Reporte No.

8
Propiedades qumicas de los
carbohidratos.

Centro de Ciencias Bsicas.

Departamento de Qumica.
Academia de Bioqumica.
Lic. Anlisis Qumicos Biolgicos.

Materia: Bioqumica I
Profesor: M.C. Javier Martnez Rodrguez.
Alumnas
Joselyn Georgina Flores Ibarra.
Dulce Mara Palos Dueas.
Alejandra Ramos Hernndez.

Fecha: 19/Octubre/2017
OBJETIVO
Caracterizar un carbohidrato problema, hasta donde sea posible, mediante algunas pruebas
qumicas cualitativas.

INTRODUCCION
Los carbohidratos son molculas formadas por carbono, hidrgeno y oxgeno (C, H, O) e
incluyen algunas de las molculas ms relevantes en la vida de los organismos, como son
la glucosa, que es universalmente utilizada por las clulas para la obtencin de energa
metablica, el glucgeno contenido en el hgado y el msculo, que forma la reserva de
energa ms fcilmente asequible para las clulas del organismo y la ribosa y desoxirribosa
que forman parte de la estructura qumica de los cidos nucleicos. Por otra parte los
carbohidratos son molculas importantes en la bisfera, en donde la celulosa, que forma la
porcin principal de la estructura de las plantas, es la molcula orgnica ms abundante
del planeta y la encontramos en nuestra vida diaria bajo la forma de madera o las fibras de
algodn, acetato y rayn de nuestras ropas; as tambin el azcar de mesa, la sacarosa,
es un disacrido con el que endulzamos nuestros alimentos y se produce anualmente en
cantidad de millones de toneladas. (Lehninger, 2006)
Desde el punto de vista qumico, los carbohidratos son polihidroxi aldehdos o cetonas y
sus polmeros y existen en tres categoras principales distinguibles por el nmero de
unidades de azcar que los forman: monosacridos, oligosacridos y polisacridos. Los
polisacridos liberan a la hidrlisis centenares o millares de monosacridos; mientras que
los oligosacridos producen de dos a l0 monosacridos y los monosacridos mismos son
las unidades mnimas de los carbohidratos que ya no se pueden hidrolizar. Se les llama
carbohidratos debido a que su estructura qumica semeja formas hidratadas del carbono y
se representan con la frmula Cn (H2O)n. (Mathews, 2002)
Los carbohidratos tienen diversas funciones en el organismo destacan: su papel como
combustible metablico (1 g de carbohidrato produce 4 Kilocaloras); como precursores en
la biosntesis de cidos grasos y algunos aminocidos y; como constituyentes de molculas
complejas importantes: glucolpidos, glucoprotenas, nucletidos y cidos nucleicos. Las
unidades bsicas de los carbohidratos son los monosacridos, no hidrolizables en unidades
ms pequeas. La glucosa es el monosacrido ms abundante; tiene 6 tomos de carbono
y es el combustible principal para la mayora de los organismos. Los oligosacridos
contienen de dos a diez unidades de monosacridos unidas covalentemente. (Devlin, 2004)
Existen varias pruebas qumicas para la identificacin de carbohidratos, algunas de ellas
son:
Reaccin de Molish: Todos los carbohidratos tanto los monosacridos como los disacridos
y polisacridos reaccionan con -naftol, en presencia de cido sulfrico para formar
sustancias complejas coloreadas. Esta reaccin se utiliza para la identificacin en general
de los carbohidratos.
Reaccin de Seliwanof: Esta reaccin comprende la deshidratacin del carbohidrato con
cido clorhdrico (cido mineral fuerte) y la posterior reaccin con el resorcinol para formar
el complejo coloreado, como se muestra en la reaccin presentada a continuacin. Es una
reaccin que ocurre rpidamente con las cetosas, por lo que se utiliza para su identificacin.
Prueba de Barfoed: Es un ensayo qumico utilizado para detectar monosacridos. Se basa
en la reduccin de cobre (En forma de acetato) a cobre (En forma de xido), el cual forma
un precipitado color rojo ladrillo.
Prueba de Benedict: la lactosa, la glucosa, la maltosa, y pueden reducir el Cu+2 que tiene
color azul a Cu solucin alcalina como Cu+2 O Reaccin de Benedict Benedict identifica
azcares reductores, como maltosa, y celobiosa. En soluciones alcalinas, que tiene color
azul a Cu+, que precipita de la Cu2O de color rojo-naranja. (Macarulla, 1994)

