CULTIVO DE MICROALGAS

1. INTRODUCCIN
La subsistencia de los laboratorios o criaderos de acuicultura en condiciones controladas
dependen gradualmente del aporte de alimento par el mantenimiento de los organismos en
cultivo (reproductores y/o larvas) en base a microalgas, que actualmente se consideran como
el mejor alimento para los filtro alimentadores de importancia comercial.
Las microalgas, son un grupo heterogneo del fitoplancton, las que poseen una gran diversidad
de tamaos, pigmentacin, bajo nivel de especializacin celular, etc.
Son tpicamente acuticas y viven fijas a un substrato o flotando libremente en el plancton, las
formas que adquieren son variadas; se organizan en unicelulares o coloniales, debido a la
necesidad de cultivar microalgas es importante conocer las tcnicas y alternativas, que faciliten
su cultivo.

2.- MEDIOS DE CULTIVO

Para iniciar el cultivo de microalgas, se debe tener en consideracin como punto principal un
medio de cultivo adecuado.
Los medios de cultivo mas utilizados actualmente se basan en el medio enriquecido f de
Guillard y Ryther (1962). As se ha desarrollado el medio f/2 de guillard (1975), que es el mas
conocido y se describe a continuacin.
Medio f/2 de Guillard y Ryther, 1975.
Uno de los medios de agua de mar enriquecida mas utilizado tanto para cultivar especies
planctnicas como bentonicas es el f/2 .su contenido de nutrientes mayores como nitrgeno y
fsforo se encuentran en cantidades reducidas en comparacin con otros medios de cultivo.

3.- MEDIOS GENERALES DE CULTIVO

Los medios de cultivo de microalgas, dependen mayormente de los requerimientos y
exigencias de estas en las diversas etapas de su desarrollo, con excepcin de lo bivalvos o
filtradores, usualmente los organismo son alimentados indirectamente formando una cadena
alimenticia, que lleva la energa almacenada en los productores primarios a travs de
eslabones secundarios, tales como rotferos y artemias:

Segn su naturaleza los cultivos se pueden clasificar en:

3.1.- cultivos intensivos
Son aquellos cultivos en que los factores del crecimiento se mantienen completamente bajo
control, de modo tal que se obtiene una mxima respuesta en la produccin de la poblacin
3.2 cultivos extensivos
Son los cultivos en que solo se controlan las variables ms accesibles en el manejo tcnico,
tales como las caractersticas qumicas del medio y la densidad del cultivo reguladora de la luz

Segn la forma de cosecha del cultivo, estos e clasifican en:

3.3. Cultivos continuos
La poblacin, las caractersticas qumicas del medio, la temperatura y la luz, son sostenidas en
un valor constante por periodos prolongados, manteniendo un flujo constante de entrada de
requerimientos y salida de productos.
3.4. Cultivo bach
Se caracterizan principalmente por la intermitencia del cultivo .esta se implementa una vez y se
cosecha completamente, luego que la poblacin ha alcanzado un nivel apropiado de densidad.
Generalmente la cosecha se realiza en la fase exponencial de crecimiento, la carga de
nutrientes y luz, son proporcionados al inicio de cultivo, este mtodo es comnmente
empleado en centro de cultivo de bivalvos.
3.5 cultivos semicontinuos
Son principalmente una combinacin de los dos mtodos anteriormente sealados, en ellos, se
cosecha una parte del medio segn la produccin y se renueva el volumen cosechado con
medio de cultivo fresco

Segn la pureza del cultivo, estos se clasifican en:

3.6 cultivos axenicos
Son aquellos en los cuales la poblacin se mantiene libre de bacterias, se emplea comnmente
en cultivos continuos y semicontinuos, permitiendo as mantener la produccin por mayor
tiempo, este tipo de cultivo es mas delicado requiriendo un manejo cuidadoso por lo que
emplea material estril.
3.7 cultivos monoespecificos
Son cultivos en que la poblacin de microalgas se encuentra parcialmente contaminada con
otros organismos tale como bacterias y protozoos, es empleado generalmente en cultivos del
tipo Bach y Extensivos.

