PRCTICA No.

3: Preparacin de medios de cultivo, medios

selectivos y diferenciales

Autores y cdigos

Fecha: 18/08/2016

Objetivo:
Reconocer los diferentes medios de cultivo existentes para el crecimiento de microorganismos,
aplicando los conceptos bsicos de nutricin y preparacin de los mismos, adems fortalecer
en el estudiante las competencias necesarias antes durante y despus de la preparacin de un
medio de cultivo.

De los medios de cultivo suministrados por su tutor, registre la informacin solicitada y prepare
el medio de cultivo.
Nombre del medio de cultivo: Agar MRS (de Man, Rogosa and Sharpe)
Forma de preparacin: Despus de hecho las clculos se pesa 3,3 g de agar MRS en un recipiente
de plstico y en una probeta se llena 50 ml de agua destilada; los 3,3 gramos de agar MRS, y se
adicionan en un frasco esmerilado junto con los 50 ml de agua destilada y un agitador magntico,
se tapa medio flojo el frasco y se pone en una plancha agitadora a 200 RPM y 200 c hasta que
ebulle.
Composicin (g/L):Extracto de carne 8g, Extracto de levadura 4g, Glucosa 20g, Monoleato de
sorbitn 1 ml, Fosfato, dipotsico 2g, Acetato de sodio 5g, Citrato de amonio 2g, Sulfato de
magnesio 0.2g, Sulfato de manganeso 0.05g y Agar 13g
66 g/L
Clculos:
(66 g/ml de MRSx50 ml)/(1000 ml)=3,3 g de MRS

Nombre del medio de cultivo: agar MacConkey

Forma de preparacin: Despus de hecho las clculos se pesa 33,75 g de agar MacConkey en un
recipiente de plstico y en una probeta se llena hasta 675 ml de agua destilada; los 33,75 gramos
de agar MacConkey, y se adicionan en un frasco esmerilado junto con los 675 ml de agua destilada
adems se adiciona 10,8 g de agar-agar y un agitador magntico, se tapa medio flojo el frasco y se
pone en una plancha agitadora a 200 RPM y 200 c hasta que ebulle.
Composicin (g/L): Peptona 17,0 g/l, Pluripeptona 3,0 g/l, Lactosa 10,0 g/l, Mezcla de sales biliares
1,5 g/l, Cloruro de sodio 5,0 g/l, Agar 13,5 g/l, Rojo neutro 0,03 g/l y Cristal violeta 0,001 g/l.
Clculos: 45 cajas x 15 ml= 675 ml
(50 g/ml de MacConkey x 675 ml)/(1000 ml)=33,75 g de MacConkey
(16 g/ml de agar-agar x 675 ml)/(1000 ml)=10,8 g de agar-agar

Nombre del medio de cultivo: Vogel Johnson

Forma de preparacin:Despus de hecho las clculos se pesa 26,1 g de agar en un recipiente de
plstico y en una probeta se llena hasta 450 ml de agua destilada; los 26,1 gramos de agar vogel
johnson, y se adicionan en un frasco esmerilado junto con los 675 ml de agua destilada adems se
 DISCUSIN PREPARACIN MEDIOS DE CULTIVO:

DISCUSIN PREPARACIN MEDIOS DE CULTIVO

Es importante saber la cantidad que se va a preparar de medio de cultivo, para no desperdiciar

ya que estos medios son costosos adems tener en cuenta la relacin de preparacin en
gramos/ litros para que a la hora de servir en la caja petri o en el tubo quede bien gelificado
nuestro medio para su uso.

IMAGEN DEL MEDIO FUNDAMENTO DEL MEDIO EXPLICACIN DE LOS

CON CRECIMIENTO RESULTADOS QUE
MICROBIOLGICO SE ESPERAN OBTENER
EN EL CRECIMIENTO DE
LA CAJA TIPOS DE
COLONIAS, CAMBIOS DE
COLORACIN
AGAR XLD XLD Agar es un medio selectivo y La degradacin de los
(agar de xilosa, lisina, de diferenciacin. Contiene carbohidratos presentes
desoxicolato) extracto de levadura como fuente en el medio (xilosa,
de nutrientes y vitaminas. Utiliza lactosa y sacarosa)
el desoxicolato de sodio como genera la produccin de
agente selectivo y, por cido haciendo virar el
consiguiente, inhibe los indicador (rojo fenol) de
microorganismos gram positivos. rojo a amarillo.
La xilosa se incorpora en el
medio dado que la fermentan
prcticamente todos los
entricos.
La lisina se incluye para permitir
Xiomara Rodrguez

