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Comisso Nacional Permanente do Benzeno (CNPBz)

INDICADORES BIOLGICOS DE
EXPOSIO AO BENZENO

Profa Dra Solange Cristina Garcia


Laboratrio de Toxicologia (LATOX)
Faculdade de Farmcia
Universidade Federal do Rio Grande do Sul
EXPOSIO A ALTAS CONCENTRAES DE BENZENO

LEUCEMIAS
- MIELIDE AGUDA
- NO LINFOCTICA AGUDA

EVIDNCIAS DE EFEITOS HEMATOTXICOS E


CNCER LINFOHEMATOPOITICO

< 1 ppm
Carcinogenesis (2013) 34 (1): 2-9. doi: 10.1093/carcin/bgs382
BAIXAS DOSES TAMBM SO PREOCUPANTES

ESTABELECIMENTO DE CRITRIOS

QUANTITATIVOS PARA INDICADORES BIOLGICOS
TORNAM-SE IMPRESCINDVEIS

DIMINUIR EXPOSIO A DOSES < 1 ppm PRECISAM


SER TRAADAS COMO METAS
INDICADORES DE EXPOSIO

TEMPO DE DIFERENTES
BIOMARCADORES DE EXPOSIO
5
(Henderson et al., 1989)
INDICADORES BIOLGICOS

BENZENO EXPIRADO
SANGUE
URINA

ADUCTOS DE PROTENAS
Albumin adducts of benzene oxide (BO-Alb)
benzene oxide Hb adducts
1,4-benzoquinone (1,4-BQ-Alb)
Lin Y.S., et al.
(2007) Albumin adducts of electrophilic benzene metabolites in benzene-exposed and control workers. Environ. Health Perspect., 115, 2834.

Rappaport S.M.,
et al. (2002) Albumin adducts of benzene oxide and 1,4-benzoquinone as measures of human benzene metabolism. Cancer Res., 62, 13301337.
METABLITOS URINRIOS

CIDO S-FENILMERCAPRICO

CIDO TRANS, TRANS-MUCNICO


INTRODUO

BIOTRANSFORMAO DO BENZENO

(Adaptado Qu et al., 2005) 8


POLIMORFISMOS GST
12
Manini et al., Toxicology Letters 168, 2007.
INDICADORES BIOLGICOS DE
EXPOSIO AO BENZENO

QUAIS?

AMOSTRAS BIOLGICAS

MOMENTO DA COLETA

ESTABILIDADE

IMPORTNCIA DO ESTABELECIMENTO DE
CRITRIOS QUANTITATIVOS
BIOMARCADORES EM
FRENTISTAS DO RIO GRANDE DO SUL
PESQUISA AVALIAO DE RISCO
Medida das exposies e IDENTIFICAO DO PERIGO
observao dos efeitos

Estudo dos mecanismos AVALIAO DOSE-RESPOSTA

Nova informao genmica AVALIAO DA EXPOSIO

UM NICO XENOBITICO

MISTURAS
AVANOS NA PESQUISA/
PUBLICAES BIOMONITORAMENTO:

BIOLOGICAL MONITORING,
OCCUPATIONAL HEALTH

pubmed.gov
16
Biological monitoring, occupational health
2011-2015

2011-2012

2006-2010
Year

2001-2005

1996-2000

1990-1995

1980-1989

0 500 1000 1500


Publications 17
17
2001-2010

156%

1991-2000

438%

1980-1990

18
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
GASOLINA

TOLUENO
XILENO

COMPOSTOS BTX

GRUPO DE RISCO

(Chen et al., 2008; Dougherty et al., 2008; Fundacentro, 2005; Keenan et al., 2010; Keretetse et al., 2008)
O benzeno reconhecidamente um agente CARCINOGNICO
classificado no grupo A1 pela Agncia Internacional para
Pesquisa do Cncer (IARC).

NO EXISTE LIMITE SEGURO DE EXPOSIO

A Organizao Mundial de Sade (OMS) estima que o risco de desenvolvimento


de leucemia de cerca de seis casos por milho entre as pessoas que
experimentam exposio de 1g/m3 de benzeno ao longo da vida.

