CARRERA: AGRONOMA

CONTENIDO TEMATICO
MICROBIOLOGA GENERAL.
CICLO II

NDICE

I. Introduccin a la Microbiologa
1.1 El Descubrimiento de los Microorganismos
1.2 El Conflicto de la Generacin Espontnea
1.3 El Reconocimiento del Papel de los Microorganismos en el Desarrollo de
Enfermedades
1.4 El Descubrimiento del Efecto Microbiano Sobre la Materia Orgnica e
Inorgnica
1.5 Composicin del Mundo Microbiano
1.6 Relevancia de la Microbiologa en la Vida Diaria

II. Estudio de la Estructura Microbiana

2.1 Microscopio ptico (de Campo Claro, de Campo Oscuro, de Contraste de
Fases, de Fluorescencia)
2.2 Preparacin y Tincin de Muestras (Fijacin, Colorantes y Tincin Simple,
Tincin Diferencial)
2.3 Microscopia Electrnica

III. Estructura y Funcin de la Clula Procariota

3.1 Tamao, Forma y Organizacin Procariota
Membranas de Clulas Procariotas (Membrana Plasmtica y Sistemas de Membranas
Internas).
3.3 Matriz Citoplasmtica.
3.4 Nucleoide.
3.5 Pared Celular Procariota.
3.6 Componentes Externos a la Pared Celular.
Quimiotaxis
3.8 Endospora Bacteriana.

IV. Nutricin Microbiana

4.1 Requerimientos Comunes de Nutrientes
4.2 Tipos Nutricionales de Microorganismos
Factores de Crecimiento
4.4 Toma de Nutrientes por la Clula
Medios de Cultivo
4.6 Aislamiento de Cultivos Puros

LA MICROBIOLOGA
CAPTULO I. INTRODUCCIN A LA MICROBIOLOGA.

1.1 El descubrimiento de los microorganismos.

Incluso antes de que los microorganismos fueran vistos, algunos investigadores

sospecharon de su existencia y los responsabilizaron de las enfermedades. Entre otros,
el filsofo Romano Lucrecius (98-55 A.C.) y el fsico Girolamo Fracastoro (1478-1553)
sugirieron que las enfermedades eran causadas por criaturas vivas invisibles. Las
primeras observaciones microscpicas fueron hechas al parecer entre 1625 y 1630 por el
Italiano Francesco Stelluti, utilizando un microscopio facilitado muy probablemente por
Galileo. Sin embargo, la primera persona en observar y describir microorganismos de
manera sistemtica fue el microscopista Holands Antonio van Leeuwenhoek (1632-
1723). Leeuwenhoek se ganaba la vida como comerciante de telas, pero gasto gran parte
de su tiempo construyendo microscopios simples compuestos de lentes dobles convexos
montados entre dos placas de plata. Sus microscopios podan amplificar de 50 a 300
veces y se podan mantener iluminadas sus muestras lquidas colocndolas entre dos
piezas de vidrio e incidiendo la luz sobre ellas en un ngulo de 450 con respecto al plano
de la muestra.
Esto pudo haber proporcionado una forma de iluminacin parecida a la de campo oscuro
e hizo a las bacterias claramente visibles. A principios de 1673 Leeuwenhoek envi cartas
detalladas describiendo sus observaciones a la Real Sociedad de Londres; de acuerdo
con dichas descripciones, es claro que l observ tanto bacterias como protozoarios.

1.2 El conflicto de la generacin espontnea.

Desde tiempos muy remotos, la gente haba credo en la generacin espontnea, esto
es, que los organismos vivos podran desarrollarse a partir de materia no viva. Incluso el
gran Aristteles (384-322 A.C.) pensaba que algunos invertebrados simples se originaban
por generacin espontnea. Esta visin fue finalmente cambiada por Francesco Redi
(1626-1697) quien llev a cabo una serie de experimentos sobre la descomposicin de
la carne y su habilidad para producir larvas espontneamente. Redi coloc carne en tres
contenedores: uno no estaba cubierto, el segundo fue cubierto con papel y el tercero fue
cubierto con una gasa fina que poda excluir las moscas. Las moscas dejaron sus
huevecillos en la carne al descubierto y se generaron larvas; las otras dos piezas de
carne no produjeron larvas de manera espontnea. Sin embargo, las moscas fueron
atradas hacia el contenedor cubierto con gasa y dejaron sus huevecillos sobre sta;
estos huevecillos produjeron larvas. As, la generacin de larvas como resultado de la
descomposicin de la carne es debida a la presencia de huevecillos de moscas, y por lo
tanto la carne no genera larvas de manera espontnea como se crea. Experimentos
similares realizados por otros cientficos ayudaron a desacreditar la teora al menos en lo
que se refiere a organismos grandes.

El descubrimiento de los microorganismos por Leeuwenhoek renov la controversia.

Algunos propusieron que los microorganismos se generaban por generacin espontnea,
incluso aunque los organismos de gran tamao no lo hicieran. Ellos pensaban que los
extractos hervidos de carne podan dar origen a microorganismos si se dejaban en
reposo por un rato. En 1748 el sacerdote Ingls John Needham (1713-1781) report el
resultado de sus experimentos sobre generacin espontnea. Needham calent caldo de
carnero y luego tap hermticamente los frascos.
Eventualmente muchos de los frascos de volvieron turbios y contenan
microorganismos. l pens que la materia orgnica contena una fuerza vital que poda
conferir las propiedades de vida a materia no viva. Unos cuantos aos ms tarde el
sacerdote y naturalista Italiano Lzaro Spallanzani (1729- 1799) mejor el diseo
experimental de Needham sellando primero los frascos de vidrio que contenan agua y
semillas. Si los frascos sellados eran colocados en agua hirviendo por 45 minutos, no
haba crecimiento mientras permanecieran sellados. l propuso que el aire acarreaba
grmenes al medio de cultivo. Sin embargo, quienes apoyaban la teora de la generacin
espontnea sostenan que calentar el aire en los frascos sellados destrua su habilidad
para soportar la vida.

Diversos investigadores intentaron rebatir tales argumentos, aunque con poco xito.
En 1859 el naturalista francs Flix Pouchet afirm haber realizado experimentos que
determinaban de manera concluyente que el crecimiento microbiano poda ocurrir sin
contaminacin debida al aire. Est afirmacin provoc que Luis Pasteur (1822-1895) se
decidiera a intentar resolver esta situacin de una vez por toda. Pasteur primero filtr aire
a travs de algodn y encontr que algunos objetos que asemejaban esporas de plantas
haban sido atrapados. Si un pedazo de este algodn se colocaba en medio estril,
apareca crecimiento microbiano. Enseguida l coloc solucin nutritiva en frascos,
calent sus cuellos en una flama y los dobl en una variedad de curvas mientras
mantena el extremo del cuello abiertos a la atmsfera. Pasteur calent luego las
soluciones por unos cuantos minutos y permiti que se enfriaran. No hubo crecimiento
an y cuando los contenidos de los frascos estaban expuestos al aire. Pasteur seal que
el crecimiento no se presentaba porque el polvo y grmenes haban sido atrapados en las
paredes del cuello curvo de los frascos. Si los cuellos eran rotos, el crecimiento
comenzaba inmediatamente. Pasteur no slo resolvi la controversia en 1861, sino que
tambin mostr cmo mantener estriles las soluciones.

El cientfico Ingls John Tyndall (1820-1893) puso punto final al asunto de la

generacin espontnea en 1877 al demostrar que el polvo acarreaba grmenes y que, si
el polvo estaba ausente, los cultivos permanecan estriles incluso si eran expuestos al
aire. Durante el curso de sus estudios, Tyndall proporcion evidencia de formas
bacterianas excepcionalmente resistentes al calor. Trabajando independientemente, el
botnico Alemn Ferdinand Cohn (1828-1898) demostr la existencia de endosporas
bacterianas resistentes al calor.

1.3 El reconocimiento del papel de los microorganismos en el desarrollo de

enfermedades.

Aunque Fracastoro y algunos otros haban sugerido que organismos invisibles

producan las enfermedades, la mayora crea que las enfermedades eran causadas por
fuerzas sobrenaturales, vapores venenosos llamados miasmas y el desbalance entre los
cuatro humores presentes en el cuerpo (sangre, flema, bilis amarilla o clera y bilis negra
o melancola). Los apoyos a la teora de los grmenes como productores de
enfermedades comenzaron a acumularse a principios del siglo XIX. Agostino Bassi (1773-
1856) fue el primero en mostrar que un microorganismo podra ser el causante de una
enfermedad cuando demostr que una enfermedad en el gusano de seda era debida a
una infeccin por hongos. l tambin sugiri que muchas enfermedades eran causadas
por hongos. Despus de su xito con el estudio de las fermentaciones, Pasteur fue
llamado por el gobierno francs para investigar una enfermedad en el gusano de seda
que estaba acabando con la industria de la seda. Despus de varios aos de trabajo,
demostr que la enfermedad era debida a un protozoario parsito.
La enfermedad fue controlada desarrollando gusanos a partir de huevecillos de
palomillas sanas.
Evidencia indirecta de que los microorganismos eran agentes causantes de
enfermedades humanas deriv de los estudios del cirujano Ingls Joseph Lister (1827-
1912) sobre la prevencin de infecciones en heridas. Lister, impresionado con los
trabajos de Pasteur sobre fermentaciones y putrefaccin, desarroll un sistema de ciruga
antisptica diseado para prevenir la entrada de microorganismos en las heridas. Los
instrumentos eran esterilizados por calor y el fenol era utilizado sobre las ropas
quirrgicas y asperjado a intervalos de tiempo sobre el rea de ciruga. Este sistema fue
notablemente exitoso y transform a la ciruga despus de que Lister public sus trabajos
en 1867. Esto tambin proporcion fuerte evidencia indirecta del papel de los
microorganismos en las enfermedades debido a que el fenol, el cual mataba bacterias,
tambin prevena la infeccin de las heridas.

La primera demostracin directa del papel de las bacterias como causantes de

enfermedades lleg con los estudios del ntrax por el cientfico Alemn Robert Koch
(1843-1910). Koch utiliz los criterios propuestos por su maestro y formador Jacob Henle
(1809-1885) para establecer la relacin entre Bacillus anthracis y el ntrax y public sus
hallazgos en 1876. Koch inyect ratones sanos con material proveniente de animales
enfermos, y los ratones se enfermaron. Despus de transferir ntrax por inoculacin a
travs de una serie de 20 ratones, incub un fragmento de bazo que contena el bacilo
del ntrax en suero de carne de res. Los bacilos crecieron, se reprodujeron y produjeron
esporas. Cuando bacilos aislados o esporas fueron inyectados en los ratones, el ntrax
se desarroll. Sus criterios para probar la relacin causal entre un microorganismo y una
enfermedad especfica son conocidos como Postulados de Koch y pueden resumirse
como sigue:
1.El microorganismo debe estar presente en cada caso de enfermedad, pero ausente en
organismos sanos.
1.El microorganismo sospechoso debe ser aislado y crecido en cultivo puro.
1.La misma enfermedad debe resultar cuando el microorganismo aislado es inoculado en
un hospedero sano.
1.El mismo microorganismo debe ser aislado otra vez a partir del hospedero enfermo.

Aunque Koch utiliz lo descrito en sus postulados durante sus estudios sobre el
ntrax, l no los estableci completamente hasta 1884 en su publicacin sobre la
tuberculosis.

Durante los estudios de Koch sobre las enfermedades bacterianas se volvi

necesario aislar bacterias patgenas en suspensin. Al principio l cultivo las bacterias en
la superficie estril de papas cortadas y hervidas. Esto no era satisfactorio debido a que
las bacterias no siempre crecan bien sobre las papas. Luego intent solidificar medio
lquido regular aadiendo gelatina. Colonias separadas de bacterias se desarrollaban
despus de que la superficie era estriada con una muestra de bacterias. La muestra
poda tambin ser mezclada con el medio de gelatina lquida; cuando la gelatina
solidificaba bacterias individuales desarrollaban colonias separadas. A pesar de sus
ventajas, la gelatina no era el agente solidificante ideal debido a que era digerida por
muchas bacterias y se derreta a temperaturas superiores a 280C. Una mejor alternativa
fue proporcionada por Fannie Eilshemius Hesse, esposa de Walter Hesse, uno de los
asistentes de Koch. Ella sugiri el uso de agar como agente solidificante ya que ella lo
haba utilizado de manera exitosa durante algn tiempo para hacer jaleas.

El agar no era atacado por la mayora de las bacterias y no se derreta sino hasta
alcanzar una temperatura de 1000C. Uno de los asistentes de Koch, Richard Petri,
desarroll la caja Petri, un contenedor para medio de cultivo slido. Estos desarrollos
hicieron posible el aislamiento de cultivos puros que contenan slo un tipo de bacteria, y
estimularon de manera directa el progreso en todas las reas de la b a c t e r i o l o g a .

Koch tambin desarroll medios adecuados para crecer bacterias aisladas del
cuerpo. Debido a su similitud con los fluidos corporales, los extractos de carne y digeridos
de protenas fueron usados como fuentes de nutrientes. El resultado fue el desarrollo de
caldos nutritivos y del agar nutritivo, medios que son utilizados ampliamente an en la
actualidad.

Para 1882 Koch haba utilizado estas tcnicas para aislar el bacilo que cusa la
tuberculosis. A esto le sigui una edad de oro de cerca de 30 a 40 aos en los cuales la
mayor parte de los principales patgenos bacterianos fueron aislados .

El descubrimiento de los virus y su papel en las enfermedades fue hecho posible

cuando Charles Chamberland (1851-1908), uno de los asociados de Pasteur, construy
un filtro bacteriano de porcelana en 1884. El primer patgeno viral en ser estudiado fue el
virus de la enfermedad del mosaico del tabaco.

En este perodo tambin se hicieron progresos en la determinacin de cmo los

animales resisten a las enfermedades y en el desarrollo de tcnicas para proteger a los
humanos y al ganado contra patgenos. Durante sus estudios sobre el clera en pollos,
Pasteur y Roux descubrieron que incubando sus cultivos por intervalos largos entre
transferencias, podan atenuar las bacterias, lo cual significa que stas haban perdido su
capacidad para causar la enfermedad. Si los pollos eran inyectados con estos cultivos
atenuados, permanecan saludables y desarrollaban la habilidad de resistir a la
enfermedad. Ellos llamaron vacuna a los atenuados (del latn vacca, vaca) en honor de
Edward Jenner quien, muchos aos antes, haba usado la vacunacin con materia
proveniente de lesiones de viruela de ganado para proteger a la gente contra la viruela.
Poco despus de esto, Pasteur y Chamberland desarrollaron una vacuna atenuada de
ntrax por dos caminos distintos: tratando los
cultivos con dicromato de potasio, y por incubacin de las bacterias a 42-430C.

Poco despus Pasteur prepar vacunas contra la rabia por una va distinta. El
patgeno fue atenuado hacindolo crecer en un hospedero no comn, el conejo. Despus
de que los conejos infectados murieron, sus cerebros y mdula espinal fueron removidas
y deshidratadas. Durante el curso de estos estudios, Joseph Meister, un nio de nueve
aos de edad que haba sido mordido por un perro rabioso, fue llevado a Pasteur.
Puesto que la muerte del nio era irremediable en ausencia de un tratamiento, Pasteur
estuvo de acuerdo en aplicar su vacuna. Joseph fue inyectado 13 veces en los siguientes
10 das con preparaciones con virulencia creciente del virus atenuado. El nio sobrevivi.

La lucha contra las enfermedades infecciosas estaba en marcha, y la ciencia

dispona ya de armas para hacerles frente.
1.4 El descubrimiento del efecto microbiano sobre la materia orgnica e
inorgnica.

Aunque Theodore Schwann (1810-1882) y otros haban propuesto en 1837 que las
clulas de levadura eran responsables de la conversin de azcar a alcohol, un proceso
llamado fermentacin alcohlica, los qumicos ms relevantes de la poca crean que los
microorganismos no tenan nada que ver en el asunto. Ellos estaban convencidos de que
la fermentacin era debida a una inestabilidad qumica que degradaba los azcares a
alcohol. Pasteur no estaba de acuerdo. Al parecer Pasteur se interes en las
fermentaciones muy temprano en su carrera debido a sus investigaciones sobre la
actividad ptica de las molculas. l crea que las fermentaciones eran realizadas por
organismos vivos y producan productos asimtricos tales como el alcohol amlico que
tenan actividad ptica. Haba una ntima conexin entre la asimetra molecular, la
actividad ptica y la vida. Entonces, en 1885 M. Bigo, un industrial francs requiri la
ayuda de Pasteur. Su negocio era la produccin de etanol por fermentacin a partir de
remolacha y el alcohol producido haba declinado recientemente y el producto se haba
acidificado. Pasteur descubri que la fermentacin fallaba porque la levadura
normalmente responsable de la formacin de alcohol haba sido reemplazada por
microorganismos productores de cido lctico ms que de etanol. Al resolver este
problema prctico, Pasteur demostr que todas la fermentaciones eran debidas a
actividades de levaduras y bacterias especficas, reportando sus trabajos en diversos
artculos sobre fermentaciones entre 1857 y 1860. Su xito lo llevo al estudio de las
enfermedades del vino y al desarrollo de la pasteurizacin para preservar el vino durante
su almacenamiento. Los estudios de Pasteur sobre fermentacin continuaron durante
casi 20 aos. Uno de sus ms importantes descubrimientos fue que algunos
microorganismos fermentativos eran anaerobios y podan vivir slo en ausencia de
oxgeno, mientras que otros eran capaces de vivir tanto aerobia como anaerbicamente.

Unos pocos de los primeros microbilogos escogieron investigar el papel ecolgico

de los microorganismos. En particular estudiaron los microorganismos involucrados en los
ciclos del carbono, nitrgeno y azufre que tiene lugar en el suelo y en ambientes
acuticos. Dos de los pioneros en este tema fueron Sergei N. Winogradsky (1856-1953) y
Martinus W. Beijerinck (1851-1931).

El microbilogo ruso Sergei N. Winogradsky hizo muchas contribuciones a la

microbiologa del suelo. Descubri que las bacterias del suelo podan oxidar hierro, azufre
y amonio para obtener energa, y que muchas bacterias podan incorporar CO2 como
materia orgnica tal y como lo hacan muchos organismos fotosintticos. Winogradsky
tambin aisl bacterias del suelo anaerobias fijadoras de nitrgeno y estudi la
descomposicin de la celulosa.

Martnez W. Beijerinck fue uno de los grandes microbilogos generales que hizo
aportaciones fundamentales a la ecologa microbiana y muchos otros campos. l aisl la
bacteria anaerobia fijadora de nitrgeno Azotobacter; una bacteria de ndulos de raz
capaz de fijar nitrgeno (llamada posteriormente Rhizobium); y bacterias sulfato
reductoras. Beijerinck y Winogradsky desarrollaron la tcnica de cultivo enriquecido y el
uso de medios selectivos, los cuales han sido de gran importancia en el desarrollo de la
microbiologa.
1.5 Composicin del mundo microbiano.

Existen dos tipos fundamentales de clulas. Las clulas procariotas (organismos con
un ncleo primordial) tienen una morfologa mucho ms simple que los organismos
eucariotas y carecen de una verdadera membrana que delimite el ncleo. Todas las
bacterias son procariotas. En contraste, las clulas eucariotas tienen una membrana que
rodea al ncleo y son morfolgicamente ms complejas y usualmente ms grandes que
las procariotas. Algas, hongos, protozoarios, plantas superiores y animales son
eucariotas.

La antigua descripcin de los organismos como plantas o animales es claramente

demasiado simple, y por muchos aos los bilogos han dividido a los organismos en
cinco reinos:

1. Los organismos procariotas se encuentran en el reino Monera o Procaryotae.

2. El reino Protista contiene organismos eucariotas unicelulares o coloniales que

carecen de tejidos verdaderos. Los protozoarios, los hongos inferiores, y la mayora de
las algas microscpicas estn colocados en este reino.

3. Los miembros del reino Fungi son organismos eucariotas que se nutren por
absorcin y a menudo son multinucleados. Los hongos superiores pertenecen a este
reino.

4. El reino Animalia contiene animales multicelulares con nutricin por ingestin.

5. Las plantas multicelulares con clulas eucariotas poseedoras de pared celular y

fotosntesis se localizan en el reino Plantae.

En las ltimas dcadas se han hecho grandes progresos en tres reas que afectan
profundamente la clasificacin de los microorganismos. Primero, Se ha aprendido mucho
sobre la estructura a detalle de las clulas microbianas con el uso de la microscopia
electrnica. Segundo, los microbilogos han determinado las caractersticas bioqumicas
y fisiolgicas de muchos microorganismos diferentes. Tercero, se han comparado las
secuencias de protenas y RNA ribosomal de una amplia variedad de organismos. Est
claro ahora que hay dos grupos de organismos procariotas con diferencias importantes:
eubacterias y archaeobacterias. Ms an, el reino Protista es tan diverso que puede ser
necesario dividirlo en tres o ms reinos. As, muchos taxnomos han concluido que el
sistema de cinco reinos es demasiado simple. Un sistema de clasificacin ms reciente
divide a los organismos en dos imperios y ocho reinos.

Imperio Bacteria

1.Reino Eubacteria. Bacterias verdaderas.

2.Reino Archaeobacteria. Bacterias ancestrales, por lo general extremfilas.

Imperio Eucaryota
 3.Reino Archezoa. Organismos primitivos eucariotas unicelulares, tales como Giardia,
que tienes ribosomas 70S y carecen de aparato de Golgi, mitocondrias, cloroplastos y
peroxisomas.
4.Reino Protozoa. Protozoarios complejos.
1. Reino Chromista. Organismos fotosintticos que tiene sus cloroplastos dentro del
lumen del retculo endoplasmtico rugoso y no en la matriz citoplasmtica.
2. Reino Fungi. Organismos eucariotas que se nutren por absorcin y a menudo son
multinucleados. Los hongos superiores pertenecen a este r eino .
3. Reino Plantae. Plantas multicelulares con clulas eucariotas poseedoras de pared
celular y fotosntesis.
4. Reino Animalia. Animales multicelulares con nutricin por ingestin.

1.6 Relevancia de la microbiologa en la vida diaria.

Los microorganismos son excepcionalmente diversos, se encuentran casi donde sea

y afectan a las sociedades humanas de incontables maneras.
As, la microbiologa moderna es una disciplina compleja con muchas diferentes
especialidades; tiene gran impacto en medicina, agricultura y ciencias alimentarias,
ecologa, gentica, bioqumica y muchos otros campos.

La microbiologa tiene aspectos tanto bsicos como aplicados. Muchos

microbilogos tienen un inters primario en la biologa de los microorganismos en si
mismos. Ellos pueden centrarse en un grupo especfico de microorganismos y convertirse
en virlogos (virus), bacterilogos (bacterias), ficlogos o alglogos (algas), miclogos
(hongos) o protozoologos (protozoarios). Otros estn interesados en la morfologa
microbiana o en procesos funcionales particulares y trabajan en campos tales como
citologa microbiana, fisiologa microbiana, ecologa microbiana, gentica y biologa
molecular microbiana, y taxonomia microbiana. Muchos microbilogos tienen una
orientacin ms aplicada y trabajan sobre problemas prcticos en campos tales como la
microbiologa mdica, microbiologa de alimentos o de la leche, microbiologa de salud
pblica, biotecnologa, microbiologa industrial e ingeniera gentica, entre otros.

El futuro de la microbiologa es brillante. Con el advenimiento de la tecnologa del

DNA recombinante la microbiologa se expandir y cambiar mucho ms rpido en el
futuro. La necesidad de microbilogos para trabajar en problemas de medicina,
proteccin ambiental, produccin y conservacin de alimentos y en el desarrollo
industrial, crecer indudablemente. El microbilogo Ren Dubos ha resumido bien lo
prometedor de la microbiologa:

Cuan extraordinario es que, en todo el mundo, los microbilogos estn ahora

involucrados en actividades tan diferentes como el estudio de la estructura gentica, el
control de enfermedades, y los procesos industriales basados en las fenomenales
habilidades de los microorganismos para descomponer y sintetizar molculas orgnicas
complejas. La microbiologa es una de las profesiones ms reconfortantes debido a que
da a quienes la practican a oportunidad de estar en contacto con todas las dems
ciencias naturales y contribuir as de muchas maneras diferentes al mejoramiento de la
calidad de vida humana.

CAPTULO II. ESTUDIO DE LA ESTRUCTURA MICROBIANA

Usualmente la microbiologa se relaciona con organismos tan pequeos que no

pueden ser distinguidos con el ojo desnudo. Debido a la naturaleza de esta disciplina, el
microscopio es de importancia crucial: mucho de lo que se conoce de los
microorganismos ha sido descubierto gracias a los microscopios. As, es importante
entender cmo trabajan los microscopios y la manera en la cual los especimenes son
preparados para su observacin.

2.1 Microscopio ptico (de campo claro, de campo oscuro, de contraste de fases,
de fluorescencia).

Los microbilogos emplean una variedad de microscopios pticos (de luz) en su

trabajo; los de campo claro, de campo oscuro, de contraste de fases y de fluorescencia
son los utilizados ms comnmente. Los microscopios modernos son todos compuestos,
esto es, la imagen amplificada formada por los lentes del objetivo es posteriormente
agrandada por uno o ms lentes adicionales.

Microscopio de campo claro.

El microscopio ordinario es llamado de campo claro debido a que se genera una

imagen oscura sobre un fondo brillante. El microscopio consiste en un cuerpo robusto de
metal compuesto de una base y un brazo en el cual se fijan el resto de las partes. Una
fuente de luz, que puede ser un espejo o un iluminador electrnico, se localiza en la base.
Dos botones, el de ajuste grueso y el de ajuste fino (llamados tornillos macro y
micromtrico, respectivamente) estn localizados sobre el brazo y pueden moverse para
enfocar la imagen.

La platina est localizada en la parte media del brazo y en ella se colocan las
laminillas de observacin, sujetas por un clip simple o por un clip mecnico. El clip
mecnico permite al operador mover una laminilla en cuatro direcciones (atrs, adelante,
derecha e izquierda) durante la observacin. El condensador de la platina est montado
dentro o por debajo de la platina y su funcin es transmitir un cono de luz sobre la
muestra. A menudo su posicin es fija en los microscopios simples, pero puede ajustarse
verticalmente en los modelos ms avanzados.

La curvada parte superior del brazo sostiene el revlver y uno o ms oculares. Los
microscopios ms avanzados tienen oculares para ambos ojos y son llamados
microscopios binoculares. El cuerpo del ocular contiene en s mismo una serie de espejos
y prismas y el tubo que los sostiene puede estar inclinado para facilitar la observacin. El
revlver sostiene de tres a cinco objetivos con lentes de diferente poder de amplificacin
y pueden ser rotados para posicionar cualquiera de ello debajo del cuerpo del ocular.
Idealmente un microscopio deber ser par focal, esto es, que la imagen debe permanecer
enfocada cuando los objetivos son c am biado s .

Las lentes de los objetivos forman una imagen real amplificada dentro del
microscopio, y las lentes del ocular amplifican an ms esta imagen primaria. El
aumento total es calculado multiplicando el aumento del objetivo por el aumento del
ocular. Por ejemplo, si se utiliza el objetivo 45x con un ocular 10x, el aumento total de la
muestra ser de 450x.

La parte ms importante del microscopio es el objetivo, el cual debe producir una

imagen clara y no slo amplificarla. Por ello, la resolucin es extremadamente importante.
La resolucin es la capacidad de una lente para separar o distinguir entre dos objetos
pequeos que estn demasiado cerca uno del otro. Mucho de la teora ptica respecto al
diseo de microscopios fue desarrollada por el fsico Alemn Ernst Abb en los 1870s.
La distancia mnima (d) entre dos objeto que los revela como entidades separadas est
dada por la ecuacin de Abb en la cual lambda () es la longitud de onda de la luz
utilizada para iluminar la muestra y (nsen) es la apertura numrica (AN).

0.5
d
nsen

Conforme d se vuelve ms pequea, la resolucin se incrementa y pueden

discernirse detalles ms finos de la muestra. La ecuacin anterior indica que el principal
factor en la resoluciones la longitud de onda de la luz empleada. La longitud de onda
debe ser ms corta que la distancia entre dos objetos o stos no sern vistos
claramente. As, la mayor resolucin se obtiene con luz de longitud de onda ms corta, la
del extremo azul del espectro visible (en el rango de 450 a 500 n m ).

Normalmente, un microscopio est equipado con tres o cuatro objetivos en el

rango de 4x a 100x. La distancia de trabajo de un objetivo es la distancia entre la
superficie frontal de la lente y la superficie del cubreobjetos (si es utilizado) o de la
muestra cuando est enfocada. Los objetivos con apertura numrica grande y gran poder
de resolucin tienen distancias de trabajo pequeas.

La mayora de los microscopios estndar vienen con ocular de 10x y tiene un lmite
superior de amplificacin de 1000x con aceite de inmersin. Un ocular de 15x puede
usarse con objetivos adecuados y obtener una amplificacin de 1500x. Cualquier
aumento superior no capacita a la persona para observar ms detalles. Puede construirse
un microscopio de luz capaz de amplificar hasta 10,000x, pero se estara amplificando
simplemente una imagen borrosa. Slo el microscopio electrnico proporciona suficiente
resolucin para hacer til tan alta capacidad de amplificacin.

La siguiente tabla muestra las propiedades de los objetivos ms comunes del

microscopio de luz.

Objetivo
Propiedades De escaneo Seco dbil Seco fuerte De inmersin
Amplificacin 4x 10x 40-45x 90-100x
Apertura numrica 0.10 0.25 0.55-0.65 1.25-1.4
Longitud focal aproximada (f) 40 mm 16 mm 4 mm 1.8-2.0 mm
Distancia de trabajo 17-20 mm 4-8 mm 0.5-0.7 mm 0.1 mm
Poder de resolucin aproximado 2.3 0.9 0.35 0.18
con luz de 450 nm (azul)

Microscopio de campo oscuro.

Clulas y organismos vivos no teidos pueden ser observados simplemente

cambiando la manera en la cual son iluminados. Un cono hueco de luz es enfocado sobre
la muestra de manera tal que la luz no reflejada y no refractada no entra al objetivo. Slo
la luz que ha sido reflejada o refractada por la muestra forma una imagen. El campo
alrededor de la muestra aparece negro, mientras que el objeto a observar est
brillantemente iluminado; debido a que el fondo es negro, este tipo de microscopia es
llamada microscopia de campo oscuro. Considerables estructuras internas son visibles en
microorganismos eucariotas. El microscopio de campo oscuro es utilizado para identificar
bacterias tales como Treponema palidium, el agente causante de la sfilis.

Microscopio de contraste de fases.

Las clulas vivas no pigmentadas no son claramente visibles en el microscopio de

campo claro debido a que hay poca diferencia en contraste entre las clulas y el agua.
As, los microorganismos a menudo deben ser fijados y teidos antes de ser observados
para incrementar el contraste y crear variaciones en color entre las estructuras celulares.
Un microscopio de contraste de fases convierte pequeas diferencias en el ndice de
refraccin y de densidad celular en variaciones de intensidad de luz fcilmente
detectables y es una excelente manera de observar clulas vivas.

El condensador de un microscopio de contraste de fases tiene un alto anular, un

disco opaco con un delgado anillo transparente el cual produce un cono hueco de luz.
Conforme este cono pasa a travs de la clula, algunos rayos de luz son curvados
debido a variaciones en densidad e ndice de refraccin dentro de la muestra y son
retardados cerca de de longitud de onda. La luz desviada es enfocada para formar una
imagen del objeto. El fondo de la imagen, formado por la luz no desviada, es brillante,
mientras que los objetos no teidos aparecen oscuros y bien definidos. A menudo se
utilizan filtros de color para mejorar la imagen.

El microscopio de contraste de fase es especialmente til para la deteccin de

componentes bacterianos tales como endosporas o inclusiones que contienen poli--

hidroxibutirato, polimetafosfato, azufre y otras sustancias. stas son claramente visibles

debido a que tiene ndices de refraccin marcadamente diferentes al del agua. El
microscopio de contraste de fases es tambin ampliamente utilizado para el estudio de
clulas eucariotas.

Microscopio de fluorescencia.

Los microscopios hasta ahora considerados producen una imagen a partir de la

luz que pasa a travs de la muestra. Un objeto tambin puede ser observado debido a
que emite luz, y esto es la base del microscopio de fluorescencia. Cuando algunas
molculas absorben energa radiante se excitan y despus liberan la energa capturada
como luz. Cualquier luz emitida por una molcula excitada tendr una menor longitud de
onda (o ser de menor energa) que la radiacin absorbida originalmente.

El microscopio de fluorescencia expone una muestra a luz ultravioleta, violeta, o

azul y forma una imagen de los objetos con la luz fluorescente resultante. Una lmpara de
vapor mercurial u otra fuente produce un rayo intenso y el calor transferido es limitado por
un filtro infrarrojo especial. La luz pasa a travs de un filtro excitador que transmite slo la
longitud de onda deseada. Un condensador de campo oscuro proporciona un campo
oscuro contra el cual brillan los objetos fluorescentes. Usualmente la muestra ha sido
teida con molculas colorantes llamadas fluorocromos que fluorescen brillantemente al
ser expuestas a luz de una longitud de onda especfica, pero algunos microorganismos
son autofluorescentes. El microcopio forma una imagen a partir de la luz emitida cuando
el objeto fluoresce. Un filtro de barrera posicionado despus de las lentes del objetivo
remueve cualquier luz ultravioleta remanente, la cual podra daar los ojos del
observador, o la de color azul o violeta, la cual podra reducir el contraste de la imagen.
 La microscopia de fluorescencia se ha vuelto una herramienta esencial en
microbiologa mdica y en ecologa microbiana.

