Determinacin de glifosato en suelo / lodo por cromatografa lquida de alto rendimiento (HPLC)

Instrumentacin

Todos los anlisis y procedimientos descritos en este trabajo se llevaron a cabo utilizando un sistema de HPLC, un sonicador
ultrasnico, una centrfuga C5804 y un aparato de mezcla a temperatura constante.

El sistema de HPLC se acopl con un detector de fluorescencia para anlisis. La columna cromatogrfica era AR C18, 5
mm de tamao de partcula, L x I.D 250 mm x 4,6 mm, y la temperatura de la columna fue de 35C 5C. El caudal fue de
1,0 ml/min y la fase mvil era la hora programada usando acetonitrilo (A) y una solucin acuosa de cido fosfrico al 0,2%
v/v (B). El porcentaje de fase mvil orgnica (B) fue cambiado linealmente como sigue: 0 min, 35%; 10 min, 25%, 15 min,
80%; 20 min, 35%. El volumen de inyeccin fue de 20 L. El detector de fluorescencia se ajust a una longitud de onda de
excitacin de 254 nm y una longitud de onda de emisin de 301 nm.

Reactivos

Glifosato (99%) a Sigma Aldrich

9-fluorenil-metil-cloroformiato de ChemServiice
Acetonitrilo de grado HPLC de Merck
Disolventes de grado analtico tales como acetato de etilo, n-hexano, diclorometano y triclorometano.
Hidroxido de sodio (NaOH), hidrxido de potasio (KOH), fosfato sdico (Na3PO4 ), bicarbonato de sodio (NaHCO3),
tetraborato de sodio (Na2B4O7) y cido fosfrico (85%) se obtuvieron de Nanjing Chemical Reagent Co., Ltd.
Agua destilada obtenida por un sistema Millipore Milli-Q.

Preparacin de la solucin estndar, la solucin de trabajo y blanco

El patrn de glifosato se prepar a una concentracin de 1,0 g/L en agua desionizada y se diluy adicionalmente con agua
desionizada para obtener cada solucin estndar de trabajo. Estas soluciones estndar se almacenaron a 4 C en botellas
oscuras para uso futuro. Se prepar una muestra en blanco pesando 10,0 g de arena de cuarzo y siguiendo los mismos
pasos para el anlisis que para las muestras de suelo. Se prepararon soluciones estndar con concentraciones que
oscilaban entre 0,005 mg/L y 0,5 mg/L diluyendo la solucin patrn estndar con una cantidad apropiada de agua
desionizada.

Mtodo de extraccin

Muestra de suelo.

Se pesaron con precisin 10,0 g de la muestra de suelo fresco y se extrajeron utilizando 50 ml de una mezcla de fosfato
sdico (0,03 mol/L) y citrato trisdico (0,01 mol/L) asistido por un sonicador ultrasnico durante 30 min. La solucin se
someti entonces a centrifugacin a 10000 rpm durante 5 min para obtener el sobrenadante. El agua intersticial en el
sedimento se elimin por centrifugacin a 10.000 rpm durante 10 min. Se pesaron 10,0 g de la muestra de sedimento con
precisin y el proceso subsiguiente de extraccin fue el mismo que para la muestra de suelo

Mtodo de purificacin

Para la purificacin, el pH de la solucin de extraccin se ajust primero a 9 con HCl (1,0 mol/L). La solucin se dej
entonces reposar durante 10 minutos antes de la filtracin. Posteriormente, se aadieron 50 ml de n-hexano y la mezcla se
agit vigorosamente. Despus de dejar reposar la mezcla durante un cierto periodo de tiempo, se desech la fase orgnica.
Se repitieron por segunda vez y finalmente se trataron 1,0 ml de la solucin preparada con los reactivos para la reaccin de
derivatizacin.

Reaccin de derivatizacin

El derivado de FMOC de la reaccin de glifosato se prepar haciendo reaccionar 1 ml del extracto purificado con 0,12 ml
de Na2B4O7 (0,05 mol/L) y 0,2 ml de FMOC-Cl (1,0 mg/ml) a temperatura ambiente durante 4 h. La reaccin se control
analizando las alcuotas obtenidas despus de la filtracin sobre una membrana (0,22 m) usando cromatografa lquida
acoplada a deteccin de fluorescencia.

