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CROMATOGRAFA DE
GASES
TCNICAS ANALTICAS DE
SEPARACIN
1
1. INTRODUCCIN
Proceso de separacin en el que los
analitos se distribuyen entre una fase
estacionaria y una fase mvil.
2
1. INTRODUCCIN
Equilibrio de distribucin entre FE y FM
Objetivo
Separar sustancias principios termodinmicos
Temperatura
Aumenta Ec
Impide interacciones entre analito y FE
Elucin
3
1. INTRODUCCIN
FASE MVIL: gas
Se llama gas portador
Normalmente He, H2, N2, Ar, CO2
Depende del detector, eficacia y rapidez deseada
5
1. EL PROCESO DE SEPARACIN
ELUCIN
6
3. INTRODUCCIN DE LA MUESTRA
3.1. COMPONENTES DEL INYECTOR
Septo
Debe cambiarse cada
20 inyecciones
manuales o 100 con
automuestreador
7
3.1. COMPONENTES DEL INYECTOR
Tipos de septum
8
3.1. COMPONENTES DEL INYECTOR
TIPOS DE FRRULAS
9
3.1. COMPONENTES DEL INYECTOR
Las impurezas se acumulan en el inserto que debe
cambiarse peridicamente
MUESTRAS SLIDAS
SHS, DHS, SPME (static heaspace, dynamic headspace, solid-
phase microextraction)
MUESTRAS LQUIDAS
Acero
1-10 L o grandes volmenes (muestras limpias, trazas)
11
3.3. DISCRIMINACIN Y
ENSANCHAMIENTO DE BANDAS
Calidad de la inyeccin:
Volumen
Mnimo, concentrado Temperatura alta en Analitos con
inyector, termosensibles volatilidades diferentes
Temperatura columna
recondensacin
Volumen inyeccin
ensanchamiento banda
pequeo
(columnas capilares)
12
3.3. DISCRIMINACIN Y
ENSANCHAMIENTO DE BANDAS
Ensanchamiento de banda cromatogrfica por la inyeccin:
13
3.3. DISCRIMINACIN Y
ENSANCHAMIENTO DE BANDAS
ENFOQUE MEDIANTE DISOLVENTE picos muy estrechos
Inyeccin
Al aumentar T se evapora
el disolvente enfocndose
los analitos en una14
banda
estrecha
3.3. DISCRIMINACIN Y
ENSANCHAMIENTO DE BANDAS
La condensacin del disolvente crea una pseudofase
Disminuye la relacin de fases columna vol. gas portador/vol. fe
Modifica la constante de particin masa soluto en f. liq/en gas portador
GAP DE RETENCIN. TUBO HUECO:
Reduce la longitud de la zona inundada de la columna
Protege de contaminaciones en la columna
15
SOLVENT FOCUSSING
16
3.4. TCNICAS DE INYECCIN
Limpiar la jeringa varias veces con un disolvente adecuado
En el que est disuelto el analito
De polaridad adecuada para la FE de la columna
disolvente 17
3.4. TCNICAS DE INYECCIN
Tcnica de aguja caliente
Se toma la muestra y se aspira aire que llena la aguja
Se calienta en inyector de 2-3 s
Se inyecta rpidamente
Adecuada en inyecciones manuales, muy reproducible
18
3.4. TCNICAS DE INYECCIN
Efecto de la discriminacin como consecuencia de la tcnica de
inyeccin empleada para n-alcanos de diferente nm. At. C
19
K. Grob, H.P. Neumon, J HRC & GC, 2 (1979) 15
3.5. SELECCIN DEL INSERTO
Inserto recto es menos eficiente al transferir la energa
La base metlica del inyector se enfra ms rpidamente que el
vidrio
La columna est ms fra
Previamente se evapora disolvente y voltiles y se enfra
20
3.5. SELECCIN DEL INSERTO
El volumen de la muestra al vaporizarse < volumen del
inserto para evitar flashback
S.e. la muestra se expandir por todo el volumen
disponible.
