Produccin de protena

unicelular a partir de
pulpa de caf.

Lugo Ocaa Gildardo Adrin

Ezrr Ruiz Jennifer
Jimnez Crdova Jess Ivn
Torres Paredes Glenda
Produccin de protena unicelular a partir
de pulpa de caf.

Introduccin

Durante las ltimas dos dcadas, se han desarrollado varios procesos

para la produccin de microorganismos tiles como fuentes de protena
para alimentacin, debido al valor nutritivo de la materia celular, a la
rapidez del proceso y a la habilidad de algunos microorganismos de
poder metabolizar azcares en los desechos de otras industrias (Garca
et al., 2005). En los aos setenta, se consider que la capacidad de los
microorganismos para crecer en diversos sustratos, particularmente en
residuos agroindustriales, podra ser explotado para producir biomasa
microbiana conocida como protena unicelular (PUC), a partir de
bacterias, hongos y levaduras (Badui, 2006).
La pulpa de caf es el residuo slido principal del beneficio hmedo del
grano de caf, y constituye aproximadamente el 41% del peso hmedo
del grano de caf. Para 1996, la produccin mundial de residuos de
caf se estim en cerca de 22 millones de toneladas mtricas (TM) de
pulpa de caf, 2,4 millones TM de muclago y 8,6 de pergamino. Estas
cantidades fluctan cada ao de acuerdo a las variaciones en las
tcnicas usadas en el procesamiento y produccin del caf. El
problema de disposicin de los residuos del caf, ISSN 1900-6241 N
82, Noviembre 2008 :: Manejo de Residuos 14
Noviembre 2008: Manejo de Residuos Mara Viviana Giraldo y Paula
Lorena Lpez sin embargo, es enorme y representa una contaminacin
potencial en los pases productores. Los esfuerzos para reciclar los
residuos de caf comprenden actividades tales como: compostaje,
alimentos para animales, produccin de fertilizantes orgnicos, protena
unicelular y biogas. El mejoramiento de los valores nutricionales de la
pulpa de caf por tratamientos biolgicos incluye procesos aerbicos y
anaerbicos, empleando microorganismos tales como levaduras,
bacterias y mohos. Se conocen alternativas bien estudiadas en el
tratamiento combinado con hongos filamentosos y levaduras. El
proceso involucra un consorcio de microorganismos que son
tpicamente usados para la bioconversin de residuos lignocelulsicos
(Thrichoderma viride y Aspergillus niger), y levaduras como
Saccharomyces cerevisiae y Candida utilis, en diferentes
combinaciones. Inicialmente, los hongos filamentosos degradan la
celulosa y hemicelulosa presente en la fibra y, subsecuentemente, las
levaduras fermentan los azcares libres producidos. Dichos hongos
pueden tambin mejorar los valores alimentarios de otros residuos
agroindustriales. Dentro de los cultivos no convencionales, el caf es
uno de los ms prometedores para la obtencin de protena unicelular
o biomasa en Colombia, debido a su alto contenido de hidratos de
carbono fcilmente hidrolizables. Puede decirse que la pulpa de caf
constituye un sustrato adecuado para obtener biomasa o protena
unicelular, que podra ser destinada como suplemento en formulaciones
para alimentacin animal (Gualtieri et al., 2007).

