CITOESQUELETO ERITROCITARIO

MEMBRANA ERITROCITARIA

Debido a su fcil accesibilidad, la membrana eritrocitaria es la ms estudiada de

las membranas biolgicas. Compuesta por una bicapa lipdica (los lpidos son
del 50-60 % de la masa de la membrana) y un esqueleto subyacente, provee al
eritrocito de la estabilidad y deformabilidad requeridas para viajar a travs de la
circulacin.

BICAPA LIPDICA

Est constituida fundamentalmente por fosfolpidos y colesterol, con pequeas

cantidades de glicolpidos. Los fosfolpidos primarios son: fosfatidilcolina, PC,
(28 % del total de fosfolpidos), fosfatidiletanolamina, PE, (27 %),
esfingomielina, SM, (26 %), fosfatidilserina, PS, (13 %) y en menor cuanta,
fosfatidilinositol. Estos fosfolpidos estn distribuidos de forma asimtrica, lo
que es importante para mantener la homeostasis.

Fosfatidilcolinas (PC) y esfingomielinas (SM) predominan en el exterior

respecto a Fosfatidilserinas (PS) y fosfatidiletanolaminas (PE) que se
encuentran en el interior. Hay una tendencia a que los fosfolpidos para cambiar
de ubicacin a pesar de la dificultad para las cabezas polares para cruzar el
ncleo hidrofbico de la bicapa. Sin embargo, la asimetra se mantiene estable
durante la vida til de los glbulos rojos.
Esto es tarea de las translocasas o flipasas enzimas dependientes de ATP, los,
que aseguran una molcula de fosfolpido que habra a la capa externa
retornarla a la capa interna.
Los scramblases juegan un papel contrario. La escramblasa-1de glbulos rojos o
escramblasa dependiente de Ca2+ se desencadena por una fosforilacin
catalizada por protein quinasa C.

Los glicolpidos y el colesterol estn intercalados entre los fosfolpidos.

PROTENAS

La membrana del eritrocito contiene alrededor de 15 protenas mayores y

cientos de menores. En estudios protemicos del eritrocito se ha encontrado
que de 527 protenas alrededor de 340 estn asociadas con la membrana.

Tradicionalmente, estas protenas se clasifican de acuerdo con la facilidad con la

que pueden ser eliminadas totalmente de la membrana.

- Protenas integrales: son aquellas que estn arraigadas firmemente y

distribuidas a travs de la bicapa lipdica e interactan con los lpidos

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hidrofbicos (glicoforinas, las protenas Rh, los antgenos Kell y Duffy,
protenas transportadoras como la Banda 3);

- Protenas perifricas: que estn asociadas de manera ms lbil, por lo que

su extraccin es ms fcil. Estas interactan (por uniones covalentes y no
covalentes) con las protenas integrales o los lpidos que recubren la membrana,
pero no penetran dentro de la bicapa y solo se relacionan con la cara
citoplasmtica (protenas estructurales del esqueleto: espectrinas, anquirina,
actina, protena 4.1 y protena 4.2).

GPA: Glicoforina A; GPB: Glicoforina B

Estas protenas se han nombrado de acuerdo con la movilidad electrofortica en

gel de poliacrilamida-dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE), en base al orden de
migracin de la banda de la protenas.

Algunas de ellas an se nombran con esos trminos, como la Banda 3 o las

Protenas 4.1 y 4.2.

Protenas integrales

Banda 3 (intercambiador de aniones):

Band 3 es un miembro de la familia de protenas de intercambio aninico de

bicarbonato y es importante para muchos procesos fisiolgicos, incluyendo el
transporte de CO2 en la sangre, propiedades mecano-estructural de los
eritrocitos, el mantenimiento del pH intracelular y la secrecin de equivalentes
acido-base. Band 3 (Intercambiador de aniones 1; (Anion Exchanger 1, AE1) es
una protena de transporte que atraviesa la membrana plasmtica y lleva a cabo

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el intercambio de bicarbonato-cloruro en el eritrocito. El dominio N-terminal
citoplasmtica (aminocidos 1-359) de la banda 3 se une protenas de
membrana perifricas y es el sitio de anclaje de membrana para el citoesqueleto
de clulas rojas. Este dominio se une anquirina, protenas 4.1, 4.2 y protenas
adducina. La regin citoplsmica N-terminal de la banda 3 es tambin el sitio
para la unin de desoxi-hemoglobina y varias enzimas glucolticas competitivos.
El dominio C-terminal (aminocidos 360-911) lleva a cabo intercambio aninico
y comprende 12-14 segmentos transmembrana (TM) con una cola
citoplasmtica corto (33 aminocidos). La cola C-terminal alberga un sitio de
unin para la anhidrasa carbnica II.

