Etude Cinétique de La Croissance de Saccharo

ElWahat pour les Recherches et les Etudes Vol.
8 n1 (2015) : 19 35
Revue ElWahat pour les Recherches et les Etudes

ISSN : 1112 -7163
http://elwahat.univ-ghardaia.dz
Etude cintique de la croissance de Saccharothrix algeriensis

DSM 44581 en fermenteur batch sur un milieu semi-
synthtique en prsence dacide tiglique et dacide
mthacrylique
BOURAS N.1,2,3, MOKRANE S.2, BOURAS H.D.4, KEMASSI A.3,

BRANDAM C.1, LEBRIHI A.1, MATHIEU F.1 et SABAOU N.2
1-
Universit de Toulouse, INPT-ENSAT, Laboratoire de Gnie Chimique, UMR
5503 (CNRS/INPT/UPS), Dpartement de Bioprocds et Systmes
Microbiens, France;
2- Laboratoire de Biologie des Systmes Microbiens (LBSM), Ecole Normale
Suprieure de Kouba, Alger, Algrie;
3- Dpartement de Biologie, Facult des Sciences de la Nature et de la Vie et
Sciences de la Terre, Universit de Ghardaa, BP 455, Ghardaa 47000, Algrie;
4- Laboratoire de Recherche sur les Produits Bioactifs et la Valorisation de la
Biomasse (LPBVB), le Normale Suprieure de Kouba, B.P. 92, 16 050 Vieux-
Kouba, Alger, Algeria
Correspondance: noureddine_bouras@yahoo.fr
Rsum-
Ce travail sest donn pour objectif ltude cintique de leffet de

certains nutriments (acide tiglique et acide mthacrylique) sur la
croissance de Saccharothrix algeriensis DSM 44581 en fermenteur batch
dans un milieu semi-synthtique.
Des fermentations contrles dans des fermenteurs en batch ont t

effectues en prsence de lacide tiglique et de lacide mthacrylique, pris
un un, pour affiner les rsultats obtenus en Erlenmeyers. D'aprs les
rsultats obtenus, la croissance de S. algeriensis dans les deux
fermentations est trs rapide pendant les premires heures de culture. Les
cellules de la culture tmoin subissent une lyse cellulaire assez marque
alors que les cellules en prsence des acides organiques se maintiennent
bien. Les acides organiques en tant que source de carbone permettent la
conservation de lintgrit des cellules. La formation de la biomasse est
soumise la rgulation par les deux acides organiques ajouts. Les
rsultats obtenus en fermenteurs ne sont pas exactement les mme que
ceux obtenus en Erlenmeyers dun point de vue qualitatif et quantitatif.
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Revue ElWahat pour les Recherches et les Etudes Vol.8 n1 (2015) : 19 35
Mot cls: Saccharothrix algeriensis, fermentation, biomasse, acide

tiglique, acide mthacrylique.
Kinetic study of the growth of Saccharothrix algeriensis DSM

44581 in batch fermenter on a semi-synthetic medium in the
presence of tiglic acid and methacrylic acid
Abstract-
This work aimed to investigate the effect of some nutriments

(tiglic acid and methacrylic acid) on the growth of Saccharothrix
algeriensis DSM 44581 on chemically defined medium (semi-synthetic
medium) by using controlled batch fermenters.
The controlled batch fermentations were conducted in the
presence of tiglic and methacrylic acids. The growth rate of S. algeriensis
in all fermentations was fast during the first 10 h of fermentation. The
control culture showed a partially cell lysis in comparison to cultures with
organic acids. This result showing that these organic acids could be used
for biomass maintaining. The formation of biomass was influenced by the
addition of organic acids. The experiment in the fermentor showed some
differences with results obtained in Erlenmeyers.
1- Introduction
Les actinobactries, microorganismes procaryotes, sont des bactries

Gram positif qui tendent former des filaments ramifis lesquels
peuvent tre assez dvelopps pour former un vritable myclium. Le
diamtre de ces filaments varie gnralement entre 0,5 et 2 m. Ils sont
dfinis par un taux lev en guanine et cytosine (suprieur 55%), ce qui
les spare des autres procaryotes ayant un taux infrieur en G+C (Holt et
al., 1994). Ce groupe englobe des genres trs diversifis dans leur
morphologie. On retrouve la forme cocci (Micrococcus), ou une
alternance "bacille-cocci" (Arthrobacter) mais la majorit tendent
former des filaments ramifis, fragments (Nocardia, Rhodococcus), ou
non (Micromonospora, Streptomyces, Streptosporangium, etc.)
(Boudjella, 2007).
La production de nouveaux mtabolites secondaires bioactifs

