APONTAMENTOS

TCM
BIOCELL
 ndice
Mdulo II - Clulas
II. 3 Membranas.....................................................................1

II. 4.3 Checkpoint G1, Replicao do DNA...........................10

II. 4.4 Checkpoints G2-M, M-Cdk e Mitose............................14

II. 5.1 Organelos Celulares....................................................22

II. 5.2 Estrutura Nuclear. Processos Nucleares I.................30

II. 5.3 Processos Nucleares II...............................................37

II. 6.1 Transporte Nuclear;Citoplasma..................................48

II. 6.2 Traduo Proteica e Modificaes Ps-Translacionais...54

II. 6.3 Via Secretria e Organelos Associados.....................61

II. 6.4 Via Endoctica e Organelos Associados.....................74

Mdulo III - Sinalizao
III. 7.1 Estratgias e Vias de Sinalizao. Recetores..........85

III. 7.2 Recetores e Protenas G............................................95

III. 7.3 Recetores e Tirosinas Cinases, TGF, GTPases.......105

Mdulo IV - Comportamento Celular

IV. 8.1 Mobilidade Celular e Quimiotaxia.............................116

IV. 8.2 Diferenciao Celular................................................122

IV. 8.3 Apoptose....................................................................129

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3. Membranas
Membranas so barreiras seletivamente permeveis entre dois compartimentos essenciais vida. As
membranas so compostas por lpidos e protenas.

Tipos de membranas:
- Membrana plasmtica
- Intracelular (organelos)

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Modelo do mosaico fluido
Em 1972, Singer e Nicholson propuseram um novo modelo de organizao membranar, o modelo do mosaico
fluido:
Bicamada lipdica (lipid bilayer) com 5nm de espessura
Membrana um mosaico fluido de lpidos e protenas (fluidez a facilidade com que as molculas
lipdicas se movem no plano da bicamada)
Lpidos membranares so anfipticos: contm um grupo hidroflico e um grupo hidrofbico.
Protenas membranares: perifricas e integrais.
Protenas e lpidos orientados em 2D (o meio aquoso envolvente, interior e exterior clula, previne
que os lpidos da membrana escapem da bicamada, no entanto nada impede que estas molculas se
movam e troquem de lugares dentro do plano da bicamada)
Lpidos e protenas interagem no covalentemente (interaes do tipo hidrofbicas)

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Novo Modelo Membranar
Agora h um novo modelo. O que novo neste modelo?
A densidade de protenas transmembranares muito mais alta do que inicialmente prevista (cerca de
50% da massa membranar total)
H heterogeneidade lateral nas membranas. Isto significa que os fosfolpidos e os lpidos em cada uma
das monocamadas podem mover-se lateralmente e formar estruturas chamadas domnios membranares, um dos
mais conhecidos so os rafts (domnios membranares ricos em glicerol e esfingolpidos - elevada lipidez, que
esto envolvidos em sinalizao e outros eventos celulares)
Prev a existncia de interaces ocasionais entre lpidos e protenas
As membranas so curvas
Existncia de fases lipdicas (ordenadas, lquidas ou slidas)
Mobilidade dos lpidos em trans (flip-flop), ou seja, os lpidos de uma monocamada podem translocar-se
para outra monocamada. Este flip-flop catalisado pela enzima scramblase. Ex. Acontece no caso da
fosfatidilserina (componente dos fosfolpidos) que se encontra na monocamada interior da membrana
plasmtica, quando a clula entra em apoptose, a fosfatidilserina translocada para a monocamada externa da
clula (forma de identificar clula apopttica)

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Lpidos Membranares
Grande diversidade: h milhares de lpidos membranares diferentes nas clulas (no h metodologia que
os quantifique a todos, isto porque muitos dos lpidos so minoritrios e, portanto, estas metodologias no tm
sensibilidade suficiente para os detetar e quantificar - a tcnica shotgun lipidomics de espetometria de massa
consegue identificar volta de 500 lpidos)
Lpidos tm diferentes grupos polares e/ou caudas hidrofbicas (cidos gordos), permitindo gerar
diversidade.
Distribuio dos lpidos em diferentes organelos heterognea (composies lipdicas diferentes da
membrana conferem identidade aos organelos - ex. membrana plasmtica muito rica em colesterol, enquanto na
membrana de um peroxissoma o colesterol quase inexistente)
Composio lipdica caracterstica de cada tipo de membrana.
Podem estar envolvidos em sinalizao celular.
Adoo de fases distintas, slida (mais rgida, no permite sinalizao) e fluida (permite sinalizao),
caracterizadas por diferentes arranjos espaciais e liberdade de movimento em relao aos lpidos adjacentes.

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Tipos de lpidos membranares:
1. Fosfolpidos (lpidos mais abundantes na membrana celular, ex. glicerofosfolpidos)
2. Esteris (ex. colesterol)
3. Esfingolpidos

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Estrutura qumica dos diferentes tipos de lpidos
Os glicerofosfolpidos so o principal componente das membranas celulares e so caracterizados por terem
um glicerol (lcool) e 3 grupos hidroxilo (2 deles formam comunicao com os cidos gordos sn1 e sn2, o outro
liga-se a um grupo fosfato - sn3 - este fosfato pode ligar-se a diferentes molculas e da haver a fosfatildilcolina, a
fosfatidilnolamina ou a fosfatidilserina). No caso de no haver duplas ligaes entre os carbonos a cadeia aclica
muito organizada (ou seja, os cidos gordos apresentam-se em linha reta); quando h estas duplas ligaes ocorre
um desarranjo e a cadeia aclica j no to organizada, fazendo uma espcie de joelho dobrado (ver imagem).
Isto muito importante para as propriedades da membrana.

Os esfingolpidos dividem-se em esfingomielina e glicoesfingolpido. A parte inferior (cidos gordos) muito

similar nos dois casos. Na esfingomielina h uma ligao entre o grupo fosfato e a colina (grupo polar), nos
glicoesfingolpidos a poro inferior est ligada a um acar (da o nome).

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 O colesterol tem uma composio lipdica completamente diferente dos outros e um lpido muito rgido.
Como o nico tipo de esteris no corpo humano, ao ingerirmos esteris vegetais ocorre competio com o
colesterol em termos de absoro no intestino, por isso que recomendado comer vegetais quando a dieta
rica em gordura.

Influncia da composio lipdica na estrutura membranar

Devido grande variabilidade de lpidos que existem, a composio lpidica altera a estrutura e propriedades
da membrana relativamente a:
Fluidez
Espessura
Formao de domnios
Forma dos lpidos
Curvatura
Presso Lateral
Carga
Interdigitao

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Fluidez
Lpidos insaturados (monossaturados ou polissaturados 1 ou mais ligaes duplas) originam uma
bicamada mais desorganizada e fluida.
Lpidos saturados (ligao simples) levam a uma organizao total da bicamada, o que a torna menos
fluida e permite a insero de colesterol (intercala-se nas duas bicamadas), que vai reduzir a fluidez da
membrana, aumentando a sua rigidez e organizao.

Na imagem direita, membrana pouco fluida porque tem 2 tipos de fosfolpidos mais o colesterol intercalado.

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 Slide 11
Espessura
A espessura das membranas varia com o comprimento das caudas dos lpidos.
Fosfolpidos com cido gordos (caudas) muito longos (depende do n de carbonos) originam membranas
espessas.

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Formao de Domnios
A formao de microdomnios resultado da segregao (separao) lateral de lpidos, principalmente de
esfingolpidos e colesterol, dando origem aos domnios rafts ou jangadas os mais estudados, tm
propriedades biofsicas diferentes dos outros domnios, so muito organizados, com alguma rigidez e resultam da
movimentao lateral dos lpidos. Em termos de funo importante porque permite a segregao de recetores
das protenas transmembranares que tenham afinidade para estes lpidos, possibilitando que haja sinalizao,
entre outros eventos. (ex. no complexo de Golgi permite o sorting de diferentes protenas).
Esta formao de domnios altamente dinmica e reversvel.

Forma dos Lpidos

A forma dos lpidos determinada pelo racio entre o tamanho da cabea lipdica e a rea ocupada pelas
caudas hidrofbicas.
Os lpidos podem ter vrias formas. A fosfatidilcolina (um grupo colina e duas cadeias aclicas) tem uma forma
cilndrica. Se este lpido perder um cido gordo e ficar s com uma cadeia, assume uma forma de cone invertido.
Se tivermos uma cabea polar mais pequena do que os fosfolpidos a temos a forma cnica.

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Curvatura
Havendo a possibilidade de os lpidos terem forma cnica ou cnica invertida h curvaturas na clula. Se
tivssemos s fosfolpidos no conseguiramos ter membranas redondas.
Assim, a curvatura das membranas induzida pela forma dos lpidos:
Curvatura negativa forma cncava
Curvatura positiva forma convexa

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 Presso Lateral
Uma elevada presso lateral causada pela repulso do ncleo hidrofbico da membrana, sobretudo quando
h insero de lpidos cnicos ou cnicos invertidos, o que leva a um aumento da presso lateral.

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Carga
A carga superficial membranar determinada pelas propriedades qumicas dos lpidos, se tivermos uma parte
polar (cabea) com uma carga negativa a membrana tem carga negativa; se no tiver carga, a membrana tem
carga neutra.

Interdigitao
A interdigitao provocada por assimetria nas caudas lipdicas, que se intercalam: quanto maior a
interdigitao menor a espessura da membrana.
O fosfolpido pode ter dois cidos gordos de tamanhos diferentes, de modo que a membrana se organiza de
forma a haver uma interdigitao, o cido gordo mais longo emparelha com o mais curto do lpido oposto e vice-
versa.

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A composio da membrana plasmtica e das membranas dos diversos organelos muito diferente (o que
confere identidade aos organelos). Assim:
Membrana plasmtica fosfolpidos e esfingolpidos (h diferenas entre monocamada interna e externa
da bicamada, ex. fosfatidilserina s aparece na monocamada interna, fosfatidilinositol e diacilglicerol envolvidos
na sinalizao/rearranjo do citoesqueleto de actina)
Membrana mitocndria lpido muito especfico, a cardiolipina
Membrana via exoctica diferentes fosfatidilinositides

Slide 16
Assimetria das bicamadas
A bicamada lipdica no simtrica. Por exemplo, na membrana plasmtica:
Colesterol presente na monocamada externa e monocamada interna
Fosfatildilcolina maioritariamente na monocamada externa
Fosfatidilserina monocamada interna
Esfingomielina e glicoesfingolpidos monocamada externa
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 No retculo endoplasmtico h uma maior homogeneidade de lpidos. Algum colesterol, mas menos do que na
membrana plasmtica, e alguns lpidos que no aparecem na membrana plasmtica.

Slide 17
A assimetria das bicamadas e a formao destes domnios membranares (mais conhecidos como lipid rafts)
importante para a sinalizao.
Um exemplo, ras signaling: O ras uma protena que tem duas cadeias aclicas (caudas), o que permite a
interao com as membranas. Quando h segregao lateral dos lpidos (rafts), h uma promoo de uma
sinalizao sustentada eficaz.

Slide 18
Principais funes da membrana celular
1.Barreira mecnica
2.Regulao das trocas com o exterior
3.Transporte vesicular

Slide 19 e 20
1.Barreira mecnica
Separao da clula com o meio extracelular
Compartimentalizao celular (clula tem organelos rodeados de membrana)
o Permite gerao de diferentes compartimentos (organelos).
o Maioria das reaces bioqumicas ocorre em membranas (transporte, sinalizao).
o Permite especializao de funes.
o Aumenta a eficcia bioqumica, restringe a disseminao de produtos reativos (ex. controlo das
espcies reativas de oxignio produzidas na mitocndria)
o Organelos mais comuns em clulas animais: ncleo, RE, complexo de Golgi, mitocndrias,
lisossomas, endossomas, peroxissomas, ribossomas livres.

Na imagem direita, clula epitelial, com domnio membranar apical, conhecido como
raft (enriquecido em colesterol e esfingolpidos), base lateral. A existncia destes dois
domnios membranares deve-se s tight-junctions (barreiras que evitam a difuso dos lpidos
do domnio apical para a base lateral).

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Slide 19, 21 e 22
2. Regula as trocas com o exterior
Trfego intracelualar (exocitose e endocitose)
Permeabilidade membranar (difuso versus transporte) a membrana semi-permevel, h molculas
que se difundem muito rapidamente, outras menos e h tambm o transporte endoctico e exoctico
o Depende do tamanho e da solubilidade em gorduras.
o Quanto mais hidrofbico mais permevel (molculas hidrofbicas difundem-se muito rapidamente e
de forma eficaz atravs das membranas, ex. O2, CO2, N2, hormonas)
o Molculas pequenas ou polares difundem-se menos que as hidrofbicas (ex. glicerol, ureia)
o Membranas so impermeveis a ies (existem canais inicos na membrana, dependentes de ATP
transporte ativo, ex. transporte de sdio para o exterior e potssio para o interior da clula ligao
do sdio ao canal, alterao da conformao que leva libertao do sdio para o exterior, ligao
do potssio; h a criao de gradientes de ies).
o Necessidade de transportadores para compostos/molculas no permeveis.

Slides 23-26
3. Transporte vesicular
Existem vrios tipos de transporte:
atravs de poros (ex. entre o ncleo e o citosol)
contactos membrana a membrana (transmembrane transport)
transporte vesicular (via endoctica e exoctica)
Envolve sempre a formao de vesculas. Inicialmente h formao de uma vescula do organelo dador, que
transportada at ao organelo recetor, ocorre ento a fuso e libertao do contedo hormonal. Estas vesculas
transportam molculas solveis, de lmen para lmen. Na formao destas vesculas importante a forma dos
lpidos ser cnica ou cnica invertida para a formao da curvatura e separao do organelo dador.

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Via exoctica
Comea no RE, vai para o Golgi, late endosome ou vesculas secretoras que libertam o contedo hormonal
superfcie da clula.

Via endoctica
Transporte do exterior para o interior. Ligandos ligam-se aos recetores, havendo tambm processos no
mediados por recetores (ex. pinocitose), mas que envolve transporte vesicular

As membranas esto em constante remodelao para regenerar componentes da membrana que envelhecem,
havendo repetidamente endocitose e exocitose.

Todas as membranas so capazes de se fundir umas com as outras.

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 4.3 Checkpoint G1, Replicao do DNA
A quantidade de S-ciclina aumenta durante a fase G1, e depois associa-se
CDK. Quando o DNA est replicado, este complexo proteico vai ento estimular
a sntese de histonas e atuar na sntese do DNA, fosforilando as protenas que
so necessrias para a sntese do DNA (activando-as).
Histonas Fazem o enrolamento do DNA, permitindo que seja visvel ao
microscpio ptico; Permitem uma maior acuidade quando se d a separao
dos cromatdeos irmos).

Dupla cadeia de DNA

As cadeias parentais so anti paralelas:
uma orientada de 5-3
uma orientada outra 3-5.

Extremidade 5 Grupo fosfato

Extremidade 3 Grupo OH

As bases azotadas esto para dentro da dupla cadeia e os acares (DNA -

desoxirribose) e o grupo fosfato e OH esto virados para fora da cadeia.
A cadeia de DNA enrola-se sobre ela prpria.

Ligaes entre nucletidos

Adenina + Timina 2 pontes de hidrognio
Guanina + Citosina 3 pontes de hidrognio
(ligaes fracas h enzimas que abrem a dupla cadeia, para a replicar)

Replicao de DNA
A replicao do DNA d-se sempre no sentido 5 para 3, porque s se
conhecem DNA polimerases (enzima que adiciona novos nucletidos nova
cadeia) que atuam de 5 para 3. A DNA polimerase precisam de mais algumas
especificidades para poderem atuar (3OH livre).
A replicao do DNA semi-conservativa, conservando sempre uma das
cadeias moldes. Portanto, se houver erros iniciais e se no forem reparados,
estes vo sendo propagados para as geraes seguintes.
As helicases so protenas que se ligam ao DNA e, atravs da hidrlise do
ATP, vo fazendo a hidrlise das ligaes fosfodiester, abrindo a dupla cadeia de
DNA numa taxa de mil nucletidos por segundo. As helicases mantm a dupla
cadeia aberta, mas ligam-se apenas a uma delas, enquanto as cadeias vo sendo
sintetizadas.
Quando se abre a dupla cadeia de DNA, temos um molde, mas no temos
uma sequncia oligonucleotida, ou seja, no temos uma sequncia de nucletidos
inicial e por isso, esta tem de ser sintetizada. Isto porque, a DNA polimerase alm
de precisar de sintetizar no sentido 5-3 precisa tambm de um 3OH livre.
Para termos um 3OH livre: A protena DNAprimase sintetiza uma
sequncia de RNA iniciadora de 10 nucletidos (primer).

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 No 3OH livre vai ser inserido o novo nucletido complementar. O
desoxirribonucleotideo trifosfato (uma citosina) que vai ser adicionado, vai
estabelecer a ligao 5Fosfato ao 3OH do acar que j estava adicionado do
primer. Estabelece se assim a ligao fosfodiester, e depois desta estabelece-se a
ligao por pontes de hidrognio com a base complementar da cadeia de onze.

O primer de RNA e no de DNA, o que no faz muito sentido, pois no

fim este RNA vai ser removido, caso contrrio amos ter cadeias hibridas (com
RNA e DNA). No entanto, a DNA polimerase tambm tem a capacidade remover
nucletidos mal incorporados e h outras protenas que removem pequenos
oligonucletidos que esto inseridos incorrectamente na cadeia de DNA. Ou seja,
os primers de RNA vo ser reconhecidos como estranhos e vo ser removidos. Se
no fossem removidos, alm de termos timina teramos uracilo e amos ter uma
sequencia estranha e no se podia fazer a traduo.

Single-strand DNA binding proteins Protenas que se ligam ao DNA

em cadeia simples, frente da DNA polimerase; Libertam os nucletidos e
impedem que haja super enrolamentos no final da cadeia.

Slinding clamp adicionado DNA polimerase por hidrolise do ATP e

impede que o DNA polimerase saia da cadeia de DNA.

Forquilha de replicao Direo tomada pelo processo da sntese das

novas cadeias, quando a dupla cadeia abre. Existe uma direo para esquerda e
uma para a direita.

Origem de replicao Centro da abertura da cadeia; A replicao vai

ocorrer para os dois lados da linha.

Quando samos da mitose entramos em fase G1, dentro da clula no h

quase ciclinas nenhumas a serem produzidas, no havendo ento complexos CDK
dependentes de ciclinas a serem produzidos.
Est ativo o ultimo checkpoint (supostamente o primeiro check point,
entre a fase G1 e fase S) que ativa a juno de zonas especificas do DNA a uma
srie de protenas, formando o complexo pr replicativo, em que estas protenas
vo marcar a zona onde se inicia a replicao- a origem de replicao. Por cada
cadeia h varias zonas de origem de replicao sendo que toda a replicao
demora 9 horas, seno houvesse tantas origens demorava mais. Toda a
replicao inicia simultaneamente.
medida que isto ativo entramos na fase S iniciando o processo de pr-
iniciao, s-CDK ativa.
S-CDK Reconhece as protenas da zona de replicao e fosforila novas
protenas que vo substituir e marcar esta zona de replicao com uma srie de
protenas que formam o complexo de iniciao, em que ira efetivamente iniciar-
se a replicao do DNA.
Comea a abrir a dupla cadeia por ao das helicases, quando o complexo
de pr-iniciao sai, o DNA j no pode ser replicado nessa zona permitindo
assim que o DNA s possa ser replicado uma vez na mesma cadeia.

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 Depois de sair o complexo de pr-replicao, na origem, forma-se o
complexo de iniciao, junta se a helicase que abre a cadeia e a inicia-se a sntese
dos primers de RNA que iro promover a replicao.

Cadeia Lagging

A sntese da cadeia lagging descontinua, pois a cadeia molde comea

em 5 e a sntese feita no sentido 5-3 (o que corresponde ao sentido 3-5 da
cadeia molde).
Se a cadeia molde inicia em 5 ento por complementaridade de bases a
replicao feita no sentido 3-5, contrria ao suposto, ou seja, a replicao, uma
vez que ter de obedecer ao sentido de replicao (5-3), ser feita de forma
descontinua atravs dos fragmentos de okasaki.

Fragmentos de okasaki Sequncias de nucletidos da nova cadeia

entre os primers de RNA que marcam o local de incio da replicao.

So precisos vrios primers de RNA, distanciados entre 100 a 200 pares

de bases. Pensa se que ser o RNA a fazer de primer e depois se tudo correr
bem ele sai e substitudo por DNA (para sintetizar de 5-3).
Inicia a replicao junto forquilha, onde mete um primer e depois
outro primer mais a frente.
Os primers de RNA vo ser removidos pela enzima RNAase (que remove
RNA).
Polimerase de reparao Uma nova DNApolimerase que utilizando o
fragmento de okazaki que tem a extremidade 3OH livre, vai sintetizar os 10
nucletidos que faltavam do fragmento de okasaki que foi removido.

DNAligase Vai ligar o 3OH ao 5fosfato, utilizado ATP, e liberta ADP

(pois vai haver ligaes fosfodiester que no esto estabelecidas entre os
fragmentos).
Na zona 3 da cadeia lagging vai haver uma zona terminal que no tem
sitio para se ligar primer de RNA, vai portanto haver uma zona de DNA em
cadeia simples. Se esta zona terminal (zonas de sequncias repetitivas de
nucletidos) no for sintetizada, o DNA vai diminuindo de tamanho, os
cromossomas so cada vez mais pequenos, e a clula entra em apoptose
(controla o tempo de vida da clula).

Cadeia Leading

A sntese da cadeia leading continua, pois a cadeia molde comea em 3

e a sntese feita no sentido 5-3.
S precisando de 1 primer que se localizar junto origem de replicao.
Inicia a replicao na origem de replicao.

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 Em suma: a sntese de DNA comea no meio (origem de replicao) e
dirige se tanto para a direita como para a esquerda na direo das forquilhas de
replicao, assim para o lado que vem de 3-5 a sntese ser continua, pois feita
5-3 (complementaridade com a cadeia molde) mas a cadeia para o lado oposto
(outro lado da origem de replicao) j ter direo 5-3 e a replicao feita 3-
5 tendo por isso de ser descontinua e iniciando junto s forquilhas (adio de
primers). Na cadeia molde de baixo em espelho, uma vez que as cadeias so
antiparalelas. A direo de replicao mantm-se sempre: 5-3.

H vrias DNA polimerases a atuar (uma na leading e duas na legging)

DNApolimerase
Tem uma estrutura parece a mo direita (com polegar para cima), que
forma uma concha. Tem um local de adio de polimerizao, onde se estabelece
a ligao fosfodiester entre a cadeia que estava a ser sintetizada e o novo
nucletido. Esta ligao liberta pirofosfato.
Entra o novo nucletido, e a DNA polimerase muda de forma (o polegar
junta aos outros dedos) e ela vai reconhecer se o novo nucletido que se juntou
cadeia molde tem a conformao energeticamente favorvel para o DNA
continuar a ser replicado.
Quando a incorporao do nucletido no o correto, este fecho
mais lento pois energeticamente menos favorvel. Isto reconhecido pela
prpria DNA polimerase e o nucletido removido pelo local de exiting.
Na natureza e dentro da clula as adeninas, timinas, citosinas e guaninas
podem formar as formas tautomricas (alteraes das ligaes qumicas dentro
da molcula, por alteraes do ambiente celular), que provocam um
emparelhamento incorrecto (p.ex.: Adenina liga-se citosina). Isto reconhecido
no fecho da DNA polimerase (Energeticamente menos favorvel) e corrige o
erro.
DNA polimerase consegue corrigir os seus prprios erros. Esta
capacidade permite que s haja uma taxa de erro de 1 para 109.

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 4.4 Checkpoints G2/M, M-Cdk e Mitose
Em G2 vai haver verificao se esse DNA est bem replicado, havendo para tal um
checkpoint entre a fase G2 e a fase M. Nesse checkpoint vai-se verificar se a clula tem
contedo em organelos necessrio para que se v formar duas novas clulas e se o
contedo do DNA foi ou no bem replicado.
(Slide 2) O que vai acontecer na clula durante a fase G2 que a M-ciclina ou B-ciclina
vai aumentando em quantidade, isto , vai sendo expressa durante esta fase e medida
que expressa vai-se ligando cinase e por sua vez, ao ligar-se cinase, se ficar logo
ativa em G2 vai promover a mitose antecipadamente. Para que isso no acontea, a
ciclina B vai na mesma ser formada (ela j est completamente formada durante a fase
G2) mas a sua ao vai ser bloqueada pela ao da Wee1 Cinase. Isto permite que o tal
complexo esteja formado, mas apresentando o fosfato inibitrio.

