UNIVERSIDAD DE CORDOBA

LIC. CIENCIAS NATURALES Y EDUCACIN AMBIENTAL

ASIGNATURA: GENTICA. VIII SEMESTRE
DOCENTE: MNICA MARTNEZ GERMN

PRCTICA DE LABORATORIO:
OBSERVACIN DE CROMOSOMAS POLITNICOS EN LARVAS DE DROSOPHILA

Introduccin a la politenia y los cromosomas politnicos de Drosophila

Cuando en el ciclo de divisin celular se modifica la alternancia normal de las fases
S y M, de manera que despus de una mitosis se producen dos perodos de sntesis sucesivos,
tiene lugar el fenmeno de la endorreduplicacin. Un caso extremo de la misma es la
politenia, proceso en el que se produce un nmero elevado de rondas sucesivas de replicacin
(5, 10 o ms) dando lugar a los llamados cromosomas gigantes o cromosomas politnicos que
estn constituidos por 2n cromatidios (siendo n el nmero de rondas de replicacin). As, por
ejemplo, en las glndulas salivales de varias especies de Drosophila la replicacin se produce
durante diez rondas sucesivas, es decir, que cada cromosoma tiene 210 = 1.024 cromatidios.
Los cromosomas politnicos se mantienen en interfase; por tanto son cromosomas somticos
interfsicos en los que las cromtidas permanecen descondensadas (como corresponde a la
interfase) por lo que la longitud del cromosoma es entre 100 y 200 veces la del cromosoma
mittico correspondiente. Como las numerosas copias de cada cromosoma permanecen
unidas y, adems, los cromosomas homlogos tienden a estar apareados, la politenia produce
un grosor total que es unas diez veces el de los cromosomas metafsicos. Todo ello los hace
perfectamente analizables con microscopia ptica a pesar de tratarse de cromosomas
interfsicos.
La politenia no es una anomala del ciclo celular, sino que se considera un mecanismo de
amplificacin gnica dentro de un proceso de citodiferenciacin. Este sistema permite a los
organismos disponer de una lnea germinal con un contenido de ADN relativamente bajo, con
las ventajas que ello conlleva respecto a replicaciones rpidas y ciclos celulares cortos, pero
con la capacidad de multiplicar el genoma (o partes de l) en lneas celulares especficas.
Los cromosomas politnicos fueron descubiertos por Balbiani (1881), pero su significado no
fue comprendido hasta mediado de los aos treinta en que fueron analizados en las glndulas
salivales de las larvas de los dpteros. Posteriormente, se observaron en otros tejidos u
rganos de las larvas (epitelio intestinal, tubos de Malpigio, etc) y en otros organismos, por
ejemplo en el macroncleo de protozoos ciliados, glndulas de la seda de Bombix mori,
glndulas salivales de insectos colmbolos y tambin en distintos tejidos vegetales. De todas
formas los organismos ms favorables para la observacin de los cromosomas politnicos son
los dpteros, por lo que los cromosomas politnicos mejor conocidos son los de las glndulas
salivales de las larvas de Drosophila y Chironomus.

Cuando se estudia el desarrollo de las larvas de D. melanogaster se observa la formacin de

las glndulas salivales por divisiones celulares e invaginaciones del blastodermo hasta alcanzar
un nmero aproximado de 125 clulas cada glndula. A partir de este momento, que coincide
con el periodo de eclosin de la larva, las clulas ya no se dividen ms y comienzan a aumentar
de tamao como consecuencia del proceso de endorreduplicacin que origina los
cromosomas politnicos. Los cromosomas politnicos muestran un patrn de bandas tpico,
producido por la alternancia de regiones condensadas (bandas) y regiones descondensadas
(interbandas). Esta organizacin es consecuencia del alineamiento exacto de las cromtidas en
los cromosomas de forma que las regiones de fuerte empaquetamiento de las cromtidas
individuales (correspondientes a crommeros) tienen la apariencia de bandas, alternndose
con las interbandas (Fig. 1).
Fig. 1. Fotografa de un cromosoma politnico
de Drosophila y detalle de su morfologa.

En Drosophila, los cromosomas politnicos aparecen unidos en una zona central, denominada
cromocentro, que se interpreta como la fusin de las regiones pericentromricas
heterocromticas. En otros gneros de dpteros, como Chironomus, no aparece cromocentro
de manera que los cromosomas politnicos se presentan sueltos
(Fig. 2).

Figura 2. Cromosomas politnicos (a) de Drosophila melanogaster mostrando la

presencia del cromocentro, (b) de Chironomus thummi, sin cromocentro.