Puede producir prdida de voltiles (discriminacin)
La muestra debe vaporizarse en la base
no en el centro
Flashback
Picos fantasma
Picos con cola
Se llena linea purga y otras
21
3.5. SELECCIN DEL INSERTO
La lana de vidrio debe estar en la base para vaporizacin
lo ms abajo posible
Cuanto ms estrecho mejor porque aumenta la velocidad
lineal del gas portador
Estrechamiento inferior: mejor para fraccin menos voltil
Estrechamiento superior: mejor para fraccin voltil
22
3.5. SELECCIN DEL INSERTO
Flashback. Expansin del disolvente
Inserto 4 mm y 78,5 mm tiene un volumen 1 mL
T P Volumen
Metanol 1L567 L
23
3.5. SELECCIN DEL INSERTO
Inserto recto 1.2 mm/ Inserto lana vidrio centro 4 mm
Inserto recto estrecho
Mejor para los ms voltiles: Evita prdida por expansin
inicial del disolvente
Vaporizacin en zona inferior y mayor velocidad lineal gas
24
Inyector Columna Modo Muestra Comentarios Muestra
concentracin a columna
Con/sin Capilar Divisin Alta Muy poca
divisin
Divisin a pulsos (pulsed split) Alta Puede ser til con Muy poca
3. INTRODUCCIN DE MUESTRA
inyecciones de gran
Sin divisin (splitless) Baja volumen Toda
Columnas empaquetadas
3-4 mm x 1-5 m
Semicapilares
560 m
Poca resolucin
Poco habituales
26
3.6. TIPOS DE INYECTORES
3.6.2. INYECCIN CON DIVISIN (SPLIT)
Parte de la muestra sale por el split
Inyeccin de 1 l 0,5 mL de gas y parte sale por septum
Razn de divisin: 50:1-600:1 (flujo split:flujo columna)
T alta: evita prdida de slo los componentes ms voltiles
T muy alta: La muestra se descompone
Split
27
3.6.2. INYECCIN CON DIVISIN (SPLIT)
Entra en columna 0,2-2% muestra
Para una buena resolucin
Mnima cantidad de muestra 1 mL
1 ng analito
Aconsejable
Cuando concentracin > 0,1 %
Compuestos muy voltiles, los picos aparecen
inmediatamente despus del disolvente
Las muestras no pueden diluirse ms (p.e. disolventes)
Muestras sucias
Se usa una columna de alta resolucin que no admite
mucha carga
28
INYECCIN CON DIVISIN (SPLIT)
AQU
29
3.6.3. INYECCIN SIN DIVISIN (SPLITLESS)
Anlisis de trazas (<0,01%)
No tiene cmara de mezcla
Entra en la columna ~80%
La T suele ser menor
La muestra ms tiempo en inyector
Puede descomponerse
Banda ancha
Splitless
30
3.6.3. INYECCIN SIN DIVISIN (SPLITLESS)
A:
Split
T cte 75 C
Flujo divisin alto
La gua se limpia constantemente
B:
Se purga muy lentamente la gua
La muestra pasa a la columna durante
mucho tiempo
Las reas son mayores porque llega todo
C:
Splitless pero:
purga la gua a los 30 s eliminando vapores
D:
Igual a C pero:
enfriando inicialmente columna a 25C
31
3.6.4. INYECCIN EN COLUMNA (ON-COLUMN)
On-column
32
3.6.4. INYECCIN EN COLUMNA (ON-COLUMN)
33
3.6.5.VAPORIZACIN DE TEMPERATURA PROGRAMADA
PTV
34
3.6.5.VAPORIZACIN DE TEMPERATURA PROGRAMADA
35
3.7. CONSUMIBLES
TIPOS DE SEPARADORES
36
3.7. CONSUMIBLES
37
3.7. CONSUMIBLES
38
CUESTIONES
1. Si la muestra se prepara mediante purga y atrapamiento,
cul sera el modo de inyeccin adecuado? Sin divisin
Largas y estrechas
Fabricadas en slice fundida SiO2
Recubiertas de poliimida (plstico que resiste 350 C)
Dimetro interno: 0,1-0,53 mm
Longitud: 15-100 m
40
4.COLUMNAS
TUBULARES ABIERTAS
41
4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
Comparacin de los picos cromatogrficos obtenidos con una
columna empaquetada (izda) y otra capilar (dcha)
Empaquetada: 1-5 m y 3-4 mm, semicapilar: 560 um
Capilares: 15-100 m y 0,1-0,53 mm
42
4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
TIPOS:
43
4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
Las columnas FSOT son parecidas a
WCOT pero el material es diferente,
en las FSOT es slice fundida y en las
WCOT es vidrio.