Mtodo de extraccin

Aunque el glifosato es insoluble en disolventes orgnicos comunes, sus sales son fcilmente solubles en agua. Por lo tanto,
se us un afeitado en solucin alcalina para la solucin de extraccin. En este estudio se intentaron diversas soluciones
alcalinas, tales como KOH (0,6 mol/L), NaOH (0,6 mol/L), NaHCO3 (0,6 mol/L) Na3PO4 (30 mmol/L) y KH2PO4 (0,1 mol/L).
Para este experimento se eligi el suelo de arroz con 1,0 y 5,0 mg/kg de glifosato debido a su mayor contenido de materia
orgnica. La solucin Na3PO4 (30 mmol L) fue la mejor opcin con una tasa de recuperacin ms alta. Debido al mecanismo
similar de adsorcin de glifosato y otros fosfatos en el suelo, estos compuestos compiten por los sitios de adsorcin. Esto
generalmente reduce la adsorcin de glifosato y mejora la tasa de recuperacin.

Concentracin del extracto

Se utilizaron soluciones de Na3PO4 con diferentes concentraciones para el proceso de extraccin. Las velocidades de
recuperacin de glifosato en muestras de suelo con un incremento de 0,5 y 2,0 mg/kg. Se encontr que la tasa de
recuperacin aumentaba al principio y disminua despus con un aumento en la concentracin de Na 3PO4. La recuperacin
de extraccin ms alta se obtuvo con 50 mM. Sin embargo, la forma del pico vari con el aumento de la concentracin de
Na3PO4. En la optimizacin, se seleccion 30 mmol/L de solucin de Na3PO4 como la concentracin de galn superior.

La adicin de agentes complejantes de iones metlicos

Tpicamente, el suelo contiene una amplia variedad de iones, como Ca2+, Mn2+ Zn2+, Mg2+, Fe2+, Fe3+ y Al3+ que pueden
reaccionar con glifosato y reducir su tasa de recuperacin. Con el fin de eliminar la interferencia de los iones, se requiere
un agente complejante adecuado para mejorar la tasa de recuperacin. Se ensayaron y compararon tres tipos de agentes
complejantes de iones metlicos. En cuanto a la separacin de los picos de cromatograma, las consecuencias de usar la
sal de Seignette y el citrato trisdico fueron mejores que las del EDTA disdico. El citrato trisdico (0,01 mol/L) mostr un
mejor efecto de extraccin y una tasa de recuperacin ms alta en las dos muestras tpicas de suelo y lodo seleccionadas
que fueron picadas a 1,0 mg/kg.

Mtodo de purificacin

La deteccin de glifosato tambin puede verse afectada por el humus y una variedad de otras sustancias orgnicas. Por lo
tanto, es necesario seleccionar el mtodo de purificacin apropiado para eliminar la interferencia de impurezas. La
extraccin lquido-lquido y la extraccin en fase slida son dos mtodos comunes de purificacin. La extraccin en fase
lquida es ms conveniente, rpida y ms barata que la extraccin en fase slida. Por lo tanto, se utiliz el mtodo de
extraccin lquido-lquido para la purificacin. De acuerdo con la tasa de recuperacin, el hexano fue el mejor reactivo de
purificacin para los cinco suelos y sedimentos representativos.

Anlisis de muestras de suelos y lodos

El mtodo validado se aplic al anlisis de muestras de algunas regiones representativas de China. Se recolectaron
muestras de suelo de la provincia de Hunan (suelo rojo), Regin Nordeste (suelo negro) y el rea alrededor del lago Tai
(suelo de arroz), donde el plaguicida glifosato es ampliamente utilizado en los campos. Se obtuvieron dos tipos de muestras
de lodo procedentes del ro Qinhuai (lodo del ro) y del lago Qin (lodo lacustre). El compuesto diana se encontr en todas
las muestras de suelo ensayadas en concentraciones de 0,15 mg / kg en suelo rojo, 0,19 mg / kg en suelo negro y 0,11 mg
/ kg en suelo de arroz.

Conclusiones

El articulo describe un protocolo conveniente y simple para la determinacin de glifosato en suelo/lodo, este mtodo implica
la derivatizacin precolumna y utiliza una HPLC acoplada con un detector de fluorescencia. Utilizando el procedimiento
desarrollado es posible analizar todos los tipos de muestras de suelos y lodos que poseen diferentes propiedades fsicas y
qumicas. Adems, debido a la posible interferencia de algunos iones metlicos, humus y otras sustancias orgnicas en el
suelo, se agrega un agente complejante inico y la purificacin se realiza con hexano. El mtodo demuestra una buena
relacin lineal (coeficiente de correlacin 0,999) en el rango de concentracin de glifosato de 0,005-0,5 mg / L, y tambin
es bastante sensible (LOD: 0,01 mg / kg, LOQ: 0,04 mg / kg) y exacta (recuperacin: 75% a 110% con la DSR inferior al
15%). Los parmetros de esta metodologa cumplen con los lmites establecidos de la norma de calidad ambiental del suelo
agrcola (0,5 mg /kg) y como este protocolo de anlisis es barato, simple y sensible, puede aplicarse ampliamente.