AGAR MAC CONKEY
( mezcla de peptona,
lactosa, cloruro de sodio,
sales biliares, rojo neutral y
agar.)
AGAR VOGEL
JOHNSON
(Tripteina, extracto de
levadura, manitol, fosfato
dipotsico, cloruro de litio,
glicina, rojo de fenol, agar)
la diferenciacin del grupo
Salmonella de los organismos no
patgenos;sin lisina, Salmonella
fermentara rpidamente la xilosa
y no se distinguira de las
especies no patgenas.
Para evitar el cambio similar en
los organismos coliformes
positivos a la lisina, se aaden
lactosa y sacarosa para producir
cido en exceso.
Este medio se utiliza para el Por fermentacin de la
aislamiento de bacilos Gram lactosa, disminuye el pH
negativos de fcil desarrollo, alrededor de la colonia.
aerobios y anaerobios Esto produce un viraje del
facultativos.En el medio de color del indicador de pH
cultivo, las peptonas, aportan los (rojo neutro), la absorcin
nutrientes necesarios para el en las colonias, y la
desarrollo bacteriano, la lactosa precipitacin de las sales
es el hidrato de carbono biliares.
fermentable, y la mezcla de sales Los microorganismos no
biliares son los agentes fermentadores de lactosa
selectivos que inhiben el producen colonias
desarrollo de gran parte de la incoloras.
flora Gram positiva.
En el medio de cultivo, la triptena Los estafilococos
y el extracto de levadura aportan coagulasa positivo,
los nutrientes necesarios para el fermentan el manitol,
adecuado desarrollo bacteriano. produciendo la
El manitol es el hidrato de acidificacin del medio y
carbono fermentable. El telurito el viraje del indicador de
de potasio, el cloruro de litio y la pH al color amarillo, y
alta concentracin de glicina tambin reducen el telurito
inhiben el desarrollo de la flora a teluro observndose
habitual de algunas especies de como colonias de color
microorganismos Gram positivos negro.
y negativos, permitiendo el
crecimiento selectivo de
estafilococos. El rojo fenol es el
indicador de pH y el agar es el
agente solidificante. Es
diferencial por la fermentacin de
manitol y reduccin de telurito a
teluro. Los estafilococos
coagulasa positivo, fermentan el
manitol, produciendo la
acidificacin del medio y el viraje
Xiomara Rodrguez
 del indicador de pH al color
amarillo, y tambin reducen el
telurito a teluro observndose
como colonias de color negro.
AGAR TRIPTICASA La triptena y la peptona de soya Lo esperado es que
DE SOYA. aportan nutrientes ricos en ocurra una hemlisis la
pptidos, aminocidos libres, cual se puede observar de
(tripteina, peptona de soya, bases pricas y pirimdicas, tres maneras:
cloruro de sodio y agar) minerales y vitaminas. La 1. Alfa-hemlisis:
peptona de soja aporta tambin decoloracin verdosa de
carbohidratos que estimulan el medio
crecimiento de muchos 2 .Beta-hemlisis: zona
microorganismos. El cloruro de clara alrededor de la
sodio mantiene el balance colonia
osmtico. 3. Gamma-hemlisis: sin
Adicionado con 5-10 % sangre , cambio
se logra un medio enriquecido y
adecuado para observar
reacciones de hemlisis.
Cuando se prepara como agar
chocolate, es til para el cultivo
de Neisseria spp., Haemophilus
influenzae y microorganismos
exigentes similares. Incubado en
forma anaerobia, permite el
crecimiento de Clostridium spp. y
anaerobios NO esporulado
AGAR PDA el agar dextrosa y papa es un Las levaduras se
medio utilizado para el cultivo de observan como colonias
hongos y levaduras; la infusin de color crema o blanco y
de papa promueve un los hongos crecen como
crecimiento abundante de hongos colonias difusas y de
y levaduras y el agar es varios colores.
adicionado como agente
solidificante.
La base del medio es altamente
nutritiva y permite la esporulacin
y la produccin de pigmentos en
algunos dermatofitos.
AGAR NUTRITIVO Medio de cultivo utilizado para Por ser un medio nutritivo,
(pluripeptona, extracto de propsitos generales, para el se esperara encontrar
carne, cloruro de sodio y aislamiento de microorganismos gran crecimiento de
agar) poco exigentes en lo que se colonias.
refiere a requerimientos
nutritivos.
Por las caractersticas de sus
componentes es un medio usado
Xiomara Rodrguez
 para el cultivo de
microorganismos poco exigentes
en sus requerimientos
nutricionales. No contiene
inhibidores del desarrollo
bacteriano. La pluripeptona es la
fuente de carbono y nitrgeno
para el desarrollo bacteriano. El
agregado de cloruro de sodio
permite el enriquecimiento con
sangre de carnero u otras
sustancias para facilitar el cultivo
de microorganismos exigentes.