2.2 Preparacin y tincin de muestras (fijacin, colorantes y tincin simple,

tincin diferencial).

Aunque los microorganismos vivos pueden ser examinados directamente con el

microscopio de luz, a menudo deben ser fijados y teidos para incrementar su visibilidad,
acentuando caractersticas morfolgicas especficas y preservndolas para su estudio
posterior.

Fijacin.

Las clulas teidas vistas al microscopio deben recordar a la clula viva tanto
como sea posible. La fijacin es el proceso mediante el cual las estructuras externas e
internas de las clulas y microorganismos son preservados y fijados en una posicin
definida. Esto inactiva las enzimas que podran alterar la morfologa celular

y endurece las estructuras celulares de manera que no cambien durante el teido y la

observacin. El microorganismo es usualmente muerto y adherido firmemente a la
laminilla durante la fijacin.
Hay dos tipos fundamentales diferentes de fijacin. (1) Los bacterilogos fijan las
muestras de bacterias al calor, pasando la laminilla, previamente secada al aire,
cuidadosamente por la flama del mechero. Esto preserva adecuadamente la morfologa
de las estructuras externas, pero no las estructuras celulares internas. (2) La fijacin
qumica debe ser usada para proteger las finas estructuras subcelulares y la morfologa
de microorganismos ms grandes y delicados. Los qumicos para fijacin penetran las
clulas y reaccionan con los componentes celulares, usualmente protenas y lpidos, para
volverlos inactivos, insolubles e inmviles. Las mezclas comunes para fijacin contienen
componentes tales como etanol, cido actico, cloruro mercrico, formaldehdo y
glutaraldehdo.

Uso de colorantes.

Los muchos tipos de colorantes usados para teir microorganismos tiene dos
caractersticas en comn. (1) Tienen grupos cromforos, es decir, grupos con dobles
enlaces que dan al colorante su color. (2) Pueden unirse con las clulas por enlaces
inicos, covalentes o hidrofbicos. Por ejemplo, un colorante cargado positivamente se
une a una estructura celular cargada negativamente.

Los colorantes ionizables pueden dividirse en dos clases generales en base a la

naturaleza de sus grupos cargados.

1. Colorantes bsicos. Son catinicos o tienen grupos cargados positivamente (usualmente

algunos en forma de nitrgeno pentavalente) y se venden generalmente como sales de
cloruro. Los colorantes bsicos se unen a molculas cargadas negativamente, tales como
los cidos nucleicos y muchas protenas. Debido a que la superficie de las clulas
 bacterianas est tambin cargada negativamente, los colorantes bsicos son de los ms
comnmente usados en bacteriologa. Dentro de este grupo se encuentran el azul de
metileno, la fucsina bsica, el cristal violeta, la safranina y la verde malaquita.

2. Colorantes cidos. Son aninicos o poseen grupos cargados negativamente tales como el
carboxilo (-COOH) e hidroxilos fenlicos (-OH). Los colorantes cidos, debido a su carga
negativa, se unen a estructuras celulares cargadas positivamente. Dentro de este grupo
se encuentran la eosina, el rosa de bengala y la fucsina cida.

El pH puede afectar la efectividad del colorante puesto que la naturaleza y el grado

de carga de los componentes celulares cambia con el pH. De esta manera, los colorantes
aninicos tien mejor bajo condiciones de acidez cuando las protenas y muchas otras
molculas llevan una carga positiva; los colorantes bsicos son ms efectivos a pH altos.

Aunque las interacciones inicas son probablemente el medio ms comn de

unin de los colorantes, tambin pueden hacerlo mediante enlaces covalentes o debido a
sus caractersticas de solubilidad. El Sudan III (negro sudan), por ejemplo, tie
selectivamente los lpidos debido a que es lpido soluble, pero no se disuelve en las
porciones acuosas de la clula.

A menudo los microorganismos pueden ser teidos de manera satisfactoria por

tincin simple, en la cual se usa slo un agente de tincin. El valor de la tincin simple
radica en su simplicidad y facilidad de uso. Se cubre la muestra fijada con colorante
durante un tiempo apropiado, se lava el exceso de colorante con agua y se deja la
laminilla a secar. Colorantes bsicos como el cristal violeta, el azul de metileno y la
carbolfucsina son frecuentemente usados para determinar el tamao, forma y arreglo de
las bacterias.

Los procedimientos de tincin diferencial dividen a las bacterias en grupos

separados en base a sus propiedades de tincin. La tincin de Gram, desarrollada en
1884 por el Dans Christian Gram, es el mtodo de tincin ms ampliamente usado en
bacteriologa. ste es un procedimiento de tincin diferencial debido a que divide a las
bacterias en dos clases, gram negativos y gram positivos. Otra tcnica muy usada de
tincin diferencial es la tincin cido-resistente.

2.3 Microscopia electrnica.

Microscopio electrnico de transmisin.

El mejor microscopio de luz tiene un lmite de resolucin de cerca de 0.2 . Debido

a que las bacterias usualmente tienen un dimetro de 1 , con este tipo de microscopio
slo se puede apreciar su forma general y sus principales caractersticas morfolgicas. La
estructura interna a detalle de los microorganismos ms grandes tampoco puede ser
estudiada de manera efectiva con el microscopio de luz. Estas limitaciones surgen de la
naturaleza de la longitud de onda de la luz visible y no de una inadecuacin del
microscopio de luz en si mismo.

Hay que recordar que la resolucin de un microscopio de luz se incrementa con

una disminucin de la longitud de onda de la luz empleada para la iluminacin. Un rayo
de electrones se comporta como radiacin y puede ser enfocado mucho mejor que la luz
en un microscopio de luz. Si los electrones iluminan la muestra la resolucin del
microscopio se incrementa enormemente debido a que la longitud de onda de la radiacin
es cercana a 0.005 nm, aproximadamente 100,000 veces ms corta que la de la luz
visible. El microscopio electrnico de transmisin tiene una resolucin prctica de
aproximadamente 1,000 veces mejor que la del microscopio de luz; en muchos
microscopios electrnicos pueden distinguirse puntos 5 0.5 nm cercanos entre s y la
amplificacin til es de casi 100,000x.

Un microscopio electrnico de transmisin moderno (TEM) es complejo y

sofisticado, pero el principio bsico detrs de su operacin puede ser entendido
fcilmente. Un filamento caliente de tungsteno en el emisor de electrones genera un rayo
de electrones que es luego enfocado sobre la muestra por el condensador. Puesto que
los electrones no pueden pasar a travs de lentes de vidrio, para enfocar el rayo se
utilizan electromagnetos con forma de dona llamados lentes magnticos. La columna que
contiene las lentes y la muestra debe estar al alto vaco para lograr una imagen clara
debido a que los electrones son deflectados al colisionar con molculas en el aire. La
muestra dispersa los electrones cuando pasan a travs de ella y el rayo es enfocado por
las lentes magnticas para formar una imagen amplificada y visible de la muestra sobre
una pantalla fluorescente.
Regiones ms densas de la muestra dispersa ms electrones y por lo tanto
aparece ms oscura en la imagen puesto que pocos electrones golpean esa rea de la
pantalla. En contraste, regiones electro-transparentes son ms brillantes. La pantalla
puede tambin ser movida hacia un lado y la imagen capturada en pelcula fotogrfica
para su registro.

Microscopio electrnico de barrido.

El microscopio descrito previamente forma una imagen a partir de la radiacin que
ha pasado a travs de la muestra. El microscopio electrnico de barrido (SEM), en
cambio, ha sido utilizado para examinar la superficie de los microorganismos en gran
detalle; muchos instrumentos tienen una resolucin de 7 nm o menos. El SEM difiere de
otros microscopios electrnicos en que produce la imagen a partir de electrones emitidos
por la superficie del objeto, ms que de los electrones transmitidos.

El SEM escanea un rayo de electrones que incide sucesivamente sobre la

muestra. Cuando el rayo golpea un rea en particular, los tomos de la superficie
descargan un delgado bao de electrones llamado electrones secundarios los cuales son
atrapados por un detector especial. Los electrones secundarios entran al detector
golpeando un cintilador causando que ste emita flashes de luz que un fotomultiplicador
convierte en una corriente elctrica y la amplifica. La seal es enviada a un tubo de rayos
catdicos y produce una imagen como de televisin la cual puede ser vista o
fotografiada.

El nmero de electrones secundarios que alcanzan el detector depende de la

naturaleza de la superficie de la muestra. Cuando el rayo de electrones golpea un rea
elevada, un gran nmero de electrones secundarios entran al detector; en contraste,
pocos electrones escapan a una depresin en la superficie y alcanzan el detector. As, las
reas elevadas aparecen ms brillantes sobre la pantalla y las depresiones ms oscuras.
El resultado es una imagen tridimensional muy realista de la superficie del
microorganismo con gran enfoque y profundidad.
CAPTULO III. ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LA CLULA PROCARIOTA.

3.1 Tamao, forma y organizacin procariota.

Podra esperarse que los organismos pequeos y relativamente simples como las
bacterias fueran uniformes en forma y tamao. Aunque es verdad que muchas bacterias
son similares en morfologa, hay una remarcable cantidad de variaciones. Se describen
aqu los principales patrones morfolgicos y algunas variantes interesantes para la
supervivencia bacteriana.

Forma.

Las bacterias ms comnmente encontradas tienen una o dos formas. Los cocos son
clulas aproximadamente esfricas. Pueden existir como clulas individuales, pero
tambin estn asociados en arreglos caractersticos que con frecuencia son tiles en la
identificacin de bacterias. Los diplococos se presentan cuando los cocos se dividen y
permanecen juntos formando pares (por ejemplo Neisseria). Cadenas largas de cocos
(estreptococos) resultan cuando las clulas se adhieren despus de repetidas divisiones
en un plano; este patrn se observa en los gneros Streptococcus, Enterococcus y
Lactococcus.
Staphylococcus se divide en planos aleatorios para formar grupos irregulares como
racimos de uvas. La divisin en dos o tres planos puede producir grupos simtricos de
cocos. Los miembros del gnero Micrococcus a menudo se dividen en dos planos para
formar grupos cuadrados de cuatro clulas llamados ttradas. En el gnero Sarcina los
cocos se dividen en tres planos produciendo paquetes cbicos de ocho clulas.

La otra forma bacterial comn es la de bastn, a menudo llamada bacilo. Bacillus

megaterium es un tpico ejemplo de una bacteria con forma de bastn. Los bacilos
difieren considerablemente en su ancho y longitud; los cocobacilos son tan cortos y
anchos que parecen cocos. La forma del bastn vara entre especies y puede ser plana,
redondeada, en forma de cigarro, o bifurcada. Aunque muchos bacilos se presentan
solos, pueden permanecer juntos para formar pares o cadenas. Unas cuantas bacterias
con forma de bastn, los vibrios, estn curvados para formar comas distintivas o espirales
incompletos.

Las bacterias pueden asumir una gran variedad de formas, aunque a menudo son
simples esferas o bastones. Los Actinomycetes forman de manera caracterstica largos
filamentos multinucleados o hifas que pueden ramificarse para producir una red llamada
micelio. Muchas bacterias tienen forma de largos bastones rotados en espirales o hlices;
stos son llamados espirilos si son rgidos y espiroquetas si son flexibles. La bacteria con
forma de oval a pera Hyphomicrobium produce un brote en el extremo de una larga hifa.
Unas pocas bacterias son de hecho planas. Por ejemplo, E. Walsby descubri una
bacteria cuadrada viviendo en pozas saladas. Esta bacteria tiene forma de caja aplanada,
de cuadrada a rectangular, de cerca de 2 por 2 a 4 , y slo 0.25 de espesor.
Finalmente, algunas bacterias son variables en forma y carecen de una forma
simple y caracterstica. stas son llamadas pleomrficas incluso aunque pueden,
como Corynebacterium, tener una forma general semejante a un bastn.
 Tamao.

Las bacterias varan en tamao mucho ms que en forma. Las ms pequeas (por
ejemplo algunos miembros del gnero Mycoplasma) tienen de 100 a 200 nm de dimetro,
aproximadamente el tamao de los virus ms grandes (los poxvirus). Escherichia coli, un
bacilo de tamao promedio, es de 1.1 a 1.5 de ancho por 2.0 a
6.0 de largo. Unas pocas se han vuelto bastante largas; algunas espiroquetas alcanzan
ocasionalmente 500 de longitud y la cianobacteria Oscillatoria tiene cerca de 7 de
dimetro (el mismo dimetro que un eritrocito). Recientemente, se ha descubierto una
bacteria enorme en el intestino de un pez Acanthurus nigrofuscus (pez cirujano caf).
Epulopiscium fishelsoni crece tan grande como 600 por 80 , un poco ms pequea
que un guin de imprenta. Ahora es claro que unas cuantas bacterias son mucho ms
grandes que la clula eucariota promedio.

Organizacin de la clula procariota.

En las clulas procariotas se encuentran una variedad de estructuras. No todas

las estructuras se encuentran en cada gnero. Ms an, las clulas gram negativas y las
gram positivas difieren, particularmente con respecto a su pared celular. A pesar de
estas variaciones, las clulas procariotas son consistentes en su estructura fundamental y
en sus componentes ms importantes.

Casi siempre las clulas procariotas estn limitadas por una pared celular
qumicamente compleja. Dentro de esta pared, y separada por un espacio periplsmico,
se encuentra la membrana plasmtica. Esta membrana puede estar invaginada para
formar estructuras membranales internas simples. Puesto que las clulas procariotas no
contienen organelos membranales internos, su interior parece morfolgicamente simple.
El material gentico est localizado en una regin discreta, el nucleoide, y no est
separado del citoplasma circundante por membranas. Los ribosomas y las inclusiones
citoplasmticas estn dispersos en la matriz citoplasmtica. Tanto las gram positivas
como las gram negativas pueden utilizar flagelos para la locomocin. Adems, muchas
clulas estn rodeadas por una cpsula o delgada capa externa a la pared celular.

Las clulas procariotas son morfolgicamente ms simples que las eucariotas.

3.2 Membranas de clulas procariotas (membrana plasmtica y sistemas de

membranas internas).

Las membranas son un requerimiento absoluto para todos los organismos vivos. La
clula debe interactuar de una manera selectiva con su ambiente, ya sea el ambiente
interno de un organismo multicelular o un menos protegido y ms variable ambiente
externo. Las clulas deben no solo ser capaces de adquirir nutrientes y eliminar
desechos, sino que tambin deben mantener su interior en un estado constante
altamente organizado a pesar de los cambios externos. La membrana plasmtica rodea al
citoplasma tanto de clulas procariotas como eucariotas. Esta membrana es el principal
punto de contacto con el ambiente de la clula y es por lo tanto responsable de muchas
de sus relaciones con el mundo exterior. Para entender la funcin de las membranas es
necesario familiarizarse con su estructura, particularmente con la de la membrana
plasmtica.

La membrana plasmtica.

Las membranas contienen tanto protenas como lpidos, aunque la proporcin

exacta entre ambos vara ampliamente. La mayora de los lpidos asociados a
membranas son estructuralmente asimtricos con extremos polares y no polares y son
llamados amfipticos. El extremo polar interacta con el agua y es hidroflico; el extremo
no polar es insoluble en agua y tiende a asociarse con otro igual. Esta propiedad de los
lpidos los capacita para formar una bicapa en las membranas. Las superficies externas
son hidroflicas, mientras que los extremos hidrofbicos estn enterrados en el interior,
lejos del agua circundante. Muchos de estos lpidos amfipticos son fosfolpidos. Las
membranas bacterianas usualmente difieren de las membranas eucariotas en que
carecen de esteroles tales como el colesterol. Sin embargo, muchas membranas
bacterianas contienen molculas pentacclicas parecidas al esterol llamadas hopanoides.
Los hopanoides son sintetizados a partir de los mismos precursores que los esteroides.
Como los esteroides en las eucariotas, los hopanoides probablemente estabilizan la
membrana bacteriana. Los lpidos de membrana estn organizados en dos capas, u
hojas, de molculas arregladas extremo con extremo.

Muchas membranas archeobacterianas difieren de otras membranas bacterianas

en que tienen una monocapa con molculas de lpidos abarcando la membrana entera.

Las membranas celulares son estructuras muy delgadas, de 5 a 10 nm de espesor,

y slo pueden ser vistas con el microscopio electrnico. La tcnica de criofractura ha sido
usada para romper membranas por el centro de la bicapa lipdica, partindola en dos y
exponiendo el interior. De esta manera se ha descubierto que muchas membranas,
incluyendo la plasmtica, tienen una compleja estructura interna. Las pequeas
partculas globulares vistas en estas membranas son protenas de membrana que se
encuentran dentro de la bicapa lipdica.

El modelo de estructura de membrana ms ampliamente aceptado en la actualidad

es el modelo de mosaico fluido de S. Jonathan Singer y Garth Nicholson. Ellos distinguen
entre dos tipos de protenas de membrana. Las protenas perifricas estn escasamente
conectadas a la membrana y pueden ser fcilmente removidas. Son solubles en solucin
acuosa y constituyen del 20 al 30 % de las protenas totales de la membrana. Cerca del
70 al 80 % de las protenas de membrana son protenas integrales, las cuales no se
extraen tan fcilmente de la membrana y son insolubles en solucin acuosa cuando
estn libres de lpidos.

Las protenas integrales, como los lpidos de membrana, son amfipticas; sus
regiones hidrofbicas estn enterradas en la fase lipdica mientras que las porciones
hidroflicas se proyectan hacia la superficie de la membrana. Algunas de estas protenas
se extienden incluso a travs de toda la capa de lpidos. Las protenas integrales pueden
difundirse lateralmente a lo largo de la superficie para tomar nuevas posiciones, pero no
pueden moverse o rotar hacia la otra capa lipdica. A menudo hay carbohidratos unidos a
la superficie externa de las protenas de la membrana plasmtica, en donde desempean
funciones importantes.

La membrana celular es uno de los sistemas ms altamente organizados y

asimtricos, y adems flexible y dinmico. Aunque las membranas tienen aparentemente
un diseo bsico comn, hay amplias variaciones tanto en estructura como en
capacidades funcionales.

La membrana plasmtica de las clulas bacterianas debe desempear una

increble variedad de funciones de manera exitosa. La membrana plasmtica retiene al
citoplasma, particularmente en clulas sin pared celular, y lo separa del medio
circundante. La membrana plasmtica tambin sirve como una barrera permeable
selectiva: permite el paso de algunos iones y molculas particulares, ya sea hacia adentro
o hacia afuera de la clula, mientras que impide el paso de otros. De esta manera la
membrana previene la prdida de componentes esenciales a travs de fugas al mismo
que tiempo que permite el movimiento de otras molculas. Debido a que muchas
sustancias no pueden cruzar la membrana plasmtica sin ayuda, sta debe auxiliar estos
movimientos cuando sea necesario. Usualmente se emplean sistemas de transporte para
realizar tareas tales como la toma de nutrientes, la excrecin de desechos y la secrecin
de protenas. La membrana plasmtica bacteriana es tambin el sitio de localizacin de
una variedad de procesos metablicos cruciales: respiracin, fotosntesis, y sntesis de
lpidos y constituyentes de la pared celular. Finalmente, la membrana contiene molculas
receptoras especiales que ayudan a la bacteria a detectar y responder a qumicos en el
ambiente. Claramente se ve que la membrana plasmtica es esencial para la
supervivencia de los microorganismos.

Sistemas de membranas internas.

Aunque el citoplasma bacteriano no contiene organelos membranales complejos

como las mitocondrias o los cloroplastos, pueden observarse estructuras membranales
de diversos tipos. Una estructura comn es el mesosoma. Los mesosomas son
invaginaciones de la membrana plasmtica en forma de vesculas, tbulos o lamelas.
Estas estructuras se encuentran tanto en bacterias gram positivas como gram negativas,
aunque generalmente son ms prominentes en las primeras.

A pesar de los aos de investigacin sobre mesosomas, su funcin exacta es an

desconocida. Algunas veces se observan cerca de los septos o de la pared celular
en bacterias en divisin, y algunas veces se les observa unidos al cromosoma bacteriano.
As, pueden estar involucrados en la formacin de la pared celular durante la divisin o
jugar un papel en la replicacin del cromosoma y su distribucin hacia las clulas hijas.
Los mesosomas tambin pueden estar involucrados en procesos secretorios.

Actualmente muchos bacterilogos creen que los mesosomas son estructuras

generadas durante la fijacin qumica de la bacteria para microscopia electrnica.
Posiblemente representan partes de la membrana plasmtica que son qumicamente
diferentes y ms desorganizadas debido a la fijacin. Sin embargo los mesosomas han
sido vistos ocasionalmente en bacterias criofracturadas y por lo tanto algunas veces
pueden estar presentes en clulas vivas. Resolver esta controversia requiere por
supuesto de investigacin adicional.

Muchas bacterias tienen sistemas de membranas internas muy diferentes a los

mesosomas. Plegamientos de la membrana plasmtica pueden volverse extensos y
complejos en bacterias fotosintticas tales como las cianobacterias y las bacterias
prpura, o en bacterias con actividad respiratoria muy alta como las bacterias
nitrificantes. Estos sistemas pueden ser agregados de vesculas esfricas, vesculas
 aplanadas, o membranas tubulares. Su funcin parece ser proporcionar una gran
superficie de membrana para mayores actividades metablicas.

3.3 Matriz citoplasmtica (inclusiones celulares, ribosomas).

El citoplasma procariota, a diferencia del eucariota, carece de organelos de unidad

membranal. La matriz citoplsmica es la sustancia localizada entre la membrana
plasmtica y el nucleoide. Esta matriz es en gran medida agua (cerca del 70% de la masa
bacteriana es agua). La membrana plasmtica y cada cosa hacia su interior es llamada
protoplasto, as, la matriz citoplasmtica es la mayor parte del protoplasto.

Inclusiones celulares.

Una gran variedad de inclusiones celulares (cuerpos de inclusin), grnulos de

materiales orgnicos e inorgnicos, son vistos a menudo dentro de la matriz
citoplasmtica de las bacterias con ayuda del microscopio electrnico. Algunas de estas
inclusiones no estn rodeadas por una membrana y se encuentran libres en el citoplasma
(los grnulos de polifosfato y los de cianoficina, por ejemplo); otras, en cambio, estn
encerradas por una membrana monocapa no unitaria de 2.0 a 4.0 nm de espesor.
Ejemplos de estas inclusiones rodeadas por membranas son los grnulos de poli--
hidroxibutirato (PHB), algunos grnulos de glucgeno y azufre, carboxisomas y vacuolas
de gas. Las membranas de las inclusiones celulares varan mucho en composicin;
algunas son de naturaleza protenica, mientras que otras contienen lpidos.
No todas las bacterias poseen todos los tipos de inclusiones, e incluso existen
bacterias que no poseen ninguna de ellas. Se trata, por tanto, de estructuras opcionales
producidas solamente por algunas clases de procariotas. Una breve descripcin de
algunas de las inclusiones de mayor importancia se da a continuacin.

Las inclusiones orgnicas usualmente contienen glucgeno o poli--

hidroxibutirato. El glucgeno es un polmero de unidades de glucosa compuesto de largas
cadenas unidas por enlaces (1,4) glicosdicos y cadenas ramificadas conectadas por
enlaces (1,6) glicosdicos. El poli--hidroxibutirato contiene molculas de -
hidroxibutirato unidas por enlaces ster entre grupos carboxilo e hidroxilos de molculas
adyacentes. Usualmente slo uno de estos polmeros se encuentra en una especie, pero
las bacterias prpura fotosintticas tienen ambos. El PHB se acumula en inclusiones
distintivas, de cerca de 0.2 a 0.7 de dimetro, que son fcilmente teibles con negro
Sudan para microscopia de luz y que son fcilmente visibles con microscopio electrnico.
El glucgeno est disperso ms homogneamente como pequeos grnulos (cerca de 20
a 100 nm de dimetro) a lo largo de la matriz y a menudo slo pueden ser vistos con
microscopio electrnico. Si las clulas contienen una gran cantidad de glucgeno, su
tincin con una solucin de yodo las volver caf rojizas. Las inclusiones de glucgeno y
de PHB son almacn de reserva de materiales para proporcionar energa y para
biosntesis. Muchas bacterias tambin almacenan carbono en forma de gotas de lpidos.

Las cianobacterias tienen dos inclusiones orgnicas distintivas. Los grnulos de

cianoficina estn compuestos de polipptidos que contienen cantidades
aproximadamente iguales de los aminocidos arginina y cido asprtico. Estos grnulos
son a menudo lo suficientemente grandes para ser visibles en el microscopio de luz y
almacenan nitrgeno extra para la bacteria. Los carboxisomas estn presentes en
muchas cianobacterias, bacterias nitrificantes y tiobacilos. stos grnulos son polidricos,
de cerca de 100 nm de dimetro y contiene la enzima ribulosa-1,5-bifosfato carboxilasa
en un arreglo paracristalino. Su funcin es servir como reserva de esta enzima y pueden
ser un sitio de fijacin de CO2.

Unas inclusiones orgnicas ms remarcables, las vacuolas de gas, estn

presentes en muchas cianobacterias, en bacterias fotosintticas prpuras y verdes y en
algunas otras formas acuticas como Halobacterium y Thiothrix. Estas bacterias flotan en
o cerca de la superficie debido a que las vacuolas de gas les dan flotacin. Las vacuolas
de gas son agregados de un enorme nmero de estructuras cilndricas, pequeas y
huecas, llamadas vesculas de gas. La pared de las vesculas de gas no contiene lpidos
y est compuesta de una simple y pequeas protena. Estas subunidades de protena se
ensamblan para formas un cilindro rgidamente cerrado que es hueco e impermeable al
agua, pero permeable a gases atmosfricos. Las bacterias con vacuolas de gas pueden
regular su flotacin para moverse a la profundidad necesaria para obtener niveles
adecuados de intensidad de luz, concentracin de oxgeno y de nutrientes. Estas
bacterias descienden simplemente colapsando sus vesculas, y flotan hacia la superficie
cuando son formadas nuevas vesculas.

Se han observado dos tipos principales de inclusiones inorgnicas. Muchas

bacterias almacenan fosfato como grnulos de polifosfato o grnulos de volutina. El
polifosfato es un polmero lineal de ortofosfatos unidos por enlaces ster. As, los
grnulos de volutina funcionan como almacn de reserva de fosfatos, un componente
importante de constituyentes celulares tales como los cidos nucleicos. En algunas
clulas actan como reserva de energa y el polifosfato puede servir como una fuente de
energa en algunas reacciones.

En ocasiones estos grnulos son llamados grnulos metacromticos debido

precisamente a que muestran un efecto metacromtico, esto es, aparecen rojos o con
diferente sombreado en azul cuando son teidos con los colorantes azul de metileno o
azul de toluidina. Algunas bacterias tambin almacenan azufre temporalmente como
grnulos de azufre, un segundo tipo de inclusiones inorgnicas. Por ejemplo, las
bacterias prpuras fotosintticas pueden usar sulfuro de hidrgeno como donador de
electrones en la fotosntesis y acumulan el azufre resultante ya sea en el espacio
periplsmico o en glbulos especiales en el citoplasma.

Ribosomas.

La matriz citoplasmtica procariota est a menudo empacada con ribosomas, los

cuales tambin se encuentra estrechamente adheridos a la membrana celular. Con baja
amplificacin de micrografas electrnicas, los ribosomas se observan como pequeas
partculas sin rasgos distintivos, pero son de hecho objetos muy complejos formados
tanto de protenas como de cido ribonucleico (RNA). Ellos son el sitio de sntesis de
protenas: los ribosomas de la matriz sintetizan protenas destinadas a permanecer dentro
de la clula, mientras que los ribosomas de la membrana plasmtica fabrican protenas
para transporte al exterior. Los ribosomas procariotas son ms pequeos que los
eucariotas. Son comnmente llamados ribosomas 70S y tienen dimensiones de cerca de
14 a 15 nm por 20 nm, un peso molecular de aproximadamente 2.7 millones, y estn
construidos por dos subunidades llamadas 50S y 30S. La S de 70S y valores similares se
adopta por las unidades Svedberg, las cuales son las unidades del coeficiente de
sedimentacin, una medida de la velocidad de sedimentacin en una centrifuga. El
coeficiente de sedimentacin est en funcin del peso molecular de la partcula, su
volumen y su forma. Normalmente las partculas ms pesadas y compactas tienen
 nmero de Svedberg ms grandes o sedimentan ms rpidamente. Debe enfatizarse que
los valores de Svedberg no son directamente proporcionales al peso molecular: el peso
de los ribosomas 70S es igual a la suma de los pesos moleculares de sus subunidades
50S y 30S, aunque la suma de 50 y 30 es 80 y no 70.
Los ribosomas de la matriz citoplasmtica eucariota son 80S y de cerca de 22 nm
de dimetro. A pesar de sus diferencias en tamao, ambos tipos de ribosomas estn
compuestos de manera similar por una subunidad grande y una pequea.

3.4 Nucleoide.

Probablemente la diferencia ms marcada entre las clulas procariotas y las

eucariotas es la manera en la cual est empacado su material gentico. Las clulas
eucariotas tienen dos o ms cromosomas contenidos dentro de un organelo delimitado
por membranas, el ncleo. En contraste, las procariotas carecen de un ncleo
delimitado por membranas. El cromosoma procariota, casi siempre uno slo, circular y
formado por DNA de doble cadena, se localiza en una regin de forma irregular llamada
nucleoide (otros nombres que recibe son cuerpo nuclear, cuerpo de cromatina, y regin
nuclear). Aunque el nucleoide parece variar con el mtodo de fijacin y tincin, en las
micrografas electrnicas a menudo se observan fibras las cuales muy probablemente
son DNA. El nucleoide tambin es visible con el microscopio de luz si se utiliza colorante
de Feulgen el cual reacciona especficamente con el DNA. Una clula puede tener ms
de un nucleoide cuando ocurre la divisin celular despus de que el material gentico se
ha duplicado. En bacterias creciendo activamente el nucleoide tiene proyecciones que se
extienden dentro de la matriz citoplasmtica; presumiblemente estas proyecciones
contienen DNA que est siendo trascrito activamente para producir RNA.

Cuidadosos estudios de microscopia electrnica han mostrado a menudo que el

nucleoide est en contacto con los mesosomas o con la membrana plasmtica. En
nucleoides aislados tambin se han encontrado membranas. Hay por lo tanto evidencia
de que el DNA bacteriano est unido a membranas celulares, y las membranas pueden
estar involucradas en la separacin del DNA hacia las clulas hijas durante la divisin
celular.

Se han aislado nucleoides intactos y libres de membranas. Su anlisis qumico

revela que estn compuestos de cerca del 60 % de DNA, algo de RNA y una pequea
cantidad de protenas. En Escherichia coli, un bacilo de 2 a 6 de longitud, el DNA
circular mide cerca de 1400 ; obviamente debe haber un empaquetamiento muy
eficiente para colocarlo dentro del nucleoide. El DNA est extensamente enrollado,
probablemente con ayuda de protenas nucleoides, las cuales difieren de las protenas
histonas presentes en el ncleo eucariota.

Muchas bacterias poseen plsmidos adems de su cromosoma. Los plsmidos

son molculas de DNA circular de doble cadena que pueden existir y replicarse
independientemente del cromosoma o pueden estar integrados con l; en cualquier caso
los plsmidos son heredados a la descendencia. Los plsmidos no se requieren para el
crecimiento y la reproduccin, aunque pueden llevar genes que dan a las bacterias
ventajas selectivas. Los genes de los plsmidos pueden volver a las bacterias resistentes
a drogas, darles nuevas habilidades metablicas, hacerlas patgenas, o dotarlas con
otras propiedades.

3.5 Pared celular procariota.

 La pared celular es una de las partes ms importantes de la clula procariota por
diversas razones. Excepto para los micoplasmas y algunas arqueobacterias, la mayora
de las bacterias tiene paredes slidas que les dan forma y las protegen de la lisis
osmtica.
La pared celular de muchos patgenos tiene componentes que contribuyen a su
patogenicidad. La pared puede proteger a la clula de sustancias txicas y es el sitio de
accin de diversos antibiticos.

Despus de que Christian Gram desarroll la tincin de Gram en 1884, se hizo

evidente que las bacterias podan ser divididas en dos grupos principales en base a su
respuesta a la tincin de Gram. Las bacterias Gram-positivas se tien de prpura,
mientras que las Gram-negativas se tien de rosa o rojo. La verdadera diferencia
estructural entre estos dos grupos se volvi clara con el advenimiento de la microscopia
electrnica. La pared de las clulas Gram-positivas consiste en una sola capa de
peptidoglicano o murena homognea y de 20 a 80 nm de espesor la cual se encuentra
hacia el exterior de la membrana plasmtica. En contraste, la pared celular de las Gram-
negativas es muy compleja. Tiene una capa de peptidoglicano de 1 a 3 nm de espesor
rodeada por una membrana externa de 7 a 8 nm de espesor. Los microbilogos llaman
comnmente a todas estas estructuras exteriores a la membrana plasmtica la envoltura
celular. Este trmino incluye a la pared celular y a otras estructuras como las cpsulas,
cuando estn presentes.

