RESUMEN

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros

componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. Puesto que la diversidad metablica de los microorganismos es
enorme, la variedad de medios de cultivo es tambin muy grande. La mayora de los
medios de cultivo se comercializan en forma de liofilizados que es preciso rehidratar.
La preparacin de un medio de cultivo se reduce en general a pesar la cantidad de medio
y re disolverla en agua destilada (libre de inhibidores del crecimiento) siguiendo las
instrucciones del fabricante.

En esta prctica de laboratorio experimental se logr obtener crecimiento de

microorganismos, principalmente utilizando el Agar Mac Conkey, que es un
polisacrido extrado de algas marinas, intensamente ramificado y entrelazado, de
composicin compleja, mediante la tcnica de medio de cultivo slido,

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 INTRODUCCION

Un medio de cultivo est constituido por una mezcla de agua y sustancias que en
conjunto proporcionan los requerimientos nutricionales para el desarrollo de los
microorganismos. La composicin de los medios de cultivo vara en funcin del
grupo microbiano que se pretende estudiar, y la preparacin del medio depende de
la complejidad qumica (composicin), el estado fsico y otras condiciones
requeridas (pH, concentracin, etc.).

EI crecimiento de los microorganismos va ligado a la presencia de agua.

Las sustancias disueltas en el agua, a partir de las cuales los microorganismos
forman su material celular y obtienen energa, son los nutrientes.
Los requerimientos de los distintos microorganismos en cuanto a la composicin
del medio de cultivo y a las dems condiciones ambientales son muy variables. Por
ello se han descrito muchas recetas de la composicin de los medios de cultivo para
los microorganismos. Bsicamente la disolucin ha de cumplir la siguiente
condicin mnima: han de estar presentes todos los elementos implicados en la
constitucin del material celular, y en forma de compuestos utilizables. (Hans G.
Shlegel, 1997).

El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de

Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Un medio de cultivo
debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar
exento de todo microorganismo contaminante.

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 PRACTICA 2

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

I. OBJETIVOS

Preparar adecuadamente medios de cultivo a partir de sus ingredientes,

distribuir y esterilizar.

Proceder a sembrar con microorganismos.

II. FUNDAMENTO TEORICO

Medios de cultivo y condiciones de crecimiento

Una gran cantidad de microorganismos sin requerimientos, como por ejemplo

muchos pseudomonas del suelo y del agua, pero tambin Escherichia coli, se
desarrollan perfectamente en un caldo de cultivo. Muchos microorganismos
necesitan adems uno u otro de los oligoelementos, vitaminas o suplementos
antes indicados. Si el medio de cultivo est compuesto por sustancias qumicas
definidas, se habla de un medio de cultivo sinttico o definido. Se pretende
conseguir definir para cada microorganismo los nutrientes mnimos para
establecer un medio mnimo, que contenga nicamente los componentes
necesarios para el crecimiento. Las especies ms exigentes requieren un gran
nmero de complementos. Para Leuconostoc mesenteroides se ha desarrollado
un medio sinttico que contiene ms de 40 componentes.

Medios de cultivo complejos. Para muchos microorganismos exigentes no se

conocen aun suficientemente bien los requerimientos nutritivos. Se cultivan en
disoluciones que contienen extracto de levadura, peptona o extracto de carne.
Para algunos grupos de organismos son tambin corrientes: mosto (extracto de
malta), infusin de heno, jugo de ciruelas, juga de zanahoria, leche de coco, y
para hongos coprofilos incluso extracto de excremento de caballo. Debido a los
costos, a los medios de cultivo se les aade en lugar de sustancias puras otras

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complejas, como lactosuero, melazas, agua de maz o extracto de soja, que son
productos de desecho baratos.

Medios de cultivo slidos. Para obtener medios de cultivo solidos se aade a los
caldos de cultivo unas sustancias solidificantes, que dan a las disoluciones
acuosas una consistencia gelatinosa. La gelatina ya solo se utiliza en casos
aislados, porque licua ya a 26-30C y muchos microorganismos son capaces de
licuar la gelatina. Un solidificante casi ideal es el descubierto en 1883 por
HESSE, un colaborador de R. KOCH, al introducir el agar en la tcnica
bacteriolgica. Es un polisacrido extrado de algas marinas, intensamente
ramificado y entrelazado, de composicin compleja. Se aade a las disoluciones
acuosas en una concentracin de 15-20 gil. EI agar funde a 100C, pero se
mantiene liquido al enfriarse hasta 15C de temperatura. Es atacado tan solo por
pocas bacterias. Cuando se necesitan medios sin componentes orgnicos se
utiliza el gel de slice como solidificante.

