FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERA EN ALIMENTOS

GUA DE PRCTICA DE LABORATORIO

INGENIERA BIOQUMICA

MDULO: Microbiologa I
NIVEL: Tercero
PRCTICA DE LABORATORIO: 2
TEMA:PRUEBAS DE ESTERILIZACION

1. OBJETIVO GENERAL

Evaluar la eficacia de los mtodos de esterilizacin aplicables en el laboratorio de microbiologa.

2. OBJETIVOS ESPECFICOS

Identificar el funcionamiento de los equipos de esterilizacin presentes en el laboratorio.

Ensayar varios tipos de esterilizacin y determinar el mejor tratamiento para medios de cultivo.

Se evalu los diferentes procesos de esterilizacin la cual como objetivo es el quedar libremente de
microorganismos vivos para ello la desinfeccin ser la manera que reduzca la posibilidad de que ocurra
una infeccin los cuales permitirn la limitacin de causar infecciones lo cual se efectu en la prctica
nmero uno con los diversos procesos que aplicamos como en el caso del autoclave y estufa que son
eficaces En el calor hmedo ya que destruye los microorganismos por coagulacin de sus protenas
celulares.El principal mtodo de esterilizacin que emplea calor hmedo es la esterilizacin por vapor a
presin. Existen otros mtodos de descontaminacin que emplean este tipo de calor los cuales, aunque no
permiten la destruccin total de los microorganismos, disminuyen la carga microbiana que posee un
material. Entre estos mtodos podemos citar:. En la esterilizacin en la autoclave lo hicimos a 121 C por
15 minutos se pudo notar la alta eficacia de esterilidad a diferencia del bao termosttico se pudo notar
que no es eficaz en su esterilizacin directamente para esterilizacin por vapor a presin a altas
temperaturas ya que a medida que se aument la temperatura se pudo notar la esterilizacin ms eficaz
En el caso de flujo laminar a radiacin UV no funciono en su esterilizacin ya que el flujo laminar es un
sistema de esterilizacin del aire con filtros hepa que filtran ciertas partculas a cierto tamao el cual
empujan el aire hacia el exterior y evitan la contaminacin ambiental de las muestras hay que recalcar que
para hacer este proceso lo debemos hacer con los debidos materiales e indumentaria ya que podemos
contaminar si no tomamos en cuenta estos aspectos no se esterilizara como ocurri en este caso los tubos
no se esterilizaron y hubo presencia de turbulencia es decir presencia de microorganismos y el objetivo de
esterilizar es eliminar todo microorganismo viviente

. se puede decir que hay varios tipos de esterilizacin para cada tipo ya que va a depender de sus
temperaturas las cuales van a influir directamente sobre el metabolismo celular y su capacidad de
sobrevivir o morir, con esto concluimos que el calor ya sea seco o hmedo representara uno de los
mecanismos ms importantes para producir esterilidad.

Preparar 14 tubos con 5 ml del medio de cultivo y disponerlos de la siguiente manera:

2 tubos llevar al autoclave a 121 C por 15 minutos.

2 tubos llevar a la estufa a 200 C por 3 horas.
2 tubos a la cmara de flujo laminar a radiacin UV por 20 minutos.
2 tubos a bao termosttico con agua hirviendo por 15 minutos.
2 tubos a vapor fluyente por 15 minutos.
2 tubos a bao termosttico de 60 a 100 C siguiendo este orden: 15 min a 60, 70, 80, 90 y 100
C.
2 tubos permanecern como testigos y no se les aplicar calor.
Despus de haber transcurrido el tiempo de tratamiento trmico se enfriarn los tubos y se proceder a
incubarlos a 37 C por 48 horas. Verificar la presencia de microorganismos en cada uno de los tubos, su
presencia se reflejar como turbidez en el medio de cultivo.