En las micrografas electrnicas de las bacterias Gram-negativas se observa

frecuentemente un espacio entre la membrana plasmtica y la membrana externa, y en
algunas ocasiones se observa un espacio similar, aunque ms pequeo entre la
membrana plasmtica y la pared celular de bacterias Gram-positivas.
Este espacio es llamado espacio periplsmico. Evidencia reciente indica que el
espacio periplsmico puede estar ocupado por una red laxa de peptidoglicano.
Posiblemente es ms un gel que un espacio ocupado por fluido. La sustancia que ocupa
el espacio periplsmico es el periplasma. El tamao estimado del espacio periplsmico en
las bacterias Gram-negativas est en el rango de 1 nm hasta tanto como 71 nm. Algunos
estudios recientes indican que puede constituir del 20 al 40 % del volumen celular total
(cerca de 30 a 70 nm), pero se requieren ms estudios para establecer un valor ms
exacto. El espacio periplsmico de las bacterias Gram-negativas contiene muchas
protenas que participan en la adquisicin de nutrientes (por ejemplo, enzimas hidrolticas
que atacan cidos nucleicos y molculas fosforiladas), y protenas involucradas en el
transporte de materiales hacia el interior celular. Las bacterias desnitrificantes y las
quimiolitoautotrficas a menudo tienen protenas transportadoras de electrones en su
periplasma. El espacio periplsmico tambin contiene enzimas involucradas en la sntesis
de peptidoglicano y en la modificacin de compuestos txicos que pudieran daar a la
clula. Las bacterias Gram-positivas pueden no tener un espacio periplsmico visible y no
parecen tener muchas protenas periplsmicas; ms an, secretan diversas enzimas que
ordinariamente seran periplsmicas en las bacterias Gram-negativas. Tales enzimas
secretadas son comnmente llamadas exoenzimas.
Las arqueobacterias difieren de otras bacterias en muchos aspectos. Aunque
pueden ser positivas o negativas, sus paredes celulares son distintivas tanto en
estructura como en composicin qumica. La pared carece de peptidoglicano y est
compuesta de protenas, glicoprotenas y polisacridos.

Estructura del peptidoglicano.

 El peptidoglicano o murena es un enorme polmero compuesto de muchas
subunidades idnticas. El polmero contiene dos derivados de azcares, N-
acetilglucosamina y cido N-acetilmurmico (el ter lactil de la N-acetilglucosamina), y
varios aminocidos diferentes, tres de los cuales (cido D-glutmico, D-alanina y cido
meso-diaminopimlico) no se encuentran en las protenas.
El esqueleto de este polmero est compuesto de N-acetilglucosamina y cido N-
acetilmurmico alternados. Una cadena polipeptdica de cuatro D- y L-aminocidos
alternados est conectada al grupo carboxil del cido N-acetilmurmico. Muchas
bacterias substituyen otro diaminocido, usualmente L-lisina, en la tercera posicin por el
cido meso-diaminopimlico.

Cadenas de subunidades de peptidoglicano se forman mediante enlaces

entrecruzados entre los pptidos. A menudo el grupo carboxil de la D-alanina terminal
est conectada directamente al grupo amino del cido diaminopimlico, pero en su lugar
puede ser utilizado un puente peptdico. La mayora de las paredes celulares Gram-
negativas carecen de este puente peptdico. Estos entrecruzamientos resultan al final en
un enorme saco de peptidoglicano, que en realidad es una densa red interconectada.
Estos sacos han sido aislados de bacterias Gram-positivas y son lo suficientemente
fuertes para retener su forma e integridad, aun cuando son elsticos y algo flexibles, a
diferencia de la celulosa (constituyente de la pared celular vegetal). La pared celular
procariota es adems porosa, de manera que algunas molculas pueden penetrarla.

Pared celular Gram-positiva.

Normalmente la gruesa y homognea pared celular de las Gram-positivas est

compuesta primariamente de peptidoglicano, el cual a menudo contiene puentes
peptdicos. Sin embargo la pared celular Gram-positiva usualmente tambin contiene
grandes cantidades de cidos teicoicos, polmeros de glicerol o ribitol unidos por grupos
fosfato.
Aminocidos tales como la D-alanina y azcares como la glucosa estn unidos a
los grupos glicerol y ribitol. Los cidos teicoicos estn conectados tanto al peptidoglicano
mismo mediante enlaces covalentes con el hidroxilo seis del cido aceilmurmico, o a los
lpidos de la membrana plasmtica; en este ltimo caso son llamados cidos lipoteicoicos.
Los cidos teicoicos parecen extenderse por toda la capa de peptidoglicano y, debido a
que estn cargados negativamente, ayudan a dar a la pared de las Gram-positivas su
carga negativa. La funcin de estas molculas no es an clara, pero pueden ser
importantes para mantener la estructura de la pared. Los cidos teicoicos no estn
presentes en las bacterias Gram- negativa.

Pared celular Gram-negativa.

La pared celular Gram-negativa es mucho ms compleja que la de las Gram-

positivas. La delgada capa de peptidoglicano enseguida de la membrana plasmtica
puede constituir no ms de 5 a 10% del peso de la pared. En E. coli es de cerca de 1 nm
de espesor y contiene slo una o dos capas de hojas de peptidoglicano. Como se
mencion antes, el peptidoglicano puede estar en forma de gel ms que como capa
compacta.
La membrana externa se encuentra hacia afuera de la delgada capa de
peptidoglicano. La protena ms abundante en esta membrana es la lipoprotena de
Braun, una pequea lipoprotena unida covalentemente a la regin superior del
peptidoglicano y embebida en la membrana externa por su extremo hidrofbico. La
membrana externa y el peptidoglicano estn tan firmemente unidos por esta lipoprotena
que pueden ser aislados como una unidad.

Posiblemente los constituyentes ms inusuales de la membrana externa son sus

lipopolisacridos (LPSs). Estas molculas grandes y complejas contienen tanto lpidos
como carbohidratos y constan de tres partes: (1) lpido A, (2) ncleo polisacrido, y (3) el
poliscrido O cadena lateral O. El LPS de Salmonella typhimurium ha sido el ms
estudiado y su estructura general se describe aqu. La regin del lpido A contiene dos
glucosalinas, cada una con tres cidos grasos y fosfato o pirofosfato unido. ste est
sepultado en la membrana externa y el resto del LPS se proyecta desde su superficie. El
ncleo polisacrido est unido al lpido A. En salmonela est construido de 10 azcares,
muchos de ellos de estructura inusual. La cadena lateral O antgeno O es un
polisacrido de cadena corta que se extiende hacia el exterior desde el ncleo
polisacrido. Tiene varios azcares peculiares y vara en composicin entre cepas
bacterianas. Aunque el polisacrido O es reconocida por los anticuerpos de los
hospederos, las bacterias Gram-negativas pueden frustrar las defensas del hospedero
cambiando rpidamente la naturaleza de su cadena lateral O para evitar la deteccin. La
interaccin de los anticuerpos con el LPS antes de alcanzar la membrana externa puede
proteger a la pared celular de un ataque directo.

El LPS es importante por diversas razones adems de burlar las defensas del
hospedero. Puesto que el ncleo polisacrido normalmente contiene azcares cargados y
fosfato, el LPS contribuye a la carga negativa de la superficie de la bacteria. El lpido A es
el principal constituyente de la membrana externa y el LPS ayuda a estabilizar la
estructura de la membrana. Ms an, el lpido A a menudo es txico por lo cual el LPS
puede actuar como endotoxina y causar algunos de los sntomas que se presentan en
infecciones por bacterias Gram -negativas.

Una funcin ms importante de la membrana externa es servir como barrera

protectora. Previene o disminuye la entrada de sales biliares, antibiticos y otras
sustancias txicas que pueden matar o daar a la bacteria. Incluso as, la membrana
externa es ms permeable que la membrana plasmtica y permite el paso de pequeas
molculas como la glucosa y otros monosacridos. Esto es debido a la presencia de
protenas porinas especiales. Tres molculas de porina se agrupan y atraviesan la
membrana externa para formar un canal hueco a travs del cual pueden pasar molculas
pequeas de 600 a 700 daltons. Molculas ms grandes, tales como la vitamina B12,
deben ser transportadas a travs de la membrana externa por acarreadores especficos.
La membrana externa tambin previene de la prdida de constituyentes como las
enzimas periplsmicas.

La pared celular y la proteccin osmtica.

Usualmente la pared celular es requerida para proteger a la bacteria contra la

destruccin por la presin osmtica. Los solutos estn mucho ms concentrados dentro
de la clula que en la mayora de los hbitats microbianos, los cuales son hipotnicos.
Durante la smosis, el agua se mueve a travs de membranas selectivamente
permeables, tales como la membrana plasmtica, de soluciones diluidas (alta
concentracin de agua) a soluciones ms concentradas (baja concentracin de agua).
As, el agua normalmente entra a la clula bacteriana y la presin osmtica puede
alcanzar 20 atmsferas o 300 libras por pulgada cuadrada. Sin una pared celular que la
proteja, la membrana plasmtica no puede resistir tales presiones y la clula se hinchar
y ser destruida fsicamente, un proceso llamado lisis. En hbitats hipertnicos, donde los
solutos estn ms concentrados que dentro de la clula, el agua fluye hacia el exterior y
el citoplasma se seca, fenmeno llamado plasmlisis.
 Aunque la mayora de la bacterias requieren de la pared celular para sobrevivir,
algunas no la poseen. Por ejemplo, los micoplasmas carecen de pared celular y sin
embargo a menudo crecen en medios diluidos o en ambientes terrestres porque su
membrana plasmtica es ms fuerte de lo normal.
La razn precisa de esto no es bien conocida, aunque la presencia de esteroles
en la membrana de muchas especies puede proporcionar fuerza adicional. Sin una pared
celular rgida, los micoplasmas tienden a ser pleomrficos o variables en forma.

Las formas L (llamadas as en honor al Instituto Lister de Londres, donde fueron

descubiertas) tambin carecen de pared celular. La falta puede ser completa o parcial
(algunas tienen una pared defectuosa) y pueden ser Gram-positivas o Gram- negativas.

3.6 Componentes externos a la pared celular.

Las bacterias tienen una variedad de estructuras externas a la pared celular cuyas
funciones son proteccin, adhesin a objetos, o movimiento celular.

Cpsulas, capa mucosa, y capas S.

Algunas bacterias tienen una capa de material al exterior de la pared celular.

Cuando la capa est bien organizada y no se lava con facilidad se le llama cpsula. Una
capa mucosa es una zona difusa de material no organizado que se remueve con
facilidad. Un glicocliz es una red de polisacridos que se extiende desde la superficie de
las bacterias y otras clulas (en este sentido, podra rodear tanto a la cpsula como a la
capa mucosa).
Las cpsulas y las capas mucosas usualmente estn compuestas de
polisacridos, pero pueden estar construidas de otros materiales. Bacillus anthracis, por
ejemplo, tiene una cpsula de cido poli-D- glutmico. Las cpsulas son claramente
visibles en el microscopio de luz cuando se emplean tinciones negativas o tinciones
especiales para cpsulas; pueden ser estudiadas tambin con el microscopio electrnico.

Aunque las cpsulas no se requieren para el crecimiento bacteriano en

condiciones de laboratorio, stas confieren varias ventajas cuando las bacterias crecen
en hbitats normales. Ayudan a las bacterias a resistir fagocitosis por clulas fagocticas
de los organismos hospederos. Streptococcus pneumoniae proporciona un ejemplo
clsico. Cuando carece de cpsula es destruido fcilmente y no causa enfermedad,
mientras que la variante capsulada mata rpidamente a los ratones. Las cpsulas
contienen una gran cantidad de agua y pueden proteger a la bacteria contra la
desecacin; adems excluyen a los virus bacterianos y a la mayora de los materiales
txicos hidrofbicos como los detergentes. El glicocliz tambin ayuda a la fijacin
bacteriana a superficies de objetos slidos en ambientes acuticos o a superficies de
tejidos en hospederos vegetales y animales.

Muchas bacterias Gram-positivas y Gram-negativas tienen una capa regularmente

estructurada llamada capa S en su superficie. La capa S es comn entre las
arqueobacterias, donde puede de hecho ser la nica estructura de pared externa a la
membrana plasmtica. La capa S tiene un patrn parecido a un mosaico y est
compuesta de protena o glicoprotena. En las bacterias Gram-negativas la capa S se
adhiere directamente a la membrana externa; en las Gram-positivas est asociada con la
superficie del peptidoglicano. La capa S puede proteger a la clula contra iones y
 fluctuaciones del pH, estrs osmtico, enzimas, o contra el depredador bacteriano
Bdellovibrio. La capa S tambin ayuda a mantener la rigidez de la envoltura y la forma de
al menos algunas bacterias. Finalmente, la capa parece proteger a algunos patgenos
contra el ataque del complemento y la fagocitosis, contribuyendo as a su virulencia.

Pili y fimbrias.

Muchas bacterias Gram-negativas tienen apndices parecidos a pelos, cortos y

finos, que son ms delgados que los flagelos y no estn involucrados en la motilidad.
Usualmente estas estructuras son llamadas fimbrias (en ocasiones son referidas tambin
como pili). Aunque una clula puede estar cubierta con ms de 1,000 fimbrias, debido a
su pequeo tamao son visibles slo con microscopio electrnico. Las fimbrias parecen
ser estructuras tubulares compuestas de subunidades protenicas en arreglo helicoidal,
de cerca de 3 a 10 nm de dimetro y varias micras de longitud. Al menos algunos tipos de
fimbrias adhieren a la bacteria a superficies slidas tales como tejidos de hospederos o
rocas en corrientes de a g u a .

Los pili sexuales son apndices similares, de 1 a 10 por clula, que difieren de la
fimbrias en los siguientes aspectos. Los pili a menudo son ms largos que las fimbrias
(alrededor de 9 a 10 nm de dimetro) y estn genticamente determinados por factores
sexuales o plsmidos conjugativos y son requeridos para el apareamiento bacteriano.
Algunos virus bacterianos atacan especficamente a receptores en los pili sexuales al
comienzo de su ciclo reproductivo.

Flagelos y motilidad.

La mayora de las bacterias mtiles se mueven usando flagelos, apndices

locomotores filamentosos que se extienden hacia afuera de la membrana plasmtica y la
pared celular. Son estructuras esbeltas y rgidas de cerca de 20 nm de dimetro y de
ms de 15 a 20 de longitud. Los flagelos son delgados y no pueden observarse
directamente con el microscopio de campo brillante, sino que deben teirse con tcnicas
especiales diseadas para incrementar su grosor. La estructura detallada del flagelo slo
puede observarse con el microscopio electrnico.

A menudo las especies bacterianas difieren distintivamente en sus patrones de

distribucin de flagelos. Las bacterias montricas tienen slo un flagelo; si est localizado
en un extremo se dice que el flagelo es polar. Las bacterias amftricas tienen un flagelo
solitario en cada polo. En contraste, las bacterias loftricas tienen un grupo de flagelos
en uno o en ambos polos. En las bacterias pertricas los flagelos estn distribuidos a lo
largo de la superficie completa de la clula. Los patrones de flagelacin son muy tiles en
la identificacin de bacterias.

- Ultraestructura flagelar.

Estudios con microscopia electrnica de transmisin han demostrado que el

flagelo bacteriano est compuesto de tres partes. (1) La porcin ms larga y obvia es el
filamento, el cual se extiende desde la superficie celular hasta la punta. (2) Un cuerpo
basal que est embebido en la clula; y (3) un segmento cort y curvo, el gancho, que
une al filamento con el cuerpo basal y acta como unin flexible. El filamento es un
cilindro rgido y hueco construido de una sola protena llamada flagelina, la cual tiene un
peso molecular en el rango de 30,000 a 60,000.
 El gancho y el cuerpo basal son bastante diferentes del filamento. Ligeramente
ms ancho que el filamento, el gancho est hecho de diferentes subunidades de protena.
El cuerpo basal es la parte ms compleja del flagelo. En E.coli y la mayora de las
bacterias Gram-negativas, el cuerpo tiene cuatro anillos conectados a un eje central. Los
anillos ms externos, L y P, se asocian con la capa de lipopolisacridos y de
peptidoglicano, respectivamente. El anillo interno M est en contacto con la membrana
plasmtica. Las bacterias Gram-positivas tienen slo dos anillos en el cuerpo basal, un
anillo interno conectado a la membrana plasmtica y un anillo externo probablemente
unido al peptidoglicano.

- Sntesis flagelar.

La sntesis del flagelo es un proceso complejo que involucra al menos de 20 a 30

genes. Adems del gen para la flagelina, 10 ms genes codifican para las protenas del
gancho y del cuerpo basal; otros genes conciernen al control de la construccin flagelar o
a su funcionamiento. No es bien conocido cmo la clula regula o determina la
localizacin exacta del flagelo.

Las bacterias pueden desflagelarse y de esta manera estudiar la regeneracin del

filamento flagelar. Se cree que las subunidades de flagelina son transportadas a travs
del hueco del filamento. Cuando alcanzan la punta las subunidades de agregan
espontneamente de manera que el filamento crece desde su extremo ms que desde la
base. La sntesis del filamento es un excelente ejemplo de ensamble a s mismo. Muchas
estructuras se forman espontneamente por la asociacin de sus partes componentes sin
la ayuda de alguna enzima en especial u otros factores.
La informacin requerida para la construccin del filamento est presente en la
estructura de la subunidad de flagelina por s misma.

- Mecanismo de movimiento flagelar.

Los flagelos procariotas operan de manera diferente a como lo hacen los

eucariotas. El filamento est en la forma de una hlice rgida y las bacterias se mueven
cuando la hlice rota. Existe considerable evidencia que demuestra que los flagelos
actan como las propelas de un bote. Las bacterias mutantes con flagelos rectos o
regiones del gancho anormalmente largas (mutantes poligancho) no pueden nadar.
Cuando las bacterias son fijadas a una laminilla de vidrio usando anticuerpos para
protenas del filamento o del gancho, el cuerpo de la clula rota rpidamente sobre el
flagelo estacionario. El motor flagelar puede rotar muy rpidamente; en E. coli, por
ejemplo, rota a 270 revoluciones por segundo (r.p.s.) y Vibrio alginolyticus promedia
1,100 r.p.s.

La direccin de la rotacin flagelar determina la naturaleza del movimiento

bacteriano. Las bacterias montricas con un flagelo polar rotan en direccin contraria a
las manecillas del reloj (vistas desde fuera de la clula) durante el movimiento normal
hacia adelante mientras que la clula en s rota lentamente en direccin de las manecillas
del reloj. El movimiento flagelar rotando helicoidalmente empuja a la clula hacia adelante
con el flagelo siguindola atrs. Las bacterias montricas se detienen y cambian de
direccin de manera aleatoria revirtiendo la direccin de la rotacin del flagelo. Las
bacterias flageladas pertricas operan de una manera algo similar. Para moverse hacia
delante, los flagelos rotan en direccin contraria a las manecillas del reloj; conforme los
hacen, ellas doblan sus ganchos para formar un haz rotatorio que las impulsa hacia
adelante. La rotacin del flagelo en direccin de las manecillas del reloj rompe al haz y la
 clula se detiene o cambia de d i r e c c i n . Debido a que las bacterias nadan gracias a la
rotacin de sus flagelos rgidos, debe haber algn tipo de motor en su base. De acuerdo
con una hiptesis, un flagelo rota debido a interacciones entre los anillos S y M. Un eje se
extiende desde el gancho y termina en el anillo M, el cual puede rotar libremente en la
membrana plasmtica.
Se cree que el anillo S est unido a la pared celular en la Gram- positiva y no rota.
De esta manera, si los dos anillos interactan de alguna manera, el resultado es un
movimiento giratorio. Los anillos O y L de las Gram-negativas podran actuar como
orientadores para la rotacin del eje. En contraste, hay alguna evidencia de que el cuerpo
basal es una estructura pasiva y rota dentro de un complejo de protenas embebidas en la
membrana de una manera similar a como lo hace un motor elctrico en el centro de un
anillo de el ec t rom agnet os .

El mecanismo exacto que regula la rotacin del cuerpo basal an no est claro.
Hay evidencia de que el flujo de protones pasando los dos anillos o entre el cuerpo basal
y circundando las protenas de la membrana lleva a la rotacin. No parece que el ATP
proporcione directamente la energa para la rotacin flagelar en las bacterias.

El flagelo es un dispositivo para nadar muy efectivo. Desde el punto de vista de

las bacterias, nadar es bastante difcil debido a que el medio acuoso circundante parece
muy denso y viscoso, como melaza. La clula debe perforar a travs del agua con su
flagelo helicoidal o en forma de sacacorchos y, si la actividad flagelar cesa, se detiene
casi instantneamente. A pesar de tal resistencia del ambiente a su movimiento, las
bacterias pueden nadar de 20 a casi 90 /segundo. Esto es equivalente a viajar de 2 a
100 longitudes celulares por segundo; en contraste, un humano excepcionalmente rpido
de 1.5 m de altura, puede ser capaz de correr cerca de cinco cuerpos de longitud por
segundo.

Las bacterias pueden moverse por mecanismos diferentes a la rotacin flagelar.

Las espiroquetas son bacterias helicoidales que viajan a travs de sustancias viscosas,
tales como moco o fango, mediante movimientos de flexin y expansin causados por un
filamento axial especial. Un tipo diferente de motilidad, motilidad por deslizamiento, es
empleado por muchas bacterias: las cianobacterias, los miembros de los rdenes
Myxobacteriales y Cytophagales, y algunos micoplasmas. Aunque no hay estructuras
visibles asociadas con el deslizamiento, estas bacterias pueden moverse a lo largo
de superficies slidas a tasas de 3
/segundo.

3.7 Quimiotaxis.

Las bacterias no siempre nadan de manera errtica sino que son atradas por
nutrientes tales como azcares o aminocidos y repelidas por muchas sustancias dainas
y productos de desecho bacteriano (las bacterias tambin pueden responder a otros
factores ambientales como temperatura, luz y gravedad). El movimiento hacia un
atrayente qumico o lejos de un repelente es conocido como quimiotaxis. Tal
comportamiento es una ventaja obvia para las bacterias.

La quimiotaxis positiva y negativa puede ser estudiada con cultivos en caja petri. Si
las bacterias son colocadas en el centro de una placa de agar que contiene un atrayente,
las bacterias agotarn los nutrientes locales y luego nadarn hacia el gradiente del
atrayente que han creado. El resultado es un anillo en expansin de bacterias. Cuando un
disco de repelente es colocado en una caja petri de agar semislido y bacterias, las
 bacterias nadarn lejos del repelente creando una zona clara alrededor del disco.

Las bacterias pueden responder a niveles muy bajos del atrayente (cerca de 10-8 M
para algunos azcares), la magnitud de su respuesta se incrementa con la concentracin
del atrayente.
Usualmente los repelentes slo son detectados a concentraciones altas. Si un
atrayente y un repelente estn presentes juntos, la bacteria comparar ambas
seales y responder al qumico con la concentracin ms efectiva.

Tanto los atrayentes como los repelentes son detectados por quimiorreceptores,
protenas especiales que se unen a los qumicos y transmiten seales a otros
componentes del sistema quimiosensitivo. Se han descubierto cerca de 20
quimioreceptores de atrayentes y 10 para repelentes. Estas protenas quimioreceptoras
pueden estar localizadas en el espacio periplsmico o en la membrana plasmtica.
Algunos receptores participan en las etapas iniciales del transporte de azcar hacia el
interior de la clula.

El comportamiento quimiotctico de las bacterias ha sido estudiado usando el

microscopio de rastreo, un microscopio con una fase mvil que de manera automtica
mantiene en foco a una bacteria individual. En ausencia de un gradiente qumico, E. coli y
otras bacterias se mueven aleatoriamente. Una bacteria viaja en lnea recta o ligeramente
curva, una corrida, por unos cuantos segundos: luego se parar y cambiar de rumbo. El
cambio de rumbo es seguido por una corrida en una direccin diferente. Cuando la
bacteria es expuesta a un gradiente del atrayente, cambia de direccin con menos
frecuencia (o tiene corridas ms largas) cuando viaja hacia el gradiente, pero regresa a
su frecuencia normal de cambios de direccin cuando se mueve lejos del gradiente.
El comportamiento es moldeado por cambios temporales en la concentracin
qumica: la bacteria compara su ambiente actual con el experimentado en los momentos
previos; si la concentracin del atrayente es ms alta, los cambios en direccin se
suprimen y la corrida es ms larga. La respuesta opuesta ocurre con un gradiente de
repelente. La frecuencia de cambios de direccin disminuye cuando la bacteria se mueve
lejos del gradiente del repelente.

Como ya se dijo, las bacterias pueden responder a factores diferentes a los

qumicos. Un ejemplo fascinante lo constituyen las bacterias magnetotcticas que en los
ambientes acuticos se orientan a s mismas en el campo magntico de la Tierra. La
mayora de estas bacterias tienen cadenas intracelulares de partculas de magnetita
(Fe3O4) o magnetosomas, de cerca de 40 a 100 nm de dimetro y rodeadas por una
membrana. Algunas especies de hbitats sulfdricos tienen magnetosomas que contienen
greigita (Fe3S4) y pirita (FeS2). Puesto que cada partcula de hierro es un pequeo
magneto, las bacterias usan sus cadenas de magnetosomas para determinar los rumbos
hacia arriba o hacia abajo, y nadar hacia los sedimentos ricos en nutrientes o localizar la
profundidad ptima en ambientes marinos o de agua dulce. Los magnetosomas tambin
estn presentes en la cabeza de aves, atn, delfines, tortugas verdes y otros animales,
para ayudar presumiblemente a la navegacin. Los animales y las bacterias comparten
ms rasgos de comportamiento en comn que lo que podramos imaginarnos.

3.8 Endospora bacteriana.

Un nmero de bacterias Gram-positivas pueden formar una estructura de

resistencia llamada endospora. Las endosporas se desarrollan dentro de las clulas
Bacterianas vegetativas de varios gneros: Bacillus y Clostridium (bacilos), Sporosarcina
(cocos) y otros. Estas estructuras son extraordinariamente resistentes a estrs
ambiental tal como calor, radiacin ultravioleta, desinfectantes qumicos, y desecacin.
De hecho, algunas endosporas han permanecido viables por ms de 500 aos, y
esporas de actinomicetes (las cuales no son esporas verdaderas) han sido recuperadas
vivas despus de estar enterradas en el fango por 7,500 aos. Debido a su resistencia y
al hecho de que varias especies de bacterias formadoras de endosporas son patgenas
peligrosas, las endosporas son de importancia prctica en microbiologa de alimentos,
industrial y mdica. Esto es debido a que es esencial ser capaces de esterilizar
soluciones y objetos slidos. Las endosporas a menudo sobreviven al calentamiento por
una hora o ms; por lo tanto las autoclaves deben ser utilizadas para esterilizar muchos
materiales. Las endosporas son tambin de considerable inters terico. Debido a que las
bacterias fabrican estas intrincadas entidades de una manera muy organizada en un
periodo de pocas horas, la formacin de esporas es un modelo adecuado para la
investigacin sobre la construccin de estructuras biolgicas complejas. En el ambiente,
las endosporas ayudan a la supervivencia cuando los nutrientes son escasos.

Las endosporas pueden ser examinadas tanto con microscopio de luz como
electrnico. Debido a que las esporas son impermeables a la mayora de los colorantes, a
menudo se les observa como reas sin teir en bacterias tratadas con azul de metileno y
otros colorantes simples; colorantes especiales para esporas son utilizados para hacerlas
claramente visibles. La posicin de la espora en la clula madre o esporangio difiere
frecuentemente entre especies, haciendo esto de considerable valor para la identificacin.
Las esporas pueden estar localizadas de forma central, cerca de un extremo
(subterminal), o definitivamente terminales.
Algunas veces una espora es tan larga que hace que el esporangio se h i n c h e .
Las micrografas electrnicas muestran que la estructura de la endospora es compleja. La
espora a menudo est rodeada por una cubierta delgada y delicada llamada exosporium.
Por debajo del exosporium hay una cubierta de la espora que est compuesta de varias
capas de protena y puede ser bastante gruesa. Es impermeable y responsable de la
resistencia de la espora a qumicos. El crtex (corteza), el cual puede ocupar tanto como
la mitad del volumen de la espora, descansa por debajo de la cubierta de la espora. Est
hecho de un tipo de peptidoglicano con menos entrecruzamientos que el de las clulas
vegetativas. La pared celular de la espora (o corazn de la pared) est dentro del crtex y
rodea al protoplasto o ncleo de la espora. El ncleo tiene las estructuras celulares
normales, tales como ribosomas y un nucleoide.

No se conoce con precisin por qu la espora es tan resistente al calor y a otros

agentes letales. Tanto como el 15 % del peso seco de la espora consiste en cido
dipicolnico acomplejado con iones de calcio. Durante mucho tiempo se pens que el
cido dipicolnico estaba involucrado directamente en la resistencia de la espora al calor,
pero se han aislado mutantes resistentes al calor que carecen de este tipo de cido.
Puede ser que el complejo calcio-dipicolinato estabilice los cidos nucleicos de las
esporas. La deshidratacin del protoplasto parece ser muy importante en la
resistencia al calor. El crtex puede remover agua osmticamente desde el protoplasto,
as protege a la espora tanto del calor como del dao por radiacin. En resumen, la
resistencia de la endospora al calor muy probablemente sea debida a diversos factores:
estabilizacin de diferentes componentes (como el DNA) por el complejo calcio-
dipicolinato, deshidratacin del protoplasto, la mayor estabilidad de protenas celulares en
bacterias adaptadas a crecer a altas temperaturas, y otros.
La formacin de la espora, llamada esporognesis o esporulacin, comienza
normalmente cuando cesa el crecimiento por la falta de nutrientes. Es un proceso
complejo y puede ser dividido en siete etapas. Se forma un filamento axial de material
nuclear (etapa I) seguido de una invaginacin de la membrana celular para encerrar parte
del DNA y producir el septo de la espora preliminar (etapa II). La membrana contina
 creciendo y envuelve a la espora inmadura en una segunda membrana (etapa III). En
seguida, el crtex es colocado en el espacio entre las dos membranas y se acumulan
tanto el calcio como el cido dipicolnico (etapa IV). Despus las protenas de la cubierta
son formadas alrededor del crtex (etapa V) y ocurre la maduracin de la espora

(etapa VI). Finalmente, enzimas lticas destruyen el esporangio dejando libre la

espora (etapa VII). En Bacillus megaterium la esporulacin requiere de slo 10 horas. La
transformacin de una espora latente en una clula vegetativa activa parece un proceso
casi tan complejo como la esporulacin. Ocurre en tres etapas:
(1) activacin, (2) germinacin y (3) eclosin. A menudo una espora no germinar
exitosamente, incluso en un medio rico en nutrientes, si no ha sido previamente activada.
La activacin es un proceso reversible que prepara a la espora para la germinacin y
usualmente es el resultado de tratamientos como el calor. La activacin es seguida por la
germinacin, el rompimiento del estado latente de la espora. Este proceso est
caracterizado por una hinchazn de la espora, ruptura y absorcin de la cubierta de la
espora, prdida de la resistencia al calor y otros tipos de estrs, liberacin de los
componentes de la espora, e incremento de la actividad metablica. Muchos metabolitos
normales o nutrientes (por ejemplo aminocidos y azcares) pueden desencadenar la
germinacin despus de la activacin. La germinacin es seguida por la tercera etapa, la
eclosin. El protoplasto de la espora fabrica nuevos componentes, emerge del resto de la
cubierta de la espora, y se desarrolla de nuevo a una bacteria activa.

CAPTULO IV. NUTRICIN MICROBIANA.

Para obtener energa y construir nuevos componentes celulares, los organismos

deben tener una fuente de materias primas o nutrientes. Los nutrientes son sustancias
utilizadas en biosntesis y en la produccin de energa y por lo tanto se requieren para
el crecimiento microbiano. Este captulo describe los requerimientos nutricionales de los
microorganismos, cmo son adquiridos los nutrientes, y el cultivo de los
microorganismos.

Factores ambientales tales como la temperatura, los niveles de oxgeno y la

concentracin osmtica del medio son crticos para el cultivo exitoso de los
microorganismos. Estos tpicos se describirn en el siguiente captulo.

4.1 Requerimientos Comunes de Nutrientes.

Un anlisis de la composicin de la clula microbiana muestra que cerca del 95%

de su peso seco est basado en unos cuantos elementos principales: carbono, oxgeno,
hidrgeno, nitrgeno, azufre, fsforo, potasio, calcio, magnesio y hierro. stos son
llamados macroelementos o macronutrientes debido a que el organismo los requiere en
cantidades relativamente grandes. Los primeros seis (C, O, H, N, S y
P) son componentes de carbohidratos, lpidos, protenas y cidos nucleicos. Los
restantes cuatro macroelementos existen en la clula como cationes y juegan una
variedad de papeles. Por ejemplo, el potasio (K+) es requerido para la actividad de un
gran nmero de enzimas, incluidas algunas de las involucradas en la sntesis de
protenas. El calcio (Ca2+), entre otras funciones, contribuye a la resistencia al calor de las
endosporas. El magnesio (Mg2+) sirve como cofactor de muchas enzimas, acomplejado
con ATP, y estabiliza los ribosomas y las membranas celulares. El hierro (Fe2+ y Fe3+) es
parte de los citocromos y cofactor de enzimas y protenas transportadoras de electrones.
Todos los microorganismos requieren de varios elementos traza (tambin llamados
microelementos o micronutrientes) adems de macroelementos. Estos elementos traza
(manganeso, zinc, cobalto, molibdeno, nquel y cobre), son necesarios para la mayora de
las clulas. Sin embargo, las clulas los requieren en cantidades tan pequeas que
presentes como contaminantes en agua, recipientes de vidrio o en medios regulares, son
adecuados para el crecimiento.
Normalmente los elementos traza son parte de enzimas y cofactores y ayudan en
la catlisis de reacciones y en el mantenimiento de la estructura de las protenas. Por
ejemplo, el zinc (Zn2+) est presente en el sitio activo de algunas enzimas y est
tambin Involucrado en la asociacin de subunidades regulatorias y catalticas en la
aspartato carbamoiltransferasa de E. coli. El manganeso (Mn2+) ayuda a muchas enzimas
a catalizar la transferencia de grupos fosfato. El molibdeno (Mo2+) es requerido para la
fijacin de nitrgeno y el cobalto (Co2+) es componente de la vitamina B12.