4.- preparacin de medios para cultivo

4.1 tratamiento del medio de cultivo
El agua de mar utilizada para preparar el medio de cultivo, debe tratarse de algn mtodo par
eliminar organismos (fitoplancton y zooplancton, detritus y basura. el agua se purifica a travs
de filtros de arena, filtros biolgicos, filtros de cordoncillo o cermicos (Cuno) de diferente
abertura (10, 5 y 1 um), filtros qumicos y de carbn activado par finalmente esterilizarla con
rayos ultravioleta de alta potencia (Fig.1) o mediante autoclaves a 121 C de temperatura y
1.05 kg/cm2 de presin.
Si no se tiene alguno de estos sistemas de filtracin, puede usarse agua de mar colada en filtros
de arena y posteriormente por fibra sinttica.

4. 2 PRODUCCION
La figura 2, representa un flujo general de procedimiento en la produccin de microalgas,
segn la etapa de cultivo.

4.2.1 Mantencion de Cepas

Durante esta etapa, la cepa de microalgas o stock, es contenida en matraces de 250 ml. con
100 ml. De medio de cultivo, en tubos de prueba y en placas con agar.
Para preparar el medio se utiliza agua de mar filtrada y esterilizada segn el mtodo descrito,
adicionalmente es filtrada a travs de membranas (0.22 Y 1 UM.) y luego es autoclavada.
La inoculacin se realiza de matraz a matraz o de tubo a tubo mediante una pipeta estril
(pipeta Pasteur), la transferencia se realiza aspticamente bajo una campana de luz
ultravioleta.
Esta etapa requiere el mximo de cuidado para evitar toda contaminacin posible en los
cultivos axenicos y contaminacin adicional en cultivos monoespecificos.
Se debe mantener el stock antiguo junto al nuevo, hasta que este alcance buena densidad
celular, a fin de prever una perdida del stock de cepas.
La luz permanece constante y diariamente los recipientes deben agitarse para evitar la
sedimentacin de las clulas.
La temperatura tambin se mantiene constante entre 20 y 22 C, la que se controla por medio
de un equipo de aire acondicionado

4.2.2. Cultivos iniciales

Se realizan en matraces de 500 ml con 250 ml de medio de cultivo tambin filtrado y
esterilizado por medio de la autoclave.
La inoculacin de la cepas a los cultivos inciales se realiza, cuando las cepas han alcanzado la
densidad algal adecuada, transfiriendo aspticamente bajo una campana de luz ultravioleta,
un volumen de 1-5 ml de cepa la medio fresco, se debe flamear previamente la boca de estos
recipientes y la trasferencia realizarlas con una pipeta estril (pipeta pasteur).
Esta etapa tambin requiere que peridicamente los frascos sean agitados suavemente para
renovar la posicin de las clulas.
La temperatura es constante

4.2.3 cultivos intermedio

En esta etapa se transfieren los cultivos inciales, luego de 4-7 das a recipientes de mayor
volumen (1000 a 2000 ml), con medio fresco y estril. El procedimiento de inoculacin, es el
mismo que en el punto anterior, teniendo el cuidado de evitar que las clulas sedimentadas en
el fondo, pasen al nuevo recipiente .el volumen a inocular corresponde aproximadamente al 90
% del volumen de cultivo inicial.
La aireacin es constante, con la finalidad de mantener las clulas en suspensin, evitando al
sedimentacin y aumentando el contacto de las clulas con la fuente de luz, adems de
proveer el dixido de carbono necesario par el crecimiento y estabilizar el pH de los cultivos
(Guillard, 1983).
La temperatura se mantiene en las condiciones anteriormente sealadas
Los cultivos intermedios se utilizan par alimentar larvas de moluscos bivalvos, rotferos y
artemias, debido a que representan menor contaminacin

