UAGRM

TIEMPO DE REDUCCIN DE AZUL DE METILENO

1. OBJETIVOS

Determinar de forma directa el grado de desarrollo microbiano en leche

fresca o envasada.
Conocer los pasos y operaciones necesarias para llevar a cabo este
anlisis.

2. PRINCIPIO

El mtodo esta basado en la propiedad que tiene ciertas enzimas, producidas

por bacterias capaces de transferir hidrgeno de un sustrato a un aceptor
biolgico (Azul de Metileno que es un reactivo coloreado) reducindolo.

La prueba consiste en medir el tiempo que tarda la leche en decolorar el azul

de metileno pro reduccin, siendo el tiempo de reduccin inversamente
proporcional al nmero de microorganismos contenidos en la leche al realizar
a incubacin.

3. MATERIALES/EQUIPOS

Pipeta aforada de 10ml

Pipeta aforada de 1 ml.
Tubos de ensayo de 10 ml provisto de tapones previamente esterilizados
Bao Termosttico con regulador de temperatura
Gradillas porta tubos

4. MUESTRA/REACTIVOS

Leche
Reactivo Azul de Metileno

5. PROCEDIMIENTO OPERATIVOS

Con una pipeta transferimos 1 ml de solucin de azul de metileno en un

tubo de ensayo previamente esterilizado cuidando de no exponerlo
mucho tiempo a la luz.
Adicionamos 10 ml de leche previamente homogenizada.
Tapamos los tubos y volteamos cuidadosamente los mismos hasta
mezclar ambos lquidos.
Una vez preparada la mezcla dentro de los tubos, colocamos los mismos
en un bao termorregulador a temperatura de 37 C.
Registramos el tiempo de incubacin.

Carrera: Ing. Qumica

UAGRM
Observamos continuamente si las muestras decoloraron y en los casos
que lo hicieron tomamos registro de esos tiempos.

6. ESQUEMA

Con una pipeta transferimos 1 ml de

solucin de azul de metileno en un tubo de
ensayo previamente esterilizado

Adicionamos 10 ml de leche previamente

homogenizada. Tapamos los tubos y
volteamos cuidadosamente los mismos
hasta mezclar ambos lquidos.

Luego lo llevamos a la
estufa con un tiempo
determinado.

Observamos continuamente si las

muestras decoloraron y en los casos
que lo hicieron tomamos registro de
esos tiempos.

Carrera: Ing. Qumica

UAGRM

7. EXPRESIN DE RESULTADOS

Las interpretaciones de este ensayo pueden varia segn las fuentes

consultadas o las exigencias de calidad de cada regin o pas. Por ejemplo:

Si el tiempo de decoloracin mnimo es 1-2 horas, se tiene una leche de

buena calidad.
Si el tiempo de decoloracin mnimo es 2-3 horas, se tiene una leche
media.
Si el tiempo de decoloracin es mayor que 3 horas, se tiene una leche
baja calidad.

Para la realizacin de estas experiencias se tomaron 3 muestras de leche que

son la siguiente:

B = leche comprada de campo

C = leche pil
D = leche comprada del mercado

La leche D (comprada del mercado) fue la que mas decolora.

La leche B (comprada del campo) no cambio de color.
La leche C (PIL) va decolorando rpidamente.

8. OBSERVACION

Se pudo observar que el color azul del indicador azul del metileno se volvi
celeste porque a medida que calentamos este se decolora ya que los m.o.
consumen el oxigeno y el potencial de oxido reduccin.
Tambin se observo que este es un anlisis muy demoroso para realizarlo ya
que los anlisis de calidad de la leche deberan ser de corto tiempo.

9. CONCLUSIN

Podemos concluir que los resultados obtenidos en la experiencia no son los

adecuados debido al corto tiempo que se da para la prctica en el laboratorio
ya que lo adecuado para esta experiencia debera ser de 4 horas para poder
obtener los resultados adecuados.
Los resultados que obtuvimos tiene un tiempo promedio de 30 min y los
resultados son:

La leche comprada del mercado es de calidad media

La leche comprada del campo es de baja calidad
La leche PIL es de buena calidad

Carrera: Ing. Qumica