Aulas Prticas de Microbiologia - Ano Lectivo 2017|18

PROTOCOLO 2: ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS, TCNICAS DE SEMENTEIRA E

CONTAGEM DE BACTRIAS

A cultura de bactrias a partir de amostras mistas permite a quantificao do nmero
de bactrias cultivveis presentes na amostra bem como o isolamento e purificao de
bactrias de interesse.
Neste protocolo ser utilizada uma das diferentes tcnicas de sementeira, de acordo
com a indicao do docente. A partir das placas obtidas proceder-se- quantificao
do nmero de unidades formadoras de colnias (UFCs) presentes na amostra. Para
alm disso, ser fornecida uma cultura mista, em meio slido/lquido, a partir da qual
cada grupo far o isolamento em cultura pura de um microrganismo, recorrendo ao
riscado por exausto.
Este protocolo ser adaptado aula prtica correspondente ao Protocolo 3. Curva de
crescimento.

Material
Cultura mista
Tubos de diluio
Soluto de Ringer
Placas de petri com meio TSA
Meio TSA arrefecido a 45 C
Pipetas de vidro
Vrtex
Placas com cultura em meio slido

Procedimento
A1. Fazer diluies (-1, -3 e -5) e semear as diluies, por incorporao ou
superfcie (de acordo com as indicaes do docente), nas placas de meio
fornecidas.
A2. Incubar as placas a 37 C. Observar e registar os resultados ao fim de 24 horas.
Calcular a abundncia de bactrias cultivveis expressa em UFC/mL.

B. Efectuar um riscado por exausto (de acordo com as instrues do docente) a
partir de uma cultura mista.