4.2.4 cultivo de produccin masiva

Son cultivos de mayor volumen (10-20-300-500 L). En cultivos Bach, estos alcanzan densidades
que oscilan entre 4 10 millones de clulas / ml
En cultivos de 10-20 ml (botellones de plstico) se emplean como inculos los cultivos
intermedios. El medio de cultivo es agua de mar enriquecida, luego de ser filtrada y
esterilizada con luz ultravioleta, no se utiliza el autoclavado.
En este caso es necesario dejar en repos de 30 minutos a una hora antes de inocular, ya que el
paso por la luz ha generado perxidos que afectan los pigmentos, debido lo cual se deben
tomar precauciones necesarias para evitar contaminaciones
Al inocular se debe evitar transferir la parte sedimentada de los cultivos intermedios
La intensidad luminosa vara entre 2500 a 5000 lux y la temperatura se mantiene constante
entre 20 a 22 C en volmenes de 10 a 20 L.
Los volmenes mayores (estanques 300 a 500 l) se mantienen en ambienten semicontrolado
con luz constante y temperatura ambiental
Cultivos en estanques se emplean para alimentar post larvas, semillas y reproductores de
moluscos bivalvos, por que la contaminacin bacteriana es mayor (cultivo Bach)
La luz se instala frecuentemente en la parte superior de los cultivos, y la intensidad varia entre
4000 a 5000 lux. Los inculos son obtenidos de botellas de 10 a 20 l que presentan crecimiento
rpido y carecen de sedimentacin.
En este tipo de cultivo la aireacin es tambin constante

5. Crecimiento microalgal
El crecimiento de una poblacin de microalgas, responde a la interaccin mutua de factores
biolgicos, fsicos y qumicos

6.-FASES DEL CRECIMIENTO MICROALGAL

El crecimiento de la poblacin microalgal esta influenciada por factores fsicos y qumicos de
ambiente de cultivo.

En cultivo tipo Bach, el crecimiento se produce como en la grafica de la figura 3, en la cual se

pueden distinguir 5 fases o etapas del desarrollo:
6.1 fase de ajuste
Nos e observa un crecimiento aparente de la poblacin debido ala adaptacin que sufren las
algas alas nuevas condiciones de cultivo. Esto se produce cuando se realiza la inoculacin inicial
de cultivo aun medio fresco. Esta fase puede durar de 1 a 3 das.
6.2 fases exponencial
Es la fase de crecimiento eque las clulas al adaptarse al medio se duplican sucesivamente en
intervalos iguales de tiempo. En esta fase K (Constante de crecimiento) es constante
Esta fase es la ms importante, en la cual el cultivo puede cosecharse, transferirse o diluirse
debido al incremento de densidad
6.3 fase de retardo
En esta etapa, el tiempo requerido par duplicar la poblacin aumenta reducindose as la tasa
de crecimiento. Esto es consecuencia tanto de la disminucin de factores qumicos de
crecimiento (N, P, Fe, K, Mg.,...). Aumento de la concentracin de metabolitos y reduccin de al
actividad fotosinttica por incremento de la densidad poblacional, la cual disminuye la luz
disponible por unidad de clula.
6.4 fase estacionaria
Es una fase de corta duracin, en la que el nmero de microalgas permanece estacionario y no
hay un incremento neto de la poblacin, pudiendo presentarse en su lugar la fase de muerte
6.5 fase de muerte
Es la fase final de desarrollo de la poblacin, en la que se incremente el numero de clulas
muertas, debido alas condiciones desfavorables como son el aumento del nmero de bacterias,
hongos y productos de la destruccin celular, producindose el colapso del cultivo

7 Factores que intervienen en el crecimiento

Los factores que intervienen en la produccin, tanto fsicos como qumicos se interrelacionan
de tal manera que la poblacin algal, responde principalmente a travs del crecimiento
poblacin

La produccin esta determinada principalmente por la intensidad y calidad de estos factores