(principalement les antibiotiques) est actuellement une proccupation
importante lchelle mondiale du fait de la prolifration de souches
bactriennes multi-rsistantes aux antibiotiques actuellement disponibles.
Saccharothrix algeriensis est une bactrie filamenteuse appartient au
BOURAS N, MOKRANE S., BOURAS H.D., KEMASSI A., BRANDAM C.1, LEBRIHI A.,
MATHIEU F.1 et SABAOU N.2
20
groupe des actinobactries. Celle-ci sest avre productrice de molcules

de la classe des dithiolopyrrolones et prsente des activits
antibactriennes, antifongiques et anticancreuses intressantes (Lamari
et al., 2002a,b; Minamiguchi et al,. 2001; Oliva et al., 2001; Webster et
al., 2000).
La production des mtabolites secondaires peut tre ralise sous

trois conditions. Premirement, il est ncessaire d'avoir des usines
cellulaires pour synthtiser la molcule, cest--dire de la biomasse;
deuximement, les prcurseurs doivent tre prsents; et troisimement,
les enzymes capables de transformer ces prcurseurs, doivent tre aussi
prsentes et actives (Voelker et Altaba, 2001).
Les travaux antrieurs raliss dans des Erlenmeyers ont montr que
la production, par Saccharothrix algeriensis, des antibiotiques
dithiolopyrrolones (la thiolutine, la sncioyl-pyrrothine, la tigloyl-
pyrrothine, lisobutyryl-pyrrothine et la butanoyl-pyrrothine) est
influence par la nature et la concentration de diffrents acides
organiques ajouts dans le milieu de culture (Bouras, 2005; Bouras et al.,
2007, 2008). Ainsi, des concentrations de 2,5 mM dacide tiglique et de 5
mM dacide mthacrylique mnent une meilleure production de la
tigloyl-pyrrothine et de la butanoyl-pyrrothine, respectivement.
Afin daffiner nos rsultats dans des conditions mieux contrlables,

nous avons choisi deux acides organiques: lacide tiglique ( 2,50 mM) et
lacide mthacrylique ( 5 mM). Ces acides organiques ont t tests pour
la croissance de S. algeriensis sur le milieu semi synthtique de base
(MSS) contenant 25 g/l de glucose.
2- Matriel et mthodes
2.1.- Microorganisme
Saccharothrix algeriensis DSM 44581 (NRRL B-24137) a t isole

partir dun chantillon de sol saharien de la palmeraie dAdrar (oasis du
Sud-Ouest algrien). Cette espce dactinobactrie est productrice
dantibiotiques du groupe des dithiolopyrrolones (Lamari et al., 2002a,b).
2.2.- Chromatographie liquide haute performance
Systme de chromatographie liquide haute performance (HPLC)

quip dun injecteur automatique Thermo Separation Products Spectra
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Series Autosampler AS100TM, avec une boucle dinjection de 20 L; une

pompe Spectra System P1000XR (Thermo Separation Products); un
dtecteur rfractomtrique diffrentiel Spectra Physics Refracto Monitor
IV de Thermo Separation Products SP 8430TM; une colonne de rsine
cationique (garnissage rsine cationique H+) Bio rad Aminex HPX-
87HTM de dimension 300 7,8 mm utilise 40 C, prcde dune
colonne de garde Bio rad (H+). Un logiciel, Borwin V 1,2 (t-SP V 1.21TM,
PC A000) qui permet de calculer la surface des pics dtects. Ce
systme HPLC est utilis pour doser le glucose et les acides organiques.
2.3.- Fermentations en bioracteur
Les cultures sont effectues dans des fermenteurs de 2,5 l (le