MATERIAL Y REACTIVOS
MATERIAL REACTIVOS

Reactivo de Molish (solucin de alfa-

1 gradilla
15 tubos de ensaye
3 pipetas de 1 mL
4 pipetas Pasteur con
Bulbo
1 bao mara Reactivo de cido fosfomolibdato
1 soporte completo
1 mechero y ligas
naftol en etanol).
H2SO4 concentrado
Solucin de Benedict (contiene sulfato
cprico y cido lctico disueltos en
agua).
Reactivo de Barfoed (sulfato cprico y
cido lctico disueltos en agua).
Reactivo de Seliwanoff(resorcinol en
HCL)
Soluciones de:
Glucosa,sacarosa,fructosa,galactosa,
maltosa,lactosa y almidon (1% p/v).
PROCEDIMIENTO

A 0.5 mL de cada solucin aadir una gota de reactivo de molisch.

Incubar los tubos a bao mara
Molisch Aadir, muy cudidadosamente 0.25 mL de H2SO4 concentrado

A la solucin de Benedict 1.4 mL, aada exactamente 0.25 mL de cada

una de las soluciones que van a ser probadas.
Sumerger los tubos en un bao de agua hirviente durante 5 minutos y
posteriormente enfriar lentamente.
Benedict observe si se formo un precipitado y un color rojo que inidque la prueba
como positiva.

Aada a 0.25 mL de cada una de las soluciones o.25 mL del reactivo de

Barfoed.
Agite los tubos y pngalos a bao de agua hirviendo durante 3 minutos.
Barfoed Aadir a cada tubo 0.5 mL de reactivo de cido fosfomolbdico. Agitar.
Un color azul oscuro es prueba positiva.

A 0.5 mL del reactivo de Seliwanoff aadir 1 gota de las soluciones que

se van a probar.
Calentar en bao de agua hirviendo durante 2 minutos y observar el color
Seliwanoff desarrollado.
El color rojo indica presencia de cetosas.

RESULTADOS
Tabla 1.- Tabla de resultados en la determinacin de carbohidratos

PRUEBAS

# de tubo MUESTRAS Molisch Bendiut Barfored Seliwanoff

1 Glucosa + + + +

2 Fructuosa + + + +
3 Galactosa + + + -

4 Maltosa + + - -

5 Lactosa + + - -
6 Sacarosa + - - -
 7 Almidn + - - +

8 Problema + + + -

En la tabla 1 se muestra los resultados obtenidos en la determinacin y clasificacin de

carbohidratos por medio de pruebas especficas.

Tabla 2.- Imgenes y observaciones de los resultados de la tabla 1.

PRUEBAS IMAGEN OBSERVACION

En la prueba de molisch todas las

muestras presentan cambios
visuales como la turbidez y/p
cambios de color junto con una
coagulacin caf, con excepcin
Molisch
del tubo 6, que slo present un
cambio de color, sin embargo,
este cambio de color indica la
presencia de carbohidrato en la
muestra.

En sta prueba todos presentan

una coloracin roja en la parte
superior de la solucin a
Bendiut excepcin del tubo 6 y 7,
descartando en estos tubos la
presencia de azucares
reductores.

La prueba de barfored es positiva

si la muestra tiene un cambio de
color de azul claro transparente a
Barfored un azul marino opaco, con lo que
se observa que los tubos 4, 5, 6 y
7 son negativos y no presentan
monosacridos.

En sta prueba solo los tubos 2 y

7 son positivos ya que el cambio
Seliwanoff
a color rojo indica la presencia de
cetosas.

La tabla 2 muestra las justificaciones de los resultados obtenidos y registrados en la tabla 1.