El apareamiento de los brazos homlogos es tan ntimo que suele ser difcil distinguir un
brazo del otro; sin embargo, en ocasiones se produce la falta de apareamiento en
regiones homlogas de los cromosomas politnicos

Una vez establecido que el patrn de bandas que presentan los cromosomas politnicos es
caracterstico para cada especie, se pudieron construir mapas citolgicos muy precisos, en los
cuales cada banda cromosmica quedaba identificada por una letra y un nmero (Fig. 4).

Estos mapas permiten la localizacin de reordenaciones cromosmicas que producen

alteraciones del patrn de bandas. En D. melanogaster, muchas de estas reordenaciones
cromosmicas se han podido asociar a mutantes fenotpicos determinados, facilitndose la
correlacin entre mapas citolgicos y mapas genticos. Actualmente, la posicin exacta de
genes concretos en el mapa citolgico puede determinarse mediante la tcnica de hibridacin
in situ.
Fig. 4. Mapa gentico, mapa citolgico y fotomapa de las seis primeras regiones del
cromosoma X de D. melanogaster.

OBJETIVO GENERAL:
Aprender a preparar cromosomas politnicos de Drosophila melanogaster para su observacin
al microscopio
Objetivos didcticos:
Aprender el uso del microscopio mediante la observacin de preparaciones de
cromosomas politnicos de D. melanogaster
Aprender a preparar cromosomas politnicos a partir de glndulas salivares de larvas.

Conocer y practicar las tcnicas ms usuales en la citogentica, utilizando material

biolgico.

Conocer e identificar la existencia de cromosomas gigantes en clulas glandulares

salivales de Drosophila melanogaster as como conocer su importancia en el campo de
la gentica

MATERIAL REQUERIDO:

Cubreobjetos

Caja de petri

Estereoscpio

Aguja de diseccin
 Microscopio ptico

Material biolgico:

Larvas de 3er estadio de la mosca

Material reactivo:

Reactivo de aceto orcena

DESARROLLO DE LA PRCTICA:
METODOLOGA:
1. Colocar una larva limpia en un portaobjetos con una gota de NaCl al 0,6%. Situar el porta
sobre la plataforma de la lupa. Como puede observarse en la figura 6, las glndulas salivales se
encuentran unidas entre s por la parte anterior en un conducto nico que se comunica con la
faringe.

Figura 6: Esquema interno de una larva de Drosophila.

Para extraer las glndulas, se sujeta la parte posterior de la larva con unas pinzas y
se decapita con una aguja enmangada (Fig. 7). Las glndulas aparecern como dos
saquitos transparentes, situados a ambos lados del esfago, y unidos a tejido graso.

2. Aislar las glndulas lo mejor posible pero con cuidado de no daarlas. No es excesivamente
problemtico el hecho de que quede un poco de tejido graso adherido.
3. Transferir las glndulas a una gota de colorante (orcena actico-lctica) y mantenerlas
durante 25 minutos. Este tiempo se determina empricamente y depende de la marca de
colorante y de la cepa utilizada. Es necesario que las glndulas permanezcan cubiertas por el
colorante ya que, de no ser as, se secarn y se estropear el material.
4. Tras la tincin, cubrir la preparacin con un cubreobjetos y dar unos golpes suaves con la
punta de la aguja enmangada para que las clulas se separen. A continuacin, cubrir la
preparacin con papel absorbente y hacer presin sobre el cubreobjetos, evitando que ste se
mueva, para que los cromosomas se extiendan y queden perfectamente aplanados.
PRESENTACIN DE LOS RESULTADOS:
Presentarn un resumen de la prctica en el que figure un esquema de lo que ha obtenido en
sus preparaciones.

PREGUNTAS
1. Dibuje e identifique los cromosomas. Cuntos cromosomas politnicos observa?
2. Cul ser el nmero diploide de cromosomas del organismo que trabaj?
3. En estas especies est presente o no el cromocentro?
4. Cules son los marcadores cromosmicos ms evidentes en estos cromosomas?
5. Investigue cmo es posible determinar el centrmero en estos cromosomas, hay
constriccin primaria?
7. Puede observar asinapsamientos? Represente y localice los asinapsamientos que registre,
8. Observe los telomeros de todos los cromosomas, encuentra alguna diferencia en los
telmeros de los diferentes pares de cromosomas?
9. Cuales son las principales caractersticas que permiten la diferenciacin de los cromosomas
politnicos?
10. Consulte en la literatura cules son las aplicaciones de los cromosomas politnicos en
sistemtica.