Concentracin de iones hidrogeno. Los iones H+ y OH- son los iones ms

mviles de todos; por ella, pequeas modificaciones en su concentracin tienen
grandes consecuencias. EI establecimiento de un pH inicial optimo y el
mantenimiento del pH durante el crecimiento es por ello de gran importancia.

Nutricin Definicin
La nutricin es el proceso por el que los seres vivos toman las sustancias
qumicas que necesitan para crecer, del medio donde habitan. Dichas sustancias
se denominan nutrientes, y se requieren para dos objetivos:
Energticos: Los microorganismos requieren energa del exterior.
Biosintticos: formar sustancias que constituyen la clula (Ej.: protenas)
Los nutrientes pueden clasificarse en:
Universales: Son aquellos nutrientes que todos, o bien la mayora de los
microorganismos, requieren para su crecimiento. Los ms importantes son: agua,
dixido de carbono (CO2), fosfatos, sales minerales.
Particulares: Se trata de elementos que pueden ser cubiertos de modo muy
distinto, dependiendo de las capacidades biosintticas del microorganismo que

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 se considere. Concretamente consideraremos los elementos N y S (que requieren
todos los seres vivos).
Factores de crecimiento: Son molculas orgnicas especficas que algunas
bacterias necesitan, en muy pequea cantidad, para crecer. Salvo excepciones no
tienen funcin plstica, ni sirven como fuente de energa. Suelen ser coenzimas
o sus precursores, vitaminas, que determinadas bacterias no pueden fabricar por
s mismas, al carecer de parte (o toda) de una ruta biosinttica. Consideraremos
como ejemplos, oligoelementos, vitaminas y minerales.

Clasificacin de medios de cultivo:

Segn su estado fsico:
Lquidos
Usualmente se denominan caldos ya que contienen los nutrientes disueltos en
agua. Permiten obtener suspensiones con un elevado nmero de
microorganismos. Ej. Caldo nutritivo.

Slidos
Se pueden preparar a partir de medios lquidos a los cuales se les aaden agentes
solidificantes como agar, gelatina o slica gel. Se utilizan con frecuencia en el
aislamiento y mantenimiento de los microorganismos en el laboratorio. Ej. Agar
nutritivo. El gelificante ms usado es el agar-agar, extrado de las algas rojas (ej.:
Gelidium), del cual existen versiones ms o menos purificadas. Las ms puras
que se enriquecen con el polisacrido agarosa para evitar la introduccin de
sustancias contaminantes inadvertidas que falseen las interpretaciones sobre
el comportamiento nutricional del microorganismo; son las que se emplean para
los medios definidos. El agar presenta la gran ventaja de que una vez gelificado,
no funde hasta cerca de los 100 C, lo que permite su uso para la inmensa
mayora de los microorganismos, que son mesfilos.
Segn la naturaleza de sus constituyentes:
Medios naturales, complejos o indefinidos
Estn constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal y
usualmente se complementan con el aadido de minerales y otras sustancias. No
se conocen todos los componentes del medio de cultivo, ni las cantidades exactas
en que estn presentes. Este tipo de medio es el ideal para cuando simplemente

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se pretende obtener un buen crecimiento microbiolgico, ya que su confeccin
es fcil y rpida (Basta pesar una cierta cantidad del extracto desecado,
suministrado por casas comerciales, disolverlo en agua y esterilizar en
autoclave). Ej. Extracto de carne, extracto de levaduras.
Medios sintticos
Se preparan a partir de ingredientes qumicamente puros y por lo tanto se puede
conocer exactamente su composicin cualitativa y cuantitativa. Por su costo slo
se emplean en procedimientos especiales.
Medios mezcla de los anteriores
Denominado medio semisinttico, llevan algunas sustancias qumicas cuya
naturaleza y cantidad se conoce, junto con sustancias de naturaleza y
composicin indefinida.
Segn sus propsitos de uso:
Medios de enriquecimiento
Se llama enriquecimiento a cualquier cultivo en medio lquido que resulte en un
incremento en el nmero de un tipo dado de microorganismo en relacin con el
nmero de otros tipos de microorganismos que puedan estar en el inculo. Un
medio de enriquecimiento puede contener sustancias que favorezcan el
crecimiento del microorganismo que nos interesa o que inhiban el crecimiento
de los otros tipos de microorganismos presentes. La selectividad de un cultivo
de enriquecimiento no est determinada nicamente por la composicin qumica
del medio usado, sino que en un medio dado puede ser variada
significativamente modificando otros factores tales como: temperatura, pH,
fuerza inica, iluminacin, aireacin, etc.
Ej. Caldo tetrationato utilizado para el enriquecimiento de las especies del
gnero Salmonella proveniente de muestras de heces, orina, agua o alimentos.
Medios selectivos
Son bsicamente iguales a los de enriquecimiento, se diferencian por ser medios
slidos y estn diseados para el aislamiento de microorganismos especficos.