7.1 factores fsicos
7.1.1 efecto de la luz
Las microalgas son foto auttrofas y la tasa de produccin fotosinttica se incrementa
proporcionalmente con la intensidad de la luz, pero a intensidades ms altas la produccin
fotosinttica, sufre un retardo hasta alcanzar un nivel de saturacin o de mxima tasa de
produccin, con aumentos posteriores a este valor, la produccin fotosinttica disminuye
debido aun efecto de inhibicin en la produccin (Parson et al.,1977)
La calidad espectral de la luz, es un factor importante en las microalgas ya que solo pueden
emplear en la fotosntesis, longitudes de ondas comprendidas entre 300-700 nm
La intensidad de la luz en cultivos en cultivos artificiales, vara entre 2000-5000 lux, segn el
estado y densidad de la poblacin. Esta, normalmente es aportada por tubos fluorescentes o
de luz fra
Para aumentar la eficiencia fotosinttica de la poblacin, esta debe ser agitada frecuentemente
con aire para aumenta la exposicin a la luz

7.1.2 efecto de la temperatura

La mayora de especies de microalgas crecen entre 10 y 35 C, con un ptimo entre 16 y 25 C.
En el ambiente natural, la produccin fotosinttica ocurre en un amplio rango de temperatura;
en regiones polares a 2 C y en regiones tropicales, a temperaturas mayores de 30 C. Las
microalgas, pueden adaptarse a una amplia variedad de valores de temperatura, existiendo un
efecto interdependiente con la intensidad luminosa
Toleran un cambio limitado de temperaturas en relacin a las que se encuentran adaptadas
(10-15c). En general un aumento de la temperatura induce una activacin de la fotosntesis
cuando este proceso nos e encuentra limitado por la luz y el sustrato qumico (Devlim, 1980)
7.1.3 efecto de la aireacin y agitacin
Al aplicar aire a los cultivos intermedios y masivos se logra una difusin efectiva de los
nutrientes, un aporte especial de CO2 inorgnico, se estabiliza el pH y se mantienen las algas
en suspensin.
En cultivos inciales y cepas no es necesaria al aireacin, es suficiente con agitarlos
manualmente en forma diaria

7.2 factores qumicos

7.2.1 nutrientes
Los sustratos qumicos del medio, son asimilados de acuerdo ala velocidad de reaccin de la
enzima especfica que participa en el proceso de transporte y sntesis desde el medio nutritivo
hasta el interior de la clula. Como la concentracin de un nutriente, afecta la tasa de
produccin fotosinttica, la tasa de divisin celular y composicin celular, el crecimiento de una
poblacin se hace dependiente no solo de los factores fsicos ya sealados, sino de la presencia
de compuestos qumicos orgnicos e inorgnicos, tanto a nivel traza como de macroelementos.
Para un buen crecimiento, las microalgas requieren un abastecimiento importante de
nitrgeno, fsforo y slice
Estos elementos participan directamente en la formacin de protenas, cidos nucleicos, ATP y
en el caso de la diatomeas en la formacin de la pared celular. El nitrgeno puede ser
empleado como nitrgeno o molecular (algunas algas azul-verde ), amonio, nitrito y nitratos
Algunas especies de diatomeas, tales como Chaetoceros gracilis, C. calcitrans, y Thalassiosira
pseudonana, han sido empleadas exitosamente en cultivos masivos para la alimentacin de
molusco filtradores. Estas microalgas a diferencia de otros grupos se caracterizan por emplear
el slice como elemento de nutricin, en la formacin de la pared celular
Carbono y pH
El contenido de carbono en los organismos marinos varia entre 20-50 % (Strickland ,1965)y
puede constituir un promedio del 41 % del peso seco del fitoplancton. Este elemento ,es
asimilado por la planta durante el proceso de fotosntesis a partir de CO2 disuelto en el agua, y
por ello es de gran importancia e la produccin
A bajos niveles de luz, la fotosntesis es limitada aun cuando la concentracin de CO2
aumente, mientras que en altos niveles de irradiacin, la eficiencia en al asimilacin de CO2,
aumenta hasta un nivel de saturacin, este proceso puede continuar aumentando, hasta
niveles en que la luz puede inhibir el fotosistema.
El CO2 al reaccionar con el agua forma un cido dbil (cido carbnico), el que se disocia
formando bicarbonato y carbonatos, los que se encuentran en equilibrio junto al Ion hidrgeno
liberado, de tal modo que la acidez del medio depender de la concentracin relativa de cada
uno de los iones disociados.
CO2 + H2O ---------------------H2CO3, H2CO3-----------------H + HCO3, HCO3

