Velocidad de crecimiento del hongo Aspergillus spp.

, en Agar
Sabouraud a diferentes rangos de pH.

Yessica Cceres 1, Jos Rivela1

Departamento de biologa, Facultad de Ciencias exactas y naturales, UNA- San Lorenzo,

Paraguay. Trabajo presentado en la ctedra de Biofsica del grado de licenciatura en ciencias
mencin biologa- San Lorenzo, Junio 2017. 1Alumnos de la carrera de biologa Facultad de
ciencias exactas y naturales, UNA
RESUMEN
El objetivo del trabajo fue determinar el efecto del pH del medio de crecimiento y la
velocidad de propagacin en diferentes rangos de tiempo del hongo Aspergillus sp. Los pH
ajustados fueron: (cido, neutro y bsico). Los resultados se expusieron en tablas y grfico
indicando la mxima velocidad de crecimiento que corresponde al medio cido con 0.693
mm2/hora a T: 25C y pH: 5,06. Seguida del medio neutro con velocidad media de crecimiento
de 0,677 mm2/horas, a T: 25C, y pH: 7, y el medio bsico con una menor velocidad de
crecimiento con 0,358 mm2/hora a T: 25C, y pH: 9. Puesto que en este trabajo las condiciones
ptimas para el crecimiento del Aspergillus sp fueron: pH: 5,06 (cido) a una temperatura de
25C, e indicando que el pH del medio de cultivo es determinante para dicho hongo.

Palabras clave: cido, Aspergillus sp; agar Sabouraud Dextrose; bsico; efecto del pH;
velocidad del crecimiento, neutro.

SUMMARY
The objective of the work was to determine the effect of the pH of the growth medium
and the propagation speed in different time ranges of the fungus Aspergillus sp. The pH adjusted
were: (acid, neutral and basic). The results were presented in tables and graph indicating the
maximum growth rate corresponding to the acid medium with 0.693 mm2 / hour at T: 25C and
pH: 5.06. Following the neutral medium with a mean growth rate of 0.677 mm2 / hours, at T:
25C, and pH: 7, and the basic medium with a slower growth rate with 0.358 mm2 / hour at T:
25C, and pH: 9. Since in this work the optimum conditions for the growth of Aspergillus sp
were: pH: 5.06 (acid) at a temperature of 25C and indicating that the pH of the culture medium
is determinant for said fungus.

Key words: acid, Aspergillus sp; Sabouraud Dextrose agar; basic; PH effect; Speed of
growth, neutral.
 Introduccin
Los hongos filamentosos, son aquellos que se caracterizan por poseer un aspecto
algodonoso, aterciopelado o pulverulenta de colores claros u oscuros y poseen filamentos
microscpicos que se ramifican y crecen en sustratos como alimentos, ropas entre otras objetos
de uso cotidiano segn Garca, (2004).El Aspergillus segn Guevara, (2007), es un hongo
filamentoso que posee tabiques no ramificados y las hifas no son septadas Las colonias se
desarrollan rpido sobre Agar Sabouraud. El color de las colonias al principio es blanco a
amarillo; cuando se desarrollan completamente la colonia se torna de color negro. La textura
de las colonias es granular. (Lpez et al., 2006).
La medicin de la velocidad de crecimiento en hongos filamentosos segn (Gutirrez
Snchez, 1999), son mtodos que permiten evaluar la capacidad de los hongos para colonizar
un determinado medio de cultivo slido.

MATERIALES Y MTODOS
Se emple 4,6 gr de Agar Sabouraud Dextrosa (marca OXOID) en 70 ml de agua
destilada. Una vez homogeneizada, se ajust a distintos pH utilizando HCl para bajar el pH y
NaOH para subir utilizando pipetas Pasteur, se agreg 9 gotas de HCl para el pH: 5,06 (cido),
60 gotas de NaOH para el pH: 7(Neutro) y 211gotas de NaOH para el pH: 9(Bsico). Se midi
los distintos pH con ayuda de un pH-metro digital. Los preparados se llevaron a la autoclave
(marca VZ) a 121C aproximadamente unos 15 minutos, para as eliminar todo microorganismo
existente en el medio y evitar contaminacin. Posteriormente el medio se coloc en cajas de
Petri esterilizadas de 90mm x25mm. Para los distintos medio tres placas de Petri y se dej
solidificar al lado de varios mecheros para as evitar posibles contaminaciones. Con ayuda de
un asa bacteriolgica se inculo por picadura al hongo a ser estudiado y se llev al centro de la
placa cuidadosamente y se incub a 25 C por 24 horas. Se registr su largo y ancho de las
colonias con ayuda de un vernier, se control la primera medicin a las 15 horas cada dos horas
y luego se registr a las 24 horas cada dos horas el crecimiento de las colonias, se registr y se
tom fotografas de estas. Los datos obtenidos se represent en tablas y grficos estadsticos y
se hall la velocidad de crecimiento de las colonias en los diferentes pH.
 RESULTADOS Y DISCUSIN
En la figura n1, se aprecia el crecimiento de las 9 colonias en los diferentes rangos de
pH despus de 15 horas de haber incubado a una temperatura de 25C, donde se observ muy
bajo crecimiento macroscpico de las colonias, es por esa razn que se dej completar las 24
horas de incubacin como menciona (Arias et al., 2008). El pH es fundamental para el
desarrollo de los hongos, a un pH alto se ve afectada la solubilidad de los metales y a pH bajo
se afectan los sistemas enzimticos, el ingreso de vitaminas esenciales y cidos orgnicos y la
toma de minerales. El pH ptimo se encuentra entre 4 y 6 (Arias, 2008).