Sin embargo las FSOT no estn
disponebles a dimetros > a 0.53 mm
y las WCOT s
44
4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
45
4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
Columnas de pared recubierta (WCOT)
Recubiertas de FE liq. de 0,1-0,5 m espesor
Al disminuir espesor:
Aumenta resolucin
Disminuye tiempo de retencin
Disminuye capacidad de carga
46
4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
Capa porosa (PLOT)
Mayor rea superficial
Mayor capacidad de carga
47
4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
Eleccin de la FE lquida
Lo semejante disuelve a lo semejante
Analito polar FE polar y viceversa
Polaridad de solutos:
48
Fases estacionarias
Polidimetilsiloxano
Polietilenglicol
49
4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
TIPOS DE FE Y DISOLVENTES RECOMENDADOS
50
51
SKOOG,Douglas y LEARY,James. Anlisis Instrumental. 4 Edicin. McGraw-Hill. Espaa.1994
4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
Fases estacionarias de uso
frecuente en CG capilar
52
4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
La columna se degrada
Cuando envejece
FE se altera dejando grupos silanol descubiertos (Si-O-
H)
Aumentan las colas
53
4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
Eleccin FE slida:
Almina Al2O3
Tamices moleculares
Materiales inorgnicos o polmeros provistos de
grandes cavidades donde las molculas pequeas
penetran y se retienen parcialmente
Pueden separar H2, O2, N2, CO2 y CH4
Retienen fuertemente el agua y los gases se secan
Pueden regenerarse
Liberando agua
Mediante calentamiento a 300 C a vaco o bajo corriente de N2
54
4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
55
4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
FASE ENLAZADA QUIRAL: PTICAMENTE ACTIVA
FE basada en el aa quiral
L-valina
Separa enantimeros
Separa enantimeros
voltiles derivados de
aas
56
4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
Todos los aas naturales son L
57
4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
Ciclodextrinas enlazadas con la FE
Tipo de FE quiral para CG o CL
Son azcares cclicos
Tienen cavidad quiral hidrfoba 0,78 mm
diam.
Los -OH se pueden bloquear con grupos
pentilo (-C5H11) o trifluoroacetilo
[-C(C=O)CF3]. Que disminuyen la
polaridad.
Permiten la separacin de enantimeros
de un determinado compuesto, ya que
cada unos de llos tiene mayor o menor
afinidad por la cavidad que se produce.
58
5.COLUMNAS EMPAQUETADAS
Soporte slido:
Partculas finas
Tierras de diatomeas (esqueletos silceos de algas)
Se silanizan para reducir puentes de H con compuestos
polares
Tefln
Para solutos que se unen con ms fuerza
Polmero qumicamente inerte CF2-CF2-CF2-
Temperatura < 200 C
Recubierto de:
Slido adsorbente
El slido mismo es la FE
59
5.COLUMNAS EMPAQUETADAS
Menor eficacia
tiles:
a escala preparativa
Para separar gases, se retienen poco
Material:
Acero inoxidable
Nquel
Vidrio
Dimensiones:
3-4 mm dimetro
1-5 m longitud
60
5.COLUMNAS EMPAQUETADAS
Gran uniformidad en tamao partcula:
Disminuye el trmino de caminos mltiples A en la Ec. Van Deemter
Aumenta resolucin
Disminuye H
Tamao partcula
m
nmero de mallas:
nmero de aberturas del tamiz por unidad de longitud
Partcula de 100/200 mallas pasa por tamiz de 100 mallas pero no de 200
