INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

DEPARTAMENTO FISIOLOGA VEGETAL

LABORATORIO RELACIN PLANTA-MICROORGANISMO

MICROPROPAGACIN

INTEGRANTES:

Canizal Ramos Adriana

Ramrez Hernndez Perla Isabel

Villalvazo Gonzlez Marcos Paris

GRUPO: 6QV2 EQUIPO: 7

FECHA: 09-junio-17
Introduccin
La micropropagacin consiste en la
propagacin de plantas en un ambiente
artificial controlado, empleando un medio de
cultivo adecuado. El cultivo es as una
herramienta muy til en los programas de
mejoramiento, ya que tiene el potencial de
producir plantas de calidad uniforme a escala
comercial, a partir de un genotipo selecto y con
una tasa de multiplicacin ilimitada. Esto es
posible gracias a la propiedad de totipotencia
que tienen las clulas vegetales; esto es la
capacidad de regenerar una planta completa
cuando estn sujetas a los estmulos
adecuados. As, las clulas somticas de
cualquier tejido podran formar tallos, races o
embriones somticos de acuerdo con la
competencia que posea y al estmulo que
reciban . Dependiendo de las caractersticas
de la planta que se pretenda propagar y del
objetivo perseguido, la micropropagacin
puede realizarse a travs de tres vas de
regeneracin: brotacin de yemas adventicias
preexistentes, produccin de yemas de novo y
embriognesis somtica. 2 Etapas de la
micropropagacin La micropropagacin
presenta cuatro etapas principales: 1)
establecimiento del cultivo, 2) desarrollo y
multiplicacin de vstagos o embriones, 3)
enraizamiento y 4) aclimatacin de las
plntulas. Generalmente, las etapas de
enraizamiento y aclimatacin pueden
combinarse en condiciones ex vitro. En el caso
de la embriognesis somtica, el
enraizamiento es reemplazado por una etapa
de maduracin y germinacin de los embriones
para la diferenciacin de los pices caulinar y
radicular. En algunos casos tiene importancia
considerar una etapa previa (Etapa 0) que es
la etapa de preparacin de los explantes para
el establecimiento.
Etapa 0: Preparacin del material vegetal
La correcta eleccin y preparacin del explante
incide directamente sobre la calidad del mismo
y su respuesta frente a los dos principales
problemas que afectan al establecimiento del
cultivo, que son la contaminacin con
microorganismos y la oxidacin del explante.
Los factores que influyen sobre la calidad del
explante son: el tipo de rgano que sirve como
explante, la edad ontognica y fisiolgica del
mismo, la estacin en la cual se colecta el
material vegetal, el tamao y el estado
sanitario general de la planta donante. La
planta donante debe elegirse en base a una
seleccin masal positiva para las
caractersticas agronmicas deseables. Una
vez seleccionados los individuos, es preciso
definir el tipo de explante a establecer en
condiciones in vitro. En general, los rganos
jvenes o bien rejuvenecidos son los que
tienen mejor respuesta en el establecimiento
que los obtenidos a partir de materiales
adultos. El empleo de explantes que se
encuentran expuestos a bajos niveles de
patgenos puede resolver el problema de la
contaminacin por hongos y bacterias durante
el establecimiento del cultivo in vitro. Se
recomienda colectar explantes primarios a
campo durante la estacin primaveral y estival,
cuando existe una brotacin activa de las
yemas, ya que el empleo de yemas en estado
de dormicin ocasiona serios problemas de
contaminacin. A fin de lograr explantes de
ptima calidad es conveniente hacer crecer las
plantas donantes por un tiempo mnimo en
condiciones de invernculo. De esta forma es
posible incidir directamente sobre el estado
sanitario y la calidad de los explantes mediante
el control de la intensidad lumnica,
temperatura y reguladores de crecimiento.
Para especies ornamentales tropicales y
subtropicales se recomienda mantener las
plantas donantes en condiciones de alta
temperatura (25C) y baja humedad relativa
(75%) a fin de reducir la proliferacin de
patgenos. Los procesos morfognicos de
floracin, dormicin y bulbificacin son
controlados por el fotoperodo y la
temperatura. Controlando estos factores
tambin es posible obtener plantas donantes y
explantes ms homogneos durante todo el
ao. Pueden aplicarse adems pretratamientos
con reguladores de crecimiento a las plantas
donantes, as como tambin a los explantes
mismos. En especies leosas suele utilizarse
como pretratamiento la inmersin de los
explantes primarios en soluciones con
citocininas a fin de inducir la brotacin de
yemas.
Etapa 1: Establecimiento del cultivo
El objetivo de esta etapa es establecer cultivos
viables y axnicos. El xito est determinado
por la calidad del explante a utilizar. En esta
etapa los principales procesos a controlar son
la seleccin, el aislamiento y la esterilizacin
de los explantes. Los materiales que
demuestran tener mayor capacidad
regenerativa son los obtenidos de tejidos
meristemticos jvenes, ya sean yemas
axilares o adventicias, embriones o semillas en
plantas herbceas y aquellos tejidos
meristemticos que determinan el crecimiento
en grosor, como el cambium en las plantas
leosas. En este sentido, es importante
sealar que el empleo de yemas adventicias
(tambin llamadas yemas formadas de novo)
est asociado con una mayor probabilidad de
ocurrencia de variantes somaclonales respecto
de los sistemas de propagacin basados en la
regeneracin a partir de yemas axilares o
embriones somticos. La obtencin de cultivos
axnicos puede lograrse trabajando tanto
sobre aspectos preventivos como curativos.
