MARCO TEORICO

ENZIMAS

QUE SON?
Las enzimas son biomolculas de naturaleza proteica que aceleran la velocidad
de reaccin hasta alcanzar un equilibrio. Constituyen el tipo de protenas ms
numeroso y especializado y, actan como catalizadores de reacciones
qumicas especficas en los seres vivos o sistemas biolgicos. Muchas de las
enzimas no trabajan solas, se organizan en secuencias, tambin llamadas
rutas metablicas, y muchas de ellas tienen la capacidad de regular su
actividad enzimtica

ESTRUCTURA
Las enzimas son protenas globulares formadas por una o ms cadenas
polipeptdicas plegadas, creando una hondonada donde encaja el sustrato y
tiene lugar la reaccin. Esta zona de la enzima se denomina centro activo y
slo unos pocos aminocidos estn implicados en l. La proximidad de los
aminocidos en el centro activo est determinada por la estructura terciaria,
aunque tambin pueden ocupar posiciones adyacentes en la estructura
primaria. En una enzima con estructura cuaternaria, los aminocidos del centro
activo pueden encontrarse incluso en diferentes cadenas. La configuracin
tridimensional del centro activo es complementaria a la del sustrato y posee
una distribucin complementaria de sus cargas sobre la superficie de unin. Es
decir, si una regin del sustrato tiene una carga negativa, la zona
correspondiente del centro activo tendr una carga positiva y viceversa. En
1894, Emil Fischer, un qumico alemn, compar la especificidad de la enzima
con una llave y su cerradura. Pero, estudios posteriores sugirieron que el
centro activo es ms flexible que el ojo de una cerradura: la unin entre la
enzima y el sustrato altera la conformacin de la enzima, ajustando el centro
activo al sustrato. Se piensa que este cambio inducido puede crear cierta
tensin en las molculas reactivas y facilitar de esta manera la reaccin.
MECANISMO DE ACCIN DE LAS ENZIMAS. CATLISIS ENZIMTICA.

ENERGA DE ACTIVACIN
En toda reaccin qumica se produce la transformacin de unas molculas
iniciales denominadas sustratos en las reacciones bioqumicas, en unas
sustancias finales o productos. Esta transformacin necesita, en la mayora de
las reacciones, un aporte inicial de energa que aumenta la energa cintica de
las molculas y stas, reaccionan permitiendo que un mayor nmero de ellas,
choquen con suficiente fuerza para superar su repulsin mutua y debilitar los
enlaces qumicos que poseen. La energa que deben poseer las molculas
para iniciar la reaccin se conoce con el nombre de energa de activacin.

EL CATALIZADOR
Un catalizador disminuye la energa de activacin necesaria para una reaccin,
porque forma una asociacin pasajera con las molculas que reaccionan. Esta
asociacin aproxima a las molculas que reaccionan y, favorece tanto la
ruptura de enlaces existentes, como la formacin de otros nuevos. Cuando
existe un catalizador en la energa de activacin, esta reaccin puede suceder
rpidamente sin o con poca adicin de energa. El catalizador no sufre ninguna
alteracin permanente en el proceso y puede volver a utilizarse. Gracias a las
enzimas, las clulas son capaces de desarrollar reacciones qumicas a gran
velocidad y a temperaturas relativamente bajas.

REACCIONES ENZIMTICAS
En estas reacciones, la enzima se une al sustrato para formar el complejo
enzima-sustrato. Despus tiene lugar la transformacin del sustrato en
producto, liberndose el producto y quedando libre la enzima para una nueva
unin con el sustrato. Las enzimas, como los dems catalizadores, aceleran la
reaccin sin alterar la posicin de equilibrio.

LA CONSTANTE DE EQUILIBRIO
La constante de equilibrio se produce en las reacciones enzimticas y siempre
tiene un valor constante fijado por la relacin entre las velocidades en uno u
otro sentido, independientemente de que el catalizador est o no presente. La
catlisis hace disminuir considerablemente el tiempo necesario para alcanzar el
equilibrio
REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