volume utile est fix 2 l), modle: New Brunswick Scientific Co., Inc.
Edison, N.J., U.S.A., Q 290100. Les fermenteurs sont inoculs 5 %
volume pr-culture/volume culture soit 100 ml de pr-culture dans 2 l de
culture. Ce fermenteur est quip dun ensemble dagitation pour assurer
lhomognit du milieu de culture, comprenant un systme dont la
vitesse dagitation est rglable par un moteur dagitation (Magmator). Un
mode de rgulation de la temprature qui est assur par un systme qui
dispose dun capteur mtallique permettant des acquisitions trs prcises.
Ce systme est reli une sonde place dans le milieu de culture ainsi
quune bande chauffante autour du fermenteur et une circulation deau
thermostate dans un serpentin plongeant dans le bioracteur. Un
dispositif daration qui comporte un dbitmtre massique air
(Bronkhorst Hi-tec, srie F100/200). Un filtre air strilisable lentre,
un diffuseur dair situ dans la partie infrieure de la cuve et un
condenseur deau pour viter la perte de milieu par vaporation. Une
sonde de prlvement (chantillonneur) plongeant dans le milieu de
culture. Cette sonde est relie lextrieur une seringue pour effectuer
des prlvements striles. Un quipement ,de septa, permettant dinoculer
le fermenteur ou pour diverses alimentations; une sonde pH immersion
strilisable (Ingold Infit, type 764.50 B/BH), relie un ensemble de
rgulation par acide (HCl, 2 N) ou par base (KOH, 2 N); une sonde de
mesure de pO2 pression partielle pour mesurer loxygne dissous
polarographique (sonde O2 Ingold, Biolafitte, model 34-10-3003; Mettler
Toledo, Zurich, Switzerland) avec leur systme de rgulation. Le logiciel
utilis est: Bio Flo 110 Fermentor/Bioreactor, Bio-Command Plus, NBS
Bio Command, version 3,3 plus (BioProcessing Software).
22
2.4.- Milieu de pr-culture et de culture
La composition du milieu de production a t labore au sein de

notre laboratoire (Bouras et al., 2006a,b). Ce milieu chimiquement dfini,
dit MSS (Milieu Semi-Synthtique) est compos de (quantit pour 1000
ml eau distille): D(+) Glucose anhydre: 25 g, (NH4)2SO4: 2 g (15,13
mM), NaCl: 2 g, KH2PO4: 0,5 g, K2HPO4: 1 g, MgSO4 7 H2O: 0,2 g (0,81
mM), extrait de levure: 2 g, CaCO3: 5 g (le carbonate de calcium permet
de tamponner le pH du milieu de culture). Le pH est ajust 7 avec du
NaOH (2N).
Pour les pr-cultures, la prparation des inocula est effectue en
fioles Erlenmeyer de 250 ml contenant 50 ml de MSS. Ces fioles sont
ensemences avec un inoculum de spores provenant dune culture de S.
algeriensis ge de 10 jours. Le milieu de culture est de la mme
composition que le milieu basal (MSS).
2.5.- Strilisation des milieux de culture
Pour les pr-cultures, les fioles Erlenmeyer de 500 ou de 250 ml et

contenant respectivement 100 ou 50 ml de milieu (soit 20% de leurs
volumes totaux), sont strilises dans un autoclave pendant 20 min 120
C (sous 1 bar), alors que le fermenteur de 2,5 l contenant jusqu 2 l de
milieu de culture est strilis pendant 25 min 120 C.
Le milieu semi-synthtique (MSS) est strilis en deux parties
spares afin dviter la raction de Maillard (entre les sources de
carbone et les sources dazote) qui peut changer la composition du milieu
de culture. Le glucose (solution A) est autoclav sparment puis
mlang strilement avec lautre partie du milieu de culture (solution B
contenant les sels et lextrait de levure) seulement aprs strilisation et
juste avant linoculation.
De mme les produits ajouts au milieu MSS (lacide tiglique et
lacide mthacrylique) sont autoclavs sparment et ajouts au milieu de
culture juste avant linoculation.
2.6.- Conditions de fermentation (cultures en fermenteur)
Les pr-cultures sont places dans un incubateur thermostat 30C,

et agitation orbitale fixe 250 r.p.m (rotation par minute). Toutes les
cultures liquides de fermentation discontinue (batch) sont ralises dans
un fermenteur (le volume utile est fix 2 l).
Lensemencement est effectu partir dun inoculum en phase
exponentielle de croissance (g de 36 48 h). Aprs 48 heures
23
dincubation, une estimation du poids sec permet de fixer le volume de