NOTA: Los tubos mostrados en las imgenes se tom la numeracin del 1 al 8 de izquierda a
derecha.
DISCUSIONES
FLORES IBARRA JOSELYN
Fundamento de la prueba de Fehling. El ensayo con el licor de Fehling se fundamenta en
el poder reductor del grupo carbonilo de un aldehdo. ste se oxida a un cido carboxlico
y reduce la sal de cobre (II) en medio alcalino a xido de cobre (I), que forma un precipitado
de color rojo. Un aspecto importante de esta reaccin es que la forma aldehdo puede
detectarse fcilmente aunque exista en muy pequea cantidad. Si un azcar reduce el licor
de Fehling a xido de cobre (I) rojo, se dice que es un azcar reductor. Esta reaccin se
produce en medio alcalino fuerte, por lo que algunos compuestos no reductores como la
fructosa (que contiene un grupo cetona) puede enolizarse a la forma aldehdo dando lugar
a un falso positivo. (Lozano, 2001)
Fundamentos Reaccin Barfoed. Se basa en la reduccin de cobre (II) (En forma de
acetato) a cobre (I) (En forma de xido), el cual forma un precipitado color rojo ladrillo.
RCOH + 2Cu+2 + 2H2O RCOOH + Cu2O + 4H+
Los disacridos tambin pueden reaccionar, pero en forma ms lenta. El grupo aldehdo
del monosacrido que se encuentra en forma de hemiacetal se oxida a su cido carboxlico
correspondiente. Muchas sustancias, entre ellas el cloruro de sodio, pueden interferir en la
prueba. (Van Holde, 2000)
Al realizar la prueba con el reactivo de Molish, todas las muestras de carbohidratos
reaccionan. Por lo tanto, podemos concluir que el reactivo de Molish sirve para identificar
cualquier carbohidrato. Al mezclar el reactivode Seliwanoff con la fructuosa, observamos
que reacciona, cambiando de color a uno rojo. Mientras que con otros carbohidratos no
ocurre nada mientras stos no sean cetosas. De acuerdo con la informacin aprendida en
la prctica, adems de reconocer si un compuesto pertenece a la familia de los
carbohidratos, diferenciaramos si se trata de un monosacrido tipo aldosa o cetosa, si es
fcilmente oxidable o no, es decir si es un AZCAR REDUCTOR o no lo es, si es de cinco
tomos de carbono (pentosa) o de seis tomos de carbono (hexosa), si es disacrido o
polisacrido.
Los carbohidratos al contener grupos carbonilo e
hidroxilo presentan propiedades y comportamiento qumico tpico de estos dos grupos
funcionales, los carbohidratos se clasifican generalmente en monosacridos y polisacridos
(simples y complejos), los monosacridos son carbohidratos que no se pueden
descomponer a compuestos ms simples por medio de hidrolisis, estos a su vez se
subdividen por el nmero de tomos de carbono y grupo que contengan en: aldosas
(aldehdo) y cetosas (cetona). Un polisacrido es un carbohidrato que al hidrolizarse da dos
o ms unidades de monosacridos. Los monosacridos presentan reacciones
caractersticas de xido-reduccin como las reacciones con los reactivos de Tollens y
Fehling, la formacin de osazonas y la formacin de furfurales.
PALOS DUEAS DULCE MARA
Los carbohidratos se definen como los derivados aldehdicos o cetnicos de alcoholes
polihdricos, o sea con varios grupos OH. Comprenden, por lo tanto, alcoholes cetnicos,
alcoholes aldehdos, o sus anhdridos, y sus polmeros (Salvador B. 1990). De acuerdo a
las sustancias analizadas, sabiendo la estructura de cada una de ellas y con lo dicho