Los elementos pueden ser categorizados de una manera un poco diferente con
respecto a los requerimientos nutricionales. Los elementos mayores (C, O, H, N, S, P)
son necesario en cantidades de gramos por litro de medio de cultivo. Los elementos
menores (K, Ca, Mg, Fe) se requieren a menudo en cantidades de miligramos. Los
elementos traza (Mn, Zn, Co, Mo, Ni, Cu) deben estar disponibles en cantidades de
microgramos.

Adems de los macroelementos comunes y de los elementos traza, los

microorganismos pueden tener requerimientos particulares que reflejan la naturaleza
especial de su morfologa o ambiente. Las diatomeas necesitan cido silcico (H4SiO4)
para construir sus hermosas paredes celulares de slica [(SiO2)n]. Aunque la mayora de
las bacterias no requieren grandes cantidades de sodio, muchas bacterias crecen en
lagos salinos y en ocanos dependiendo de la presencia de altas concentraciones del in
sodio (Na+).

Requerimientos de carbono, hidrgeno y oxgeno.

A menudo, los requerimientos de carbono, hidrgeno y oxgeno son satisfechos

juntos. El carbono es requerido para el esqueleto de todas las molculas orgnicas, y las
molculas que sirven como fuente de carbono usualmente tambin contribuyen al aporte
de hidrgeno y oxgeno. Una fuente de carbono para la cual esto no es verdad es el
bixido de carbono (CO2) debido a que est oxidado y carece de hidrgeno.
Probablemente todos los microorganismos pueden fijar CO2, esto es, reducirlo e
incorporarlo a molculas orgnicas. Sin embargo, por definicin, slo los auttrofos
pueden usar CO2 como su fuente principal o nica de carbono. Muchos microorganismos
son autotrficos: muchos de ellos son fotosintticos, pero algunos auttrofos oxidan
molculas inorgnicas para obtener energa.

La reduccin de CO2 es un proceso muy costoso en trminos de energa. Por ello,

muchos microorganismos no pueden utilizarlo como su nica fuente de carbono, sino que
dependen de la presencia de molculas complejas ms reducidas para obtener el
carbono. Los organismos que usan molculas prefabricadas ms reducidas como fuente
de carbono son hetertrofos (estas molculas prefabricadas normalmente proceden de
otros organismos). La mayora de los hetertrofos usan nutrientes orgnicos tanto como
fuente de carbono como de energa. Por ejemplo, la va glicoltica atrapa la energa como
ATP y NADH y tambin produce esqueletos de carbono para su uso en biosntesis.

Una caracterstica nutricional ms remarcable de los microorganismos es su

extraordinaria flexibilidad con respecto a la fuente de carbono. No hay molcula orgnica
de ocurrencia en la naturaleza que no pueda ser utilizada por algn microorganismo. Los
Actinomicetos pueden degradar alcohol amlico, parafina, e incluso caucho. Algunas
bacterias parecen capaces de emplear casi cualquier cosa como fuente de carbono; por
ejemplo, Pseudomonas cepacia puede usar alrededor de 100 diferentes compuestos de
carbono.
Desafortunadamente, muchas sustancias hechas por el hombre, como plsticos y
DDT son degradados muy lentamente o incluso no son degradados. En contraste con las
bacterias omnvoras, algunas bacterias son extremadamente meticulosas y catabolizan
pocas fuentes de carbono. Las bacterias metilotrficas, por ejemplo, metabolizan
slo metano, metanol, monxido de carbono, cido frmico y unas cuantas molculas
relacionadas de un carbono. Los miembros parasticos del gnero Leptospira usan slo
cidos grasos de cadena larga como su principal fuente de carbono y energa.

Los requerimientos nutricionales de los microorganismos varan enormemente

entre las diferentes especies. Adems, estos requerimientos pueden cambiar dentro de
una especie debido a mutaciones. Un microorganismo que requiere los mismos nutrientes
como la mayora de los miembros de su especie es un prottrofo. Un microorganismo
prototrfico puede mutar de manera que no puede sintetizar una molcula esencial para
el crecimiento y reproduccin. Requerir entonces una molcula, o un compuesto que
pueda ser convertida a, como nutriente.

Un microorganismo mutado que carece de la habilidad para sintetizar un nutriente

esencial y por lo tanto debe obtenerlo, o a un recursor, de su entorno es un auttrofo. El
requerimiento de un aminocido especfico es una forma comn de auxotrofa. Muchos
microorganismos pueden sintetizar todos los aminocidos comunes necesarios para el
crecimiento. Ocasionalmente una mutacin bloquea la sntesis de un aminocido esencial
y el microorganismo se volver auxtrofo para ste, esto es, el aminocido debe estar
disponible para que el crecimiento tenga lugar. La produccin de auxtrofos es utilizada
en el estudio de gentica microbiana, entre otras reas.

Requerimientos de nitrgeno, fsforo y azufre.

Para crecer, un microorganismo debe ser capaz de incorporar grandes cantidades

de nitrgeno, fsforo y azufre. Aunque estos elementos pueden ser adquiridos de los
mismos nutrientes que proveen el carbono, los microorganismos usualmente tambin
emplean fuentes inorgnicas.

El nitrgeno es necesario para la sntesis de aminocidos, purinas, pirimidinas,

algunos carbohidratos y lpidos, cofactores de enzimas, y otras sustancias. Muchos
microorganismos pueden usar el nitrgeno de aminocidos, y el amonio es a menudo
incorporado directamente por la accin de enzimas tales como la glutamato
deshidrogenasa o la glutamina sintetasa y la glutamato sintetasa. La mayora de los
fottrofos y muchos microorganismos no fotosintticos reducen el nitrato a amonio e
incorporan el amonio en un nitrato reduccin asimilatoria. Una variedad de bacterias (por
ejemplo muchas cianobacterias y la bacteria simbitica Rhizobium) pueden reducir y
asimilar nitrgeno atmosfrico usando el sistema nitrogenasa.

El fsforo est presente en los cidos nucleicos, fosfolpidos, nucletidos como el

ATP, diversos cofactores, algunas protenas, y otros componentes celulares. Casi todos
los microorganismos usan fosfato inorgnico como fuente de fsforo y lo incorporan
directamente. Algunos microorganismos (como E. coli) adquieren fosfato de manera
activa directamente de su ambiente. Niveles bajos de fosfato limitan el crecimiento
microbiano en muchos ambientes acuticos.
 El azufre es necesario para la sntesis de sustancias como los aminocidos
cistena y metionina, algunos carbohidratos, biotina, y tiamina. La mayora de los
microorganismos usan sulfato como fuente de azufre y lo reducen por sulfato reduccin
asimilativa; unos cuantos requieren formas reducidas de azufre tales como la cistena.
4.2 Tipos Nutricionales de Microorganismos.

Todos los organismos requieren tambin de una fuente de energa, hidrgeno y

electrones para que el crecimiento tenga lugar. Los microorganismos pueden ser
agrupados en clases nutricionales de acuerdo a cmo satisfacen estos requerimiento
(Tablas 4.1 y 4.2). Hay slo dos tipos de fuentes de energa disponibles para los
organismos: (1) energa lumnica atrapada durante la fotosntesis, y (2) energa derivada
de la oxidacin de molculas orgnicas e inorgnicas. Los fototrofos usan luz como
fuente de energa; los quimiotrofos obtienen energa de la oxidacin de compuestos
qumicos (tanto orgnicos como inorgnicos). Los microorganismos tambin tienen slo
dos fuentes de tomos de hidrgeno o electrones. Los litotrofos (esto es, comedores de
rocas) usan sustancias inorgnicas reducidas como fuente de electrones, mientras que
los organotrofos extraen electrones o hidrgeno de compuestos orgnicos.

Tabla 4.1 Fuente de carbono, energa, e hidrgeno/electrones

Fuente de carbono
Auttrofos CO2 como fuente nica o principal de carbono para
biosntesis.
Hetertrofos Molculas orgnicas reducidas y prefabricadas
procedentes de otros organismos.
Fuente de energa
Fototrofos Luz.
Quimiotrofos Oxidacin de compuestos orgnicos o inorgnicos.
Fuente de hidrgeno o electrones
Litotrofos Molculas inorgnicas reducidas.
Organotrofos Molculas orgnicas.

Tabla 4.2 Principales tipos nutricionales de los microorganismos.

a
Principales tipos nutricionales
Auttrofos Fotolitotrofos
Hetertrofos Fotoorganotrofos Energa lumnica. Donador
Auttrofos Quimiolitotrofos
Fuente de energa, Microorganismos
hidrgeno/electrones y representativos.
carbono.
Energa lumnica. Algas.
Donador inorgnico de Bacterias prpura y verde
-
hidrgeno/electrones (H/e ) CO2 azufrosas.
como fuente de carbono Bacterias verde-azules
(cianofceas).
Bacterias prpura no sulfurosas.
-
orgnico H/e Bacterias verdes no sulfurosas.
Fuente orgnica de carbono
(tambin pueden utilizar CO2).
Fuente de energa qumica Bacterias oxidativas azufrosas
(inorgnica) Bacterias del hidrgeno.
-
Donador inorgnico H/e Bacterias nitrificantes Bacterias
CO2 como fuente de carbono del hierro.

Hetertrofos Quimiorganotrofos Fuente de energa qumica Protozoarios. Hongos.

(orgnica). La mayora de las bacterias no
-
Donador orgnico H/e fotosintticas (incluidas la mayora
Fuente orgnica de carbono. de las patgenas).
a
Se han encontrado bacterias en otras categoras nutricionales. Las categoras se definen en
trminos de energa, electrones, y fuente de carbono.
 A pesar de la gran diversidad metablica observada entre los microorganismos, la
mayora puede ser colocada en una de cuatro clases nutricionales en base a su fuente
primaria de energa, hidrgeno y/o electrones, y carbono (Tabla 4.2). La gran mayora de
los microorganismos ms extensamente estudiados son auttrofos fotolitotrofos o
hetertrofos quimiorganotrofos. Los auttrofos fotolitotrofos (a menudo llamados
fotoauttrofos) usan la energa lumnica y CO2 como fuente de carbono. Los
hetertrofos quimiorganotrofos (a menudo llamados quimiohetertrofos e incluso
hetertrofos) usan compuestos orgnicos como fuente de energa, hidrgeno, electrones
y carbono para biosntesis. Frecuentemente los mismos nutrientes orgnicos satisfarn
todos esos requerimientos. Es de apuntar que esencialmente todos los microorganismos
patgenos son quimiohetertrofos. Las otras dos clases tienen menos microorganismos
pero a menudo son muy importantes ecolgicamente. Algunas bacterias prpuras y
verdes son fotosintticas y usan materia orgnica como donadora de electrones y fuente
de carbono. Estos hetertrofos fotoorganotrofos son habitantes comunes de lagos
contaminados. Algunas de estas bacterias tambin pueden crecer como fotoauttrofos
con hidrgeno molecular como donador de electrones. El cuarto grupo, los auttrofos
quimiolitotrofos oxidan compuestos orgnicos reducidos tales como molculas de hierro,
nitrgeno o azufre para obtener tanto energa como electrones para biosntesis. El bixido
de carbono es la fuente de carbono. Unos cuantos quimiolitotrofos pueden obtener
carbono de fuentes orgnicas y ser as hetertrofos. Bacterias que dependen de fuentes
inorgnicas de energa y de fuentes orgnicas de carbono (o en ocasiones CO 2) pueden
ser llamadas mixotrficas (son una combinacin de procesos metablicos auttrofos y
hetertrofos). Los quimiolitotrofos contribuyen enormemente a la transformacin qumica
de elementos (por ejemplo, la conversin de amonio a nitrato o de azufre a sulfato) que
ocurre continuamente en los ecosistemas.

Aunque usualmente una especie particular pertenece a slo una de las cuatro
clases nutricionales, algunas muestran una gran flexibilidad metablica y alteran sus
patrones metablicos en respuesta a cambios en el ambiente. Por ejemplo, muchas
bacterias prpura no sulfurosas actan como hetertrofos fotoorganotrofos en ausencia
de oxgeno, pero oxidan molculas orgnicas y funcionan quimiotrficamente a niveles
normales de oxgeno. Cuando el oxgeno es bajo, la fotosntesis y el metabolismo
oxidativo pueden funcionar simultneamente. Este tipo de flexibilidad parece complejo y
confuso, incluso si da a quien lo posee una ventaja definitiva si las condiciones
ambientales cambian frecuentemente.

4.3 Factores de Crecimiento.

Los microorganismos, especialmente muchos auttrofos fotolitotrofos, crecen y se

reproducen cuando son suplementados minerales, fuente de energa, carbono, nitrgeno,
fsforo y azufre. Estos microorganismos tienen las enzimas y vas metablicas necesarias
para sintetizar todos los componentes celulares requeridos para su buen desarrollo. Por
otra parte, muchos microorganismos carecen de una o ms enzimas esenciales. Por lo
tanto no pueden fabricar todos los constituyentes indispensables sino que deben
obtenerlo, o a sus precursores, del ambiente. Los compuestos orgnicos que son
requeridos debido a que son esenciales para los componentes celulares o para los
precursores de dichos componentes y que no pueden ser sintetizados por el
microorganismo, son llamados factores de crecimiento. Hay tres clases principales de
factores de crecimiento: (1) aminocidos, purinas y pirimidinas, y (3) vitaminas. Los
aminocidos son necesarios para la sntesis de protenas, y las purinas y pirimidinas para
la sntesis de cidos nucleicos.
 (2) Las vitaminas son pequeas molculas orgnicas que usualmente toman parte
como cofactores de enzimas y sostienen el crecimiento en cantidades muy pequeas.
Algunos microorganismos requieren muchas vitaminas; por ejemplo, Enterococus faecalis
(una bacteria cido lctica) necesita ocho diferentes vitaminas para crecer. Tambin se
observan otros factores de crecimiento; el grupo hemo (de la hemoglobina o los
citocromos) es requerido por Haemophilus influenzae, y algunos micoplasmas necesitan
colesterol.

El conocimiento del factor de crecimiento especfico requerido de muchos

microorganismos hace posibles ensayos cuantitativos de crecimiento-respuesta para una
variedad de sustancias. Por ejemplo, las especies de los gneros bacterianos
Lactobacillus y Streptococcus pueden ser usados en anlisis microbiolgico de la mayora
de las vitaminas y aminocidos. La bacteria apropiada es crecida en una serie de tubos
de cultivo, cada uno conteniendo medio con una cantidad excesiva de todos los
componentes requeridos, excepto el factor de crecimiento a ser analizado. A cada vaso
se le aade una cantidad diferente del factor de crecimiento. Se prepara una curva
estndar graficando la concentracin o cantidad del factor de crecimiento contra el
crecimiento bacteriano total. Idealmente, la cantidad de crecimiento resultante es
directamente proporcional a la cantidad de factor de crecimiento presente; si la
concentracin del factor de crecimiento se dobla, el crecimiento final se duplica. La
cantidad de factor de crecimiento presente en una muestra problema se determina
comparando el crecimiento obtenido en la muestra desconocida con el crecimiento
resultante en la curva estndar. Los anlisis microbiolgicos son especficos, sensibles y
simples. Son an usados en el anlisis de sustancias como la vitamina B12 y la biotina,
adems de los avances en tcnicas de anlisis qumico.

4.4 Toma de Nutrientes por la Clula.

El primer paso para el uso de nutrientes es la toma del nutriente requerido por la
clula microbiana. Los mecanismos de toma deben ser especficos, esto es, debe
adquirirse la sustancia necesaria, y no otra. Esto vuelve a las clulas malas para tomar
una sustancia que no pueden usar. Puesto que los microorganismos a menudo viven en
hbitats pobres en nutrientes, deben ser capaces de transportar los nutrientes de
soluciones diluidas hacia la clula en contra del gradiente de concentracin. Finalmente,
las molculas de nutrientes deben pasar a travs de una selectivamente permeable
membrana plasmtica que no permite el paso libre de la mayora de las sustancias. En
vista de la enorme variedad de nutrientes y la complejidad de la tarea, no es de
sorprender que los microorganismos hagan uso de varios mecanismos de transporte
diferentes. Los ms importantes de stos son la difusin facilitada, el transporte activo, y
la translocacin de grupos. Los microorganismos eucariotas no parecen emplear
translocacin de grupos, pero toman nutrientes por procesos de endocitosis.

Difusin facilitada.

Unas cuantas sustancias, tales como el glicerol, pueden cruzar la membrana

plasmtica por difusin pasiva. La difusin pasiva, a menudo llamada simplemente
difusin, es el proceso en el cual las molculas se mueven de una regin de alta
concentracin a una de menos concentracin debido a la agitacin trmica aleatoria. La
tasa de difusin pasiva depende del tamao del gradiente de concentracin entre el
exterior celular y el interior. Un gradiente de concentracin grande es requerido para una
adecuada toma de nutrientes por difusin pasiva y, a menos que los nutrientes sean
utilizados de manera inmediata, la tasa de toma de nutrientes decrece conforme stos
son adquiridos.
 La difusin pasiva es un proceso ineficiente y no es empleado de anera
extensiva por los microorganismos. Molculas muy pequeas tales como H2O, O2 y CO2 a
menudo se mueven a travs de la membrana por difusin pasiva.

La tasa de difusin a travs de membranas selectivamente permeables se

incrementa enormemente usando protenas transportadoras, algunas veces llamadas
permeasas, las cuales estn embebidas en la membrana plasmtica. Debido a que los
transportadores ayudan al proceso de difusin, este mecanismo es llamado difusin
facilitada. La tasa de difusin facilitada se incrementa con el gradiente de concentracin
mucho ms rpido y a concentraciones ms bajas de la molcula que se difunde que la
difusin pasiva. Ntese que los niveles de difusin alcanzan un plato por encima de
valores especficos de gradiente debido a que el transportador se satura, esto es, la
protena transportadora est unida y transportando tantas molculas de soluto cmo es
posible. La curva que resulta se asemeja a una curva enzima-sustrato y es diferente de la
respuesta linear que se observa con difusin pasiva. Las protenas transportadoras
tambin se asemejan a las enzimas en su especificidad por la sustancia a ser
transportada; cada transportador es selectivo y transportar slo solutos cercanamente
relacionados. Aunque hay protenas transportadoras involucradas, la difusin facilitada es
realmente una difusin. Un gradiente de concentracin a lo largo de la membrana dirige el
movimiento de molculas y no se requiere energa extra; si el gradiente de concentracin
desaparece, el movimiento hacia el interior de la clula cesa.

Aunque se ha hecho mucha investigacin sobre el mecanismo de la difusin

facilitada, el proceso no es an comprendido por completo. Parece que los complejos de
protenas transportadoras cruzan la membrana. Despus de que la molcula de soluto se
une en el exterior, el transportador puede cambiar su conformacin y llevar la molcula
hacia el interior celular. El transportador puede subsecuentemente regresar a su forma
original y estar listo para tomar otra molcula. El efecto neto es que una molcula no
liposoluble puede entrar a la clula en respuesta a su gradiente de concentracin. Hay
que recordar que el mecanismo es reversible; si la concentracin del soluto es ms
grande adentro de la clula, ste se mover hacia afuera. Debido a que la clula
metaboliza los nutrientes al entrar, el influjo se ve favorecido.

La difusin facilitada no parece ser importante en procariotas. El glicerol es

transportado por difusin facilitad en E. coli, Salmonella typhimurium, Pseudomonas,
Bacillus y muchas otras bacterias. El proceso es mucho ms prominente en clulas
eucariotas donde es usado para transportar una variedad de azcares y aminocidos.

Transporte activo.

Aunque los transportadores de difusin facilitada pueden mover eficientemente

molculas hacia el interior cuando la concentracin del soluto es ms alta en el exterior,
ste no puede ser tomado cuando la concentracin es mayor en el interior de la clula (es
decir, en contra del gradiente de concentracin). Los microorganismos a menudo viven en
hbitats caracterizados por fuentes diluidas de nutrientes y, para desarrollarse, deben ser
capaces de transportar y concentrar dichos nutrientes. As, el mecanismo de difusin
facilitada no siempre es adecuado, y deben utilizarse otras formas. Los dos procesos de
transporte ms importantes en tales situaciones son el transporte activo y la translocacin
de grupos. El transporte activo es el transporte de molculas de soluto hacia una
concentracin ms alta, o en contra del gradiente de concentracin, con el uso de energa
metablica. Debido a que el transporte activo involucra actividad de protenas
acarreadoras, en algunos aspectos de parecer a la difusin facilitada.
 Las protenas transportadoras se unen a solutos particulares con gran
especificidad. Molculas de solutos similares pueden competir por la misma protena
transportadora tanto en la difusin facilitada como en el transporte activo. El transporte
activo tambin se caracteriza por el efecto de saturacin de acarreadores a altas
concentraciones de solutos. Sin embargo, el transporte activo difiere de la difusin
facilitada en el uso de energa metablica y en su habilidad para concentrar sustancias.
Los inhibidores metablicos que bloquean la produccin de energa inhibirn el transporte
activo, sin afectar la difusin facilitada (al menos en el corto plazo). El sistema de unin
con protenas transportadoras emplea protenas especiales de unin con el sustrato
localizadas en el espacio periplsmico de las bacterias gram-negativas. Estas protenas
periplsmicas, que tambin participan en la quimiotaxis, se unen a la molcula a ser
transportada y luego interactan con las protenas de transporte de la membrana para
mover la molcula de soluto hacia el interior celular. Estos complejos de membrana
tienen al parecer varias subunidades y forman un poro en la membrana. La fuente de
energa es ATP, aunque tambin pueden utilizarse otros compuestos fosfatados de alta
energa. E. coli transporta una variedad de azcares (arabinosa, maltosa, galactosa,
ribosa) y aminocidos (glutamato, histidina, leucina) por este mecanismo. El transporte
mediado por ATP est tambin presente en gram-positivas, pero no est tan bien
entendido como en organismos gram-negativos.

Las bacterias tambin usan fuerza protonmotriz (usualmente en la forma de un

gradiente de protones generado durante el transporte de electrones) para realizar el
transporte activo. Las protenas transportadoras de membrana responsables de este
proceso carecen de protenas especiales de unin a solutos en el periplasma. La lactosa
permeasa de E. coli es un ejemplo bien estudiado. La permeasa es una protena sencilla
que tiene un peso molecular de 30,000. Transporta una molcula de lactosa hacia el
interior conforme un protn entra de manera simultnea (una alta concentracin de
protones es mantenida fuera de la membrana por actividad de la cadena transportadora
de electrones). Este transporte ligado de dos sustancias en la misma direccin es llamado
simportador. Aqu, la energa almacenada como gradiente de protones dirige el transporte
de solutos. Aunque el mecanismo de transporte no est completamente entendido, se
cree que la unin del protn a la protena transportadora le cambia su forma y afinidad por
el soluto a ser transportado. E. coli tambin usa simportadores para adquirir aminocidos
y cidos orgnicos tales como el succinato y el malato.

La fuerza protonmotriz tambin puede accionar el transporte activo indirectamente,

a menudo a travs de la formacin de un gradiente de sodio. Por ejemplo, un sistema de
transporte de sodio en E. coli bombea sodio hacia el exterior en respuesta al movimiento
de protones hacia el interior. Tal transporte ligado en el cual las sustancias transportadas
se mueven en direcciones opuestas es llamado antiportador. El gradiente de sodio
generado por este sistema dirige entonces la toma de azcares y aminocidos. Un in
sodio puede unirse a una protena transportadora ocasionando un cambio en su
configuracin; el transportador puede unirse luego al azcar o al aminocido y orientar
sus sitios de unin para conducirlos al interior celular. Debido a la baja concentracin de
sodio intracelular, el in sodio puede disociarse del trasportador y enseguida lo har la
otra molcula tambin. Las protenas transportadoras en E. coli llevan el azcar melibiosa
y al aminocido glutamato cuando el sodio se mueve simultneamente al interior de la
clula. El simportador de sodio es tambin un proceso importante en clulas eucariotas,
donde es usado en la toma de azcares y aminocidos.
El ATP, ms que la fuerza protonmotriz, dirige usualmente el transporte de sodio
en este tipo de clulas .
 Parece razonable que los microorganismos pudieran tener un solo sistema de
transporte para cada nutriente, pero a menudo esto no es as, como se ha observado en
E. coli. Esta bacteria tiene al menos cinco sistemas de transporte para el azcar
galactosa, tres sistemas para cada uno de los aminocidos glutamato y leucina, y dos
complejos de transporte de potasio. Cuando hay varios sistemas de transporte para la
misma sustancia el sistema difiere en propiedades tales como su fuente de energa, su
afinidad por el soluto transportado, y la naturaleza de su regulacin. Presumiblemente
esta diversidad da a su poseedor una ventaja competitiva adicional en un ambiente
variable.

Translocacin de grupos.

En el transporte activo, las molculas de soluto se mueven a travs de una

membrana sin ser modificadas. Muchas procariotas tambin toman molculas por
translocacin de grupos, un proceso en el cual una molcula es transportada dentro de la
clula mientras es qumicamente alterada. El mejor sistema de translocacin conocido es
el sistema fosfoenolpiruvato: azcar fosfotransferasa (PTS). Este sistema transporta una
variedad de azcares hacia dentro de la clula procariota mientras las fosforila usando
fosfoenolpiruvato (PEP) como donador de f o s f a t o .

PEP + azcar (exterior) -------------> Piruvato + azcar-P (interior)

El PTS es bastante complejo. En E. coli y Salmonella typhimurium consiste de dos

enzimas y una protena termoestable de bajo peso molecular (HPr). La HPr y la enzima I
(EI) son citoplsmicas. La enzima II (EII) es ms variable en estructura y a menudo est
compuesta de tres subunidades o dominios. EIIA (anteriormente llamada EIII) es
citoplsmica y soluble. EIIB tambin es hidroflica, pero frecuentemente est unida a EIIC,
una protena hidrofbica que est embebida en la membrana. Un fosfato de alta energa
es transferido del PEP a la enzima II con la ayuda de la enzima I y la HPr. Luego,
conforme una molcula de azcar es transportada a travs de la membrana por la enzima
II, es fosforilada. La enzima II transporta slo azcares especficos y vara con el PTS,
mientras que la enzima I y la HPr son comunes a todos los PTS.

Los PTS estn ampliamente distribuidos entre los procariotas. Excepto para
algunas especies de Bacillus que tienen tanto la va de Embden-Meyerhof como el
sistema fosfotransferasa, las bacterias aerobias parecen carecer de PTS. Los miembros
de los gneros Escherichia, Salmonella, Staphylococcus y otras bacterias anaerobias
facultativas tienen sistema fosfotransferasa; algunas bacterias anaerobias obligadas
(como Clostridium) tambin tienen PTS. Muchos carbohidratos son transportados por este
sistema. E coli toma glucosa, fructosa, manitol, sacarosa, N-acetilglucosamina, celobiosa,
y otros carbohidratos por translocacin de grupos. Adems de su papel en el transporte,
las protenas del PTS pueden actuar como receptores para quimiotaxis.

Toma de hierro.

Casi todos los microorganismos requieren hierro para usarlo en citocromos y en

muchas enzimas. La toma de hierro se dificulta por la gran insolubilidad del in frrico
(Fe3+) y sus derivados, los cuales dejan poco hierro libre disponible para el transporte.
Muchas bacterias y hongos vencen esta dificultad secretando siderforos. Los
siderforos son molculas de bajo peso molecular que son capaces de
acomplejarse con iones de hierro y suplementarlos a la clula. Estas molculas
transportadoras de hierro son normalmente hidroxamatos o fenolatos-catecolatos.
 El ferrocromo es un hidroxamato producido por muchos hongos: la enterobactina
es un catecolato producido por E. coli. Al parecer tres grupos siderforos de acomplejan
con los orbitales del hierro para formar un complejo hexacoordinado octahdrico.

Los microorganismos secretan siderforos cuando hay poco hierro disponible en el

medio. Una vez que los complejos hierro-siderforo han alcanzado la superficie celular,
se unen a una protena receptora de siderforos. Luego el hierro es liberado para entrar
directamente a la clula, o bien el complejo entero es transportado hacia el interior. En
E. coli el receptor siderforo est en la membrana externa de la envoltura celular; cuando
el hierro alcanza el espacio periplsmico se mueve a travs de la membrana plasmtica
con la ayuda de otras protenas. Despus de que el
Hierro ha entrado a la clula, se reduce a su forma ferrosa (Fe2+). El hierro es tan crucial
para los microorganismos que ellos pueden usar ms de una ruta de adquisicin para
asegurar su suplemento adecuado.

4.5 Medios de Cultivo.

Gran parte de la microbiologa depende de la habilidad para crecer y mantener los

microorganismos en el laboratorio, y esto es posible slo si estn disponibles medios de
cultivo adecuados. Adems, los medios especializados son esenciales en el aislamiento e
identificacin de microorganismos, el anlisis de sensibilidad a antibiticos, anlisis de
agua y alimentos, microbiologa industrial, y otras actividades. Aunque todos los
microorganismos necesitan una fuente de energa, carbono, nitrgeno, fsforo, azufre y
varios minerales, la composicin precisa de un medio satisfactorio depender de la
especie que se pretende cultivar debido a que los requerimientos nutricionales varan
enormemente. El conocimiento del hbitat normal de un microorganismo es a menudo til
en la seleccin de un medio de cultivo apropiado debido a que sus requerimientos
nutricionales reflejan su ambiente natural. Frecuentemente un medio es usado para
seleccionar y crecer microorganismos especficos o ayudar a identificar una especie en
particular. En tal caso la funcin del medio tambin determinar su composicin.

Medio definido o sinttico.

Algunos microorganismos, particularmente auttrofos fotolitotrofos tales como

cianobacterias y algas eucariotas, pueden crecer en medios relativamente simples que
contengan CO2 como fuente de carbono (a menudo aadido como carbonato de sodio o
bicarbonato), nitrato o amonio como fuente de nitrgeno, sulfato, fosfato, y una variedad
de minerales. Tales medios en los cuales se conocen todos los componentes, son
conocidos como medios definidos o medios sintticos. Muchos hetertrofos
quimiorganotrofos tambin pueden ser crecidos en medios definidos con glucosa como
fuente de carbono y sales de amonio como fuente de nitrgeno. Los medios definidos son
usados ampliamente en investigacin, ya que a menudo es deseable conocer lo que el
microorganismo experimental est metabolizando.

Medio complejo.

Los medios que contienen algunos ingredientes de composicin qumica

desconocida son llamados medios complejos. Tales medios son muy tiles ya que
pueden ser lo suficientemente ricos y completos como para garantizar los requerimientos
nutricionales de muchos microorganismos diferentes.
Adems, los medios complejos son a menudo necesarios debido a que no se
conocen los requerimientos nutricionales de un microorganismo en particular.
 Esta es la situacin con muchas bacterias meticulosas, algunas de las cuales
incluso requieren un medio que contenga sangre o suero.

Los medios complejos contienen componentes indefinidos tales como peptonas,

extracto de carne y extracto de levadura. Las peptonas son hidrolizadas de protenas
preparadas por digestin proteoltica parcial de carne, casena, soya, gelatina, y otras
fuentes de protena. Pueden servir como fuente de carbono, energa y nitrgeno. El
extracto de carne y el extracto de levadura son extractos acuosos de carne magra y
levadura de cerveza, respectivamente. El extracto de carne contiene aminocidos,
pptidos, nucletidos, cidos orgnicos, vitaminas y minerales. El extracto de levadura es
una excelente fuente de vitaminas B as como de nitrgeno y compuestos de carbono.
Tres medios complejos usados comnmente son (1) caldo nutritivo, (2) caldo soya-
tripticasa, y (3) agar McConkey.

Si se necesita un medio slido para cultivo de microorganismos en superficie, el

medio lquido puede ser solidificado con la adicin de 1.0% a 2.0% de agar, ms
comnmente 1.5%. El agar es un polmero sulfatado compuesto principalmente de D-
galactosa, 3,6-anhidro-L-galactosa, y cido D-glucornico. Usualmente es extrado de
algas rojas. El agar es adecuado como agente solidificante debido a que despus de que
ha sido calentado en bao mara puede ser enfriado a 40-420C antes de endurecer y no
se fundir de nuevo hasta que la temperatura alcance de 80 a 900C. El agar es tambin
un excelente agente solidificante debido a que la mayora de los microorganismos no
pueden degradarlo.

A menudo se emplean tambin otros agentes solidificantes. Por ejemplo, la slica

gel es usada para crecer bacterias auttrofas sobre medio slido en ausencia de
sustancias orgnicas y para determinar la fuente de carbono para bacterias hetertrofas
suplementando el medio con varios compuestos orgnicos.