Una accin preventiva la constituye el empleo
de mtodos de verificacin de patgenos en
los explantes. Esto puede realizarse mediante
anlisis especficos para las enfermedades del
cultivo, tales como DASELISA o PCR, anlisis
generales para patgenos cultivables como el
empleo de medios de cultivo para el
crecimiento de bacterias y hongos y mtodos
especficos para la deteccin e identificacin
de patgenos intracelulares como virus,
viroides y bacterias. La realizacin de estos
anlisis directamente sobre las plantas
donantes, previo establecimiento, presenta dos
ventajas. En primer lugar, el empleo de tejidos
maduros permite visualizar los sntomas ms
marcados de la enfermedad, en segundo lugar,
la carga de patgenos es mayor y por lo tanto
la precisin del sistema de deteccin aumenta.
Por otro lado, las plantas enfermas pueden
tratarse con tcnicas adecuadas para la
eliminacin de patgenos como la
termoterapia, la quimioterapia a travs de la
aplicacin de antibiticos, desinfectantes,
antivirales y el cultivo de meristemas. La
desinfeccin superficial incluye varios pasos: el
lavado de los explantos con agua corriente, el
empleo de etanol al 70% por 1 minuto, seguido
de concentraciones variables de hipoclorito de
sodio (0,5 a 1,5% de cloro activo) con unas
gotas de tensoactivos para favorecer su
penetracin y actividad. Posteriormente, los
explantos deben ser enjuagados al menos tres
veces con agua destilada estril. Algunos
patgenos permanecen latentes y se expresan
cuando son transferidos a un medio de cultivo
nuevo. En general, estos pat- genos incluyen
los patgenos superficiales del material
vegetal, los patgenos endgenos y los
patgenos propios del manejo en laboratorio.
En la Etapa 1 tambin pueden observarse
infecciones por bacterias y hongos asociados a
trips que sobreviven a los tratamientos de
esterilizacin y por patgenos endgenos
latentes dentro del sistema vascular, resultado
de una esterilizacin inefectiva de los
explantos. Estos patgenos latentes podran
manejarse mediante el empleo de
bacteriostticos o antibiticos en el medio de
cultivo.
Etapa 2: Multiplicacin
El objetivo de esta etapa es mantener y
aumentar la cantidad de brotes para los
nuevos ciclos de multiplicacin sucesivos
(subcultivos) y poder destinar parte de ellos a
la siguiente etapa de produccin
(enraizamiento, bulbificacin, etc.). Ambas vas
de regeneracin, organognesis y protocolos para la obtencin de embriones
embriognesis, pueden darse en forma directa
o indirecta. Esta ltima implica la formacin de
callo. En general, la organognesis conduce a
la produccin de vstagos unipolares que
enrazan en etapas sucesivas, mientras que
por embriognesis somtica se forman
embriones bipolares a travs de etapas
ontognicas similares a la embriognesis
cigtica. Es importante sealar que cualquiera
sea la va de regeneracin empleada, es
conveniente evitar la formacin de callo para
disminuir el riesgo de variacin somaclonal.
Los medios de cultivo, los reguladores de
crecimiento como auxinas, citocininas y cido
giberlico y las condiciones de crecimiento
juegan un papel crtico sobre la multiplicacin
clonal de los explantos. La organognesis
puede darse por induccin de yemas axilares o
adventicias. La induccin de yemas axilares
comprende la multiplicacin de yemas
preformadas, usualmente sin formacin de
callo. La induccin de yemas adventicias
comprende la induccin de tejido
meristemtico localizado mediante un
tratamiento con reguladores de crecimiento,
conduciendo a la diferenciacin del primordio y
desarrollo del vstago, esto ltimo
generalmente en ausencia del regulador de
crecimiento que indujo la organognesis. La
principal desventaja del primer mtodo es que
el nmero de yemas axilares por explanto
limita la cantidad de vstagos. Esto se ve
compensado, sin embargo, por un aumento en
la tasa de multiplicacin con los sucesivos
subcultivos. La formacin de yemas
adventicias ofrece mayor potencial para la
produccin de vstagos, ya que ocurre en
sitios distintos al de los meristemas.
La embriognesis somtica es una va ms
conveniente porque permite saltar las etapas
de formacin de yemas y enraizamiento,
regenerando plantas en una forma mucho ms
rpida y eficiente. A su vez, la disponibilidad de
somticos es clave para la automatizacin de
la micropropagacin y la consecuente
reduccin de costos para su implementacin a
escala comercial. Los biorreactores son
equipos que contienen aproximadamente 2
litros de medio de cultivo lquido estril y donde
los embriones somticos pueden regenerar y
madurar a partir de suspensiones celulares,
sustentados por la circulacin permanente de
nutrientes y de aire. Hoy en da, el empleo de
biorreactores para la micropropagacin a gran
escala est limitado por dos motivos crticos.
En primer lugar, el declinamiento de las lneas
celulares (clones) por efecto de la variacin
somaclonal y segundo, por los altos costos
asociados con la conversin de estos
embriones somticos en plntulas. Las
condiciones culturales en las cuales crece el
explante son el resultado de la interaccin de
tres factores: el estado del explante o material
vegetal, determinado en parte por el medio de
cultivo, el recipiente de cultivo y el ambiente
externo o condiciones de crecimiento del
cuarto de cultivo. La capacidad de respuesta
de los explantes a un mismo medio de cultivo
cambia con el nmero de subcultivos, el tipo
de explante subcultivado y el mtodo del
repique. Por esto mismo, el medio de cultivo
debe optimizarse a fin de lograr la mayor tasa