anteriormente se puede deducir que todas las muestras fueron determinadas como
carbohidratos, debido a que se obtuvo un resultado positivo en la prueba de Molisch para
cada muestra analizada. Ya que la prueba de Molisch segn el protocolo seguido determina
la presencia de carbohidratos y comprobando los resultados obtenidos con lo mencionado
corroboramos nuestra deduccin.
El grupo aldehdo o cetona es una funcin reductora comn a los azcares simples,
formada, en rigor, por un grupo carbonilo que, de acuerdo con sus sustituciones, integra
parte de un grupo aldehdico o de un grupo cetnico. Como este grupo cetnico, en el caso
de los azcares, se encuentra entre dos funciones alcohlica, reacciona habitualmente
como un aldehdo y se le denomina grupo funcional cetol (Laguna J. 1972). De la misma
manera como se mencion anteriormente conociendo la estructura de las sustancias
determinadas y ubicando el grupo cetol, podemos deducir que la cetosa presente en
nuestra lista de muestras sera solamente la fructuosa (vase la tabla y/o imagen 6.2),
corroborando que la fructuosa si debi de dar positivo para Seliwanoff. Aun as, el almidn
dio positivo para la prueba de Seliwanoff, la cual determina a las cetosas, siendo
tericamente y de acuerdo a la tabla 6.2 que se muestra posteriormente el almidn es un
polisacrido constituido por amilosa y amilopectina segn se cree que esto es debido a
la amilosa que tiene una estructura muy semejante a las cetosas de que el almidn da
positivo en esta prueba, sin embargo, no debi de ser as.
De acuredo a la tabla y/o
imagen de clasificacin de los
carbohidratos de Laguna J.
1972 muestra solamente como
monosacridos que fueron
analizados en sta prctica a la
glucosa, y fructosa, sin
embargo, sabemos que la
galactosa tambin lo es, y
comparando los resultados
obtenidos son esos tres
carbohidratos conocidos son
los nicos que dieron positivos
para la prueba de Barfoed, la cual sta prueba determina solamente a los monosacridos.
Los azucares reductores son aquellos carbohidratos que poseen su grupo carbonilo intacto
y que atreves del mismo pueden reaccionar como reductores con otras molculas. Todos
los disacridos y algunos monosacridos son azcares reductores (excepto la sacarosa),
ya que al menos tienen un OH libre (Tejin et. al. 2009). Dicho esto, y sabiendo que el
almidn no es ni un monosacrido ni disacrido, sino un polisacrido y lo mencionado sobre
la sacarosa, todas las muestras debieron dar positivo para la prueba de Benedict a
excepcin de los dos ltimos carbohidratos mencionados, ya que esta prueba determina
los azucares reductores.
La sacarosa no contiene ningn tomo de carbono anomrico libre, puesto que los
carbonos anomricos de sus dos unidades monosacridos constituyentes e hallan unidos
entre s, covalentemente mediante un enlace O-glucosdico. Por esta razn, la sacarosa no
es un azcar reductor y tampoco posee un extremo reductor (Tejin et. al. 2009).
En cuanto a la muestra del tubo 8, de acuerdo a los resultados obtenidos en cada prueba
de determinacin de carbohidratos, podemos deducir que sta solucin problema se trata
de la glucosa o galactosa, ya que, si comparamos los resultados de las tres muestras juntas,
se observan los mismos resultados, sin embargo, por fines prcticos, econmicos y de
alcance se deduce que se trata de una solucin de glucosa.

