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Analyse chromatographique avec un chromatographe en phase liquide haute performance (HPLC) quip

de plusieurs dtecteurs (large ventail des possibilits danalyse et souplesse dapplication)

Rfrences : HPLC Ultimate 3000 de Dionex (ECP CEBB)


Principe :
HPLC est une technique danalyse qui consiste sparer les espces contenues dans un chantillon par partage
entre une phase mobile (liquide) et une phase stationnaire (liquide ou solide).
Chaque solut inject sur la colonne est soumis deux effets antagonistes :
un effet d'entranement par la phase mobile dans laquelle il est soluble
un effet de rtention par la phase stationnaire avec laquelle il interagit
La sparation et le temps de migration des composs sparer dpendent des diffrences d'affinits de ces
composs pour les phases mobile et stationnaire.
Objectifs : Analyse quantitative et qualitative des sucres C5-C6, acides organiques, polyphnols

Photographie de la configuration standard de Le systme HPLC Ultimate est quip de 4 dtecteurs :


HPLC Ultimate 3000
Spectromtre de masse MSQ Plus ; dtecteur de masse
quadriple
Dtecteur barrette de diodes UHPLC+ DAD-3000 (1024
diodes)- 8 canaux d'acquisition simultans, 100 Hz - Gamme
spectrale de 190 800 nm
Dtecteur d'indice de rfraction RI-101
Dtecteur de fluorescence FLD 3100 - Gamme 200-65

Lutilisation en srie ou en parallle des diffrents


dtecteurs permet dobtenir un maximum dinformations sur
la structure et les concentrations des espces analyses.
Par exemple, le spectromtre de masse branch aprs le
dtecteur barrette de diode permet de confirmer les poids
molculaires des espces spares.

Deux exemples dapplications :

A
b
s
o
r
b
a
n
c
e
Temps dlution

Sparation de luracile et de 9 alkylphnones Sparation de sucres issus de mot de fermentation en 22


en 10 secondes, avec dtection en barrette de minutes, avec dtection dindice de rfraction (RUI - Unit
diodes 190800 nm 100 Hz (enregistrement dIndice de Rfraction). Lanalyse a t ralise en utilisant
tridimensionnel : absorbance-temps-longueur un dbit de 0,5 ml/min, une contre-pression de 100 bars et
donde). Lanalyse a t ralise en utilisant un une temprature de four de 35C sur une colonne Aminex
dbit de 3,7 ml/min, une contre-pression de HPX 87H
730 bars et une temprature de four de 100 C
sur une colonne C18 30 2,1 mm avec une
taille de particules de 1,8 m