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CARCTER ANFOTRICO Y PUNTO ISOELCTRICO DE AMINOCIDOS

RESUMEN
Los aminocidos son molculas orgnicas las cuales permite la unin entre s para formar
un enlace amida conocido como enlace peptdico. Todos los aminocidos componentes
de las protenas son L-alfa-aminocidos. Durante el desarrollo de la prctica se
desarrollaron dos titulaciones con diferentes aminocidos, como es el caso de la Alanina y
la Lisina, las cuales sirvieron para analizar el comportamiento de estos, en medios
acuosos y con variacin diferentes de pH que permitieron evidenciar el comportamiento
tampn de estos dos aminocidos.

INTRODUCCIN principalmente como un ion dipolar neutro


(zwitterion).2
Todas las protenas estn constituidas por
aminocidos unidos en una secuencia
lineal mediante un tipo especco de
enlace covalente (enlace peptdico)
formado entre el grupo amino de un
aminocido (NH2) y el grupo carboxilo
(COOH) del aminocido precedente. A
partir de estas combinaciones, las clulas
tienen la capacidad de sintetizar protenas,
como anticuerpos, enzimas, hormonas,
protenas estructura- les y ms. Todos los
aminocidos que se hallan en las
protenas son alfa aminocidos; es decir,
en todos ellos el carbono (alfa) es
asimtrico y est unido a cuatro grupos
diferentes: el grupo carboxilo, el grupo
amino, un grupo R y un tomo de H.
Todos los aminocidos de las protenas
tienen conguracin L y dieren entre s
por la estructura de sus cadenas laterales
o grupos R. 1
En disolucin cida, el aminocido es
TABLA 1.Estructura de los aminocidos mas
protonado y existe principalmente como un
comunes
catin. En disolucin bsica, el aminocido
es desprotonado y existe principalmente Este pH se llama punto isoelctrico (pI) del
como un anin. Entre las dos est a un pH aminocido y tiene un valor de 6.01 para la
intermedio en el que el aminocido est alanina. Ms especficamente, el pI de
balanceado exactamente entre las formas cualquier aminocido es el promedio de las dos
aninica y catinica y existe constantes cidas de disociacin que
involucran al ion dipolar neutro. 2
con NaOH 0,05M a la cual se le aplicaron
primeramente alcuotas de 0,2 mL hasta
completar 1 Ml, luego alcuotas de 0.5 ml y
por ultimo de 1ml hasta completar la titulacin.

Titulacin de aminocido L-lisina

En este caso tomaron 5mL de l-lisina para la


titulacin, En el cual se utiliz inicialmente
alcuotas de 0.1 ml despus se usaron
alcuotas de 0.5 ml hasta llegar a un (pH) de
11.35 y de 1ml para finalizar, esto para tener
un conjunto de datos ms completo a la hora
de graficar.

RESULTADOS Y ANLISIS

Para el caso de la titulacin de la L-alanina los


valores obtenidos para el cido HCl y la base
TABLA 2. Valores de pKa de los NaOH se encuentran en la tabla 3.
aminocidos. Con los valores obtenidos en la titulacin se
hicieron los clculos de la concentracin de H+
del cido HCl:
METODOLOGIA
0,05
Para el desarrollo de la prctica se dividi 1 = 0, 5 Moles
1000
en dos partes, en donde la primera parte
se realiz un trabajo terico en casa, el Seguidamente de obtener las moles se
cual fue indispensable para realizar la realizaron los clculos pertinentes para el
parte experimental. Para la segunda desarrollo de la grfica de la titulacin;
parte de la prctica se tomaron
soluciones acuosas 0,05M de los
aminocidos L-alanina y L-lisina pH vs Equivalentes de H+
8
Titulacin de aminocido L-alanina 6
pH