de multiplicacin vegetativa. Comnmente se
emplea como medio basal el medio MS
completo sugerido por Murashige & Skoog
(1962) suplementado con 3% de sacarosa
como fuente de carbono. A este medio se le
adicionan adems reguladores de crecimiento,
tanto del tipo de auxinas como de citocininas.
La etapa de multiplicacin generalmente
comprende dos perodos, la fase de induccin
y la fase de multiplicacin propiamente dicha.
La primera implica, generalmente, el empleo
de concentraciones elevadas de reguladores
de crecimiento (generalmente de auxinas ms
que citocininas) para favorecer la
desdiferenciacin. La segunda etapa requiere
del empleo de un balance hormonal adecuado
para favorecer los procesos de diferenciacin y
multiplicacin celular. En este caso el sistema
es ms dependiente de reguladores del tipo de
las citocininas. En algunos casos, como ocurre
en la formacin de embriones somticos, se
requiere de una tercera y cuarta etapa,
denominadas de maduracin y de germinacin
respectivamente, cuya duracin vara entre 1 a
2 semanas. Para la etapa de maduracin se
adiciona ABA (cido absccico) al medio basal
en rangos de 5 a 20 M, seguido del subcultivo
a un medio basal conteniendo AG (cido
giberlico) en concentraciones de 0,1-1 M,
cuyo fin es lograr la germinacin de los
embriones obtenidos. Los tipos de auxinas
ms empleados son IBA, 2,4-D, AIA, ANA y
picloram, y las citocininas BA, CIN, ZEA, 2ip y
TDZ. El rango de concentracin empleado
vara con el regulador del crecimiento, as es
que el 2,4-D, por ejemplo se utiliza en
concentraciones de 4-35 M mientras que otra
auxina como el IBA, tiene un rango de 0,1 a 2
M.
Los tipos de reguladores, sus combinaciones y
rangos de concentraciones deben ser
optimizados para cada especie, genotipo y
etapa de multiplicacin determinada. Las
condiciones de incubacin de los cultivos in
vitro dependen de las especies con que se
trabaje. En el caso de las especies
subtropicales, por ejemplo, los cultivos se
incuban en luz a 272 C con 14 horas de
fotoperodo e intensidad lumnica moderada
(100 mol m-2 s-1). La presencia de
compuestos fenlicos oxidados se encuentra
asociada con tejidos vegetales sometidos a
situaciones de estrs, tales como aquel
provocado por el dao mecnico producido
durante el aislamiento del explante de la planta
madre o durante la transformacin. Los
compuestos fenlicos liberados al medio
pueden inhibir el crecimiento e incluso matar al
explante. Para minimizar el dao de estos
compuestos se emplean agentes adsorbentes
de fenoles en el medio de cultivo, tales como el
carbn activado y la polivinilpirrolidona o
antioxidantes como el cido ascrbico, la
modificacin del potencial redox con agentes
reductores, la inactivacin de las fenoloxidasas
con agentes quelantes o la reduccin de su
actividad o afinidad por el sustrato utilizando
un bajo pH, bien cultivando in vitro en
condiciones de oscuridad. Es recomendable
adems lograr que la tasa de intercambio
gaseoso entre los ambientes del recipiente y
externo sea ptima, evitndose la acumulacin
de CO2 y de etileno. En este sentido el sellado
del recipiente es importante, el intercambio
gaseoso es ms limitado con el empleo de una
tapa de plstico que con un film de polietileno
extensible. La utilizacin de una tapa perforada
con tapn de gomaespuma es altamente
recomendable. El principal problema que
puede presentarse durante los sucesivos
subcultivos in vitro es la vitrificacin. La cual
consiste en un proceso de morfognesis
anormal con cambios anatmicos,
morfolgicos y fisiolgicos que producen hojas
de una apariencia vidriosa. Este fenmeno
est regulado por dos factores clave que son la
humedad relativa y el potencial agua, y afecta
a dos procesos fisiolgicos fundamentales, la
fotosntesis y la transpiracin. Debido a la
disfuncin metablica asociada, las plantas se
vuelven completamente hetertrofas y
transpiran excesivamente debido a un mal
funcionamiento estomtico y a cambios
estructurales en las paredes celulares. La
principal consecuencia de la vitrificacin es la
baja supervivencia de las plntulas obtenida
durante la aclimatizacin ex vitro. Por ello, es
fundamental conocer el rol de los distintos
factores que inciden negativamente sobre el
desarrollo morfognico normal (parcialmente
auttrofo) in vitro. Estos factores son el
ambiente de cultivo, los componentes
orgnicos e inorgnicos del medio, los
reguladores de crecimiento, la luz y la
temperatura. Una baja humedad relativa,
elevada irradiacin, la remocin de la fuente de
carbohidratos del medio de cultivo y la
defoliacin de las plantas para estimular la
formacin de hojas nuevas estimulan la
fotosntesis y otras actividades metablicas de
las hojas en forma normal. Otras estrategias
para lograr un ptimo crecimiento implican el
empleo de retardantes del crecimiento para
estimular la formacin de hojas nuevas
despus del transplante. O bien, el empleo de
altos niveles de CO2 (antagonista del etileno)
para estabilizar la va de lignificacin y prevenir
la vitrificacin a travs de la inhibicin de la
hiperhidratacin, la hipolignificacin y la
formacin de aernquima.
Etapa 3: Enraizamiento y aclimatizacin
En esta etapa se produce la formacin de
races adventicias. En las especies herbceas
es relativamente fcil mientras que en muchas
especies leosas resulte ms complicada por
su limitada capacidad rizognica. El
enraizamiento puede realizarse tanto en
condiciones in vitro como ex vitro. En el primer
caso pueden emplearse varios tipos de