DISCUSIN DE LOS RESULTADOS QUE SE OBTIENEN SEMBRAR EN LOS MEDIOS DE

CULTIVO

los medios de cultivo selectivos y diferenciales en su efecto son muy tiles e importantes a la
hora de llevar a cabo una investigacin para aislar un organismo microbiano especfico debido a
que las caractersticas de cada compuesto ya sean como inhibidores en el medio de cultivo
ofrecen indicadores de fermentacin, acidificacin o alcalinizacin del medio que permiten
identificar el organismo microbiano.

CONSULTA

Microorganism Interpretacin del

Medio de o (s) Composicin (g/L) Forma de preparacin medio
cultivo objeto (Imagen del medio
de cultivo con el
crecimiento
microbiolgico)
Salmonella Spp. Peptona 5g Suspender 46g del polvo en un litro
Sales biliares 1g de agua purificada. Mezclar
Carbonato de Calcio 10g vigorosamente, calentar con
Caldo Tiosulfato de sodio 30g agitacin frecuente, y llevar a
Tetrationato. ebullicin para disolucin total.
Enfriar a 45 Celsius. Agregar 20 ml
de solucin iodada. Mezclar y
distribuir. No esterilizar por
autoclave.

Xiomara Rodrguez
 Salmonella thyphi Extracto de carne 5,0 g
Digerido pancretico de
casena 5,0 g
Agar Bismuto
Digerido pptico de tejido
Sulfito.
animal 5,0 g
Dextrosa 5,0 g
Fosfato de sodio 4,0 g
Sulfato ferroso 300,0 mg
Indicador de sulfito de bismuto
8,0 g
Agar 20,0 g
Verde brillante 25,0 mg
Staphylococcus Digerido pancretico de
aureus casena 10,0 g
Extracto de carne 5,0 g
Agar Baird Parker. Extracto de levadura 1,0 g
Cloruro de litio 5,0 g
Agar 20,0 g Glicina 12,0 g
Piruvato de sodio 10,0 g
Escherichia coli y deTriptosa 5.0 g, Cloruro de
los coliformes totales
sodio 5,0 g, Sorbitol 1.0 g,
en alimentos Triptofano 1.0 g, Fosfato di
Caldo LMX- hidrgeno di potasio 2.7 g,
Fluorocult. fosfato di-hidrogeno potasio
2.0 g, Lauril sulfato de sodio
sal 0.1g, 5 Bromo 4 Cloro 3
indolyl Beta D-
galactopiranosida (X-GAL)
0.08g, 4 Metil umbeliferil B-
D-glucoronide (MUG) 0.05 g,
1 isopropil B-D-1-tio-
galactoriranoside (IPTG) 0.1g.
Agar Nutritivo. microorganismos poco Pluripeptona 5g
exigentes en sus Extracto de carne 3g
requerimientos Cloruro de sodio 8g
nutricionales Agar 15g
Suspender los ingredientes en el
agua destilada. Calentar agitando
frecuentemente y dejar hervir no
ms de 1 a 2 minutos. Evitar el
sobrecalentamiento. Enfriar entre
50C y 55C, mezclar suavemente
para que se disperse el precipitado,
colocar 20 mL de medio por cada
placa y dejar solidificar. Este medio
no puede ser esterilizado en
autoclave por lo que debe utilizarse
el mismo da de su preparacin.
Suspender los ingredientes en el
agua destilada. Calentar agitando
frecuentemente y dejar hervir
durante 1 minuto para disolver
completamente. Esterilizar en
autoclave a 121C (15 lb de presin)
durante 15 minutos. Enfriar entre
45C y 50C y agregar 10 mL de
solucin de telurito de potasio al 1%
esterilizado por filtracin y 50 mL de
una emulsin de yema de huevo.
Mezclar completa y suavemente,
colocar 20 mL de medio por cada
placa y dejar solidificar. Para
preparar la emulsin de yema de
huevo se debe desinfectar la
superficie de la cscara, romper la
misma aspticamente y separar las
yemas intactas en un cilindro
graduado estril y diluir al 50% en
solucin salina estril. Las placas
preparadas deben ser utilizadas
dentro de las siguientes 24h.
Una vez realizados los clculos
para el agar deshidratado y el agua,
la preparacin homogeneizada se
lleva a ebullicin y posteriormente
se lleva a esterilizacin a 121 C, se
deja solidificar en el tubo o se sirven
en cajas Petri, posteriormente se
conservan en temperaturas de
refrigeracin.
Suspender 31 g de polvo por litro de
agua destilada. Mezclar y dejar
reposar 5 minutos. Calentar
suavemente agitando y hervir 1 o 2
minutos hasta su disolucin.
Distribuir y esterilizar a 121C
durante 15 minutos
Xiomara Rodrguez
Caldo BHI (Infusin Amplia variedad de Infusin de cerebro y corazn Suspender 37 g del medio en un litro
Cerebro Corazn). tipos de organismos, de agua purificada. Calentar con
de (slidos) 8,0 g
incluidos las bacterias, agitacin suave hasta su completa
Digerido pptico de tejido
levaduras y hongos disolucin y hervir durante un
animal 5,0 g
filamentosos minuto. Dispensar en tubos de
Digerido pancretico de
Estreptococos vidrio, tapar y esterilizar en
casena 16,0 g
Neumococos autoclave a 121 O C (15 libras de
Cloruro sdico 5,0 g
Meningococos presin) durante 15 minutos
Glucosa 2,0 g
Fosfato disdico de hidrgeno
2,5 g
Agar 13,5 g
Agar TSI (Agar Enterobacterias Extracto de Carne 3 g Suspender 62,5 g del polvo por litro
Hierro Tres Pluripeptona 20 g Cloruro de de agua destilada. Mezclar bien y
Azcares). sodio 5 g Lactosa 10 g calentar con agitacin frecuente,
Sacarosa 10 g Glucosa 1 g hervir 1 o 2 minutos hasta disolucin
Sulfato de hierro y amonio 0.2 total. Llenar hasta la tercera parte de
g Tiosulfato de sodio 0.2 g los tubos de ensayo. Esterilizar a
Rojo de fenol 0.225 g Agar 13 121C por 15 minutos. Enfriar en
g pico de flauta profundo.