Medio Largo Ancho Supf. Largo Ancho Supf.

(cm2 ) (cm2 ) (cm2 ) (cm2 )
1p.m. 1p.m. 3p.m. 3 p.m.
A1 0,4 0,2 0,08 0,5 0,4 0,2
A2 0,4 0,2 0,08 0,5 0,5 0,25
A3 0,1 0,1 0,01 0,2 0,2 0,04
N1 0,4 0,2 0,08 0,5 0,4 0,2
N2 0,5 0,3 0,15 0,7 0,3 0,21
N3 0,5 0,5 0,25 0,8 0,7 0,56
B1 0,2 0,1 0,02 0,2 0,3 0,06
B2 0,2 0,1 0,02 0,3 0,2 0,06
B3 0,3 0,2 0,06 0,3 0,3 0,09

Tabla n 1: Crecimiento de la colonia despus de 15 horas de ser inoculado e

incubado a 25C.
*Supf. Superficie (Lxa), A: cido; N: Neutro; B: Bsico.

En la figura n 2 se presenta los resultados del crecimiento de las 9 placas con

las colonias del Aspergillus sp., en Agar Sabouraud Dextrose este un medio de cultivo que por
sus caractersticas funciona como medio de enriquecimiento para hongos. Una vez terminada
las mediciones se calcul la superficie y se orden en la tabla n3 respectivamente y se calcul
las velocidades de cada muestra en los diferentes pH.
 Largo Ancho Largo Ancho Largo Ancho Largo Largo Ancho
Medio Ancho
(cm2 ) (cm2 ) (cm2 ) (cm2 ) (cm2 ) (cm2 ) (cm2 ) (cm2 ) (cm2 )
Supf. Supf. Supf. (cm2 ) Supf. Supf.
9a.m. 9a.m 11a.m 11a.m 1p.m 1p.m 3p.m 3p.m 5p.m 5p.m
A1 1,1 1 1,1 1,3 1,2 1,56 1,4 1,3 1,82 1,6 1,6 2,56 1,8 1,7 3,06
A2 1,1 1,3 1,43 1,2 1,4 1,68 1,3 1,5 1,95 1,4 1,7 2,38 1,7 1,8 3,06
A3 1,1 1 1,1 1,2 1,2 1,44 1,3 1,2 1,56 1,4 1,3 1,82 1,6 1,5 2,4
N1 0,9 1 0,9 1 1,2 1,2 1,1 1,1 1,21 1,2 1,1 1,32 1,4 1,3 1,82
N2 1,3 1,2 1,56 1,4 1,3 1,82 1,5 1,4 2,1 1,6 1,5 2,4 1,8 1,7 3,06
N3 1 0,9 0,9 1,2 1 1,2 1,3 1,1 1,43 1,4 1,2 1,68 1,5 1,4 2,1
B1 0,8 0,9 0,72 0,9 1 0,9 0,9 1,2 1,08 1 1,3 1,3 1 1,3 1,3
B2 0,7 0,9 0,63 0,8 1 0,8 1 1 1 1,1 1,1 1,21 1,3 1,2 1,56
B3 0,8 0,8 0,64 0,9 0,8 0,72 1 0,9 0,9 1 0,9 0,9 1,1 1,1 1,21

Tabla n 2: Crecimiento de la colonia despus de 24 horas de ser inoculado e incubado a 25C.

*Supf. Superficie (Lxa)

En el grafico n1, se observa la relacin que existe entre el crecimiento de las

colonias en los diferentes medios utilizados, mostrando un crecimiento pico en el medio cido,
seguida del medio neutro y con una disminucin energtica en el medio bsico, es decir, utilizan
menos energa en este medio.

3,5

3
Crecimiento

2,5

1,5

0,5

0
A1 A2 A3 N1 N2 N3 B1 B2 B3

Medios

Grafico n1: Relacin entre el crecimiento de la colonia del hongo Aspergillus sp., con respecto a
los diferentes rangos de pH.
 15 h 17 h 35 h 37 h 39h 41 h 43 h
Total Total Total Total Total Total Total
Medio 1 p.m. 3 p.m. 9 a.m. 1 a.m. 1 p.m. 3 p.m. 5 p.m.
2 2 2 2 2 2
( mm ) (mm ) ( mm ) ( mm ) ( mm ) ( mm ) ( mm2) v=(f-i)/T
(
mm2/h)
A1 0,08 0,2 1,1 1,56 1,82 2,56 3,06 0,693
A2 0,08 0,25 1,43 1,68 1,95 2,38 3,06 0,693
A3 0,01 0,04 1,1 1,44 1,56 1,82 2,4 0,556
N1 0,08 0,2 0,9 1,2 1,21 1,32 1,82 0,405
N2 0,15 0,21 1,56 1,82 2,1 2,4 3,06 0,677
N3 0,25 0,56 0,9 1,2 1,43 1,68 2,1 0,43
B1 0,02 0,06 0,72 0,9 1,08 1,3 1,3 0,298
B2 0,02 0,06 0,63 0,8 1 1,21 1,56 0,358
B3 0,06 0,09 0,64 0,72 0,9 0,9 1,21 0,267

