Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia do Rio de Janeiro

PROPRIEDADES DAS PROTENAS

Alunos: Matheus de Souza Lima Mendes e Felipe Goes

Professor: Ivanilton Nery
Data de realizao da prtica: 09/10/2017
 Introduo:

Objetivo:

Materiais e Mtodos: . 1 Tubo plstico para centrifugao;

. 1 Ovo;
. 1 Basto de vidro;
. Leite desnatado;
. 2 Bqueres de 250 mL;
. gua destilada;
. 3 Pipetas graduadas de 5 mL;
. Soluo de Cloreto de sdio 1M;
. 1 Pipeta graduada de 2 mL;
. Soluo de Sulfato de amnio
. 1 Peneira de plstico;
(NH4)2SO4 70% (p/v);
. 5 Tubos de ensaio de vidro;
Procedimentos:

1. Isolamento da clara do ovo e caracterizao das propriedades da

ovoalbumina:

Abriu-se o ovo e se separou a gema e a clara em recipientes distintos,

tomando cuidado para no romper a membrana que envolve a gema. Descartou-
se posteriormente a gema na pia. Foi realizada a filtrao da clara usando uma
peneira de plstico e recolhendo o filtrado num bquer.

Foi realizado ento o procedimento de Salting in, ao se diluir 2 mL de clara

de ovo em 4 mL de gua destilada, adicionando-se, posteriormente, soluo de
NaCl 1M numa proporo 1:1 (v/v). Essa adio foi realizada gota a gota at a
solubilizao do material. Tomou-se, ento, nota dos resultados.

Fez-se ento o procedimento de Salting out, no mesmo tubo do

experimento anterior. Este foi realizado ao se adicionar 5 mL de uma soluo
saturada de (NH4)2SO4, tambm gota a gota. Tomou-se nota dos resultados.

Em tubo separado do anterior, adicionou-se 1 mL de clara e 0,5 mL de

lcool etlico 95%, agitando o sistema. Tomou-se nota dos resultados.

Em novo tubo de ensaio, ps-se 1 mL de clara e submeteu-se o sistema

a aquecimento em banho de gua fervente por 10 minutos. Tomou-se nota dos
resultados.
 Em mais um tubo de ensaio, misturou-se 1 mL de clara e 1 mL de acetato
de chumbo, agitando o tubo. Tomou-se nota dos resultados.

2. Preparo de uma soluo aquosa a 10% de clara de ovo e

caracterizao das propriedades da ovoalbumina:

A soluo supracitada foi preparada ao adicionar-se 1 mL de clara

de ovo filtrada e 9 mL de gua destilada a um bquer.

Adicionou-se a um tubo de ensaio 1 mL da soluo preparada,

juntando a ela 1 mL de cido tricloroactico 10%, agitando o sistema aps a
adio. Tomou-se nota dos resultados.

A outro tubo de ensaio, foi feita a adio de 5 mL da soluo de

clara e 0,5 mL de soluo de ninhidrina, agitando o sistema. Num terceiro tubo,
misturou-se 5 mL de soluo 10% de glicina e 0,5 mL de soluo de ninhidrina,
tambm agitando esse. Colocou-se ambos os tubos em banho de gua fervente
por 5 minutos, tomando nota dos resultados ao final.

Resultados e discusses

1. Isolamento da clara do ovo e caracterizao das propriedades da

ovoalbumina:

Salting-in: Quando pequenas quantidades de sal inico neutro, as cargas

provenientes da dissociao do sal passam a interagir com as molculas
proteicas, diminuindo a interao entre elas. Aumentando, tambm, a
capacidade de solvatao, ou seja, aumenta-se a solubilidade da protena.

Salting-out: Quando uma quantidade de uma soluo saturada de um sal

com grande capacidade de solvatao adicionada, as molculas de gua
passam a interagir tanto com as molculas proteicas quando com as de on
proveniente da dissociao do sal. Porm, as molculas de gua tm tendncia
a solvatar, preferencialmente, molculas menores, nesse caso, os ons. Sendo
assim, a capacidade de solvatao dos ons maior que das protenas, fazendo
com que a gua deixe as molculas proteicas de lado, fazendo com que haja a
precipitao das mesmas.
 Solventes orgnicos: A precipitao de protenas por adio de
solventes orgnicos um processo que envolve principalmente a reduo da
constante dieltrica do meio, o qual promove a agregao de protenas por
interao de cargas, fazendo com que elas precipitem. A desvantagem do uso
deste mtodo a possvel desnaturao das protenas. Ainda assim, isto pode
ser minimizado atravs da reduo da temperatura para valores geralmente em
torno de 0C, j que, a baixa temperatura a flexibilidade das biomolculas
menor, diminuindo assim a capacidade de penetrao do solvente e de qualquer
desnaturao irreversvel das enzimas (PESSA e KILIKIAN, 2005).

Calor: As protenas possuem uma estrutura tridimensional (conformao)

bem definida, da qual dependem fundamentalmente suas propriedades fsicas,
qumicas e biolgicas. Essa estrutura relativamente sensvel ao do calor,
que causa desorganizao das cadeias peptdicas, com conseqente alterao
conformacional. Esse fenmeno recebe o nome de desnaturao, e altera as
estruturas quaternria, terciria e secundria da protena sem afetar sua
estrutura primria.

Sais de metais pesados: Os ctions de metais pesados como Hg2+,

Pb2+, Cu2+, Fe2+, Cd2+ e Zn2+ formam precipitados insolveis de protenas,
denominados de acordo com o elemento formador (exemplo: proteinato de
mercrio, proteinato de chumbo, etc.). Essa precipitao mais intensa quando
o pH est acima do ponto isoeltrico (pI). Isso porque, acima do pI, a carga
lquida sobre a protena negativa favorecendo a interao com os ctions
provenientes do sal.

2. Preparo de uma soluo aquosa a 10% de clara de ovo e

caracterizao das propriedades da ovoalbumina:

cidos complexos: cidos fortes como o cido tricloroactico (TCA),

desnaturam as protenas, precipitando-as. Valores extremos de pH afetam
bruscamente a estrutura das protenas, causando uma mudana radical na
conformao da protena para um estado conformacional biologicamente inativo.
Referncias bibliogrficas:
PESSA, A. Jr., KILIKIAN, B.V. Purificao de Produtos Biotecnolgicos, 1 Ed.
Manole, So Paulo, 2005.