RUTAS METABLICAS

En los seres vivos, las maneras para regular la actividad enzimtica son
diversas. Existen rutas metablicas que estn formadas por grupos de enzimas
que actan conjuntamente en el metabolismo celular. Las enzimas trabajan en
serie, formando vas enzimticas, de forma que el producto de una enzima
constituye el sustrato de la siguiente. Todas las rutas metablicas pueden ser
controladas por enzimas reguladoras. stas varan su actividad dependiendo
de ciertas seales y normalmente la primera enzima de la ruta es la reguladora.
sta se llama el punto de compromiso de la va. La actividad de estas enzimas
se modula por diferentes molculas seal, que generalmente son metabolitos
de poco peso molecular o cofactores.
Las vas enzimticas suponen ventajas para las clulas. Por una parte, los
grupos de enzimas que constituyen una va comn pueden segregarse dentro
de la clula e incluso, si estn ubicadas en las membranas, pueden estar
alineadas en secuencia. Otra ventaja es la escasa acumulacin de productos
intermedios. Cada producto tiende a ser usado en la siguiente reaccin de la
va enzimtica.

COFACTORES
Muchas enzimas necesitan para una correcta actividad enzimtica la adicin de
cofactores, que son determinados iones minerales (magnesio, zinc, cobre,
etc.). En algunos casos, los enlaces entre los iones y los radicales de ciertos
aminocidos ayudan a mantener la estructura terciaria o a estabilizar la
estructura cuaternaria de la protena.

COENZIMAS
Las molculas orgnicas que actan como cofactores se denominan
coenzimas. stas se unen de manera temporal o permanente a la enzima en
una zona bastante prxima al centro activo. Cuando la enzima es activada por
una coenzima, el conjunto se denomina holoenzima, y cuando la inactiva,
apoenzima
DINMICA Y FUNCIN
La dinmica interna de las enzimas est relacionada con sus mecanismos de
catlisis. La dinmica interna se define como el movimiento de diferentes
partes de la estructura de la enzima, desde residuos individuales
de aminocidos, hasta grupos de aminocidos o incluso un dominio
proteico entero. Estos movimientos se producen a diferentes escalas de tiempo
que van desde femtosegundos hasta segundos. Casi cualquier residuo de la
estructura de la enzima puede contribuir en el proceso de catlisis por medio
de movimientos dinmicos. Los movimientos de las protenas son vitales en
muchas enzimas. Dichos movimientos podrn ser ms o menos importantes
segn si los cambios conformacionales se producen por vibraciones pequeas
y rpidas o grandes y lentas, y dicha importancia depender del tipo de
reaccin que lleve a cabo la enzima. Sin embargo, aunque estos movimientos
son importantes en el proceso de unin y liberacin de sustratos y productos,
an no est claro si estos movimientos ayudan a acelerar los pasos qumicos
de las reacciones enzimticas. Estos nuevos avances tambin tienen
implicaciones en la comprensin de los efectos alostricos y en el desarrollo de
nuevos frmacos.

MODULACION ALOSTERICA
Los sitios alostricos son zonas de la enzima con capacidad de reconocer y
unir determinadas molculas en la clula. Las uniones a las que dan lugar son
dbiles y no covalentes, y generan un cambio en la conformacin estructural de
la enzima que repercute en el sitio activo, afectando as a la velocidad de
reaccin. Las interacciones alostricas pueden tanto inhibir como activar
enzimas, y son una forma muy comn de controlar las enzimas en las clulas

TERMODINAMICA
Al igual que sucede con todos los catalizadores, las enzimas no alteran el
equilibrio qumico de la reaccin. Generalmente, en presencia de una enzima,
la reaccin avanza en la misma direccin en la que lo hara en ausencia de
enzima, solo que ms rpido. Sin embargo, en ausencia de enzima, podra
producirse una reaccin espontnea que generase un producto diferente
debido a que, en esas condiciones, dicho producto diferente se forma ms
rpidamente.
Adems, las enzimas pueden acoplar dos o ms reacciones, por lo que una
reaccin termodinmicamente favorable puede ser utilizada para favorecer otra
reaccin termodinmicamente desfavorable. Por ejemplo,
la hidrlisis de ATP suele ser utilizada para favorecer otras reacciones
qumicas.
Las enzimas catalizan reacciones qumicas tanto en un sentido como en el
contrario. Nunca alteran el equilibrio, sino nicamente la velocidad a la que es
alcanzado. Por ejemplo, la anhidrasa carbnica cataliza su reaccin en una u
otra direccin dependiendo de la concentracin de los reactantes, como se
puede ver a continuacin:

(en tejidos; alta concentracin de CO2)

(en pulmones; baja concentracin de CO2)

Si el equilibrio se ve muy desplazado en un sentido de la reaccin, es decir, se

convierte en una reaccin muy exergnica, la reaccin se hace efectivamente
irreversible. Bajo estas condiciones, la enzima nicamente catalizar la
reaccin en la direccin permitida desde un punto de vista termodinmico.