pr-culture ncessaire pour ensemencer le fermenteur de manire avoir
une biomasse initiale denviron 0,2 g/l. Les conditions opratoires pour
les cultures en fermenteur (batch) sont les suivantes: pH est maintenu
une valeur de 7 0,05 au dbut de la fermentation, temprature
dincubation est maintenue 30 0,1 C, dbit dair (laration initiale)
est fix 1 v/v/m (volume dair par volume de liquide par minute) soit
2000 ml dair par minute, pourcentage doxygne dissous (pression
partielle) est maintenu 30 5% de la saturation par modification de la
vitesse dagitation (rglable de 200 300 r.p.m). Afin de limiter la
formation de mousse, un agent anti-mousse: le polyglycol P-2000 E est
employ.
Des chantillons sont prlevs, dans des conditions aseptiques, tous
les 4 h afin dtablir les cintiques de fermentation. Un volume de 20 ml,
destin au dosage des substrats, est centrifug (10 000 g pendant 10
min), puis stock -20 C jusqu la fin de la fermentation. Le poids sec
du myclium est immdiatement mesur. La dure dune fermentation est
de 5 jours (120 h).
2.7.- Mesure du poids sec
Elle consiste peser la biomasse cellulaire contenue dans un volume

de culture connu. Pour mesurer le poids sec, nous avons utilis la
mthode de Pfefferle et al. (2000) avec quelques modifications. Pour
chaque chantillon, 20 ml de culture sont prlevs et mis dans des tubes
pralablement dessiqus et tars. Les tubes sont ensuite centrifugs
16 000 g pendant 10 min. Le culot est lav trois fois par centrifugation
en utilisant 1,5 ml de HCl (0,35 M) afin dliminer le CaCO3, et une
dernire fois avec 1,5 ml deau distille.
Par la suite, les cellules sont rcupres par centrifugation. Les tubes
sont ensuite placs dans une tuve 105 C pendant 24 heures, puis pess
aprs refroidissement dans un dessiccateur. Le poids sec ainsi dtermin
est ensuite rapport au litre de volume de fermentation (exprim en
gramme de matire sche par litre de milieu de culture). Les peses sont
effectues sur une balance analytique Sartorius.
2.7.1.- Mesure du pH
Lors de la centrifugation pour la mesure du poids sec, le surnageant

obtenu est utilis immdiatement pour enregistrer les variations de pH au
cours du temps.
24
2.7.2.- Dosage du glucose et des acides organiques par HPLC
Les dosages chimiques ont t raliss aprs les fermentations. Les

chantillons prlevs en vue dune analyse chromatographique ont t
centrifugs (10 000 g, 4 C et pendant 10 min) et le surnageant est
directement congel 20 C dans des tubes essais en verre ferms. Au
moment de lanalyse, lchantillon a t dcongel temprature
ambiante, puis il a t convenablement dilu avec un dilueur
automatique. Les concentrations en glucose, acide tiglique et acide
mthacrylique ont t analyss par chromatographie liquide haute
performance (HPLC), aprs filtration laide dune seringue et dun filtre
(Minisart Sartorius, 0,2 m). La phase mobile est une solution dacide
sulfurique (H2SO4) 5.10-3 mM (dgaz lhlium) lu un dbit
isocratique de 0,4 ml/min par une pompe. Le temps dacquisition est de
40 min.
La courbe dtalonnage est ralise avec 5 concentrations pour

chaque compos. Nous avons utilis les concentrations suivantes: 0, 2,5,
5, 15 et 25 g/l pour le glucose et 0, 0,25, 1,25 et 5 mM pour les acides
organiques (tiglique et mthacrylique). Les surfaces des pics ont t
traites par ordinateur quip du logiciel Borwin. Cette surface est
corrle une valeur en concentration par lintermdiaire dune courbe
de calibration pour le glucose et pour lacide mthacrylique. Ainsi, les
surnageants de nos chantillons sont dilus de manire obtenir des
concentrations infrieures ou gales 25 g/l pour les sucres et 4 g/l pour
les acides organiques.
2.7.3.- Dosage du glucose par la mthode enzymatique YSI
Le glucose est dos galement par une mthode enzymatique