RAMOS HERNNDEZ ALEJANDRA

Los carbohidratos o sacridos (del griego: sakcharn, azcar) son compuestos esenciales
de los organismos vivos y son la clase ms abundante de molculas biolgicas. El nombre
carbohidratos significa literalmente hidratos de carbono y proviene de su composicin
qumica, que para muchos de ellos es (CH2O)n, donde n 3. Es decir, son compuestos en
los que n tomos de carbono parecen estar hidratados con n molculas de agua. En
realidad se trata de polihidroxialdehidos y polihidrohicetonas (y algunos derivados de stos),
cadenas de carbono que contienen un grupo aldehdo o cetnico y varios grupos hidroxilos.
Las unidades bsicas de los carbohidratos son los monosacridos, no hidrolizables en
unidades ms pequeas. La glucosa es el monosacrido ms abundante; tiene 6 tomos
de carbono y es el combustible principal para la mayora de los organismos. Los
oligosacridos contienen de dos a diez unidades de monosacridos unidas covalentemente.
Por su parte, los polisacridos estn constituidos por gran nmero de unidades de
monosacridos unidos covalentemente, alcanzando pesos moleculares de hasta 106 dalton
(g/mol). Los polisacridos desempean dos funciones biolgicas principales: algunos
almacenan energa metablica y otros sirven de elementos estructurales a la clula. Los
monosacridos se forman en la naturaleza por reduccin del carbono atmosfrico gracias
a la "fijacin" del CO2 que realizan los organismos fotosintticos. El ciclo del carbono se
completa con la oxidacin de los carbohidratos hasta CO2 realizada por el metabolismo
oxidativo de plantas y animales
Los monosacridos se clasifican segn la naturaleza qumica de su grupo carbonilo y del
nmero de tomos de carbono que poseen. Atendiendo a la naturaleza qumica del grupo
funcional carbonlico, si ste es aldehdo el monosacrido recibe el nombre genrico de
aldosa, y si es cetnico el monosacrido se le designa como cetosa. Dependiendo del
nmero de tomos de carbono de la molcula, los monosacridos se denominan triosas,
tetrosas, pentosas, hexosas, etc. cuando contienen tres, cuatro, cinco, seis, etc. tomos de
carbono. Se conocen en la naturaleza monosacridos de hasta 8 tomos de carbono. La
combinacin de ambas nomenclaturas anteriores permite denominar con el trmino
aldohexosa a un azcar (-osa) de seis tomos de carbono (-hex-), cuyo carbono carbonlico
es una aldosa (aldo-). Por ejemplo, la glucosa.
En la prueba de Molish obtuvimos que en el tubo de ensayo se formaron dos capas en las
cuales su parte superior era granulosa y en la parte inferior de la capa se form un
concentrado grueso de color blanco.
En la prueba de Benedict , en el primer tubo el cual contena lactosa, se pudo observar la
formacin de un precipitado de color rojo, lo cual indica que hay presencia de azcar
reductor. En el segundo tubo el cual contena Glucosa, se pudo observar la formacin de
un precipitado de color rojo, lo cual indica que hay presencia de azcar reductor.En el tercer
tubo el cual contena sacarosa, no se observ precipitado.
En la prueba de Barfoed se obtuvo que: en el primer tubo el cual contena galactosa se
observ la formacin de un precipitado de color rojo ladrillo, lo cual indica la presencia de
monosacridos. En el segundo tubo el cual contena fructosa se observ la formacin de
un precipitado de color rojo ladrillo, lo cual indica la presencia de monosacridos. En el
tercer tubo el cual contena almidn no se observ precipitado.
En la prueba de SELLIWANOFF, se obtuvo los siguientes resultados: En el primer tubo el
cual contena fructosa se observ la aparicin de una coloracin rosada lo que indica que
esta prueba es positiva para cetosas. En el tubo que contena glucosa no se present
cetosas.

CONCLUSIONES
FLORES IBARRA JOSELYN
Los carbohidratos al poseer en su estructura aldehdos o cetonas, presentan un
comportamiento qumico ligado a los grupos funcionales de estos, como por ejemplo la
capacidad de oxidarse con agentes oxidantes suaves como el reactivo de Fehling o de
Tollens o la capacidad de formar osazonas, adems esta clase de reacciones permiten
diferenciar monosacridos de disacridos como la sacarosa. Los monosacridos se
diferencia de los disacridos (sacarosa) por su poder reductor, poder que es otorgado por
el carbono libre que posee, los monosacridos a su vez se subdividen en aldosas y cetosas,
y en pentosas o hexosas, estos fueron identificados y diferenciados mediante la pruebas
realizadas en las que se evidencio la velocidad de deshidratacin de las aldosas y cetosas,
y la formacin de furfural o hidroximetil furfural, segn provenga una pentosa o hexosa. Los
reactivos que reaccionaban positivo (cambiaban de color) son los que contienen
carbohidratos. Monosacridos como la glucosa y disacridos como la maltosa a excepcin
de la sacarosa son azucares reductores. La maltosa presenta en su estructura el OH
hemiacetlico por lo que es un azcar reductor, es decir tienen su OH anomrico libre, y
stos son los que dan positivo en la prueba de Benedict.