Assim que os cromossomas estejam completamente condensados e se no houver erros

no DNA, a Cdc-25 fosfatase vai remover o fosfato inibitrio e inicia-se a fase M, ou seja,
a mitose. Por outro lado, quando h erros no DNA, vai ocorrer um processo semelhante
cascata do checkpoint em G1, ou seja, vai haver a ativao de uma srie de cinases, as
ATM/ATR e as Chk1/Chk2, iniciando-se exatamente o mesmo processo, em que a Chk2
uma vez ativada vai desfosforilar com protenas. Como tal, a Chk2, uma vez ativa vai
inibir a Cdc25, fosforilando-a e deste modo impede que o complexo se torne ativo. Deste
modo, o processo vai ser interrompido permitindo assim que seja reparado o DNA.
Assim que a reparao fica completa, o Cdc25 desfosforilado e reinicia-se a mitose. Se
no houver reparao neste checkpoint, normalmente a clula entra em apoptose ou
para o processo de replicao e fica parada passando a fazer parte do lixo txico que

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ns temos dentro dos nossos tecidos. No entanto, na maioria das vezes a clula
induzida a entrar em mitose.
Apesar de este checkpoint no estar totalmente conhecido, sabe-se que ele est ligado
p53 (tal como no 1 checkpoint). Dependendo do tipo de dano que existe no DNA pode
ser fosforilada a Cdc25 ou ativada a p53.
(Slide 3). Uma vez que vai ser formado o complexo ciclinaB/Cdk1, os cromossomas so
cada vez mais condensados, vai haver a quebra do invlucro nuclear j que este
invlucro tem que ser quebrado para que os cromossomas possam ir para os polos da
clula. Vai tambm haver uma reorganizao do retculo endoplasmtico e do aparelho
de Golgi que vai ser desagregado em vesculas, permanecendo ento em vesculas no
interior da clula durante esta fase para que depois possa voltar a ser reorganizado no
final da mitose. Vai haver ainda uma perda de adeso entre a clula que est a ser
replicada e a sua matriz extracelular, ou seja, o espao adjacente clula, de modo a
que ela possa aumentar em tamanho e vai haver por fim, uma reorganizao do
citoesqueleto com formao do fuso acromtico. Nesta fase, toda a clula est parada
em termos de transcrio de genes e expresso de protenas (tem que estar tudo
formado por esta altura) sendo que a M/Cdk vai fosforilar todas as protenas necessrias
a que estes passos aconteam de modo a que se forme o fuso acromtico e os
cromossomas fiquem alinhados na placa equatorial para que possam ser puxados para
os polos opostos.
Em relao condensao, para alm das histonas, existem outras protenas que
existem na condensao dos cromossomas, nomeadamente as coesinas (a verde no
slide) que so responsveis por manter os cromatdeos-irmos ligados entre eles.

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Posteriormente, entre a metfase e a anafase essas protenas so quebradas para que
possa haver a segregao dos cromossomas.

A replicao dos centrolos ocorre durante o ciclo celular, em que entre a fase G1 e a
fase S existe uma replicao semi-conservativa dos centrolos.
No incio da fase M, os centrossomas, que representam os centros organizadores dos
microtbulos separam-se, e vo permitir a adio e a remoo de -tubulina.
Durante a interfase os centrolos esto a replicar-se e ainda esto juntos e a partir do
momento em que se inicia a prfase, comea a haver a formao do fuso acromtico
por microtbulos que so emitidos pelos centrossomas, de forma a que os centrossomas
se comecem a separar das clulas, de forma a que quando se formam as duas clulas
finais no final da mitose, temos um centrossoma em cada uma das duas clulas para
depois se poder reiniciar o ciclo.
(Slide 4). Na prfase conseguimos observar o DNA a azul fluorescente, a zona da
formao dos microtbulos e dos centrossomas a verde, sendo possvel muitas vezes
observar na prfase mitocndrias e no interior do ncleo, o nuclolo (fundamental na
sntese proteica). Nesta altura conseguimos observar a membrana nuclear, os
centrossomas a migrar para polos opostos das clulas e a comearem a emitir
microtbulos, que neste caso vo ligar os centrossomas membrana da clula.

(Slide 5). Na prometafase, atravs da fosforilao pela M-Cdk, vai haver a desagregao
do involucro nuclear, j que as protenas do involucro nuclear so fosforiladas,
desagregando-se e permanecendo em vesculas, h tambm a desagregao do retculo
endoplasmtico rugoso, que est associado membrana e fica armazenado em
vesculas. Todos estes organelos membranares ficam associados a vesculas no

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citoplasma de forma a puderem voltar a reorganizar-se no final da mitose. Havendo a
queda do involucro nuclear, os centrossomas j esto completamente em plos
opostos, com emisso de microtbulos para o centro da clula, os cromossomas
comeam a alinhar na placa equatorial (no entanto no esto completamente
alinhados). Pode-se tambm observar uma srie de fibras que vo representar as
protenas do cinetocoro que vo ter a funo de ligar os microtbulos do cinetocoro aos
centrossomas, de forma a que o alinhamento dos cromossomas na placa equatorial seja
total.
(Slide 6)(Contedos das aulas de motores moleculares e de citoesqueleto) Existem
vrios motores moleculares, as dneinas que se ligam ao polo positivo dos microtbulos
e se dirigem em direo ao polo negativo, sendo neste caso o polo negativo
representado pelos centrossomas. Tem de haver uma constante adio e remoo de
tubulina. Os microtbulos do fuso acromtico. Os microtbulos que esto num
centrossoma e que se cruzam no meio de um fuso so chamados de microtbulos
interpolares e possuem uma cinesina que os liga numa determinada zona, a cinesina-
14, que s possui uma cabea para se movimentar (existem outras cinesinas que
possuem duas cabeas para se movimentarem). A cinesina-14 representa a exceo nas
cinesinas, j que ela se vai ligar ao polo positivo, movimentando os microtbulos em
direo ao polo negativo, j que normalmente as cinesinas ligam-se ao polo negativo e
aumentam a movimentao de microtbulos para o polo positivo, que o que acontece
por exemplo com a cinesina-4, a cinesina-5 e a cinesina-10 que ligam os braos dos
cromossomas.
Como j tnhamos visto, nos centrossomas temos os microtbulos aster que saem em
direo membrana da clula, os microtbulos interpolares que empurram os
centrossomas para os polos opostos das clulas e ainda os microtbulos do cinetocoro
que vo puxar os cromossomas para o polo negativo. Destas foras todas, vai resultar a
instabilidade dinmica dos microtbulos, ou seja, vo estar sempre a aumentar e a
diminuir e por sua vez os motores moleculares vo estar sempre a ajudar nesse
movimento de aumento e diminuio. Neste caso, o objetivo da clula que os
cromossomas fiquem todos alinhados na placa equatorial e como tal as foras negativas
vo ter que ser iguais s foras positivas, ou seja, a adio de tubulina no terminal
negativo tem que ser igual remoo de tubulina no terminal positivo.
(Slide 7). O fuso acromtico forma-se completamente na metfase, em que os
cromossomas vo ficar completamente alinhados na placa equatorial, e como tal as
foras positivas e negativas tm que ser iguais para permitir este alinhamento e a fora
que faz a ligao dos microtbulos ao cinetocoro extremamente importante porque
essa que vai manter os cromossomas no meio da placa equatorial. Ento, se essa fora
comear a desaparecer comeamos ento a entrar na anafase e como tal os
cromossomas comeam a ser separados pelos cromatdeos-irmos. Na altura da
metfase temos tambm o fuso bipolar em que temos um centrossoma do lado e o
outro do outro, os microtbulos aster, os cromossomas esto alinhados na placa
equatorial ligados pelos microtbulos do cinetocoro e os microtbulos interpolares

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que vo contrariar estas foras de forma a que tudo isto se anule. Isto ocorre de tal
maneira, que enquanto os cromossomas no tiverem todos alinhados no possvel
iniciar-se a anafase, pelo que a anafase s se inicia a partir do momento em que eles
esto todos alinhados na placa equatorial e as foras exercidas pelos microtbulos so
todas anuladas.

Slide 7
(Slide 8) Este todo um processo que relativamente rpido, sendo que agora vamos
entrar na transio entre a metfase e a anafase, onde existe um checkpoint. Nesta
parte, vamos querer que as foras exercidas pelos microtbulos aumentem e que haja
uma destabilizao do fuso acromtico de forma a que os cromatdeos-irmos sejam
puxados para polos opostos. Isto permitido pela ativao do complexo promotor da
anafase (APC), sendo ento este complexo responsvel pela passagem da clula para a
anafase ou a sua permanncia em metfase.
(Slide 9) O que vai acontecer que a protena APC/C normalmente est inativa e a partir
do momento em que os cromossomas se alinham na placa equatorial, h como que uma
fora sensorial, que vai permitir a ligao de uma subunidade APC/C e como tal vai
ativ-la. Uma vez ativo, este complexo que j estava formado e que possui uma
separasse e uma securina e que anteriormente mantinha a unio dos cromatdeos-
irmos pela securina, mas a partir do momento em que o APC/C ficou ativado pela
Cdc20, ele vai funcionar como uma ubiquitina ligase, adicionando ubiquitinas a uma
dada protena e fazendo com que ela seja eliminada no proteossoma. Como tal, neste
caso o APC/C vai degradar a securina por ubiquitinao e ao degradar a securina, a
separasse tornasse ativa, mudando completamente de configurao e permitindo
dissociar as coesinas que mantinham os cromatdeos-irmos ligados entre si, permitindo
que haja a destabilizao dos microtbulos de forma a que haja a segregao dos
cromatdeos-irmos para os polos opostos.

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 Slide
H uma determinada fase do ciclo celular, nomeadamente no final do ciclo celular e no
inicio de G1 em que no vo haver complexos ciclina/Cdk ativos. Neste momento ainda
temos a M-Cdk ativa. No entanto o complexo APC/C para alm de levar ativao da
separasse vai por outro lado, levar inativao da Ciclina B ( ou ciclina M) atravs da sua
ubiquitinao.
O APC/C vai tambm ligar-se a outra subunidade, o Cdh1 (??) que permite que ele esteja
sempre ativo entre a fase M e o inicio de G1, impedindo que neste momento o complexo
M-Cdk esteja ativo, mesmo que se formem ciclinas B, sendo que este um processo que
est sempre a acontecer at ao inicio de G1
No fuso acromtico, quando temos este mecanismo sensorial que leva ativao do
APC/C, os cinetocoros tambm vo fazer com que haja a paragem ou no da diviso
celular. Se as protenas dos cromatdeos-irmos no estiverem bem ligadas ao fuso,
emitem um sinal negativo que vai bloquear a ativao do APC/C, ou seja, no fundo
bloqueia a ligao do Cdc20 ao APC/C, o que bloqueia a transio entre a metfase e a
anafase e o ciclo celular para at que ocorre o juntar dos cromossomas (tal como se
mostra no vdeo que a professora mostrou durante a aula).
(Slide 10). Na anafase, vai ocorrer o desmantelamento do fuso acromtico, iniciando-se
tambm a citocinese, ou seja, comea a haver a formao de um anel contrctil que vai
permitir a diviso entre as duas clulas. Como j tnhamos visto os cromatdeos-irmos
comeam a ser puxados para os polos, o que faz com que os microtbulos dos
cinetocoros vo diminuindo de tamanho e os microtbulos interpolares, que vo ligar
um centrossoma a outro centrossoma vo aumentar de tamanho, ou seja, vo
empurrando os centrossomas para os polos da clula. Ao mesmo tempo, os

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microtbulos aster, que vo ligar os centrossomas membrana da clula vo
diminuindo de tamanho e vo ento aproximar a membrana da clula dos
centrossomas. Como tal, podemos verificar que todas estas foras so opostas s foras
verificadas momentos antes da anafase.

(Slide 11). Por fim temos a telfase. A telfase diferente da citocinese, uma vez que
apesar de j termos um anel contrctil a formar-se, as duas clulas ainda no esto
divididas. Inicialmente os cromossomas vo comear a descondensar, vai ser herdado
um centrossoma numa clula e outro centrossoma noutra clula, sendo que o anel
contrctil vai garantir que metade do material gentico vai para uma metade da clula
e a outra metade do material gentico para a outra metade da clula. Na telfase ainda
no h o desmantelar completo do fuso acromtico j que ainda possvel observar
alguns microtbulos, havendo ainda uma ligao que se mantm entre as clulas. Ao
mesmo tempo comea-se a reorganizar o citoplasma das clulas e forma-se a membrana
nuclear. A membrana nuclear vai-se formar porque j no temos a M-Cdk e temos ativas
nas clulas fosfatases que vo ento desfosforilar todas as protenas que estavam
fosforiladas e vo permitir que elas se juntem novamente, permitindo que haja a fuso
das vesculas que vo formar a membrana nuclear, permitindo tambm que as protenas
do ncleo entrem para dentro do ncleo (essas protenas possuem um sinal que lhes
indica que elas so do ncleo), havendo tambm a reorganizao do retculo
endoplasmtico e do aparelho de Golgi.

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(Slide 13). Em relao citocinese, esta no feita por microtbulos, mas sim por
filamentos de actina, sendo que estes, nomeadamente a miosina tm uma capacidade
contrctil representando tambm a fora motora para os nossos msculos permitindo
a contrao e a descontrao dos nossos msculos. Neste caso, as miosinas vo atuar
para formao do anel contrctil. Este anel contrctil vai-se originar entre as duas novas
clulas que se vo formar, mas o seu tempo de clivagem determinado pelo seu fuso
acromtico, de tal forma que o local onde estavam os cromossomas alinhados na placa
equatorial vai ser substitudo pelos filamentos de miosina e de actina para formar o anel
contrctil. Durante a formao do anel contrctil em que se vo juntando os tais
filamentos de actina e de miosina, vai haver tambm a adio de vesiculas membranares
na membrana citoplasmtica j que a clula tem de aumentar de rea, sendo que isto
s possvel se a membrana citoplasmtica tambm aumentar, de tal forma que h
medida que se vo adicionando as vesculas membranares membrana citoplasmtica
ela aumenta de tamanho e por outro lado, o anel contrctil vai diminuir de tamanho, de
forma a formar as duas novas clulas.

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 5.1 Organelos Celulares
A maioria dos organelos da clula eucaritica so limitados por membrana,
podendo esta ser dupla ou simples.

A compartimentalizao dos organelos dentro da clula permitiu a sua

especializao. Esta especializao de grande importncia: numa clula
procaritica tudo feito dentro da mesma clula, no h organizao entre
organelos portanto o grau de especializao ser muito mais reduzido; o
facto de na clula eucaritica termos compartimentalizao, isto , termos o
material gentico organizado no ncleo, termos o retculo endoplasmtico,
termos mitocndrias que geram energia, etc. permitiu que houvesse
evoluo e um maior grau de especializao em termos celulares, que nos
permite de facto ter 210 tipos de clulas diferentes nos seres humanos, isto
possibilitou ento uma evoluo no s a nvel celular como ao nvel do
organismo, originando organismos multicelulares com tipos de clulas
especializadas, onde embora todas as clulas tenham basicamente os
mesmos tipos de organelos, podero ter diferentes quantidades destes, por
exemplo uma clula muscular necessita de uma grande quantidade de
mitocndrias porque necessita de gerar muita energia muito rapidamente.

Reticulo Endoplasmtico Rugoso, Reticulo Endoplasmtico Liso e

Coplexo de Golgi

Os organelos que so mais conhecidos, e que de facto tm um papel

preponderante no funcionamento da clula, o circuito composto pelo
reticulo endoplasmtico rugoso (RER), reticulo endoplasmtico liso (REL) e
complexo de Golgi.

De facto estes organelos, para alm de serem local de sntese de

componentes celulares, so tambm no fundo a central de distribuio
desses mesmos componentes celulares, so o centro organizacional, que vai
pegar na mensagem que vem do ncleo e promover/assegurar todas as
funes celulares. Este circuito composto por estes 3 organelos
responsvel pela sntese de vrios compostos, mas tambm pela modificao
e transporte de protenas, portanto o mRNA lido pelos ribossomas (sejam
estes aderentes ao RER ou livres) e essas protenas so depois modificadas
(modificaes ps-translacionais, que sero faladas em aulas posteriores)
sendo depois deslocadas at ao local de actuao, por exemplo as protenas
da membrana plasmtica tm de ser transportadas para a membrana
plasmtica

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O reticulo endoplasmtico pode ser rugoso (RER) ou liso (REL), apesar de
terem ambos a mesma constituio base apresentam algumas diferenas
entre eles:

RER REL
Com ribossomas pontinhos junto
ao organelo observveis apenas ao Sem ribossomas
microscpio electrnico
Snteses de lpidos - grande parte
Sntese de protenas das hormonas esterides so aqui
produzidas

O RER, o REL e o complexo de Golgi esto muito prximos do ncleo, alis

muitas vezes a membrana externa do ncleo est em continuidade com a
membrana do RER portanto no fundo o mRNA que sai do ncleo logo
captado pelos ribossomas que esto nas imediaes, dando-se ento a
traduo da mensagem para uma protena. O que pode acontecer, e acontece
frequentemente, que existem mltiplos ribossomas a ler o mesmo mRNA,
obtendo-se assim no final da leitura vrias cadeias polipeptdicas a partir de
um mesmo mRNA. A sntese de protenas pode acontecer tanto nos
ribossomas ligados ao RER como nos que se encontram livres no
citoplasma!!!

Ribossomas associados ao
RER

Ribossomas livres

Relativamente ao REL, est em ntima associao com o RER, no apresenta

os pontinhos pretos (ribossomas) caractersticos do RER, tratando-se

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portanto de um sistema membranoso e tubular que tem um interior oco,
basicamente o REL composto por tbulos/sculos. As principais funes
deste organelo so de facto a sntese de hormonas esterides, fosfolpidos
(muito importantes para as membranas) e outros lpidos, mas tambm
muito importante para a desintoxicao do organismo (por exemplo
degradao do etanol e de alguns frmacos o citocromo p450 uma famlia
de protenas que torna compostos insolveis em solveis, promovendo a sua
degradao). O REL tem tambm uma outra funo extremamente
importante no msculo, a contraco muscular depende intimamente da
existncia de clcio e este organelo que est associado ao controlo do
fluxo de clcio na clula: se necessrio o msculo contrair o REL liberta
clcio, quando o msculo tem de relaxar capta o clcio. Trata-se no fundo de
uma reserva de clcio.

O complexo de Golgi, facilmente confundido em imagem de microscopia

electrnica com o REL pois encontra-se na imediao do ncleo e do RER,
no possu ribossomas associados e apresenta tambm uma estrutura em
forma de sculos, denominados cisternas.

Este organelo o CTT da clula, no fundo a sua grande funo a

distribuio do correio (protenas) para os locais onde estas se devem
localizar, seja para secreo, isto para sarem da clula, seja no interior da
clula.

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Este organelo tem 2 zonas com nomes diferentes, a regio cis, mais prxima
do ncleo, e a regio trans, mais prxima da membrana celular. Na zona cis
onde entram as vesculas que trazem protenas para depois serem
distribudas para a clula e a regio trans por onde saem as vesiculas de
distribuio.

As cisternas so basicamente uns sculos que esto empacotados (ligados

uns aos outros), e cada conjunto de cisternas (nos seres humanos 4 a 8
cisternas) compem o dictiossoma, que a unidade do complexo de Golgi.
No caso dos mamferos, dependente dos tipos de clulas, existem entre 40 a
100 dictiossomas, conforme a necessidade de produo proteica das clulas.

Na zona trans (lado cncavo) na 1 e 2 cisternas existe um conjunto de

enzimas, sobretudo fosfatases, que vo modificar as protenas de acordo
com as necessidades da clula (podem ser adicionadas novas ligaes,
podem ser removidos determinados grupos, etc. = modificaes ps-
translacionais).

Nas cisternas intermdias temos uma NADPase, enzima que vai produzir
NADH.

Nas fotografias de microscopia electrnica, a poro mais fcil de identificar

do complexo de Golgi so as 1 e 2 cisternas do lado cis, uma vez que h
mais impregnao de smio. possvel atravs desta poro do organelo
perceber qual a polaridade/organizao deste.

Em suma: o complexo de Golgi tem uma srie de enzimas que fazem a

modificao proteica antes das protenas sarem para os locais de aco,
atravs de vesiculas.

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 Lisossomas

Os lisossomas so pequenos organelos intracelulares, geralmente esfricos,

de tamanho bastante varivel, que no fundo so caixotes do lixo. So
usados para destruir componentes, quer exteriores clula quer
intracelulares. Tm esta funo porque esto cheios de enzimas
degradativas, regra geral hidrolticas, que vo actuar num grande universo
de substratos.

Esta atividade enzimtica dependente do pH. Geralmente o pH fisiolgico

de 7.2, mas nos lisossomas o pH tem um valor entre 4.5/5 (ambiente
fortemente acdico) o que tambm auxilia nos processos de
hidrlise/destruio dos compostos necessrios. As enzimas que esto no
lisossoma tiveram de evoluir de forma a funcionarem em pleno num pH
bastante cido, por este motivo o pH ideal das enzimas lisossomticas
muito baixo. Assim apesar do ambiente dentro do lisossoma ser
supostamente muito agressivo, se um lisossoma rebentar no interior da
clula (o que extremamente raro, pois na membrana interna dos
lisossomas existe um revestimento de hidratos de carbono que no s
protege a prpria membrana da digesto, mas tambm previne a ruptura da
membrana) as enzimas no digerem os componentes celulares, porque no
esto no seu pH ideal, e por isso no h risco para a clula.

As classes de enzimas so variadas, temos

nucleases, que degradam cidos nucleicos,
algumas enzimas que degradam ligaes
glicosdicas, sulfatases, enzimas que
degradam protenas, lpidos, entre outras.

Em suma: nos lisossomas h um ambiente

degradativo para destruio quer de
componentes intracelulares que j no so
necessrios, quer de componentes que
entram na clula atravs de um processo
endoctico, por exemplo: no caso da
fagocitose feita pelos macrfagos, grande
parte dos componentes so destrudos via
lisossomas.

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Existem uma grande srie de patologias associadas a deficincias em
enzimas lisossomais. O que sucede que se existe uma enzima deficiente no
lisossoma, que no consegue degradar compostos, o que acontece que vai
haver acumulao desses compostos na clula e isso implicar problemas ao
nvel da clula, muitas vezes provoca a apoptose, levando ao surgimento de
doenas (musculares, neuronais, etc.).

Peroxissomas

Os peroxissomas so outros organelos, que no fundo, tambm participam na

limpeza celular. Sendo as reaces que ocorrem no seu interior
essencialmente de oxidao, portanto tm enzimas das classes das oxidases
e das catlases, que com recurso ao oxignio, vo oxidar os produtos que
entram na clula, esta reaco leva formao de perxido de hidrognio
que depois decomposto em gua.

Basicamente: entra um produto na clula que necessita de ser degradado

pelos peroxissomas, o que ocorre a sua oxidao (o que facilita a sua
degradao), a oxidao origina tambm peroxido de hidrognio que depois
decomposto em gua, de modo a que no prejudicial clula.

Pode haver um nmero varivel de peroxissomas na clula, normalmente

so identificados na microscopia electrnica atravs do cristalide
(estrutura com a forma de um paraleleppedo/rectngulo que mais
eletrodenso, e por isso muito escuro numa fotografia de microscopia
electrnica). A identificao assim facilitada, pois so muito escuros,
apresentam uma dimenso ligeiramente mais pequena que a dos lisossomas
e esto espalhados pela clula.

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 Mitocndria

A mitocndria tem um ar de baguete francesa com risquinhas.

Um grupo de mitocndrias denomina-se condrioma e pode corresponder em

algumas clulas a 25% do volume celular (clulas musculares por exemplo).

Estrutura da mitocndria: tem uma membrana dupla (membrana externa +

membrana interna, a externa normal mas a interna apresenta
cristas/invaginaes). Tem DNA prprio (circular, semelhante ao das
bactrias).

A funo da mitocndria a de produzir energia, energia esta que

proveniente de molculas que ingerimos nos alimentos. Molculas que
derivam da gliclise ou do processamento de lpidos.

O produto que chega mitocndria resultante dos processos citados acima

so os cidos gordos, que entram para a matriz da mitocndria, sendo ai
convertidos em acetilcoenzima A, que de seguida entra no ciclo de Krebs,
gerando ento NADH e FADH que depois vo ser usados na cadeia
oxidativa/fosforilao oxidativa. Para todo este processo necessrio
oxignio, ADP, NAD, etc. A mitocndria assim como uma central
energtica/barragem que transforma uma fonte de energia em energia.

A membrana externa da mitocndria tem uma composio de

aproximadamente 60% protenas e 40% lpidos. Grande parte desta poro
proteica so protenas chamadas purinas, que permitem a difuso de
molculas abaixo de 5 000 daltons (o Wikipdia refere 10 000 mas no
10 000 5 000!). Quando as molculas so maiores que 5 000 daltons j
necessrio existirem transportadores, portanto existem translocases que
vo ser responsveis por levar para o interior da clula as molculas que no
conseguem passar por difuso.

A membrana interna tem uma composio um bocadinho diferente, tendo

ainda um maior contedo proteico porque na membrana interna que
existe o complexo respiratrio (no fundo um local de fosforilao oxidativa
e tem todas as protenas que compem a cadeia respiratria e tambm
ATPsintetase).

Est organizada em cristas mitocondriais, que servem essencialmente para

aumentar a rea superficial de modo a terem muitos mais complexos
respiratrios.

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A matriz tambm importante, sendo o local onde ocorre o ciclo de Krebs.
Este ciclo serve para gerar electres/energia que depois vai alimentar a
fosforilao oxidativa (no necessria saber os passinhos todos do ciclo de
Krebs, apenas a funo e o que se forma). Na matriz existe tambm o DNA
mitocondrial, circular, e a partir dele que a prpria mitocndria sintetiza
determinados componentes que so necessrios ao seu correto
funcionamento (citocromos, ATPsintetase, as subunidades, as unidades de
NADH, no fundo as enzimas que precisa para a fosforilao oxidativa), mas
os restantes componentes da mitocndria (protenas da membrana por
exemplo) vm do genoma da clula/ncleo da clula, a mitocndria por si s
j no consegue sobreviver independentemente do resto da clula embora
possua DNA.