16 mallas = aberturas son cuadrados de 1.18 mm
20 mallas = aberturas son cuadrados de 0.85 mm
Si una muestra pasa por 16 mallas y no por 20 tenemos partculas con dimetro
entre 0.85 y 1.18 mm. Partculas = 16/20 mallas
61
COMPARACIN DE COLUMNAS
USADAS EN CG
62
6.NDICE DE RETENCIN
Los tiempos relativos de retencin varan a medida que vara la
polaridad de la FE
63
6.NDICE DE RETENCIN
El ndice de retencin relaciona el tiempo de retencin
de un soluto con los tiempos de retencin de los
alcanos lineales
64
6.NDICE DE RETENCIN
65
6.NDICE DE RETENCIN
El I del benceno en poli(dimetilsiloxano) es 657 por lo que eluye entre
hexano y heptano usando FE no polar
El nitropropano eluye justo despus que el heptano en la misma columna
A medida que bajamos en la tabla aumenta la polaridad de la FE
Con la ltima FE, el benceno eluye despus del decano y el nitropropano
despus del n-C14H30 (tetradecano)
66
7.PROGRAMACIN DE
TEMPERATURA Y PRESIN
Aumentando la
temperatura de la
columna:
Aumenta la presin de
vapor de los solutos
Disminuye el tiempo de
retencin
Los picos son ms
pronunciados
(a) 150 C
Los ms voltiles salen
juntos y los menos no
salen
(b) Rampa 50-250 C a
8C/min
67
7.PROGRAMACIN DE
TEMPERATURA Y PRESIN
En la CG la "afinidad" de un soluto por la FM
depende
69
7.PROGRAMACIN DE
TEMPERATURA Y PRESIN
En el caso de muestras que contienen constituyentes
con presiones de vapor muy diferentes,
PROGRAMA CROMATOGRFICO
Temperatura C C/min Tiempo (min) Tiempo final
60 2 2
180 25 10 16,8
300 4 5 51,8
71
7.PROGRAMACIN DE
TEMPERATURA Y PRESIN
Si T aumenta mucho
Descomposicin trmica de analito y FE
72
8.GAS PORTADOR
El He es el ms comn y compatible con la mayora de
detectores
73
8.GAS PORTADOR
INCONVENIENTES DEL USO DE H2 EN CG:
75
8.GAS PORTADOR
Cux
8.GAS PORTADOR
Cs y Cm dependen del tipo de cromatografa
En CG con columna tubular abierta:
2 K d 2
Cs
3(k1) 2 Ds d: espesor de la FE
Ds: coef. Difus. Soluto en FE
1 6 K 11K r
2 2
Cm
24( K 1) 2 Dm
Al disminuir d disminuye H debida a la transferencia de masa
aumenta la eficacia debido a que el soluto puede difundirse
ms rpidamente desde las partes ms profundas de la FE a la
FM
77
8.GAS PORTADOR
En columnas tubulares abiertas con FE suficientemente fina
(< 0,5 mm) Cux se rige por la lentitud de difusin a travs
de la FM y en segundo lugar de la FE
Cs<<Cm
78
8.GAS PORTADOR
79
9. DETECTORES
ANLISIS CUALITATIVO:
Detectores que permiten anlisis cualitativo:
MS
Transformada de Fourier
Libreras de espectros
Comparacin con tr (no fiable)
Co-cromatografa: fortificar la muestra con el analito que se sospecha
Uso de dos columnas con distintas FE
ANLISIS CUANTITATIVO:
rea de pico
A mano (si el pico tiene forma gaussiana):
rea = 1,064 x altura de pico x w1/2
Altura de pico (cuando son muy estrechos)
80
9.1. Detector de Conductividad trmica, TCD
Universal
Sencillo
Sensibilidad limitada a nivel traza y columnas <0,53 mm
Mide la modificacin de la conductividad trmica del gas
portador, ocasionada por la presencia de substancias eludas
La conductividad trmica mide la capacidad de una
sustancia para transferir calor de una regin a otra ms fra
82
9.1. DETECTOR DE
CONDUCTIVIDAD TRMICA (TCD)
El He es el ms usado
He e H2 dan la mejor sensibilidad
H2 es el de ms conductividad
Todos los analitos disminuyen su
