Ao del buen servicio al ciudadano

UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA

VEGA

ESPECIALIDAD: CIENCIAS FARMACEUTICAS Y BIOQUIMICA

TEMA:
PRACTICA #2: Determinacin del punto isoelctrico

CURSO:
Bioquimica II

PROFESORA:
Minaya, Angelica

INTEGRANTES:
Alvia Saldarriaga, Christhian Alexander
Apaza Ipanaqu, Manuel ngel
Camones Vargas, Flor Ana
Chavez Bazalar, Elena
Cordova Zorrilla, Eduardo Franco
Naveda Ysla, Daniela Nicole
Olortegui Quispe, Antonella Rosario
Ventura Mory, Dennis

CICLO:
VII 1-A (G1)
LIMA 2017
 INTRODUCCIN

El nombre protena fue propuesto en 1838 por el qumico sueco Jons Jakob
Berzelius para designar a las substancias complejas y ricas en nitrgeno que se
encuentran en las clulas de todas las plantas y animales.

Dentro de estas sustancias podemos resaltar a las enzimas de naturaleza proteica

que tienen la propiedad de acelerar las reacciones qumicas sin modificar la
constante de equilibrio del sistema.

Las protenas en general son imprescindibles para el correcto funcionamiento del

organismo. Generan y mantienen los tejidos de los distintos rganos del cuerpo:
huesos, msculos, corazn, tubo digestivo, respiratorio, glndulas endocrinas,
cerebro, nervios y piel.

Por lo que es importante el estudio de sus propiedades y como se ven afectadas

por distinto factores, como la polaridad del disolvente, la fuerza inica, el pH y la
temperatura.

Adicional a estos factores es fundamental conocer su punto isoelctrico (pI), pH

en el cual la protena presenta su mnima solubilidad y por tanto precipita. Debido
a la composicin en aminocidos de la protena, los radicales libres pueden existir
en tres formas dependiendo del pH del medio: catinicos, neutros y aninicos, y as
cada protena tendr un (pI) diferente.

El presente trabajo tuvo como objetivo determinar el punto isoelctrico de la

casena.
MARCO TEORICO:
Las enzimas son protenas que catalizan las reacciones qumicas en los seres
vivos. Catalizadores son sustancias que, sin consumirse en una reaccin,
aumentan su velocidad. Las enzimas no hacen factibles las reacciones imposibles
sino que, sencillamente, aceleran las que tendran lugar de manera espontnea.
Gracias a ellas tienen lugar, en condiciones fisiolgicas, reacciones que, sin
catalizador, requeriran condiciones extremas de presin, temperatura o de pH.

PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS CON RESPECTO AL PUNTO

ISOELCTRICO:

Las propiedades de las enzimas derivan del hecho de ser protenas y actuar como
catalizadores. Como protenas, poseen una conformacin natural ms estable y los
cambios en esta conformacin suelen ir asociados a cambios en la actividad
cataltica. Todas las enzimas poseen grupos qumicos ionizables (carboxilos -
COOH; amino - NH2; hidroxilo -OH; tiol -SH; imidazol, etc.) tanto en sus extremos
como en las cadenas laterales de sus aminocidos. En funcin del pH del medio,
estos grupos pueden tener carga elctrica positiva, negativa o neutra. Como la
conformacin de las protenas depende, en parte, de sus cargas elctricas, habr
un pH en el cual la conformacin ser la ms adecuada para la actividad cataltica.
Este es el llamado pH ptimo. As, la pepsina gstrica tiene un pH ptimo de 2 y la
tripsina pancretica lo tiene a pH 7,8. La mayora de las enzimas son muy sensibles
a los cambios de pH. Desviaciones de unas pocas dcimas por encima o por debajo
del pH ptimo pueden afectar drsticamente la actividad enzimtica. Por este
motivo, los seres vivos han desarrollado sistemas ms o menos complejos para
mantener estable el pH intracelular.

Propiedades cido - bsicas

Ya sabemos que todos los aminocidos protenicos tienen en su molcula un

radical -carboxilo y otro -amino, y por ello son anfteros. Estos radicales son
cidos y bases dbiles y su ionizacin cambia con el pH del medio, como se
muestra en el siguiente esquema para la Valina.
La fuerza de los grupos est determinada por el pKa de los radicales, que es
caracterstico de cada aminocido, como puede verse en la tabla de propiedades
fisicoqumicas de los aminocidos. Al variar la ionizacin de los radicales con el pH,
la carga total de los aminocidos tambin cambia.

Para todos los aminocidos existen formas catinicas, con carga neta positiva;
aninicas, con carga neta negativa, y una forma isoelctrica, en la cual la cantidad
de carga positiva es igual a la negativa, y la carga neta es cero. El pH al cual
predomina la forma isoelctrica de un aminocido se conoce como pH isoelctrico
o Punto Isoelctrico (pI) del aminocido. El pI se puede calcular como el promedio
de los dos pKa que limitan la forma isoelctrica. Tomando como ejemplo la Valina,
que slo tiene dos grupos ionizables, y con los valores de la tabla de propiedades
fisicoqumicas de los aminocidos, tenemos que:

Donde el pKa1 corresponde al grupo -carboxilo y el pKa2 al -amino, esta forma

de nomenclatura es la usada en Bioqumica.

Propiedades de inters tecnolgico:

Sin lugar a dudas es la actividad enzimtica, caractersticas de las protenas
denominadas enzimas, la propiedad ms interesante desde el punto de vista
tecnolgico. Las enzimas son los componentes de los alimentos que son capaces
de modificar su composicin o sus caractersticas sensoriales y acelerar su
alteracin. Por otro lado es habitual su empleo en la industria alimentaria con los
fines ms diversos (por ejemplo para elaborar alimentos fermentados).