INHIBICION
Los inhibidores son molculas que regulan la actividad enzimtica, inhibiendo
su actividad. A grandes rasgos, pueden clasificarse
en reversibles e irreversibles. Las irreversibles se unen covalentemente a la
enzima sin posibilidad de revertir la modificacin, siendo tiles en farmacologa.
Algunos de los frmacos que actan de este modo son
la eflornitina, la penicilina y la aspirina.
Las reversibles se unen de forma reversible a la enzima, pudiendo clasificarse
a su vez, segn la forma en que intervienen en la reaccin,
en competitivas, acompetitivas y mixtas. Habitualmente, por su amplia
presencia en multitud de procesos, se habla tambin de inhibicin no
competitiva, que en realidad no es ms que una variante de la ya mencionada
inhibicin mixta. Sin embargo, por sus caractersticas se suele presentar como
opuesta a la competitiva, con la que es comparada frecuentemente.

En la inhibicin competitiva, el sustrato y el inhibidor no se pueden unir a

la misma enzima al mismo tiempo, como se muestra en la figura de la
derecha. Esto generalmente ocurre cuando el inhibidor tiene afinidad por
el sitio activo de una enzima en el cual tambin se une el sustrato; el
sustrato y el inhibidor compiten para el acceso al sitio activo de la enzima.
Por ejemplo, el metotrexato es un inhibidor competitivo de la
enzima dihidrofolato reductasa, que cataliza la reduccin de dihidrofolato a
tetrahidrofolato. La similitud entre las estructuras del cido flico y el
metotrexato permite que se establezca una inhibicin de tipo competitivo.
Este tipo de inhibicin se puede superar con concentraciones
suficientemente altas del sustrato, es decir, dejando fuera de competicin al
inhibidor. En la inhibicin competitiva la velocidad mxima de la reaccin no
vara, pero se necesitan concentraciones ms elevadas de sustrato para
alcanzar una determinada velocidad, incrementndose as la Km aparente.
 En la inhibicin acompetitiva el inhibidor no puede unirse a la enzima
libre, sino nicamente al complejo enzima-sustrato (ES). Una vez formado
el complejo con el inhibidor (EIS) la enzima queda inactiva. Este tipo de
inhibicin es poco comn, pero puede darse en enzimas multimticas.
La inhibicin no competitiva es una forma de inhibicin mixta donde la
unin del inhibidor con la enzima reduce su actividad pero no afecta la
unin con el sustrato. Como resultado, el grado de inhibicin depende
solamente de la concentracin de inhibidor, independientemente de la
concentracin de sustrato, con lo que vara el valor de la Vmax aparente. Sin
embargo, como el sustrato an puede unirse a la enzima, el valor de Km no
vara.
En la inhibicin mixta, el inhibidor se puede unir a la enzima al mismo
tiempo que el sustrato. Sin embargo, la unin del inhibidor afecta la unin
del sustrato, y viceversa. Este tipo de inhibicin se puede reducir, pero no
superar al aumentar las concentraciones del sustrato. Aunque es posible
que los inhibidores de tipo mixto se unan en el sitio activo, este tipo de
inhibicin resulta generalmente de un efecto alostrico donde el inhibidor se
une a otro sitio que no es el sitio activo de la enzima. La unin del inhibidor
con el sitio alostrico cambia la conformacin (es decir, la estructura
terciaria) de la enzima de modo que la afinidad del sustrato por el sitio
activo se reduce.

FUNCION BIOLOGICA
Las enzimas presentan una amplia variedad de funciones en los organismos
vivos. Son indispensables en la transduccin de seales y en procesos de
regulacin, normalmente por medio de quinasas y fosfatasas. Tambin son
capaces de producir movimiento, como es el caso de
la miosina al hidrolizar ATP para generar la contraccin muscular o el
movimiento de vesculas por medio del citoesqueleto. Otro tipo de ATPasas en
la membrana celular son las bombas de iones implicadas en procesos
de transporte activo. Adems, las enzimas tambin estn implicadas en
funciones mucho ms exticas, como la produccin de luz por la luciferasa en
las lucirnagas. Los virus tambin pueden contener enzimas implicadas en la
infeccin celular, como es el caso de la integrasa del virus HIV y de
la transcriptasa inversa, o en la liberacin viral, como la neuraminidasa del virus
de la gripe.
Una importante funcin de las enzimas es la que presentan en el sistema
digestivo de los animales. Enzimas tales como las amilasas y las proteasas son
capaces de degradar molculas grandes (almidn o protenas,
respectivamente) en otras ms pequeas, de forma que puedan ser absorbidas
en el intestino. Las molculas de almidn, por ejemplo, que son demasiado
grandes para ser absorbidas, son degradadas por diversas enzimas a
molculas ms pequeas como la maltosa, y finalmente a glucosa, la cual s
puede ser absorbida a travs de las clulas del intestino. Diferentes enzimas
digestivas son capaces de degradar diferentes tipos de alimentos.
Los rumiantes que tienen una dieta herbvora, poseen en sus intestinos una
serie de microorganismos que producen otra enzima, la celulasa, capaz de
degradar la celulosa presente en la pared celular de las plantas.