3. RESULTADOS Y DISCUSIN
Tabla#1: Resultados de esterilizacin

Tubos en la autoclave a 121 C por Proceso de esterilizacin altamente usado

15 minutos. por su efectividad y eficacia,
comprobndolo con los tubo A y B que no
denotaron presencia de microorganismos
Tubos en la estufa a 200 C por 3 Proceso de esterilizacin altamente usado
horas. por su efectividad y eficacia,
comprobndolo con los tubo A y B que no
denotaron presencia de microorganismos
Tubos en la cmara de flujo laminar Proceso de esterilizacin no idneo ya que
a radiacin UV por 20 minutos. en las dos muestras (A, B) no se logr la
esterilizacin, existiendo la presencia de
turbulencia por lo tanto, la de
microorganismos.
Tubos a bao termosttico con agua Este proceso presento cierta singularidad.
hirviendo por 15 minutos. Tubo A: presento una esterilizacin
completa.
Tubo B: Se observ presencia de
turbulencia en muestra analizada.
Tubos a vapor fluyente por 15 Este proceso presento cierta singularidad.
minutos. Tubo A: presento una esterilizacin
completa.
Tubo B: Se observ presencia de
turbulencia en muestra analizada.
Tubos a bao termosttico de 60 a Este proceso presento cierta singularidad.
100 C siguiendo este orden: 15 min Tubo A: Se observ turbulencia en la
a 60, 70, 80, 90 y 100 C. sustancia.
Tubo B: Se apreci ausencia de turbulencia
en muestra analizada.
Tubos permanecern como testigos. No se le aplico ningn proceso de
esterilizacin
Con los diversos procesos que aplicamos como en el caso del autoclave y estufa que son eficaces En el
calor hmedo ya que destruye los microorganismos por coagulacin de sus protenas celulares. El
principal mtodo de esterilizacin que emplea calor hmedo es la esterilizacin por vapor a presin.
Existen otros mtodos de descontaminacin que emplean este tipo de calor los cuales, aunque no
permiten la destruccin total de los microorganismos, disminuyen la carga microbiana que posee un
material. Entre estos mtodos podemos citar: En la esterilizacin en la autoclave lo hicimos a 121 C por
15 minutos se pudo notar la alta eficacia de esterilidad a diferencia del bao termosttico se pudo notar
que no es eficaz en su esterilizacin directamente para esterilizacin por vapor a presin a bajas
temperaturas ya que a medida que se aument la temperatura se pudo notar la esterilizacin ms eficaz ya
que fue ms eficaz a 100C.
tambin es el caso de flujo laminar a radiacin UV no funciono en su esterilizacin ya que el flujo
laminar es un sistema de esterilizacin del aire con filtros hepa que filtran ciertas partculas a cierto
tamao el cual empujan el aire hacia el exterior y evitan la contaminacin ambiental de las muestras hay
que recalcar que para hacer este proceso lo debemos hacer con los debidos materiales e indumentaria ya
que podemos contaminar si no tomamos en cuenta estos aspectos no se esterilizara como ocurri en este
caso los tubos no se esterilizaron y hubo presencia de turbulencia es decir presencia de microorganismos
y el objetivo de esterilizar es eliminar todo microorganismo viviente

4. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Se evalu los diferentes procesos de esterilizacin la cual como objetivo es el quedar libremente de
microorganismos vivos para ello la desinfeccin ser la manera que reduzca la posibilidad de que
ocurra una infeccin los cuales permitirn la limitacin de causar infecciones lo cual se efectu en la
prctica nmero uno

Se identifico que para cada eqipo es necesario tomar encuenta las temperaturas ya que algunos
dependen de temperaturas mas altas que otros Cuando se calculan los tiempos de funcionamiento para
el equipo de esterilizacin por aire caliente, deben considerarse tres perodos:
El perodo de ascenso de la temperatura, que es el tiempo necesario para que toda la carga alcance la
temperatura de esterilizacin; puede llevar alrededor de 1 hora.
Los perodos de mantenimiento a las diferentes temperaturas de esterilizacin recomendadas por el
Medical Rescarch Councill que son 160C durante 45 minutos, 170C durante 18 minutos, 180C
durante 7 1/2 minutos y 190C durante 1 1/2 minutos.
El perodo de enfriamiento, que se realiza gradualmente para prevenir la rotura del material de vidrio
como consecuencia de un descenso demasiado rpido de la temperatura. Este perodo puede llevar 2
horas

Se evaluo que el mejor esterilizador es el autoclave ya que es El proceso completo de esterilizacin en

un autoclave se compone de diferentes fases:
Fase de purgado: A medida que la resistencia calienta el agua del fondo del caldern, se va produciendo
vapor que desplaza el aire, hacindolo salir por la vlvula de purgado que est abierta. Esta fase termina
cuando se alcanza la temperatura de esterilizacin.
Fase de esterilizacin: Una vez cerrada la vlvula de purgado y alcanzada la temperatura de
esterilizacin previamente seleccionada se inicia el proceso de esterilizacin.
Fase de descarga: Terminado el proceso de esterilizacin, deja de funcionar la resistencia calefactora,
con lo que deja de producirse vapor y la presin y temperatura del caldern empieza a bajar poco a
poco. Se puede decir que hay varios tipos de esterilizacin para cada tipo ya que va a depender de sus
temperaturas las cuales van a influir directamente sobre el metabolismo celular y su capacidad de
sobrevivir o morir, con esto concluimos que el calor ya sea seco o hmedo representara uno de los
mecanismos ms importantes para producir esterilidad.
5. CUESTIONARIO