As mitocndrias tm uma hereditariedade chamada no mendeliana, em que

este organelo herdado exclusivamente da parte da me. Este facto
bastante interessante e til para estudos filogenticos e estudos de
determinao de linhagens, permitindo-nos perceber certas migraes que
aconteceram no incio da evoluo humana. Esta hereditariedade
concordante com a teoria da Eva mitocondrial, que diz que todos
indivduos descendem da mesma mulher.

Tambm existem vrias doenas associadas s mitocndrias, onde das

patologias existentes cerca de 15% devido a mutaes no genoma
mitocondrial, e podem afectar diferentes rgos (crebro, por exemplo).

Nota: fotografias dos organelos sempre obtidas por microscopia electrnica!

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 5.2 Estrutura Nuclear. Processos Nucleares I
Organelo celular onde se encontra a maioria do genoma da clula, patrimnio
gentico sob a forma de molculas de DNA. Encontra-se delimitado
por uma membrana dupla, o invlucro nuclear.

INVLUCRO NUCLEAR

Estrutura que separa os componentes nucleares dos citoplasmticos,

conferindo individualidade ao ncleo como organelo celular.

Funes:
Isolar espacial e temporalmente os fenmenos de expresso
gentica;
Criao e manuteno de um ambiente molecular adequado s actividades nucleares
cido.
Est envolvido no transporte ncleo-citoplasma (poros nucleares)
Organizao espacial da cromatina

Compreende 3 elementos estruturais:

Membranas nucleares

Delimitam a cisterna perinuclear.

A membrana nuclear externa est em continuidade com o retculo endoplasmtico e
bioqumica e funcionalmente semelhante a este.
A membrana nuclear interna tem uma composio proteixa especfica em termos de
protenas integrais e est em associao com a lmina nuclear.
As duas membranas esto em continuidade ao nvel dos poros nucleares.

Lmina nuclear

uma rede de fibras que funciona como suporte do ncleo, constituda por protenas
laminas. uma camada contnua, densa aos electres, interrompida ao nvel dos poros
nucleares.

Funes:
Constitui uma interface estrutural e funcional entre a membrana nuclear interna e a
cromatina.
Promove, com a membrana do poro, a ancoragem deste ao invlucro.
Com a membrana celular interna e o poro, forma uma unidade estrutural e funcional
que promove a associao da cromatina ao invlucro.

Poros nucleares

Estrutura supramolecular, com uma massa estimada em 125MDa

e contendo, pelo menos, 100 polipptidos diferentes.

Funo:

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 Transporte, para alm de metabolitos diversos, de protenas e complexos
ribonucleicos, nomeadamente subunidades ribossomais.

Estrutura:
So constitudos por 2 anis co-axiais (120nm de dimetro),
um voltado para a superfcie citoplasmtica e outro para a
superfcie nucleoplasmtica. Esto ligados um ao outro e
membrana do poro por subestruturas que conferem ao conjunto
uma simetria octogonal.
Na poro central encontra-se o grnulo central. Deste,
irradiam 8 espculas. Filamentos projectam-se a partir do anel
citoplasmtico em direco ao citoplasma. Filamentos de outro
tipo conectam o anel ncleo-plasmtico com um anel intra-
nuclear de menor dimetro, formando uma estrutura em forma de
cesto.

Funcionamento:
Existem duas concepes para se explicar o mais elevado nvel de protenas a nvel
nuclear:
Transporte activo mediado por receptores especficos para
sinais presentes apenas em protenas carioflicas.
Difuso livre, sendo a reteno das protenas carioflicas
provocada pela sua ligao a receptores especficos
insolveis.
De qualquer das formas, o transporte efectuado pelo grnulo
central. O transporte activo de protenas para o ncleo efectua-se
por duas etapas:
1. Associao ao poro nuclear, s fibrilas citoplasmticas.
2. Translocao atravs do poro, envolvendo energia.
So conhecidos vrios NLS (sinais de localizao nuclear), que
enviam as protenas carioflicas para o poro nuclear, e receptores de
NLS importinas.
A exportao de RNA depende de sinais de exportao de
protenas associadas, estando exportinas envolvidas no processo.

ORGANIZAO INTRANUCLEAR DA EXPRESSO GENTICA

O DNA tem graus de compactao variveis. Esta compactao feita sob a forma de
cromatina, que no mais do que a unio do DNA a protenas deignadas de histonas.
Sem esta compactao do DNA, este no seria suficientemente pequeno para caber no
comportimento nuclear.
H regies do ncleo com ou mesmo sem DNA, ricas em ribonucleoprotenas (RNP)
estruturas intercromatnicas.

Existem dois tipos de cromatina:

Heterocromatina compacta, distribui-se periferia do ncleo, junto ao invlucro
nuclear, periferia do nuclolo e tambm em massas dispersas no nucleoplasma.

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Eucromatina descondensada, corresponde regio transcricionalmente activa do
DNA.

Nas estrutuas intercromticas, salientam-se:

Agregados de grnulos intercromatnicos (AGI) - correspondem a domnios de forma
irregular interligados por prolongamentos mais finos, formando uma malha que se
estende desde a periferia do ncleo periferia do nuclolo. Contm RNPs intimamente
associados cromatina, as fibrilas pericromatnicas (FP). Faz a concentrao em
determinados domnios nucleares dos componentes da maquinaria de splicing e um
reservatrio de spliceossomas maduros.
Corpos espiralados estruturas que acumulam componentes da maquinaria de
processamento dos RNAa. Todos os snRNPs envolvidos na reaco de splicing
encontram-se aqui, estando ento os corpos espiralados envolvidos no ciclo do
spliceossoma.

A actividade transcricional escassa nos AGIs e na heterocromatina.

No interior do ncleo, a actividade transcricional est a cargo de 3 polimerases: RNA
polimerases I, II e III. Aps a transcrio, os pr-mRNAs so processados, dando
origem a mRNAs prontos a serem traduzidos no citoplasma. Estas estapas envolvem:
Adio de um cap de 7-metil-guanosina extremidade 5
Reaco de splicing consiste na remoo dos intres (azonas no codificveis do pr-
mRNA) e religao dos exes, originando mRNA. Este processo realizado pelo
spliceossoma, com a participao de factores de splicing, proteicos e
ribonucleoproteicos. Os ribonucleoproteicos so os UsnRNPs. Os proteicos so os
factores SR que actuam precocemente na reaco de splicing, promovendo o
reconhecimento dos stios de splicing e a organizao do spliceossoma. Tm tambm
papel regulador, participando no splicing alternativa (remoo de diferentes intres do
mesmo mRNA, havendo formao de diferentes protenas a partir desse mRNA).
Poliadenilao da extremidade 3.
A actividade transcricional parece recrutar, s por si, os componentes da maquinaria de
splicing. A prpria RNA polimerase II desempenha um papel importante neste captulo.
Alm disso, certos genes encontram-se prximos dos AGIs.

ORGANIZAO DO GENOMA NO NCLEO

O padro de distribuio da heterocromatina no interior do ncleo caracterstico do

tipo celular, sendo usado como critrio de diagnstico citolgico em patologia clnica.
Em relao aos centrmetos (constituio primria observada em cromossomas
metafsicos constitudos por heterocromatina), tendem a localizar-se junto ao invlucro
nuclear e volta do nuclolo.
Com respeito aos telmeros, a sua associao com a periferia do ncleo no to
constante como nos centrmeros, e esta associao depende da fase do ciclo celular.

Sequncias Gnicas

A organizao tri-dimensional do genoma em interfase no aleatria. Cada gene

parece situar-se num subvolume nuclar preferencial, de acordo com determinados graus
de liberdade. A complexidade desta organizao resulta da aco coordenada de vrias
variveis:

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Os cromossomas comportam-se como entidades independentes no interior do volume
nuclear
Cada cromossoma constitudo por subunidades cromatnicas (bandas cromossmicas)
distintas

Territrios Cromossmicos

Cada cromossoma ocupa um territrio discreto, bem definido. Existem dois modelos
para a distruibuio da cromatina nos territrios cromossmicos:
Modelo conhecido como trajectria aleatria que prev uma distribuio isotrpica da
cromatina no interior de cada territrio cromossmico.
Modelo que admite maior previsibilidade na organizao espacial, correntemente o
modelo mais aceite.

Compartimentos permissivos e repressores da actividade transcricional

A compartimentao de sequncias no ncleo, com formao de domnios, permissivos

da actividade transcricional tem um papel no equilbrio entre expresso e
silencionamento transcricionais.
Experincias com linfcitos demonstraram que os domnios genticos se possam
movimentar entre compartimentos cromatnicos repressores ou permissivos da
actividade transcricional, consoante o seu nvel de expresso. Assim, a cromatina pode-
se mover no ncleo, envolvendo repercursses funcionais.

Locais de replicao do ncleo

A replicao ocorre durante a fase S do ciclo celular. Inicia-se em mltiplos stios,

denominados por focos de replicao, para assegurar a replicao da totalidade do
genoma no espao de tempo de 6-8h.
Cada foco tem cerca de 40 replices. As sequncias que replicam numa subfase
especfica da fase S tm um arranjo espacial caracterstico, pois em cada subfase
replicam um conjunto de sequncias bem definidas.

Matriz nuclear

Estrutura residual complexa, de natureza predominantemente proteica.

Estudos demonstram que est intimamente ligada a actividades de transcrio e
traduo.

Cromatina e cromossomas

Nas clulas eucariticas, a parte no nucleolar do ncleo, formada por uma estrutura
fibrosa cromatina. Esta constituda por DNA associado a protenas bsicas, as
histonas, e protenas no histnicas.
Em interfase, a cromatina encontra-se dispersa, e a que possvel dar-se a sntese de
mRNA. Durante a mitose, a cromatina encontra-se estruturada nos cromossomas.
Existem dois tipos de cromatina, que se distinguem pelo seu grau de compactao e
actividade de transcrio do mRNA:

33 de 141
Eucromatina descondensada, activa. Corresponde a regies do genoma
transcricionalmente activas.
Heterocromatina condensada. Visvel no ncleo em interfase sob a forma de regies
densas crommeros.
A cromatina est disposta irregularmente no nucleoplasma, sob a forma de massas mais
ou menos densas.

TIPOS DE HETEROCROMATINA

Heterocromatina facultativa

Aquela cujo estado de condensao varia em tipos diferentes de clulas e estados de

desenvolvimento.
Constitui um dos 2 cromossomas X das clulas femininas.
Nas clulas somticas, este cromossoma encontra-se inactivo, enquando que nas clulas
germinativas e nas clulas de uma fase muito precoce de desenvolvimento, se encontra
activo.
H ento uma heterocromatizao da eucromatina de um dos cromossomas X (corpo de
Barr), que funciona nas clulas somticas femininas como mecanismo de compensao
de dose relativamente s masculinas.
Quando h dois cromossomas X em cada clulas:
Um de replicao tardia, na interfase (Fase S)
Esse mesmo cromossoma inactivo na sua quase totalidade, inactivao essa que se d
numa fase precoce do desenvolvimento embrionrio.

Heterocromatina constitutiva

Caracterizada por um estado permanente de condensao e inactivao gentica.

Encontra-se em posies idnticas em cromossomas homlogos. tambm
caracterizada pela associao a sequncias de DNA altamente repetidas.

FUNES DA CROMATINA

Regulao do emparelhamento dos cromossomas

Proteco da eucromatina contra quebras e rearranjos
Contribuio para o desenvolvimento e evoluo dos caritipos
Estabilizao de regies cromossmicas centrmero e telmero
Estabelecimento de barreiras de fertilidade

ESTRUTURA E NVEIS DE ORGANIZAO DA CROMATINA

Para que o DNA possa estar contido em compartimentos de alguns micra de dimetro,
como o ncleo, sofre uma compactao
grande.

Nucleossomas

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Em interfase, a cromatina encontra-se constituda por subunidades, designadas por
nucleossomas. Cada nucleossoma um ncleo central, constitudo por histonas (H2A,
H2B, H3 e H4), em torno do qual o DNA se enrola em duas voltas estabilizadas pela
histona H1.

Dos nucleossomas ao cromossoma

Os nucleossomas so o primeiro nvel de compactao do DNA. O nivel seguinte,

consiste na concentrao dos nucleossomas justapostos, com enrolamento helicoidal
posterior, formando uma longa fibra, na qual a histona H1 tem um papel importante.
Com o prosseguimento do ciclo celular, a fibra de cromatina organiza-se em nveis
sucessivos de complexidade, at formar o corpo do cromossoma. Este, constitudo por
uma nica fibra de cromatina, composta por uma longa molcula de DNA, que percorre
cada cromatdio de um extremo ao outro.
Algumas protenas permanecem nos cromossomas contribuindo para a organizao do
DNA em ansas, nomeadamente topoisomerases.

Os cromossomas e o Caritipo

O nmero de cromossomas caracterstico de cada espcie. A sua organizao em

grupos, constitui o caritipo. A anliso cariolgica tem um papel importante no estudo
de patologias e evoluo.
Nas formas de reproduo assexuada, h dois tipos de cromossomas: autossomas e
heterossomas (ou cromossomas sexuais). Ho Homem, o caritipo constitudo por 22
pares de autossomas e 1 par de heterossomas.

Tipos de cromossomas

Metacntricos a posio do centrmero mediana (braos iguais).

Submetacntricos e Acrocntricos quando o centrmero se desloca para os extremos,

ou telmeros, dando origem a braos desiguais. Os acrocntricos 13, 14, 15, 21 e 22
contm as NOR (regies onde se situam os genes que codificam para as subunidades
5,8S; 18S e 28S do rRNA.

Telocntricos centrmero ocupa posio terminal. No fazem parte do genoma

humano normal.

35 de 141
Tipos de RNA

36 de 141
 5.3 Processos Nucleares II

Vamos terminar os processos nucleares e fazer tambm a ponte para aquilo que ser das
prximas aulas, acerca daquilo que se passa no citoplasma.

Vamos falar acerca da complexidade do nosso genoma, da transcrio (passagem de DNA

para RNA) e do processamento do RNA

COMPLEXIDADE GENMICA
Slide 3

A grau de complexidade do matrial genmico no reflete a complexidade de um organismo

ou o seu grau de evoluo, ou seja, por exemplo ns, humanos, temos um grau de
complexidade superior ao de muitos animais que tm um nmero mais elevado de
cromossomas.

A complexidade no tem uma correspondncia direta com o nmero de genes

Slide 4

O ser humano aparece no fundo da tabela com 2.9 bilies de pares de bases (bp, a unidade
de medida do tamanho do genoma). Embora no esteja indicado nesta tabela existem
organismos que tm mais pares de bases e no tm, necessariamente mais genes. O ser
humano tem 20.000-25.000 genes, enquanto por exemplo o arroz, tem 51000 genes, embora
tenha menos bp. O quadro apenas para ter uma ideia.

Slide 5

Mais uma vez reforada a ideia de que o tamanho do genoma NO reflete a complexidade.

Isto deve-se a vrias razes.

1) Temos uma grande quantidade de DNA repetido ao longo do genoma

2) Temos DNAs no codificantes, quer em regies entre os genes (DNA intergnico, sendo
que neste caso este DNA se chama DNA spacer) quer dentro dos prprios genes (DNA
intragnico, so os intres que so posteriormente removidas)

No DNA existe ento: DNA repetido, DNA no codificante e o DNA que corresponde
efectivamente aos genes funcionais.

Slide 6

DNA repetitivo

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Este tipo de DNA s existe nos cromossomas eucariotas (nos procariotas, no existe espao
dentro da clula para este tipo de DNA, todo o DNA praticamentes codificante). Regra geral
est repetido diversas vezes ao logo do genoma, pode haver milhares de cpias de DNA
repetido, estas cpias podem estar agrupadas ou podem estar dispersas.

Slide 7

Quando esto agrupadas, se forem mesmo muito repetitivas designam-se DNA satlite e
podem ser, por exemplo, um componente dos centrmeros, que so feitos por partes no
codificantes de DNA e da heterocromatina (que aquela que no transcrita, regra geral*)

*conforme falado na aula anterior, h heterocromatina que nunca codifica e heterocromatica

que pode codificar, dependendo da clula)

Este DNA tem um tamanho aproximado de 5 a 200 nucletidos e constitui 10 a 20 % do

genoma total.

Ainda nas cpias agrupadas, temos o DNA moderadamente repetitivo, que temos como
exemplo os microsatlites e minisatlites (so coletivamente chamados VNTRs - Variable
Number Tandem Repeats, ou seja tm um nmero varivel de repeties seguidas).

Os microsatelites so muitas vezes utilizados para fazer a diferenciao entre indivduos, em

testes forenses e so repeties de menos de 5 pb.

(doena de huntigton, h uma alterao na protena huntingtina, em que o tripleto CAG

repetido um nmero varivel de vezes. Quanto maior o numero de repeties maior ou mais
cedo a doena se manifesta)

Os minisatlies, so um pouco maiores, a partir de 5 pb.

Quando esto dispersos, so classificados como curtos (Short interspersed elements - SINEs)
ou longos (Long interspersed elements - LINEs), esto dispersos pelo genoma e j h alguns
identificados nos seres humanos.

Regra geral este conjunto dos SINEs e LINEs corresponde a 1/3 do genoma.

Slide 8

O grfico mostra como se distribui o nosso genoma, apenas 1.5% so genes codificantes, o
resto so intres, LINEs e SINEs, e outros.

O que no codifica tambm tem funo, serve por exemplo para proteger as zonas
codificantes. No se perdeu com a evoluo porque vantajoso.

Slide 9

O gene contm a informao para a sntese de uma cadeia polipeptdica ou de um RNA

funcional (porque nem todo o RNA traduzido para protena).

Slide 10

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Os genes codificantes (aqueles 1,5% do genoma) podem ser classificados em genes solitrios,
genes duplicados ou famlias genicas,

Gene solitrio: s se encontra uma vez no genoma (ex: lisozima da saliva);

Genes duplicados: os genes em questo encontram-se a uma grande distncia um do outro.

Pensa-se que isso porque um dos genes surgiu por duplicao do outro. Mas, por ter havido
tambm uma mutao, em vez de os dois genes codificarem para a mesma protena vo
codificar para protenas ligeiramente diferentes. Por exemplo a insulina e o seu recetor: o gene
que codifica para o recetor de insulina surgiu a partir de uma duplicao do gene que codifica
a insulina (ou vice-versa) e tambm de uma mutao que faz com que o gene seja
ligeiramente diferente, e portanto, as funes a ele associadas vo ser ligeiramente diferentes,
mas associadas uma outra.

Famlias genicas: famlias/conjuntos de genes que se encontram no mesmo local e que

codificam uma srie de protenas, como por exemplo os locais do cromossoma que codificam
para a alfa globulina e a beta globulina (a hemoglobina tem cerca de 10 subunidades que esto
agrupadas nestes 2 locci no genoma)

Slide 11

Este quadro para termos uma ideia de que de facto pode haver mais do que uma cpia de
um gene a produzir a mesma protena. Mas tambm pode existir apenas um. Verifica-se que
aquilo que mais utilizado na clula e que vai entrar na constituio de outros componentes
tambm aquilo que ter mais cpias do mesmo gene, para haver uma certeza de que estar
sempre disponvel ( por exemplo, a clula no pode querer entrar em mitose e faltar-lhe uma
cdk)

Slide 12

Nos PROCARIOTAS o processo simples,

DNAintegralmente transcrito a RNAintegralmente traduzido em PROTENAS

Nos EUCARIOTAS mais complexo:

Logo no DNA inicial temos INTRES, depois de ser transcrito continua com os intres, mas
temos que evitar a sua degradao, tem que ser protegido. Sendo uma molcula de cadeia
simples as nucleases vo degrad-lo rapidamente. Depois temos que tirar os intres. E s a
que ele exportado para o citoplasma para ser lido, portanto temos um grau de complexidade
e controlo muito mais elevado relativamente aos procariotas.

Slide 13

Foi dos estudos destes processos efetuados em procariontes que surgiu o dogma central da
biologia, segundo o qual o DNA passa a RNA, o RNA traduzido em protenas, o DNA tem
capacidade replicativa, bem como o RNA.

Nos ltimos 50 anos, aps se descobrir a estrutura do DNA e tudo o que est por trs dos
processos moleculares, descobriu-se que o RNA no s rRNA, tRNA, mRNA. Tem imensos

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papis dentro da clula, pode ser cataltico funcionando como uma enzima (e ai tem o nome
de ribosima), pode regular outros RNAs, no s promovendo a sua destruio ou inibindo a sua
expresso, mas tambm servindo como sinalizador da sua ao.

TRANSCRIO
Slide 14

No processo de transcrio procarionte existe apenas uma RNA polimerase

No processo de transcrio eucarionte existem 3 RNA polimerases, com papis distintos.

Slide 15

A RNA polimerase responsvel pela sintese do RNA atravs da transcrio, a partir de uma
molecula de DNA. No fundo, o que ela faz ligar-se ao DNA e destruir as ligaes entre as duas
cadeias para o poder inserir-se e fazer a sua transcriao por adio de ribonucleotidos.

A sua polimerizao orientada e sequencial, sempre feita de 5' para 3' a partir de uma cadeia
de DNA orientada dde 3' para 5'. A cadeia nascente de RNA ento sintetizada de 5' para 3'.

DOIS TRABALHOS DA RNA POLIMERASE : 1- DESTRUIR A LIGAO ENTRE AS CADEIAS, 2-

ADIO DE NUCLEOTIDOS.

Slide 16

Temos ento 3 RNA polimerases com funes diferenas.

RNA polimerase 1

A RNA polimerase esta localizada no nuclolo, onde ocorre produo de ribossomas, ou seja
de rRNA. O RNA ribossomal todo produzido no nuclolo excepto um: o rRNA 5S. Este
codificado no nucleo, produzido no citoplasma e depois enviado novamente para o
nucleo (tal como algumas proteinas ribossomais, como se viu na aula anterior). De
resto, a RNA polimerase 1 responsavel pela produo dos componentes ribossomais
rRNAs 28s, 182, 5.8s

RNA polimerase 2

a clssica que ns conhecemos, responsvel por produzir o RNA mensageiro, mas

tambm por produzir os snRNAs e snoRNAs que vo ajudar na montagem dos
ribossomas e no processamento do RNA. No fundo, RNAs acessrios

RNA polimerase 3

Via prduzir or tRNAS, o rRNA 5S, e mais outros RNAs de controlo da transcrio

(Basta saber o que cada uma faz, no fundo a ltima linha do quadro do slide)

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Slide 17

(Vamos ver a transcrio no geral porque j demos no secundrio)

Na transcrio a cadeia sintetizada cresce no sentido 5 3 e usa a cadeia de DNA

orientada de 3 --> 5.

Temos no DNA a zona de inicio de transcrio, sendo essa zona de inicio de transcrio
indicada com o nmero +1 (imagem), e portanto a RNA polimerase vai iniciar a
trancrio nesse +1 e vai mover-se na chamada direo downstream (na direo dos
nmeros crescentes positivos).

(downstream e upstream como se fosse jusante e montante)

(Os nmeros positivos e negativos so uma conveno. Os nucletidos que vm antes
do incio da transcrio so negativos, e a partir da fica positivo)

A transcrio congnica no um processo aleatrio, controlado e regulado, e tem imensas

sequencias regulatrias e imensas molculas que so agentes reguladores e que ao ligarem-se
cadeia de DNA vo aumentar ou diminuir a transcrio. Estas molculas reguladoras
permitem, por outras palavras, modular a expresso gnica.

Ento, para que haja a transcrio, tem que haver a ligao de fatores de transcrio numa
zona chamada promotor, que se encontra upstream do +1 onde vai iniciar a transcrio.

Aps a transcrio, a cadeia sintetizada vai ser igual cadeia molde de DNA, apenas com U
onde antes existia T.

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Chama-se cadeia de RNA formada de transcrito primrio. Esta cadeia no a final de RNA
que vai ser traduzida, ainda vai sofrer alteraes.

Slide 18

As etapas da transcrio so 3: a iniciao, a elongao e a terminao.

(ISTO O PROCESSO SIMPLIFICADO)

Iniciao: a RNA polimerase vai reconhecer o local de inicio da transcrio (liga-se a zona +1).
Tem aqui funo de helicase, que vai abrir a dupla hlice de DNA e formar a Bolha de
Transcrio (anloga forquilha de replicao). Quando abre as duas cadeias comea a
adicionar ribonucletidos. Ao contrrio do que acontecia na replicao do DNA, no so
necessrios primers.

Elongao: Aps adicionar os primeiros ribonucletiods a sntese tem continuidade, a cadeia

vai crescendo at chegar a uma zona com a indicao de que para parar a transcrio, a
zona STOP (bolinha vermelha da imagem).

Terminao: Quando chega a este ponto STOP, a polimerase liberta o RNA que foi sintetizado e
dissocia-se do DNA permitindo que este se volte a enrolar.

42 de 141
Slide 19

(S para termos uma ideia de como a elongao)

A RNA polimerase no uma enzima s por si,, mas uma enzima com imensos cofatores e
imensos fatores de ligao.

medida que a transcrio avana, o RNA vai-se soltando e o DNA vai voltando a enrolar-se,
ou seja a bolha de transcrio vai-se deslocando e a cadeia de RNA vai ficando solta.