Medios diferenciales
No contienen sustancias inhibidoras, es decir, permiten el crecimiento de
muchos tipos de microorganismos, pero s contienen indicadores de productos
derivados de la actividad metablica de los microorganismos sobre algunos de

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 los componentes del medio. Se utilizan para la identificacin de los
microorganismos. Ej.: Agar base rojo fenol utilizado para detectar fermentacin
de carbohidratos.
Medios selectivos diferenciales
A veces se combinan en un mismo medio las caractersticas de ser selectivo y
diferencial. Por ejemplo, el agar Mac Conkey, este medio contiene sales biliares
y cristal violeta, que inhiben el crecimiento de las bacterias Gram positivas. Pero
como tambin contiene lactosa y un indicador de pH permite distinguir entre las
bacterias fermentadoras de lactosa y las que no lo son.
Ejemplos de medios de cultivo
Agua peptonada
Medio usado como diluyente y para enriquecimiento bacteriano a partir de
alimentos y otros materiales de inters sanitario.
APC Agar plate count
Medio de cultivo recomendado para el recuento de bacterias aerbicas en aguas,
aguas residuales, productos lcteos y otros alimentos. Tambin es recomendado
como medio general para determinar poblaciones microbianas.
Baird Parker Medio Base
Medio de alta especificidad diagnstica, selectivo y diferencial para el
aislamiento y recuento de estafilococos coagulasa positiva en alimentos y otros
materiales de importancia sanitaria.
EMB (eosina-azul de metileno)
Este medio (tambin denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento
selectivo de bacilos Gram negativos de rpido desarrollo y escasas exigencias
nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia
Enterobacteriaceae.
YGC (extracto de levadura, glucosa, cloramfenicol)
Medio selectivo recomendado para el recuento genrico de mohos y levaduras.
Caldo Mac Conkey
Medio de cultivo selectivo, utilizado para la investigacin presuntiva de
microorganismos coliformes en aguas, alimentos y otros materiales de
importancia sanitaria.

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 Medios de cultivo preparados
listos para usar
En la actualidad los
profesionales tienen la
posibilidad de contar con
medios de cultivos preparados
en placas, tubos, frascos listos
para usar. Al elegir esta opcin,
ahorran tiempo pudindolo
emplear en tareas ms inherentes a su rol en el laboratorio.
Existen tambin las Placas Petrifilm de 3M, que son una herramienta segura y
sencilla para todas aquellas personas que deban realizar anlisis microbiolgicos
en alimentos en particular.
Debido a su muy ingeniosa conformacin de gran similitud al mtodo
tradicional, del que extrae sus ventajas (medios de cultivo ms que probados) y
elimina el inconveniente de trabajar a temperatura (tornando no viables bacterias
injuriadas), es que poseen una enorme versatilidad para realizar ensayos en sitios
aislados, en situaciones que requieran gran delicadeza en el tratamiento trmico
de muestras con bacterias necesitadas de recuperacin y varias aplicaciones no
habituales en las cuales han mostrado un excelente
desempeo. Cuando se requiere la realizacin de mltiples lecturas o para evitar
posibles variaciones entre distintos tcnicos del laboratorio, 3M ofrece la
posibilidad de utilizar un lector de placas, que proporciona una lectura y registro
consistentes y automatizados de los resultados de las Placas 3M Petrifilm
(Recuento de Aerobios, Coliformes, E. coli/Coliformes y Selectivo E. coli) en
tan solo 4 segundos.

III. MATERIALES Y METODOS

Materiales
Matraces de 250 ml
Pipetas de 10 ml
Esptulas, mechero
Tubos de ensayo
Papel craf, Asa de col

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 Materiales de la practica 1:

Material de vidrio previamente esterilizado (tubos y placas Petri) para la

distribucin del medio de cultivo.