Varias enzimas pueden actuar conjuntamente en un orden especfico, creando

as una ruta metablica. En una ruta metablica, una enzima toma como
sustrato el producto de otra enzima. Tras la reaccin cataltica, el producto se
transfiere a la siguiente enzima y as sucesivamente. En ocasiones, existe ms
de una enzima capaz de catalizar la misma reaccin en paralelo, lo que permite
establecer una regulacin ms sofisticada: por ejemplo, en el caso en que una
enzima presenta una actividad constitutiva pero con una baja constante de
actividad y una segunda enzima cuya actividad es inducible, pero presenta una
mayor constante de actividad.

Las enzimas determinan los pasos que siguen estas rutas metablicas. Sin las
enzimas, el metabolismo no se producira a travs de los mismos pasos, ni
sera lo suficientemente rpido para atender las necesidades de la clula. De
hecho, una ruta metablica como la gluclisis no podra existir sin enzimas. La
glucosa, por ejemplo, puede reaccionar directamente con el ATP de forma que
quede fosforilada en uno o ms carbonos. En ausencia de enzimas, esta
reaccin se producira tan lentamente que sera insignificante. Sin embargo, si
se aade la enzima hexoquinasa que fosforila el carbono 6 de la glucosa y se
mide la concentracin de la mezcla en un breve espacio de tiempo se podr
encontrar nicamente glucosa-6-fosfato a niveles significativos. Por tanto, las
redes de rutas metablicas dentro de la clula dependen del conjunto de
enzimas funcionales que presenten.

IMPLICACIONES EN ENFERMEDADES
Debido a que es necesario un fuerte control de la actividad enzimtica para la
homeostasis, cualquier fallo en el funcionamiento (mutacin, incremento o
reduccin de la expresin o delecin) de una nica enzima crtica puede
conducir al desarrollo de una enfermedad gentica. La importancia de las
enzimas se pone de manifiesto en el hecho de que una enfermedad letal puede
ser causada por el mal funcionamiento de un nico tipo de enzima de todos los
miles de tipos que existen en nuestro cuerpo.

Un ejemplo de esto es el tipo ms comn de fenilcetonuria. En esta

enfermedad gentica se produce una mutacin de un nico aminocido en la
fenilalanina hidroxilasa, una enzima que cataliza la primera reaccin de la ruta
de degradacin de la fenilalanina y de compuestos relacionados. Al ser esta
enzima inactiva, se acumulan una serie de productos que terminan dando lugar
a la aparicin de retardo mental si no se recibe tratamiento.

Otro ejemplo es cuando se produce una mutacin en los genes de la lnea

germinal que codifican las enzimas implicadas en la reparacin del ADN. En
este caso, al no repararse adecuadamente el ADN de las clulas, se acumulan
mutaciones que suelen derivar en el desarrollo de diversos tipos de cncer
hereditarios, como la xerodermia pigmentosa.

APLICACIONES INDUSTRIALES
Las enzimas son utilizadas en la industria qumica, y en otros tipos de industria,
en donde se requiere el uso de catalizadores muy especializados. Sin
embargo, las enzimas estn limitadas tanto por el nmero de reacciones que
pueden llevar a cabo como por su ausencia de estabilidad en solventes
orgnicos y altas temperaturas. Por ello, la ingeniera de protenas se ha
convertido en un rea de investigacin muy activa donde se intentan crear
enzimas con propiedades nuevas, bien mediante diseo racional, bien
mediante evolucin in vitro. Estos esfuerzos han comenzado a tener algunos
xitos, obtenindose algunas enzimas que catalizan reacciones no existentes
en la naturaleza