Tipos de medios.

Los medios como el caldo soya-tripticasa y el agar soya-tripticasa son llamados

medios para propsitos generales ya que soportan el crecimiento de muchos
microorganismos. La sangre y otros nutrientes especiales pueden aadirse a los medios
de propsitos generales para fomentar el crecimiento de bacterias hetertrofas
meticulosas. Estos medios especialmente fortificados (por ejemplo el agar sangre) son
llamados medios enriquecidos.

Los medios selectivos favorecen el crecimiento de microorganismos en particular.

Las sales biliares o los colorantes como la fucsina bsica y el cristal violeta favorecen el
crecimiento de bacterias gram-negativas inhibiendo el crecimiento de bacterias gram-
positivas. El agar endo, el agar eosina azul de metileno y el agar McConkey tres medios
ampliamente usados para la deteccin de E. coli y bacterias relacionadas en fuentes de
agua, contienen colorantes que suprimen el crecimiento de bacterias gram-positivas.
El agar McConkey tambin contiene sales biliares. Las bacterias tambin pueden
ser seleccionadas por incubacin con nutrientes que pueden usar especficamente. Un
medio que contiene slo celulosa como fuente de carbono y energa es bastante efectivo
en el aislamiento de bacterias que digieren celulosa. Las posibilidades de seleccin son
inmensas, y hay docenas de medios selectivos especiales en uso. Los medios
diferenciales son medios que distinguen entre diferentes grupos de bacterias e incluso
permiten la identificacin tentativa de microorganismos en base a sus caractersticas
biolgicas. El agar sangre es tanto un medio diferencial como enriquecido ya que
distingue entre bacterias hemolticas y no hemolticas.
 Las bacterias hemolticas (por ejemplo muchos estreptococos y estafilococos
aislados de la garganta) producen zonas claras alrededor de sus colonias debido a la
destruccin de las clulas rojas. El agar McConkey es tanto selectivo como diferencial.
Puesto que contiene lactosa y el colorante rojo neutro, las colonias que fermentan la
lactosa aparecen de rosa a rojo y se distinguen fcilmente de las colonias no
fermentativas.

4.6 Aislamiento de Cultivos Puros.

En hbitats naturales los microorganismos usualmente crecen en poblaciones

mezcladas y complejas que contienen diversas especies. Esto representa un problema
para el microbilogo ya que un tipo especfico de microorganismo no puede ser estudiado
adecuadamente en un cultivo mezclado. Es necesario un cultivo puro, una poblacin de
clulas originadas a partir de una nica clula, para caracterizar una especie individual.
Los cultivos puros son tan importantes que el desarrollo de las tcnicas de cultivo puro
por el bacterilogo Roberto Koch transform la microbiologa. Hay varias maneras de
preparar cultivos puros; a continuacin se explican algunas de las ms comunes.

Extendido en placa y estriado en placa.

Si una mezcla de clulas es extendida sobre una superficie de agar de manera que
cada clula crezca en una colonia completamente separada, un crecimiento
macroscpicamente visible en medio slido, cada colonia representar un cultivo puro. El
extendido en placa es una tcnica fcil y directa para obtener este resultado. Un pequeo
volumen de mezcla microbiana diluida conteniendo alrededor de 100 a 200 clulas o
menos es transferido al centro de una caja petri con agar y extendido uniformemente
sobre la superficie con un asa de vidrio en forma de bastn. Las clulas dispersadas se
desarrollarn en colonias aisladas. Debido a que el nmero de colonias debera igualar
al nmero de organismos viables en la muestra, la tcnica de extendido en placa puede
ser usada para contar la poblacin microbiana.

Tambin pueden obtenerse colonias puras por estriado en placa. La mezcla

microbiana es transferida al borde de una caja petri con agar con un asa de inoculacin (o
bacteriolgica) y luego distribuida por estriado sobre la superficie siguiendo diferentes
patrones. En algn punto del proceso clulas solitarias sern separadas en la superficie y
se desarrollaran en colonias individuales. Tanto en la tcnica de extendido como en la de
estriado, el xito del aislamiento depende de la separacin espacial de clulas nicas.

Vertido en placa.

La tcnica de vertido en placa, usada extensivamente para bacterias y hongos,

tambin produce colonias aisladas.
La muestra original es diluida varias veces para reducir la poblacin microbiana lo
suficiente para obtener colonias separadas cuando se los coloca en la caja petri. Luego,
volmenes pequeos de varias muestras diluidas son mezclados con agar lquido que ha
sido enfriado a c e r c a de 450C, y las mezclas son vertidas inmediatamente en cajas
petri estriles. La mayor parte de las bacterias y hongos no mueren por una corta
exposicin al agar tibio. Despus de que el agar se ha solidificado cada clula queda fija
en lugar y forma como una colonia individual. El nmero total de colonias iguala al
nmero de microorganismos viables en la muestra diluida. Las colonias que crecen en la
superficie pueden tambin ser utilizadas para preparar medio fresco y preparar cultivos
puros.
 Los mtodos descritos son incluso ms efectivos cuando se utilizan con medios
selectivos o diferenciales. Un buen ejemplo es el aislamiento de bacterias que degradan
el herbicida cido 2,4-diclorofenoxiactico (2,4-D). Las bacterias capaces de metabolizar
el 2,4-D pueden obtenerse con un medio lquido que contenga 2,4-D como fuente nica
de carbono y los componentes requeridos de nitrgeno, fsforo, azufre y minerales.
Cuando este medio es inoculado con suelo, slo crecern las bacterias capaces de
utilizar el 2,4-D. Despus de la incubacin, una muestra del cultivo original se transfiere a
un matraz con medio selectivo fresco para enriquecimiento adicional de las bacterias
metabolizadoras de 2,4-D. Despus de varias transferencias similares se obtendrn
poblaciones mixtas de bacterias degradadoras de 2,4-D. Los cultivos puros pueden
obtenerse cultivando esta mezcla en agar que contenga 2,4-D como fuente nica de
carbono. Slo las bacterias capaces de crecer en 2,4-D formarn colonias visibles y
pueden ser subcultivadas. Esta misma metodologa general es utilizada para aislar y
purificar una gran cantidad de bacterias seleccionndolas por caractersticas fisiolgicas
especficas.

Morfologa colonial y crecimiento.

El desarrollo de colonias sobre superficies de agar ayuda al microbilogo a

identificar bacterias debido a que especies individuales forman colonias de tamao y
apariencia caractersticos. Cuando una poblacin mixta ha sido cultivada en placa de
manera apropiada, es algunas veces posible identificar la colonia deseada en base a su
apariencia y usarla entonces para obtener un cultivo puro. La estructura de las colonias
bacterianas ha sido examinada tambin con el microscopio electrnico de barrido. La
estructura microscpica de las colonias es a menudo tan variable como la apariencia
visible.

En la naturaleza, las bacterias y muchos otros microorganismos crecen a menudo

como colonias sobre superficies. Por lo tanto, el entendimiento del crecimiento colonial es
esencial para los ecomicrobiolgos. Generalmente el crecimiento celular ms veloz ocurre
en el extremo de la colonia. El crecimiento es ms lento en el centro, y la autolisis celular
tiene lugar en la porcin central ms vieja de algunas colonias. Estas diferencias en
crecimiento aparecen debido a la creacin de gradientes de oxgeno, nutrientes y
productos txicos dentro de la colonia. En los extremos de la colonia el oxgeno y los
nutrientes son ms abundantes. El centro de la colonia, por supuesto, es mucho ms
delgado que el extremo. Consecuentemente, el oxgeno y los nutrientes no se difunden
rpidamente hacia el centro, mientras que los productos de desecho no pueden ser
rpidamente eliminados, y entonces el crecimiento en el centro de la colonia disminuye y
se detiene. Debido a estas variaciones ambientales dentro de una colonia, las clulas en
la periferia pueden estar creciendo a tasa mxima mientras que las clulas en el centro
estn m u r i e n d o .

CAPTULO V. CRECIMIENTO MICROBIANO.

El crecimiento puede ser definido como un incremento en los constituyentes

celulares. Si el microorganismo es cenoctico, esto es un organismo multinucleado en el
cual las divisiones nucleares no se acompaan de divisin celular, el crecimiento resulta
en un incremento en el tamao celular, pero no el nmero de clulas. El crecimiento lleva
a un aumento en el nmero de clulas cuando los microorganismos se reproducen por un
proceso como la fisin binaria. Al final, las clulas individuales se alargan y dividen dos
hijas de aproximadamente igual tamao.
 Usualmente no es conveniente investigar el crecimiento y reproduccin de
microorganismos individuales debido a su pequeo tamao. Por lo tanto, cuando se
estudia el crecimiento, los microbilogos siguen normalmente los cambios en la poblacin
total.

5.1 Curva de Crecimiento.

El crecimiento de una poblacin se estudia analizando la curva de crecimiento de

un cultivo microbiano. Cuando los microorganismos son cultivados en medio lquido
usualmente son crecidos en cultivo batch o sistema cerrado, esto es, se incuban en un
vaso de cultivo cerrado con slo un lote de medio. Debido a que no se proporciona medio
fresco durante la incubacin, la concentracin de nutrientes declina y la concentracin de
desechos se incrementa. El crecimiento de los microorganismos reproducindose por
fisin binaria puede graficarse como el logaritmo del nmero de clulas contra el tiempo
de incubacin. La curva resultante tiene cuatro fases distintivas.

a. Fase Lag. Cuando los microorganismos son introducidos en medio de cultivo fresco, el
nmero de clulas no se incrementa usualmente de manera inmediata y por lo tanto este
perodo es llamado fase lag. Aunque no tiene lugar la divisin celular y no hay incremento
en masa, la clula est sintetizando nuevos componentes. Una fase lag previa al inicio de
la divisin celular puede ser necesaria por diversas razones. Las clulas pueden ser
viejas y deficientes de ATP, cofactores esenciales, y ribosomas; todo esto debe ser
sintetizado antes de que el crecimiento pueda iniciar. El medio puede ser diferente de
aquel en el que el microorganismo estaba creciendo previamente. As, pueden requerirse
nuevas enzimas par usar los diferentes nutrientes. Posiblemente el microorganismo ha
sido daado y requiere tiempo para recuperarse. Sin importar las causas, eventualmente
las clulas se revitalizan, replican su DNA, comienzan a incrementar su masa, y
finalmente se dividen.
La fase lag vara considerablemente en longitud con las condiciones del microorganismo
y la naturaleza del medio. Esta fase puede ser bastante larga si el inculo proviene de
un cultivo viejo o uno que ha sido refrigerado. La inoculacin de un cultivo en un medio
qumicamente diferente tambin resulta en una fase lag larga. Por otra parte, cuando un
cultivo joven, vigoroso y en fase exponencial es transferido a medio fresco de la misma
composicin, la fase lag ser muy corta o incluso estar ausente.

b. Fase Exponencial. Durante la fase exponencial o fase log los microorganismos estn
creciendo y dividindose a la tasa mxima posible dada por su potencial gentico, la
naturaleza del medio, y las condiciones bajo las cuales ellos estn creciendo. Su tasa de
crecimiento es constante durante la fase exponencial, el microorganismo se divide y dobla
su nmero a intervalos regulares. Debido a que cada individuo se divide en momentos
ligeramente diferentes, la curva de crecimiento se eleva suavemente ms que a saltos
discretos.

c. La poblacin es ms uniforme en trminos de sus propiedades qumicas y fisiolgicas

durante esta fase; por lo tanto, los cultivos en fase exponencial son usados en estudios
bioqumicos y fisiolgicos.

d. Fase Estacionaria. Eventualmente el crecimiento de la poblacin cesa y la curva de

crecimiento de vuelve horizontal. Esta fase estacionaria usualmente es alcanzada por
las bacterias a un nivel de poblacin de cerca de 109 clulas por mililitro.
e. Otros microorganismos no alcanzas niveles tan altos de densidad de poblacin; los
cultivos de protozoarios y de algas a menudo tienen concentraciones mximas de cerca
de 106 clulas por mililitro. Por supuesto que el tamao final de la poblacin depende de
la disponibilidad de nutrientes y de otros factores, as como del tipo de microorganismo
que est siendo cultivado. En la fase estacionaria el nmero total de microorganismos
viables permanece constante. Esto puede resultar de un balance entre la divisin celular y la
muerte celular, o la poblacin puede simplemente cesar su divisin aunque mantengan su
actividad metablica.

Las poblaciones microbianas entran a fase estacionaria por diversas razones. Un factor
obvio es la limitacin de nutrientes; si un nutriente limitante est severamente escaso, la
poblacin crecer muy lentamente. Los microorganismos aerobios estn usualmente
limitados por la disponibilidad de O2. El oxgeno no es muy soluble y puede agotarse muy
rpidamente de manera que slo en la superficie se encuentra en concentraciones
adecuadas para el crecimiento. Las clulas pro debajo de la superficie no sern capaces
de crecer a menos que el cultivo sea agitado o aireado de otra manera. El crecimiento de
la poblacin tambin puede cesar debido a la acumulacin de producto de desecho
txico. Este factor parece limitar el crecimiento de muchos cultivos anaerobios. Por
ejemplo, los estreptococos pueden producir mucho cido lctico y otros cidos orgnicos
por la fermentacin del azcar de manera que el medio se vuelve cido y se inhibe el
crecimiento. Los cultivos de estreptococos tambin pueden entrar en fase estacionaria
debido al agotamiento de su fuente de azcar. As, la entrada en fase estacionaria puede
ser el resultado de diversos factores operando en conjunto.

f. Fase de Muerte. El deterioro ambiental ocasionado por el agotamiento de nutrientes o la

acumulacin de desechos txicos lleva a la disminucin del nmero de clulas viables,
caracterstica distintiva de la fase de muerte celular. La muerte de una poblacin
microbiana, como su crecimiento durante a fase exponencial, es usualmente logartmica
(esto es, una proporcin constante de clulas muere cada hora). Este patrn se mantiene
incluso cuando el nmero total de clulas permanece constante debido a que las clulas
simplemente fallan en lisarse despus de morir. A menudo la nica manera de decidir si
una clula bacteriana es viable o no es mediante incubacin en medio fresco; si no
crece y se reproduce, se asume que est muerta.
Aunque usualmente la mayor parte de la poblacin microbiana muere en forma
logartmica, la tasa de muerte puede disminuir despus de que la poblacin ha sido
reducida drsticamente. Esto es debido a la presencia de clulas sobrevivientes o
particularmente resistentes.

Las matemticas del crecimiento.

El conocimiento de la tasa de crecimiento microbiano durante la fase exponencial

es indispensable para los microbilogos. Los estudios de la tasa de crecimiento
contribuyen a la investigacin bsica de fisiologa y ecologa y a la solucin de problemas
aplicados en la industria.
Por lo tanto, los aspectos cuantitativos del crecimiento en fase exponencial se
discutirn a continuacin.

Durante la fase exponencial cada microorganismo se divide a intervalos

constantes. As, la poblacin se duplica en nmero en una longitud especfica de tiempo
llamada tiempo de generacin o tiempo de duplicado.
 Esta situacin puede ser ilustrada con un ejemplo simple. Suponga que un tubo de
cultivo es inoculado con una clula que se divide cada 20 minutos (Tabla 5.1). La
poblacin ser de 2 clulas despus de 20 minutos, 4 clulas despus de 40 minutos, y
as. Debido a que la poblacin se duplica cada generacin, el incremento en la poblacin
es siempre 2n, donde n es el nmero de generaciones. El incremento resultante en la
poblacin es exponencial o logartmico.

Tabla 5.1 Un ejemplo de crecimiento exponencial.

a n
Tiempo Nmero de 2n Poblacin0 (N x 2 ) Log10Nt
divisiones
0
0 0 2 =1 1 0.000
1
20 1 2 =2 2 0.301
2
40 2 2 =4 4 0.602
3
60 3 2 =8 8 0.903
4
80 4 2 = 16 16 1.204
5
100 5 2 = 32 32 1.505
6
120 6 2 = 64 64 1.806
a
El cultivo hipottico comienza con una clula que tiene un tiempo de generacin de 20 minutos.

Estas observaciones pueden ser expresadas como ecuaciones para el tiempo de

generacin.
Sea N0 = nmero inicial de la poblacin.
Nt = la poblacin al tiempo t
n = el nmero de generaciones al tiempo t
La inspeccin de resultados de la tabla 5.1 muestra que

Nt N 0 x2 n

Resolviendo para n, el nmero de generaciones, donde todos los logaritmos son en

base 10,

log Nt log N0 nx log 2

y

log Nt log N 0 log Nt log N0

n
log 2 0.301
 La tasa de crecimiento en un cultivo batch puede ser expresada en trminos de la
constante de velocidad de crecimiento (k). Este es el nmero de generaciones por unidad
de tiempo, a menudo expresada como las generaciones por hora.
n log Nt log N0
k
t 0.301t

El tiempo que toma una poblacin para doblar su tamao, esto es el tiempo medio
de generacin o tiempo medio de duplicacin (g), puede ahora ser calculado. Si la
poblacin se duplica (t=g), entonces

Nt 2N 0

Los tiempos de generacin varan marcadamente con las especies de

microorganismos y con las condiciones ambientales. Su rango va desde menos de 10
minutos (0.17 h) para unas cuantas bacterias, hasta varios das para el caso de algunos
microorganismos eucariotas. Los tiempos de generacin en la naturaleza sin usualmente
ms largos que en cultivo.

5.2 Medicin del Crecimiento Microbiano

Hay muchas maneras de medir el crecimiento microbiano para determinar la velocidad

de crecimiento y el tiempo de generacin. Puede monitorearse tanto la masa como el
nmero de la poblacin ya que el crecimiento lleva al incremento en ambos. Las tcnicas
ms comnmente empleadas para la medicin del crecimiento se examinan brevemente
y se sealan las desventajas de cada una de ellas.

Medicin del nmero de clulas.

La manera ms obvia de determinar nmeros microbianos es a travs de su

cuenta directa. El uso de una cmara contadora es fcil, barato, y relativamente rpido;
adems se obtiene tambin informacin sobre el tamao y morfologa de los
microorganismos. La cmara de Petroff-Hausser para conteo puede ser usada para
contar bacterias; los hemocitmetros pueden ser usados para los ms grandes
microorganismos eucariotas. Estas laminillas especialmente diseadas tienen cmaras
de profundidad conocida con una cuadrcula grabada sobre el fondo de la cmara. El
nmero de microorganismos en una muestra puede ser calculado considerando en la
cuenta el volumen de la cmara y cualquier dilucin de la muestra requerida. Hay algunas
desventajas en esta tcnica. La poblacin microbiana debe ser bastante grande para
tener exactitud debido a que slo se analiza un volumen pequeo. Esa bastante difcil o
imposible distinguir entre clulas vivas y clulas muertas en la cmara de conteo.

Microorganismos ms grandes como protozoarios, algas y levaduras no

filamentosas pueden ser contados directamente con contadores electrnicos tales como
el Contador Coulter. La suspensin microbiana es forzada a pasar a travs de un
pequeo orificio. Una corriente elctrica fluye a travs del orificio y electrodos colocados a
ambos lados miden la resistencia elctrica. Cada vez que una clula microbiana pasa a
travs del orificio la resistencia elctrica se incrementa (o la conductividad disminuye) y la
clula es contada. El contador Coulter da resultados exactos con clulas grandes y es
extensamente utilizado en laboratorios de hospitales para contar clulas rojas y blancas.
 No es til para contar bacterias debido a la interferencia por pequeas partculas
de polvo, la formacin de filamentos, y otros problemas.

Las cmaras de conteo y los contadores elctricos producen cuentas de clulas,

estn vivas o no. Hay tambin diversas tcnicas de cuanta de viables, procedimientos
especficos para clulas capaces de crecer y reproducirse. En la mayora de los
procedimientos de cuenta de viables una muestra diluida de bacterias u otros
microorganismos es dispersada sobre una superficie slida. Cada microorganismo o
grupo de microorganismos se desarrolla en una colonia distintiva. El nmero original de
microorganismos viables en la muestra puede calcularse a partir del nmero de colonias
formadas y la dilucin de la muestra. Por ejemplo, si 1.0 mL de una dilucin 1x10-6
produce
150 colonias, la muestra original contena cerca de 1.5 x 108 clulas por mililitro.
Usualmente la cuenta se hace ms exacta usando un contador especial de colonias. De
esta manera, las tcnicas de vertido y estriado en placa pueden emplearse para
determinar el nmero de microorganismos presentes en una muestra.
Las tcnicas en placa son simples, sensibles, y ampliamente usadas para contar
bacterias y otros microorganismos en muestras de alimentos, agua y suelo. Varios
problemas, sin embargo, pueden llevar a un conteo inexacto. Un bajo conteo puede
resultar si grupos de clulas no son dispersados. Debido a que no es posible estar
absolutamente seguros de que cada colonia fue originada de una clula individual, el
resultado a menudo se expresa como unidades formadoras de colonias (UFC) ms que
como nmero de microorganismos. Las muestras deben producir entre 25 y 250 colonias
para mejores resultados. Por supuesto que la cuenta ser tambin baja si el medio
empleado no puede soportar el crecimiento de todos los microorganismos viables
presentes. El agar caliente usado en la tcnica de vertido en placa puede daar o matar a
clulas sensibles.; as, a veces la tcnica de estriado en placa da cuentas mayores que la
de vertido.

El nmero de microorganismos se determina frecuentemente a partir de cuentas

de colonias que crecen sobre filtros especiales de membrana que tienen poros lo
suficientemente pequeos para atrapar bacterias. En esta tcnica, llamada de filtro de
membrana, la muestra es pasada a travs de filtros de membrana especiales. El filtro es
luego colocado sobre un medio con agar o en una almohadilla empapada con medio
lquido, e incubado hasta que cada clula forma una colonia separada. El nmero de
colonias contadas da el nmero de microorganismos en la muestra filtrada y un medio
especial puede ser utilizado para seleccionar microorganismos especficos.

Los filtros de membrana tambin son utilizados para contar bacterias directamente.
Primero la muestra se filtra a travs de un filtro de membrana de policarbonato que ha
sido teido de negro para proporcionar un buen fondo de observacin de objetos
fluorescentes. Luego las bacterias son teidas con un colorante fluorescente tal como el
naranja de acridina y observadas microscpicamente. Los microorganismos teidos con
naranja de acridina brillan de color naranja o verde y son fcilmente contados
con un microscopio de epifluorescencia. Usualmente las cuentas obtenidas con esta
tcnica son ms altas que las obtenidas con cultivos. En la actualidad existen kits
comerciales con colorantes que diferencian entre clulas vivas y clulas muertas.

Medicin de la masa celular.

El incremento en la masa celular, as como en el nmero de clulas, acompaa al

crecimiento de la poblacin. Por lo tanto, las tcnicas de medicin de la masa celular
pueden utilizarse para medir el crecimiento.
 La tcnica ms directa es la determinacin del peso seco microbiano. Las clulas
creciendo en medio lquido se recolectan por centrifugacin, lavadas, secadas en un
horno, y pesadas. Esta es una tcnica especialmente til para medir el crecimiento de los
hongos. Sin embargo, es tardada y poco sensible. Debido a que el peso de las bacterias
es pequeo, puede ser necesario centrifugar varios cientos de mililitros de cultivo para
colectar suficiente muestra.

Una tcnica ms rpida y sensible depende del hecho de que las clulas
microbianas dispersan la luz que incide sobre ellas. Debido a que las clulas microbianas
en una poblacin son aproximadamente de tamao constante, la cantidad de dispersin
es proporcional a la concentracin de clulas presentes. Cuando la concentracin de
bacterias alcanza cerca de 10 millones de clulas (107) por mililitro, el medio se vuelve
turbio. Incrementos posteriores en la concentracin resultan en mayor turbidez y menos
luz es transmitida a travs del medio. El grado de luz dispersada puede ser medido con
un espectrofotmetro y es casi lineal respecto a la concentracin bacteriana a niveles
bajos de absorbancia. De esta manera, el crecimiento de la poblacin puede ser medido
fcilmente espectrofotomtricamente mientras la poblacin sea lo suficientemente grande
para dar turbidez detectable.

Si la cantidad de sustancia en cada clula es constante la cantidad total de los

constituyentes celulares de dicha clula est relacionada directamente con la masa
celular microbiana total. Por ejemplo, una muestra de clulas lavadas colectadas de un
volumen conocido de medio puede ser analizado por protena o nitrgeno total. Un
incremento en la poblacin microbiana se reflejar en mayor nivel de protena total.
Similarmente, pueden usarse determinaciones de clorofila para medir las poblaciones de
algas, y la cantidad de ATP puede usarse para estimar la cantidad de masa microbiana
viva.

5.3 Productividad del Crecimiento y Efecto del Nutriente Limitante.

Cuando el crecimiento microbiano est limitado por una concentracin baja de un

nutriente requerido, el crecimiento neto final o produccin de clulas se incrementa con la
cantidad inicial del nutriente limitante presente. Esta es la base del anlisis microbiolgico
de vitaminas y otros factores de crecimiento. La tasa de crecimiento tambin se
incrementa con la concentracin del nutriente, pero de manera hiperblica. La forma de
la curva parece reflejar la velocidad de toma del nutriente por las protenas de transporte
del microorganismo. A niveles suficientemente altos del nutriente los sistemas de
transporte estn saturados y la velocidad de crecimiento no mejora con el incremento en
la concentracin del nutriente.

La cantidad de masa microbiana producida a partir de un nutriente puede

expresarse cuantitativamente como la produccin de crecimiento (Y):

masa de microorganismos formados masa de sustrato consumido

Y

La produccin de crecimiento de bacterias fermentativas se ha estudiado

extensivamente. Cuando crecen en medio nutricionales ricos las bacterias pueden utilizar
la fermentacin de carbohidratos slo para generacin de energa y emplear otras
sustancias, como aminocidos, como materia prima para biosntesis. La eficiencia del
ATP usado durante la fermentacin se refleja en el valor YATP:


 Aunque los valores de YATP pueden variar a concentraciones muy bajas de azcar,
el YATP de la mayora de las bacterias es de cerca de 10.5 g/mol a niveles altos de
azcar. As, parece que las bacterias usan generalmente la energa en biosntesis con
una eficiencia bastante constante. Ms an, el valor medido de YATP es mucho ms bajo
que el mximo terico de 32, el cual es el valor de YATP esperado si todo el ATP fuera
usado en biosntesis. Mucho del ATP es usado en transporte, trabajo mecnico, y
probablemente otras formas.

5.4 Cultivo Continuo de Microorganismos.

Hasta este punto, se ha puesto atencin en sistemas cerrados, denominados cultivos
batch, en los cuales el aporte de nutrientes no se renueva y los desechos no son
removidos. El crecimiento exponencial dura slo unas pocas generaciones y la fase
estacionaria se alcanza pronto. Sin embargo, es posible crecer microorganismos en un
sistema abierto, un sistema en el cual se mantienen condiciones ambientales constantes
a travs de la provisin contina de nutrientes y la remocin de desechos. Estas
condiciones se alcanzan en el laboratorio por medio de sistemas continuos de cultivo.
Una poblacin microbiana puede ser mantenida en fase de crecimiento exponencial y a
una concentracin constante de biomasa por largos periodos en un sistema de este tipo.

El quimiostato.

Los dos tipos principales de sistemas continuos de cultivo comnmente usados

son: (1) quimiostato y (2) turbidostato. Un quimios tato se construye de manera que el
medio estril es alimentado al vaso de cultivo a la misma velocidad que se remueve el
medio conteniendo microorganismos. El medio de cultivo para un quimiostato posee un
nutriente esencial (por ejemplo un aminocido) en cantidad limitante. Debido a la
presencia de este nutriente limitante, la velocidad de crecimiento est determinada por la
velocidad a la cual se alimenta medio nuevo en la cmara de crecimiento y la densidad
celular final depende de la concentracin del nutriente limitante. La tasa de intercambio
de nutrientes est expresada como la tasa de dilucin (D), la velocidad a la cual el medio
fluye a travs del vaso de cultivo, con respecto al volumen de dicho vaso, donde f es la
velocidad de flujo (ml/h) y V es el volumen del vaso (mL):

Tanto los niveles de poblacin microbiana como el tiempo de generacin se

relacionan con la tasa de dilucin. La densidad de poblacin microbiana permanece sin
cambio en un rango amplio de valores de la tasa de dilucin. El tiempo de generacin
decrece al incrementarse la tasa de dilucin. El nutriente limitante estar casi
completamente agotado bajo estas condiciones balanceadas. Si la tasa de dilucin
aumenta demasiado el microorganismo puede de hecho ser lavado fuera del vaso de
cultivo antes de que pueda reproducirse debido a que la tasa de dilucin es ms grande
que la velocidad mxima de crecimiento. La concentracin del nutriente limitante aumenta
a tasas de dilucin altas debido a que pocos microorganismos estn presentes para
utilizarlo.

A tasas de dilucin muy bajas un incremento en D causa un aumento tanto en la

densidad celular como en la velocidad de crecimiento. Esto es debido al efecto de la
concentracin del nutriente sobre la velocidad de crecimiento, a veces llamado relacin
de Monod. A bajas tasas de dilucin hay una baja disponibilidad de nutrientes. Mucha de
la energa disponible debe ser utilizada para mantenimiento celular, no para crecimiento y
reproduccin. Conforme la tasa de dilucin se incrementa, la cantidad de nutrientes y la
densidad celular resultante aumentan debido a que hay energa disponible tanto para
mantenimiento como para crecimiento.
 La velocidad de crecimiento se incrementa cuando la energa total disponible excede
a la energa de mantenimiento.

El turbidostato.

El segundo tipo de sistema continuo de cultivo, el turbidostato, tiene una fotocelda

que mide la absorbancia o turbidez del cultivo en el vaso de crecimiento. La velocidad de
flujo del medio a travs del vaso es regulada automticamente para mantener una
turbidez o densidad celular predeterminada. El turbidostato difiere del quimiostato en
varios aspectos. La tasa de dilucin en el turbidostato vara ms que permanecer
constante y el medio de cultivo carece de un nutriente limitante. El turbidostato opera
mejor a tasas de dilucin altas; el quimiostato es ms estable y efectivo a tasas bajas de
dilucin.

Los sistemas continuos de cultivo son muy tiles debido a que proporcionan una
fuente constante de clulas en fase exponencial y que crecen a velocidad conocida. Esto
hace posible el estudio del crecimiento microbiano a niveles muy bajos de nutrientes,
concentraciones cercanas a aquellas que se encuentran en ambientes naturales. Estos
sistemas son esenciales para la investigacin en muchas reas, por ejemplo en estudios
sobre interacciones entre especies microbianas bajo condiciones ambientales semejantes
a pozas o lagos dulces.

5.5 Crecimiento Balanceado y No Balanceado.

El crecimiento exponencial, ya sean en sistema batch o continuo, es crecimiento

balanceado. Esto es, todos los constituyentes celulares se sintetizan a tasas constantes y
relacionadas con los otros componentes. Si los niveles de nutrientes u otras condiciones
ambientales cambian, resulta un crecimiento no balanceado debido a que la tasa de
sntesis de los componentes celulares vara con respecto a la de otros hasta que se
alcance un nuevo estado balanceado. Esta respuesta es observada en un experimento
en el cual se transfieran bacterias de un medio nutricional pobre a uno rico. Las clulas
primero construyen nuevos ribosomas para mejorar su capacidad de sntesis de
protenas; esto es seguido por un incremento en la sntesis de protenas y DNA.
Finalmente, tiene lugar el esperado aumento en la velocidad de reproduccin.

El crecimiento no balanceado tambin resulta cuando una poblacin bacteriana es

desplazada de un medio rico a uno pobre. El microorganismo puede previamente haber
sido capaz de obtener muchos componentes celulares directamente del medio. Cuando
se le cambia aun medio nutricionalmente inadecuado necesita tiempo para sintetizar las
enzimas requeridas para la biosntesis de los nutrientes no disponibles.
Consecuentemente la divisin celular y la replicacin del DNA continan despus del
desplazamiento, pero la sntesis de protenas se vuelve lenta. Las clulas se vuelven ms
pequeas y se reorganizan a s mismas metablicamente hasta que sean capaces de
crecer nuevamente y el crecimiento balanceado sea reanudado.

Estos experimentos de desplazamiento demuestran que el crecimiento microbiano

est bajo control preciso y coordinado y responde rpidamente a cambios en las
condiciones ambientales.

5.6 Influencia de Factores Ambientales Sobre el Crecimiento Microbiano.

El crecimiento de los microorganismos es afectado enormemente por la naturaleza

fsica y qumica de su ambiente.
 El entendimiento de la influencia ambiental ayuda al control del crecimiento
microbiano y al estudio de la distribucin ecolgica de los microorganismos.

Solutos y actividad del agua.