Slide 20

(ela a partir daqui baralhou um bocado na explicao deste esquema, acho que acabou por se
contradizer um bocado, no percebi muito bem)

Para que haja transcrio temos ento que ter um local de iniciao, codificado com +1(cerca
de 50% das vezes o nucletido adenina que se encontra neste local) e a montante deste
(upstream) temos o promotor core, que uma zona com cerca de 60 nucletidos onde se
encontram protenas, que so os chamados FATORES DE TRANSCRIO (modelam a
transcrio). neste local que se vo ligar os cofatores e elementos de ligao que constituem
a RNA polimerase. O promotor core est dividido em diversas zonas onde se vo ligar fatores
especficos.

O fator de transcrio TFIID vai-se ligar na zona da TATA box. O TFIIB vai-se ligar mais acima. E
mais a baixo existem zonas onde se vo ligar outros de que no vamos falar. (Estes fatores so
bocados da RNA polimerase)

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Slide 21

Sabe-se que a TATA box est sempre a montante da zona de incio da transcrio, no entre o
nucletido -35 e -25. Chama-se TATA box porque uma regio extremamente conservada em
vrios organismos.( Comeou a falar das percentagens das posies dos nucletidos da TATA
box(quadro amarelo do slide, mas basicamente disse que o que interessava era que a regio
bastante constante). A TATA box muito importante porque aqui que vai haver ligao de
um dos primeiros fatores da RNA polimerase.

Slide 22

Basicamente para ns lermos, pode haver fatores que estimulam ou inibem a transcrio,
vamos falar mais nas prximas aulas.

Slide 23

Nos procariotas temos apenas regies de regulao, TATA box, e o exo (gene)

Slide 24

Nos eucariotas temos vrias sequencias de regulao (enhancers ou silenciadores, que

estimulam ou inibem a tranascrio), depois vem a TATA box, depois vrios intres dentro do
gene, podem seguir-se sequencias reguladoras dentro do gene, e depois temos sempre
sequencias reguladoras depois do gene.

Vamos dar estas sequencias de uma forma geral, sem entrar em grande detalhe.

Protenas reguladoras da expresso de genes (que tem que estar presentes na zona de
iniciao aquando do inco da transcrio:

- Activadores transcricionais que se ligam a sequncias especficas do DNA

- Mediadores (so enhancers, promovem a formao de complexos proteicos necessrios)
- Complexos remodeladores de cromatina (ajudam ao desenrolamento da cromatina)
- Enzimas modificadoras de histonas (para promover o acesso da RNA polimerase ao DNA)

44 de 141
Slide 25 e 26

Falando de alguns cofatores

O TFIID liga-se a TATAbox

O TFIIA liga-se ao TFIID e isto constitui as TATA BINDING PROTEIN (TBP) e juntam-se
tambm a este conjunto outro fatores, os TAFs. Isto vai fazer com que haja uma
modificao conformacional na cadeia do DNA. Para que a polimerase se possa ligar
tem que haver esta modificao na estrutura.
O TFIIB liga-se ao local onde o TFIID j est, juntamente com o TFIIA
O TFIIF guia a RNA polimerase para o local onde j esto os outros 3. Nesta altura a
polimerase j est no local mas inativa.
O TFIIE liga-se ao conjunto, promovendo a ligao do TFIIH
O TFIIH promove a ao da helicase que vai desenrolar a cadeia de DNA e formar a
bolha de transcrio. Entra aqui tambm em ao uma cinase cdk que vai fosforilar o
terminal carboxilo da polimerase, dando ento incio transcrio.

45 de 141
A partir daqui h a elongao. Quando chega ao STOP a RNA polimerase liberta o RNA, desliga-
se da DNA e esta volta sua conformao normal.

PROCESSAMENTO
Slide 28

O mRNA no tinha primers, era apenas uma adio de ribonucleotidos. Assim, s e ele ficar
solto vais ser rapidamente danificado. Tem ento que ser protegido para poder ser lido pelo
ribossoma quando for transportado para o citoplasma. E portantovamos falar de duas
modificaes com este fim d eproteo, que vo ocorrer em abos os terminais (5 e 3) do RNA.
As modificaes de que vamos falar so o 5 CAP(occorre na porro 5) e a cauda Poly-A
(ocorre na poro 3).

Slide 29

5CAP

Uma fosfatase remove o grupo fosfato do nucletido

A guanilil transferase adiciona GTP ao terminal 5
A metil-transferase transfere um grupo metilo para a guanosina. Esta metilao
previne a degradao, constitui o chapu que impede a destruio da cadeia pela
extremidade 5. Tem tambm a funo de ajudar no reconhecimento da cadeia de RNA
pelos ribossomas que o vo traduzir no citoplasma.

Slide 30

Cauda Poly-A

No terminal 3 h uma endonuclease que liberta 3OH, que vai permitir a formao desta
cauda na extremidade. A cauda tem vrias adeninas Poly A -(nmero varavel), isto impede a
digesto do DNA na extremidade 3, sinaliza a exportao do RNA do ncleo para o citoplasma
e facilita o seu reconhecimento pelo ribossoma.

Slide 31

Antes da traduo ainda preciso remover os intres. A este processa chama-se SPLICING.
Quando termina tem-se ento um transcrito de RNA que tem uma sequncia codificante
continua.

Slide 32

Splicing: Cada intro tem em cada extremidade uma zona de reconhecimento que o identifica,
a ligam-se protenas, que cortam o intro e aproximam os exes adjacentes.

Splicing alternativo: A existncia de intres permite que a partir da mesma sequncia de genes
se obtenham protenas diferentes. Isto chama-se splicing alternativo. So removidos os intres
mas tambm alguns exes.

46 de 141
Slide 33

Exemplo: o gene da fibronectina vai dar 2 tipos de fibronectina diferentes (a dos hepatocitos e
a dos fibroblastos), como resultado, respetivamente, da ausencia ou presena dos exes EIIS e
EIIA

Slide 34

O controlo de todo este processo vai ser feito a vrios nveis, 6 nveis mais exatamente, que
vo ser falados ao longo das prximas aulas.

47 de 141
 19/10/2016

6.1 Transporte Nuclear/ Citoplasma

Slide 2:

A clula est altamente

compartimentada e por isso tem
problemas de barreiras. H
organelos importantes no
funcionamento da clula, como a
mitocndria, geradora de
energia, o retculo
endoplasmtico, o complexo de
Golgi, etc. As clulas apresentam
mecanismos para levarem as
protenas certas para os stios
certos. Se no interior da
mitocndria no houvesse
protenas, a mitocndria no
podia funcionar. Se no
houvesse possibilidade de
atravessar barreiras
membranares, nunca uma clula
podia exportar protenas. Aquilo
que sai do ncleo e produzido
em termos proteicos tem de encontrar o seu destino. Todas as clulas da matriz
extracelular, como o colagnio, so formados dentro da clula e so exportados para fora
da clula.
O que se passa fora do ncleo?
Tudo que produzido no ncleo, em termos proteicos, tem que encontrar o seu destino.

Slide 3:

Temos 3 tipos de
transportes. Nesta
aula, so abordados 2:
o gated transport
que por poros e o
tranporte
transmembranar. O
transporte vescular
ser abordado nas
aulas seguintes.
48 de 141
Slide 4:

Aqui temos uma viso geral dos 3 tipo de transportes em formato de desenho. H a
traduo de novas protenas no citosol, sendo algumas citoslicas, e ficam pelo citosol, h
outras que trabalham dentro do ncleo, outras dentro da mitocndria e tm que ir para
esses destinos.

Transporte Nuclear

Vamos comear pela parte nuclear para perceber como que as protenas que trabalham
dentro do ncleo, conseguem entrar l, assim como protenas que esto dentro do ncleo e
querem sair. H muitas protenas que entram e saem do ncleo. Assim, tm que utilizar
sempre este tipo de transporte, que um transporte por poros nucleares.

Slide 6:

O que so os poros nucleares?

So estruturas especiais.
O ncleo protegido por uma
camada dupla lipdica que
continua com o retculo
endoplasmtico e por dentro
reforado pela lmina nuclear,
ou seja, h uma srie de
protenas que formam uma
estrutura compacta que d
forma ao ncleo. Esta
estrutura interrompida pelos
poros nucleares, estruturas
altamente complexas por
onde passam os solutos, gua,
etc.

Neste slide, vemos imagens verdadeiras dos poros nucleares, vistos de dentro para fora do
ncleo ou vice versa, ou em corte. Tambm vemos a dupla membrana lipdica. Do lado do
citosol tm fibrilhas e do lado do ncleo tem tipo uns cestos (nuclear basket)
Tudo isto so protenas que vo ser importantes neste tipo de transporte e que controlam a
fronteira entre o ncleo e o citosol.

49 de 141
Slide 7:

O que passa nesta fronteia nuclear?

Protenas maiores de 60 kDa no passam. Regra geral, difcil que molculas muito grandes
(com grande peso molecular) atravessem os poros nucleares. Normalmente, passam as
molculas de peso molecular inferior a 5 kDa que no so protenas, so pptidos ou outro
tipo de compostos (simples). As regras de passagem so os mecanismos que a clula
apresenta e que so muito complexos (j esto bem conhecidos).

Slide 8:

Temos aqui um exemplo muito importante que ajudou a revelar que a localizao nuclear
era sinalizada, ou seja, no s necessrio apresentar o tamanho adequado, tambm
necessrio ser sinalizada, apresentar um sinal que indique o lugar para onde deve ir.
Isto foi descoberto desta forma: utilizou se uma protena modelo, que sabamos que existia
no ncleo e que para a tornar visvel ao microscpio, fez se uma fuso com uma protena
que fluorescente naturalmente. Ou seja, juntamos 2 genes, que normalmente existem
separados. Deste modo, a protena tem 2 componentes: o GFP que fluorescente e v se
ao microscpio onde que esta protena est e este T-antigen que se localiza no ncleo.
Numa situao normal, esta protena est toda localizada no ncleo.
Fazendo uma mutao numa parte da protena, nesta sequncia de aminocidos - lisina-
lisina-lisina-arginina-lisina (aa bsicos com cargas positivas) - mudou se uma lisina para
treonina, ou seja, removeu-se esta carga da 2 lisina. Assim, a protena perde o sinal que
indica que deve permanecer no ncleo e passa a localizar se no citoplasma.
Um sinal nuclear uma srie de aminocidos bsicos seguidos e basta isso para
reconhecer uma protena para entrar no ncleo.

Slide 9:

Como se faz a entrada no ncleo? Para que servem estes aminocidos bsicos?
O processo de importao nuclear bastante complexo e o que acontece que h
protenas acessrias que so transportadoras, como se fossem autocarros que levam do
ncleo para o citoplasma e vice versa. Os passageiros que entram neste autocarro so os
que tm este sinal de localizao, os tais aminocidos bsicos que os identifica e vo fazer a
interface de ligao protena- protena entre o autocarro, que o receptor (receptor de
importao nuclear) e o cargo que a a protena que vai entrar no ncleo que tem o
sinal de localizao intracelular. H vrios receptores que se ligam ao cargo. Os
autocarros vo se ligar a umas protenas que so as nucleopurinas, componentes do
poro. como se os autocarros andassem em estradas e essas estradas so as
nucleopurinas. Esses receptores andam procura de passageiros e uma vez cheios vo se
ligar ao poro nuclear e a primeira interao atravs destas protenas que formam o poro
nuclear nucleopurinas. Uma vez atingido o poro, e ligao nucleopurina, d se o
transporte de fora para dentro.

50 de 141
Como se d este transporte direcional?
Como que a clula controla a direo do transporte?

Se a coisa fosse aleatria, o autocarro podia ficar confuso, no h nada que o leve para a
frente, no h nenhuma fora, gradiente, informao que o direcione, ele tanto pode
entrar como sair. Tem de haver gradientes, de certa maneira foras para que os processos
sejam direcionais e no aleatrios. O movimento das partculas no ar aleatrio mas a
clula um sistema altamente sofisticado e direcional.
O que acontece?

Slide 10

H umas protenas muito importantes que so as GTPases. So protenas chamadas

switch, protenas interruptor. Elas ligam se a este nucletido que o GTP ou ao GDP por
ligaes no covalentes. No fosforilao! Fosforilao controla o contedo proteico que
se utiliza na sinalizao intracelular mas que uma adio covalente de um fosfato a um
aminocido. Neste caso uma protena que tem um pocket, que se liga a um GDP ou GTP
. Quando se liga ao GTP tem uma certa conformao ativa - e quando se liga ao GDP, que
tem menos um fsforo, tem conformao inativa. Por outras palavras, quando est ativa,
liga se a algumas protenas, e no estado que se liga ao GDP, desliga se dessas protenas e
liga se a outras. Por isso que um interruptor. Quando queremos ativao de um
receptor, temos que ter ativao desta protena. As protenas podem converter se em
ativas e inativas sozinhas ou ter ajuda das GAP, que ajudam na inativao, ou seja hidrlise
do GTP em GDP, e das GEF que vo ativar a protena. GTPase muito importante porque
ela oscila entre o estado ativado, GTP, no ncleo e o estado inativado, GDP, no citoplasma,
por causa das GAP e dos GEF. Temos 2 conformaes diferentes em 2 localizaes
diferentes.

Slide 11:

O Ran GTP ajuda a que haja uma interao entre o cargo protein e o receptor, no
citoplasma. Depois os receptores ligam se as nucleopurinas, e quando ao chega ao ncleo,
ele v o Ran GDP, compete com o cargo. Reciclamos quer o receptor quer a Ran.

Slide 12:

H outro processo que o processo de exportao. Neste caso as protenas tem um

export signal para sair do ncleo. Vo se ligar ao receptor, com ajuda do Ran GTP.

Slide 13:

Os genes so ativados por factores de transcrio e estes so sintetizados no citoplasma.

No entanto, so protenas que precisam de ir para o ncleo. O que acontece muita das
vezes que os fatores de transcrio ficam no citoplasma at serem ativados. Alguns so
51 de 141
reativos a estmulos que a clula recebeu. Ou seja, s quando a clula recebe um certo
estmulo ou entra num certo estado que h uma sinalizao desse fator de transcrio,
que estando no citosol est totalmente inativo e s no caso do fator de transcrio ser
ativado que transportado para o ncleo e vai transcrever genes.
Fosforialao tambm um mecanismo de ativao de protenas, mas diferente das
GTPases, atravs de ligaes covalentes. Quando a protena fosforilada, deixa de ter
capacidade de entrar no ncleo. A clula ativada por um processo inflamatrio (por
exemplo) e das primeiras coisas que faz ativar a fosfatase que retira os fsforos, e expe
os sinais de importao para o ncleo. A factor de transcrio entra no ncleo e transcreve
os genes associados. Depois, dentro do ncleo h uma cinase que desfosforila e o factor de
transcrio sai do ncleo.

Processos Transmembranares

O que acontece na exportao de protenas? O que acontece na superfcie do Retculo

Endoplasmtico? Permite a localizao de 2 tipos de protenas, protenas estas que so
destinadas para exportao, tm que atravessar uma membrana, e tambm protenas de
membrana (permanentemente na membrana).
Temos a traduo do polipptido, no ribossoma, e certas protenas so formadas. Aqui
temos uma sequncia de sinais signal sequence. O ribossoma vai para a superfcie da
membrana do RE, que tem receptores. Protena com 2 subunidades que forma um poro
muito simples e pequeno onde um polipeptido pode atravessar a membrana, s pode ser
uma protena esticada. Depois h chaperons que as enrolam. Lmen do RE rico em
chaperones, pois necessrio enrolar todas as protenas que l entram.
Protenas de membrana so uma variao deste processo, mas funciona na mesma com um
signal sequence. No h translocao de toda a protena, vai haver uma sequncia que
identificada pelo canal. Metade da protena dentro e outra metade fora. Depois entram no
RE e vo ser transportadas para outras vias por vesculas.
Terminal amina dentro e terminal carboxilo fora (mas h outras que ao contrrio).

Outra situao com interesse em doenas:

Muitas doenas tm a ver com protenas instveis, no enrolam bem e no so ativas.
Como no so ativas, h um dfice de uma dada funo na clula, e causa doena. O RE
tem um sistema de emergncia que faz com que se livre destas protenas. Imaginem uma
clula que tem uma mutao que produz uma protena instvel. S sai do RE as que so
estveis. H uns poros que as tiram para fora que depois so degradas pelo proteossoma,
por ubiquitinao, por exemplo, no citoplasma. O RE fica aliviado, no comprometendo
as outras funes da clula.

II Processo: processo de entrada na mitocndria (complexo) um problema duplo, porque

a mitocndria tem membrana dupla. Como se resolve o problema? Com um signal
sequence.
52 de 141
H protenas destinadas mitocndria que so sintetizadas com sequencias especficas de
modo a serem identificadas para entrar na mitocndria. Temos uma signal sequence que
se liga ao receptor do exterior da mitocndria, este receptor uma vez ativado entra em
conexo com o outro receptor, atravs do polipptido. Faz se uma translocao dupla.
uma espcie de duplo poro, onde passa a lombriga da protena, atravs das duas
membranas e acaba na matriz.
Temos uma srie de receptores e poros na membrana externa e poros na membrana
interna.

O que determina na mitocndria e no RE a entrada da protena?

Shaperones enrolam as protenas e consomem ATP para ajudar no enrolamento, para que
a protena encontre a sua conformao mais estvel. Tambm existem no citoplasma e so
umas espcies de mos que puxam fora do ATP.

Cada sistema tem sinais, as protenas so fabricadas com sinais que os levam ao seu
destino. aquilo que comum nos 3 processos.

53 de 141
 6.2 Traduo Proteica e Modificaes Ps-
Translacionais

A passagem do DNA para RNA chama-se transcrio. Este processo usa o mesmo tipo de
linguagem (passa de nucletidos de DNA para nucletidos de RNA).

A passagem de mRNA para uma protena traduo diferente, pois a linguagem

diferente (passamos de nucletidos para aminocidos).

PROBLEMA:
Como passar dos 4 tipos diferentes de nucletidos que existem para os 20 tipos de
aminocidos?

A nica forma de obtermos os 20 a.a. atravs da sua codificao por conjuntos de 3

nucletidos (tripletos), pois 4x4x4 = 64.
Mas como no temos 64 tipos de aminocidos conclumos que o cdigo gentico
redundante e que vrios tripletos levam formao do mesmo a.a.

Elementos Essenciais para a Traduo:

mRNA

RNAt:
As molculas de RNAt funcionam como adaptadores que reconhecem e se
ligam a um determinado codo, de um lado, e do outro esto ligados a um
a.a. especfico.
A molcula de RNAt capaz de emparelhar com alguns nucletidos
complementares da prpria molcula, originando uma molcula em forma de
trevo (2D=. A forma mantm-se por se terem estabelecido ligaes de
hidrognio nesses locais.
A molcula de RNAt apresenta uma zona onde no h emparelhamento: o
anticodo sequncia de 3 nucletidos complementar de um determinado
codo do RNAm
Na extremidade 3 do RNAt (que de cadeia simples) liga-se o a.a. que
codificado pelo codo.
A redundncia do cdigo gentico implica que ou haja mais de um RNAt para os diferentes
a.a. ou que um RNAt seja capaz de emparelhar com diferentes codes.
Acontece ambas as situaes:
Existem a.a. que tm mais de um RNAt e tambm, alguns RNAt que esto construdos de tal
forma que apenas requerem preciso para o reconhecimento dos dois primeiros nucletidos
de um codo, tolerando o 3.
ENZIMAS:
As enzimas responsveis pelo reconhecimento e estabelecimento de uma ligao covalente
entre o a.a. e a sua molcula de RNAt apropriada so as aminoacil-tRNA sintetases. Existem
20 tipos diferentes desta enzima, uma para cada a.a.

54 de 141
Como que a sintetase sabe que quele RNAt deve ser adicionado um determinado a.a.?
Atravs de nucletidos especficos situados no RNAt na regio de ligao a um a.a. e no
anticodo.

A reao catalisada pelas sintetases requer energia, obtida pela hidrlise do ATP a AMP. Esta
energia permite numa primeira etapa ativar o a.a. e numa segunda etapa, uma ligao de alta
energia entre os RNAt e os a.a. A energia desta ligao vai ser posteriormente usada na sntese
proteica, para ligar os a.a. entre si, covalentemente, na cadeia polipeptdica

RIBOSSOMAS:

A mensagem do RNA descodificada nos ribossomas em particular nos ribosimas

(ribossomas com propriedade cataltica)

(Ribossoma: complexo constitudo por diferentes protenas ribossomais e diversas molculas

de RNA chamadas RNAs ribossmicos)

Este complexo responsvel por capturar as molculas de RNAt, p-las em posio e ligar
covalentemente os a.a. entre si.

Os ribossomas so constitudos por uma pequena subunidade responsvel pelo processo

de ligao dos RNAt aos codes do RNAm e a grande subunidade responsvel por catalisar
a formao das ligaes peptdicas entre os a.a., originando a cadeia polipeptdica.

As duas subunidades juntam-se no RNAm, iniciando a traduo. O RNAm puxado ao longo

do ribossoma. medida que a molcula de RNAm se move ao longo do ribossoma, este vai
realizando a traduo de codes em a.a. No fim, as duas subunidades do ribossoma separam-
se.

Os ribossomas apresentam 1 centro ativo para a molcula de RNAm e 3

para a de RNAt (A anticodo recm chegado de RNAt liga a codo de
mRNA, P anticodo de RNAt ligado a codo de mRNA e E RNAt sem
a.a.).

55 de 141
 TRADUO ETAPAS
1) INICIAO:

1. O RNAt que inicia a traduo o RNAt de iniciao e est ligado a

uma metionina. O RNAt de iniciao liga-se primeiro pequena
subunidade do ribossoma juntamente com fatores de iniciao da
traduo que se encontram ligados a esta subunidade.

2. O RNAt de iniciao liga-se ao centro ativo P da pequena

subunidade do ribossoma.

3. A pequena subunidade do ribossoma liga-se a extremidade 5 do

RNAm (que sinalizado pela CAP)

4. A subunidade pequena move-se ao longo do RNAm, em direo a 3

at encontrar o codo de iniciao.

5. Quando a subunidade encontra o AUG os factores de iniciao

dissociam-se e a grande subunidade liga-se.

2) ENLONGAMENTO:

1. Tendo em conta que a RNAt de iniciao esta ligada ao centro ativo

P, ento o centro ativo A est livre para se associar a uma nova RNAt
ligada EF-Tu/EF-1 (fatores de enlongamento) com GTP. Ao chegar ao
ribossoma o GTP hidrolisado em GDP + P, o fator dissocia-se do
tRNA+aa e a ligao peptdica pode ser realizada entre este aa e o
anterior.

2. A nova RNAt liga-se por complementaridade ao codo

correspondente e associa-se ao centro ativo A do ribossoma.

3. No ribossoma o peptyl sintetase catalisa a formao de uma ligao

peptdica entre o a.a. transportado por este RNAt e a metionina
clivando a ligao entre o aa e o tRNA no sitio P.

4. A reao provoca uma mudana de conformao e a grande

subunidade do ribossoma avana, deslocando os dois tRNA dos seus
stios: a RNAt que codifica para a metionina passa para o c. activo E do
ribossoma, enquanto que o ultimo RNAt que se ligou passa para o
centro activo P.

5. O Fator de alongamento EF-G/EF-2- GTP liga-se ao stio A e provoca mudanas

conformacionais que deslocam o mRNA e a subunidade pequena anda 3 nucletidos para a
frente, atravs da hidrlise de GTP, ficando em contacto com um novo nucletido, ao qual se
liga, por complementaridade, outra RNAt que est ligada a um a.a. especifico que se vai ligar,
atravs de uma ligao peptdica, com o a.a do centro activo P da enzima do peptidil RNAt.

() ocorre muitas vezes este ciclo at que se alcance o codo stop.

56 de 141
 3) TERMINAO:

Os codes UAA, UAG e UGA no possuem RNAts

correspondentes logo no codificam nenhum a.a. e
representam codes STOP.

1) Fatores de dissociao, ligados ao GTP, ligam-se ao

stio A quando um codo stop aparece

2) Peptidil-transferase (que a enzima responsvel

por catalisar a reao de formao uma ligao
peptdica entre 2 a.a. diferentes) hidrolisa a ligao
entre a cadeia polipeptdica e o ltimo RNAt.

3) O polipptido separa-se do RNAt e liberado

4) mRNA libertado

Poliribossomas
Os polirribossomas dizem respeito
a um conjunto de ribossomas ligados
a uma nica molcula de RNAm. Este
conjunto de ribossomas ligados
RNAm, possibilitam a formao
rpida de um conjunto de protenas
iguais, a partir de uma nica
molcula de RNAm. Assim, ainda um
ribossoma no terminou a sntese da
protena e j muitos outros
ribossomas se ligaram a RNAm para
realizar mais tradues.

As protenas ao sarem da traduo e ao serem feitas comeam a mostrar

sinais que indicam para onde ela vai ser deslocada.

H medida que vai saindo do ribossoma e mostrando sequncias pode ir

para vrios locais.

importante salientar as que vo para membranas ou que so secretadas,

pois passam pelo RE (O RE recebe os ribossomas que comearam a traduo
e que tm sinais/sequencias para irem para o RE)

O sinal lido Protena liga-se a esse sinal transporte at membrana

do RE protena liga-se a um recetor nessa membrana Protena entra
para o RE

57 de 141
 No RE comeam as MODIFICAES PS-TRADUCIONAIS

Caracterizam-se por:

CLIVAGEM

Muito importante para a maturao ou

processamento da protena.
Remove as metioninas iniciais correspondentes
ao codo de iniciao
Remove pptidos sinais

Ex: INSULINA

A proinsulina (no funcional) sai do ribossoma e tem

vrios elementos com pontes entre eles, desloca-se para
o Golgi e a essas ligaes so cortadas em locais
especficos (clivagem) e forma-se uma insulina
(funcional)

GLICOSILAO

Pode ser ps-traducional aps a traduo ou co-traducional

ao longo da traduo.