8.- ESPECIES DE MICROALAGAS QUE SE CULTIVAN EN HATCHERY

Muchas especies de microalgas han sido cultivadas y son usadas en los hatcheries.
Ellas pueden ser divididas en dos grupos: diatomeas y flagelados, la mayora de las especies
comnmente usadas son conocidas mundialmente y son reconocidas como especies
adecuadas en trminos de su cultivo fcil y el valor nutritivo.
Algunas especies son apropiadas como alimento para las diferentes etapas de vida de la concha
de abanico y de la ostra, para las etapas larvales, se usan comnmente tres especies:
Isochrysis galvana (variedad Tahit), comnmente denominada como T. Isochrysis, flagelada
pertenece al grupo de las Haptoficeae, las que pueden ser unicelulares mviles y formar
colonias.
Chaetoceros calcitrans y Ch. Gracilis, diatomeas pertenecientes al grupo de las
bacillariophyceae, unicelulares con un ncleo, cuya membrana esta formada por protena y
slice.
Dunaliella tertiolecta, flagelada perteneciente al grupo de las Chlorophyceae (algas verdes),
unicelulares flageladas y no flageladas como Nannochloris y Chlorella.
Dunaliella adems de Isochrysis y Chaetoceros, son adecuadas para cultivo de post larvas y
acondicionamiento de reproductores
El uso de cada especie como alimento en la s diferentes etapas del desarrollo del molusco
depender del tamao la clula algal, la presencia de espinas, o grosor de la pared celular.

9.- CONTROL DE BACTERIAS EN EL CULTIVO DE MICROALGAS

La contaminacin bacteriana generalmente es al causa ms comn de problemas o mortandad
de los cultivos algales, los cultivos usados en hatcheries de bivalvos no son axenicos (libres de
bacterias) y los niveles de bacterias deben ser mantenidos bajo control, ya que ellos pueden
disminuir el crecimiento de los mismos y causar una cada de la produccin antes de alcanzar
las densidades cosechables
Las bacterias pueden competir con las algas por nutrientes (Machieson and Toner, 1966)
Los cultivos que tienen altos niveles de bacterias, pueden ser txicos para las algas de bivalvos
aun cuando las clulas algales parecen saludables (Calabrese and Dans 1970)
Todos los recipientes de cultivo debern ser examinados mensualmente para verificar los
niveles de bacterias. Cultivos Batch o semicontinuos, debern ser examinados diariamente
para evitar el uso de cultivos contaminados. Cultivos con altos niveles de contaminacin
bacteriana, por ejemplo 1:1 algas a bacterias, no servir para alimento de larvas, pero podra
servir para reproductores o juveniles: si ocurriera una severa contaminacin bacteriana en los
cultivos stock, se deber hacer mucho esfuerzo par limpiar el cultivo con antibitico o adquirir
cepas de microalgas axenicas en un centro de cultivo

10.-tratamiento con antibiticos

El tratamiento con antibiticos generalmente es usado solo para cultivos stock (cepas), debido
a que es una labor intensiva y se realiza cuando la contaminacin bacteriana es identificada. Si
se observa una severa contaminacin, puede ser ms econmico importar cepas algales
axenicas. Un metido que ayuda a prevenir la contaminacin bacteriana es tratar el cultivo stock
con antibiticos en forma regular (3 a 4 veces al ao).