(Enzymatic Glucose Analyzer) grce un appareil automatique YSI.
Lappareil utilise une enzyme immobilise (glucose-oxydase) sur une
membrane, elle-mme couple une sonde lectrochimique. Lenzyme
ragit avec le glucose et produit du peroxyde dhydrogne (H2O2). Celui-
ci est ensuite lectro-chimiquement oxyd par une anode de platine. Cette
raction produit un signal lectronique proportionnel la concentration
en glucose de la solution dose. La rponse de lappareil est linaire entre
0,002 et 25 g/l de glucose, avec une erreur maximale tolre de 5% par
rapport une solution standard 25 g/l de glucose.
25
2.7.4.- Dosage de lazote ammoniacal
Lazote ammoniacal est dos par une mthode enzymatique propose

en kit par Boehringer-Mannheim (kit Diagnostics Ammonia, Enzymatic
BioAnalysis/Food Analysis, UV-test, approx. 50 assays). Rfrence: R-
Biopharm, K-Amia, AG, D-64293, E 1112732, Darmstadt Roche).
En prsence de la glutamate dshydrognase (GIDH) et du

dinuclotide nicotinamide-adnine rduit (NADH), lammoniaque ragit
avec 2-oxoglutarate pour donner le L-glutamate. Le NADH soxyde en
NAD+.
GIDH
2-Oxoglutarate + NADH + NH4+ L-glutamate
+ NAD+ + H2O
La quantit de NADH oxyde dans la raction ci-dessus est

stoechiomtrique la quantit d'ammoniaque. La quantit de NADH est
dtermine grce son absorbance 334, 340 ou 365 nm.
Lappareil utilis est le Mascot Plus, qui est compos de trois parties:
le distributeur sur lequel sont placs les ractifs et les chantillons et qui
assure la partie prparation (prlvement des ractifs, des chantillons,
pr dilutions, post-dilutions); le banc optique o sont transfrs les
prlvements et o est assur le suivi des ractifs et linterface utilisateur
par lintermdiaire de laquelle sont programms les paramtres de
fonctionnement de lanalyseur.
Le consommable est le suivant: chantillons une dilution adapte et la
solution standard dammoniac concentration connue pour test, solution
de mouillant, cuves PMMA (540 barrettes de 8 cuves), cuves
polystyrnes (540 barrettes de 8 cuves), godets de 0,5 ml (1000), godets
pour antisrum (25) et flacons ractifs complets (16) et essuyeurs (32). Le
ractif R1 est compos de 1 ml de 2-oxoglutarate, 1 ml deau dionise et
1 tablette du flacon 2 (flacon contenant des tablettes de NADH). Le
ractif R2 est compos de 0,1 ml de GIDH et 0,9 ml deau dionise.
Au cours du dosage et aussitt quune analyse est termine, le rsultat

saffiche sur la partie droite de lcran du synoptique de travail. Le
numro de la cuve de mesure utilise, le numro du godet et le nom du
paramtre trait sont suivis du rsultat calcul.
L'quation gnrale pour calculer la concentration est la suivante:
26
V MW
C A g / l
d v 1000
V = volume finale [ml],

v = volume de lchantillon (ml),
MW = poids molculaire de la substance tester (g/mol),
d = trajet de la lumire (cm),
= coefficient d'extinction de NADH: 6,3 (l mmol-1 cm-1) 340 nm;
6,18 (l mmol-1 cm-1) 334 nm et 3,4 (l mmol-1 cm-1) 365 nm.
Pour lammonium, on a:
3 , 020 17 , 03 0 , 514
C A A g ammoniac / l chantillo n
1 , 00 0 ,100 1000
Si l'chantillon a t dilu sur la prparation, le rsultat doit tre

multipli par le facteur F de dilution. En analysant les chantillons solides
et semi solides qui sont pess pour la prparation tmoin, le rsultat doit
tre calcul partir de la quantit pese.
Pour Lazote ammoniacal:

