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DETERMINACION DE HDL

INTRODUCCIN. Las Lipoproteinas son macromolculas que estructuralmente estn formadas


por una parte lipdica y una proteica, cuya funcin es empaquetar los lpidos insolubles en el
plasma proveniente de los alimentos (exgeno) y los sintetizados por nuestro organismo
(endgenos), que son transportarlos desde el intestino y el hgado a los tejidos perifricos y
viceversa; devolviendo el colesterol al hgado para su eliminacin del organismo en forma de
cidos biliares.

En la actualidad, las lipoprotenas se clasifican segn su densidad en :

Quilomicrones
VLDL, lipoproteinas de muy baja densidad
IDL; lipoproteinas de densidad intermedia
LDL; lipoproteinas de baja densidad
HDL, lipoproteinas de alta densidad.

Caractersticas: Las lipoprotenas son partculas esfricas, de un tamao menor que los hemates y
solo son visibles al microscopio electrnico. Estn formadas por una parte lipdica, y una proteica.
Dentro de la lipdica encontramos colesterol esterificado y no esterificado, triglicridos y fosfolipidos
y en la parte proteica a las apolipoproteinas. El colesterol en su forma esterificada se va a
encontrar en el centro o core de la lipoproteina, y el colesterol no esterificado lo vamos a encontrar
en una capa mas superficial junto a los fosfolpidos.

El colesterol es una molcula derivada de los esteroides, y es esencial para nuestro organismo,
esta presente en todas las clulas formando parte de las membranas celulares, en pequea
cantidad en el sistema nervioso central, recubriendo las vainas de mielina. Es precursor de
hormonas esteroides (progesterona, estrgeno, testosterona y corticoesteroides. En la piel y por
accin de los rayos solares se transforma en vitamina D. El ser humano dispone de colesterol
gracias a dos vas: la exgena directamente a travs de los alimentos y la endgena que sintetiza
el hgado (la mayor parte).

La determinacin de colesterol total incluye la medicin de las formas libres y esterificadas del
esteroide. En el suero o en el plasma 2/3 del colesterol total se encuentran como ster y el resto en
forma libre. Esto tiene cierta importancia analtica ya que en algunas reacciones qumicas, el ster
del colesterol desarrolla un color ms intenso que el colesterol libre, lo cual puede provocar un
sesgo positivo. Por esta razn es de suma importancia el conocimiento de la qumica de los
diversos mtodos para colesterol y el reconocimiento de sus limitaciones en la eleccin del mtodo
que se empleara en el laboratorio.

DETERMINACION. La incidencia de las enfermedades cardiacas coronarias tiene una correlacin


inversa con el nivel srico de HDL(High Density Lipoproten) colesterol, osea que a mayor
concentracin de HDL-Colesterol, menor es la incidencia de la enfermedad y viceversa.
Aparentemente la relacin esta dada por el hecho que las HDL transportan el colesterol desde los
tejidos perisfericos para ser metabolizados por el higado, evitando as la proliferacin y crecimiento
de lesiones ateromatosas.

Existe HDL aumentado en mujeres , nios y negros. En la enfermedad de Tangierexiste dficit de


sntesis de HDL, acumulando colesterol en los tejidos. El colesterol ligado a HDL es en promedio el
20 % del colesterol total en hombres y 22,5% en mujeres.

MTODO DE RUTINA: Mtodo Fosfotungstnico-Magnesio


Fundamento. Los quilomicrones, VLDL(Very Low Density Liporpoten) y LDL(Low Density
Liporpoten), son precipitados por adicin de acido fosfotungstinico e iones magnesio. Luego de la
centrifugacin , la fraccin HDL est contenida en el sobrenadante. La cuantificacin posterior se
realiza utilizando el reactivo para determinar colesterol.

Muestra: Suero, Plasma heparinizado o EDTA.

Linealidad: El test solo debe ser realizado en pacientes con niveles de trigliceridos menores a 400
mg/dl.