La cualidad anfotrica de las protenas permite su disociacin y determina, junto a

otros factores, su solubilidad. La carga neta de la protena varia con las condiciones
del medio (pH) en que se encuentra. As pueden comportarse como aniones o
cationes (cidos o bases), o precipitar cuando la carga neta es cero. La primera
cualidad permite que las protenas tengan una cierta capacidad tamponadora o
amortiguadora. Por otro lado, la precipitacin se produce a un pH determinado
(punto isoelctrico) para cada tipo de protena y es de crucial importancia en la
industria alimentaria, tanto para evitar que precipiten protenas como para
conseguirlo. El punto isoelctrico es caracterstico de cada protena y esto permite
lograr la precipitacin selectiva de protenas de un medio. No obstante, la
solubilidad de las protenas no depende exclusivamente de pH del medio, sino que
influyen tambin tanto el nmero de grupos polares y apolares como su distribucin.
As, es posible que una protena con un escaso nmero de interacciones
hidrofbicas no precipite en su punto isoelctrico debido a la hidratacin y a la
repulsin estrica.
PARTE EXPERIMENTAL

Materiales:

- 10 Tubos de ensayos
- Pipetas de diferentes medias
- 5 Beakers

Reactivos:

Casena 5% en CH3COONa 0.1N

Agua destilada
Acido Actico 1N
Acido Actico 0,1N
Acido Actico 0,01N
PROCEDIMIENTO:

1) Se agreg 1 ml de cafena a cada tubo segn lo

indicado en la gua.

2) Procedimos a aadir agua destilada en diferentes

cantidades a cada tubo
3) Solo al tubo n9 se le agrego 1.6ml de cido Actico a 1N.
A los tubos del 3 al 8 se le aadi cido Actico al 0.1 N
Mientras que a los tubos 1 y 2 se le aadi cido Actico al 0.01 N
4) Se observ durante 2 periodos de 15 minutos los cambios que
ocurran dentro de cada tubo, buscando identificar aquel que tuviera
el mayor nivel de sedimentacin, lo cual indicara ser el del punto
isoelctrico.
 RESULTADOS:
TUBOS
SOLUCION 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
CASEINA 5% EN 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
CH3COONa 0.1N
AGUA DESTILADA 8.4 7.8 8.8 8.5 8.0 7.0 5.0 1.0 7.4 9.0
CH3COOH 1N (mL) 1.6
CH3COOH 0.1N (mL) 0.2 0.5 1.0 2.0 4.0 8.0
CH3COOH 0.01N (mL) 0.6 1.2
pH PRACTICO 5.9 5.78 5.56 5.26 4.9 4.54 4.23 3.9 3.66 5.92
pH TERICO 5.97 5.67 5.44 5.05 4.75 4.45 4.15 3.85 3.55 5.4
OBSERVACION A - - - + ++++ + ++ +++ +++++ -
LOS 15 MIN.
OBSERVACION A - - - + ++++ + ++ +++ +++++ -
LOS 30 MIN.

LEYENDA:

+++++: Precipitado altamente notable

++++: Precipitado notable
+++: Precipitado
++ : Precipitado ligeramente notable
+ : Poco Precipitado

- : Sin Precipitado

Aplicando la ecuacin de Hendersson-Hasselbalch, obtuvimos los pH

tericos.

Ejm:
1104
pH = 4,75 + log( )
6106
DISCUSIN

Tericamente ya conocemos que el punto isoelctrico, es aquel valor de pH al cual

su carga elctrica neta es cero , y se ha demostrado por medio de la presente
prctica, la validez del resultado, puesto que nuestro pH obtenido en prctica, se
asemeja o acerca al valor de pH terico de la leche al ser acidificada .

SEGN SEGAL Y ORTEGA, 2005 La casena se separa de la leche la cual tiene

un pH aproximadamente de 7 por acidificacin llevando a la casena a su punto
isoelctrico (de 4.6) donde se precipita.

La casena se asienta, o precipita, en una solucin en su punto isoelctrico porque

es el nivel de pH el cual tiene carga elctrica igual a cero es apolar.

Para determinar el punto isoelctrico de la casena utilizamos el cido actico, lo

cual nos permiti que la casena se acidifique y disminuya el pH hasta llegar a un
punto de equilibrio que en este caso en nuestra prctica fue de 3.66.

CONCLUSIONES.

El tubo 9 con el cido actico en mayor concentracin nos dio como

resultado el punto isoelctrico

Los tubos con el menor pH experimental tuvieron una muy notable

precipitacin y lo contrario ocurri con los que obtuvieron mayor pH
experimental.

Al equilibrar las cargas negativas y positivas de la casena se present una

mayor posibilidad de precipitacin.
REFERENCIAS:

Vctor Manuel Rodrguez Rivera. Bases de la Alimentacin Humana. Edit.

Netbiblo, Espaa 2008. Encontrado en: https://books.google.com.pe

Mara de la Luz Velzquez Monroy, Miguel ngel Ordorica Vargas.

Protenas. Encontrado en:
http://www.bioquimica.dogsleep.net/Teoria/archivos/Unidad30.pdf

Segal, C.A. K. y Gustabo Jesus Ortega L. G.J. ed. (2005) Manual de

prcticas. Biologa molecular de la celula I. UNAM. Publidisa, Mxico.

http://www.bioquimica.dogsleep.net/Teoria/archivos/Unidad30.pdf