Agar LIA (Agar Microorganismos, Peptona de gelatina 5g Suspender 35 g del medio

Lisina Hierro). especialmente Extracto de levadura 3g deshidratado en un litro de agua
Salmonella spp Glucosa 1g Lisina 10g Citrato destilada. Dejar embeber unos 15
de hierro y amonio 0.5g minutos. Calentar cuidadosamente,
Tiosulfato de sodio 0.04g agitando con frecuencia y hervir
Prpura de bromocresol 0.02g durante un minuto hasta la
Agar 15g disolucin completa. Distribuir y
esterilizar a 121C durante 15
minutos. Enfriar en pico de flauta
dejando un fondo vertical apto para
la puncin.
Agar Papa Candida albicans, Agar 15.0 Rehidratar 39 g del medio en un litro
Dextrosa (PDA). Saccharomyces Dextrosa 20.0 de agua destilada. Reposar 10 a 15
cerevisiae Infusin de papa 4.0 minutos. Calentar agitando
Trichophyton frecuentemente hasta el punto de
mentagrophytes ebullicin durante 1 minuto para
Aspergillus niger disolverlo por completo. Esterilizar
en autoclave a 121C (15 lbs de
presin) durante 15 minutos. Enfriar
aproximadamente a 45C. Vaciar de
acuerdo a la tcnica a seguir en
cajas de Petri estriles
Agar EMB (Eosina Aislamiento selectivo Peptona 10g Suspender 36 g del polvo en un litro
- Azul de Metileno - de bacilos Gram Lactosa 5g de agua destilada. Reposar 5
Lactosa). negativos. Permite el Sacarosa 5g minutos; mezclar, calentando a
desarrollo de todas las Fosfato dipotsico 2g ebullicin durante 1 o 2 minutos
especies de la familia Agar 13.5g hasta su disolucin. Esterilizar en
Enterobacteriaceae Eosina 0.4g autoclave a no ms de 121C
Azul de metileno 0.065g durante 15 minutos. Enfriar a 45C y
distribuir agitando suavemente.

