Universidad Autnoma del Estado de Mxico

Facultad de Qumica
Qumico Farmacutico Bilogo
Bioqumica Bsica

Problemario 3.2. Inhibicin enzimtica

1. Se investig el efecto de un inhibidor I sobre la velocidad de una reaccin catalizada

enzimticamente sobre un solo sustrato, obtenindose los siguientes resultados

Concentracin de sustrato Concentracin del inhibidor (mmol L -1)

(mmol L -1) 0 0.5 1.0
Velocidad de reaccin (mol L -1 min-1)
0.05 0.33 0.20 0.14
0.10 0.50 0.33 0.25
0.20 0.67 0.50 0.40
0.40 0.80 0.67 0.57
0.50 0.83 0.71 0.63

A) De qu manera acta el inhibidor? B) Obtngase grficamente los valores para Vmx, y Km.

R: a) inhibidor competitivo; b) sin inhibidor: Vmax= 1(mol L -1 min-1), Km=0,1 (mmol L -1) Con
inhibidor: Km=0,2(mmol L -1) con 0.5(mmol L -1) de inhibidor y Km=0,3 (mmol L -1) con
1(mmol L-1).

2. A partir de los siguientes datos de una reaccin enzimtica, determinar de qu manera est
actuando el inhibidor. Determinar la Km y la velocidad mxima.

[S] mM g producto/h
(sin inhibidor) (6 mM inhibidor)
2 139 88
3 190 121
|4 210 149
10 340 257
15 380 313

R: Vmax= 1(mol L -1 min-1) y de la interseccin con el eje 1/[S]0 los valores de Km=0,1 (mmol
L -1) sin ihnhibidor, Km=0,2(mmol L -1) con 0.5(mmol L -1) de inhibidor y Km=0,3 (mmol L -
1
) con 1(mmol L-1).

3. Habindose conseguido aislar de Salmonella typhimurium una enzima (E) que cataliza la
reaccin AP, se decidi hacer un estudio estructural y cintico de dicha enzima:

[A] mM 1.00 0.55 0.25 0.20

V(mmol P/ min) 1.00 0.71 0.50 0.41
V (nmol P/min) con J 0.66 0.41 0.25 0.20

Donde J es un inhibidor de E cuya influencia como tal se quiere estudiar. [J] = 0,25mM.
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a) Calcular la Km de la enzima estudiada para A, y Vmax para la transformacin A--P en presencia
de E.
b) Qu tipo de inhibidor es J?
c) Cul sera el efecto sobre la Vmax de la enzima, un aumento de la concentracin de J?

R: a) Vmax = Vmax = 1.66 mmol P/min; b) KM = 0.5 mM; c) KM = 1.25 mM (con

inhibidor) (Inhibicin Competitiva)

4. La cintica de una enzima viene determinada como funcin de la concentracin de sustrato en

presencia y ausencia del inhibidor I.

[S], Mx10-5 0.3 0.5 1.0 3.0 9.0

V(mol/min) sin inhibidor 10.4 14.5 22.5 33.8 40.5
V(mol/min) con inhibidor 10-4 M 2.1 2.9 4.5 6.8 8.1

a) Calcular la Km y la Vmax en presencia y ausencia de inhibidor

b) Qu tipo de inhibidor es?

R: a) Vmax = 50 mol/min; b) Vmax = 9.5 mol/min; c) KM = 1.1x10-5 M; d) Inh. No

Competitiva

5. La hidroxiurea (U-OH) es un medicamento utilizado para el tratamiento de tumores. El uso de esta

droga est basado en que es un inhibidor reversible de la enzima ribonucletido reductasa (RRasa),
la que cataliza la sntesis de deoxirribonucletidos (dNDP) a partir de los ribonucletidos (NDP)
correspondientes segn la reaccin:
NDP + tiorred red dNDP + tiorred ox

As, la U-OH inhibe la proliferacin de clulas tomorales ya que disminuye considerablemente la

sntesis de los dNDP necesarios para la replicacin del DNA. Al estudiar la inhibicin reversible de
la U-OH sobre la RRasa se midi actividad enzimtica a con contraciones variables de NDP (el otro
sustrato se mantuvo fijo y saturante) en ausencia o presencia del inhibidor.