C ammonia g / l sample
content ammonia 100 g / 100 g
weight sample g / l
2.7.5.- Dosage de lazote total
Lazote total est dos par une mthode propose en kit par Odyssey /
Fisher (kit Odyssey DR / 2500, Test N TubeTM Vials, LR (10-150 mg/l
N). Rfrence: kit 26722-45.
La mthode utilise pour est la digestion par le persulfate. Le racteur de
type COD, Analyzer and COD heating Reactor, Hach. Company, USA.
Spectrophotomtre (Spectro-Hach Odyssey), USA. Le ractif 1 est
compos de 0,5 ml de lchantillon ( une dilution adapte) + le ractif
(Hydroxyde Reagent compos dhydroxyde de sodium) + un sachet de
persulfate de potassium. Chauffer le ractif 1 pendant 30 minutes dans un
racteur COD, Hach ( une temprature de 105 C), puis laisser refroidir
la temprature ambiante, et ajouter au ractif 1, un sachet de ractif A
(mtabisulfite de sodium) et mlanger pendant 2 minutes, par la suite
ajouter au ractif 1, un sachet de ractif B (acide chromatropique, sel
disodium, quartz blanc, ure et mtabisulfite de sodium) et mlanger
pendant 5 minutes. Un blanc (0,0 mg/l) est prpar dans les mmes
conditions, avec 0,5 ml deau dionise prsente dans le kit. Mettre 2 ml
de ractif 1 dans le ractif C (acide sulfurique) et mlanger pendant 5
27
minutes. Effectuer la lecture 410 nm dans un spectrophotomtre

spectro-Hach, Touch (Hach Programs), Select Program (350N, Total
TNT/ n 395). Les rsultats sont exprims en mg dazote total/l.
3.- RESULTATS
3.1.- Effet sur la croissance de S. algeriensis
D'aprs les rsultats obtenus sur la figure 1, la croissance de S.

algeriensis dans toutes les fermentations (en prsence dacide tiglique,
dacide mthacrylique et dans le milieu tmoin) est trs rapide pendant
les dix premires heures de culture. La biomasse maximale obtenue est de
5,97 g/l pour le tmoin, 8,90 g/l en prsence dacide tiglique et 8,80 g/l en
prsence dacide mthacrylique. La phase stationnaire est observe
globalement entre 24 et 52 h de fermentation. De plus, aprs 48 h de
fermentation, la culture tmoin subit une lyse cellulaire partielle. En
revanche, en prsence dacide tiglique ou dacide mthacrylique, la
biomasse se maintient un niveau lev.
Les valeurs obtenues de la vitesse spcifique maximale de croissance

(max) sont de 0,31, 0,31 et 0,32 h-1, en prsence dacide tiglique, dacide
mthacrylique et dans le milieu le tmoin, respectivement. Daprs ces
rsultats, il semblerait quil ny ait pas de diffrence significative
concernant la croissance de S. algeriensis en prsence des diffrents
acides organiques. En outre, la vitesse spcifique maximale de croissance
(max) est obtenue aprs 8 h de fermentation en prsence dacide
mthacrylique et aprs 10 h en prsence dacide tiglique et dans le milieu
tmoin.
28
Figure 1. Cintique de la variation de la biomasse (, , ), P (O2) (,

, ) et du pH (, , ), dans diffrentes cultures en batch, dans des
fermenteurs de 2 l, en prsence dacide tiglique (2,5 mM), dacide
mthacrylique (5 mM), et dans le milieu tmoin, respectivement.
3.2.- Effet sur le pH et le P(O2)
En prsence dacide tiglique, dacide mthacrylique et dans le milieu

tmoin, les rsultats obtenus montrent que malgr une lgre acidification
observe aprs 52 h de fermentation, le pH volue peu (une unit et demi)
dans ce milieu fortement tamponn par le CaCO3 (fig. 1). Par ailleurs,
nous avons remarqu pour toutes les cultures, et ds les 24 premires
heures suivant la mise en culture, que la PO2 chute rapidement. Cette
observation tmoigne dun mtabolisme actif qui sinstalle et qui se
traduit par laugmentation de la biomasse. En outre, chez le tmoin et en
prsence dacide tiglique, nous avons remarqu une lgre augmentation
de la PO2 aprs 24 h de fermentation. Cette augmentation est
probablement due la lyse partielle des cellules. En prsence dacide
mthacrylique, on observe quau fur et mesure que la production de la
biomasse se poursuit, le taux dO2 est maintenu 30% (point de
consigne).
3.3.- Effet sur la consommation des substrats
Nous constatons par ailleurs que les quantits dazote total et
minral diminuent lentement dans le milieu de culture, en particulier pour
lazote minral en prsence de lacide mthacrylique, et pour lazote total
et minral en prsence de lacide tiglique (fig. 2).
29
Figure 2. Cintique de la variation de la biomasse (a) (, , ), de