Para el desarrollo de la titulacin se 4


tomaron 5 mL de la solucin acuosa del
2
aminocido L-alanina 0,05M en un vaso
de precipitado de 50mL. Seguidamente 0
se atendieron las indicaciones para el 0 0.0002 0.0004 0.0006 0.0008
uso de pH-metro para iniciar con la Equivalentes de H+
medicin de pH inicial de la solucin. FIG1. Grfico de la curva de titulacin obtenida para la alanina con
Luego se realizaron dos titulaciones a la solucin 0,05M y solucin acida de HCl 0,05M.
solucin. La primera con HCl 0,05M Tabla 3. Titulacin de la L-alanina con NaoH y
usando alcuotas de 0.5 mL y la segunda HCl
Vln de Vln de
NaOH pH Para el caso de la L-alanina titulada con NaOH
HCL pH
0,2 8,139 la grfica obtenida se puede observar en la
0,5 3,364
0,4 8,553 figura 2, para la cual se hizo el mismo
0,6 8,767
1 2,955 procedimiento de la titulacin con HCl pero
0,8 8,919 1,5 2,754 hallando los equivalentes de OH presentes en
1 9,05 2 2,61 la base.
1,5 9,244 2,5 2,439
2 9,379 3 2,238
2,5 9,53 3,5 2,177
3 9,591 4 2,078 pH VS Equivalentes de
3,5 9,732
4,5 2,01 OH
4 9,845 14
4,5 9,976 5 1,952
5 10,098 5,5 1,888 12
5,5 10,233 6 1,839 10
6 10,372 6,5 1,783 8

pH
6,5 10,534 7 1,754 6
7 10,745 7,5 1,719
7,5 10,995 4
8 1,683
8 11,201 2
8,5 1,679
8,5 11,388
9 1,65 0
9 11,49 0 0.0005 0.001
9,5 11,58 9,5 1,618 Equivalentes de OH-
10 11,646 10 1,59
10,5 11,699 10,5 1,564 Fig2. Grfico de la curva de titulacin
11 11,732 11 1,55 obtenida para la alanina con solucin 0,05M
12 11,776 11,5 1,54 y solucin bsica de NaOH 0,05M.
13 11,853
12 1,531
14 11,887 La Unin de estas dos graficas estara
15 11,928
12,5 1,519
13 1,489 gobernada por dos sitios en los cuales el
16 11,971
aminocido presenta comportamiento de
17 11,986
tampn como se observa el figura 3.
18 11,999
acta qumicamente como una base, al igual
que la arginina esto se debe a que tiene una
cadena lateral la cual contiene un grupo
amino protonable que por lo general participa
en puentes de hidrgeno y como base
general en catlisis3.
En la figura 4 se puede observar la estructura
de la lisina en la cual se evidencia los dos
grupos aminos.

Fig3. Curva de calibracin de la alanina


al aumentar la concentracin de OH.
Para el caso de la primera parte de la
titulacin el grupo carboxilo del
aminocido tiene un valor aproximados Fig 4. Molcula de la Lisina
de pKa de 2,34 el cual al aumentar el
pH se desprotona obtenindose una Para el caso de la titulacin de la L-lisina los
mezcla del aminocido protonado y valores obtenidos para el cido NaoH se
desprotonado en el carbonilo. Es decir encuentran en la tabla 4.
que a partir de pH 2,34 (pK1) el carboxilo
se disocia (-COO-) y el amino sigue Tabla 4. Titulacin de la L-lisina con NaOH
protonado (-NH3+). Vln de
OH pH
Cuando el aminocido tiene una carga 0,1 7,284
simultneamente positiva y negativa 0,2 7,612
(zwitterion) podemos observar que el 0,3 7,757
aminocido tiene un punto de
0,4 7,862
equivalencia al cual se le conoce como
punto isoelctrico en el cual la carga 0,5 7,943
neta es igual a cero. 0,6 8,012
A partir de pH 9,60 (pK2) el carboxilo 0,7 8,105
sigue disociado (-COO-) y el amino 0,8 8,165
pierde el protn (-NH2). El aminocido 0,9 8,214
queda con una carga negativa neta y un 1 8,285
pH bsico. 1,5 8,594
2 8,789
Titulacin de a Lisina
2,5 8,943
La segunda parte de la experimentacin 3 9,116
se titul la lisina, que es un aminocido 3,5 9,26
el cual presenta tres pka diferentes y
4 9,396 0,05M y solucin bsica de NaOH 0,05M.
4,5 9,872 La representacin grfica de la lisina
5 10,049 proporciona informacin sobre la medida de
5,5 10,14 los pK de los grupos ionizabes que en este
caso se localizan en el punto medio de la
6 10,271
zona tampn.
6,5 10,411
Adems las formas ionizables del
7 10,443
aminocido en cada rango de pH y la carga
7,5 10,654 elctrica del aminocido encada rango
8 10,773 del pH.
8,5 10,883 Cabe recalcar que en disolucin cida, los
9 10,982 aminocidos estn protonados y en
9,5 11,064 disolucin bsica, el aminocido es
10 11,153 desprotonado y existe principalmente como
10,5 11,251 un anin. Cuando ese tiene carga cero, el pI
11 11,352 de cualquier aminocido es el promedio de
12 11,493 las dos constantes cidas de disociacin que
13 11,6 involucran al ion dipolar neutro. 3
14 11,669 Para el caso de la lisina el punto isoelctrico
15 11,749 es de 9,74 debido a su carcter bsico y se
16 11,806 pude observar los dos puntos cercanos de
17 11,853
taponamiento en el pKa 9,16 y pK 10,67.
18 11,882
20 11,99
CUESTIONARIO
Luego de hacer los clculos pertinentes
se grafic el pH con los equivalentes de Pueden comportarse los aminocidos como
OH. un buffer intracelular? Por qu?
Los aminocidos tienen carcter anftero
PORQUE pueden ceder protones y tambin
pH vs Equivalentes OH captarlos ya que poseen radicales comunes
en todos los aminocidos: el grupo NH2 y el
14 grupo COOH.
12 - Estos radicales, al estar en contacto
10 con el agua, se presentan ionizados o
8 protonados; actuando los dos como donantes
pH