Adio covalente de um oligossacardeo ao grupo amina

(N-glicosilao) ou ao grupo OH da protena (O-
glicosilao).
Podem ocorrer em vrios locais diferentes tais como no
RE, no Golgi e em vesiculas de secreo
Ajudam na estabilidade das protenas (aucares tornam
a protena solvel melhor estabilidade meio semi-
aquoso) e no correto enrolamento (folding).

58 de 141
 LIPIDAO

Adio covalente de lpidos s protenas

que vai ancorar a protena
membrana, facilitando a integrao da
protena membrana (muito
importante nas protenas
membranares).

FOSFORILAO/DESFOSFORILAO

a adio de um grupo fosfato (PO4) a um aminocido de uma cadeia proteica. A reao :

ATP + protena fosfoprotena + ADP

uma das principais modificaes ps-traducionais (+ de

1/3 das protenas).
Ora pode ativar ou inativar a protena.
Exerce papel crucial em inmeros processos celulares;
muitos recetores e enzimas so ativos ou inativos pela
fosforilao e desfosforilao.
O grupo fosfato fortemente negativo, ento sua adio
induz foras na cadeia proteica que podem levar a uma
radical alterao em sua conformao. Desse modo, uma
protena pode expor os aminocidos antes escondidos no
seu centro e mudar muito as suas caractersticas. Por
exemplo, uma protena apolar e hidrofbica pode se
tornar polar e hidroflica.
um processo reversvel.

UBIQUITINAO

Muito importante para sinalizar que uma protena tem que ser degradada.

Ligao covalente de uma pequena protena ubiquitina lisina em srie que marcam a
protena para a destruio pelo proteossoma.

59 de 141
 ACETILAO/DESACETILAO

Adio de acetil a lisinas ALTERAM A CARGA

METILAO/DESMETILAO DA PROTENA E A
CONFORMAO
Adio do grupo metil (podendo-se colocar 1, 2 ou 3)

So Reversveis

A acetinao/desacetinao e metilao/desmetilao so importantes tambm noutro

contexto, os histonas.

Os histonas tm uma cauda dos primeiros aminocidos ainda de estrutura primria que fica
para fora. Nessa cauda podem realizar-se uma variedade de modificaes ps-traducionais,
especialmente a acetilao que vai mudar a afinidade desses histonas para o DNA
desenrolam ou apertam o DNA

Ex:

Acetilando alguns resduos de

lisinas nessas caudas de
histonas mudvamos a cauda
dessa protena ficava mais
neutra perdia afinidade
para o DNA.

Concluindo temos apenas

cerca de 20 a 25 mil genes e
as nossas clulas tm mais
de 1000000 de protenas,
isto acontece devido
diversidade de processos e
modificaes que ocorrem
tanto ao longo da traduo
como ps traducionais.

60 de 141
 6.3 Via Secretria e Organelos Acessrios

Todas as clulas devem alimentar-se, comunicar com o mundo sua volta e

responder rapidamente a mudanas no seu ambiente.

De modo a completar estas tarefas, as clulas alteram continuamente a

composio da sua membrana plasmtica como rpida resposta s suas
necessidades.

Elas utilizam um elaborado sistema intramembranar para adicionar ou remover

protenas transmembranares da superfcie celular, como recetores, canais
inicos e transportadores.
Atravs deste processo de exocitose, a via secretria entrega protenas,
hidratos de carbono e lpidos membrana citoplasmtica ou ao meio
extracelular.
Atravs do processo inverso de endocitose, as clulas removem
componentes da membrana plasmtica e entregam-nos a
comportamentos internos, os endossomas, a partir dos quais eles podem
ser reciclados e distribudos pelas clulas ou transmitidos aos lisossomas
para degradao.

A partir deste mecanismo, a clula tambm capaz de captar nutrientes
importantes, captados sob a forma de macromolculas, sendo depois libertados
no citoplasma para utilizao em vrios processos biossintticos.

O transporte vesicular implica a formao de vesiculas de transporte. Estas

vesculas de transporte destacam-se de uma membrana e fundem-se com outra,
transportando componentes membranares e molculas solveis considerados o
cargo. O trfego vesicular orienta-se segundo rotas organizadas que
direcionam a vescula para o compartimento final correto.

PROTEINAS IMPORTANTES

Existe uma superfamlia de protenas que regula este trfego vesicular, a

superfamlia das Rabs. Estas protenas esto envolvidas na sinalizao
das protenas que iro ser transportadas.

GTPases So protenas que hidrolisam GTP e, portanto, ligam-se ao

GDP e trocam o nucletido. As protenas que se
chamam GAP catalisam esta troca. Assim as
GTPases juntamente com as GAP hidrolisam o GTP.

Estas protenas (GTPases) ligam-se ao GTP atravs

de efetores, ficando desta forma ativas. Os efetores
no so mais do que protenas que vo
desempenhar certas funes como por exemplo os
motores moleculares so efetores das protenas
Rabs ou Arfs. H vrios tipos de protenas Rabs e
Arfs. H cerca de 65 Rabs e 22 Arfs.

61 de 141
As protenas referidas esto
localizadas em compartimentos
especficos da clula, de tal forma
que so utilizadas como
marcadores. Por exemplo as
protenas Rab1 e Rab6 esto
localizadas no complexo de golgi,
etc. importante perceber que
cada organelo tem uma funo
numa determinada via de transporte
vesicular (via secretria, via
endoctica).

NOTA:
compartimento=organelo

Cada uma das protenas referidas tende as estar num compartimento especfico,
caraterizando esse compartimento. Pois o facto de existirem determinadas
protenas num compartimento que permite que este adquira uma funo
especfica.

Complexos de protenas adaptadoras (complexos AP) Formam uma camada

de revestimento posicionada entre a membrana das vesculas e a camada
externa de claterina(clathrin). Os complexos AP ligam a camada de claterina
membrana da vescula e determinam o tipo de protenas cargo que sero
transportadas na vescula. Os complexos AP existentes so AP1, AP2, AP3,
AP4(constitudos por quatro subunidades proteicas) e GGA (constitudo por uma
cadeia nica)

62 de 141
 LPIDOS

Os lpidos tambm tm um papel muito importante no transporte

vesicular.
Os lpidos so fosforilados e, consoante a fosforilao (dupla ou
tripla), os lpidos ligam-se a diferentes protenas. Ou seja, tal como
as GTPases que se ligam efetores, os lpidos ligam-se a protenas
quando esto fosforilados.

Em concluso: A clula pode ento regular a fosforilao atravs

de cinases ou fosfatases, e pode regular quais as protenas que se
vo ligar e desligar.
Este sistema permite que a clula controle rapidamente e
facilmente se as protenas se ligam ou no aos efetores que fazem
uma determinada funo (provocam um efeito biolgico).
Portanto quando necessria uma funo as protenas ligam-se
aos efetores, quando deixa de ser preciso as GTPases deixam de
ser ativadas, ou so fosforiladas/desfosforiladas e, por isso, fcil
de determinar o processo de ligao ao efetor.
PASSOS DO TRFEGO VESICULAR

H a formao da vesicula no compartimento chamado dador ou de origem.

Depois forma-se uma vescula que transportada para o compartimento de
destino/alvo. Por fim, ocorre a fuso de modo a que as protenas que se
encontravam no compartimento dador sejam transportadas para o novo
compartimento.

PASSOS DO TRFEGO CELULAR

SO 5 PASSOS:

1- SORTING (FORMAO DE VESCULAS)

Este passo est associado a um processo que fundamental que a

seleo das protenas, dos lpidos ou molculas (o cargo). Ou seja, nem
todas as molculas que se encontram no compartimento dador vo ser
transportadas para o compartimento destino.

NOTA:
Pois se tal acontecesse, o compartimento destino
transformar-se-ia no compartimento dador, como por
exemplo, se todas as molculas do complexo de golgi
fossem transportadas para os ribossomas, estes
transformar-se-iam no complexo de golgi. Por isso,
bastante importante haver uma seleo para garantir
que cada compartimento assegura a sua identidade.

63 de 141
Seleo de protenas a serem transportadas:

A seleo feita por vrios processos, como por exemplo, atravs das
protenas adaptadoras (adaptor proteins). As protenas adaptadoras so
protenas com vrias subunidades.

O que importante saber acerca destas protenas que estas ligam-se

recetores transmembranares que capturam molculas solveis para
dentro da vescula, as molculas cargo.
1. So os recetores que se ligam a estas protenas que emitem os
sinais (vo constituir o cargo).
2. Os sinais so compostos por aminocidos que permitem que as
protenas sejam reconhecidas pelas protenas adaptadoras e,
desta forma, decidir para onde que estas sero transportadas.
3. Pois nem todas as protenas do compartimento dador so
transportadas, visto que, s so transportadas as protenas que
emitem o sinal.
4. Todas as protenas que emitem o sinal ligam-se s protenas
adaptadoras e vo ser concentradas na zona onde se forma a
vescula.

As protenas adaptadoras, tal com as Ras, as Rabs, as arfs e GTPases que

esto armazenadas em compartimentos especficos, no esto
espalhadas por toda a clula e concentram-se em diferentes organelos. A
sua concentrao em diferentes organelos determinada pela funo da
protena.

64 de 141
 COAT PROTEINS

O que tambm importante de referir quanto s protenas adaptadoras que,

para alm das subunidades que se ligam aos recetores, estas tambm possuem
outras subunidades, como o caso dos locais de ligao clathrin.

A clathrin uma coat protein Responsvel por formar uma estrutura exterior
volta da vescula (forma uma espcie de uma gaiola).

Tambm existem outras coat proteins como a COP I e a COP II, e estas
encontram-se sempre por fora da membrana.

Em concluso, as coat proteins so responsveis por revestir as vesculas.

Mais uma vez, de fazer referncia que as coat proteins tambm s esto
localizadas em certos compartimentos da clula porque como bvio a
sua funo est relacionada com a funo da protena, por exemplo:
A COP II est no retculo endoplasmtico para que acha o
transporte de vesculas do reticulo endoplasmtico para o
complexo de golgi.
A COP I est presente no complexo de golgi porque vai formar
vesculas para que estas sejam transportadas para o retculo
endoplasmtico
As clathrin encontram-se mais espalhadas pela clula, mas
normalmente so encontradas no retculo endoplasmtico,
complexo de golgi e ribossomas.

65 de 141
 FORMAO DA VESCULA

1. Uma das protenas adaptadoras

recrutada e uma das suas subunidades
ATENO:
liga-se aos recetores ligados aos sinais
Cada tipo de adaptadora
das protenas (molcula cargo) que
especfico de um conjunto de
estejam na membrana do compartimento
recetores e a sua utilizao
dador.
conduz formao de um
tipo especfico de vescula.
2. Por sua vez, a protena adaptadora vai
recrutar uma coat protein que ir ligar-se
a uma subunidade da protena adaptadora.

3. Assim sendo, temos que a formao do coat introduz curvatura na

membrana, o que conduz formao de salincias da membrana (bud
formation).
4. As protenas adaptadoras ligam-se aos recetores de molculas cargo
ligados membrana, mediando o recrutamento seletivo da membrana e
das molculas cargo para a vescula. O coat de clathrin
rapidamente desintegrado aps a formao da vescula.

5. Depois de isto ocorrer e de se formar uma estrutura de coat proteins

volta da vescula, necessrio que haja a ciso da vesicula (a membrana
da vescula separa-se da membrana do organelo no qual tem origem).

Para que haja a separao da vescula da membrana do compartimento dador

h a interveno da protena dynamin que ir fazer a ciso entre a vescula e a
membrana.

66 de 141
 A dynamin possui: NOTA:
Um domnio PI(4,5)P2 que permite a Sem hidrlise de
sua ligao membrana; GTP no h a
Um domnio GTPase, que regula a taxa separao da
de destaque das vesculas. vescula

O processo de destaque consiste:

1. Na aproximao dos 2 folhetos da membrana do organelo de origem e

funde-os, permitindo que a vescula fique selada.
2. Uma vez libertada da membrana, a vescula perde o seu clathrin coat.

Para esta tarefa, a dynamin recruta outras protenas para o neck do bud
(pescoo da bud formation) sendo que a sua ao conjunta destabiliza
a interao entre as camadas da bicamada fosfolipdica, atravs da
alterao da sua composio lipdica ou pela interveno de enzimas
modificadoras de lpidos.

necessrio perceber que a interveno destas coat proteins

importante para a deformao da membrana do organelo!

Pois para alm de no fcil deformar uma

membrana da ser necessrio a utilizao de
energia e de existirem protenas que estabilizem a
membrana quando a vescula formada, da a
importncia destas protenas.

Depois da vescula ser desintegrada as coat proteins so libertadas para que a

vescula possa depois ser reconhecida e ser fundida.

67 de 141
 2- TRANSPORTE

Ocorre atravs dos motores moleculares.

NO ESQUECER!!

Sendo que a quinesinas transportam para a extremidade da clula e as dinenas

transportam para o centro da clula. Os motores so ativados e interagem com
os filamentos do citoesqueleto (filamentos de actina) consoante as protenas
Rabs estejam ativadas ou no. Se esta esta protena for inativada o motor
desligasse do filamento de actina e do se d o transporte da vescula.

(NOTA: rever a aula de motores moleculares)

3- TETHERING

o reconhecimento da vesicula, com uma distncia considervel da

membrana.

Pois antes de se iniciar o processo de fuso necessrio que haja um

reconhecimento. Visto que, no podem existir protenas que so
transportadas para um compartimento errado, da a importncia deste
passo.

Assim, para assegurar um movimento ordenado do trfego vesicular, as

vesculas de transporte devem ser altamente seletivas no
reconhecimento da membrana alvo com a qual se iro fundir.

Esta especificidade assegura pelo facto de:

Todas as vesculas possurem marcadores superficiais que as identificam

conforme a sua origem e contedo e de as membranas possurem recetores
complementares que reconhecem os marcadores apropriados.

Este processo depende das

protenas Rab, que direcionam a
vesculas para lugares
especficos da membrana alvo,
e das protenas SNARE, que
medeiam a fuso das camadas
lipdicas.

68 de 141
Existem protenas que so responsveis por este reconhecimento e tm o nome
de coiled-coil.
Estas protenas so alongadas e
estendem-se por uma distncia
considervel e, portanto, formam uma
ponte entre a vescula e a membrana do
compartimento destino.
Esta protena s se liga vesicula quando
existe uma protena Rab ativa sua
superfcie, fazendo a ligao entre a
vescula e a protena responsvel pelo
reconhecimento. Se no existir uma Rab
ativa no ocorrer o tethering.

Desta forma:
1. feito o reconhecimento da vescula
2. Que depois se aproxima da membrana do compartimento destino
3. E funde-se com a sua membrana.

Outro processo de reconhecimento mediado por

complexos de protenas que formam mais uma vez a
ponte entre a vescula e a membrana do
compartimento destino.

4- DOCKING

um processo, que ao contrrio

do tethering que era de longa
distncia, este de curta
distncia.

Este mediado por protenas Rab

que quando esto ativas ligam-se
aos efetores, permitindo mais uma
vez um reconhecimento e se este
for bem feito e no ocorrer nenhum
problema, d-se de seguida a
fuso.

69 de 141
 5- FUSO

mediado por protenas SNARE.

PROTENAS SNARE

A famlia deste tipo de protenas tambm bastante extensa e possui vrios tipos
de protenas SNARE.
Estas esto, mais uma vez, distribudas especificamente pelos compartimentos.
Estas protenas distribuem-se em:
v-SNAREs (v de vescula)
t-SNAREs (t de target ou alvo)

PASSOS DA FUSO:

1. As v-SNAREs ligam-se s t-SNAREs e formam uma estrutura de hlice

quadrupla (4 hlices ) que ficam enroladas e formam o SNARE complex.

2. Este SNARE complex muito estvel e permite que as membranas se

fundam, ultrapassando a barreira de energia que se forma para as
membranas se fundirem.

3. As membranas tm de estar muito prximas para que ocorra a fuso.

70 de 141
4. A estrutura das protenas SNARE torna-se to estvel que necessrio
que haja um complexo de protenas que desmonte este complexo.

5. Este processo envolve ATP permitindo, assim, a desmontagem dos

complexos.

6. As molculas lipdicas dos dois folhetos

da bicamada que interagem fluem por
entre as membranas para formar um
canal comunicante;

7. Os lpidos dos outros dois folhetos

contactam entre si, formando uma nova
bicamada lipdica que amplia a zona de
fuso;

8. A rutura da nova bicamada completa a

reao de fuso.

71 de 141
NOTA FINAL:

As protenas Rabs que participam em vrios momentos do trfego celular j

tm de estar ligadas vescula desde incio. Logo, a vescula est logo desde
incio direcionada para um destino.
As protenas SNARE e Rab so inativadas atravs da protena GAP que
catalisa esta inativao quando j no necessitam de fazer a sua funo e so
recicladas, visto que, no so degradadas.

RESUMINDO...

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(INTRODUO AOS APONTAMENTOS DA PRXIMA AULA)

VIA SECRETRIA

aquela que seguida pelas as protenas que so sintetizadas pelo

retculo endoplasmtico rugoso.
Segue atravs do complexo de golgi.
Estas podem ficar na prpria membrana plasmtica, podem ser
secretadas para fora da clula ou podem ser direcionadas para a via
endoctica

VIA ENDOCTICA
A via endoctica comea na membrana plasmtica. Segue atravs dos
endossomas para os lisossomas.

VIA DE RECICLAGEM
Esta seguida pelos recetores que trazem os ligandos da superfcie da
membrana para que estes sejam reciclados (por exemplo, protenas Rab
e protenas SNARE) para o novo ciclo.
Os ligandos permanecem dentro da clula, mas os recetores voltam a sair
para fazer o novo passo de endocitose.

73 de 141
 6.4 Via Endoctica e Organelos Acessrios

No esquema:
setas azuis - via endoctica
setas verdes -via de
reciclagem.
Faltam algumas vias
porque um esquema
simplificado, mas o
objetivo da aula perceber
as principais vias.

Via secretria:
Comea no retculo
endoplasmtico (RE).
Este pode ser:
Liso
Rugoso
Retculo endoplasmtico
O retculo endoplasmtico liso (REL) estende-se por quase toda a clula e tem como funes:
sntese de lpidos, fosfolpidos, esteroides e glicoprotenas;
destoxificao,
metabolismo de carboidratos e esteroides;
um dos principais locais dentro da clula onde armazenado clcio- quando preciso um
aumento de clcio ao nvel intercelular h libertao de clcio do RE-Importante!

Na imagem v se o retculo endoplasmtico rugoso

(RER) (chama se rugoso porque tem os ribossomas
associados).
Funo principal do RER:
sntese proteica;
Outras funes:
glicosilao (glicosilao mais completa no golgi),
enrolamento de protenas
mecanismos de controlo de qualidade para as
protenas (se esto bem enroladas ou no).

Relembrar: a sntese proteica pode ocorrer ao mesmo

tempo que a insero de protenas do lmen do RE,
principalmente protenas que vo seguir a via secretria.

74 de 141 1
Insero de protenas no lmen do Retculo
1) H uma sequncia de
sinal no inicio da protena
que se liga a uma protena
que reconhece essa
sequncia de sinal- SRP;
2) H um recetor na
membrana do retculo
endoplasmtico para essa
protena;
3) H um canal de
translocao para onde a
protena vai ser inserida,
portanto h medida que est a ser traduzida a protena vai ser inserida no RE e, portanto,
vai ficar no lmen do RE onde vai ser enrolada.

Relao RE-Golgi

Aparelho de Golgi:
um sistema de vrias cisternas e vesculas. constitudo por:
Cis golgi- parte proximal ao RE, encontra-se em contacto com o RE;
Golgi staks (vesiculas achatadas)- parte mediana;
TGM (Trans golgi network) -Importante! - onde acontece o sorting e onde o trfego
prossegue para outros lugares da clula, para a membrana plasmtica ou para os endossomas
e, portanto, liga-se via endoctica (de reciclagem).
H trfego num sentido e noutro e este dependente
da COP 2 (do RE para o golgi) e COP1 (do golgi para o RE-
trafego retrgrado).

As protenas vo progredindo do cis golgi para o golgi stack

e para o trans golgi por onde saem.
Vesculas volta asseguram o trfego entre as stacks.
Na imagem vemos a ligao do RE com o golgi:
1) transporte dependente da COP 2
2) vesculas que so coated pela COP 2
3) transporte retrgrado pela COP1.

Formam-se ainda vesculas e tbulos para assegurar o

transporte entre o RE e o golgi.

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Budding de vesculas associada COP II
GTPase (pode estar ativa ou
inativa) como est no citosol, est
inativa e ligada ao GDP. Liga-se a uma
protena que est na membrana do
retculo endoplasmtico (GEFs-trocam
GDP por GTP o que vai ativar a protena
e alterar a conformao desta,
permitindo a sua ligao a efetores).
Esta alterao de conformao vai
expor o domnio hidrofbico, N-
terminal, que permite a interao com a camada lipdica da membrana, a protena fica, assim,
estabilizada na membrana e ativa. Como est ativa pode recrutar outras protenas - efetores,
que, neste caso, sero protenas que pertencem coat da COPII (Sar1 GTPase ativa recruta
as protenas da coat). H recetores e ligandos que foram sequestrados na vescula para serem
transportados, interao da cauda citoplasmtica com a coat (e tambm com a protena e com
outros motivos) Explicao da imagem.

Forma-se a vescula (Budding) e, quando esta se

separa da membrana, d-se o uncoating. Se a protena
teve de ser ativada para recrutar as protenas COPII da
coat, logo basta inativ-la, com uma Gap que foi
recrutada pela protena ativa e que vai catalisar a
hidrlise do GTP, que passa a GDP, muda a
conformao e perde a interao com a membrana
(domnio hidrofbico fica recolhido), d-se a
desagregao das coats, a protena Sar1 perde
afinidade membrana, separando-se desta e fica s a
vescula com os recetores e as protenas que tem de ser transportados.

76 de 141 3
Via secretria
Secreo:

Constitutiva
Regulada
Na via constitutiva a
fuso da membrana
desregulada, de acordo
com o livro (o professor no
concorda, diz que apenas
no ativada por nenhum
estmulo especfico, mas
regulada, pois tm de
existir protenas que o
regulam).

No TGM (trans Golgi network), h formao de vesculas que levam certas

protenas/macromolculas para a membrana plasmtica, os recetores ou protenas
transmembranares ficam na membrana plasmtica e as protenas que esto no lmen so
secretadas (clulas secretam protenas ou precisam de recetores superfcie para o fazerem).

H protenas que so secretadas ou seguem a via secretria da forma constitutiva, ou seja,

algo que est sempre a acontecer e que a clula precisa constantemente, por exemplo, a
albumina (esta produzida pelo fgado, secretada pelos hepatcitos, sendo muito abundante
no soro).

H outras em que tem de ser de uma forma regulada, ou seja, s quando necessria, por
exemplo, a insulina. As protenas que tm uma secreo regulada acumulam-se numa vescula
secretria, que fica dentro da clula, espera de receber o estmulo, quando este se d, h fuso
e secreo de enzimas ou protenas que estavam acumuladas na vescula.

Por defeito, considera-se que as clulas que no tm secreo regulada tero secreo
constitutiva (no se sabe o que que as regula, pois um processo muito rpido). Na regulada
as vesculas esto acumuladas na clula, facilmente visvel, prontas a fundir (h protenas que
impedem a secreo, s quando h o estmulo que se d a fuso e secreo).

Sabe-se, no entanto, muito pouco acerca do que regula a secreo constitutiva, por ser
um processo muito rpido, que est sempre a acontecer. Por este motivo, muito difcil
observar e estudar vesculas, uma vez que aps se formarem, estas so secretadas e fundem-se
com a membrana. Por sua vez, as vesculas envolvidas na secreo regulada ficam acumuladas
na clula, na ausncia de estmulo, e podem ser observadas.

A regulao acontece ao nvel do tethering, do docking e da fuso, uma vez que as

vesculas esto prontas a fundir, tm toda a maquinaria necessria para que a fuso ocorra, mas
h protenas que impedem que isso acontea at haver um estmulo de, por exemplo, clcio,
que detetado pela clula, ativando uma das protenas presentes na vescula, constituindo o
sinal para fundir. Assim, apenas os ltimos passos que esto congelados e s quando h um
estmulo que acontece a fuso (as SNAREs juntam-se, etc.).

77 de 141 4
VIA ENDOCTICA
Endocitose o uptake, a internalizao ou a entrada no s de protenas que esto na
membrana, mas tambm de fluido extracelular. H dois processos que se podem distinguir:
pinocitose e fagocitose. Pinocitose a entrada de fluido, mas tambm protenas de membrana
e lpidos. Por sua vez, a fagocitose a internalizao de partculas (bactrias e no s) maiores
que 0.5 ou 0.75 m.

O processo de endocitose , ento, um processo de formao de uma vescula. Todos

os processos so assentes nos princpios referidos na aula anterior.