conductividad
mol dc
Flujo 2 J D
m s dx
83
3.1. DETECTOR DE
CONDUCTIVIDAD TRMICA (TCD)
El eluato pasa por filamento caliente de wolframio-renio
Disminuye la conductividad del gas
El filamento de calienta
Aumenta su resistencia elctrica
Vara el voltaje
El detector mide esa variacin
84
3.1. DETECTOR DE
CONDUCTIVIDAD TRMICA (TCD)
Generalmente se usa una columna de referencia conectada
a otro filamento
Minimiza las diferencias de flujo al variar T
Rango lineal: 104
La sensibilidad
Aumenta con el cuadrado de la corriente del filamento
Puede quemarse
Inversamente proporcional al caudal
Aumenta con la diferencia de T entre filamento y bloque
exterior
85
3.2. DETECTOR DE
IONIZACIN DE LLAMA (FID)
Consiste en una llama de
hidrgeno-aire y una placa
colectora
Es sensible y es el detector
ms ampliamente utilizado,
Es destructivo
Empleado para hidrocarburos, poco 86
87
9.2. DETECTOR DE IONIZACIN DE
LLAMA (FID)
88
9.3. DETECTOR DE CAPTURA
ELECTRNICA (ECD)
Selectivo
Molculas con halgeno
Carbonilos conjugados
Nitrilos
Fsforo
Nitrocompuestos
Compuestos organometlicos
Insensible a:
Hidrocarburos
Alcoholes
90
Cetonas
9.3. DETECTOR DE CAPTURA
ELECTRNICA (ECD)
Gas de make-up:
N2
Ar con 5% metano
La humedad disminuye la sensibilidad
Muy sensible
91
9.3. DETECTOR DE CAPTURA
ELECTRNICA (ECD)
92
9.4. DETECTOR DE
FOTOIONIZACIN (PID)
93
9.4. DETECTOR DE
FOTOIONIZACIN (PID)
94
9.5. DETECTOR FOTOMTRICO
DE LLAMA (FPD)
95
9.5. DETECTRO FOTOMTRICO
DE LLAMA PULSADO (PFPD)
96
97
9.6. OTROS DETECTORES
99
9.6. OTROS DETECTORES
SO O3 SO2 * O2
SO2 * : estado excitado
SO2 * SO2 h
100
Compuestos del S en gas natural
a) FID, los comp. Org. S no se detectan porque estn
muy diluidos; b) QLD, insensible a hidrocarburos
101
9.6. OTROS DETECTORES
Detector de nitrgeno-fsforo.
Es bsicamente el mismo FID, pero se le adiciona un metal alcalino,
por lo que en algn momento se le llam (AFID) detector de
ionizacin de llama alcalino, tambin se le ha llamado detector de
ionizacin (TID), detector termoinico de llama (FTD), detector
especfico termoinico (TSD).
102
Detector de N-P
107
9.7. CROMATOGRAFA DE GASES
ESPECTROMETRA DE MASAS
ANALIZADORES DE MASA
TRAMPA DE IONES
CUADRUPOLO
MODOS DE ADQUICISIN
BARRIDO COMPLETO
MONITORIZACIN DE UNA REACCIN SELECCIONADA
(MS/MS)
DETECCIN DE UN ION SELECCIONADO
MODOS DE IONIZACIN
IMPACTO ELECTRNICO
IONIZACIN QUMICA
108
9.7. CROMATOGRAFA DE GASES
ESPECTROMETRA DE MASAS
BARRIDO COMPLETO
MS/MS
109
Ionizacin electrnica
Las molculas que entran en la fuente de ionizacin
se convierten iones por ionizacin electrnica
110
Ionizacin electrnica
Casi todas las molculas estables tienen un nmero par de
electrones.
111
Ionizacin electrnica
La energa cintica de los electrones de 70 eV es
mucho mayor que la energa de ionizacin de las
molculas con las que colisionan.
MOLCULA DE FORMALDEHDO:
112
Ionizacin electrnica
La interaccin con electrones de 70 eV eliminar con muchsima
probabilidad los electrones que tienen la mnima energa de
ionizacin.
Figura:
no presenta el pico M+ que debera tener de una m/z 226.
picos de m/z 197, 156, 141, 112, 98, 69 y 55, correspondientes a prdidas
de fragmentos del ion M+.
113
Ionizacin electrnica
CH4+ + M CH4 + M+
116
Ionizacin qumica
El pico MH+, de m/z 227, es el segundo pico ms intenso del espectro.
M(C2H5)+
117