Agar Cetrimide Pseudomonas Peptona de gelatina 20g Suspender 45,3 g del polvo por litro
aeruginosa y de otras Cloruro de magnesio 1.4g de agua destilada. Agregar 10 ml de
especies del gnero. Sulfato de potasio 10g glicerina. Dejar reposar 5 minutos.
Agar 13.6g Calentar agitando frecuentemente y
Cetrimida 0.3g hervir durante 1 minuto. Distribuir en
tubos o frascos y esterilizar en
autoclave 15 minutos a 121C.

Xiomara Rodrguez
Agar Salmonella- Salmonella spp. y de Pluripeptona 5g
Shigella algunas especies de Extracto de carne 5g
Shigella spp Lactosa 10g
Mezcla de sales biliares 8.5g
Citrato de sodio 8.5g
Tiosulfato de sodio 8.5g
Citrato frrico 1g
Agar 13.5g
Verde brillante 0.00033g
Rojo neutro 0.025g
Suspender 60 g del polvo por litro de
agua destilada. Reposar 5 minutos y
mezclar hasta homogeneizar.
Calentar a ebullicin durante 2 o 3
minutos. NO ESTERILIZAR EN
AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50C y
distribuir unos 20 ml por placa.
Secar la superficie del medio unos
minutos en la estufa.

Agar MRS Lactobacilos y otras Extracto de carne 8g Suspender 64 g del medio en un litro
bacterias cido lcticas Extracto de levadura 4g de agua destilada. Reposar 5
Glucosa 20g minutos y mezclar calentando a
Monoleato de sorbitn 1ml ebullicin durante 1 2 minutos.
Fosfato dipotsico 2g Esterilizar en autoclave durante 15
Acetato de sodio 5g minutos a 121 C.
Citrato de amonio 2g
Sulfato de magnesio 0.2g
Sulfato de manganeso 0.05g
Agar 13g

BIBLIOGRAFA
Agar XLD En Lnea. Disponible en: https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8783 Consultado
Agosto 22 de 2016. 13:17.

Mac Conkey Agar. En Lnea. Disponible en: http://www.bd.com/resource.aspx%3FIDX%3D8770

Consultado Agosto 22 de 2016 13: 29.

Agar VogelL Johnson En Lnea. Disponible en:

http://www.britanialab.com/productos/308_hoja_tecnica_es.pdf Consultado Agosto 22 de 2016 18:35.

Agar PDA En Lnea. Disponible en: http://www.electronic-

systems.com.mx/pdf/AGAR%20DEXTROSA%20Y%20PAPA.pdf

Agar Salmonella-Shigella Disponible en:

https://microbeblog.org/2016/05/09/know-your-culture-a-quick-reference-guide/

Xiomara Rodrguez
DISCUSIN DE LOS RESULTADOS QUE SE OBTIENEN SEMBRAR EN LOS MEDIOS DE
CULTIVO

IMAGEN DEL MEDIO Resultado

CON CRECIMIENTO
MICROBIOLGICO

AGAR XLD se observa que hubo un crecimiento de

(agar de xilosa, lisina, desoxicolato) forma masiva, se observan colonias
color crema rojizo, y segn el medio
podemos deducir que es un gram
negativo.

AGAR MAC CONKEY Se observa un crecimiento notorio de

(Mezcla de peptona, lactosa, cloruro de colonias de una tonalidad crema rojizas
sodio, sales biliares, rojo neutral y agar.) segn el medio se puede deducir que
nuestro microorganismo es un bacilo
gram negativo.

AGAR VOGEL JOHNSON Segn la literatura consultada, se

(Tripteina, extracto de levadura, manitol,
fosfato dipotsico, cloruro de litio, glicina,
rojo de fenol, agar)
esperaba obtener un color amarillo en la
formacin de colonias, debido a la
fermentacin de manitol producida por
estafilococos, sin embargo se observa
un crecimiento de colonias color crema.

Xiomara Rodrguez
 AGAR TRIPTICASA DE SOYA.
(tripteina, peptona de soya, cloruro de
sodio y agar)
Se observa un crecimiento de colonias
color crema.
En la zona del crecimiento se observa
decoloracin verdosa del medio,
comparando con la literatura sera un
Alfa-hemlisis (reduccin de la
hemoglobina de los glbulos rojos a
metahemoglobina en el medio)

Agar PDA No se obtuvo crecimiento de hongos

AGAR NUTRITIVO Se observa un crecimiento de colonias

(pluripeptona, extracto de carne, cloruro color crema y amarillas en gran
de sodio y agar) cantidad.
La muestra que se utiliz fue frappe

Xiomara Rodrguez
Xiomara Rodrguez