Biotempo 2005, Volumen 5, 31- 36
Las 2 familias de saponinas referidas
presentan un grupo de caractersticas
generales que sirven de base para su
identificacin rpida: a) produccin de
espuma al ser agitadas sus soluciones
acuosas, lo cual es la base de la reaccin
de selivoflo empleada en el tamizaje
fitoqumico; b) produccin de hemlisis de
los glbulos rojos por la mayora de ellas,
propiedad que se aprovecha en las tcnicas
en que se cuantifica la potencia de estas
substancias; c) toxicidad en animales
poiquilotrmicos, en especial los peces
(sapotoxinas), a los cuales provocan
parlisis de las agallas (se emplean en
formas destructivas de pesca), pescar
embarbascado; d) produccin de una
reaccin positiva en la prueba de
Liebermann-Burchard. Por lo general, las
esteroidales en esta prueba manifiestan
colores que van desde el azul hasta el verde
y las triterpnicas, rosado, rojo o violeta.
Adems, la mayora de las saponinas son
solubles en diferente grado en soluciones
de etanol al 80 %, propiedad que se emplea
en diversas tcnicas para su extraccin y
purificacin.
MATERIAL Y MTODOS
Extraccin de saponinas
La muestra de Agaricus bisporus
fue adquirida comercialmente y secada en
estufa a 60 C, hasta la obtencin de un
peso constante. Luego se procedi a moler
la muestra.
Se pes 5 gr. de la muestra seca y
molida y se coloc en un tubo de ensayo,
aadindole 6 ml de etanol al 75%; y
puesto a hervir en BM por 15 minutos. Se
filtr y el extracto etanlico se evapor a
sequedad, con la finalidad de realizar el test
afrosimtrico y las pruebas de identi-
ficacin.
Identificacin de saponinas
Reacciones de Coloracin.
A partir del extracto alcohlico seco
se procedi a realizar los siguientes
ensayos:
i) Prueba de Liebermann-
Burchard.- Se tom una pequea cantidad
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de extracto y se aadi 2 ml de anhdrido
actico, 2 ml de cloroformo y se enfri a
0C. Se aadi 2 gotas de cido sulfrico
(c). La aparicin de una coloracin azulada
que pasa a anaranjado para luego volverse
verde, indica que la reaccin es positiva.
ii) Prueba de Salkowski.- Se tom
una pequea cantidad del extracto y se le
aadi 2 ml de cloroformo y 2 ml de cido
sulfrico. Una coloracin anaranjada indica
reaccin positiva.
iii) Prueba del naftol.- En un tubo
de ensayo se coloc una pequea cantidad
de extracto alcohlico seco y se aadi 2
ml de etanol y 2 gotas de solucin 0.1% de
- naftol adicionndose por la pared del
tubo de ensayo 2 ml de cido sulfrico (c).
La reaccin es positiva cuando en la
interfase se forme un anillo de color violeta.
Evaluacin de saponinas
Valoracin de las saponinas
Las saponinas se pueden valorar por
mtodos fsicos como el llamado Test
Afrosimtrico y el ndice de Espuma o
ndice Afrosimtrico; o por mtodos
biolgicos como el ndice Hemoltico o el
ndice del Pez.
a. Test Afrosimtrico.
Se tom la cuarta parte del extracto
etanlico seco en un tubo de ensayo y se
aadi 5 ml de agua destilada, se calent al
BM hirviente por 2 minutos, se agit
vigorosamente, observndose la aparicin
de espuma muy persistente; la persistencia
en minutos de la espuma se califica con
cruces:
5 - 20 min. (+); 20 - 25 min. (++);
30 - Ms (+++).
b. ndice afrosimtrico. (I . A.)
Es el nmero que expresa el
volumen en centmetros cbicos en que
est disuelto un gramo de material
saponnico para producir espuma de un
centmetro de altura en un tubo de 16 mm.,
de dimetro que contiene 10 ml., de
solucin.
Rev. Per. Qum. Ing. Qum. Vol. 13 N. 2, 2010. Pgs. 36-39

hasta agotamiento. El extracto etanlico Tabla 2. Reacciones de identificacin del extrac-

se concentra a sequedad y se disuelve en to crudo de saponinas
una mezcla de 200 mL de agua y 100 mL
de n-butanol. Este extracto hidrobutanlico Prueba Primer metodo Segundo mtodo
se lleva a reflujo en 200 mL de n-butanol.
De la espuma +++ +++
Se reposa 24 horas, el extracto butanlico
y luego se filtra. Se agrega sulfato de sodio Salkowsky +++ +++

anhidro y se lleva a sequedad. Se pesa y Libermann Buchard +++ +++

se obtiene el extracto bruto de saponinas. Acido sulfurico + ++
Igualmente a este extracto se le hicieron
todas las pruebas de saponinas, dando +++: Muy positivo
++: Algo positivo
positivas para saponinas triterpnicas. +: Poco positivo
Igualmente luego se le realiz la hidrlisis - : Resultado negativo
agregando agua destilada y luego a reflujo
con cido clorhdrico 2 N, durante dos horas. Tabla 3. Reacciones de identificacin del extrac-
Se enfra, se agrega 100 mL de agua y se to hidrolizado de las saponinas
lleva a evaporar hasta la tercera parte del
volumen. Se extrae con acetato de etilo en Prueba Primer mtodo Segundo mtodo
una pera y la fase orgnica se deja evaporar
De la espuma +++ (ms de 3 min.) +++ (ms de 3 min.)
y se obtienen cristales parduzcos.
Salkowsky +++ +++

Libermann Buchard +++ +++

3. RESULTADOS Y DISCUSIN
cido sulfrico + +

Tabla 1. Reacciones de comprobacin de pre- +++: Muy positivo

sencia de saponinas ++: Algo positivo
+: Poco positivo
- : Resultado negativo
Pruebas o rxs. Quimica Resultados

Prueba de salwosky +++ (color rojizo) Tabla 4. Porcentaje de saponinas en el boliche

Prueba de liebermann-buchard +++ (color rojizo a lila)

Prueba del cido sulfrico ++ (color rojo) Primer Segundo

Porcentaje de saponinas obtenidas
mtodo mtodo
Prueba de la espuma +++ (ms de 3 minutos)
Extracto crudo sin hidrolizar 1.75% 2.15%

Extracto hidrolizado 055% 0.67%

Con los resultados de ambos mtodos se

comprob la presencia de saponinas en la
muestra del boliche, las cuales se pudieron
identificar como saponinas triterpnicas, en
el extracto crudo de las saponinas. Se so-
meti el extracto crudo a una hidrolizar u se
obtuvieron cristales pardo oscuro.
Estos cristales fueron recristalizados con
acetato de etilo hasta la obtencin de un
color blanquecino transparente, los cuales
provocaban estornudos.
4. CONCLUSIONES
Las saponinas de la muestra de Sapin-
dus Saponaria L. utilizadas son del tipo
triterpnicas.
El mtodo de mayor rendimiento es
el segundo mtodo, el cual se extrae
primero con cloroformo (desengrasado).
Es preferible secar la muestra ya que
el fruto cuando no est sec es muy
gomoso.

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