lazote total (b) (, , ) et consommation de lacide mthacrylique (b)
() et de lazote minral (c) (, , ), en diffrentes cultures en batch,
dans des fermenteurs de 2 l, en prsence dacide tiglique (2,5 mM),
dacide mthacrylique (5 mM), et dans le tmoin, respectivement.
En dehors de lacide mthacrylique, aucun autre acide na pu tre

dtect par la mthode HPLC utilise. Nous avons prsent alors
uniquement la cintique de consommation de lacide mthacrylique et
nous avons remarqu que sa concentration passe de 5 mM au dbut de la
fermentation 0 mM aprs 72 h de fermentation (fig. 2). Lventuelle
excrtion des acides organiques courte chane comme lactate, le
propionate ou le butyrate a t recherche. Aucun de ces acides na t
dtect.
Lassimilation du glucose a t vrifie. Les rsultats montrent que

la concentration de glucose passe de 25 g/l au dbut de fermentation
24,21 et 23,38 g/l aprs 80 h de fermentation chez le tmoin et en
30
prsence de lacide mthacrylique, respectivement. Par ailleurs, en

prsence de lacide tiglique, nous avons constat que la concentration du
glucose est de 25 g/l, mme aprs 80 h de fermentation.
Ces rsultats montrent quil ny a pas ou peu de consommation de

glucose dans le milieu de culture, malgr lenregistrement des valeurs de
biomasse de lordre de 5,97 8,90 g/l entre 32 et 52 h. Afin de vrifier les
rsultats obtenus par HPLC nous avons quantifi le glucose par une autre
mthode enzymatique (lYSI). Les rsultats acquis par cette mthode
nous ont confirm ceux obtenus par HPLC.
Ces rsultats inattendus nous amnent se poser certaines questions

sur les moyens disponibles pour former la biomasse. Contrairement ce
qui a pu tre attendu, nous avons pens que lextrait de levure et peut tre
mme le CaCO3 peuvent jouer un rle dans la formation de la biomasse.
Dans la prsente tude, six diffrentes fermentations en Erlenmeyers

ont t menes dans diffrentes conditions de culture. Cette tude sera
focalise sur la mesure de la biomasse produite par S. algeriensis dans
diffrentes conditions. Nous avons effectu des fermentations en absence
et en prsence de 25 g/l de glucose, en absence et en prsence de 2 g/l
dextrait de levure et en absence et en prsence de 5 g/l de CaCO3. Par
ailleurs, nous avons effectu une fermentation en prsence de 4 g/l de
(NH4)2SO4 au lieu de 2 g/l dans le milieu de base (MSS). Cinq points de
mesure de la biomasse sont effectus ( 0, 48, 96, 144 et 216 h); les
rsultats sont prsents dans la figure 42.
0h 48 h 96 h 144 h 216 h
3,5
2,5
PS (g/L)
1,5
0,5
0
Pas de Pas de Pas de Glucose (25 Glucose (25 Glucose (25 MS, mais
Glucose Glucose, ni Glucose, ni g/L) = g/L), mais g/L), mais avec 4 g/L
de CaCO3 de l'Ext. de Tmoin pas de pas de l'Ext. de (NH4)2
levure CaCO3 de levure SO4
Figure 3. Effet du glucose, du CaCO3, de lextrait de levure et du

NH42SO4, sur la biomasse de S. algeriensis obtenue aprs 0, 48, 96, 144
et 216 h de fermentation en Erlenmeyers.
31
Les rsultats obtenus montrent que la biomasse maximale chez le