substratos y reguladores de crecimiento
(principalmente auxinas) para promover la
rizognesis. Los substratos incluyen: medio
solidificado con agar, perlita y/o vermiculita
humedecidas con medio nutritivo o agua. En
un medio solidificado con agar, los nutrientes
se reducen de a de la composicin
original, y la sacarosa se reduce a una
concentracin final de 1-2%. Medios con baja
concentracin salina, como el WPM (Lloyd &
McCown, 1981) y GD (Gresshoff & Doy, 1972)
incrementan el porcentaje de enraizamiento de
vstagos axilares en plantas latifoliadas. El
empleo de agar presenta ventajas y
desventajas sobre la rizognesis. Por un lado,
el enraizamiento de especies forestales en
agar se favorecera al producirse una
rizognesis ms sincrnica como resultado del
contacto ntimo de las estacas con el medio de
cultivo. Sin embargo, las races producidas por
este mtodo son usualmente engrosadas y no
poseen pelos radiculares. Adicionalmente, el
empleo de agar est asociado con la formacin
de callo en la base de las estacas, que
conduce al establecimiento de conexiones
vasculares interrumpidas entre races y
vstagos. Comnmente, a fin de proceder a su
enraizamiento, los vstagos de buenos
tamaos provenientes de la etapa de
multiplicacin y provistos de al menos 4-5
yemas, se colocan durante periodos cortos en
soluciones con concentraciones elevadas de
auxinas. La auxina ms utilizada es el IBA, que
puede utilizarse a concentraciones de 1-10 M
durante pocas horas. Alternativamente se
pueden emplear niveles ms bajos de auxinas
(0,1 a 1 M), pero manteniendo la induccin
por un periodo ms prolongado (3 a 7 das).
Luego los vstagos se transfieren a un medio
de cultivo basal desprovisto de reguladores de
crecimiento para permitir el desarrollo de las
races. Aproximadamente 20 das despus del
tratamiento de induccin, es posible la
obtencin de una adecuada cantidad de races
funcionales que permitan continuar hacia la
etapa de aclimatizacin. Es importante
acentuar que el uso de auxinas a elevadas
concentraciones es contraproducente porque
induce la formacin de callo en la base de las
estacas. Por ello para cada cultivo es
necesario optimizar un protocolo de
rizognesis que minimice la formacin de callo
y maximice la tasa de rizognesis y
supervivencia de las plantas. El enraizamiento
ex vitro permite que el enraizamiento y
aclimatizacin se logren simultneamente y
que raramente se forme callo en la base de las
estacas, asegurando as una conexin
vascular continua entre el vstago y la raz. Sin
embargo, el estrs asociado a la transpiracin
acelerada de las plantas durante las etapas
iniciales del trasplante puede reducir
considerablemente la tasa de supervivencia.
Por ello, es conveniente contar con
instalaciones de invernadero o cmaras de
crecimiento adecuadas para brindar
temperatura y humedad relativa moderadas
que permitan lograr la rusticacin de las
plantas en forma progresiva. Bajo condiciones
ex vitro se utilizan diferentes substratos,
mezclas de tierra y arena y/o abonos, los
cuales convienen que estn debidamente
desinfectados.
La micropropagacin de especies herbceas
est orientada a proveer material libre de
patgenos, propagar material seleccionado por
su mayor rendimiento o por su mayor
resistencia a enfermedades y estreses
ambientales, conservar la diversidad especfica
en bancos de germoplasma, obtener material
para estudios fisiolgicos y genticos y sentar
las bases para la aplicacin de tcnicas de
ingeniera gentica. Existe una gran variedad
de protocolos, desarrollados en funcin de la
especie y de los objetivos de la propagacin.
Existen protocolos generales para
monocotiledneas como en el caso ciertos
cereales (trigo, maz, cebada, avena, arroz),
pasturas (pasto bermuda, festuca alta, raigrs,
pasto llorn) y hortcolas (cebolla, ajo, puerro);
protocolos generales para dicotiledneas que
incluyen especies hortcolas (tomate, papa,
pimientos y zanahorias) y leguminosas
forrajeras (alfalfa, man, trbol blanco) y
protocolos para especies modelo como
Arabidopsis y tabaco. En todos los casos, las
formas de propagacin son las mismas. Se
emplean vas de regeneracin por formacin
de yemas axilares, yemas adventicias y
embriognesis somtica. En los dos primeros
casos, el sistema de propagacin a travs de
la organognesis directa asegura la estabilidad
gentica de las plantas regeneradas y se
emplean cuando el objetivo es la propagacin
clonal a gran escala. La embriognesis u
organognesis indirecta, con formacin de
callo, se emplea en cambio para generar
variabilidad en programas de mejoramiento. En
el caso de ajo y cebolla, por ejemplo, las
etapas de la micropropagacin incluyen tanto
la multiplicacin de yemas axilares por el
cultivo de meristemas, la formacin directa de
yemas adventicias en explantos obtenidos a
partir de placas basales o umbelas inmaduras
y la formacin indirecta de yemas adventicias
y/o embriones somticos obtenidos a partir de
callos que provienen de distintos tipos de
explantos (meristemas, brotes, placa basal
races). En el caso de alfalfa y otras
leguminosas como soja y man la
micropropagacin es llevada a cabo por la va
de la embriognesis somtica, donde los
embriones se obtienen utilizando tejidos
juveniles (embriones, cotiledones y pecolos)
como explantos. En algunos casos como pasto
llorn (Eragrostis curvula) es posible la
regeneracin de plantas mediante embriog-
nesis, organognesis y regeneracin directa a
partir de los explantos.
Resultados

