,00 0,00 0,11 0,01
CV1 (%) 1,70 19,68 2,09 2,25 12,17 6,46 6,20 11,10 9,40 1,04 3,45 6,91 4,90 4,62 7,23 32,51
CV2 (%) 2,88 12,09 2,09 10,65 9,02 9,36 9,77 6,17 9,84 1,75 2,45 3,69 9,28 5,36 15,55 7,33
*Significativo a 5% pelo teste F
ns No significativo a 5% pelo teste F