tmoin contenant 25 g/l est de 3,79 g/l. En revanche, llimination du
glucose a fait diminuer la biomasse maximale de 3,79 1,65 g/l. De la
mme manire, llimination du CaCO3 et de lextrait de levure, a
galement fait abaisser la biomasse maximale 2,44 et 1,34 g/l,
respectivement. Par ailleurs, la culture en absence du glucose a fourni une
biomasse de 1,65 g/l. En revanche, llimination du CaCO3 et de lextrait
de levure a diminu la biomasse 1,30 et 0,95 g/l, respectivement. En
outre, la biomasse maximale obtenue en prsence de 4 g/L de (NH4)2SO4
(1,47 g/l) est moins leve que celle obtenue en prsence de 2 g/l de
(NH4)2SO4 (1,65 g/l). Nous avons constat galement que toutes les
valeurs de la biomasse maximale ont t mesures 48 h, lexception
de la fermentation effectue sans glucose (mesure 96 h). Les rsultats
obtenus indiquent que le glucose nest pas lunique fournisseur de la
biomasse mais que lextrait de levure remplit aussi ce rle.
4.- Discussion
Malgr des conditions de pr-culture standardises, des diffrences

de biomasse, de vitesses de croissance ont t observs. Ces diffrences
pourraient tre dues la variabilit de ltat physiologique de linoculum
li la prparation des pr-cultures et la particularit de diffrenciation
du genre Saccharothrix. Lors dune culture de microorganisme, le
fermenteur reprsente un lieu de transformations biochimiques
complexes.
La formation de la biomasse et la biosynthse des antibiotiques est

soumise la rgulation par des mcanismes dus au mtabolisme des
sources de carbone, dazote et de phosphate: induction et rpression de la
biosynthse, rtro-inhibition et inactivation enzymatique (Martn and
Demain, 1980). La question importante qui reste pose dans notre cas,
concerne la formation dune biomasse relativement considrable partir
dune consommation minime de glucose. La concentration de glucose a
t vrifie par deux mthodes diffrentes (lHPLC et lYSI). Nous avons
essay alors dtablir une corrlation entre la formation de la biomasse et
la consommation dautres sources comme lextrait de levure et le CaCO3.
Nous pouvons donc conclure ce niveau que le glucose nest pas
lunique fournisseur de la biomasse chez S. algeriensis mais que le
CaCO3 (malgr que les actinobactries sont des organismes
chimioorganotrophes et non des chimio-litho-trophes) et lextrait de
levure remplissent aussi ce rle.
32
Lassimilation de certains acides gras excrts ou ajouts dans le

milieu de culture, modifie fortement la formation de la biomasse. Il est
possible que le tiglate et le mthacrylate entrane une modification de la
composition de la membrane cytoplasmique et vite le dclin cellulaire. Il
a t montr que laddition dun acide gras, comme le mthylolate,
modifie la composition lipidique membranaire chez Streptomyces
hygroscopicus (David et al., 1992). Ces modifications membranaires
entraneraient des variations dans lactivit de certaines enzymes du
mtabolisme primaire et par la suite le mtabolisme secondaire (Arima et
al., 1973).
Les rsultats obtenus en fermenteurs ne sont pas exactement les

mmes que ceux obtenus en Erlenmeyers dun point de vue qualitatif et
quantitatif. Egalement, le rsultat obtenu indique quau cours de 48 h de
fermentation, la biomasse est principalement forme partir dun substrat
autre que le glucose. Lextrait de levure est principalement constitu de
matire protique. Hogdson (2000) ayant abondamment rpertori les cas
de catabolisation des acides amins par des actinomyctes, il serait
probable que la phase initiale de croissance ait lieu sur un ou plusieurs
substrats apports par lextrait de levure, par exemple les acides amins
(Strub, 2009).
Les rsultats de Strub (2009) ont confirm que sur le milieu semi-
synthtique, les diffrents substrats sont consomms de manire
squentielle. Dans un premier temps, lactinobactrie crot partir des
acides amins libres amens par lextrait de levure. Une fois la majorit
des acides amins puiss, lactinobactrie se multiplie plus lentement.
En effet, la concentration en biomasse volue peu pendant la deuxime
phase (Strub, 2009). Cette priode sapparenterait une priode de
diauxie (Narang et Pilyuing 2006). Il sagirait dun temps dadaptation du
microorganisme un nouveau substrat, le glucose, suite lpuisement
des acides amins (Strub, 2009).
Des tudes futures sur des mcanismes de rgulation de la formation
de la biomasse fourniront des informations importantes qui permettront
de dfinir des milieux de culture et des conditions optimales de
fermentation. Toutefois, ces propositions peuvent servir de base
dautres tudes prcises et quantitatives sur ce microorganisme.
5.- Rfrences bibliographiques

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