PALOS DUEAS DULCE MARA

En sta prctica se logr determinar qu clase de carbohidrato se tena en una solucin
problema con ayuda de pruebas patrones junto con las comparaciones de muestras ya
conocidas. A su vez se logr clasificar, saber el porqu de las reacciones y resultados
obtenidos de las muestras conocidas.
Es importante para un AQB saber identificar los carbohidratos y conocer las propiedades
de estos, ya sea para el rea clnica y alimenticia principalmente, industrial u cualquier otra
ya que se sabe que los carbohidratos son esenciales en nuestro organismo y que a
condiciones anormales de concentracin, estructura, mala relacin entre otras molculas,
entre otras anomalas, son altamente dainos para la salud y medio ambiente. Tambin se
logr conocer las pruebas especficas para cada uno de los carbohidratos, la exactitud con
la que trabajan y su importancia que tienen stas.
RAMOS HERNANDEZ ALEJANDRA
Los carbohidratos al poseer en su estructura aldehdos o cetonas, presentan un
comportamiento qumico ligado a los grupos funcionales de estos, como por ejemplo la
capacidad de oxidarse con agentes oxidantes suaves como el reactivo de fehling o de
Tollens o la capacidad de formar osazonas, adems esta clase de reacciones permiten
diferenciar monosacridos de disacridos como la sacarosa.
Los monosacridos se diferencia de los disacridos (sacarosa) por su poder reductor,
poder que es otorgado por el carbono libre que posee, los monosacridos a su vez se
subdividen en aldosas y cetosas, y en pentosas o hexosas, estos fueron identificados y
diferenciados mediante la prueba de Seliwanoff en la que se evidencio la velocidad de
deshidratacin de las aldosas y cetosas, y la formacin de furfural o hidroximetil furfural,
segn provenga una pentosa o hexosa.
La sacarosa al hidrolizarse libera a sus monosacridos constituyentes: la glucosa y la
fructosa, debido a esto la sacarosa presento resultados positivos en la prueba para
disacridos y en la prueba de Seliwanoff.
En esta prctica llegamos a conocer la importancia de cada una de las pruebas que
realizamos, y as poder conocer carbohidratos, pentosas, aldosas, cetosas, accin
reductora de azucares.
Es de mucha importancia conocer sobre el tema de carbohidratos, son bases fundamental
para la estabilidad del organismo y as diferenciar que sustancias pueden ingerir ciertos
organismo cual las pueden rechazar y como pueden reaccionar algunas con un cierto
organismo metabolizndolas.

CUESTIONARIO
1.-Reacciones levadas a cabo.
REACCIN DE MOLISH: Todos los carbohidratos tanto los monosacridos como los
disacridos y polisacridos reaccionan con -naftol, en presencia de cido sulfrico para
formar sustancias complejas coloreadas. Esta reaccin se utiliza para la identificacin en
general de los carbohidratos. El proceso se fundamenta en la deshidratacin que
experimentan los carbohidratos en presencia de cidos minerales fuertes, como el cido
sulfrico y el cido clorhdrico. Despus de deshidratado el carbohidrato se forma el
complejo coloreado, porque el grupo carbonilo, del carbohidrato, se polariza produciendo
un carbocatin que se estabiliza con los pares electrnicos libres del oxgeno del -naftol.
Vase a continuacin la descripcin de la reaccin.
PRUEBA DE BENEDICT: En este ensayo se identifican los azucares reductores, todos los
monmeros contienen en sus extremos funciones qumicas (Aldehdos y Cetonas) que
pueden reducir otras sustancias.
En la reaccin con el reactivo de Benedict, la galactosa al ser una aldosa reduce el
complejo cprico, desapareciendo el color azul intenso, por un color rojo ladrillo que el cual
es positivo para este ensayo.
La sacarosa es la unin por los dos extremos reductores de la glucosa y la fructosa, por lo
consiguiente no podr efectuar esta reduccin del ion cprico.
Ilustracin 2. Reaccin de la glucosa con el Reactivo de Benedict
PRUEBA DE BARFOED: El reactivo de Barfoed es una prueba para distinguir entre
monosacridos y disacridos, en nuestro ensayo el resultado no fue representativo ya que
la sacarosa que trabajamos no era la indicada, para esta prueba.

Tericamente la velocidad de reaccin al reducir el ion +2 , por parte del monmero debe
ser ms rpida que la del disacrido, Esta reaccin est limitada al tamao de la molcula,
siendo la reaccin de los monmeros mucho ms rpida que los disacridos