3,5
3
Crecimiento(cm2)

2,5
2
1,5
1
0,5
0
15 h 17 h 35 h 37 h 39h 41 h 43 h
Tiempo (Horas)

A1 A2 A3 N1 N2 N3 B1 B2 B3

Grafico n2: Relacin entre el crecimiento de la colonia del hongo Aspergillus sp., con
respecto al tiempo de muestreo.

Tabla n 3: total de las superficies (mm2); 43 horas de muestreo. Y la velocidad de las 9 muestras.
 Grafico n3: Efecto del pH del medio de cultivo respecto con la velocidad de crecimiento
(mm2Con
/hora)respecto a los parmetros
de las especies de crecimiento
de hongos Aspergillus sp. como muestra en la tabla n 3 y el grfico
n3, la mayor velocidad especifica de crecimiento fue en el medio cido con 0.693 mm2 y 0,556
mm2 por horas respectivamente a una T: 25C y pH: 5, 06, adems se observ un crecimiento
rpido donde muestra que la colonia de inicio es blanca algodonosa y posteriormente se torna
pulverulenta fina de color negro azabache ilimitada. En el medio neutro se registra una
velocidad media de crecimiento de 0,677 mm2, 0,43 mm2 y 0,405 mm2 por horas, a una T: 25C,
y pH: 7, donde se observ una disminucin del crecimiento de los conidios de color negro
azabache. Mientras que el medio bsico fue donde se observ una menor velocidad de
crecimiento de las colonias con 0,358 mm2, 0, 298 mm2 y 0,267 mm2 por hora. Esto se debera
a que el pH es fundamental para el desarrollo de los hongos, a un pH alto se ve afectada la
solubilidad de los metales y a pH bajo se afectan los sistemas enzimticos, el ingreso de
vitaminas esenciales y cidos orgnicos y la toma de minerales. El pH ptimo se encuentra
entre 4 y 6 del hongo Aspergillus sp. (Lpez et al., 2006) Todas presentaron un reverso de color
crema de las colonias.

CONCLUSIN
Los resultados obtenidos en el estudio revelaron que el pH del medio de cultivo tiene
efectos significativos sobre el crecimiento del hongo Aspergillus sp., provocando una
disminucin en el crecimiento en el medio bsico siendo este efecto ms evidente en los
cultivos donde el pH fue de 9. En general, donde se observaron los mayores crecimientos se
correlacionan con los valores de pH del cido, donde los hongos crecan en forma natural.

REFERENCIA BIBLIOGRFICA
- Arenas, R. 1993. Micologa Mdica Ilustrada. Clnica, laboratorio y teraputica. Primera
Edicin. McGraw. Mxico. F.F. p: 397
- Arias Cifuentes, E. L., Espinosa, P., & Andera, P. (2008). Aislamiento e Identificacin de
hongos filamentosos de muestra de suelo de los pramos de Guasca y Cruz
Verde (Bachelor's thesis).
- Bonifaz, A. (2012) Micologa Mdica Bsica, Capitulo 5: Hongos Contaminantes, 4 Edicin,
McGrawHill: Mxico. pp. 63, 600p.
- Carrillo-Inungaray, M. L., Ramrez-Zapata, M. R., & Martnez-Castilleja, J. C. (2006). Efecto
de solutos sobre el crecimiento de hongos deteriorativos de Alimentos effect of solutes
on growth parameters of food spoilage moulds cytajoural of food, 5(2), 142-146.
- Hung, L. L., y Trappe, J. M. (1983). Variacin del crecimiento entre y dentro de las especies
de hongos ectomicorrzicos en respuesta al pH in vitro. Micologa. 234 241
- Larone, D. (2011) Medically Important Fungi: A Guide To Identification Capitulo Termally
Monomorphic Moulds, ASM Press: Washington, Dc Pp: 175 176, 485p
- Lpez Ros, C. A., Zuluaga Meneses, A. L. E. J. A. N. D. R. O., Herrera Penagos, S. N., Ruiz
Colorado, A. A., & Medina De Prez, V. I. (2006). Production of citric acid with
Aspergillus niger NRRL 2270 from milk whey. Dyna, 73(150), 39-57.
- Mendoza, J. C. D., & Kulich, E. I. (2004). Aplicacin de balances de masa y energa al
proceso
de Fermentacin en estado slido de bagazo de caa de azcar con Aspergillus
Niger. Biotecnologa Aplicada, 21(2), 85-91.