[NDP] (M) Velocidad (U/mg)

[U-OH] = 0 M [U-OH] = 4 M [U-OH] = 12 M
6.25 0.80 0.40 0.20
8.3 1.0 0.5 0.25
12.5 1.33 0.67 0.33
25.0 2.0 1.0 0.5

Esta tabla muestra los resultados obtenidos. En base a ellos:

a. Determine el tipo de inhibidor es U-OH, indicando el modelo de la reaccin de inhibicin.
b. Determine Km y Vmax para NDP de la RRasa y el Ki para U-OH.
c. Indique si los niveles de NDP en la clula tumoral afectan la efectividad de la U-OH como
medicamento. Justifique su respuesta.

R: a) no competitivo b) Km= 26 M, Vmx=4 U/mg, Ki= 3,9 M c) no afecta

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6. Una de las enzimas ms importantes de la va de biosntesis de cido flico (coenzima
indispensable en la sntesis de purinas y pirimidinas) es la dihidrofolato reductasa. Se purific
esta enzima a partir de leucocitos humanos obtenindose un extracto altamente purificado
(concentracin de protena: 0,1 mg/ml) al que se le midi la actividad
espectrofotomtricamente (Coeficiente de extincin: 6220 M-1cm-1) empleando distintos
volmenes del mismo (1 l, 2 l y 3 l) en una cubeta de reaccin de 1 ml y 1 cm de camino
ptico. Se obtuvieron las variaciones de absorbancia en el tiempo que se muestran a
continuacin:

Explique las formas de las curvas observadas en los distintos ensayos. Cul elige para
calcular la actividad de la enzima y por qu? Calcule la actividad especfica de la enzima
purificada.

El metotrexato se emplea en el tratamiento de nios con leucemia, ya que se trata de un

potente inhibidor de la enzima mencionada. Con el objeto de conocer cul es el mecanismo
de inhibicin se ha determinado la velocidad de reaccin de la enzima a distintas
concentraciones de sustrato en presencia de distintas concentraciones del inhibidor
obtenindose los resultados que se indican en la tabla.

Indique cul es el mecanismo de inhibicin, calcule el Ki para el metotrexato. Considera que el

nivel de dihidrofolto en la clula es capaz de alterar el efecto del metotrexato?
R: Competitivo; Ki= 0,25 nM
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7. Properties of an Enzyme of Prostaglandin Synthesis Prostaglandins are a class of eicosanoids,
fatty acid derivatives with a variety of extremely potent actions on vertebrate tissues. They are
responsible for producing fever and inflammation and its associated pain. Prostaglandins are
derived from the 20-carbon fatty acid arachidonic acid in a reaction catalyzed by the enzyme
prostaglandin endoperoxide synthase. This enzyme, a cyclooxygenase, uses oxygen to convert
arachidonic acid to PGG2, the immediate precursor of many different prostaglandins.

(a) The kinetic data given below are for the reaction catalyzed by prostaglandin endoperoxide
synthase.
1. Focusing here on the first two columns, determine the Vmax and Km of the enzyme.

(b) Ibuprofen is an inhibitor of prostaglandin endoperoxide synthase. By inhibiting the synthesis of

prostaglandins, ibuprofen reduces inflammation and pain. Using the data in the first and third columns
of the table, determine the type of inhibition that ibuprofen exerts on prostaglandin endoperoxide
synthase.

[Arachidonic acid] Rate of formation of PGG2 Rate of formation of PGG2 with

(mM) (mM/min) 10 mg/mL ibuprofen (mM/min)
0.5 23.5 16.67
1.0 32.2 25.25
1.5 36.9 30.49
2.5 41.8 37.04
3.5 44.0 38.91

R: a) Vmax = 51.5 mM/min, Km = 0.59 mM; b) competitive inhibitor