Ingeniera Gentica

RECONOCIMIENTO DE EQUIPOS UTILIZADOS EN

EL LABORATORIO Y ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA
Presentado por:
Manuel lvarez Hernndez, Heifren Villadiego Morales, Karen Fuentes Lpez
Correspondencia: manuelalvares1208@hotmail.com; Bandbamor@hotmail.com ;
karen_fuenlop@hotmail.com; mariajhernandez96@gmail.com

Resumen.
El mbito de la ingeniera gentica en los ltimos 20 aos ha llevado al desarrollo de equipos
que cumplen con las necesidades de la investigacin en este campo los cuales nos permitido
facilitar los estudio y un amplio entendimiento en esta rea. La ingeniera gentica se encarga
del manejo de las molculas biolgicas, como son los cidos nucleicos y las protenas. Estas
prcticas consistirn en comprobar la forma en que estn unidas dos molculas de DNA as como
los mtodos empleados para aislar y purificar ambos tipos de molculas de DNA. Utilizaremos
por tanto una serie de conceptos y herramientas. El anlisis de ADN permite obtener informacin
de la estructura de un gen, mientras que el anlisis del ARN aporta la informacin funcional sobre
la expresin de una protena. En la prctica utilizaremos conceptos apropiados para la
preparacin de buffer de solucin y anlisis de datos para concentraciones.

Palabras clave.
Electroforesis, gel de agarosa, foto documentacin, ADN.

Introduccin

Al momento de realizar una prctica se debe conocer las normas generales que se estandarizan
en los laboratorios de biologa molecular e ingeniera gentica, de igual manera se hace
importante conocer los equipos con los que se cuenta dicho laboratorio, as como sus
funcionamientos, de igual forma se hace necesario conocer los reactivos a tratar, desde su
composicin hasta los daos txicos que pueden originar, esto se hace con el fin de utilizar las
herramientas disponibles en laboratorio de la manera ms adecuada y evitar as posibles
accidentes laborales.

Electroforesis es una tcnica de separacin que consiste en la migracin de partculas cargadas

sometidas a la influencia de un campo elctrico, de tal forma que las molculas con carga positiva
migran al ctodo (electrodo con carga negativa) y las molculas con carga negativa migran al
nodo (electrodo con carga positiva). La electroforesis en gel de agarosa es una tcnica que se
emplea para separar macromolculas en funcin del tamao, la carga elctrica y otras
propiedades fsicas, constituye un mtodo normalizado que se utiliza para separar, identificar y
purificar fragmentos de ADN y ARN (Somma & Querci, 2007).

En el caso de los geles de agarosa, se le aade un colorante, (hay que resaltar que esta tincin
no es mutagena) la sustancia se intercala entre las bases del DNA y es y esta puede ser
visualizada en luz normal o blanca. Las muestras de DNA aplicado y los marcadores de peso
molecular se pueden identificar por el nmero de pares de bases que posea. El DNA problema
que se va a analizar mediante electroforesis en gel de agarosa en esta prctica es suministrado
por el docente.

Los objetivos propuestos para esta prctica son los siguientes:

Familiarizarse con mtodos de separacin de cidos nucleicos mediante electroforesis en geles

de agarosa, teniendo en cuenta muestras suministradas.
Utilizacin de equipos de laboratorio y manejo de estos mismos, manteniendo normas de
bioseguridad.

Determinacin de los tamaos moleculares mediante electroforesis en gel de agarosa,

haciendo una recta patrn con fragmentos de DNA de peso molecular conocido.

Materiales

Vial pMAP/Pstil

Vial pMAP/Pstil/Hpal

Vial pMAP/Pstil/Sspl

PMAP/Pstl/Hpal7Sspl

Vial lambda DNA/Pstl size markers

Frasco de tincin de Carolina BLU

Bandejas de tincin

Agarosa

Tbe 1x

Buffer de tincin final carolina BLU

Guantes

Micro pipeta

Molde de electroforesis

Plancha de calentamiento con agitacin magntica

Resultados

Clculos

Para el buffer

650 ml => AX=20

C1V1 = C2V2

V1= C2V2/C1 = 1x * 650ml / 20x = 32,5 ml buffer

Colorante
500 ml => 96 ml

580ml =>ml?