Discusin de micropropagacin

Como bien sabemos la micropropagacin consiste en la propagacin asexual de plantas usando la

tcnica de cultivo de tejidos vegetales. Esto significa que una porcin pequea de tejido vegetal de
una planta selecta por determinadas caractersticas, en el caso de la practica de violeta africana
Saintpaulia ionantha WendI se introduce en un recipiente estril, con medio de cultivo para que la
planta tenga todos los nutrientes que necesita. En el caso ideal la planta crece y va generando
nuevos vstagos que pueden subdividirse usualmente cada 4 a 8 semanas, generando nuevos
plantines clonados a partir de ese explante original4.

Dentro de los cinco pasos de la micropropagacin (Etapa 0: seleccin y acondicionamiento de la

planta madre, etapa 1: establecimiento de cultivos axnicos, etapa 2: regeneracin de las plantas a
partir del explante, etapa 3: procesamientos de alargamiento y etapa 4: aclimatacin) los puntos
clave son la seleccin de la planta madre, el trabajo en condiciones aspticas y la proporcin de
condiciones de cultivo adecuadas. De acuerdo al prembulo anterior y a los resultados obtenidos en
la presente prctica se realiza el siguiente anlisis:

De acuerdo a los resultados mostrados en los explantes en la primera revisin, podemos decir que la
cantidad de estos que no presentaron contaminacin y tampoco estaban oxidados en el caso de
nuestro equipo fueron mayores a la media reportada, as como en el caso de los no contaminados y
oxidados, por lo que en este punto haba una ventaja pues se reflejaba la buena respuesta por parte
de los explantes. Para aquellos cultivos que se encontraban contaminados y no oxidados no se
reportaron valores en el equipo, aunque si para aquello contaminados y oxidados, siendo estos
valores mucho menores a la media establecida por el grupo, con ello hasta ese momento podamos
decir que se haba estado trabajando adecuadamente pues los valores de contaminacin de
explantes eran mucho menores a los valores de explantes contaminados. Ahora bien, para la
segunda revisin ya se haban desechado todos aquellos explantes contaminados encontrados en la
primera revisin, de acuerdo a los resultados obtenidos esta segunda vez la cantidad de explantes
no contaminados, as como no oxidado era mucho mayor a la del grupo en general, mientras que la
cantidad de aquellos explantes no contaminados pero oxidados descendi en gran medida
comparada con el grupo. En cuanto a los contaminados, en el caso del equipo no se mostr
presencia de ninguno.
Para los frascos se realiz una lectura inicial y una final, en el caso de la primera como podemos ver
en la tabla correspondiente, la cantidad de frascos no contaminados y no oxidados en el equipo fue
mayor comparada con los datos del grupo en general. Cuando se observaron los no contaminados
oxidados obtuvimos valores ligeramente por debajo de la media. En el caso de los contaminados y
no oxidados no se reportaron datos en el equipo y finalmente en los contaminados y oxidados
definitivamente nuestros valores superaron a los de la media. Ahora bien en la ltima revisin la
cantidad de frascos que no estaban contaminados ni oxidados fueron mucho menores a los primero
reportados, pero se mantuvieron por arriba de los resultados grupales. En cuanto a los frascos no
contaminados pero oxidados los valores obtenidos por el grupo disminuyeron comparados con los de
la primera lectura y respecto a ellos tambin los valores obtenidos por el equipo. En esta ltima
lectura ya no se encontraron frascos contaminados no oxidados o contaminados oxidados.