Debido a que una membrana selectiva y semipermeable separa a los

microorganismos de su ambiente, stos pueden ser afectados por cambios en la
concentracin osmtica de su entorno. Si un microorganismo es colocado en una
solucin hipotnica el agua entrar a la clula y causar su estallido a menos que de
algn modo se impida el flujo de agua. La mayora de las bacterias, algas y hongos tienen
paredes celulares rgidas que mantienen la forma e integridad de la clula. Adems,
muchos microorganismos mantienen la concentracin osmtica de su protoplasma por
encima de la del medio circundante con el uso de solutos compatibles, as la membrana
plasmtica est siempre presionada firmemente contra la pared celular. Los solutos
compatibles son solutos que son compatibles con el metabolismo y el crecimiento a altas
concentraciones intercelulares. La mayora de las bacterias incrementan su concentracin
osmtica interna a travs de la sntesis o toma de colina, botaina, prolina, cido glutmico
y otros aminocidos; niveles elevados de in potasio estn tambin involucrados en algn
grado. Las algas y los hongos emplean sacarosa y polioles (arabitol, glicerol, y manitol)
para el mimo propsito. Los polioles y aminocidos son solutos ideales para esta funcin
porque normalmente no destruyen la estructura enzimtica y su funcin. Unas pocas
bacterias, como Holobacterium salinarium, mejoran su concentracin osmtica con iones
potasio. Las enzimas de este microorganismo han sido alteradas de manera que
requieren altas concentraciones de sal para su actividad normal. Puesto que los
protozoarios no tiene una pared celular, deben usar vacuolas contrctiles para eliminar el
exceso de agua cuando viven en ambientes hipotnicos.

Cuando microorganismos con pared celular rgida son colocados en un ambiente

hipertnico, el agua fluye hacia fuera y la clula se encoge, un proceso conocido como
plasmlisis. Esto deshidrata la clula y puede daar la membrana plasmtica: usualmente
la clula se vuelve metablicamente inactiva y cesa de crecer.

La cantidad de agua disponible para los microorganismos puede reducirse por

interaccin con molculas de soluto (efecto osmtico) o por adsorcin a la superficie de
slidos (efecto de matriz). Debido a que la concentracin osmtica de un hbitat tiene un
efecto profundo sobre los microorganismos, es til tener la capacidad de expresar
cuantitativamente el grado de disponibilidad de agua. Los microbilogos por lo general
usan en la actividad del agua (aw) para este propsito. La actividad del agua de una
solucin es 1/100 de la humedad relativa de la solucin (cuando se expresa como por
ciento). Esto es equivalente a la tasa de presin de vapor de la solucin (Psoln) sobre la
del agua pura (Pagua).
Pso ln
a w
aguaP

La actividad del agua de una solucin o un slido puede determinarse en una

cmara sellada midiendo la humedad relativa despus de que el sistema ha alcanzado el
equilibrio. Suponga que despus de que una muestra ha sido tratada de esta manera el
aire por encima esta 95% saturado, esto es, al aire contiene el 95% de la mezcla que
podra tener en el equilibrio a la misma temperatura con una muestra de agua pura. La
humedad relativa sera 95% y la actividad de agua de la muestra 0.95. La actividad del
agua se relaciona inversamente a la presin osmtica; si una solucin tiene alta presin
osmtica, su aw es bajo.
 Los microorganismos difieren ampliamente en su habilidad para adaptarse a
hbitats con baja actividad de agua. Un microorganismo debe hacer un esfuerzo extra
para crecer en hbitats con bajo aw porque debe mantener una alta concentracin interna
de solutos para retener agua. Algunos microorganismos pueden hacer esto y se les llama
osmotolerantes; crecen en un amplio rango de actividades de agua y concentracin
osmtica. Por ejemplo, Staphylococcus aureus puede cultivarse en medios que contienen
cualquier concentracin de cloruro de sodio por arriba de 3 M. La levadura
Saccharomyces rouxii crecer en soluciones de azcar con valores de aw tan bajos como
0.6. El alga Dunaliella viridis tolera concentraciones de cloruro de sodio desde 1.7 M
hasta soluciones saturadas .

Aunque unos pocos microorganismos son en verdad osmotolerantes, la mayora

slo crecen bien a actividades de agua de alrededor de 0.98 (el aw aproximado del agua de
mar) o ms altos.

Las halfilas se han adaptado de tal manera a condiciones salinas que requieren
cerca de 2.8 M a saturacin (cerca de 6.2 M) para bacterias haloflicas extremas.
Halobacterium y otras bacterias haloflicas extremas han modificado significativamente la
estructura de sus protenas y membranas ms que simplemente modificar la
concentracin intracelular de solutos, la estrategia utilizada por la mayora de las
osmotolerantes. Las haloflicas extremas se han adaptado exitosamente a un ambiente
que destruye a la mayora de los microorganismos. En el proceso se han vuelto tan
especializadas que han perdido flexibilidad ecolgica y slo pueden prosperar en pocos
hbitats extremos.

PH.

No es de sorprender que el pH afecte dramticamente el crecimiento microbiano.

Cada especie tiene un rango definido de pH de crecimiento y un pH ptimo.

- Acidfilas. Tienen su pH ptimo de crecimiento entre 0 y 5.5.

- Neutrfilas. Tienen su pH ptimo de crecimiento entre 5.5 y 8.0.
- Alcalfilas. Tienen su pH ptimo de crecimiento entre 8.5 y 11.5.
- Alcalfilas extremas. Prefieren pH por encima de 10.0.

En general los diferentes grupos microbianos tienen preferencias de pH

caractersticas. La mayora de las bacterias y los protozoarios son neutrfilos. La
mayora de los hongos prefieren entornos ligeramente cidos, de cerca de 4 a 6; las algas
tambin parecen preferir estas condiciones. Hay muchas excepciones a esta
generalizacin. Por ejemplo, el alga Cyanidium caldarium y la bacteria Sulfolobus
acidocaldarius son habitantes comunes de manantiales termales cidos; ambos crecen
bien a pH de alrededor de 1 a 3 y altas temperaturas.

Aunque los microorganismos generalmente crecen bien a rangos amplios de pH,

hay lmites a su tolerancia. Variaciones drsticas en el pH pueden daar al
microorganismo rompiendo la membrana plasmtica o inhibiendo la actividad de enzimas
y protenas transportadoras de membrana. La muerte bacteriana ocurre si el pH interno
baja ms all de 5.0 y 5.5. Cambios en el pH externo tambin pueden alterar la ionizacin
de las molculas de nutrientes y reducir as su disponibilidad para el organismo.
 A pesar de la amplia variacin en el pH de su hbitat, el pH interno de la mayora
de los microorganismos es cercano a la neutralidad. Los microorganismos a menudo
deben adaptarse a cambios de pH en su ambiente para sobrevivir. Los microorganismos
frecuentemente cambian el pH de su propio hbitat produciendo desechos metablicos
cidos o bsicos.

Temperatura.

La temperatura ambiental afecta profundamente a los microorganismos, al igual

que a otros organismos. Adems, los microorganismos son especialmente susceptibles
porque usualmente son unicelulares y poiquilotermos, es decir, su temperatura vara con
la del ambiente externo. Por estas razones, la temperatura de la clula microbiana refleja
directamente la de su entorno. Un factor ms importante para la influencia de la
temperatura sobre el crecimiento es la sensibilidad de las reacciones catalizadas por
enzimas a la temperatura. A bajas temperaturas un aumento en la temperatura
incrementa la velocidad de crecimiento debido a que la velocidad de una reaccin
catalizada por enzimas, al igual que cualquier reaccin qumica, se dobla cada 100C de
incremento en temperatura. Debido a que la velocidad de cada reaccin se incrementa,
el metabolismo en su totalidad es ms activo a temperaturas altas, y el microorganismo
crece ms rpido. Ms all de cierto punto incrementos adicionales desaceleran el
crecimiento y temperaturas suficientemente altas son letales. Las temperaturas altas
daan al microorganismo desnaturalizando las enzimas, las protenas transportadoras, y
otras protenas. Las membranas microbianas son tambin rotas por el calor. As, aunque
las enzimas funcionales operan ms rpidamente a temperaturas altas, el
microorganismo puede ser daado a tal grado que el crecimiento sea inhibido debido a
que el dao no puede ser reparado adecuadamente.

Debido a esta influencia opuesta de la temperatura, el crecimiento microbiano tiene

una dependencia caracterstica de la temperatura con temperaturas cardinales distintivas,
temperaturas de crecimiento mnima, ptima, y mxima. Aunque la forma de a curva de
dependencia de la temperatura puede variar, la temperatura ptima es siempre ms
cercana a la mxima que a la mnima. Las temperaturas cardinales de una especie en
particular no son fijas de manera rgida sino que a menudo dependen hasta cierto grado
de otros factores ambientales tales como el pH y los nutrientes disponibles.

Las temperaturas cardinales varan ampliamente entre los microorganismos. El

rango de temperatura ptima va desde 00C hasta 750C, mientras que el crecimiento
microbiano ocurre a temperaturas que se extienden desde -200C hasta arriba de 1000C.
El rango de temperatura de crecimiento de un microorganismo en
Particular tiene usualmente un rango de 30 grados. Algunas especies (como Neisseria
gonorrhoeae) tienen rangos pequeos y son llamados estenotermales; otros, como
Enterococcus faecalis, crecen en rangos amplios de temperatura y son llamados
euritermales. Los principales grupos de microorganismos difieren en sus temperaturas
mximas de crecimiento. El lmite superior para los protozoarios es de
Cerca de 500C. Algunas algas y hongos pueden crecer a temperaturas tan altas como 55
a 600C. Se han encontrado bacterias creciendo a o cerca de 1000C, el punto de ebullicin
del agua. Claramente, las procariotas pueden crecer a temperaturas mayores que los
eucariotas.

Los microorganismos pueden ser colocados en una de cinco clases de acuerdo a

su rango de temperatura de crecimiento.
- Psicrfilas. Crecen bien a 00C y tienen una temperatura ptima de crecimiento de 150C o
menos; la mxima es de alrededor de 200C.
- Psicrotrofas o psicrfilas facultativas. Pueden crecer a 00C aunque tienen
Una ptima entre 20 y 300C y una mxima de cerca de 350C. Estas bacterias son
importantes en el deterioro de alimentos refrigerados.
- Mesfilas. Temperatura ptima de crecimiento entre 20 y 450C; mnima de
150C y mxima de cerca de 450C. La mayora de los microorganismos caen
probablemente en esta categora.
- Termfilas. Pueden crecer a temperaturas de 550C o ms altas. Su mnima es de
cerca de 450C y a menudo tienen una ptima de entre 55 y 650C. Mxima entre 90 y
1000C.
- Hipertermfilas. Tienen una temperatura ptima de crecimiento entre 80 y 1100C.
Usualmente no crecen bien por debajo de 550C.

Concentracin de oxgeno.

Un organismo capaz de crecen en presencia de O2 atmosfrico es un aerobio,

mientras que uno que puede crecer en su ausencia es un anaerobio. Casi todos los
organismos superiores son completamente dependientes del O2 atmosfrico para crecer,
esto es, son aerobios obligados. El oxgeno sirve como el aceptor final de electrones para
la cadena transportadora de electrones en la respiracin aerobia. Adems, las eucariotas
aerobias emplean O2 en la sntesis de esteroles y cidos grasos insaturados. Las
anaerobias facultativas no requieren oxgeno para crecer, pero crecen mejor en su
presencia. Las anaerobias aerotolerantes, tales como Enterococcus faecalis,
simplemente ignoran el O2 y crecen igualmente bien si est presente o no. En contraste,
las anaerobias estrictas u obligadas no toleran el oxgeno y mueren en su presencia.
Las aerotolerantes y las anaerobias estrictas no pueden generar energa a travs de la
respiracin y deben emplear la fermentacin o respiracin anaerobia para este propsito.
Finalmente, hay unas pocas aerobias tales como Campylobacter, llamadas microerfilas,
que son daadas por niveles normales de O2 atmosfrico (20%) y requieren niveles de O2 en
un rango del 2 al 10% para crecer.

Un grupo microbiano puede mostrar ms de un tipo de relacin para el O 2. Los

cinco tipos se encuentran entre las bacterias y protozoarios. Los hongos son
normalmente aerobios, pero algunas especias, particularmente levaduras, son anaerobias
facultativas. Las algas son casi siempre aerobias obligadas.

Presin.

La mayora de los microorganismos pasan su vida en tierra o en la superficie del

agua, siempre sujetos a presiones de 1 atmsfera (atm) y nunca son afectados
significativamente por la presin. Pero la presin hidrosttica puede alcanzar 600 a 1100
atm en el fondo del ocano, con temperaturas de 2 a 30C. A pesar de estos extremos, las
bacterias sobreviven y se adaptan. Muchas son barotolerantes: el incremento en la
presin no las afecta adversamente tanto como a las bacterias no tolerantes. Algunas
bacterias del intestino de invertebrados del fondo del ocano, tales como anfpodos, son
baroflicas, esto es, crecen ms rpidamente a presiones altas. Estas bacterias juegan un
papel importante en el reciclado de nutrientes en el fondo del ocano.

Radiacin.

Nuestro planeta es bombardeado con radiacin electromagntica de varios tipos.

Muchas formas de esta radiacin son muy dainas para los microorganismos.
 Esto es en particular valido para la radiacin ionizante, radiacin de muy corta
longitud de onda o alta energa la cual puede causar que los tomos pierdan electrones y
se ionicen. Los dos tipos principales de radiacin ionizante son los rayos X (producidos
artificialmente) y los rayos gamma (emitidos el desintegrarse radioistopos). Bajos niveles
de radiacin ionizante producirn mutaciones que pueden resultar indirectamente en la
muerte, mientras que niveles altos son directamente letales. Aunque los microorganismos
son ms resistentes a la radiacin ionizante que los organismos mayores, pueden ser
destruidos por dosis suficientemente largas de radiacin. La radiacin ionizante puede ser
utilizada para esterilizar. Algunas bacterias (como Deinococcus radiodurans) y algunas
esporas bacterianas, pueden sobrevivir a grandes dosis de radiacin ionizante.

La radiacin ultravioleta (UV) mata todo tipo de microorganismos debido a su corta

longitud de onda (aproximadamente 10 a 400 nm) y alta energa. La radiacin UV ms
letal tiene una longitud de onda de 260 nm, la longitud de onda ms efectivamente
absorbida por el DNA. El mecanismo primario de dao por UV es la formacin de dmeros
de timina en el DNA. Dos timinas adyacentes en una cadena de DNA son unidas
covalentemente e inhiben la funcin y replicacin del DNA. Este dao es reparado de
diversas maneras. En la fotoreactivacin, la luz azul es utilizada por una enzima
fotoreactivadora para romper los dmeros de timina. Una secuencia corta que contenga
los dmeros de timina puede tambin ser cortada y reparada. Este proceso ocurre en
ausencia de luz y es llamado reactivacin oscura. Cuando la exposicin a UV es
demasiado larga, el dao es tan extenso que la reparacin es imposible

CAPTULO VI. CONTROL DE MICROORGANISMOS POR AGENTES FSICOS Y

QUMICOS.

La gente ha practicado desinfeccin y esterilizacin desde el comienzo del registro

histrico, incluso antes de que se sospechara la existencia de microorganismos. En
nuestros das, la habilidad para destruir microorganismos no es menos importante; esto
hace posible el uso de tcnicas aspticas en investigacin microbiolgica, preservacin
de alimentos, y prevencin de enfermedades. Las tcnicas descritas en este captulo
tambin son esenciales para la seguridad personal tanto en el laboratorio como en el
hospital.

La terminologa es especialmente importante cuando se discute sobre el control de

microorganismos debido a que palabras como desinfectante y antisptico son a menudo
usadas errneamente. Esta situacin es incluso ms confusa porque un tratamiento
puede inhibir el crecimiento o matar dependiendo de las c o n d i c i o n e s .

La habilidad para controlar poblaciones microbianas u objetos inanimados, como

utensilios para comida e instrumentos quirrgicos, es de considerable importancia
prctica. Algunas veces es necesario eliminar todos los microorganismos de un objeto,
mientras que en otras situaciones slo se requiere destruccin parcial de la poblacin
microbiana. La esterilizacin es el proceso mediante el cual todas las clulas vivas,
esporas viables, virus y tiroides, son destruidos y removidos de un objeto o hbitat. Un
objeto estril est totalmente libre de microorganismos viables, esporas, y otros agentes
infecciosos. Cuando la esterilizacin es alcanzada por un agente qumico, el qumico es
llamado esterilizante. En contraste, la desinfeccin es la muerte, inhibicin, o remocin de
microorganismos que pueden causar enfermedades. Los desinfectantes son agentes,
usualmente qumicos, usados para realizar la desinfeccin y normalmente son usados
slo en objetos inanimados. Un desinfectante no necesariamente esteriliza un objeto
porque pueden permanecer esporas y algunos pocos microorganismos. La sanitizacin
est muy cercanamente relacionada con la desinfeccin.
 En la sanitizacin la poblacin microbiana es reducida a niveles considerados
seguros segn estndares de salud pblica. A menudo objetos inanimados son limpiados
y parcialmente desinfectados; por ejemplo, se utilizan sanitizadores para limpiar los
utensilios en los restaurantes .

Frecuentemente es necesario controlar los microorganismos en los tejidos vivos

con el uso de agentes qumicos. La antisepsia es la prevencin de infecciones o sepsis
y es lograda con el uso de antispticos, los cuales son agentes qumicos que se aplican a
los tejidos para prevenir infecciones matando o inhibiendo el crecimiento de patgenos.
Debido a que no deben destruir mucho el tejido del hospedero, generalmente loa
antispticos no son tan txicos como los desinfectantes.

Puede emplearse un sufijo para denotar el tipo de agente antimicrobiano. Las

sustancias que matan al microorganismo llevan a menudo el sufijo -cida: un germicida
mata microorganismos patgenos (y muchos no patgenos), pero no necesariamente
endosporas. Un desinfectante o antisptico puede s e r particularmente
efectivo contra un grupo especfico, en este caso puede ser llamado bactericida,
fungicida, algicida, o viricida. Otros qumicos no matan sino que previenen el crecimiento.
Sus nombres terminan en estticos; por ejemplo, bacteriostticos o fungistticos.

Aunque estos agentes han sido descritos en trminos de su efecto sobre

patgenos, debe observarse que tambin pueden matar o inhibir no patgenos. Su
habilidad para reducir la poblacin microbiana total, no slo de afectar los niveles de
patgenos, es muy importante en muchas situaciones.

6.1 Patrn de Muerte Microbiana.

Una poblacin microbiana no muere instantneamente cuando es expuesta a un

agente letal. La muerte poblacional, como el crecimiento poblacional, es generalmente
exponencial o logartmico, esto es, la poblacin se reducir en la misma fraccin a
intervalos constantes. Si el logaritmo de la poblacin remanente es graficado contra el
tiempo de exposicin del microorganismo al agente, la grfica resultante es una lnea
recta. Cuando la poblacin ha sido reducida en gran medida, la velocidad de muerte
puede disminuir debido a la supervivencia de cepas ms resistentes de microorganismos.

Para estudiar la efectividad de un agente letal, uno debe ser capaz de decidir
cundo el microorganismo est muerto, una tarea nada fcil. Una bacteria es definida
como muerta si no crece cuando es inoculada en un medio de cultivo que normalmente
soportara su crecimiento. De esta manera, un virus inactivo no puede infectar a un
hospedero adecuado.

6.2 Condiciones que Influyen Sobre la Efectividad de la Actividad de Agentes

Microbianos.

La destruccin de los microorganismos y la inhibicin del crecimiento microbiano

no son asuntos simples porque la eficacia de un agente antimicrobiano (un agente que
mata microorganismos o inhibe su crecimiento) es afectada por al menos seis factores.

1) El tamao de la poblacin. Debido a que una fraccin igual de una poblacin microbiana
es eliminada durante cada lapso de tiempo, una poblacin grande requiere de un mayor
tiempo de exposicin que una ms pequea.
2) La composicin de la poblacin. La efectividad de un agente vara enormemente con la
naturaleza de los organismos que son tratados debido a que los microorganismos difieren
ampliamente en susceptibilidad. Las endosporas bacterianas son mucho ms resistentes
a la mayora de los agentes antimicrobianos que las formas vegetativas, y las clulas
jvenes son usualmente destruidas ms fcilmente que los organismos maduros. Algunas
especies son capaces de resistir condiciones adversas mejor que otras.
Mycobacterium tuberculosis, el cual causa la tuberculosis, es mucho ms resistentes a
los agentes antimicrobianos que la mayora de otras bacterias.

3) Concentracin o intensidad de un agente antimicrobiano. A menudo, pero no siempre, a

mayor concentracin de un agente qumico o mayor intensidad de uno fsico, mayor
rapidez en la destruccin de los microorganismos. La dependencia de la eficacia con
respecto a la concentracin o la intensidad generalmente es no linear. En un rango corto,
pequeos incrementos en la concentracin llevan a un aumento exponencial en la
eficacia; ms all de cierto punto, incrementos posteriores no aumentarn la tasa de
muerte en gran medida. Algunas veces un agente es ms efectivo a concentraciones
bajas. Por ejemplo, el etanol al 70% es ms efectivo que el etanol al 95%.
4) Duracin de le exposicin. Cuanto mayor sea la exposicin de una poblacin a un
agente antimicrobiano, ms organismos sern eliminados. Para alcanzar la esterilizacin,
debe usarse una la duracin de la exposicin que reduzca la probabilidad de
supervivencia a 10-6 o menos.
5) Temperatura. Un incremento en la temperatura a la cual acta un qumico mejora a
menudo su actividad. Frecuentemente puede usarse una concentracin ms baja de
agente desinfectante o esterilizante a temperatura ms alta.

6) Ambiente local. La poblacin a ser controlada no est aislada, sino rodeada por factores
ambientales que pueden ya sea ofrecerle proteccin o bien ayudar a su destruccin. Por
ejemplo, debido a que el calor mata ms rpidamente a un pH cido, los alimentos y
bebidas cidos tales como frutas y tomates, son mucho ms fciles de pasteurizar que
los alimentos ms neutrales como la leche. Un segundo factor ambiental importante es la
materia orgnica que puede proteger a los microorganismos contra el calor y
desinfectantes qumicos. Puede ser necesario limpiar un objeto antes de su desinfeccin
o esterilizacin. Las jeringas y el equipo mdico o dental debe limpiarse antes de su
esterilizacin debida a la presencia de mucha materia orgnica que podra proteger a los
patgenos e incrementar el riesgo de infeccin. Los mismos cuidados deben tomarse
cuando los patgenos son destruidos durante la preparacin de agua potable. Cuando la
fuente de abastecimiento de agua de una ciudad tiene un alto contenido de materia
orgnica, debe aadirse ms cloro para la desinfeccin.

6.3 Uso de Mtodos Fsicos en Control.

El calor y otros agentes fsicos son comnmente utilizados para esterilizar objetos,
como puede verse por el uso continuo de la autoclave en cada laboratorio de
microbiologa. Los cuatro agentes fsicos ms utilizados son calor, filtracin, radiacin
ultravioleta, y radiacin ionizante.

Calor.

El fuego y el agua hirviendo han sido utilizados para esterilizare y desinfectar

desde tiempos de los Griegos, y el calor es an uno de los mtodos ms populares para
destruir microorganismos, ya sea como calor hmedo o como calor seco.
 El calor hmedo mata fcilmente virus, bacterias y hongos. La exposicin a agua
hirviendo por 10 minutos es suficiente para destruir clulas vegetativas y esporas
eucariotas. Desafortunadamente, la temperatura de ebullicin del agua (1000C 2120F)
no es lo suficientemente alta para destruir endosporas bacterianas que pueden sobrevivir
horas en ebullicin. Por lo tanto, este mtodo puede ser usado para desinfeccin de agua
potable y objetos que no se daan con el agua, pero hervir no esteriliza.

Debido a que el calor es tan til para controlar microorganismos, es esencial tener
una medicin precisa de la eficacia del calor para matar. Inicialmente la efectividad fue
expresada en trminos del punto de muerte termal (TDP), la temperatura ms baja a la
cual una suspensin microbiana es matada en 10 minutos. Debido a que la TDP implica
que cierta temperatura es inmediatamente letal a pesar de las condiciones, ahora es ms
comnmente usado el tiempo de muerte termal (TDT). ste es el tiempo ms corto
necesario para matar todos los microorganismos en una suspensin microbiana a una
temperatura especfica y bajo condiciones definidas. Sin embargo, tal destruccin es
logartmica y tericamente no es posible destruir completamente a los microorganismos
presentes en una muestra, incluso con exposiciones grandes al calor. Por lo tanto, un
concepto an ms preciso, el tiempo de reduccin decimal (D) o valor D, ha ganado
amplia aceptacin. El tiempo de reduccin decimal es el tiempo requerido para matar al
90% de los microorganismos o esporas en una muestra a una temperatura especfica. En
una grfica semilogartmica de la poblacin remanente contra el tiempo de calentamiento,
el valor D es el tiempo requerido para que la lnea baje un ciclo logartmico 10 veces.
Usualmente el valor D se escribe con un subndice que indica la temperatura a la cual
se aplica. Los valores D son usados para estimar la resistencia relativa de un
microorganismo a diferentes temperaturas a travs del clculo del valor de z. El valor z es
el incremento en la temperatura requerido para reducir D a 1/10 de su valor o reducirlo en
un ciclo logartmico cuando D se grafica contra temperatura. Otra manera de describir la
efectividad del calentamiento es con el valor F. El valor F es el tiempo en minutos a una
temperatura especfica (usualmente 2500F 121.10C) necesario para matar una
poblacin de clulas o esporas.

La esterilizacin por calor hmedo puede realizarse a temperaturas por encima de

1000C para destruir endosporas bacterianas, y esto requiere el uso de vapor saturado
bajo presin. La esterilizacin con vapor se realiza en una autoclave, un equipo que
parece una extravagante olla de presin. El agua es hervida para producir vapor el cual
es llevado hacia la cmara de la autoclave. El aire presente inicialmente en la cmara es
forzado a salir hasta que la cmara est llena con vapor saturado y las salidas son
cerradas. El caliente vapor saturado contina entrando hasta que la cmara alcanza la
temperatura y presin deseada, usualmente 1210C y 15 libras de presin. A esta
temperatura el vapor saturado destruye todas las clulas vegetativas y endosporas en un
volumen pequeo de lquido en un tiempo de 10 a 12 minutos. El tratamiento se contina
usualmente por 15 minutos para proporcionar un margen de seguridad.

El autoclavado debe realizarse apropiadamente o el material procesado no estar

estril. Si el aire no es completamente desalojado de la cmara, sta no alcanzar 1210C
incluso aunque alcance las 15 libras de presin. La cmara no debe empacarse muy
apretadamente porque el vapor necesita circular libremente y estar en contacto con cada
cosa en el autoclave. Las endosporas bacterianas sern eliminadas slo si se mantienen
a 1210C por 10 a 12 minutos. Cuando debe esterilizarse un gran volumen de lquido ser
necesario un tiempo mayor de esterilizacin ya que tomar ms tiempo para que el centro
del lquido alcance 1210C; 5 litros de lquido pueden requerir cerca de 70 minutos.
 En vista de estas potenciales dificultades, un indicador biolgico es a menudo
autoclavado junto con otro material. Estos indicadores consisten comnmente en un tubo
de cultivo que contiene una mpula estril de medio y una tira de papel cubierta con
esporas de Bacillus stearothermophilus o Clostridium PA3679. Despus del
autoclavado, la
mpula es aspticamente rota y el cultivo incubado por varios das. Si la bacteria de la
prueba no crece en el medio, la esterilizacin ha sido exitosa. En algunos casos una
cinta especial que tiene escrita la palabra estril de manera invisible o una tira de papel
indicador que cambia de color con suficiente calentamiento, es autoclavada con una
carga de material. Si la palabra aparece en la cinta o la tira cambia de color, se supone
que el material est estril. Esta metodologa es til y ahorra tiempo, pero no son tan
confiables como el uso de endosporas bacterianas.

Muchas sustancias, tales como la leche, son tratadas con calentamiento

controlado a temperaturas por debajo del punto de ebullicin, un proceso conocido como
pasteurizacin en honor de su desarrollador, Luis Pasteur. La leche puede ser
pasteurizada de dos maneras. En el mtodo antiguo la leche se mantiene por 30 minutos
a 630C. Pero en la actualidad grandes cantidades de leche son procesadas por
pasteurizacin flash o pasteurizacin de temperatura de corto tiempo (HTST) la cual
consiste en calentarla rpidamente a cerca de 720C por 15 segundos y luego enfriarla
rpidamente. La industria lctea tambin usa a menudo esterilizacin por temperatura
ultraalta (UHT). La leche y los productos lcteos son calentados a 140 1500C por uno a
tres segundos. La leche procesada por UHT no requiere refrigeracin y puede ser
almacenada a temperatura ambiente por cerca de dos meses sin cambio de sabor.
Las pequeas porciones de crema para caf utilizadas en los restaurantes son a menudo
preparadas por esterilizacin UHT.

Algunos objetos son esterilizados mejor en ausencia de agua por esterilizacin con
calor seco. Los productos a ser esterilizados son colocados en un horno a 160 o 1700C
por 2 a 3 horas. Aparentemente la muerte microbiana resulta de la oxidacin de los
constituyentes celulares y la desnaturalizacin de protenas. Aunque el calor con aire
seco es menos efectivo que el calor hmedo, las esporas de Clostridium botulinum son
eliminadas en 5 minutos con calor hmedo a 1210C pero slo despus de 2 horas a
1600C con calor seco, hay algunas ventajas. El calor seco no corroe los vasos de vidrio
y los instrumentos de metal como lo hace el calor hmedo, y puede ser usado para
esterilizar polvos, aceites y productos similares. La mayor parte de la esterilizacin de
material de vidrio como cajas petri y pipetas se realiza con calor seco. A pesar de estas
ventajas, la esterilizacin por calor seco es lenta y no adecuada para materiales
sensibles al calor como muchos artculos de plstico y de c a u c h o .

Filtracin.

La filtracin es una excelente manera para reducir las poblaciones microbianas en

soluciones de materiales sensibles al calor, y en algunos casos puede ser utilizada para
esterilizar soluciones. Ms que destruir directamente los microorganismos contaminantes,
el filtro simplemente los remueve. Hay dos tipos de filtros. Los filtros de profundidad
consisten en materiales fibrosos o granulares que han sido unidos en una capa delgada
llena con canales retorcidos de dimetro pequeo. La solucin que contiene los
microorganismos es absorbida a travs de esta capa al vaco y las clulas son
removidas por atrapamiento y por adsorcin a la superficie del material del filtro. Este tipo
de filtros estn hechos de tierra de diatomeas, vidrio porcelanizado, asbestos, y otros
materiales similares.
 Recientemente los filtros de membrana han reemplazado a los filtros de
profundidad para muchos propsitos. Estos filtros circulares son membranas porosas, de
0.1 mm de espesor, hechos de acetato de celulosa, nitrato de celulosa, policarbonato, y
otros materiales sintticos. Aunque estn disponibles una gran variedad de tamao de
poro, las membranas con poro de cerca de 0.2 de dimetro son usadas para remover
clulas vegetativas de soluciones que van desde 1 mL hasta varios litros en volumen. Las
membranas son mantenidas en contenedores especiales y a menudo precedidas por
filtros de profundidad hechos de fibra de vidrio para remover partculas grandes que
pudieran tapar el filtro de membrana. La solucin es forzada a travs del filtro con vaco,
o a presin con una jeringa, bomba peristltica o tanque de gas nitrgeno, y colectada en
contenedores previamente esterilizados. Los filtros de membrana remueven
microorganismos separando partculas pequeas de las grandes. Estos filtros son
utilizados para esterilizar farmacuticos, medios de cultivo, aceites, antibiticos, y otras
soluciones sensibles al calor.

El aire tambin puede ser esterilizado por filtracin. Dos ejemplos comunes son
las mscaras quirrgicas y los tapones de algodn de los vasos de cultivo que dejan
pasar el aire pero no los microorganismos presentes en l. Las campanas de seguridad
biolgica de flujo laminar emplean filtros de alta eficiencia de aire particulado (HEPA) los
cuales remueven 99.97% de las partculas de 0.3 y son uno de los sistemas de filtracin
de aire ms importantes.

Radiacin.

Los tipos de radiacin y la manera en que daan o destruyen a los icroorganismos

se mencionaron en el captulo anterior. El uso prctico de las radiaciones ultravioleta e
ionizante para esterilizar objetos se describe brevemente a continuacin.

La radiacin ultravioleta de alrededor de 260 nm es bastante letal pero no penetra

muy efectivamente al vidrio, pelculas de polvo, agua, y otras sustancias. Debido a estas
desventajas, la radiacin UV es usada como agente esterilizante slo en una pocas
situaciones especficas. Lmparas UV son algunas veces colocadas en los techos de
habitaciones o en campanas de seguridad biolgica para esterilizar el aire y cualquier
superficie expuesta. Debido a que la radiacin UV quema la piel y daa los ojos, la gente
que trabaja en dichas reas debe cerciorarse de que las lmparas estn apagadas
cuando las reas estn en uso. Existen unidades UV disponibles para el tratamiento de
agua. Patgenos y otros microorganismos son destruidos cuando una delgada capa de
agua es pasada bajo estas l m p a r a s .

La radiacin ionizante es un excelente agente esterilizante y penetra

profundamente en los objetos. La radiacin gamma de una fuente de cobalto 60 es usada
en la esterilizacin en fro de antibiticos, hormonas, suturas, y desechables plsticos
como las jeringas. La radiacin gamma ha sido tambin utilizada para esterilizar y
pasteurizar carne y otros alimentos. Tanto la FDA (Food and Drug Administration) como
la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) han aprobado la irradiacin de alimentos y la
han declarado segura.