Equipos:

Autoclave
Balanza analtica
Flujo laminar vertical
Estufa

IV. PROCEDIMIENTO
a. Se pes la cantidad exacta de cada una de las muestras e ingredientes. Se
cerr inmediatamente el frasco de medio de cultivo.
b. Se prepar el medio de cultivo de acuerdo a las indicaciones del fabricante.
c. Se distribuy el medio de cultivo de acuerdo a las indicaciones sealadas, al
calentar los medios de cultivo con agar-agar es muy importante procurar agitar
repetidamente el medio para evitar que el agar-agar se pegue en el fondo del
matraz y que se queme. Asimismo, evitar que hierva para evitar su derrame.
d. Se identific el lote de medio de cultivo preparado y se indic su nombre y
distribucin.
e. Se esterilizo de inmediato el medio de cultivo.

Tabla 1: Parmetros de esterilizacin.

Tiempo Temperatura
15 min 121 C

Fuente: Elaboracin propia, 2017.

f. Luego se procedi con el sembrado de microorganismos:
Muestra de jugo de pia en muestra D.
Muestra de yogurt en muestra D.
Muestra expuesta al medio ambiente, medio ambiente de un bao cercano.
g. Seguidamente se coloc las muestras en las placas Petri (ya esterilizadas) en
el flujo laminar vertical, en la cual se gelifico.
h. Una vez gelificadas lo suficiente, se llev a la estufa para incubar a 37C
durante 24 horas.

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V. RESULTADOS Y DISCUSIONES

Se logr experimentar medios de cultivo solidos se aade a los caldos de cultivo

unas sustancias solidificantes, que dan a las disoluciones acuosas una
consistencia gelatinosa. La gelatina ya solo se
utiliza en casos aislados, porque licua ya a 26-
30C y muchos microorganismos son capaces de
licuar la gelatina. Es un polisacrido extrado de
algas marinas, intensamente ramificado y
entrelazado, de composicin compleja.
Hubo mayor notoriedad en la placa Petri con
Agar Mac Conkey, que contiene sales biliares y cristal violeta que inhiben el
desarrollo de bacterias Gram positivas y de algunas Gram negativas exigentes.
La lactosa es la nica fuente de carbono, en el caso de la muestra de sembro con
yogurt derivado lcteo, se observ la presencia de microorganismos referente a
los lcteos. El indicador es el rojo neutro. Las bacterias fermentadoras de lactosa
formas colonias de diferentes tonos de rojo. Los fermentadores fuertes de lactosa
pueden provocar la precipitacin de las sales biliares por la gran cantidad de
cidos formados, lo que se observa fcilmente en el medio por la aparicin de
zonas opacas alrededor de las colonias. Las bacterias que no fermentan la lactosa
forman colonias incoloras o transparentes.

VI. CONCLUSIONES

Se observ crecimiento bacteriano en la muestra de yogurt con el Agar Mac

Conkey.
Entre los principales factores que influyen sobre la velocidad de crecimiento
debe considerarse la calidad y cantidad de los nutrientes disueltos en el medio
de cultivo. Cualitativamente estos nutrientes deben proveer todos los elementos
qumicos que necesitan las bacterias (carbono, nitrgeno, oxgeno, hidrgeno,
azufre, iones inorgnicos, etc.) para biosintetizar sus componentes, y la energa
necesaria para llevar a cabo sus funciones.
Se logr aprender sobre las tcnicas de preparacin de diferentes medios de
cultivo y sus aplicaciones.

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VII. BIBLIOGRAFIA

Esterilizacin y Preparacin de Medios de Cultivo. Consultado en

junio de 2017 de:

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Protocolo2_3_19088.pdf

Preparacin de medios de cultivo. (2009). Consultado en junio de 2017

de:

http://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnol
ogia/practicol.pdf

Hans G. Schlegel. Microbiologa general. (1997). Consultado en junio

de 2017 de:

https://oncouasd.files.wordpress.com/2015/06/microbiologiageneral.pdf

Medios de cultivo. Consultado en junio de 2017 de:

http://asignatura.us.es/mbclinica/docs/recursos/12/medios-de-cultivo.pdf

Microbiologa general. Consultado en junio de 2017 de:

http://www.unavarra.es/genmic/microgral/manual%20practicas%20micagr
al.pdf

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