La contaminacin en los frascos y explantes por parte del equipo pudo deberse a las malas
condiciones de siembre y resguardo de estos, as como a la falta de cuidado al tapar los frascos,
siendo los hongos los principales tipos de agentes que pueden provocar su contaminacin pues
estos son cosmopolitas, entre ellos los ms comunes son Aspergillus, Fusarium, Penicillium1.

La oxidacin presente en explantes y frascos tiene una explicacin ms profunda. la oxidacin u

oscurecimiento de tejidos cultivados in vitro, se puede definir como la oxidacin, por radicales libres,
de diferentes componentes celulares, as como, la oxidacin de compuestos fenlicos catalizado por
la enzima polifenol oxidasa (PPO) para producir quinonas, las cuales son especies qumicas muy
reactivas y propensas a reaccionar, generando dao e incluso la muerte celular (Amiot et al. 1996,
Bray et al. 2000). Segn lo reportado por George 1993, Tabiyeh et al. 2006, Van Staden et al. 2006,
Abdelwahd et al. 2008 en el caso particular del cultivo de tejidos in vitro, los procesos de oxidacin
son causados principalmente por el efecto abrasivo del agente desinfectante aplicado durante la
asepsia del explante, los cortes que sufre el explante, composicin del medio de cultivo, volumen y
calidad del frasco de cultivo3.

El medio de cultivo empleado contaba con todos los promotores de crecimiento vegetal necesarios,
as como con los macro nutrientes, micronutrientes y necesarias para el desarrollo de nuestro
explante, sin mencionar tambin la presencia de agentes quelantes como el EDTA para la
disponibilidad de hierro2 y la presencia de agar para sostener el nuevo cultivo y donde estaban
dispersos todos estos compuestos. Cabe destacar que la mayora de los cultivos de clulas
vegetales no son auttrofos y por lo tanto dependen completamente de una fuente externa de
carbono. En muchos casos, se prefiere sacarosa como en l nuestro. Por lo anterior podemos decir
que la falta de crecimiento de estos no se ve atribuida a problemas en la cantidad y tipo de sustratos
aadidos, a continuacin, se mencionan las cuales fueron esos sustratos aadidos: Macroelementos
(N, P, K, Ca, Mg, S) y micro elementos (Fe, Co, Zn, Ni, B, Al, Mn, Mo, Cu, I) en proporciones
adecuadas. Vitaminas: piridoxina y acido nicotnico. Hormonas reguladoras del crecimiento como
auxinas: promueven la elongacin celular, la formacin de callos y races adventicias, inhiben la
formacin de brotes axilares adventicios y, en ocasiones, inhiben la embriognesis. Citocininas:
promueven la divisin celular, regulan el crecimiento y el desarrollo de los tejidos vegetales.

Conclusin

La micropropagacin de violeta africana Saintpaulia ionantha WendI no pudo concluirse de acuerdo

a lo planteado en el procedimiento de la prctica, esto debido a la falta de explantes viables. Tal
situacin la propiciaron diversos factores, dentro de los cuales uno de los ms importante fue la
contaminacin de los medios por falta de cuidado por parte de los alumnos, sin embargo, podemos
decir que la aplicacin de esta biotcnica resulta una metodologa apropiada para la multiplicacin a
gran escala de esta especie cuando se lleva a cabo de manera apropiada, es decir cuidando la
seleccin de la planta madre, el trabajo en condiciones aspticas y el propiciamento de condiciones
de cultivo adecuadas.