En los eritrocitos, banda 3 existe como oligmeros como dmeros (60%),

tetrmeros (40%) y agregados ms grandes. El complejo tetramrico de banda 3
humana, denotado originalmente como el complejo de la banda 3, consista en
un tetrmero de la banda 3 unido a anquirina-1 y la protena 4,2, junto con
Glicoforina A.

Por lo tanto la banda 3 contiene importantes sitios de unin para interactuar

con otras protenas de la membrana, tales como la anquirina, la protena 4.1 y la
protena 4.2. La unin a Anquirina / banda 4.2 facilita la asociacin a la
espectrina. La unin del dominio citoplasmtico con la anquirina es uno de los
mecanismos crticos para anexar el esqueleto a la membrana plasmtica, lo que
es determinante en la flexibilidad o rigidez del eritrocito.

Protenas perifricas

Espectrina

Es la protena ms abundante y larga de las que conforman el esqueleto de

membrana. Est formada por subunidades alfa y beta, que aunque tienen
semejanzas, son estructuralmente diferentes y estn codificadas por genes
separados.

Ambas subunidades contienen 106 aminocidos homlogos que estn situados

en segmentos helicoidales. La presencia de estas repeticiones sugiere que las 2
cadenas de la espectrina se desarrollaron a partir de la duplicacin de un solo
gen ancestral.

La estructura de triple hlice de la molcula de espectrina est dada por

heterodmeros y , que se alnean y entrelazan entre s de modo antiparalelo
con respecto a sus terminales NH2, para formar heterotetrmeros.

Estos tetrmeros compuestos de las repeticiones mltiples, suministran un

filamento fuerte y elstico que interviene de manera decisiva en la forma y
resistencia de la membrana. Adems, la espectrina regula la movilidad lateral de
las protenas de membrana, garantiza el soporte estructural para la bicapa
lipdica y se une a la actina y a la protena 4.1 mediante secuencias
repetitivas. Otras secuencias no repetitivas en la espectrina proveen de sitios

3
para el reconocimiento y unin de otros moduladores como quinasas y
calmodulina.

Aunque los miembros de la familia de las espectrinas adoptan un pliegue

helicoidal repetitivo, las interacciones muy especficas de las espectrinas con
otras protenas indican que las repeticiones han evolucionado para proveer una
funcin especializada mientras se mantiene la estructura terciaria.

Anquirina

En los humanos existen 3 isoformas: anquirina 1 o R, que se encuentra en el

eritrocito; anquirina 2 o B, localizada primariamente en el cerebro; y la
anquirina 3 o G, con una expresin ms general.

Esta protena puede ser separada en 3 dominios funcionales: uno NH2 terminal
de unin a la membrana que contiene sitios para la banda 3 y otros ligandos; un
dominio central que contiene sitios para las espectrinas; y uno COOH terminal
regulador, que influye en la interaccin con otras protenas.

El dominio de unin a la membrana contiene 24 repeticiones en tndem, las que

contienen mltiples sitios de unin con protenas. Las repeticiones de la
anquirina son altamente conservadas y se han encontrado en otras protenas
con gran variedad de funciones.

La anquirina garantiza la unin al esqueleto de membrana mediante su relacin

con la espectrina y a la bicapa lipdica a travs de la banda 3. Las interrupciones
de alguna de estas vas de unin provocan inestabilidad en la membrana.

Protena 4.2

Pertenece a la familia de las transglutaminasas; sin embargo, la protena 4.2 no

posee actividad de transglutaminasa porque carece de un residuo crtico en su
sitio activo. Se han descrito al menos 4 isoformas de la protena, aunque la
trascendencia funcional de las isoformas no est esclarecida. La protena 4.2
une diferentes protenas: la banda 3, la protena 4.1 y la anquirina. Su principal
funcin es estabilizar la asociacin del complejo espectrina-actina-anquirina
con la banda 3. Tambin protege el esqueleto de la membrana del
envejecimiento prematuro mediante la unin del calcio y otros cofactores que
normalmente activan las transglutaminasas en el hemate.

ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LA MEMBRANA

La funcin de la membrana eritrocitaria incluye el ensamblaje y organizacin de

las protenas de la bicapa lipdica con las del esqueleto, proporciona a la clula
la estabilidad y deformabilidad necesarias, participa en la biognesis y el
envejecimiento, y provee de una barrera entre el citoplasma y el medio externo
con una permeabilidad selectiva.

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Ensamblaje y organizacin

Cuando se examina la membrana eritrocitaria y esta es estirada, las protenas

individuales del esqueleto aparecen como un enrejado organizado de
hexgonos. Las esquinas de cada hexgono son estructuras globulares llamadas
complejos de unin formados por actina, aducina y protena 4.1. Los tetrmeros
de espectrinas forman los brazos de los hexgonos. Estos tetrmeros, en sus
colas, se unen con los complejos de unin de actina con la ayuda de la protena
4.1 y la aducina. Las interacciones horizontales (paralelas en el plano de la
membrana) derivadas de las uniones anteriores son vitales para el
mantenimiento de la integridad estructural de la clula.

El esqueleto se fija a las protenas integrales de la membrana por varias

interacciones proteicas. La espectrina es el componente principal de la red que
est anclada a la membrana por la anquirina (protena adaptadora), que a su vez
establece el vnculo de la espectrina con la banda 3.

Los extremos terminales de las espectrinas tambin se unen con la membrana

mediante la protena 4.1, la cual se fija a la glicoforina C y la P55.
Adicionalmente, la espectrina y la protena 4.1 se unen dbilmente con la
fosfatidilserina ubicada en el interior de la bicapa lipdica. Estas interacciones
verticales (perpendiculares en el plano de la membrana): protena-protena y
protena-lpido, son crticas en la estabilidad de la bicapa lipdica e impiden la
prdida de sus celdas.

Estabilidad de la membrana y deformabilidad celular

La deformabilidad es la propiedad ms importante del hemate para su

supervivencia y donde mejor se pone a prueba es en su trnsito por los senos
esplnicos.

Se describen 3 factores determinantes en la deformabilidad:

- la geometra celular (forma de disco bicncavo),

- la viscosidad citoplasmtica (determinada por la concentracin de

hemoglobina en la clula) y

- la elasticidad intrnseca de la membrana (deformabilidad de la membrana).

De estos, la geometra celular se considera el factor ms importante.

El ser un disco bicncavo le proporciona al hemate una alta relacin

superficie/volumen (140 m3/90 m3); necesaria para diferentes situaciones,
como cuando el hemate se agranda por estrs osmtico o cuando se estira bajo
los efectos del estrs mecnico de la circulacin.

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La organizacin del esqueleto y su anexo con la membrana tambin influye en la
estabilidad y deformabilidad del hemate. La alta elasticidad de la membrana es
determinada en forma general por su estructura en red y en particular, por la
espectrina. En reposo los segmentos helicoidales de espectrina estn altamente
enrollados. Cuando la membrana se deforma se establece una restructuracin
de la red espectrina-actina: algunas molculas de espectrina comienzan a
desenrollarse y extenderse, mientras que otras se comprimen y mantienen sin
variacin el rea de superficie.

La viscosidad del hemate es determinada en gran parte por los niveles de

hemoglobina. A las concentraciones intracelulares normales de hemoglobina la
viscosidad tiene muy poca contribucin en la deformabilidad.

La concentracin de hemoglobina corpuscular media en la clula humana

normal es de alrededor de 33 g/dL. Mientras la viscosidad de la hemoglobina es
solo 5 centipoises (cp) a los 27 g/ dL, se incrementa a 15 cp a los 37 g/dL; a 45 cp
a los 40 g/dL; a 170 cp a los 45 g/dL; y a 650 cp a los 50 g/dL. Al regular la
concentracin de Hb dentro de este estrecho margen, se minimizan los efectos
de la viscosidad citoplasmtica en la deformabilidad del hemate.

La habilidad de la clula para acomodarse rpidamente en un tubo capilar

angosto en la microcirculacin, se ver comprometida por el incremento de la
viscosidad citoplasmtica. Es importante sealar que la deshidratacin del
hemate y el aumento de la viscosidad citoplasmtica comprometen la
supervivencia del glbulo rojo en grado mnimo.