Defina los siguientes trminos:

a) Sanitizacin es el proceso por el cual se realiza una reduccin sustancial del contenido
microbiano, hasta un nivel de seguridad, sin que se llegue a la desaparicin completa de
microorganismos patgenos, sin producir algn tipo de infeccin. (Hurtado, 2012)
b) Asepsia Es la ausencia total de microorganismos, patgenos, no patgenos y sus esporas.
c) Desinfeccin Proceso que consiste en la remocin de microorganismos patgenos y no
patgenos ( no elimina esporas) que se encuentran en superficies inanimadas, se obtiene por
medio de agentes qumicos
d) Esterilizacin Proceso mediante el cual se destruye o elimina toda forma de vida,
microorganismos patgenos y no patgenos, incluyendo esporas. (Bustamante, 2010)
Indique el fundamento de esterilizacin por calor seco y por calor hmedo. Cmo acta
cada uno de estos mtodos de esterilizacin sobre los microorganismos para destruirlos?
Calor seco: Su accin letal se debe a la oxidacin de componentes celulares. El aire es mal
conductor del calor y el aire caliente entra ms lentamente que el vapor en los materiales. Por ello
se requiere ms temperatura y tiempo de exposicin que en la esterilizacin con calor hmedo.
Puede utilizarse mediante flameado (incineracin) o con hornos de aire caliente.
 Calor hmedo: los materiales hmedos conducen mejor el calor que los secos: el agua tiene
mayor coeficiente de transferencia de calor que el aire. Por eso el vapor de agua es ms eficaz que
el calor seco matando a los microorganismos. As la esterilizacin en presencia de vapor de agua
requiere menos temperatura y tiempo que sin agua. (Rivas, 2008)

Mencione los parmetros crticos del proceso de esterilizacin por calor seco.
Tiempo y temperatura (Rulata, Jones, & Weber, 1996)

Indique paso a paso el funcionamiento del autoclave.

Trabaja a presin superior a la atmosfrica. El agua a presin atmosfrica hierve a 100C. A presiones
superiores, la temperatura de ebullicin aumenta por lo que se pueden calentar soluciones acuosas
(como los medios de cultivo-) a temperaturas superiores a 100C. El autoclave permite elevar la
presin de una a dos atmsferas sobre la presin atmosfrica. .
El dispositivo trabaja aislado del exterior. En un sistema aislado del exterior, cada elevacin de
temperatura provoca un aumento de presin. La relacin entre temperatura y presin depende de la
composicin de la atmsfera incluida en el sistema
Cuando en el autoclave el aire es reemplazado por vapor de agua (purgado del autoclave), La relacin
entre temperatura y presin en atmsfera saturada de agua es la indicada en la tabla de la izquierda.
Si quedan restos de aire son necesarias temperaturas mayores para provocar la misma presin en el
interior (Rivas, 2008)

Qu es un bioindicador de esterilizacin?
Es un dispositivo preparado de esporas no patgenas y altamente resistentes (Bacillus
stearothermophilus y Bacillus subtilis) a los procesos de esterilizacin y por lo tanto son tiles y
eficaces para establecer la capacidad del ciclo de esterilizacin para destruir microorganismos
especficos, que se sabe que son ms resistentes al proceso que se est probando. (Rulata, Jones, &
Weber, 1996)

Por qu se utiliza a la bacteria Bacillus stearothermophilus como bioindicador?

Se utilizan porque las esporas de Bacillus stearothermophilus son las ms resistentes al calor hmedo,
para controlar as la efectividad de la esterilizacin, (Arroyo, 2012)

Mencione otra bacteria que sea bioindicadora y sus caractersticas.

Bacillus subtilis es una bacteria Gram positiva, Catalasa-positiva, aerobio facultativo comnmente
encontrada en el suelo. Miembro del Gnero Bacillus, B. subtilis tiene la habilidad para formar una
resistente endospora protectora, permitiendo al organismo tolerar condiciones ambientalmente
extremas.(Rulata, Jones, & Weber, 1996).

Mencione cmo funciona la cinta indicadora de esterilizacin.

Son cintas que viran de color cuando alcanzan determinada temperatura dentro de los aparatos
esterilizados. No son indicadores de que los procesos de esterilizacin, con todos sus ciclos, se hayan
cumplido correctamente. El uso de las mismas en forma rutinaria en todos los materiales que se
esterilicen, no debe reemplazar los monitoreos biolgicas peridicos. (Arroyo, 2012)

Qu es un indicador qumico de esterilizacin?

Son dispositivos que contiene sustancias qumicas que cambian de color o estado cuando se exponen
a una o ms variables crticas del proceso de esterilizacin como temperatura-humedad o temperatura-
concentracin del agente esterilizante (Rulata, Jones, & Weber, 1996).