Bibliografia

1. Hongos y levaduras; https://prezi.com/bmb-v_btc-xe/hongos-y-levaduras-que-afectan-a-los-alimentos/ ; consulta 05 de

junio de 2017 a las 6:05 pm
2. MANUAL DEL LABORATORIO E CULTIVO DE TEJIDOS ELABORADO POR: Dr. Jess Agustn Badillo Corona Dra.
Mara del Carmen Oliver Salvador IBt. Karen Gisela Moreno Guerrero
http://www.biblioteca.upibi.ipn.mx/Archivos/Material%20Didactico/Manual%20del%20Laboratorio%20de%20Cultivo%20d
e%20Tejidos%20.pdf Consulta 08 de junio de 2017 a las 11:00 am
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http://www.mag.go.cr/rev_meso/v20n01_153.pdf consulta 08 de junio de 2017 a las 12:17 pm
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http://www.exactas.unca.edu.ar/HUAYLLUBIOS/num-7/2.pdf consulta 07 de junio de 2017 a las 3:00 pm
Villalvazo Gonzlez Marcos Paris

Los explantes son de diversa naturaleza, pueden ser porciones de tejido, clulas sueltas,
protoplastos, esporas, granos de polen o semillas. Con excepcin de los vulos y el polen, los
explantes estn constituidos por tejidos y/o clulas somticas. El tipo de explante a usarse en los
procesos de micropropagacin depende de la especie con la que se est trabajando y de los
objetivos que se persigan. Explantes como los meristemos apicales y las yemas axilares son
genticamente muy estables, este tipo de explantes sirve para reproducir mltiples clones de una
forma o variedad con caractersticas especiales que se desea mantener en el cultivo. Otros
explantes como las yemas adventicias son ms bien genticamente inestables y producen un alto
grado de variabilidad en los clones, este procedimiento no es til para la produccin de plntulas con
una determinada caracterstica de cultivo, pero si lo es para el fitomejoramiento, ya que mediante
esta variacin semi natural, es posible obtener nuevas lneas de cultivo.

Pueden ser aplicaciones para: Estudios bsicos. En este caso, los explantes cultivados pueden ser
diversos. Si lo nico que se quiere lograr es un sistema de callos para estudiar algn proceso
fisiolgico, se puede cultivar cualquier rgano, tejido o clula viva. En este caso en que lo nico que
se busca es la induccin de callos lo ideal es cultivar explantes jvenes, derivados de semillas en
germinacin, donde se obtienen respuestas rpidas y, en general, hay menores problemas de
contaminacin con microorganismos. Obtencin de plantas con sanidad controlada. Es muy comn
la utilizacin del cultivo de tejidos para la obtencin de plantas libres de virus. El explante ideal para
ello es el meristema (dependiendo de la especie, de 0,2 - 0,5mm de longitud) consistente del domo y
de un par de primordios foliares. Micropropagacin. En este caso depender del sistema que se
quiere utilizar. Si lo que se quiere explotar es la brotacin de meristemas, los pices terminales y los
segmentos uninodales de ramas jvenes constituyen excelentes explantes. En este caso el
cultivador de tejidos debe conocer perfectamente la biologa de la reproduccin de la planta para
aprovechar aquellos explantes que en forma natural son propgulos. En cambio, si se pretende
micro propagar mediante el empleo de semillas sinttica el explante original deber posibilitar la
induccin de la embriognesis somtica. En este caso, la utilizacin de embriones zigticos
inmaduros u hojas, suelen ser frecuentes como explantes. Obtencin de hbridos interespecficos.
Una de las primeras aplicaciones del cultivo de tejidos en la agricultura lo constituy su empleo como
ayuda para la obtencin de hbridos derivados de cruzamientos interespecficos, donde se produce el
aborto temprano de embriones. En estos casos, el explante cultivado es el embrin cigtico en
estadios tempranos de su desarrollo. Con la misma finalidad tambin se utilizan ovarios u vulos
fecundados. Obtencin de plantas de semillas con embriones rudimentarios. Para esta finalidad los
explantes pueden ser semillas (por ej. orqudeas) o bien, se aslan los embriones en un estado
temprano de desarrollo (corazn) como en el caso de yerba mate o de algunas variedades de
duraznero. Obtencin de plantas haploides: En este caso, los explantes ms utilizados son las
anteras, aunque tambin pueden emplearse microsporas aisladas, vulos y ovarios no fertilizados.
Induccin de variacin somaclonal. En este caso se pueden utilizar varios explantes, pero si la
finalidad de su utilizacin es la aplicacin en planes de mejoramiento gentico de plantas, los
explantes utilizados deben posibilitar la regeneracin de plantas enteras. Produccin y/o conversin
de sustancias tiles. Se puede utilizar una gran variedad de explantes. Los de races suelen ser muy
utilizados. Obtencin de hbridos somticos. Para esta finalidad se recurre a la fusin de
protoplastos. En la mayora de los casos se aslan los protoplastos de mesfilos de hojas y de
suspensiones celulares. Conservacin e intercambio de germoplasma. Los meristemos son los
explantes preferidos para el desarrollo de sistemas de conservacin a mediano y largo plazo
(crioconservacin con nitrgeno lquido) y para el intercambio de material gentico. Establecimiento
de suspensiones celulares. En este caso se recomienda iniciar los cultivos a partir de explantes
extrados de semillas en germinacin (hipoctilo, epictilo, cotiledones, races).
Posibilidad de contaminacin con microorganismos
De ser posible, se deben cultivar explantes de plantas donantes que crecen en condiciones
de invernadero, con ello se reduce sustancialmente las tasas de contaminacin. Por otra parte, es
recomendable evitar el uso de explantes sucios (races, rizomas) que provienen de plantas crecidas
en macetas o en el campo, dado que en la mayora de los casos no es posible conseguir una buena
desinfeccin de los mismos.