6.4 Uso de Agentes Qumicos en Control.

Aunque los objetos son algunas veces desinfectados con agentes fsicos, los
qumicos se emplean ms a menudo en desinfeccin y antisepsia. Muchos factores
influyen sobre la efectividad de los desinfectantes y antispticos qumicos.
 Factores tales como el tipo de microorganismo potencialmente presente, la
concentracin y naturaleza del desinfectante a ser usado, y la extensin del tratamiento,
deben considerarse. Las superficies sucias deben limpiarse antes de que el desinfectante
o antisptico sea aplicado. El uso apropiado de agentes qumicos es esencial para la
seguridad en laboratorios y hospitales. Es importante mencionar que los qumicos
tambin son usados para prevenir el crecimiento microbiano en alimentos.

Hay muchos qumicos diferentes disponibles para usarse como desinfectantes y

cada uno de ellos tiene sus propias ventajas y desventajas. En la seleccin de un agente
es importante tener en mente las caractersticas del desinfectante deseado. Idealmente el
desinfectante debe ser efectivo contra una amplia variedad de agentes infecciosos
(bacterias gram-positivas y gram-negativas, bacterias cido resistentes, endosporas
bacterianas, hongos, y virus) a diluciones altas y en presencia de materia orgnica.
Aunque los qumicos deben ser txicos para los agentes infecciosos, no deben ser
txicos para la gente ni corrosivos para los materiales comunes. Deben ser estables en
almacenamiento, inodoros o con olor agradable, solubles en agua y lpidos para poder
penetrar en el microorganismo, y tener una baja tensin superficial. Si es posible, los
desinfectantes deben ser relativamente baratos.

A continuacin se generaliza sobre las propiedades y usos de varios grupos

comunes de desinfectantes y antispticos.

Compuestos fenlicos.

El fenol fue el primer antisptico y desinfectante usado ampliamente. En 1867

Joseph Lister lo emple para reducir el riesgo de infeccin durante las operaciones. Hoy
en da el fenol y los compuestos fenlicos (derivados del fenol) tales como los cresoles,
los xilenoles, y el ortofenilfenol son usados como desinfectantes en laboratorios y
hospitales. Los fenlicos actan desnaturalizando protenas y rompiendo las membranas
celulares. Estos compuestos tienen algunas ventajas reales como desinfectantes: los
fenlicos son tuberculocidas, efectivos en presencia de materia orgnica, y permanecen
activos sobre las superficies por un perodo largo despus de la aplicacin. Sin embargo,
tienen un olor desagradable y pueden causar irritacin en la piel.

El hexaclorofeno ha sido uno de los antispticos ms populares debido a su

persistencia sobre la piel una vez aplicado y porque reduce la cantidad de bacterias en la
piel. Sin embargo, puede causar dao cerebral y ahora es utilizado slo en guarderas de
hospitales como respuesta a brotes de estafilococos.

Alcoholes.

Los alcoholes estn entre los desinfectantes y antispticos ms ampliamente

usados. Estos compuestos son bactericidas y fungicidas pero no esporocidas; algunos
virus que contienen lpidos tambin son destruidos. Los dos alcoholes germicidas ms
populares son el etanol y el isopropanol, comnmente usados a concentracin de 70 a
80%. Actan por desnaturalizacin de protenas y posiblemente disolviendo lpidos de
membrana. Un empapado durante 10 a 15 minutos con alcohol es suficiente para
desinfectar termmetros e instrumentos pequeos.
Halgenos.

Un halgeno es cualquiera de los cinco elementos (flor, cloro, bromo, yodo y

astato) del grupo VIIA de la tabla peridica. Existen como molculas biatmicas en estado
libre y forman sales con sodio y la mayora de los otros metales. Los halgenos yodo y
cloro son importantes antimicrobianos. El yodo es usado como antisptico en piel y mata
oxidando los constituyentes celulares y yodizando protenas celulares. A altas
concentraciones puede incluso matar algunas esporas. El yodo se aplica a menudo como
tintura de yodo, 2% ms de yodo en una solucin de yoduro de potasio en agua-
etanol. Aunque es un antisptico efectivo, la piel puede ser daada, se mantiene la
coloracin, y puede ocasionar alergias al yodo. Ms recientemente el yodo ha sido
acomplejado con un acarreador orgnico para formar un iodforo. Los iodforos son
solubles en agua, estables, no tien y liberan el yodo lentamente para minimizar la
irritacin en la piel. Los iodforos son usados en hospitales para limpiar la piel antes de
las operaciones y en hospitales y laboratorios para desinfectar.

El cloro es el desinfectante usual para el abasto de agua municipal y en las

albercas y tambin se emplea en la industria lctea y de alimentos. Puede ser aplicado
como gas cloro, hipoclorito de sodio o hipoclorito de calcio; todos ellos producen cido
hipocloroso (HCIO) y luego oxgeno atmico. El resultado es la oxidacin de materiales
celulares y la destruccin de bacterias vegetativas y hongos, aunque no esporas.

Cl2 H 2O HCl HClO

Ca OCl 2 2H 2 O Ca OH 2 2HClO HClO HCl O

La muerte de casi todos los microorganismos usualmente ocurre dentro de los

30 minutos. Puesto que la materia orgnica interfiere con la accin del cloro al reaccionar
con ste y sus productos, se aade un exceso de cloro para asegurar la destruccin
microbiana.

El cloro es tambin un excelente desinfectante para uso individual debido a que

es efectivo, barato y fcil de emplear. Pequeas cantidades de agua para beber pueden
ser desinfectadas con tabletas de halazono. El halazono (cido parasulfono
dicloroamidobenzico) libera lentamente el cloro cuando se aade al agua y la desinfecta
en cerca de media hora.

Metales pesados.

Por muchos aos los iones de metales pesados tales como el mercurio, la plata, el
arsnico, el zinc y el cobre, fueron usados como germicidas. Ms recientemente estos
elementos han sido reemplazados por otros germicidas menos txicos y ms efectivos
(muchos metales pesados son ms bateriostticos que bactericidas), pero hay algunas
excepciones. Una solucin al 1% de nitrato de plata es a menudo aadida a los ojos de
infantes para prevenir gonorrea oftlmica (en muchos hospitales la eritromicina se utiliza
en lugar de nitrato de plata ya que es ms efectiva contra Chlamydia y contra Neisseria).
En quemaduras de utiliza sulfadiacina de plata. El sulfato de cobre es un algicida efectivo
en lagos y albercas.

Los metales pesados se combinan con protenas, a menudo con grupos sulfhidrilo,
y las inactivan. Tambin pueden precipitar las protenas celulares.
Compuestos de amonio cuaternario.

Los detergentes son molculas orgnicas que sirven como agentes humectantes y
emulsificantes debido a que tienen tanto extremos hidroflicos polares como hidrofbicos
no polares. Debido a su naturaleza amfiptica solubilizan residuos insolubles y son muy
efectivos como agentes limpiadores. Los detergentes son diferentes de los jabones, los
cuales derivan de las grasas.

Aunque los detergentes aninicos tienen algunas propiedades antimicrobianas,

slo los detergentes catinicos son desinfectantes efectivos. Los ms populares de estos
desinfectantes son los compuestos de amonio cuaternario, caracterizados por un
nitrgeno cuaternario cargado positivamente y una larga cadena aliftica hidrofbica.
Estos compuestos rompen las membranas microbianas y pueden tambin
desnaturalizar protenas.

Los detergentes catinicos matan a la mayora de las bacterias, pero no a M.

tuberculosis ni a endosporas. Tienen la ventaja de ser estables, no txicos y suaves, pero
son inactivados por el agua dura y el jabn. Los detergentes catinicos se utilizan a
menudo como desinfectantes para utensilios de alimentacin, instrumentos pequeos, y
como antispticos en piel.

Aldehdos.

Los dos aldehdos ms comnmente usados, el formaldehdo y el glutaraldehdo,

son molculas altamente reactivas que se combinan con las protenas y las inactivan.
Son esporocidas y pueden usarse como esterilizantes qumicos. El formaldehdo
normalmente se disuelve en agua o en alcohol antes de su uso. Una solucin
amortiguadora al 2% de glutaraldehdo es un desinfectante efectivo. Es menos irritante
que el formaldehdo y es usado para desinfeccin en hospitales y en equipo de
laboratorio. El glutaraldehdo generalmente desinfecta objetos en cerca de 10 minutos,
pero puede requerir tanto como 12 horas para destruir esporas.

Gases esterilizantes.

Muchos artculos sensibles al calor tales como cajas petri desechables de plstico
y jeringas, componentes de respiradores artificiales, suturas y catteres, son esterilizados
en la actualidad con el gas xido de etileno (EtO). Este gas es tanto microbicida como
esporocida y mata al combinarse con las protenas celulares. Es un agente esterilizante
particularmente efectivo debido a que penetra rpidamente materiales empacados,
incluso envolturas plsticas.

La esterilizacin de realiza en esterilizadores especiales, que en su apariencias

recuerdan mucho a los autoclaves, que controlan la concentracin de EtO, temperatura y
humedad. Debido a que el EtO puro es explosivo, usualmente se suministra en una
concentracin de 10 a 20% mezclado ya sea con CO2 o diclorodifluorometano. La
concentracin el EtO, la temperatura y la humedad influyen en la velocidad de
esterilizacin. Un objeto limpio puede esterilizarse si es tratado p o r 5 a 8 horas a 380C o
por 3 a 4 horas a 540C cuando la humedad relativa es mantenida a 40-50% y la
concentracin de EtO a 700 mg/L. Es necesaria una aireacin extensiva del material
esterilizado para eliminar el EtO residual ya que es txico.
 La betapropiolactona (BPL) es empleada ocasionalmente como gas esterilizante.
En forma lquida se ha utilizado para esterilizar vacunas y suero. La BPL se descompone
a una forma inactiva despus de varias horas y por lo tanto no es tan difcil de eliminar
como el EtO. Tambin destruye a los microorganismos ms fcilmente que el xido de
etileno pero no penetra bien los materiales y puede ser carcinognico. Por estas razones,
la BPL no ha sido utilizada tan ampliamente como el EtO.

Recientemente se ha usado perxido de hidrgeno en fase de vapor para

descontaminar campanas de seguridad biolgica.

6.5 Evaluacin de le Efectividad de Agentes Antimicrobianos.

La evaluacin de los agentes antimicrobianos es un proceso complejo regulado, en

estado Unidos, por dos agencias diferentes. La Agencia de Proteccin Ambiental (EPA)
regula los desinfectantes, mientras que los agentes usados en humanos y en animales
estn bajo el control de la Administracin de Alimentos y Drogas (FDA). La evaluacin de
un agente antimicrobiano comienza a menudo con un anlisis de bsqueda inicial para
ver si es efectivo y a que concentracin.

El mejor examen de evaluacin de desinfectantes conocido es el examen de

coeficiente fenlico en el cual la potencia de un desinfectante se compara con la del fenol.
Una serie de diluciones de fenol y del desinfectante experimental, se inoculan con las
bacterias de prueba Salmonella typhi y Staphylococcus aureus, luego son colocados en
bao de agua a 20 370C. Estos tubos con desinfectante inoculados
son enseguida subcultivados en un medio regular fresco e incubados por dos o ms das.
La ms alta dilucin que mate a las bacterias despus de 10 minutos de exposicin, pero
no despus de 5, se usan para calcular el coeficiente fenlico. El recproco de la dilucin
apropiada del desinfectante es dividido por el del fenol para obtener el coeficiente.
Suponga que la dilucin del fenol fue 1/90 y la dilucin mxima efectiva del desinfectante
X fue de 1/450. El coeficiente fenlico de X ser 5. A mayor coeficiente fenlico, mayor
efectividad del desinfectante bajo esas condiciones. Un valor mayor de 1 significa que el
desinfectante es ms efectivo que el fenol.

El examen del coeficiente fenlico es un procedimiento adecuado de evaluacin

inicial, pero es un error tomarlo como un indicativo directo de la potencia de un
desinfectante durante su uso normal. Esto es debido a que el coeficiente fenlico se
determina bajo condiciones cuidadosamente controladas con cepas bacterianas puras,
mientras que los desinfectantes normalmente son usados sobre poblaciones complejas
en presencia de materia orgnica y con variaciones significativas en los factores
ambientales tales como pH, temperatura, y presencia de sales.

Para un estimado ms realista de la efectividad de un desinfectante, se usan a

menudo otras pruebas. La velocidad a la cual una bacteria seleccionada es destruida con
varios agentes qumicos puede ser determinada y comparada. Puede realizarse un
examen de la dilucin usada. Cilindros de acero inoxidable son contaminados con
especies bacterianas especficas bajo condiciones cuidadosamente controladas. Los
cilindros son brevemente secados, sumergidos en el desinfectante por 10 minutos,
transferidos a un medio de cultivo e incubados por dos das. Se determina entonces la
concentracin de desinfectante que mata a los organismos en la muestra con un nivel de
95% de confianza bajo estas condiciones. Los desinfectantes tambin pueden ser
evaluados bajo condiciones diseadas para simular situaciones de uso normal.
 CAPTULO VII.
MICROORGANISMOS COMO COMPONENTES DEL MEDIO AMBIENTE.

El medio ambiente es un componente de un ecosistema y se define como el total

de las condiciones externas que influyen sobre un organismo o un grupo de organismos.
Los ambientes naturales, ya sea suelo, lagos, ros, ocanos u otros hbitats, tienen
muchas caractersticas en comn, incluyendo la presencia de microorganismos. Estos
microorganismos pueden tener dos papeles complementarios: la sntesis de nueva
materia orgnica a partir de CO2 y otros compuestos orgnicos a travs de la produccin
primaria, y la descomposicin de esta materia orgnica acumulada.

7.1 Microorganismos y la estructura de los ambientes naturales.

Los microorganismos juegan muchos papeles importantes en los ambientes

naturales. Las relaciones generales entre los productores primarios que acumulan
materia orgnica, los descomponedores hetertrofos y los consumidores, son obvias.
Microorganismos de diferentes tipos contribuyen a cada una de estas relaciones
complementarias.

En ambientes terrestres los productores primarios son usualmente plantas

vasculares. En ambientes acuticos y marinos las cianobacterias y las algas juegan un
papel similar. La fuente principal de energa que maneja la produccin primaria es la luz
solar y ambos hbitats. Los consumidores superiores, incluyendo los humanos, son
quimiohetertrofos. Estos consumidores dependen de tal sistema bsico de soporte de la
vida proporcionado por organismos que acumulan y descomponen materia orgnica. El
reto es apreciar mejor el papel que desempean los microorganismos en el
funcionamiento de la gran variedad de ambientes n a t u r a l e s .

Este punto de vista sobre la naturaleza de la produccin primaria y el papel de los

microorganismos en este proceso ha cambiado desde 1977 cuando se descubrieron
grietas hidrotermales en las profundidades marinas las cuales producan sulfuro de
hidrgeno. Estas grietas soportan grandes poblaciones de gusanos con forma de tubo y
mejillones gigantes. La fuente de carbono orgnico de la cual dependan estos
organismos consumidores resulto ser bacterias quimiolitoautotrficas. Estas bacterias con
principalmente de los gneros Thiobacillus, Thiomicrospyra, Thiothrix y Beggiatoa.

Otra cadena alimenticia nica involucra a microorganismos fijadores de metano

como el primer paso para proporcionar materia orgnica a los consumidores. En este
caso las metiltrofas, bacterias capaces de utilizar metano, ocurren como simbiontes
intracelulares de mejillones.

La materia orgnica, una vez disponible, puede ser utilizada por muchos
organismos diferentes, incluyendo al humano. El proceso de descomposicin de la
materia orgnica hacia compuestos inorgnicos ms simples se llama ineralizacin.
Adems, microorganismos como protozoarios actan como consumidores, tal y como lo
hacen los insectos y los animales. Los consumidores microbianos usan materia orgnica
producida por plantas superiores, cianobacterias y algas. Los microorganismos juegan
otro papel importante en el funcionamiento de los ambientes naturales. Las clulas
microbianas, en base a su peso seco, consisten tpicamente de aproximadamente 50%
carbono, 14% nitrgeno, y 3% fsforo, por nombrar slo a los elementos principales, y
son ricos en nutrientes. Esto los convierte en una fuente de nutrientes muy deseada para
otros or ganism os .
 As, los microorganismos llevan a cabo muchas funciones en los ambientes
naturales, donde puede ocurrir crecimiento. Algunos ejemplos incluyen los siguientes:

1. Descomposicin (mineralizacin) de sustratos orgnicos.

2. Servir como fuente de alimentos rico en nutrientes para otros microorganismos
quimiohetertrofos. Esto resulta en la transformacin de materiales orgnicos a formas
minerales.
3. Servir como alimento para protozoarios, nemtodos e insectos del suelo, creando as una
red alimenticia.
4. Modificar sustancias para su uso por otros organismos.
5. Cambiar la cantidad de materiales en forma soluble y gaseosa. Esto ocurre directamente
por procesos metablicos o indirectamente modificando el ambiente.
6. Producir compuestos inhibidores que disminuyen la actividad microbiana o limitan la
supervivencia y funcionamiento de plantas y animales.

Los microorganismos existen en hbitats naturales tanto como poblaciones de

tipos de organismos similares, as como en comunidades formadas de diferentes tipos de
poblaciones interactuantes. El ambiente microbiano es complejo y cambia
constantemente. Se caracteriza por la presencia de gradientes superpuestos de recursos,
materiales txicos, y otros factores limitantes. Por ejemplo, se pueden formar gradientes
cuando regiones aerobias y anaerobias intersectan o cuando una zona iluminada cambia
a una zona oscura, crendose as microambientes nicos. El estudio de los
microorganismos y sus relaciones en ambientes particulares de denomina ecologa
microbiana. Donde las condiciones de un microambiente son adecuadas grupos
especializados de microorganismos pueden mantenerse a s mismos con competencia
mnima de otros microorganismos que tienen requerimientos funcionales ligeramente
diferentes.

Los gradientes de factores esenciales tambin influyen en la supervivencia y

funcionamiento de las poblaciones microbianas, una expresin de la Ley de Liebig del
mnimo que establece que el crecimiento de un organismo depende de los nutrientes
disponibles slo en cantidades mnimas. Los factores que pueden limitar a los
microorganismos (y a otros organismos vivos) incluyen agua, energa en forma de luz y
compuestos qumicos, temperatura, nutrientes, presin, pH, y salinidad. La situacin
puede ser incluso ms compleja que esto. Mltiples factores limitantes pueden influir a
poblaciones en particular, y los factores limitantes pueden cambiar en el tiempo y en el
espacio. Demasiado de algunos factores (metales, sales, hidrgeno, iones, calor) pueden
tambin limitar la actividad microbiana, una expresin de la Ley de la tolerancia de
Shelford, la cual establece que: la existencia y prosperidad de un organismo depende
del carcter completo de un conjunto de condiciones. La ausencia o el mal estado de un
organismo podrn ser debidos a la deficiencia o al exceso, cualitativo o cuantitativo, con
respecto a uno cualquiera de diversos factores que se acercarn tal vez a los lmites de
tolerancia del organismo en cuestin.

7.2 El estado fisiolgico de los microorganismos en el medio ambiente.

La mayora de los microorganismos estn confrontados con deficiencias que

limitan sus actividades, excepto cuando los nutrientes en exceso permiten crecimiento
ilimitado. Tal rapidez de crecimiento agotar rpidamente los nutrientes y resultar
posiblemente en la generacin de productos txicos de desecho, los cuales limitarn an
ms el crecimiento.
 En respuesta a niveles bajos de nutrientes y a la intensa competencia, muchos
microorganismos se vuelven ms competitivos en la toma de nutrientes y en la
explotacin de los recursos disponibles. A menudo la morfologa de los organismos
cambiar para incrementar su rea superficial y su habilidad para absorber nutrientes.
Esto puede involucrar la conversin de bacterias con forma de bacilo a mini o
ultramicro clulas o cambiar a la morfologa de prosteca (una extensin de la clula,
incluyendo la membrana plasmtica y la pared celular, que es ms estrecha que la clula
madura) en respuesta a la hambruna. La incrementar la adhesin especfica e
inespecfica a superficies, creando biopelculas. Estas biopelculas permiten a los
microorganismos usar nutrientes que a menudo estn presentes a altas concentraciones
localizadas sobre las superficies.

Los microorganismos pueden tambin secuestrar nutrientes limitantes crticos,

tales como el hierro, hacindolos menos disponibles para los microorganismos
competidores. De hecho, muchos microorganismos pueden sobrevivir en estos ambientes
pobres en nutrientes y crecer bajo condiciones oligotrficas.

Las sustancias naturales pueden tambin inhibir directamente el crecimiento

microbiano en ambientes con pocos nutrientes. Estos agentes incluyen fenlicos, taninos,
amonio, etileno y compuestos voltiles de azufre. La presencia de tales compuestos
puede llevar a un fenmeno generalizado de microbiostasis, o bacteriostasis y fungistasis,
que afectan a las bacterias y a los hongos, respectivamente. Esto puede ser una forma
por medio de la cual los microorganismos evitan gastar la limitada reserva energtica a
menos que haya disponibilidad de una fuente adecuada de nutrientes. Tales qumicos
son tambin importantes en patologa de plantas y pueden ayudar en el control de las
enfermedades microbianas generadas en el suelo.

7.3 Procesos de reciclamiento de nutrientes.

Las comunidades microbianas juegan un papel principal en los ciclos

biogeoqumicos. Tal como lo sugiere este trmino, procesos tanto biolgicos como
qumicos estn involucrados en el reciclamiento y transformacin de nutrientes
importantes para microorganismos, plantas y animales. Esto involucra a menudo
reacciones de xido-reduccin que pueden cambiar las caractersticas fsicas y qumicas
de los nutrientes.

Los microorganismos juegan papeles esenciales en la transformacin de carbono,

nitrgeno, azufre y hierro. Componentes gaseosos significativos se presentan en los
ciclos de carbono y nitrgeno, y de manera menos extendida en los ciclos de azufre y
fsforo. As, un microorganismo del suelo, acutico o marino puede a menudo fijar formas
gaseosas de compuestos de carbono y nitrgeno. En los ciclos sedimentarios, tales como
el del hierro, no hay componentes gaseosos.

Un importante punto a enfatizar es que estos ciclos no operan independientemente

de otros ciclos, sino que estn ligados operando a diferente escala de tiempo y a
distancias que van desde lo microbiano a lo global.

Ciclo del Carbono.

El carbono puede estar presente en formas reducidas, tales como metano (CH4) y
materia orgnica, y en ms formas oxidadas, tales como monxido de carbono (CO) y
bixido de carbono (CO2). Los reductores (e.g. hidrgeno, el cual es un reductor fuerte) y
los oxidantes (e.g. O2) influyen en el curso de las reacciones biolgicas y qumicas
involucradas en el ciclo del carbono. El hidrgeno puede se producido durante la
degradacin de la materia orgnica, especialmente bajo condiciones anaerobias cuando
ocurre fermentacin. Si se generan hidrgeno y metano, pueden movilizarse desde
regiones anaerobias a regiones a er o bi as .

Los niveles de metano en la atmsfera se han incrementado aproximadamente 1%

por ao, desde 0.7 hasta 1.6 a 1.7 ppm (volumen) en los ltimos 300 aos. Este metano
deriva de una serie de fuentes diversas. Si una columna aerobia de agua est encima de
una zona anaerobia donde se localizan las metanognicas, el metano puede ser oxidado
antes de alcanzar la atmsfera. En muchas situaciones, tales como los arrozales, donde
no hay una zona aerobia por encima, el metano alcanza directamente la atmsfera,
contribuyendo as al incremento global del metano atmosfrico. Los rumiantes pueden
producir de 200 a 400 litros de metano por da. Otras fuentes son las minas de carbn,
las plantas de tratamiento de aguas residuales, los pantanos y las cinegas. Los
microorganismos anaerobios en el intestino de las termitas tambin pueden contribuir en
la produccin de metano.

La fijacin del carbono ocurre a travs de la actividad de las cianobacterias y las

algas verdes, bacterias fotosintticas, y quimiolitoauttrofos.

Ciclo del Azufre

Los microorganismos contribuyen enormemente al ciclo del azufre. Los

microorganismos fotosintticos transforman azufre utilizando sulfuro como fuente de
electrones. En ausencia de luz el sulfuro puede cruzar en ambientes oxidantes,
permitiendo el funcionamiento de Thiobacillus y gneros quimiolitoauttrofos similares. En
contraste, cuando el sulfato se difunde en habitats reducidos, proporciona una
oportunidad para diversos grupos de microorganismos que realizan sulfato reduccin. Por
ejemplo, cuando est presente un reductor orgnico utilizable, Desulfovibrio puede
derivar energa utilizando al sulfato como oxidante. Este uso del sulfato como un aceptor
de electrones externo para formar sulfuro, el cual se acumula en el ambiente, es un
ejemplo de un proceso de reduccin desasimilatoria y respiracin anaerobia. En
comparacin, la reduccin del sulfato para su uso en la biosntesis de aminocidos y
protenas es descrita como un proceso de reduccin asimilatoria. Se ha encontrado que
otros organismos llevan a cabo reduccin desasimilatoria de azufre elemental. stos
incluyen Desulfuromonas, una arqueobacteria termoflica, y tambin cianobacterias en
sedimentos hipersalinos. El sulfito es otro intermediario crtico que puede ser reducido a
sulfuro por una amplia variedad de microorganismos, incluyendo Alteromonas y
Clostridium, as como Desulfovibrio y Desulfotomaculum.

Cuando las condiciones de pH y oxido-reduccin son favorables, tambin ocurren

varias transformaciones clave en el ciclo del azufre como resultado de reacciones
qumicas en ausencia de microorganismos.

Un importante ejemplo de tales procesos abiticos es la oxidacin del sulfuro a

azufre elemental, Esto tiene lugar rpidamente a pH neutro, con una vida media de
aproximadamente 10 minutos a temperatura ambiente.
Ciclo del Nitrgeno.

El ciclo del nitrgeno es ms simple que el del carbono o el del nitrgeno, ya que
nos hay distincin y usos diferentes por os microorganismos fotosintticos. A pesar de
esta simplificacin, deben enfatizarse varios aspectos importantes del ciclo del nitrgeno:
los procesos de nitrificacin, desnitrificacin, y fijacin de nitrgeno.

La nitrificacin es el proceso aerobio de oxidacin del in amonio (NH +) a nitrito (NO

4 2) y
la subsecuente oxidacin del nitrito a nitrato (NO3 ). Las bacterias de los gneros
itrosomonas y Nitrosococcus, por ejemplo, juegan papeles importantes en el primer paso,
y Nitrobacter y otras bacterias quimiolitohetertrofas relacionadas realizan el segundo
paso. Adems, la nitrificacin heterotrfica realizada por bacterias y hongos contribuye
significativamente a este proceso en ambientes ms cidos.

El proceso de desnitrificacin requiere un set diferente de condiciones

ambientales. Este proceso desasimilatorio, en el cual el nitrato es utilizado como oxidante
en la respiracin anaerobia, involucra usualmente hetertrofos como Pseudomonas
denitrificans. Los productos principales de la desnitrificacin incluyen gas nitrgeno (N2) y
xido nitroso (N2O), aunque el nitrito (NO -) tambin suele acumularse. 2 El nitrito es
importante desde el punto de vista ambiental debido a que contribuye a la formacin de
nitrosaminas carcinognicas. Finalmente, el nitrato puede ser transformado a amonio en
la reduccin desasimilatoria por una variedad de bacterias que incluyen Geobacter
metallireducens, Desulfovibrio spp., y Clostridium.

La asimilacin del nitrgeno ocurre cuando el nitrgeno inorgnico es usado como

nutriente y es incorporado en nueva biomasa microbiana. El ion amonio, debido a su
estado reducido, puede ser incorporado directamente sin mayor costo de energa. Sin
embargo, cuando el nitrato es asimilado, debe ser reducido con un gasto significativo de
energa. En este proceso el nitrito puede acumularse como un intermediario.

La fijacin del nitrgeno puede ser realizada por bacterias aerobias o anaerobias.
Bajo condiciones aerobias un rango amplio de gneros microbianos de vida libre
(Azotobacter, Azospirillum) contribuye a este proceso. Bajo condiciones anaerobias los
fijadores de vida libre ms importantes son los pertenecientes al gnero Clostridium. La
fijacin del nitrgeno por cianobacterias tales como Anabaena y Oscillatoria, pueden
llevar al enriquecimiento con nitrgeno de aguas dulces y marinas. Adems, la fijacin del
nitrgeno puede ocurrir a travs de la actividad de bacterias que desarrollan asociaciones
simbiticas con plantas. Estas asociaciones incluyen Rhizobium y Bradyrhizobium con
leguminosas, Frankia en asociacin con muchos arbustos leosos, y Anabaena con
Azolla, un helecho acutico de importancia en el cultivo de arroz.

El proceso de fijacin del nitrgeno involucra una secuencia de pasos de reduccin

con importante gasto energtico. El amonio, el producto de la reduccin del nitrgeno,
es inmediatamente incorporado a materia orgnica como una amina. Los procesos
reductores son extremadamente sensibles al O2 y deben ocurrir bajo condiciones
anaerobias incluso en organismos aerobios.

La proteccin de las enzimas fijadoras de nitrgeno se logra por medio de una

variedad de mecanismos, incluyendo barreras fsicas, como ocurre con le heterocistos en
algunas cianobacterias, barredoras de molculas de O2, y tasas altas de actividad
metablica. La fijacin de nitrgeno es catalizada por la enzima nitrogenasa, la cual utiliza
ferredoxina como fuente inmediata de poder reductor.
Otros procesos cclicos.

El ciclo del hierro es especialmente importante en trminos del funcionamiento

microbiano. Los principales gneros que lleva a cabo la oxidacin del hierro,
transformndolo en in ferroso (Fe2+) a in frrico (Fe3+), son Thiobacillus ferrooxidans
bajo condiciones cidas, Gallionella bajo condiciones de pH neutro, y Sulfolobus bajo
condiciones cida, todos en ambientes termoflicos. Mucha de la literatura inicial sugiere
que gneros adicionales podran oxidar el hierro, incluyendo Sphaerotilus y Leptothrix;
estos dos gneros son an llamados bacterias del hierro por los no microbilogos. La
confusin sobre el papel de estos gneros proviene de la ocurrencia de oxidacin
qumica del in ferroso a in frrico (formados precipitados insolubles de hierro) a valores
de pH neutros, donde los microorganismos tambin crecen sobre sustratos orgnicos.
Estos microorganismos estn actualmente clasificados como quimiohetertrofos.

La reduccin del hierro ocurre bajo condiciones anaerobias resultando en la

acumulacin de de in ferroso. Aunque muchos microorganismos pueden reducir
pequeas cantidades de hierro durante su metabolismo, la mayor parte de la reduccin
de hierro la realiza microorganismos especializados tales como Geobacter
metallireducens y Shewanella putrefaciens, los cuales pueden obtener energa para
crecer sobre materia orgnica usando al in frrico como oxidante.

En adicin a estas reducciones relativamente simples a in ferroso, algunas

bacterias magnetotcticas tales como Aquaspirillum magnetotacticum transforman hierro
extracelular al xido de hierro magnetita (Fe3O4) y construyen brjulas magnticas
intracelulares. Ms an, las bacterias hierro reductoras desasimilatorias acumulan
magnetita como producto extracelular.

La magnetita ha sido detectada en sedimentos, donde se encuentra en partculas

similares a las detectadas en bacterias, indicando una contribucin a largo plazo de las
bacterias a los procesos del ciclo del hierro. Se ha sugerido que la reduccin del Fe3+
pudo haber sido el primer proceso significativo global para la oxidacin de materia
orgnica a CO2. La magnetita tambin es importante en la bioremediacin ambiental y
particularmente en medicina. Las partculas pueden ser cubiertas con reactivos
inmunolgicos y con sus propiedades magnticas pueden recuperarse del torrente
sanguneo simplemente con un magneto. Adems, los genes para la sntesis de
magnetita han sido clonados en otros microorganismos, creando nuevos
microorganismos magnticamente sensibles.

La importancia de los microorganismos en el ciclo del manganeso es fcil de

apreciar. El ciclo del manganeso involucra la transformacin del in manganoso (Mn2+) a
MnO2 (equivalente al in mangnico, Mn4+) el cual ocurre en grietas hidrotermales,
cinegas, y como parte importante de rocas resinosas. Leptothrix, Arthrobacter y
Metallogenium son importantes en la oxidacin del Mn2+. Shewanella, Geobacter y otros
quimioorgantrofos puede llevar a cabo procesos complementarios de reduccin de
manganeso. El ciclo del manganeso est relacionado muy cercanamente con el ciclo del
hierro.

Los microorganismos tambin pueden usar una amplia variedad de metales como
aceptor de electrones. Metales tales como el europio, telurio, selenio y rodio pueden ser
reducidos. Entre los microorganismos importantes que realizan esta actividad se incluyen
los fotoorgantrofos Rhodobacter, Rhodopirillum y Rhodopseudomonas. Para selenio
son activos, Pseudomonas stutzeri, Thauera selenatis y Wolinella succinogenes.
Tales reducciones pueden disminuir la toxicidad de un metal.
 La transformacin microbiana del fsforo involucra primariamente la
transformacin de fsforo (valencia +5) de ortofosfato simple a diversas formas ms
complejas, incluyendo polifosfatos encontrados en los grnulos metacromticos. Un
producto nico (presumiblemente microbiano) es la fosfina (PH3) con valencia -3, el cual
es liberado en los pantanos y que arde cuando entra en contacto con el aire. Esto puede
luego prender al metano producido en ese mismo ambiente.

