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Xuan Liu, Surui Wu, Jiao Xu, Chun Suin, Jianhe Wei. (2017).

Application of CRISPR/Cas9 in plant


biology. Acta Pharmaceutica Sinica B, 7(3), 292302. 07/10/2017, De ELSEVIER Base de datos.

CONTEXTO: CRISPR / Cas es considerada una tecnologa revolucionaria dentro de la biologa


vegetal. En el artculo, se introduce el mecanismo del tipo II CRISPR/Cas llamado CRISPR/Cas9,
actualizando los avances recientes en diversas aplicaciones en plantas, y discutiendo las
perspectivas futuras para proporcionar un argumento para su uso en el estudio de plantas
medicinales.

OBJETIVO DEL TRABAJO: Determinar las posibles aplicaciones de CRISPR/Cas9 para plantas
medicinales dentro del campo de la biologa vegetal.

PRINCIPALES ASPECTOS METODOLOGICOS:


Enzyme genes
Construyeron diferentes vectores binarios que llevan diversas combinaciones de Cas9 y sgRNA,
investigaron la expresin transitoria de estos en Arabidopsis, tabaco, arroz y sorgo
por Agrobacterium o transfeccion mediada por PEG (poly-ethylene glycol), y confirmaron que
CRISPR / Cas9 tiene la capacidad de editar genes diana en estos cuatro plantas.
HDR
Es una va de reparacin muy deseable para DSB (double-strand break), conduce a la entrada de
genes precisos o el reemplazo de genes. Slo unos pocos estudios han utilizado con xito CRISPR /
Cas9 mediante esta metodologa.
El sistema CRISPR / Cas9 mediado por HDR fue utilizado para crear modificaciones precisas y
hereditarias en tomate, maz y soja.

Diagrama esquemtico de la edicin de CRISPR / Cas9 de los genes diana.

(A) Esbozo del sistema CRISPR / Cas9.


El sgRNA (negro y rojo) puede identificar el
gen diana, y luego los dos dominios de Cas9
(amarillo) escinden la secuencia diana.
(B) Dos formas en que DSB puede ser
reparado. NHEJ es imprecisa y siempre da
lugar a una mutacin knockout gentica.
Cuando una plantilla est presente, HDR
puede ser activado y los resultados en la
sustitucin de genes o knock-in.

PAM: protospacer adjacent motif. sgRNA:


single guide RNA. DSB: double-
strand break. NHEJ: nonhomologous end-
joining. HDR: homology-directed repair.

PRINCIPALES HALLAZGOS: Es posible aprovechar CRISPR / Cas9 para editar los genes diana en plantas
(que tengan genomas completamente secuenciados); y estudiar la sntesis de componentes eficaces
o componentes txicos para aumentar los componentes efectivos o reducir la toxicidad.
El uso de nuevas tecnologas como CRISPR / Cas9 puede promover la investigacin sobre vas
biosintticas y mecanismos reguladores de componentes eficaces, y una excelente seleccin de
germoplasma en plantas medicinales para un desarrollo rpido, que es una parte importante de la
actual botnica farmacutica.
Aunque el CRISPR / Cas9 puede aplicarse a la edicin del genoma de la planta, todava existen ciertos
desafos, como minimizar las tasas de inters, elucidar el mecanismo preciso para esta minimizacin
y cmo optimizar la funcin de Cas9. Se necesita un estudio adicional para mejorar la aplicacin
experimental de CRISPR / Cas9 para promover el desarrollo de sus habilidades bsicas y aplicadas en
el futuro.