Propiedades de la membrana

Las propiedades de la membrana son un reflejo de las caractersticas de la

bicapa lipdica y el esqueleto. Durante la deformacin se describe un rpido
traslado del colesterol del interior al exterior de la bicapa. Los hemates que
estn suspendidos en soluciones hipotnicas, como las que se utilizan en el
estudio de fragilidad osmtica, se agrandan y adoptan una forma esfrica ya que
la bicapa de la membrana no puede expandir su rea de superficie ms all del 3
o el 4 %. El descenso de la presin osmtica resulta en la ruptura de la
membrana y la hemoglobina intracelular es descargada al exterior.

La membrana del hemate es casi impermeable a los cationes mono y divalentes;

de esta forma, mantiene alta la concentracin de potasio intracelular, baja la de
sodio y muy bajos los niveles de calcio. Por el contrario, es muy permeable al
agua y a los aniones que son intercambiados fcilmente, razn por la que se
plantea que el hemate funciona como un osmmetro perfecto. La glucosa es
transportada sin consumo de energa.

Las vas para el transporte de agua e iones en el eritrocito incluyen:

bombas de membrana dependientes de energa, sistema de
gradientes y varios canales.

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Bombas de membrana dependientes de energa:

La bomba Na+-K+ ATPasa es la encargada de mantener el sodio intracelular bajo

y el potasio alto, con una relacin de intercambio 3:2. Tiene una importante
funcin en el mantenimiento del pH citoslico, la homeostasis inica y la
osmolaridad celular. La Ca2 + ATPasa es activada por la calmodulina, extrae
calcio de la clula y as mantiene concentraciones intracelulares muy bajas, lo
que la protege de los mltiples efectos deletreos del calcio: equinocitosis,
vesiculacin de la membrana, protelisis y deshidratacin celular. La membrana
tambin contiene un transportador ATP de glutatin oxidado y un sistema
transportador de aminocidos.

Sistema de gradientes:

El gradiente de Na+-K+ establecido por la bomba, es usado por mltiples

sistemas de gradientes pasivos para mover iones a travs de la membrana. Estos
sistemas incluyen: el cotransportador K+-Cl-, la banda 3, el cotransportador Na+-
K+-Cl- (de importancia discreta dentro de la clula) y el intercambiador de Na +-
H+ (parece ser protagnico en la maduracin temprana del hemate). El
cotransportador K+-Cl- es activo en los reticulocitos y su actividad se acelera por
la inflamacin, acidificacin y deplecin del magnesio intracelular.

Canales:

Los canales mediados por Na+-K+ ATPasa, canales de agua (acuaporinas) y los
canales de K+ activados por Ca2+ (canal Gardos), causan la prdida selectiva de
K+ en respuesta al incremento intracelular de Ca2+.

Las acuaporinas son canales de protenas que sirven como poros selectivos a
travs de los que pasa el agua y contribuyen a la habilidad del eritrocito para
hacer ajustes rpidos ante los cambios de la osmolaridad.

Se ha demostrado por monitoreo simultneo del pH y marcadores de volumen,

un enlace funcional entre el transporte de iones de la membrana, el pH y el
volumen celular; la hidratacin adecuada es un factor de peso para evitar la
formacin de vesculas en la superficie de la membrana.

Apoptosis de los eritrocitos

La translocasa y escramblasa-1 estn implicados en la apoptosis de clulas

rojas. Se ha observado que el estrs oxidativo activa la caspasa 3 que resulta en
el deterioro de la translocasa. PS se exterioriza y crea in vivo una situacin
favorable para eritrofagocitosis.

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Banda 3, es target de la activacin de la caspasa 3 por el estrs oxidativo. La
caspasa 3 escinde el dominio citoplsmico de la banda 3 en dos sitios atpicos:
Asp 45 y Asp 205. El ingreso de Ca2+ activa la scramblase- 1 y esto genera la
externalizacin de PS. Esto es el inicio del proceso de apoptosis de los
eritrocitos.
Los eritrocitos que exponen fosfatidilserina se adhieren a la pared vascular por
unin al receptor CXCL16/SR endotelial. Luego son eliminados por el sistema
fagoctico y por lo tanto se eliminan rpidamente de la sangre circulante.

CXCL16 / SR-PSOX: CXC-Motiv-Chemokin-16/Scavenger receptor for

phosphatidylserine and oxidized low density lipoprotein (SR-PSOX)