MATERIALES Y MTODOS

Preparacin del sustrato La cscara de caf se tritur empleando

una licuadora, para tener un tamao de partcula de aproximadamente
2 3 mm. La cscara se hidroliz con H2SO4 al 2 % durante 4 horas, a
una temperatura aproximada de 90-100 C. El hidrolizado cido se
centrifug a 3000 rpm a 0 C por 15 minutos y despus se decant.
Debido a la acidez del hidrolizado, el sobrenadante se ajust a un pH
de 4.5 con NaOH al 33 %, y se esteriliz a 15 libras de presin por 15
minutos, con la finalidad de inhibir el crecimiento de microorganismos
no deseados.
Microorganismo En este trabajo se utiliz una cepa comercial de
levadura de Candida utilis ATCC 9256, se descongel a temperatura
ambiente y se revitaliz en caldo extracto de malta a 25 C por 24
horas, posteriormente se sembr en cuas de Agar Papa Dextrosa
(APD). Ensayo de preadaptacin y crecimiento El ensayo de
preadaptacin y crecimiento tuvo como objetivo la adaptacin de la
levadura Candida utilis en el extracto cido de la cascarilla de caf, para
lo cual se prepar el pie de cuba.
Preparacin del pie de cuba Se tom una asada de la cepa de
Candida utilis y se inocul en tres tubos de Agar Papa Dextrosa a 25 C
por 24 horas. Posteriormente se tom una azada de Candida utilis y se
coloc en un matraz de 100 ml con 40 ml de sustrato cido de cascarilla
de caf y se incub por 20 horas, 30C a 200 rpm; despus se realiz
una resiembra, se tomaron 10 ml y se pasaron a un matraz de 1litro con
180 ml de sustrato, se incub por 20 horas, 30 C a 200 rpm; finalmente
se tomaron del cultivo anterior 10 ml y se inocularon en un matraz de
1litro con 200 ml de sustrato y se incub. Preparacin del medio de
cultivo A 200 ml de sustrato, se le agregaron 0.6 g de Urea, 0.4 g de
Fosfato cido de potasio (KH2PO4) y 0.26 g de extracto de malta-
Posteriormente, la mezcla se esteriliz en autoclave a 15 lb de presin
por 15 minutos.
Fermentacin aerbica Despus de haber preparado el medio de
cultivo y de proporcionar las condiciones para el crecimiento (nutrientes,
pH, y temperatura) se continu con la fermentacin aerbica. El medio
de cultivo preparado se coloc en una estufa con agitacin mecnica
de 200 rpm durante 20 horas a 30 C. Separacin de la biomasa La
biomasa de Candida utilis se recuper mediante centrifugacin a
3000 rpm por 10 minutos en una centrfuga marca Thermo IEC, Centra
CL3R a temperatura ambiente; el sobrenadante se separ del
precipitado con una pipeta beral. La biomasa se coloc en un vaso de
precipitado y se incub a 45 C durante 24 horas para eliminar la
humedad. Anlisis bromatolgico Se llev a cabo el anlisis
bromatolgico a la biomasa, el cual incluy la determinacin de
protenas, azcares totales, lpidos y humedad.
Determinacin de protena La determinacin de protenas, se realiz
a la biomasa obtenida al final de la fermentacin aerbica, utilizando el
mtodo Kjeldahl usando equipo de la marca Buchi (Digestin Unit K424,
Scrubber B-414 y Destillation Unit B-324).
Determinacin de azcares totales La determinacin de azcares, se
hizo al sustrato antes y despus de la fermentacin, as como a la
biomasa producida. Estas determinaciones se hicieron por triplicado
mediante la tcnica de Eynon y Lane.
Determinacin de lpidos La determinacin de lpidos se le realiz a
la biomasa de C. utilis, por triplicado mediante extraccin con ter de
petrleo y calculados como porcentaje del peso despus de evaporar
el solvente.
Determinacin de humedad La determinacin de humedad a la
biomasa se hizo por el mtodo gravimtrico, utilizando para el secado
de la muestra un horno Lindberg Blue y para la determinacin de
los pesos una balanza analtica OHAUS Mod. Adventurer .
Propiedades funcionales de la biomasa A la biomasa de C. utilis
obtenida en este trabajo se le determin la capacidad de absorcin de
agua y la capacidad de absorcin de grasa.
Capacidad de absorcin de agua Una suspensin acuosa de la
biomasa seca (10% p/v), se agit durante 30 s en un agitador Vortex y
luego se agit durante 30 minutos a 25C. La preparacin se centrifug
(3000 rpm/20 min) descartndose el sobrenadante. La diferencia entre
el peso hmedo del sedimento y el peso seco inicial proporcion
la cantidad de agua absorbida, expresndose los resultados como g
agua/g protena.
Capacidad de absorcin de grasa Se mezclaron 4 mL de aceite de
maz con 0.5 g de la biomasa seca en un tubo de centrfuga. La mezcla
se dej reposar durante 30 min a 25C y seguidamente se centrifug
(3000 rpm/25 min) descartndose el sobrenadante. La diferencia entre
el peso del sedimento obtenido y el peso seco inicial proporcion
la cantidad de aceite retenido, expresndose los resultados como g
aceite/g protena.
Referencias:
OBTENCIN DE BIOMASA A PARTIR DE CSCARA DE CAF
https://www.researchgate.net/publication/227433215_OBTENCION_D
E_BIOMASA_A_PARTIR_DE_CASCARA_DE_CAFE [accessed Oct 25
2017].