Edad fisiolgica
Este es un aspecto de gran influencia en la morfognesis. Como regla general se puede decir que
cuando ms joven e indiferenciado se encuentre el explante a cultivar, mejor ser su respuesta in
vitro. Es por ello que los meristemos apicales y axilares son ampliamente usados en numerosas
especies. En el caso de la micropropagacin de plantas leosas, la edad del explante es un factor
crtico. Si los tejidos son jvenes, la micropropagacin tiene mayores posibilidades de ser exitosa
que con tejidos maduros. Este hecho genera la necesidad de realizar tratamientos de
rejuvenecimiento de las plantas donantes de explantes.

Tamao
En general, cuanto ms grande sea el explante mayores sern las posibilidades de inducir la
proliferacin de callos o la regeneracin directa de rganos. Sin embargo, a mayor tamao de
explante tambin son mayores las probabilidades de que los cultivos se contaminen con
microorganismos. Tambin es necesario tener en cuenta que existe un tamao mnimo del explante,
que depende de la especie y del material vegetal, por debajo del cual no es fcil lograr el
establecimiento de los cultivos. Los explantes muy pequeos suelen requerir del empleo de medios
ms complejos o de los denominados medios acondicionados.

poca del ao
Es un factor que suelen tener mucha importancia en la micropropagacin y que generalmente est
asociado al grado de dormicin que presentan ciertos explantes (yemas, por ejemplo) y tambin con
la posibilidad de mayor o menor proliferacin de microorganismos.
Organognesis y Embriognesis

La organognesis es la formacin de brotes o races mediante el cultivo in vitro de explantes (directa)

o de callos (indirecta). Este proceso puede ocurrir mediante dos vas; organognesis axilar u
organognesis adventicia. La axilar es la formacin de brote a partir de yemas preexistentes,
mientras que la adventicia (de novo) consiste en la induccin de regiones meristemticas. En plantas
dicotiledneas y en reas como cultivo in vitro, micropropagacin e ingeniera gentica, la produccin
de brotes adventicios va organognesis es muy utilizada.

La morfognesis es la regeneracin de brotes, races o embriones, para dar lugar a una planta
mediante dos vas: embriognesis somtica y organognesis, los cuales pueden ser directos (clulas
diferenciadas que dan lugar a una nueva estructura a partir del tejido original de la planta, sin
formacin de callo) o indirectos (clulas no especializadas, desorganizadas y desdiferenciadas,
formacin de callo). Estos procesos se basan en la totipotencia celular por la que todas las clulas
vegetales tienen la capacidad de regenerar plantas completas.

Para estas dos vas se involucran 3 fases, en las cuales implica un desarrollo organizado que
consiste en la activacin de clulas quiescentes o inactivas para que sean capaces de dividirse.
Fase 1. Las clulas adquieren competencia morfognica o capacidad para responder a las seales
hormonales. La desdiferenciacin consiste en que las clulas adultas vivas, an cuando sean clulas
especializadas y con una estabilidad fisiolgica, puedan recobrar su actividad meristemtica cuando
son estimuladas adecuadamente. Este proceso se puede ver afectado cuando hay una modificacin
profunda del protoplasto o su desaparicin. Se desarrolla actividad meristemtica la cual consiste en
la activacin metablica de las clulas quienes tendrn la facilidad de volver a una clula quiescente
(inactiva) en clulas en divisin y con va a desdiferenciacin.

Fase 2. Las clulas se vuelven competentes. Son clulas que adquieren capacidad inductiva
(determinacin de las clulas para formar rganos especficos en respuesta a seales exgenas
producidas por hormonas y a la interaccin celular o induccin).

Fase 3. Las clulas se diferencian morfolgicamente. Formacin de rganos independientemente de

la aplicacin de reguladores exgenos (reaccin a seales especficas) (diferenciacin).

La embriognesis es uno de los procesos ms importantes en el ciclo de vida de las plantas, el cual
comienza con una fecundacin doble (embriognesis cigtica), seguido de la determinacin de los
ejes embrionarios (basal y apical) y el cambio morfolgico de estos (globular, torpedo y corazn).
Este proceso es regulado por numerosos factores incluyendo fitohormonas, enzimas y otras
sustancias relacionadas con la embriognesis.

La embriognesis somtica es el proceso asexual por el cual las clulas somticas se diferencian en
embriones somticos (sin fusin de gametos, no forma conexin vascular con el tejido original), sin
embargo, los embriones somticos son morfolgicamente parecidos a los embriones cigticos.
Durante este proceso se lleva a cabo la expresin de diferentes genes que confieren a las clulas
somticas la capacidad de manifestar su potencial embriognico. Este proceso implica por lo tanto
una gran cantidad de eventos moleculares que abarcan no solo la expresin de genes, si no de
diversas vas de transduccin de seales de activacin / represin de una gran cantidad de genes,
los cuales provocan cambios fisiolgicos, bioqumicos, metablicos y morfolgicos.