Na imagem acima, observamos a formao de uma vescula (cuja coat , provavelmente,

de clatrina), com a cargo a transportar (protenas, recetores, ligandos, etc) e houve um sorting
acumulao, naquela zona, das protenas que vo ser transportadas e tambm cargo solvel.
Depois, acontece o budding e dentro da vesicula acumulam-se as protenas e outras molculas
que vo ser internalizadas. Seguidamente, d-se o processo da ciso, que dependente de
dinamina ( a mais conhecida e mais geral) e, finalmente, ocorre a formao da vescula
individualizada.

O tipo mais comum de fagocitose aquele em que h a emisso de pseudpodes

(processo dependente de actina tem de haver uma remodelao do citoesqueleto de actina
para formar os pseudpodes) que abraam a matria e a vo internalizar.

A internalizao da LDL est ligada ferritina ( densa aos eletres e, como tal, vemos
os pontinhos na imagem). A LDL liga-se ao recetor de LDL e internalizada em vesculas que tm
clatrina (processo dependente de clatrina).

78 de 141 5
 Na imagem, podemos ver a formao da vescula, o sorting (a acumulao de LDL na
vescula para ser internalizado), a ciso e, por fim, a vescula separada, com a coat (ir, ainda,
ocorrer o uncoating).

H vrios processos de endocitose: a macropinocitose, que envolve um uptake de uma

grande quantidade de meio extracelular e dependente de actina (implica uma remodelao
da membrana quase da mesma magnitude da fagocitose), a via dependente da clatrina e da
dinamina, a via dependente da caveolina (outra protena que envolve as vesculas, mas cuja
funo ainda no se conhece detalhadamente) e processos que so independentes da clatrina
e da caveolina (e que podem ser independentes da dinamina).

importante perceber que a dimenso das vesculas varia consoante o processo. As

diferenas verificam-se ao nvel do cargo internalizado (internalizado por diferentes vias), do
mecanismo de formao da vescula, da coat (h vesculas que se formam sem coat) e do
tamanho das partculas que so internalizadas.

medida que vamos progredindo na via endoctica h uma acidificao progressiva dos
organelos. Isto depende das bombas de protes, ATPases (complexos de protenas que precisam
de energia para exercer a sua funo) e que vo acidificando progressivamente os organelos da
via endoctica.

Vemos, ento, que o pH dos early endosomes (endossomas precoces) superior ao dos
late endosomes (endossomas tardios), que, por sua vez, superior ao dos lisossomas (que por
volta de 5.0, depende das clulas). A via da reciclagem menos acdica (os endossomas de
reciclagem) e, portanto, tambm h uma acidificao progressiva at chegarmos aos lisossomas,
que tm um meio muito cido.

79 de 141 6
Endossomas
Endossomas precoces (early
endosomes) - apresentam lmen
claro, lucente. (em microscopia
eletrncia). Apresenta algumas
vesiculas dentro do organelo.

Para se visualizarem estes

early endossomes, as clulas so
encubadas com BSA (Albumina de
soro de bovino) ligadas a partculas de
ouro. (os pontinhos que aparecem mais escuros na microscopia eletrnica).

Ao fim de 15 minutos a albumina (solvel) hidrolisada pela clula e entra no

endossoma precoce.

medida que vamos

progredindo na via endocitica, temos
a prxima estao que so os late
endossomes e os lisossomas, atravs
de maturao por protenas que so
recrutadas tornando o ph mais
acdico.

Nestes late endosomes h

fuso de vesiculas e originam-se
outras vesiculas dentro dos organelos
com objectivo de incorporarem
protenas que formam novas enzimas.

Neste tipo de endossomas a experiencia feita encubando-os com os recetores do EGF-

Epiderme Gold Factor que mais tarde so degradados. Apresentam mais pintinhas dentro dos
endossomas, quando visto a microscpio eletrnico.

Nos lisossomas usou-se a HRP- horseradish peroxidase que fazem uma reao qumica
com o substrato peroxido de hidrognio que precipita e permite ver os lisossomas mais escuros
e mais densos na microscopia eletrnica. Os lisossomas apresentam-se com umas membranas
tipo casca de cebola, que geralmente aparecem nas clulas do sistema imunitrio.

80 de 141 7
 Os processos de maturao desde
os early endosomes que depois passam
para late endosomes ate resultarem nos
lisossomas (forma mais matura) resultam
de mudana do ph (mais acido), formao
de mais vesiculas intraluminais, fuso de
vesiculas e aquisio de outras protenas.

H formao de lisossomas
individuais atravs de recrutamento de
protenas, sendo que a maioria dos
processos que acontecem das clulas
resulta da fuso entre lisossomas, sendo os
early endosomes e late endosomes estados transitrios. Os Lisossomas so os que permanecem
mais tempo nas clulas.

Lisossomas
Tm enzimas hidrolticas (pH 5)
Degradam todo o tipo de
macromolculas (proveniente da
fagocitose ou da autofagia);
Reciclagem do material digerido
(com o objetivo de serem utilizados
pela clula);
Endocitose (sem eles a endocitose
afetada, acumula-se cargo);
Exocitose (lisossomas podem ser
secretados);
Reparao da membrana plasmtica (por exemplo: durante o exerccio fsico pode haver
microrroturas na membrana plasmtica das clulas musculares que tm de ser
imediatamente reparadas);
Secreo regulada;
Apoptose;
Sinalizao.

Fagocitose (resumidamente,
segundo professor)
H vrios tipos de fagocitose,
sendo a mais comum aquela em que
h a ligao de anticorpos a uma
protena de uma bactria (por
exemplo) que, depois, so
reconhecidos por recetores (FC
Receptors). um processo
dependente de actina, na formao
dos pseudpodes que vo subindo,
avanando at envolverem a

81 de 141 8
bactria, formando-se um
fagossoma que se funde a
lisossomas, formando os
fagolisossomas, digerindo a
bactria. Os produtos que no
podem ser digeridos so
posteriormente exocitados.

Nota: Os anticorpos possuem duas

pores, a poro FC (constante,
igual para uma mesma espcie) e a
poro FAB (reconhece o
antignio).

Endocitose associada ao recetor de transferina e via de reciclagem

O recetor (dmero)
liga-se transferina (TF),
protena que se liga o ferro,
essencial para trazer ferro
para dentro da clula,
sendo esta ligao apenas
possvel a pH neutro, pois s
a esse pH que as
conformaes do recetor e
da transferina so
complementares. H a
endocitose atravs de
vesculas de claterina que
depois chegam ao sorting
endosome, onde o pH acido, havendo a alterao da conformao da transferina que se desliga
do ferro. Ferro esse que transportado atravs de um canal para o citoplasma, sendo utilizado
para as necessidades metablicas da clula.

O recetor e a transferina (j no ligados ao ferro) seguem a via de reciclagem para a

membrana plasmtica, onde volta a pH neutro, voltando a repetir-se este ciclo.

82 de 141 9
Recetor da LDL e Reciclagem
As partculas de LDL ligam-
se ao recetor respetivo a pH
neutro (liga-se na ApoB protein),
vai para o interior da clula atravs
de vesculas de claterina e, quando
chega, aos endossomas (pH cido)
h a alterao da conformao do
recetor (conformao fechada) e
liberta a LDL que degradada nos
seus componentes (Aminocidos,
colesterol e cidos gordos), sendo
aproveitada nas necessidades
metablicas da clula e o recetor
vai reciclar, repetindo-se o ciclo.

O diagrama seguinte mostra algumas das mutaes envolvidas na doena de

hipercolesterolemia:

83 de 141 10
Toxinas AB
Estas toxinas aproveitam estas vias de transporte para chegarem ao interior da clula.
So chamadas de AB, pois tm duas subunidades, a A e a B, sendo que a B se liga a um glico-
esfingolpido que entra para o interior da clula, ligando-se, primeiro, a um early endosome ou
ao Golgi, sendo, depois, libertada a subunidade A para o citosol, ligado-se, depois, aos
ribossomas, possuindo um efeito txico.

84 de 141 11
 7.1 Estratgias e Vias de Sinalizao. Recetores
O que a sinalizao?

Sinal extra-celular, alcana o recetor de membrana, ativa o recetor e passa o sinal para dentro
da clula (atravs de uma cascata de sinalizao), provocando uma data de alteraes
(alteraes na expresso gnica, alteraes no metabolismo celular, alteraes na
conformao da clula).

Existem 3 tipos passos fundamentais:

receo do sinal

transduo do sinal

resposta da clula

Sinais Endcrinos

Tm origem nas clulas endcrinas e com o auxlio do sistema

circulatrio alcanam as clulas alvo. (Processos de sinalizao a
longa distncia)

Sinal Parcrino

Sinais que afetam clulas na vizinhana da clula geradora do

sinal. Exemplo das Sinapses, e do envio dos neurotransmissores.

85 de 141
 Apontamento 26.10

Sinais Holcrinos - Transmisso de Sinais atravs do

Contacto

Sinais transmitidos, atravs de protenas membranares.

(exemplo das junes comunicantes, ou gap-junctions).

Diferena significativa da transcio de sinais que passam pela expresso gnica e as que no
passam:

Sinais que passam atravs do auxlio das protenas, so extremamente rpidos, (na ordem dos
segundos, ou menos).

Respostas que passam pela traduo que envolve as protenas (so mais lentos, na ordem dos
minutos at horas). O processo de traduo e sntese proteica mais demorado.

Aspeto importante junes entre as clulas, as gap-junctions/ junes comunicantes..

complexos proteicos entre as clulas que se organizam em forma de poro, que permitem que
sinais de tamanho pequeno (a nvel molecular permita passar diretamente). o sinal pode
propagar-se de uma clula para a outra, sem ter contacto com o meio extracelular.

O que podem ser sinais?

86 de 141
 Apontamento 26.10
Podem ter uma natureza muito varivel, desde protenas, nucletidos, esteris, derivados de
cidos gordos, podem ser ainda gases como o xido ntrico (NO) e o dixido de Carbono (CO2).
As clulas utilizam como sinais matria-prima que tm sua disposio.

Tabela que demonstra a variedade da natureza dos sinais, e

algumas aes das mesmas (Slide 7/24)

Salientar o NO, (tambm referido no Case Study)

Sinalizao Paracrina atravs de recetores da superfcie celular.

87 de 141
 Apontamento 26.10

Sinalizao Autcrina

A Clula emite sinais para si prpria.

Produz sinais que so emitidos para o meio extracelular, desta

forma os mesmos, podem ser recebidos por clulas
prximas/vizinhas, mas tambm so recebidos pela prpria
clula.

Dvida: Qual que a vantagem para a clula de ter um processo de sinalizao autcrino?

Certos sinais, nomeadamente hormonas de crescimento, cujo objetivo primordial fazer

crescer um tecido (conjunto alargado de clulas), realizam a sinalizao autcrina
permitindo a propagao do sinal s clulas vizinhas, assim como a si prpria, permitindo um
crescimento uniforme de toda a extenso do tecido.

Dvida: A sinalizao autcrina pode ser comparada com um feedback?

Sim, a clula pode regular o sinal que est a emitir, regulando a concentrao do sinal emitido,
permitindo a regulao intracelular.

Importante referir (ver os exemplos): a existncia de molculas que tanto funcionam a

distncias curtas como longas.

88 de 141
 Apontamento 26.10
O que que os sinais fazem?

Graas existncia de sinais, ocorre a comunicao entre as clulas, permitindo a

transformao de estmulos (cada clula recebe inmeros sinais) em respostas especficas,
sendo principais as enumeradas:

Sobrevivncias (a inibio da apoptose)

Diviso e Crescimento

Diferenciao

Apoptose, ou morte programada da clula

A interpretao errnea dos sinais, leva formao de cancro. Nomeadamente o excessivo

crescimento celular. Falha no tipo de sinal enviado, ou falha no tipo de receptor

89 de 141
 Apontamento 26.10
Caso paradigmtico da Acetilcolina (Ach)

Pelo facto de o sinal ser igual, pressupe-se que a resposta seria semelhante. Porm, o facto
de o recetor ser diferente (comparao entre o recetor das glndulas e do msculo) ou de o
processo de integrao ser diferente (no caso dos dois tipos de msculo pois o recetor neles
ser semelhante), leva produo de respostas distintas.

A concentrao do sinal tambm ir produzir efeitos diferentes. Durante o desenvolvimento

embrionrio, e mais especificamente durante a diferenciao entre as clulas , o nvel da
concentrao poder definir que tipo de tecido se produz.

Msculo Cardaco provocam o relaxamento muscular

Nas glndulas salivares provocam a secreo

No msculo liso provocam a contrao

Recepo Intramembranar ocorre quando o sinal (normalmente hidrofbicos) atravessa a

membrana citoplasmtica, no tendo tipo relao com protenas membranares.

90 de 141
 Apontamento 26.10

Receptores associados aos canais inicos:

Os ligandos hidroflicos liga-se protena transmembranar, mudando a sua conformao

permitindo a entrada ou sada de ies. (os ies passam a ser sinais que tero implicaes
intracelulares).

Recetores associados s protenas G (exemplo de um recetor de superfcie):

O sinal liga-se protena da membrana, mudando a sua conformao, provocando uma reao
do lado interno da membrana.

A protena G possui uma poro ativa e outra inativa. Havendo uma sinalizao membranar,
ocorre a ligao das duas pores, tornando a protena funcionalmente ativa ativao do
complexo. Estando o Complexo Proteco G ativo, h uma ligao enzima, tornando-a ativa.

A enzima agora ativa ir provocar respostas intracelulares.

91 de 141
 Apontamento 26.10
Recetores ligados a enzimas:

O sinal liga-se ao recetor, alterando a

sua conformao. Associado ao
recetor existe uma protena com
capacidade enzimtica, que ativa,
provocando diversas reaes, que
tero implicaes intracelulares.

Casos dos sinais que passam

diretamente pela membrana

Possuem recetores intracelular.

Exemplos: o xido ntrico (NO), e as

hormonas esteroides.

92 de 141
 Apontamento 26.10
Os neurnios que enervam as clulas
endoteliais, libertam acetilconina
(Ach).

A acetilcolina liga-se ao recetor

membranar das clulas endotelias.

Promoo de uma cascata de

sinalizao que tem como produto
final o xido ntrico (molcula
hidroflica), resultante da NO sintase
(protena que permite a tua
produo, tendo como produto a
Arginina (Arg) e oxignio).

o xido ntrico como um gs

difunde-se atravs da membrana, das
clulas musculares lisas, que se
encontram adjacentes s clulas
endoteliais.

Ao chegar ao seu recetor intracelular

( guanilil-ciclase), que com atravs do
GTP produz cGMP. A produo deste
tem como consequncia o
relaxamento do msculo liso.

Recetores de Superfcie (ligandos hidroflicos) Enzimticos ou catalticos:

Estes recetores encontram na membrana (transmembranares) e caracterizam-se por serem

dimricos, ou at mesmo multimricos. A ligao do sinal faz com que as diferentes
componentes do recetor se liguem, entre si, ativando estes uma atividade enzimtica
intracelular.

OU

A ligao do ligando, faz uma alterao do complexo proteico (que no tem funo
enzimtica), permitindo a ligao de uma enzima.

93 de 141
 Apontamento 26.10
Recapitulao (relevo de etapas importantes)

Amplificao do sinal: realizada atravs de

mensageiros secundrios.

Esquema para exemplificar a

complexidade das respostas
intracelulares.

Apenas um sinal, com recetores

distintos, poder desencadear
respostas intracelulares diferentes.

94 de 141
 7.2. Recetores e Protenas G

Os recetores que funcionam atravs da ativao de protenas G so recetores muito

importantes, funcionam em vrios nveis de tecidos, usam vrios mecnismos e usam
vrios sinalizadores intracelulares.

RECORDAR:

Receptores de superfcie (ligandos hidroflicos)

Receptores associados a canais inicos
Receptores associados s protenas G
Receptores catalticos (funcionam eles como enzimas)

Receptores intracelulares (ligandos hidrofbicos)

xido nitrico
Hormonas esterides

Dentro da sinalizao celular, em que temos protenas intracelulares que fazem a

transduo do sinal desde o exterior da clula at ao interior, temos:

Protenas cinses/quinases ou fosfatases, que vo ser ativadas ou desativadas

por fosforilao (elas prprias vo fosforilar ou desfosforilar um primeiro
substrato);
Proteinas G (cuja forma ativada vai estar ligada ao GTP, uma molcula que as
vai ativar).

Neste tipo de sinalizao (que envolve

protenas G) inicialmente, as protenas esto
na sua forma inativa. Quando chega o sinal
(independentemente do seu tipo), os
.
recetores superficiais vo induzir alteraes
na fosforilao das protenas sinalizadoras
(G), por ao de cinases e fosfatases. Atravs
de uma cinase (anteriormente ativada, por
desfosforilao ATP), as protenas
sinalizadoras vo ser ativadas (switch)
devido adio de um grupo fosfato. No
final da sinalizao, as fosfatases vo ser
fosforiladas e remover-lhes o grupo fosfato.

95 de 141
Esta fosforilao, tipicamente, feita em resduos especificos de aminocidos da
protena, tais como tirosina, serina ou treonina. Estes dois tipos de enzimas podem
actuar em conjunto, para alterar as funes das protenas; o genoma humano codifica
cerca de 600 protenas cinases diferentes e 150 fosfatases;

As proteinas, na sua poro intracelular, esto ligadas ao GDP. O sinal vai ativ-las,
havendo uma alterao conformacional que faz com que o GDP seja removido e se
ligue uma molcula de GTP, ativando-a (a protena foi fosforilada), levando alterao
conformacional acima referida.

Quando uma GTPase est inativa(so tem GDP), ha atuacao de vrias protenas:

GEF Guanosine nucleotide-exchange factor- induz a ligao de GTP activa

protena
GAP GTPase ActivatingProteins Induz a ligao do GDP e inactiva a protena
GDIS

As protenas G podem ser:

- protenas G Trimricas (grandes), ligam-se directamente a determinados receptores
da superfcie celular e so activadas por estes. O Receptor activado leva libertao do
GDP e ligao do GTP;

-protenas G monomricas (pequenas), como as protenas Ras o do tipo Ras, que tm

papis cruciais em muitas vias que regulam o ciclo celular e a motilidade celular.

Para termos este tipo de sinalizao, necessrio termos um complexo formado por:
o recetor; a protena G ativa (trimrica, neste caso) e a enzima inativa.

RECETORES ACOPLADOS A PROTENAS G

Superfcie externa dos receptores associados protena G:

aminocidos hidrofbicos, permitindo que a protena se ligue estavelmente ao

ncleo hidrofbico da membrana plasmtica;

-A parte interna dos receptores associados protena G so diversos: Hidroflicos,

(adrenalina) e Hidrofbicos (odores e retina);

96 de 141
Estrura geral dos receptores associados s protenas G:
- Todos os receptores tm a mesma orientao na membrana com 7 regies em
-helix transmembranares (H1-H7), 4 segmentos extracelulares (E1-E4) e 4
citoplasmticos (C1-C4), o C3 em loop, alguns receptores que tambm tm o C2 em
loop interagem com a protena G trimrica

PROTENAS G
As protenas G tm trs subunidades:
- (alpha): ligada ao recetor
- (beta): no est diretamente ligada membrana
- (gama): ligada membrana
ATENO: O PROFESSOR BARALHA-SE
BASTANTE E DISSE QUE A BETA ESTAVA
DIRETAMENTE LIGADA MEMBRANA E QUE
NO ESTAVA LIGADA MEMBRANA.
PARECE-ME QUE O QUE EST CERTO
ASSIM, MAS TENHAM CUIDADO!

MECANISMO DE ATIVAO DOS RECETORES ASSOCIADOS A PROTENAS G

A molcula de sinalizao vai se ligar parte extracelular do recetor e vai ativ-lo,
levando a uma alterao conformacional, que permite a ligao do ligando
subunidade da protena g;
H uma alterao conformacional que permite a dissociao do GDP e ligao do
GTP;
A ligao do GTP subunidade vai promover uma alterao conformacional,
fazendo com que esta se separe das restantes subunidades, de modo a se poder
ligar enzima inativa;
A molcula efetora (enzima) ativada, promovendo a catalizao e continuao
da sinalizao intracelular;

97 de 141
 Depois da sinalizao, a hidrlise do GTP a GDP vai fazer com que haja uma
alterao conformacional que promove a separao da subunidade (da proteina
G) da enzima, inativando-a;
O ciclo volta ao estado de reposo e reeinincia-se.

A protena efetora ativada pela protena G e vai libertar os segundos mensageiros (cAMP)

NOTA: preciso saber a tabela!

98 de 141
O exemplo da protena Adenilato Ciclase nos recetores glucagon

A ligao desta molecula ao recetor de mebrana leva formao do complexo

da protena;
Sequncia antenrior;
Ligao da protena G adenil cilclase que vai ativar a enzima adenil ciclase E
Aumento do AMP-5

A adenil ciclase, para alm de uma via de ativao, tambm tem uma via de inibio.
Existem outras hormonas, tais como o PGE, que se ligam a um recetor especfico para
inibio da hormona. Estes recetores especificos vo se ligar a outro tipo de protenas
g, ativando-as (Galphas), formando um complexo inibitrio que, ao ligar adenil
ciclase promove, no a libertao/ativao intracelular do AMP5, mas sim a sua
inibio.

Estes processos (vias de ativao e inibio) permitem um controlo muito regulado na

quantidade intracelular de AMP5. Existem vrias doenas associadas s protenas Gs,
sendo a clera a mais comum. A clera resulta na ativao permanente numa
subunidade da protena G, provocada pela txina da clera. Esta vai levar inibio da
hidrlise do GTP, impedindo que haja a alterao da conformao e consequente
inibio da enzima. Assim, a protena estar sempre ativada, promovendo a produo
de AMP5 intracelular.

99 de 141
Outro tipo de sinalizao importante que ocorre a
nvel intracelular que ativada por estas diferentes
estruturas das protenas G so a PKA. As PKA
(protena dimrica) tm: a subunidade cataltica
(constituda por 2 domnios) e a subunidade
regulatria tambm com 2 domnios. nesta
subunidade regulatria que se vai ligar o AMPc.
Quando este se liga, ativa e liberta na sua forma
ativa estas subunidades da PKA, e esta vai depois fosforilar resduos de serinas e
treoninas nas protenas alvo.
Atravs de uma sinalizacao extracelular consegue-se dar indicao clula que
determinadas mensagens/genes tm de ser ativados durante a transcrio. Nesta via
de sinalizao temos uma molcula que ativa um recetor ligado membrana, a
activao desse recetor promove a ligao da subunidade do complexo dimrico da
protena G e vai ativar a protena da adenil ciclase. A ativao da adenil ciclase vai ser
muito importante porque com ATP vai ser capaz de formar a AMP cclica e a formao
deste AMP cclica vai levar ento ativaco da forma ativa da PKA.

Estas formas ativadas da PKA podem agora penetrar na membrana nuclear atravs dos
poros sendo capaz de ativar por fosforizao uma protena que se chama CREB. Esta
protena liga-se a uma binding protein formando o complexo CBP. Este complexo, por
sua vez, liga-se a uma regio especfica do genoma e esta ligao permite que outras
protenas (fatores de transcrio) possam iniciar a transcrio de determinado gene.
H assim uma transcrio de um gene em resposta a uma sinalizao extracelular.

Nota: O complexo CBP juntamente com a CREB no so por si s um fator de

trancrio mas juntamente com os fatores de transcrio vo tambm reconhecer
estas determinadas zonas do genoma permitindo que haja transcrio de
determinados genes.

100 de 141
Existe outra molcula, o fosfoinositol (PI) que produz o 1,2-Diacilglicerol (DAG) e o
Inositol-1,4,5-Trifosfato (IP3) que vo promover o aumento de clcio citoplasmtico
(bloqueador que pode existir na forma solvel no citosol ou ligado a outras protenas
que funcionam muitas vezes como recetores intracelulares), este aumento mediado
por ativao de um recetor ligado a protena G, esta ativao promove a alterao
conformacional da subunidade G que permite que haja uma ligao de GTP
promovendo a ativao da fosfolipase C. a fosfolipase C promove a clivagem do PIP2
originando IP3 que se vai ligar a uma protena, o DAG, e que desta maneira vo ativar
outra protena ligada membrana, a protena kinase C (PKC). Por outro lado, a
libertao de IP3 permite que seja ativado um recetor na membrana do RE, ligando-se

101 de 141
a ele de modo a promover a libertao de Ca2+ do RE para o citoplasma. Este Ca2+ no
citoplasma vai poder ligar-se PKC que fosforilada e ativada e se liga, por sua vez,
membrana permitindo a fosforilao do substrato.

Exemplo: fertilizao do ocito.

Nota: o Ca vai ser armazenado no RE, sendo a sua entrada altamente controlada.

Contrao muscular- Efeito do Ca2+

Nas fibras musculares temos molculas de troponina, actina,

miosina. No seu estado relaxado as molculas de actina,
tropomiosina e troponina levam a um aumento de clcio que
faz com que a miosina promova a contrao desta fibra
muscular. A remoo do clcio leva ao relaxamento.

102 de 141
Existe ainda outro mediador que o xido ntrico (NO) muito importante para o
relaxamento do msculo liso. De novo, utiliza-se Ca2+ intracelular que no esta apenas
completamente livre no citosol mas est tambm ligado a uma protena, a
calmodulina, que funciona como um recetor intracelular para o Ca2+.