6 o aceptores de protones.
4
En qu rangos de pH? Argumente su
2
respuesta. Tenga en cuenta el rango de
0
valores del pKa de los grupos carboxilo y
0 0.00001 0.00002 0.00003
amino de los 20 aminocidos.
Equivalenes de OH-
Fig 4. Grfico de la curva de titulacin
Para un pH cidos el NH2 capta un protn
obtenida para la lisina con solucin
NH3+ (el pka para este radical es 9) y En pH
bsicos El COOH pierde un protn: Para calcular el PI del pptido primeramente
COO- (el pKa para este radical es 2). se desarroll el enlace peptdico de los
aminocidos mencionados (N-Asparagina, E-
Glutamato, A- Alanina, L-leucina),
En el punto de pKa del grupo amino seguidamente se observaron os sitios de
existe el 50 % de radicales amino inters, es decir donde la sustancia estaba
protonados (NH3+) y el otro 50 % de cargada o posea diferentes pKa, en el cual
radicales amino desprotonados (NH2). se pudo observar 3 puntos de inters NH3+
con un pk de 8,8, COO- con pk de 4,35 y un
grupo COOH con pK de 2,36 e cual a medida
En este punto, la variacin de pH, si
que se agregaba equivalentes de OH se
adicionamos NaOH a la solucin, es
pudo observar la desprotonacin y la carga
mnima. Por lo tanto, en este punto la
neta en cada punto dando como resultado
capacidad amortiguadora es mxima.
final que entre 2,36 y 4,35 el pptido tiene un
carga neta cero el cual utilizando la formula
En el punto de pKa para el grupo 1+2
carboxilo existe el 50 % de radicales PI = se pudo obtener que el valor
2
carboxilo protonados (COOH) y el otro del punto isoelctrico es igual a 3,36.
50 % de radicales carboxilo
desprotonados (COO-). En este nivel de CONCLUSIONES
pH el aminocido tambin es buen
Utilizando el pH- metro se pudo
amortiguador.
comprobar el carcter anftero de la
2. Cmo separara los aminocidos R,
solucin de aminocido L-alanina que
H, D y E de una mezcla a pH 7? tiene la capacidad de donar o aceptar
Para hacer la separacin se necesit protones gracias a sus grupos amino y
conocer los diferentes pk de los carboxilo.
aminocidos R(Argenina), H(Histina), Las curvas de titulacin muestran los
D(Aspartato) y E(Glutamato) y puntos ms sobresalientes en la reaccin
analizarlos cuando la mezcla estuviera de los aminocidos, como lo son los pka
en pH 7. Haciendo los anlisis ya que cerca de estos puntos los
pertinentes se pudo observar que la aminocidos presentan carcter tampn,
Argenina en pH 7 presenta una carga que son importantes para la
neta de +1 el cual en presencia de neutralizacin y utilizacin de procesos
electroforesis su corrimiento es rpido biolgicos.
mientras que a Histina en un pH 7 tiene El comportamiento zwitterion del
un carga neta de cero e cual va a aminocido se puede observar
generar muy poco movimiento el cual notoriamente al agregar equivalentes de
con lleva una mala separacin. Para el OH, ya que cerca al punto isoelctrico la
casa del Aspartato y Glutamato en pH 7 variacin de pH es aproximadamente
poseen una carga neta de -1 el cual en superior e inferior a uno con solo agregar
la separacin va hacer que fluya un ml en ambos casos.
rpidamente hacia ctodo.

3. Calcule el PI del pptido N-E-A-L.


BIBLIOGRAFA

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