7.4 Interaccin en la utilizacin de recursos.

La sucesin microbiana puede ocurrir cuando la materia orgnica es usada como

fuente de nutrientes y energa. Bajo condiciones aerobias los productos oxidados tales
como nitrato, sulfato, y bixido de carbono se producirn por la degradacin de materia
orgnica compleja. En comparacin, bajo condiciones anaerobias se tienden a acumular
productos reducidos. El uso de productos de desecho de un grupo de microorganismos
por otros organismos es una relacin de comensalismo que se ve a menudo en
ambientes naturales.

Las interacciones microbianas y la sucesin tambin ocurren cuando estn

disponibles mezclas de aceptores de electrones. Si el O2, nitrato, in manganeso, in
frrico, sulfato, CO2 o cualquier combinacin similar est disponible en un ambiente en
particular, tiene lugar una secuencia predecible de uso de oxidantes cuando un sustrato
oxidable est disponible. El oxgeno es empleado como primer aceptor de electrones
debido a que inhibe el uso de nitrato por parte de microorganismos capaces de respirar
con uno u otro. Mientras el O2 est disponible, el sulfato reductor y los metangenos
estarn inhibidos debido a que estos grupos son anaerobios obligados.

Una vez que el oxgeno y los nitratos se han agotado y los productos de la
fermentacin, incluyendo hidrgeno, se han acumulado, comienza la competencia por el
uso de otros oxidantes. Las formas oxidadas de manganeso y hierro sern utilizadas
primero, seguidas de la competencia entre sulfato reductoras y metangenas. Esto es
influenciado por la mayor cantidad de energa obtenida con el sulfato utilizado como
aceptor de electrones. Diferencias en la afinidad enzimtica por el hidrgeno, un
sustrato importante utilizado por ambos grupos, juegan tambin un papel crtico. El sulfato
reductor Desulfovibrio crece rpidamente y usa el hidrgeno disponible a una tasa mayor
que Methanobacterium. Cuando el sulfato es agotado, Desulfovibrio no oxida ms
hidrgeno, y la concentracin de hidrgeno aumenta. Las metangenas finalmente
dominan el hbitat y reducen el CO2 a metano.

Ester orden del uso de oxidantes se repite siempre que el O2, nitrato, Mn4+, Fe3+,
y/o sulfato estn disponibles. En base a estas interacciones, el uso microbiano de los
oxidantes disponibles puede ser entendido, predicho, y m anejado.

7.5 Sustratos orgnicos utilizados por los microorganismos.

En las discusiones anteriores sobre los ciclos de nutrientes no se hizo distincin

entre los diferentes tipos de sustratos orgnicos. Esto es simplemente debido a que los
sustratos orgnicos difieren en su susceptibilidad a ser degr adados .
 Los factores que influyen en la degradacin incluyen los siguientes:

- Composicin elemental.
- Estructura de unidades bsicas repetitivas.
- Enlaces entre las unidades repetitivas.
- Nutrientes presentes en el ambiente.
- Condiciones abiticas (pH, potencial de oxido-reduccin, O2, condiciones osmticas)
- Comunidad microbiana presente.

De los sustratos complejos utilizados por los microorganismos, slo la biomasa

microbiana previamente producida contiene todos los nutrientes requeridos para el
crecimiento microbiano. La quitina, las protenas, la biomasa microbiana y los cidos
nucleicos contienen nitrgeno en grandes cantidades. El resto de lo sustratos complejos
contienen primariamente, o incluso slo, carbono, hidrgeno y oxgeno. Si los
microorganismos estn creciendo usando estos sustratos, deben adquirir del ambiente el
resto de los nutrientes necesarios para su desarrollo.

Las relaciones de O2 para el uso de estos sustratos son tambin de inters debido
a que la mayora de lo sustratos pueden ser fcilmente degradados con o en ausencia de
oxgeno. La principal excepcin es la lignina.

Los hidrocarburos son nicos en que la degradacin microbiana, especialmente la

de aquellos de forma ramificada, involucra la adicin inicial de oxgeno molecular.
Recientemente se ha observado la degradacin anaerobia de hidrocarburos con sulfato o
nitrato como oxidante. Con sulfato presente, organismos del gnero Desulfovibrio estn
activos. Esto ocurre slo lentamente y con comunidades microbianas que han sido
expuestas a estos compuestos por largos perodos.

La lignina, un componente estructural importante en material vegetal maduro, es un

caso especial en el cual la biodegradabilidad depende de la disponibilidad de oxgeno. A
menudo no hay degradacin significativa debido a que la mayora de los hongos
filamentosos que degradan lignina nativa in situ slo funcionan en presencia de oxgeno.
La falta de biodegradabilidad de lignina bajo condiciones anaerobias resulta en la
acumulacin de materiales lignificados.

VIII. HONGOS. GENERALIDADES.

A diferencia de los protozoarios, los hongos poseen pared celular y esporas de

diversos tipos y forman un grupo coherente filogenticamente hablando (Tabla 10.1). Se
reconocen tres grandes grupos: mohos u hongos filamentosos, levaduras y setas.

Los hbitats de los hongos son bastante diversos. Algunos son acuticos,
principalmente de agua dulce, aunque existen tambin algunos de medios marinos. La
mayora de ellos son de medios terrestres, crecen en suelos o sobre materia orgnica en
descomposicin y contribuyen notablemente a la mineralizacin del carbono orgnico. Un
gran nmero de hongos es parsito de plantas terrestres.
De hecho, los hongos causan prdidas econmicas muy notables en la
produccin hortofrutcola. Algunos hongos son parsitos de animales, incluido en hombre,
aunque, en general, desde este punto de vista, son mucho menos importantes que las
bacterias y los virus.
 a
Tabla 8.1 Clasificacin y principales propiedades de los hongos .
Grupo Nombre Hifas Representante s Tipos de Hbitat Enfermedades
comn tpicos esporas
sexuales
Neurospora, Suelo, materia Tizn del
Ascomicetos Hongos Septadas Saccharomyce s, Ascospora vegetal en castao, ergot,
Morchela descomposicin podedumbre.
Amanita Suelo, materia Tallo negro en
Basidiomiceto s Setas Septadas (venenosa), Basidiospo ra vegetal en trigo, maz, etc.
Agaricus descomposicin
(comestible)
Suelo, materia Deterioro de
Zigomicetos Hongos del Cenoctica s Mucor, Rhizopus Zigospora vegetal en alimentos, rara
pan (deterioro de descomposicin vez implicados
alimentos) en
enfermedades
parasitarias.
Oomicetos Hongos Cenoctica s Allomyces Oospora Acuticos Ciertas
acuticos enfermedades de
los peces
Ninguna Suelo, material Incluyen parsitos
Deuteromicet os Hongos Septadas Penicillium, vegetal en de plantas y
imperfectos Aspergillus, descomposicin, animales (pie de
piel de animales atleta,
Candida
dermatomicosis,
infecciones
sistmicas).
a
Con excepcin de los oomicetos, que son filogenticamente distintos, los otros grupos de hongos estn muy
relacionados entre si.

Las paredes fngicas se parecen a las de las plantas, pero slo desde el punto de
vista de su arquitectura y no desde la composicin qumica. Aunque la celulosa est
presente en ciertos hongos, muchos de ellos poseen paredes no celulsicas. La
quitina, un polmero de N-acetil-D-glucosamina es un constituyente comn de las paredes
celulares fngicas. Se dispone en grupos de microfirillas como la celulosa y en algunas
especies existen otros polmeros como mananos, galactanos o quitosn. En un 80-90%,
las paredes celulares fngicas estn compuestas de polisacridos, mientras que los
lpidos, polifosfatos e iones inorgnicos forman una matriz cementante. El conocimiento
de la pared celular fngica es muy importante por la aplicacin biotecnolgica de estos
microorganismos y, adems, porque su naturaleza qumica se ha usado en la
clasificacin de los hongos.

Los hongos son tpicamente quimioorganotrofos y tienen pocos requerimientos

nutricionales. Muchas especies pueden crecer en ambientes extremos con pHs bajos o
altas temperaturas de hasta 620C y esto, junto con la ubicuidad de las esporas fngicas,
hacen que sean los contaminantes ms frecuentes de alimentos, medios de cultivo
microbianos, etc. Sin embargo, los mohos y las levaduras no son clasificados sobre
bases fisiolgicas, sino por sus diferentes ciclos celulares que incluyen la formacin de
una gran diversidad de esporas.

8.1 Ongos Filamentosos. Mohos.

Los mohos son hongos filamentosos. Estn ampliamente distribuidos en la

aturaleza y se ven frecuentemente sobre pan viejo, queso o frutas.
 Cada filamento crece fundamentalmente en el extremo por un mecanismo de
extensin celular. Cada filamento se denomina hifa. Las hifas crecen en masa en lo que
se denomina micelio, que puede verse fcilmente sin ayuda del microscopio. En la
mayora de los casos, las hifas fngicas contienen ms de un ncleo, a veces cientos de
ncleos. Por tanto, una hifa es como un tubo nucleado con citoplasma (referida como
c enoct ic a ).

A partir del micelio, otras hifas buscan la superficie donde forma esporas o
conidios. Los conidios son esporas asexuales (su formacin no implica la fusin de
gametos), a menudo muy pigmentadas y resistentes a la desecacin, que sirven como
forma de dispersin del hongo en nuevo hbitat. Cuando se forman los conidios, cambia
el color blanco del micelio adquiriendo el de stos que puede ser negro, rojo, azul-
verdoso, amarillo o marrn. La presencia de esas esporas da a la masa micelial la
apariencia de ser una capa de polvo.

Algunos mohos tambin producen esporas sexuales, formadas como resultado de

una reproduccin sexual. Esta se produce por fusin de gametos unicelulares o de hifas
especializadas llamadas gametangios. Alternativamente, las esporas sexuales se pueden
originar de la fusin de dos clulas haploides que sufren meiosis y mitosis para dar
esporas individuales. Dependiendo a qu grupo pertenezca el hongo en cuestin se
pueden formar diversos tipos de esporas sexuales. Cuando se forman dentro de un saco
o asca se denominan ascosporas y si se forman en los extremos de estructuras en forma
de porra se denominan basidiosporas. Las zigosporas producidas por los zigomicetos
como es Rhizopus son estructuras macroscpicamente visibles. Eventualmente, la
zigospora madura y produce esporas asexuales que son dispersadas en el aire y
germinan para dar un nuevo hongo.

Las esporas sexuales de los hongos son generalmente resistentes a la

desecacin, congelacin y a algunos compuestos qumicos. No son tan resistentes como
las endosporas bacterianas. Tanto una espora sexual como asexual puede germinar para
originar un nuevo micelio.

Una actividad ecolgica muy significativa de los hongos es la descomposicin de la

madera, papel, tela y otros productos derivados de fuentes naturales, utilizando estos
productos como fuentes de carbono y de energa. La lignina es un polmero complejo en
el que las unidades son compuestos fenlicos. Es una parte muy importante de las
plantas leosas y junto con la celulosa proporciona rigidez a la planta. La descomposicin
de la lignina en la naturaleza se produce casi exclusivamente a travs de la accin de
ciertos basidiomicetos que producen la podredumbre de la madera. Se conocen dos
tipos: podredumbre marrn en la que se degrada la celulosa, pero no la lignina y
podredumbre blanca en la que se descomponen ambos polmeros. Los hongos que
producen esta ltima forma de podredumbre son muy importantes, ya que estn
activamente implicados en la descomposicin del material leoso de los bosques.

8.2 Hongos Unicelulares. Las Levaduras.

Las levaduras son hongos unicelulares, la mayora perteneciente a los

Ascomicetos. Normalmente son ovales, esfricas o casi cilndricas y la divisin es, casi
siempre, asimtrica o por gemacin. En este proceso, la nueva clula forma como un
pequeo bulto en la clula madre que crece hasta separarse de ella.
Aunque la mayora de las levaduras se reproducen como clulas aisladas, bajo
ciertas condiciones pueden filamentar.
 Por ejemplo, la fase filamentosa es esencial para la patogenicidad de Candida
albicans, una levadura que puede causar infecciones bucales, vaginales o de pulmones,
e incluso, en enfermos de SIDA, dao sistmico tisular.

Las clulas de levaduras son mucho ms grandes que las bacterias y pueden
distinguirse de ellas no solamente por su tamao sino tambin por poseer sistemas
membranosos intracitoplasmticos as como ncleo. Algunas levaduras poseen
reproduccin sexual por conjugacin en la que se fusionan dos clulas. La clula
resultante es un zigoto verdadero y de l emergen esporas sexuales por reduccin
meitica.

Las levaduras prosperan tpicamente en hbitat con azcares, tales como frutos,
flores y cortezas de los rboles. Un buen nmero vive simbionte con animales,
especialmente insectos y algunas son patgenas para animales, incluido el hombre. La
levadura ms conocida es Saccharomyces cerevisiae. El hbitat original de estas
levaduras son indudablemente las frutas y zumos de frutas, pero las levaduras
comerciales de hoy en da son muy diferentes de su ancestro silvestre, ya que ha
sido manipulada por el hombre voluntaria o involuntariamente durante los ltimos 7000
aos. Fue el primer eucariota cuyo genoma se secuenci por vez pr i m er a .

8.3 Hongos mucosos.

Los hongos mucosos son microorganismos eucarioticos que poseen similitudes

fenotpicas con hongos y protozoos. Como los primeros, pueden producir esporas y como
los protozoos pueden moverse por superficies con un movimiento flexible a modo de
amebas. Desde una perspectiva filogentica, los hongos mucosos son ms antiguos que
hongos y protozoos tales como los ciliados, pero ms derivados que los flagelados.

Los hongos mucosos pueden dividirse en dos grupos: los celulares (semejantes a
amebas) y los acelulares, que son masas amorfas de protoplasma que llamamos
plasmodios. Algunos hongos mucosos viven principalmente en material vegetal en
descomposicin, tales como restos de hojas, troncos, etc. Su alimento suele ser otros
microorganismos, especialmente bacterias que ingieren por fagocitosis. Pueden
mantenerse durante mucho tiempo en fase vegetativa o, por diversas razones, desarrollar
esporas que al germinar regeneran el estado ameboideo.

Hongos mucosos acelulares.

En la fase vegetativa, hongos mucosos acelulares tales como Physarum existen

como una masa protoplsmica de tamao indefinido. Esta forma o plasmodio es mvil por
movimiento ameboideo englobando por fagocitosis las partculas de alimento a medida
que se mueve. Este peculiar movimiento es el resultado de las corrientes citoplasmticas
que empujan contra un extremo del plasmodio que es menos viscoso y, lgicamente, la
corriente sigue el camino de mnima resistencia. Estas corrientes, como en el resto de los
microorganismos eucariticos que las poseen, estn facilitadas por microfilamentos que
forman una delgada capa debajo de la membrana citoplasmtica. En hongos mucosos
acelulares, las corrientes citoplasmticas forman unas bandas bien definidas y cada una
rodeada de una delgada membrana citoplasmtica. Las corrientes en s mismas son unos
mecanismos de distribucin celular de los metabolitos.
El plasmodio de hongos mucosos es diploide. A partir de esta masa protoplsmica,
se produce un esporangio y esporas haploides. Bajo condiciones favorables las esporas
germinan y producen una forma natatoria.
 La fusin de dos de estas formas regenera al plasmodio diploide.

Hongos mucosos celulares.

Dictyostelium discoideum es un hongo mucoso celular que tiene un ciclo de vida

muy caracterstico en el que Ias clulas vegetativas se agregan, migran como una masa
y eventualmente producen cuerpos fructferos en los que las clulas se diferencian y
forman esporas. A medida que sus clulas entran en fase de deprivacin, se agregan
para formar un seudo plasmodio, una estructura en la que las clulas pierden su
individualidad pero no se fusionan. Esta agregacin se inicia por la produccin de
adenosinmonofosfato cclico (cAMP) y una glicoprotena; ambos funcionan como agentes
quimiotcticos. Aquellas clulas que son las primeras en producir estos compuestos,
sirven como centros de atencin de otras formas vegetativas lo que conduce a la
formacin de una masa que se mueve coordinadamente.

A partir de esta masa, emerge un cuerpo fructfero cuando cesa el movimiento de

la misma y se pone en posicin vertical. El cuerpo fructfero consta de dos partes: un
pednculo y una cabeza. Las clulas en la parte delantera de la masa se diferencian en
pednculo las de la parte trasera en esporas. Las clulas que se diferencian en
pednculo comienzan a producir celulosa, que da rigidez al sistema. En la maduracin
de la cabeza, las esporas se liberan y se dispersan. Cada espora germina y regenera una
ameba.

El ciclo del cuerpo fructificante y formacin de esporas de Dictyostelium es un

proceso asexual. Sin embargo, se pueden producir tambin esporas sexuales o
macrocistos. Los macrocistos se forman de agregados de amebas que quedan
encerrados en una pared celulsica. Siguiendo la conjugacin de dos amebas, se
desarrolla una ms grande que procede a fagocitar al resto de las amebas. En este
punto, se forma una gruesa pared celulsica alrededor de la ameba gigante originando
as el macrocisto que puede permanecer durmiente durante largos periodos de tiempo.
Eventualmente, el ncleo diploide sufre meiosis para formar ncleos haploides, que se
integran en las nuevas amebas que, una vez ms, inician el crecimiento vegetativo.

IX. PROTOZOARIOS. GENERALIDADES

Los protozoarios o protozoos son microorganismos eucariotas unicelulares que

carecen de pared celular. En general no poseen color y son mviles. Los protozoos se
distinguen fcilmente de los procariotas porque son inconfundiblemente ms grandes; de
las algas porque carecen de clorofila; de los hongos y levaduras por su movilidad y
ausencia de pared celular y de los hongos mucosos por su incapacidad para originar
cuerpos fructferos. Adems, los protozoarios son filogenticamente diversos,
apareciendo en varios linajes en el rbol de Eukarya. Los protozoos se encuentran tanto
en hbitat de aguas dulces como marinas; un gran nmero de ellos son parsitos del
hombre y animales y otros son saprofitos en otros hbitats como suelo, el aire o la
superficie de los rboles.

La mayora de los protozoos se alimentan por fagocitosis, proceso por el que una
partcula de alimento es rodeada por una porcin de su membrana celular flexible,
introducindola en la clula. Algunos protozoos pueden tragar literalmente bacterias o
clulas eucariticas pequeas a travs de una estructura especial, ms o menos
desarrollada, que funciona a modo de boca y que se conoce como c it os t om a .
 Como es lgico, y por ser organismos que podramos considerar como cazadores,
los protozoos son mviles. De hecho, el tipo de movilidad es una de las caractersticas
que se emplean para dividirlos en grupos taxonmicos (Tabla 11.1). Los protozoos que se
mueven por movimientos ameboides se llaman Sarcodina; los que utilizan flagelos,
Mastigophora y los que utilizan cilios, Ciliophora. Existe un cuarto grupo Apicomplexa,
generalmente inmviles, que son parsitos de animales superiores.

Tabla 9.1 Caractersticas de los principales grupos de protozoarios.

Grupo Nombre comnRepresentantes tpicos Hbitat Enfermedades

Mastigophora Flagelados Trypanosoma, Agua dulce; Enfermedad del

Giardia, parsitos de sueo; giardiasis;
Leishmania, animales. leismaniasis.
Trichomonas
a
Euglenoides Flagelados Euglena Agua dulce, Ninguna conocida.
fototrpicos algunos marinos.
Sarcodina Amebas Amoeba, Aguas dulces y Disentera
Entamoeba saladas; parsitos amebiana
de animales. (amebiasis)

Ciliophora Ciliados Balantidium, Agua dulce y Disentera

Paramecium marina; parsitos
de animales;
rumen.
Apicomplexa Esporozoos Plasmodium, Parsitos de Malaria;
Toxoplasma animales: insectos toxoplasmosis.
(vectores).
a
Este grupo es considerado tambin como algas.

9.1 Mastighopora: los Flagelados.

Los miembros de este grupo de protozoos son mviles por la accin de flagelos.
Aunque muchos protozoos flagelados son de vida libre, un buen nmero de ellos son
parsitos de animales, incluido el hombre. El ms importante de ellos es Trypanosoma.
Estos organismos causan una serie de enfermedades graves en el hombre, como la
enfermedad del sueo. En Trypanosoma, gnero que infecta a humanos, el protozoo es
bastante pequeo, aproximadamente de 20 de longitud, son organismos delgados con
forma curvada. El flagelo se origina en un cuerpo basal y se repliega lateralmente a
travs de la clula quedando rodeado por una ondulacin de la membrana de la
superficie. Tanto el flagelo como la membrana estn implicados en el movimiento a travs
de sustancias viscosas, como es el caso de la sangre. Trypanosoma gambiense es la
especie que produce la enfermedad del sueo africana, una enfermedad crnica y
generalmente mortal. En el hombre, el parsito vive y se multiplica inicialmente en el
torrente sanguneo, invade el sistema nervioso central, causando una inflamacin del
cerebro y de la espina dorsal responsable de los sntomas neurolgicos caractersticos de
la enfermedad. El parsito se transmite por la mosca tse-tse Glossina que, al contrario
que el resto de las moscas, se alimenta chupando la sangre de los animales de sangre
caliente y vive en ciertas partes de frica. El parsito prolifera en el tracto intestinal de la
mosca e invade sus glndulas salivares, desde donde se transmite por picadura al
hospedador humano. Los flagelados fototrficos son los euglenoides, flagelados que
contienen clorofila que permite el crecimiento fotosinttico. Sin embargo, en la oscuridad
Euglena puede sobrevivir y crecer como un quimioorganotrofo y, como tal, es
indistinguible de los protozoos. Se conocen muchos euglenoides y son exclusivamente
acuticos; por lo general, se encuentran en aguas dulces siendo saprofitas.
 A diferencia de otros protozoos flagelados, los euglenoides no son patgenos.

9.2 Sarcodina: las Amebas.

Dentro de las sarcodinas se encuentran organismos como Amoeba, que en fase

vegetativa se encuentran siempre desnudos; y los foraminferos, amebas que secretan
una especie de concha durante el crecimiento vegetativo. Se conocen un buen nmero
de amebas desnudas parsitas de humanos y otros vertebrados, cuyo hbitat es la
cavidad bucal y el tracto intestinal. En estos hbitats, se mueven por movimiento
ameboide, un mecanismo que tambin emplean los hongos mucosos. Entamoeba
histolytica es un buen ejemplo de amebas parsitas. En muchos casos la infeccin es
asintomtica, pero en algunos individuos produce ulceraciones en el tracto intestinal, que
produce un estado diarreico denominado disentera amebiana (amebiasis). El organismo
se transmite de persona a persona como cistos cuando hay contaminacin fecal de las
aguas o los alimentos.

Las sarcodinas con concha presentan una interesante variedad de formas. Las
mejor estudiadas son los foraminferos. Los foraminferos son organismos exclusivamente
marinos, que viven en zonas prximas a las costas. Las conchas, llamadas testas, de las
diferentes especies tienen diversas caractersticas y a menudo estn decoradas
(ornamentadas). Las testas estn hechas de carbonato clcico y las clulas no se anclan
firmemente a ellas, de modo que la clula puede extenderse cuando se alimenta.

Debido al peso de la concha, los foraminferos se hunden hasta el fondo y se

piensa que estos organismos se alimentan de depsitos particulados en los sedimentos,
principalmente bacterias y detritus. Las conchas son bastante resistentes y, por ello, se
fosilizan rpidamente (los acantilados de Dover, Inglaterra, son en gran medida conchas
de foraminferos). Debido a que dejan un excelente registro fsil, se tiene una mejor idea
de su distribucin a travs de las edades geolgicas que a partir de cualquier otro
protozoo.

9.3 Ciliophora: los Ciliados.

Los ciliados son aquellos protozoos que al menos en alguna fase de su vida,
poseen cilios. Son nicos entre los protozoos y poseen dos clases de ncleo: el
microncleo que est implicado en la herencia y en la reproduccin sexual y el
macroncleo que est implicado en la formacin de diversos mRNAs de crecimiento y
otras funciones celulares.

Probablemente, el ciliado mejor estudiado es Paramecium, que ser utilizado aqu

como ejemplo grupo. La mayor parte de los ciliados obtienen su alimento ingiriendo
partculas a travs de una especie de boca hasta una zona ciliada que es como un
esfago. Al llegar al citoplasma, la partcula es englobada en una vacuola digestiva en la
que se vierten las enzimas digestivas.

Adems de cilios, muchos ciliados poseen tricocistos que son filamentos largos, de
naturaleza contrctil anclados debajo de la capa ms externa de la clula. Estas
estructuras permiten a los protozoos asirse literalmente a sustratos slidos y tambin
sirven para dar seales de peligro cuando estn siendo atacados por otros predadores.
En el caso de Didinium, los tricocistos paralizan la presa como preludio a la ingestin.
Muchas especies de Paramecium (as como muchos otros protozoos) sirven de
eficientes hospedadores para bacterias endosimbiontes que viven en su citoplasma o,
incluso, dentro del macroncleo.
 Existen evidencias de que en muchos casos juegan un importante papel en la
nutricin del protozoo, sintetizando vitaminas u otros factores nutricionales, que de lo
contrario tendran que ser obtenidos del medio exterior. En el caso de los protozoos del
tracto intestinal de las termitas, poseen un endosimbionte metanognico que elimina el
hidrgeno producido por la oxidacin del piruvato en el hidrogenosoma; el metano
producido es liberado a la atmsfera.

Aunque algunos ciliados son parsitos, no es sta una forma de vida habitual en el
grupo. La especie Balantidium coli es primariamente una especie parsita de animales
domsticos, pero ocasionalmente infecta el intestino de humanos dando lugar a cuadros
disentricos que pueden confundirse con Entamoeba histolytica. Adems, existe una
fauna caracterstica de ciliados anaerobios obligados en el rumen; estos protozoos juegan
un papel beneficioso en los procesos digestivos y fermentativos que ocurren all.

9.4 Sporozoa (Apicomplejos).

Los apicomplejos o esporozoos es un gran grupo de protozoos que son parsitos

obligados. Se caracterizan por ser inmviles en estado adulto y porque los alimentos los
toman disueltos en fase acuosa a travs de las envolturas celulares como ocurre en los
procariotas y hongos. Aunque el nombre esporozoos implica la formacin de esporas,
estos organismos no las forman; no al menos en el sentido en que se entiende este tipo
de formaciones para procariotas u hongos, en su lugar originan formaciones semejantes
que se llaman esporozoitos, que estn implicados en la transmisin a un nuevo
hospedador. Tantos animales vertebrados como invertebrados pueden ser hospedadores
de los esporozoos e incluso en algn caso pueden tener lugar fases alternas. Los
miembros ms importantes de esporozoos son los coccidios, normalmente parsitos de
pjaros y los plasmodios (parsitos de la malaria) que infectan pjaros y mamferos
incluyendo el hombre.

X. VIRUS. INTRODUCCIN Y CARACTERSTICAS G E NE RAL ES .

Los virus son elementos genticos que pueden replicarse independientemente de los
cromosomas de una clula pero no independientemente de dicha clulas. A fin de
multiplicarse, los virus deben entrar en una clula en la cual puedan replicarse. Dicha
clula se denomina hospedadora. Los virus se caracterizan tambin por tener una forma
infecciosa madura que es tpicamente extracelular.

Los virus, al igual que los plsmidos y otros elementos genticos, se aprovechan de la
maquinaria metablica codificada por los cromosomas de la clula hospedadora. Como
otros elementos, los virus pueden conferir importantes propiedades a la clula
hospedadora. Estas propiedades sern heredadas cuando la clula se divida, si las dos
clulas hijas heredan el genoma vrico. Estos cambios frecuentemente no son dainos, e
incluso pueden ser beneficiosos. Sin embargo, los virus a diferencia de los otros
elementos genticos como los plsmidos, tienen una forma extracelular que los capacita
para ser fcilmente transmitidos de un hospedador a otro. Esta forma extracelular ha
capacitado a los virus a replicarse dentro de un hospedador de una manera daina para
la clula hospedadora. Esta replicacin destructiva es la causa de que algunos virus sean
agentes de enfermedades. En muchos casos, el que un virus cause enfermedad o
cambio hereditario depende de la clula hospedadora y de las condiciones ambientales.
Debido a que los virus tienen una fase independiente de las clulas, algunas personas los
denominan organismos vivos o formas de vida.
 Sin embargo algunas de las propiedades que caracterizan a los sistemas vivientes no
se dan en la forma extracelular de los virus. Sin clulas en las que replicarse, los virus no
podran existir.

Los virus estn entre los ms numerosos microorganismos de nuestro planeta e

infectan todos los tipos de organismos celulares. Por tanto, son interesantes por s
mismos. Sin embargo, los cientficos han estudiado y siguen estudiando los virus por lo
que pueden ensearnos sobre la gentica y bioqumica del metabolismo celular en el
caso de algunos virus, sobre el desarrollo de las enfermedades. Adems, los virus son
tambin importantes herramientas para la gentica microbiana y la ingeniera gentica.

10.1 Propiedades Generales de los Virus.

Describiremos aqu los estados intra y extracelular de los virus. En el estado

extracelular, un virus es una partcula minscula que contiene cido nucleico rodeado por
protena y que, dependiendo del virus especfico, ocasionalmente contiene otros
componentes macromoleculares. En este estado extracelular, la partcula vrica, tambin
llamada virin, es metablicamente inerte y carece de funciones respiratorias y
biosintticas. El virin es la estructura mediante la cual el genoma del virus se transporta
desde la clula en la que se ha producido a otra clula en la que el cido nucleico vrico
puede ser introducido. Una vez dentro de la nueva clula, se inicia el estado
intracelular. Durante este estado tiene lugar la replicacin del virus: se producen nuevas
copias del genoma vrico, y se sintetizan los componentes de la cubierta del virus.
Cuando un genoma vrico se introduce y se reproduce en una clula hospedadora, el
proceso se denomina infeccin. La clula que puede ser infectada por un virus que,
adems, se reproduce en ella, se denomina hospedador. Los genomas virales son muy
limitados en tamao y codifican primariamente las funciones que no pueden adaptar de
sus hospedadores. Por tanto, durante la replicacin dentro de una clula, los virus
dependen de manera determinante de los componentes estructurales y metablicos de
las clulas hospedadoras. El virus reconduce las funciones metablicas la maquinaria del
hospedador al servicio de su propia replicacin y al ensamblaje de los nuevos viriones.
(Por tanto, para la mayora de los virus pueden encontrarse viriones dentro de la clula al
final de la i n f e c c i n ).

10.2 Genomas Vricos.

Como es bien sabido, todas las clulas tienen cido desoxirribonucleico de doble
cadena (DNA) como material gentico. Por el contrario, los virus contienen o bien DNA o
cido ribonucleico (RNA) como material gentico, y en ambos casos puede ser de cadena
sencilla o doble. Los virus se dividen a veces en dos tipos, segn contengan DNA o RNA
como material gentico, y todos los virus contienen uno u otro en el virin. Sin embargo,
existe un tercer tipo de virus que usan ambos, DNA y RNA, como material gentico, pero
en distintos estadios de su ciclo reproductivo.

El ltimo grupo incluye los retrovirus, que contienen un genoma de RNA en el virin
pero se replican a travs de un intermediario de DNA, y el virus de la hepatitis B, que
contiene DNA en el virin pero tiene RNA como intermediario de replicacin. Estas clases
pueden ser subdivididas sobre la base de si el cido nucleico del virin es de cadena
sencilla o doble. La clasificacin de los virus basada en el tipo de cido nucleico en los
viriones y las estrategias de replicacin asociadas a los mismos ha sido formalizada
como el Sistema de Clasificacin de B a l t i m o r e .
 A pesar de la diversidad en la estructura del genoma, los virus obedecen al dogma
central de la biologa molecular: toda la informacin gentica fluye desde el cido nucleico
a la protena. Adems, todos los virus usan la maquinaria traduccional de la clula; y as,
con independencia de la estructura del genoma vrico, debe generarse RNA mensajero
(mRNA) que pueda ser traducido en los ribosomas del hospedador.

10.3 Hospedadores de Virus y Taxonoma.

Los virus pueden clasificarse tambin en funcin de los hospedadores que pueden
infectar. As, tenemos virus de animales, virus de plantas y virus bacterianos. Los virus de
bacterias, a veces llamados bacterifagos (o, abreviadamente, fago, del griego phagein
que
significa comer), han sido estudiados primariamente como sistemas modelo
convenientes de investigacin en biologa molecular y gentica de la reproduccin
vrica.

Muchos de los conceptos bsicos de virologa se generaron trabajando con virus

bacterianos y se aplicaron posteriormente a virus de organismos superiores. Dada su
frecuente importancia mdica, los virus de animales tambin llamados virus animales han
sido estudiados extensamente. Los dos grupos de virus animales ms estudiados son los
que infectan insectos y los que infectan animales de sangre caliente. Los virus de plantas
o virus vegetales son importantes en agricultura y han sido menos estudiados que los
virus de animales.

Finalmente, existe un sistema formal de taxonoma vrica que organiza los virus en
iveles taxonmicos jerrquicos: orden, familia (y subfamilia), gnero y especie.
Aunque, a veces, este sistema taxonmico formal puede parecer bastante arbitrario (y a
pesar de que los nombres comunes estn todava en uso), su utilidad aumenta
continuamente debido al incremento de los datos filogenticos que se van acumulando. El
taxn familia parece particularmente til. Los miembros de una familia de virus poseen
morfologa (del virin), estructura del genoma y/o estrategias de replicacin distintivas.
Las familias de virus tienen nombres que incluyen el sufijo - irdea (como en Poxviridae).