Ilustracin 3 Reaccin de los Carbohidratos con el Reactivo de Barfoed

PRUEBA DE SELIWANOFF: Tanto las aldosas como las cetosas en presencia de cidos
minerales y en un medio caliente sufren procesos de deshidratacin, lo cual da como
producto un anillo pentagonal de furfural o hidroximetilfurfural, segn sea el monosacrido
pentosa o hexosa, los furfurales se condensan dando una coloracin roja. Las cetosas se
deshidratan ms rpido que las aldosas, lo cual permite diferenciarlos. En la prueba de
Seliwanoff la fructosa al ser una cetohexosa da un resultado positivo, en cuanto a la
sacarosa esta al contener fructosa da tambin positivo si se deja correr el tiempo adecuado
para que se efectu la hidrolisis acida en donde la sacarosa libera fructosa.
Ilustracin 4. Reaccin de las cetohexosas con el reactivo de Seliwanoff
2.-Menciona y describa en detalle el fundamento de la tcnica de cromatografa
liquida de alta resolucin especficamente para el anlisis de carbohidratos.
Cromatografa Lquida de Alta Resolucin (CLAR), tcnica conocida internacionalmente por
su nombre en ingls High Performance Liquid Chromatography (HPLC), acoplada a
detector de arreglo de diodos (DAD) y a detector de fluorescencia de barrido rpido (DF-
BR) para la resolucin de diversos problemas analticos. Desde su insercin como tcnica
analtica en los aos 1960, la CLAR ha evolucionado constantemente para lograr cada vez
mayor eficiencia, aumentando la selectividad y la velocidad de los anlisis. En principio,
estos avances se han dado travs de la comercializacin de partculas cada vez ms
pequeas y con soportes de mejor calidad, la introduccin de columnas monolticas de alto
rendimiento, la utilizacin de nuevos instrumentos que trabajan a muy altas presiones y el
uso de altas temperaturas en los sistemas tradicionales. Sin dudas, este gran crecimiento
se ha dado tambin de la mano del enorme desarrollo y perfeccionamiento de los softwares
para la adquisicin y procesamiento de datos generados por los cromatgrafos. En la ltima
dcada se ha trabajado en la obtencin y utilizacin de partculas porosas sub-2m,
pudindose encontrar comercialmente una gran variedad de fases estacionarias en este
formato. Estas partculas, empacadas en columnas cortas, proporcionan separaciones de
alta eficiencia en muy poco tiempo (Bidlingmeyer, 1992).
La mayor desventaja de estas columnas es que generan presiones que exceden los lmites
aceptables para los instrumentos convencionales de cromatografa lquida. Para solucionar
este inconveniente tuvieron que disearse instrumentos capaces de soportar presiones
mucho ms altas, dando lugar a la aparicin de la Ultra-high Pressure Liquid
Chromatography (UPLC).Estos nuevos instrumentos trabajan habitualmente a presiones
que superan los 400 bar, siendo capaces de soportar hasta 1000 bar, pero son de costo
mucho ms elevado que los instrumentos tradicionales.( Brathwaite & Smith , 1996).
La Cromatografa Lquida de Alta Presin (HPLC) o Resolucin es una tcnica de permite
separar, aislar e identificar los analitos de una mezcla de compuestos qumicos (basada en
la transferencia de masa entre la fase estacionaria y la fase mvil), por lo que es utilizada
frecuentemente en Bioqumica y Qumica Analtica para la separacin de componentes de
una sustancia determinada, basndose en diferentes tipos de interacciones qumicas.
Recientemente es una de las tcnicas ms utilizada en la industria Qumica y de alimentos,
ya que ofrece la posibilidad de identificar y cuantificar sus componentes mediante el uso de
sustancias patrn. La cromatografa de lquidos abarca un grupo muy amplio entre los
mtodos cromatogrficos, puesto que el sistema ternario fase estacionaria/fase
mvil/analito ofrece muchas y muy distintas posibilidades para separar compuestos
qumicos muy diferentes. La cromatografa lquida clsica se lleva a cabo en una columna
generalmente de vidrio, la cual est rellena con la fase fija. Luego de sembrar la muestra
en la parte superior, se hace fluir la fase mvil a travs de la columna por efecto de la
gravedad. Con el objeto de aumentar la eficiencia en las separaciones, el tamao de las
partculas de fase fija se fue disminuyendo hasta el tamao de los micrones, lo cual gener
la necesidad de utilizar altas presiones para lograr que fluya la fase mvil. De esta manera,
naci la tcnica de cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC), que requiere de
instrumental especial que permita trabajar con las altas presiones requeridas. (Gismera &
Quintina, 2009).
BIBLIOGRAFAS
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