Para que haja o relaxamento do msculo liso, as clulas endoteliais recebem a

sinalizao da acetilcolina. H um recetor ligado membrana ou ligado a protenas G
que vai ativar a fosfolipase C que liberta, de seguida, o PIP 3 que juntamente com a
calmodulina promove a ativao da enzima NO sintase que vai sintetizar o NO com o
auxlio da arginina e do oxignio. O NO formado vai ser difundido no espao entre a
clulas endoteliais e as clulas do msculo liso onde se liga a um recetor especfico e
promove a hidrlise do GTP a cGMP e PPI, o cGMP vai agora ativar a PKG que leva ao
relaxamento do msculo liso e dilatao do vasos.

As protenas G podem ativar diretamente uma enzima que pode levar ativaao do
sinal ou pode levar libertao de um mediador intracelular.

Uma capacidade que os recetores tm a abertura de canais inicos. H determinados

canais inicos que permitem a ligao da protena G j ativada. Neste caso, o recetor
recebe a acetilcolina que o ativa promovendo a sua ligao protena G (mas agora j
no a subunidade da protena G que se liga mas sim as subunidades e devido a
ligao do GTP), esta alterao conformacional permite que as duas subunidade se
liguem na regio extracelular dos canais de potssio havendo uma libertao de
potssio para o exterior e, assim, hiperpolarizaao da membrana, tendo como efeito a
reduo da frequncia de contraco do musculo cardaco.

103 de 141
As protenas G podem ligar-se a enzimas efetoras que em determinados casos vo elas
prprias fosforilar determinado substrato (a subunidade ativa uma enzima que
promove a libertao de um mediador intracelular), no entanto, existem tambm
outros casos em que a ligao de uma molcula sinalizadora ativa a protena G (a
ativao da protena G e a sua alterao conformacional leva ligao de GTP e
libertao de GDP mas neste caso no h ligao a uma enzima e a sua ativao mas
sim a ligao a um recetor inico que vai permitir a entrada ou sada de ies para
polarizao ou despolarizao da membrana).

Menssageiro
Exemplos
de
Receptores

104 de 141
 7.3 Recetores e Tirosinas Cinases, TGF, GTPases
| TCM | AULA 3 DE 3 DO MDULO DE SINALIZAO | APONTAMENTOS DA MATRIA DA AULA DE 28-10-2016|

1. INTRODUO

Os mecanismos de sinalizao extracelular podem induzir efeitos a curto e a longo curso. Esses efeitos a longo
curso (que podem incluir alteraes ao nvel da diviso e diferenciao celular) so muitas vezes conferidos pela afetao
da expresso de genes induzida por muitos destes mecanismos.

ALTERAES NA TRANSCRIO DE GENES RESULTAM EM RESPOSTAS DE LONGO TERMO

importante, ento, considerar fatores que podem influenciar a transcrio de genes: (Slide 5)

a) Estrutura da cromatina; O grau de condensao da cromatina e a posio dos nucleossomas afeta a ligao
de fatores de transcrio.
b) Modificaes nas histonas e outras protenas nucleares
c) Fatores de transcrio, fatores de crescimento e outras protenas

A estrutura da cromatina a nvel da organizao dos

nucleossomas influencia a transcrio de genes

Os fatores de transcrio:

1. Esto inativos no citosol ou ncleo;

2. Tornam-se ativos em resposta a fatores externos. Regulam => diviso, diferenciao e comunicao celular;
3. Quando sofrem alteraes/mutaes podem induzir => Cancro, diabetes, problemas no sistema imunitrio

2. MECANISMOS DE SINALIZAO

Nesta aula foram descritos diferentes recetores, componentes e moduladores de importantes vias de
sinalizao. O objetivo ento conseguir apresentar exemplos descritivos de recetores da superfcie celular e molculas
sinalizadoras importantes e os seus mecanismos de ao

2.1 RECETORES ASSOCIADOS A ENZIMAS (Slide 6)

So protenas transmembranares. O domnio de ligao ao ligando encontra-se na superfcie externa da membrana

citoplasmtica (o que faz sentido porque estamos a falar de sinalizao intercelular, pelo que a clula tem de ter
estruturas que comuniquem com o exterior). O domnio citoplasmtico ou apresenta atividade enzimtica intrnseca ou
encontra-se diretamente relacionado com uma enzima.

105 de 141
 Diferena para as GPCR (Aula de 27/10):

1. Possui carter enzimtico (intrnseco ou associao direta com uma enzima, como visto), em vez de uma
protena G trimrica.

2. Enquanto as GPCRs apresentam 7 segmentos transmembranares, cada subunidade de um recetor associado

a enzimas apresenta, geralmente, apenas 1.

(No obstante, o Alberts refere que pode acontecer que ambos os recetores, associados a enzimas e GPCRs, sejam
capazes de ativar uma mesma via de sinalizao, pelo que no existe uma razo bvia pela qual numa sinalizao
extracelular, um dos dois seja utilizado em vez do outro).

H 6 principais classes de recetores associados a enzimas, em que a diferena est nos resduos de aminocidos que
os domnios catalticos (o tal carater enzimtico) vo fosforilar.

1) Recetores Tirosinas Cinases (RTKs) fosforilam resduos de tirosinas especficos que se encontram neles prprios ou num
pequeno conjunto de molculas sinalizadoras intracelulares;
2) Recetores associados a tirosina cinases no apresentam atividade enzimtica intrnseca mas diretamente recrutam tirosina
cinases citoplasmticas para a passagem do sinal;
3) Recetores serina/treonina cinases fosforilam resduos de serina/treonina que se encontram neles prprios ou em protenas
reguladoras de genes associadas aos recetores;
4) Recetores associados a histidina cinase ativam uma via de sinalizao em que cinase fosforila resduos de histidina que se
encontram nela prpria e imediatamente transferem o grupo fosfato para uma segunda protena sinalizadora intracelular;
5) Recetores guanil ciclases diretamente catalisam a sntese de GMP cclico no citosol, que atua como uma pequeno mediador
intracelular de uma maneira semelhante ao AMP cclico
6) Recetores do tipo tirosina-fosfatase removem grupos fosfato de tirosinas de protenas sinalizadoras intracelulares
especficas (dizem-se recetores do tipo porque uma vez que os seus ligandos ainda no so conhecidos, a funo de recetor
destas estruturas ainda no est completamente provada);

Todas estas classes tm um modo funcional mais ou menos semelhante, apenas se diferenciando por uma
evoluo que levou cada um a fosforilar resduos de aminocidos especficos. A vermelho esto assinalados os mais
relevantes para o contexto da cadeira, pois so os tipos de recetor de dois exemplos importantes que iremos ver a
seguir.

OS TBF SO RECETORES SERINA/TREONINA CINASE

RECETORES TGF- Exemplo de via sinalizadora reguladora da expresso gentica

Recetor associado a enzimas serina/treonina cinase

Recetores para a superfamlia de protenas TGF Transforming Growth Factor.

UMA SUPERFAMLIA DE PROTENAS DIMRICAS EXISTEM 30-40 TIPOS NO HUMANO

ATUAM COMO MEDIADORES DE REGULAO DE UMA O QUE SO MENOS FREQUENTEMENTE, PODEM ATUAR COMO
VASTA VARIEDADE DE FUNES BIOLGICAS EM TODOS
OS ANIMAIS
AS TGF HORMONAS

NO DESENVOLVIMENTO DO ANIMAL REGULAM NO ADULTO: REPARAO DE RECIDOS, REGULAO

PADRES DE FORMAO E O COMPORTAMENTO, IMUNOLGICA, ENTRE OUTROS PROCESSOS
NOMEADAMENTE: A PROLIFERAO, DIFERENCIAO,
PRODUO DE MATRIX EXTRACELULAR E MORTE
CELULAR

106 de 141
 No Slide 7 encontramos mais informao sobre a funo destas protenas:

Impedir a proliferao por sntese de protenas que inibem o ciclo celular

Inibio do crescimento de clulas secretora (sinalizao autcrina)

TRS ISOFORMAS Inibio do crescimento de clulas vizinhas (sinalizao parcrina)

Perda de expresso de TGF em tumores

TGF-1, TGF-2, TGF-3
Activinas e inibinas expressas no incio do desenvolvimento
embrionrio, so TGF

Organizao de tecidos: promovem a expresso de molculas de

adeso e protenas da matriz extracelular

Sinalizao TGF/Smad
- Protenas Smad so protenas intracelulares transdutoras de sinal que passam o sinal dos recetores TGF para o ncleo.
- Existem 3 tipos de recetor TGF: RI, RII e RIII

Representao do Lodish Representao do Alberts

- O RIII no tem um domnio cataltico desenvolvido como o RII (no consegui confirmar isto na bibliografia mas foi a ideia que ficou da
aula) mas tem locais de ligao para o ligando, o TGF. Qual ento a funo do RIII? Apesar de nos modelos acima
ilustrados vermos recetores e ligandos individualizados, preciso lembrar que numa clula h vrios recetores e vrias
molculas de ligando nas imediaes e que a ligao entre estes componentes casual, por coliso aleatria. A funo
do RIII de se ligar ao ligando de forma a aumentar a concentrao de TGF nas imediaes de RII (basicamente tem a
funo de aumentar a disponibilidade de ligando para o RII), de forma a aumentar a velocidade da transduo do sinal.
Dizemos que o RIII tem a funo de apresentar o ligando ao RII.

- O RII no existe em todas as vias de sinalizao (por exemplo, no est representado na representao do Alberts)

- Neste mecanismo temos como componentes, resumidamente:

Sinal extracellular/ligando: TGF

Recetor: recetores TGF (RI, RII, RIII)

Protenas transdutoras de sinal: Smad

107 de 141
- Descrio do mecanismo (ver imagens na pgina anterior):

a) O ligando TGF- liga-se diretamente ao RII ou primeiramente liga-se ao RIII, que apresenta de seguida o ligando ao RII
(1b e 1a, respetivamente, na imagem do Lodish;

b) Dimerizao: A ligao do ligando ao RII promove a dimerizao do RII com o RI (o ligando no se liga diretamente ao
RI). Por outras palavras, o RII vai recrutar o RI ao fosforilar o seu brao/segmento submembranar (segmento entre a
membrana e a regio cataltica). Isto acontece porque a regio cataltica do RII caracterizada por uma capacidade
cataltica relativamente fraca, sendo necessrio que se associe ao RI, formando um homodmero. Individualmente, a
regio cataltica da RI encontra-se inibida pelo prprio segmento do seu brao pelo que a fosforilao de resduos
serina/treonina neste segmento por parte da RII, com o intuito de formar um homodmero, ativa a regio cataltica da RI.
(Isto pode ser visto no complexo de recetores no desenho do Lodish. Como d para ver nessa estrutura, o RI fosforilado no seu brao, representado
pelos P a este agarrados, e a regio cataltica ativada. Isto visto graficamente porque no RI individualizado, direita, a regio cataltica est disposta
horizontalmente enquanto que na representao da sua sua forma ativa, no homodmero, est disposta verticalmente);

c) No fim do passo anterior, o complexo de recetores TGF possui uma regio cataltica que j acessvel (RI est
ativado) s protenas citoplasmticas Smad;

d) Passo 3 (fig. Do Lodish): O RI ativo fosforila uma Smad2 ou Smad3 (protenas citoplasmticas), fazendo com que estas
exponham o seu sinal de localizao nucler (NLS). O NLS uma pequena sequncia peptdica nestas protenas citoplasmticas que
constituem o local de ligao das importinas, que so protenas carioferinas envolvidas no transporte (importao) de protenas para o ncleo. Ao
serem fosforiladas/ativadas pelo RI, as Smad expem o seu NLS, permitindo o seu transporte para o ncleo.

e) Passo 4 (fig. Do Lodish): Duas Smad2/3 com o seu NLS exposto (i.e. fosforiladas/ativas) associam-se a uma importina-
e a uma Smad4 (protena Smad no fosforilada que complementa o complexo Smad 2/3-importina, e que por isso
chamamos de co-Smad). ento formado um largo complexo citoplasmtico que entra no ncleo (diz-se que as Smad
2/3 oligomerizam-se com a Smad4).

f) Passos 5 e 6: Aps terem sido importantes no transporte do complexo para o interior do ncleo, as importinas- so
dissociadas deste atravs da Ran-GTP (se estiverem muito curiosos acho que o captulo 13 do Lodish oferece uma explicao mais
pormenorizada deste processo).

g) Passo 7: Imediatamente depois, um fator de transcrio nuclear (e.g. TFE3). Forma-se assim, um complexo de ativao
que se liga com uma configurao geomtrica precisa s sequncias reguladoras do gene alvo.

h) Passo 8: Por fim, o complexo ligado ao gene recruta co-ativadores transcricionais e a transcrio do gene assim
induzida.

i) Desmantelamento do complexo (Passos 9 e 10): No fim deste processo, as Smad2 ou 3 so desfosforiladas por enzimas
fosfatases nucleares e so recicladas, sendo transportadas do ncleo para o citoplasma atravs de um poro nuclear.

Isto a descrio do processo que precisamos de saber. Os curiosos podero encontrar uma imagem com algumas
variaes e complicaes deste processo no Slide 10 do ppt desta aula.

108 de 141
 RECETORES TIROSINA CINASE (RTKs) 2 Exemplo de via sinalizadora reguladora da expresso gentica

- o segundo exemplo importante de sinalizao com recetores associados a enzimas a saber

- Os RTKs so recetores importantes porque esto presentes nas vias de sinalizao de muitas protenas sinalizadoras
extracelulares (ligandos). Esses ligandos podem ser (alto copy-paste do Slide 11):

- Pode ser interessante denotar que nas RTKs a tirosina cinase uma parte intrnseca no recetor mas que podemos ter
tambm recetores muito semelhantes mas em que a tirosina cinase no uma parte intrnseca do recetor (i.e. o recetor
e a componente tirosina cinase no so ambos codificados pelos mesmos genes) mas encontra-se firmemente ligada ao
recetor. Nestes casos, falamos de recetores citocina e tirosina cinase fortemente ligada chamamos cinase JAK (esta
distino apenas uma curiosidade, sendo que a nvel funcional os RTKs e os recetores citocina so muito semelhantes e tudo o que ser descrito de
seguida para os RTKs aplica-se para os recetores citocina).

- A estrutura dos RTKs um pouco diferente dos outros recetores que j estudmos. Nos GPCR, a ligao ao ligando
criava uma mudana na orientao relativa das vrias -hlix transmembranares, induzindo uma mudana nos respetivos
loops citoplasmticos. Nas RTKs, existe apenas uma -hlix portanto seria improvvel uma mudana conformacional
propagar-se para o lado citoplasmtico da membrana plasmtica: Como que, ento, a ligao ao ligando induz a
ativao dos domnios cinases nas RTKs? Nas RTKs, a ligao ao ligando induz a dimerizao do recetor: quando um
recetor se liga a um ligando, automaticamente associa-se a um RTK vizinho, de modo a que os domnios cinases se
aproximem e se ativem, levando a que os dois recetores se fosforilem um ou outro em mltiplos resduos de tirosina.
Este processo chamado auto-transfosforilao/fosforilao cruzada.

109 de 141
- O processo descrito agora, envolvendo esta auto-transfosforilao, constitui a ativao dos RTKs. Em baixo temos a
representao que o Lodish d deste processo. Como visto, a ligao do ligando induz a fosforilao cruzada das
unidades catalticas (nesta imagem vemos que isto ocorre, mas especificamente, nas regies denominadas lbios de
ativao), aumentando a atividade cinase e cataltica dos recetores (pois h uma fosforilao adicional de resduos, como
se v na imagem, abaixo e acima da componente cinase).

- Existem cerca de 60 genes a codificar para RTKs, com estes a serem agrupados em mais de 16 subfamlias, variando
entre elas pelas famlias de protenas ligando associadas. A imagem abaixo mostra alguns dessas diferentes subfamlias e
como a estrutura do RTK varia consoante o seu ligando especfico. As variaes a nvel intra e extracelular so derivadas
de fenmenos evolutivos resultantes de quebras/perdas de informao que originaram esta variedade e especificidade
de recetores.

- A tabela abaixo apresenta tambm informao sobre esta variedade de RTK e as respetivas funes: (Slide 13)

- No geral, todos os RTKs possuem trs componentes essenciais:

1) Um domnio extracelular; para a ligao com o ligando

2) Um domnio hidrofbico transmembranar em -hlix
3) Um domnio citoplasmtico; que inclu o domnio tirosina cinase. Esta parte cataltica
fosforila tirosinas do prprio recetor, das protenas sinalizadores intracelulares e do
prprio ligando

110 de 141
 Sinalizao via RTKs

- Aps a ativao das RTKs, o recetor est pronto para passar o sinal.

- A tal fosforilao adicional de resduos de tirosina nas regies citoslicas do recetor adjacentes regio cinase permite
a ligao de determinadas molculas intracelulares (dizemos que se ligam cauda fosforilada do recetor), para que haja
continuao do sinal.

- Ao contrrio dos recetores TGF, a fosforilao do recetor no leva, por si, fosforilao direta das protenas
intermedirias intracelulares. Em vez disso, a fosforilao do recetor permite, sim, que estas protenas se liguem aos
segmentos citoslicos do recetor que foram adicionalmente fosforilados (como consequncia da fosforilao cruzada).
As protenas intracelulares so ativadas por esta ligao ao recetor e no por fosforilao.

- este complexo proteico que se liga ao recetor que faz a transduo do sinal onward

- Estas protenas podem ter variadas funes e estruturas, mas frequente terem domnios comuns para a ligao s
fosfotirosinas (i.e. ligao aos resduos de tirosina fosforilados do recetor). Estes domnios so geralmente domnios SH2
ou, menos frequentemente, domnios PTB. importante denotar que nem todas estas protenas intermedirias se ligam
diretamente ao recetor (podem fazer parte deste complexo ao se ligarem no ao recetor mas a outras protenas ligadas
ao recetor) e que nem todas contribuem para a passagem do sinal onward (algumas tm mesmo a funo de contrariar o
processo de sinalizao, por feedback negativo, acelerando o processo de ubiquitinao do recetor).

- A sinalizao via RTKs sumarizada na imagem abaixo:

- As enzimas tirosina fosfatase tm a funo de desfosforilar o complexo, de modo a induzir a terminao do sinal.

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- A ativao de RTKs pode induzir a passagem de sinal numa grande variedade de vias. Nessa passagem, frequente
encontrarmos algumas protenas de grande importncia para a transduo do sinal (REVER PROTENAS G DA AULA
ANTERIOR E VER SLIDE 18 DESTA AULA) e que veremos agora com mais detalhe:

Slide 18:

Protinas Ras Superfamlia de protenas G monomricas que promovem a sinalizao das RTKs para o ncleo.

- Da superfamlia Ras, destacamos duas subfamlias

-Subfamlia Rho: dos recetores para o citoesqueleto de actina

- Subfamlia Rab: regulao do trfego de vesculas de transporte intracelular

- A tabela seguinte resume a funo das restantes famlias (Slide 20):

- Qual a importncia destas protenas? Como uma GTPase monomrica, as Ras contm grupos lipdicos covalente
ligados. Estes tm a funo de ancorar a Ras face citoplasmtica da membrana, onde atuam transmitindo sinais para
outras partes da clula. Assim, as Ras funcionam como interruptores moleculares, alternando entre dois estados
conformacionais opostos:

- Ativo; quando ligado a GTP

- Inativo; quando ligado a GDP

112 de 141
 - As Ras como interruptores moleculares, so reguladas por umas outras protenas sinalizadoras que promovem
a alternncia do estado ativo e inativo das Ras. Essas protenas so:

- Ras-GEFs guanine nucleotide exchange factor; ativao da Ras, pela remoo do GDP e promoo da ligao
de GTP

- Ras-GAPs GTPase-activating proteins; inactivao da Ras, pelo aumento da hidrlise da ligao Ras-GTP

Sim, ok mas qual a importncia disto? Esta breve descrio da Ras serve apenas para percebermos melhor
a sua ao ao nvel da sinalizao via RTKs! As Ras podem ser usadas para levar o sinal das RTKs para outros lugares da
clula.

Poderamos supor que para um RTK ativar uma Ras, seria preciso que a ativao do RTK levasse ativao de
uma Ras-GEF ou a inibio de uma Ras-GAP. Apesar das Ras-GAP serem capazes de se ligarem diretamente cauda
fosforilada do RTK ativo e as Ras-GEF no, o que acontece que so mesmo as Ras-GEF a ter a funo de ativar a Ras
nesta situao. Como que isso acontece? necessrio que uma protena adaptadora se ligue ao RTK ativado primeiro!
Esta protena adaptadora, de seguida, ativa uma Ras-GEF que remove o GDP da Ras, ativando-a, por fim!

- Assim vemos como uma protena Ras pode ser ativada numa sinalizao via RTK de modo a promover a transduo do
sinal e aumentando a variedade de efeitos que um mesmo sinal pode ter numa clula! No slide 23 h uma representao
um pouco mais complexa mas completa do processo ( uma imagem do Lodish). Nessa representao so usadas as
protenas do caso em que este processo foi descoberto (clulas do olho de Drosophila em que a protena adaptadora a
GRB2 e a Sos a Ras-GEF).

Ento muito bem a Ras foi ativada, o sinal pode ser passado para vrias vias e pronto acabou. NO! Todos estes
processos que vimos at agora so muito rpidos mas pode a clula podem requerer um sinal que seja de longa durao.
Para que a clula no tenha de estar sempre a repetir este processo de ativao dos RTK e das Ras para manter a
emisso do sinal, houve uma adaptao que permitiu a converso do sinal de curta durao em longa durao. O
exemplo de um processo em que a emisso do sinal assegurada por processos mais demorados, conhecido como a
cascata da cinase MAP (mitogen activaded protein).

CASCATA DA CINASE MAP- Um mecanismo para a onverso do sinal de curta em longa durao

- necessrio prolongar o sinal para que seja possvel alterar o padro de expresso gentica, induzindo a estimulao
da proliferao e diferenciao celular (isto porque as tirosina fosfatase e as Ras-GAPs rapidamente inativam as Ras ao
promover a hidrlise da ligao GTP em GDP).

- Esta prolongao do sinal feita pela passagem deste a trs protenas cinases que formas um mdulo de sinalizao
funcional:

113 de 141
 - Protena Raf (MAP kinase kinase kinase ou MAPKKK)

- Protena Mek (MAP kinase kinase ou MAPKK)

- Protena Erk (MAP kinase ou MAPK)

A Ras ativada fosforila a Raf, que fosforila a Mek, que fosforila a Erk. Esta ltima fosforila vrias protenas do citoplasma,
como protenas reguladoras de genes e outras protenas cinases. A Erk chega mesmo a entrar no ncleo para fosforilar
componentes de um complexo regulador de genes que ativam a transcrio de immediate early genes, genes que so
ativados aps poucos minutos de uma RTK ter recebido um sinal extracelular. Calma, como assim early genes? No era
suposto o sinal ser de longa durao? Sim, a funo destes early genes de codificar para outras protenas reguladoras
de genes que vo ativar outros genes. Este processo de termos genes a serem ativados para a sntese de protenas que
por si ativam os genes ditos alvo (later genes) demora tempo e assim contribui para a prolongao do sinal (o que se
considera longo termo muito variado, podendo ir de alguns minutos para vrias horas). Em baixo esto duas imagens
que representam isto, dos Slides 24 e 25

3. UBIQUITINAO DO RECETOR

- O professor acabou por passar esta parte frente mas preciso saber. Perdoem-me mas vou s fazer um copy paste da
Neri, porque penso que no complexo nem algo a saber com detalhe (e deixo a imagem que estava no slide). Portanto
ai vai (se acharem insuficiente digam que arranjo um prilimpimpins de Alberts e Lodish):

O meio extracelular est sujeito a variaes e, para fazer face a estas, as clulas tm de ajustar as suas respostas
celulares, nomeadamente atravs de processos de dessensitizao do sinal (que envolvem o retorno da clula ao
estado de repouso).
Neste processo, existem protenas que se ligam ao receptor para diminuir a sinalizao. Estas protenas catalisam a sua
ubiquitilao (adio de molculas de ubiquitina com a finalidade de ser reconhecido por um proteossoma onde
degradado). Deste modo, a ubiquitilao envolve a endocitose e degradao dos receptores em lisossomas,
diminuindo o nvel de receptores existentes num clula e, consequentemente, a sinalizao por ligao de
ligandos aos receptores.
Existem outros mecanismos de dessensitizao do sinal que operam nas clulas.

114 de 141
115 de 141
 8.1 Mobilidade Celular e Quimiotaxia
Como estavam poucos alunos o professor disse que ia por uma pergunta especfica no exame
final com algo que tenha dito na aula!

Ver website sobre migrao celular: www.cellmigration.org

A migrao celular extremamente importante para a vida humana

Quando a mobilidade celular est afetada podem surgir diversas patologias, como por
exemplo:

As clulas no esto paradinhas, mas sim em constante movimento.

H muitos tipos celulares, muitos deles tm movimentos de migrao existindo vrios tipos de
mobilidade. Nem todas as clulas tm o mesmo tipo de migrao.

Tipo clssico de migrao por PROTUSO

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 Clula (fibroblasto, por exemplo)
Substrato (matriz extracelular de um rgo, por
exemplo)

1 Fase: A clula adere ao substrato estendendo uma protuso

para ode quer migrar;

2 Fase: Adeso na zona da protuso e intensificao da adeso

(para que no se solte);

3 Fase: Contrao/ retrao da parte de trs da clula.

Exemplos de clulas que migram desta forma: queratocitos

(fibroblastos da crnea)

Processo em mais detalhe:

O ncleo fica na parte de trs da clula e o

citoesqueleto organiza-se de maneira a
possibilitar a migrao.