Consideraciones: Concentraciones elevadas de acido ascorbico (>2,5 mg/dl) puede arrojar


valores bajos. Valores de Hemoglobina sobre 100 mg/dl y de Bilirrubina sobre 10 mg/dl interfieren
en la metodologa.

Valores de referencia

HDL colesterol
Hombre Mujer
Pronstico favorable >55 mg/dl >65 mg/dl
Niveles aceptables 35-55 mg/dl 45-65 mg/dl
Indicador de riesgo <35 mg/dl <45 mg/dl
LDL colesterol
Deseable <130 mg/dl
Riego moderado Entre 130-159 mg/dl
Riesgo elevado >160 mg/dl

METODO DE REFERENCIA: POR PRECIPITACIN

En estos mtodos, se emplean polianiones (Heparina, Dextrnsulfato), Fosfotungstato,


Polietilenglicol, en presencia de actiones bivalentes para precipitar las liporpoteinas ms grandes,
menos densas; las HDL se determinan en el sobrenadante como colesterol-HDL. Dentro de estos
mtodos se encuentran la determinacin por medio de heparina-Cloruro de manganeso que es un
reactivo de uso frecuente.

OBJETIVO: Establecer la significancia clnica de la determinacin de HDL y su correlacin con


las dems determinaciones del perfil de lpidos.

MUESTRA CLNICA:
Suero obtenido de 12 horas de ayuno. El suero puede conservarse a temperatura ambiente
hasta 5 das. La refrigeracin puede alterar la estructura de las
lipoprotenas dando resultados bajos. Usar suero control comercial.

REACTIVOS:

Solucin precipitante (Reactivo


comercial): 0.5 Molar de MgCI 2
Fosfotungstato al 4%
Reactivo para la determinacin de colesterol enzimtico (reactivo comercial)

Solucin estndar de colesterol de 200 mg/dL

Nota: las soluciones se deben atemperar ante de su uso

MATERIAL POR EQUIPO:

Tubo de ensaye de 13x1 00 mmm


Tubos de centrifuga
Micropipeta 1 000 L
Micropipeta 200 L
Gradilla
Centrifuga

POR GRUPO
Bao Mara a 25 C
Espectrofotmetro

PROCEDIMIENTO

Pipetear en tubos de centrifuga


Suero 250 L
Solucin precipitante 25 L

A Mezclar y dejar en reposo a la temperatura ambiente durante 10 min. Centrifugar el


sobrenadante a 4000 rpm.

Separar el sobrenadante claro y emplearlo para la determinacin de colesterol con el mtodo


CHOD-PAD
Probl. St Blanco
Sobrenadante 100uL 20 ul
Sol. Reactiva 2.0 2.0 2.0

Mezclar e incubar los


tubos a 37 C durante 15 min o a 37 C por 12 min. Leer a 505 nm

LlNEARIDAD DEL METODO: La reaccin es lineal u sigue


La ley de Lambert-Beer hasta 1000 mg/dL

VALORES DE REFERENCIA:
Hombres(mg/dL) Mujeres(mq/dL)
Pronstico favorable > 55 > 65
Riesgo Normal 35 - 55 45 - 65
Alto riesgo < 35 < 45
RESULTADOS

DISCUSION DE RESULTADOS

BIBLIOGRAFIA

1. JOAN F. ZILVA, P.R. PANNALL. 1998. BIOQUIMICA CLNICA EN EL


DIAGNSTICO Y TRATAMIENTO. ED. SALVAT
2. LYNCH, RAPHAEL, MELLOR SPARE E INWOOD. 1994. METODOS DE
LABORATORIO. EDITORIAL INTERAMERICANA.

http://www.revistaciencias.com/publicaciones/EpllVuAyZuoRKbAyEj.php

http://escuela.med.puc.cl/paginas/cursos/tercero/integradotercero/apfisiopsist/nutricion/NutricionPD
F/Dislipidemias.pdf