580 ml x 960ml / 500ml = 1.113,6ml

Agarosa

70 => 100%

X=> 0.8%

X=70 x 0.8 % / 100 = 0.56

% p/v = gsto / ml sln x 100

gsto= 0.8 x 70 ml / 100= 0.56

Clculos para la tincin de agarosa

50 ml => 80 ml

70ml => x = 112 ml

Volumen 1/3 del pozo

Largo= 0.12 cm

Ancho= 0.7 cm

Grosor= 0,13 cm

L*A*G = 0.01092/3 = 0.036 cm3 = ml

0.036ml* 1000 = 36 L

Gelificacion

Hora de inicio =11:08

Hora final=11:32

Dilucin

Tiempo inicial= 10:19

Tiempo final= 10:56

MAPA DE SIEMBRA EN EL GEL.

#del pozo

6 7 8 9 10
Transparente Amarillo Rojo Blanco azul
Vial lambda PMAP/Pstl1Hpal7Ssp1 Vial Vial Vial pMAP/Pst1
DNA/Pst1 size pMAP/Pstl/Ssp1 pMAP/Pst1/Hpa1
markers
 Muestra Pb Distancia
(cm)
M10 2600 4
M9 2700 3.8
M8 2900 3.7
M7 2860 3.3
MC Valores de referencia

Anlisis

Al realizar la electroforesis en geles de agarosa, este es un polisacrido (originalmente obtenido

de algas, como el agar-agar, pero de composicin ms homognea), cuyas disoluciones
(tpicamente de 0,5 a 2%) poseen la propiedad de permanecer lquidas por encima de aprox.
50C y formar un gel, semislido, al enfriarse. Este gel est constituido por una matriz o trama
tridimensional de fibras polimricas, embebida en gran cantidad de medio lquido, que retarda el
paso de las molculas de cido nucleico a su travs, en mayor medida cuanto ms grandes sean
stas. Se puede evidenciar que este proceso separa fragmentos de DNA en base a sus diferentes
masas moleculares. Los fragmentos de DNA se cargan sobre el gel horizontal de agarosa, el cul
fue sumergido dentro de una cmara contenedora de una solucin amortiguadora. Para poder
separar fsicamente los fragmentos de DNA fue necesario aplicar una corriente elctrica entre dos
electrodos ubicados en ambos extremos de la cmara. Estos fragmentos de DNA poseen una carga
negativa por Los grupos fosfato de su esqueleto de azcares-fosfato, por ende

Al someterlos a un contacto en un campo elctrico estos migran hacia el polo positivo. La matriz de
agarosa acta como un tamiz molecular separando las molculas ms pequeas de DNA (que
migran ms rpidamente) de las ms grandes (que migran ms lentamente). Por lo cual se puede
inferir, que la velocidad a la cual las molculas de DNA migran a travs de una matriz de agarosa
es inversamente proporcional a su masa molecular. Despus de un rato que ha corrido el gel, los
fragmentos ms cortos de ADN estarn ms cerca del extremo positivo del gel y los ms largos
se mantendrn cerca de los pozos. Los fragmentos de ADN muy pequeos podran correr hasta
salirse del gel si lo dejramos corriendo por demasiado tiempo.
Una "lnea" de ADN bien definida en un gel se llama banda. Cada banda contiene un gran nmero
de fragmentos de ADN del mismo tamao que han viajado juntos a la misma posicin. Un
fragmento nico de ADN (o incluso un pequeo grupo de fragmentos de ADN) no sera visible
por s mismo en un gel.

CONCLUSIN

La electroforesis es una tcnica efectiva al momento de hacer la separacin de

molculas, segn la movilidad de que estas estn en un campo elctrico.
La electroforesis se utiliz como fines analticos o preparativos de acuerdo al
objetivo: la identificacin de sustancias y su separacin cuando forma parte de
una mezcla para el estudio especfico de dicho componente.
Las separaciones de molculas en la electroforesis se dan a partir de su peso
molecular (tamao), siendo las de menor peso las que ms corren en el gel.
En este laboratorio se puede evidenciar los fallos que pueden existir al momento
de realizar un corrido de una muestra, salvo por la banda M7 que no es visible
en nuestro gel real la cual se realiza una estimacin. Esta posible podra haber
sido rectificada mediante el uso de una mayor cantidad de ADN o permitir el
mejor manejo al momento de sembrar en el pozo. En general este laboratorio
era una herramienta til en la determinacin de cmo las enzimas de restriccin
interactan dentro de un plsmido.