(na imagem: actina marcada a vermelho e

cofilina a verde; Na parte da frente da clula h
uma grande atividade do citoesqueleto. Esta
atividade que responsvel em grande parte
pela migrao celular e pela protuso.)

Na frente da clula h uma rede muito densa de

filamentos de actina que est a polimerizar e a
empurrar a clula na direo do movimento.

Quando a clulas se move polimeriza mais filamentos na direo do movimento.

Esta polimerizao constante vai empurrar a prpria membrana e vai estender a clula numa
determinada direo.

A clula faz isto integrando os sinais que recebe do ambiente (sinalizao) e manipulando os
vrios tipos de molculas que regulam o citoesqueleto de actina de maneira a que o
citoesqueleto de actina se polimerize na direo pretendida.

Aspetos chave deste processo

- necessrio:

Monmeros de actina na zona para onde a clula est a migrar;

A presena de protenas reguladoras que ativam a formao de novos filamentos;
Degradao dos filamentos na parte mais inferior da clula, onde eles j no so
necessrios, para existirem monmeros disponveis para serem adicionados frente
na clula.

Ateno:

117 de 141
Monmeros de actina no meio intracelular. H sempre filamentos de actina menos densos. A
cofilina responsvel pela destruio dos filamentos.

Esta rede nunca completamente destruda porque necessria para dar forma clula e
outras funes.

H dois tipos de estruturas de actina:

Lamelipdios - zona difusa; Rede de filamentos envolvida pela membrana que se

assemelha a lenis de rede de actina. So os principais responsveis pelo avano da
membrana.
Filopdios - estruturas mais intensas que so feixes de actina. Tm uma funo de
organizar, dando mais estrutura zona da frente da clula. Em muitos casos
estendem-se mais para a frente da clula sendo utilizados como sensores devido aos
recetores que possuem. (vo frente da clula para detetar o que que est frente).

Posteriormente protuso, ADESO:

Para a adeso entre as clulas e os substratos, as clulas utilizam molculas de adeso.

Existem vrios tipos, mas as principais e mais frequentes so as integrinas. As integrinas so
protenas de membrana que tm capacidade de se ligar a varias estruturas, em especial s
lamininas, que existem na matriz extracelular, por exemplo.

Quando a clula migra:

Avana a sua frente (a lamelipdios) e faz constantes adeses relativamente fracas. Ao

encontrar um local onde pode fazer uma adeso forte na direo da migrao, constitui uma
adeso mais forte. Tem de garantir que a adeso na parte da frente da clula mais intensa do
que na parte de trs, para que quando a clula contrair, a parte que se solta a de trs e o
movimento prossegue no sentido pretendido, ou seja, a adeso na parte de trs
comparativamente mais fraca e, portanto, aps a contrao da clula, a parte de trs solta-se.
A clula tem que garantir a migrao numa determinada direo

Para resumir esta parte: neste tipo de migrao, a clula monta todo o sistema de dos
filamentos de actina e que aumenta a formao desta rede de filamentos de actina que
empurra a clula na direo do movimento. Por outro lado, regula tambm a adeso e a
adeso tem de ser mais forte frente do que atrs para que quando h retrao, quando a
parte de trs puxada, ela se soltar atrs e no frente. E o outro passo a retrao da parte
de trs na direo do movimento

RETRAO

Esta retrao, tambm utiliza filamentos de actina, e como exercida fora, utiliza a miosina.
Portanto so filamentos de actina e miosina que funcionam, no fundo, como uma espcie de
mini musculo que contrai para puxar a clula na direo pretendida. Portanto, filamentos de
actina empurram a membrana, filamentos de actina e miosina, estruturas que contraem e
puxam a parte de tras; adeso normalmente associada s integrinas.

REGULAO

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Este processo de migrao como todos os processos celulares so regulados por vias de
sinalizao que o controlam. No fundo, dizem clula estamos a estabelecer filamentos de
actina para migrar naquela direo e retrair nesta.

Todo um conjunto de vias de sinalizao que regulam o que acontece frente e o que
acontece atrs so: a via Rac, a via do P actin kinase, via RO e clcio tambm envolvido
(adeso). Detalhes que no interessa aprofundar. S para ficar com a ideia que h vias de
sinalizao para regular este comportamento.

BLEBBING

O tipo de migrao que falamos at agora o mais estudado o que se pensava ser
predominante. Mas nos ltimos anos, devido melhoria dos meios e forma de cultura, da
microscopia, tem se vindo a descobrir que existe um outro tipo de migrao bastante comum
que baseado em blebbing. Neste caso, a parte da retrao muito semelhante, mas a parte
da protuso em vez de ser controlada pela polimerizao de filamentos de actina
controlada por presso osmtica dentro da clula. O que a clula faz inchar a parte da frente
da clula como se fosse um balo e aumentar, Retraindo a parte de trs. Vai formando aquilo a
que se chamam de blebs na parte da frente. O citoesqueleto relevante na parte da retrao
mas a sua ausncia que est a relacionada com a parte da extenso, logo um mtodo em
que a extenso bastante diferente. E o que se percebe hoje em dia que umas clulas
migram mais por extenso e outras pela criao de blebs outras pela combinao das duas e
outras ainda alternando o seu comportamento consoante a situao.

A presso dentro da clula faz com que a clula se estenda na direo do movimento. A clula
consegue atravs da presso controlar o movimento enfraquecendo o citoesqueleto e o crtex
interno da clula de maneira que se a presso for grande, a clula ceda mais nesta direo.
como um balo - se for apertado, h umas zonas mais frgeis que se estendem mais. o que
acontece nas clulas. Elas aumentam a sua presso a parte mais menos resistente presso
aumenta na direo do movimento. A clula para conseguir isto aumenta o citoesqueleto de
actina e o seu crtex interno de maneira a que a parte de trs esteja muito forte no se
estendendo. No fundo o conceito o mesmo, mas a maneira como l se chega um pouco
diferente. Acaba por tambm usar o citoesqueleto, mas de uma maneira diferente - no para
empurrar a membrana, mas para que haja a reduo do citoesqueleto e do crtex a clula para
reduzir a resistncia presso daquela zona da clula.

Extenso dos lamelipodio

Isto tudo foi migrao a 2D, mas na maior parte dos organismos, as clulas migram num
ambiente a 3D.

119 de 141
2d- ex caminhando pela matriz de um rgo

3d - ex macrfago que tem de migrar para dentro de mesenquima

A 3d mais obstculos, novas possibilidades de migrao:

Num espao apertado, e por conseguir controlar a zona onde vai fazer o blebbing, h situaes
em que a presso que a clula exerce nas paredes do espao onde se encontra suficiente
para a manter em posio. Possvel a clula migrar num espao a 3d atravs de blebbing sem a
adeso ter um papel muito importante. Porque o prprio espao a mantem no lugar e atravs
de blebbing ela vai para onde quer. Mantida Atravs das restries fsicas onde est.

O mesmo pode acontecer com uma situao de polimerizao. A 3d a clula pode migrar
atravs de polimerizao e extenso sem a adeso ter um papel muito importante porque ela
vai se estendendo dentro daquele espao a 3d. s o facto de estar confinada reduz a
necessidade de adeso.

A clula usa para migrar no s as restries fsicas mas tambm as suas prprias molculas
de adeso que tem migrar de forma eficiente.

Para resumir a parte das constries fsicas: como que a clula tem que lidar

Rigidez do substrato. Se o substrato for mais rijo ou mais mole, a capacidade de

migrao completamente diferente. Diferena comparada a correr no alcatro ou
correr na areia. Ou correr em cima de um pudim
Espao fsico onde a clula tem de migrar (2d/3d)
Topologia. Pode ser um ambiente 2d mas com muitas irregularidades.
Caractersticas de adeso do substrato, porque a clula pode estar cheiinha de
integrinas e ter imensa capacidade para aderir a tudo e mais alguma coisa, mas se o
substrato no tiver nada que ela se possa ligar, quimicamente falando, tambm vai ter
dificuldades.

QUIMIOTAXIA O PORQU DA MIGRAO

Macrfagos que perseguem bactrias migrando pelos tecidos.

As bactrias emitem sinais que atraem os macrfagos.

Base da quimiotaxia sinais qumicos, ambiente, que regulam forma como as clulas devem
migrar. As clulas respondem a estes sinais, sendo reguladas por eles, sinal, deteo, resposta.
importante no s na resposta imunitria, mas tambm no desenvolvimento embrionrio.

Funcionamento de um trator FMOP. Molcula que serve como trator qumico para os
neutrfilos (apenas um exemplo, pois h muitos sinais emitidos pelos microorganismos
patognicos que atraem os macrfagos e os neutrfilos e tambm existem muitos sinais, estes
dos prprios tecidos, em homeostase ou durante o desenvolvimento embrionrio que regulam
a migrao dos diferentes tipos de clulas).

(vdeo em que h uma zona que esta embebido no trator, e os neutrfilos vo todos para l

Os recetores de membrana que detetam os qumicos e transmitem a uma cascata de

sinalizao. Um sinal que identifica a bactria e manda a clula ir para aquela direo. Esta
cascata de sinalizao integrando esta informao com outra que exista na clula.

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A resposta o resultado de uma integrao dos vrios sinais entre os quais o trator. O que esta
via de sinalizao faz regular as Rac e a Ro de maneira a que a Rac esteja activada na frente
da clula e a produzir extenses de citoesqueleto que vo empurrar a clula (protuses na
direo do sinal) e activar a via Ro na parte de trs para retrair mais a adeso associada.
Resumo: Sinal, recetor, via de sinalizao que vai reorganizar o citoesqueleto dentro da clula.

A clula tem de ter o recetor. se no o tiver para este trator ento mais valia nem la estar.
Sinais represso de movimento tambm podem fazer com que a clula no responda.

CASOS ILUSTRATIVOS DE COMO A MIGRAO IMPORTANTE

Cicatrizao - implica vrios tipos de migrao: neutrfilos (em primeiro lugar) e macrfagos
(em segundo lugar) logo inicialmente atrados por sinais das clulas epiteliais (epiderme) e dos
prprios microorganismos que possam ter entrado, para retirar os restos celulares e fagocitar
microorganismos. Depois h a migrao dos queratincitos e fibroblastos para cobrir a ferida.
Sistema imunitrio, fibroblastos e queratincitos tm que migrar fechar a ferida. Combate
infees, remover restos celulares e emitir sinais para ativar/ estimular outras clulas a
regenerar o tecido.

Extravaso dos leuccitos dos vasos processo de migrao muito importante.

Desenvolvimento embrionrio Formao mesenquima (transformao de clulas epiteliais

em clulas mesnquimentosas que comeam migrar) . Na gastrulao, por exemplo, etc

PERGUNTA EXAME pergunta sobre as diferenas entre migrao por blebbing e protuses.

121 de 141
 8.2 Diferenciao Celular
Apontamentos - Aula 3 de Novembro de 2016

At agora temos estado a falar de diviso celular, ou seja, falamos de uma clula
que se divide em duas clulas idnticas.
Mas se ocorresse esse tipo de divises, no conseguiramos formar todas as
clulas que temos no nosso organismo. Para formar os vrios tipos de clulas, existem
outras clulas que so especializadas, mas indiferenciadas, designam-se clulas
estaminais.
Clulas estaminais:

Clulas no especializadas com baixo de diferenciao (indiferenciadas),

nem todas so totipotentes
Ex: Clula estaminal totipotente: o ovo, consegue originar qualquer outro
tipo de clulas.

Clulas com capacidade de se autorrenovarem e originarem clulas mais

diferenciadas.

Clulas que se dividem assimetricamente, as duas clulas filhas podem

diferir:
Tamanho
Forma
Composio proteica
Genes em diferentes estados de atividade
Nota: Clulas tm mesmo DNA, mas diferentes genes expressos

Tipos de clulas estaminais:

Clulas estaminais germinativas - clulas que originam os gmetas
Clulas estaminais somticas (desenvolvimento e adultas) Ex: clulas
da medula ssea.

Funo:
Reproduo
Formar as clulas do organismo (desenvolvimento animal)

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 Homeostasia
Reparao de tecidos

Mecanismos de Diviso Assimtrica

Existem vrios mecanismos de diviso assimtrica de uma clula:
1. Depende dos fatores posicionais ou fatores extrnsecos
Uma clula estaminal ao dividir-se com a orientao que apresenta na
imagem a baixo, uma das clulas filhas vai ficar mais longe das clulas
suporte (clulas cinzentas) das clulas estaminais, tambm designadas de
nichos. O nicho o stio onde as clulas estaminais so mantidas e
normalmente importante por que secreta fatores que permitem que a
clula se mantenha num estado indiferenciado. A clula que est mais
longe do nicho, no receber menos estes fatores e comear-se- a
diferenciar.

2. Depende de fatores intrnsecos (no depende das clulas exteriores

clula estaminal
A prpria clula distribu, dentro da clula, fatores, como protenas, para
lados diferentes da clula e quando a clula se divide: uma das clulas
herda alguns fatores, por exemplo, os fatores que levam diferenciao;
a outra clula herda outros fatores que mantm a clula como uma
estaminal, ocorrendo uma diviso assimtrica.

3. Mecanismo estocstico
aleatrio que a clula se
divide em duas clulas
estaminais ou se a clula
se divide em duas clulas
diferenciadas.

123 de 141
Clulas Totipotentes
Ovo ou Zigoto
- Primeira clula
- Clula indiferenciada
- Mitoses sucessivas
Consiste num zigoto que contm fatores citoplasmticos que recebeu do pai e
da me, ou mesmo todos da me, que so depois distribudos assimetricamente entre
as duas clulas, quando elas se dividem. Estas clulas apresentam um contedo
proteico diferente, apesar do seu aspeto semelhante. O ovo ir dividir-se at formar
a mrula.

Fatores Posicionais Determinantes Citoplasmticas

A mrula tem 16 clulas, as quais so fenotipicamente todas iguais e apresentam
o mesmo contedo nuclear, mas tm diferente contedo citoplasmtico.
A fase seguinte a formao do Blastocisto. Neste caso, a posio importante,
existindo j clulas fenotipicamente diferentes, sendo visvel o trofoblasto, o boto
embrionrio, ou seja, as clulas apresentam-se mais especializadas.
A posio das clulas comea a ser importante, porque elas comeam a receber
sinais dos tecidos circundantes e comeam no s a ter o seu contedo citoplasmtico
diferente, como tambm comeam a receber sinais exteriores, que lhes diz que estas
devem comear a fazer coisas diferentes, ou seja, a especializar-se mais.

Induo da Diferenciao
As clulas de alguns tecidos induzem outras a diferenciar-se, sendo que se
tratassem de processos que ocorrem em perodos temporais muito precisos e as
clulas a serem induzidas tm que ser competentes.

Fatores de Diferenciao
So fatores morfognicos que se difundem em espaos curtos, sendo a
necessrio a existem de recetores celulares nas clulas alvo. Ex: Activina, FGF,
Dorsalina.

124 de 141
Regulao da Expresso Gnica
A diferenciao consequncia da regulao da expresso gnica.
As clulas tm o mesmo DNA, mas tm diferentes conjuntos de genes diferentes
ativos ou reprimidos, o que faz com que tenham protenas diferentes e funes
celulares diferentes.
As ativaes ou represses tm de:
Manuteno da
Manter-se ativas
linhagem celular atravs
Ser herdadas pelas clulas filhas de MEMRIA

A regulao da expresso gnica pode dar-se a diferentes nveis:

Estrutura da Cromatina e DNA

Transcrio
Ps-Transcrio
Processamento de RNA
Degradao de RNA
Traduo
Processamento e degradao de protenas

I Estrutura da Cromatina e DNA

Cromatina: DNA enrolado em Histonas
Pode ocorrer vrias modificaes nos histonas, que vo afetar o estado da
cromatina:

Metilao da cromatina (adio de um grupo metil)

As histonas tm prolongamentos que podem ser metilados. Se estes
prolongamentos forem metilados, vai haver uma maior ligao com os
nucleossomas vizinhos, a cromatina vai ficar mais enrolada, o que vai fazer
com que haja menor possibilidade de transcrio, resultando na
inativao da cromatina.
A metilao da cromatina est associada a inativao de genes por longos
perodos.

125 de 141
 Pode ocorrer durante o desenvolvimento embrionrio e duram toda a vida
do organismo.

Acetilao da cromatina (adio de um grupo acetil)

Tem a funo oposta metilao da cromatina.
Se os prolongamentos das histonas estiverem acetilados, tem-se uma
menor ligao aos nucleossomas vizinhos, a cromatina vai estar menos
compacta, ou seja, menos enrolada, e ocorrer uma transcrio mais fcil.

Com estes dois tipos de modificaes, possvel ativar ou reprimir certas zonas
de DNA, ou seja, na mesma clula existir genes expressos e outros no expressos.
Tanto a acetilao como a metilao so feitas por complexos proteicos que
adicionam estes grupos metil ou acetil s histonas.

Metilao do DNA
Adiciona-se um grupo metil nas citosinas, no em todas as citosinas, s
nas citosinas que sejam seguidas por uma guanina. Esta metilao do DNA
faz com que haja uma represso da transcrio do DNA.
Ocorre a estabilizao dos nucleossomas, impedindo que os fatores de
transcrio se liguem.

II Transcrio / Ps-Transcrio
Nos eucariontes, para se iniciar a transcriao necessrio existir associao de
fatores de transcrio RNA polimerase, havendo a formao do complexo iniciao-
transcrio.
Para que ocorra a transcrio, para alm da formao do complexo iniciao-
transcrio, tem que existir outro tipos de reguladores, que indicam se a transcrio
deve efetivamente ser iniciada ou no.
Existem, portanto, dois tipos de controladores:

Controladores proximais ativadores prximos dos genes

Controladores distais ativadores (enhancers) ou estimuladores. Situam-
se longe do gene a estimular.

126 de 141
III Ps-Transcrio (Processamento de RNA e Degradao de RNA)
Processamento do RNA
RNA produzido no ncleo, vai posteriormente ser exportado para o citoplasma
sob a forma de RNA maduro.
Pode ocorrer splicing alternativo, ou seja, diferentes molculas de RNA a partir
de uma mesma molcula de DNA e RNA mensageiro, depende dos segmentos
tratados como exes ou intres.
Em alguns casos, os exes so considerados como sendo intres, originando
mRNA diferentes, consequentemente protenas diferentes com funes distintas.

Degradao de RNA
possvel regular a quantidade de protenas que so reguladas, se regularmos a
degradao de RNA. O tempo de vida do RNA determinante para o padro de
protena produzida.

IV Traduo
Na regulao da expresso gnica ao nvel da traduo, temos modificaes ps-
traducionais, como fosforilao, vai fazer com que as protenas sejam ativas ou
reprimidas, que consequentemente vai implicar que clulas diferentes tenham estas
protenas com atividades diferentes.

V Processamento e Degradao de Protenas

Tambm ir regular a expresso gnica.

Reverso da Diferenciao Celular

Uma clula estaminal vai-se dividir e distribuir assimetricamente estes fatores
de transcrio, regulando a cromatina, o DNA ou o mRNA, formando-se clulas cada
vez mais especializadas. Sabe-se, agora, que pode haver reverso desta diferenciao
celular, que foi provado pela primeira vez quando se fez a clonagem da ovelha Dolly.

127 de 141
 Provou-se que se podia tirar o ncleo de uma clula diferenciada e, de seguida,
conseguiu-se reverter este estado de diferenciao, para voltar a ser totipotente e
formar o organismo inteiro.

128 de 141
 8.3 Apoptose
Apoptose= consiste na remoo de clulas indesejadas,
permitindo um controlo social do organismo.

As clulas que sofrem apoptose so, por exemplo:

Clulas que recebem a cinalizao de morte
Clulas que nao recebem os sinais de sobrevivncia
Clulas que nao corrigem o seu DNA
Clulas em stress (ou seja dificuldade em viver)
Clulas que perdem o contacto com a membrana basal (neste
caso sofrem anoikia, que um tipo especfico de apoptose).

Necrose= Morte celular no planeada.

129 de 141
Diferenas entre necrose e apoptose:

Apoptose
Envelhecimento celular
A clula divide-se em mini-
vesculas, que so
fagocitadas por outras
clulas
Nao h inflamao ( um H lise (exploso) celular
processo controlado)
O estmulo pode ser
fisiolgico ou patolgico
Clulas individuais
Atuao de mitocndrias e
enzimas
Mecanismo codificado
geneticamente
Necrose
A clula incha (h
disrupo da membrana)
H entrada de lquido na
clula
A clula deica de funcionar
Leva a inflamao
(mecanismo no
controlado)
O estmulo sempre
patolgico
Afeta tecidos inteiros
No h participao de
nenhum organelo
Nao tem mecanismo
planeado.

130 de 141
(ESQUEMA MUITO BOM PARA VISUALIZAR + foto slide 5)

Grau de insulto (stress)

Do menor ao maior
Vida (hormese) Morte autofgicaApoptosenecroptose
Necrose

Nota-
Necroptose= tipo de morte que o intermdio entre a apoptose e a
necrose. Tem morfologia de necrose, mas induzido por sinais
qumicos (acontece quando o organismo quer que haja mecanismo
de inflamao). Nesta, no se recorre a uma componente importante
da apoptose, a caspase.
(Como um fenmeno identificado recentemente, ainda no bem
percebido, e por isso nao faz parte do programa saber.)

Tipos de insultos:
Acumulao de protenas misfolded
Infeo
Danos no DNA
Clulas cancergenas

Fases da apoptose:
1. Contrao celular
2. Condensaao da cromatina (de modo a que j nao possa ser
transcrita)
3. Ativao das nucleases (que vo fragmentar o DNA)
4. Fagocitose

Reconhecer histologicamnete clulas em apoptose:

Clula muito redonda
Condensao da cromatina em pequenos glomrulos

Mecanismo de apoptose:

Numa clula normal, a caspase (um tipo de protease) est

inativa..

A clivagem da primeira caspase (uma procaspase) estimulada

por um estmulo apopttico.

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 A clivagem da primeira caspase estimula a caspase de outras
caspases (de forma amplificadora, ou seja, uma caspase
consegue clivar muitas outras caspases).

O gene p35 e o frmaco Z-VAD-fmk conseguem impedir a ocorrncia

de apoptose. (este frmaco usado na industria alimentar para evitar
que a fruta tenha mau aspeto)

H 2 tipos de caspases:

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1. As pro-caspases/caspases iniciadoras: so a caspase 2, 8 e 9,
que tm um pro-domnio com um stio de ligao do sinal
apopttico. Estas so as primeiras a ser ativadas/clivadas.
2. As caspases executoras: estas nao tm pro-domnio, pelo que
s sero ativadas pelas outras caspases. So a caspase 3, 6 e 7.

O estmulo que ativa a apoptose pode ser extrnseco ou

intrnseco:

Via extrnseca:
1. Um lisossoma de outra clula liberta um sinal
2. O sinal reconhecido por recetores de membrana, que
possuem adaptadores para se ligarem s procaspases.
3. A procaspase clivada, e vai, consequentemente, clivar as
outras caspases.

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Via intrnseca:
1. A mitocndria liberta citocromo-c
2. O citocromo-c vai formar um complexo com a Apaf-1.
3. Vrios complexos citocromo-c-Apaf-1 vo-se ligar entre si
atravs do CARD domain do apaf1), formando um
apoptossoma (complexo heptamrico).
4. O apoptossoma vai recrutar (ligar-se) s procaspases, para as
clivar.

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 A apoptose regulada pelo equilbrio de fatores pro-
apoptticos e de fatores anti-apoptticos.

Reguladores de apoptose:

Famlia de protenas Bcl-2:

Na via intrnseca, a libertao de citocromo-C controlada pela Bcl-2.
Nesta famlia proteica existem variantes pro-apoptticas (ex: Bax,
Bid) e anti-apoptticas (ex:Bcl-2).
AS protenas pro-apoptticas tm uma componente
transmembrantica, que se vai por na membrana da mitocndria
para permitir a sada do citocromo C.
AS anti-apoptticas vo-se ligar s pro-apoptticas para fechar os
canais.

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 Tambm existem IAPs (protenas inibidoras de apoptose) que se ligam
s caspases para as segurar, impedindo a sua clivagem. Estas sao
contrabalanadas por Anti-Iaps, que inativam as IAP

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Bloqueio do DNA:

Quando ocorre apoptose, importante que se impea a atividade do

DNA (dado que se a clila mandada para apoptose, porque no
suposto estar a exprimir o seu material gentico). Deste modo, a
caspase 3 vai ativar a CAD (caspase activated desoxiribase) para
destruir o DNA.

Mecanismo de morte celular autofgica:

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Formam-se auto-fagossomoas que envolvem os organelos
citoplasmticos, para serem degradados por um lisossoma da prpria
clula.

Sinalizao extracelular da apoptose:

As clulas apoptticas emitem um eat me signal para serem
reconhecidos por um fagcito.
Este sinal consiste em virar o fosfolpido PS, que normalmente est
virado para o meio intracelular, para o meio extracelular.

Outras funoes das caspases:

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As caspases tambm podem contribuir para a diferenciao celular
dos espermatozides (levando expulso da maioria do citoplasma)
ou das hemcias (por expulsao do ncleo).

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