A qu temperatura se destruyen las esporas? A qu se debe la alta resistencia al calor de

las esporas?
Las bacterias producen esporas como manera de defenderse. Poseen paredes gruesas y logran resistir
las altas temperaturas, la humedad y otras condiciones del medio ambiente.
El ncleo de una espora madura difiere mucho de la clula vegetativa de la cual proviene. Adems
del abundante contenido en dipicolinato de calcio. La deshidratacin aumenta dramticamente la
termo-resistencia de la espora y al mismo tiempo le confiere resistencia frente a sustancias qumicas,
como el perxido de hidrgeno, contiene niveles elevados de protenas especficas denominadas
SASPs. Estas protenas tienen al menos dos funciones. Por un lado se unen fuertemente al ADN y lo
protegen de las lesiones potenciales de la radiacin UV, la desecacin y el calor seco. Por otro lado
 las SASPs pueden servir como fuente de carbono y energa para el desarrollo de una nueva clula
vegetativa a partir de la espora, proceso conocido como germinacin(Rosario, 2000).

Qu es la radiacin ionizante?
Este tipo de radiacin genera sustancias que son un veneno para el metabolismo bacteriano. Como los
radicales oxhidrilos y radicales perxidos entre otros. Estos radicales atacan a las protenas y enzimas
afectando su estructura de forma inmediata deteriorando definitivamente su metabolismo.
(Arroyo, 2012)

Qu es la pasteurizacin? Qu tipos existen?

La pasteurizacin es el proceso trmico realizado a lquidos (generalmente alimentos) con el objeto
de reducir los agentes patgenos que puedan contener: bacterias, protozoos, mohos y levaduras, etc.
Existen tres tipos de procesos bien diferenciados: pasteurizacin VAT o lenta, pasteurizacin a altas
temperaturas durante un breve perodo (HTST, High Temperature/Short Time) y el proceso a altas
temperaturas (UHT, Ultra-High Temperature)
TIPOS DE PASTEURIZACIN
PROCESO VAT
Este fue el primer mtodo de pasteurizacin, aunque se ha ido renovando por sistemas ms eficaces.
Este proceso consiste en calentar grandes volmenes de leche en un recipiente estanco a 63 C durante
30 minutos, para luego dejar enfriar lentamente. Luego debe pasar mucho tiempo para continuar con
el proceso de envasado del producto, a veces ms de 24 horas.
PROCESO HTST
Este mtodo es empleado en los lquidos a granel, como la leche, los zumos de fruta, cerveza, etc. Por
regla general es el ms conveniente, ya que expone al alimento a grandes temperaturas durante un
periodo breve y adems se necesita poco equipamiento industrial para realizar este proceso.
PROCESO UHT
El fundamento de la ultra pasteurizacin (UHT: Ultra High Temperature), o temperatura ultra-alta, es
la esterilizacin del alimento antes de empacar, es de flujo continuo y mantiene la leche a una
temperatura superior ms alta que la empleada en el proceso de HTST, y puede rondar los 138 C
durante un periodo de al menos 2 o 5 segundos. Debido a este periodo de exposicin, aunque breve, se
produce, una mnima degradacin del alimento. La leche cuando se etiqueta como
PASTEURIZADA generalmente se ha tratado con el proceso HTST, mientras que para la leche
etiquetada como ULTRAPASTEURIZADA o simplemente UHT, se debe entender que ha sido
tratada por el mtodo UHT.
Este mtodo es empleado en productos lquidos como leches, jugos, cremas, yogurt, vinos, aderezos,
alimentos con partculas discretas, alimentos para bebe, derivados del tomate, jugos de fruta y verduras,
sopas (Hurtado, 2012).

6. BIBLIOGRAFA

Arroyo, P. (2012). Mtodos de Esterilizacin. Recuperado el 30 de Abril de 2016, de

http://www.quimicayalgomas.com/salud/metodos-de-esterilizacion/

Bustamante, T. (2010). Recuperado el 30 de Abril de 2016, de

https://sites.google.com/site/enfermeriaasepsiayantisepsia/conceptos

Hurtado, M. (2012). Recuperado el 30 de Abril de 2016, de

https://prezi.com/u0ecys_zir-s/sanitizacion/

Rivas, R. (2008). ESTERILIZACIN CON AGENTES FSICOS. Recuperado el 30 de Abril de

2016, de http://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-ii/pb-ii-2-fisicos.htm

Rulata, W., Jones, S., & Weber, D. (1996). Comparacion de una lectura rapida de
indicadores biologicos para la esterilizacion de vapor. Infect Control Hosp Epidemiol.
Rosario, F. (2000). De bacterias a esporas. Recuperado el 30 de Abril de 2016, de
http://www.britanialab.com/terragene/de_bacterias_a_esporas.pdf.