(ACGIH, 2011; Brasil, 1995; Sorensen et al., 2003)


20
GENOTXICO

Danos de DNA
(alteraes cromossmicas, hipo e hiperdiploidia,
troca de cromtides irms, quebras de fitas).
IMUNOTXICO
Imunossupresso. HEMATOTXICO

Alterao da resposta Supresso das clulas progenitoras

imune (humoral e celular). hematopoiticas.


Citopenia
(anemia, leucopenia e trombocitopenia).
BENZENO

CARCINOGNICO (Leucemia Mielide Aguda)

Anemia
HEMATOTXICO (Aplasia Medular) Leucopenia
Trombocitopenia

GENOTXICO (Dano de DNA)

IMUNOTXICO (Depresso do Sistema Imune)


MECANISMO DE TOXICIDADE

BIOTRANSFORMAO

Antioxidantes Enzimticos
EROS
Antioxidantes No-Enzimticos

Peroxidao Oxidao Dano


Lipdica Protica DNA Antioxidantes

Oxidantes

ESTRESSE OXIDATIVO

23
(Barreto et al., 2009; Badham et al., 2010; Snyder, 2007; Uzma et al., 2010)
MECANISMO DE TOXICIDADE

Fatores Biolgicos (sexo, idade).


Fatores Genticos (polimorfismo gentico).
Vias de Exposio.
Co-exposio.
Hbitos de vida (tabagismo, consumo de lcool).
Hbitos alimentares.
OBJETIVOS

Avaliar diferentes biomarcadores em frentistas do RS.

BIOMONITORAMENTO

BIOMARCADORES
Santa Cruz do Sul
(n=5)

37 Frentistas

Santa Maria
(n=3)

94 Frentistas
57 Frentistas
SANTA MARIA
57 Frentistas
Tempo Exposio: 7,9 1,3 anos
Idade: 32,2 1,2 anos

n=56

n=54

n=57
SANTA CRUZ 37 Frentistas

Tempo Exposio: 6,7 1,3 anos


Idade: 31,3 1,5 anos

n=34

n=37

n=36
BIOMONITORAMENTO

Biomarcadores Hematolgicos
Hemograma
Enzima -Aminolevulinato Desidratase (ALA-D)

Biomarcadores de Genotoxicidade
Ensaio Cometa
Ensaio de Microncleo
BIOMONITORAMENTO

Biomarcadores Hepticos
Albumina
Transaminases

Biomarcadores Renais
Creatinina, reia, cido rico
Microalbuminria
N-acetil--D-glicosaminidase (NAG)
Urinria
BIOMARCADOR DE EXPOSIO AO BENZENO

cido trans, trans-mucnico urinrio (AttM-U)

Valores expressos em mediana (intervalo interquartil).

1600 g/g creatinina

ACGIH: Limite biolgico 500 g/g creatinina (BEI).


Fonte: Portaria n 34, 2001. MTE
ATTMUC-U (g/g creatinina

ATTMUC-U (g/g creatinina


SANTA MARIA

SANTA MARIA

n=3

n=16
SANTA CRUZ DO SUL
n=3

N=12
BENZENO: AMOSTRADOR PASSIVO
BIOMONITORAMENTO
Biomarcadores Hematolgicos

Hemograma
Frentistas Frentistas Sta Cruz Valores de
Sta Maria (n=54) do Sul (n=37) Referncia

4,9 0,9 4,7 0,1 4,5 6,1


Eritrcitos (x106/mm3)
4,0 5,4
13,0 18,0
Hemoglobina (g/dL) 14,3 0,6 14,2 0,2
12,0 16,0
39,0 53,0
Hematcrito (%) 43,7 1,8 40,8 0,6
36,0 48,0

Leuccitos (x103/mm3) 7,2 0,8 7,6 0,3 3,6 11,0

Plaquetas (x103/mm3) 245,3 9,2 227,8 8,2 140,0 400,0


Valores expressos em mdia EP.
BIOMARCADORES HEMATOLGICOS

Hemograma: ERITRCITOS

n=4
n=4

n=4
HEMOGRAMA: HEMOGLOBINA

n=7 n=1

n=3 n=4
HEMOGRAMA: HEMATCRITO

n=3 n=4

n=2 n=4
HEMOGRAMA: LEUCCITOS

n=2
HEMOGRAMA: PLAQUETAS
ENZIMA -AMINOLEVULINATO DESIDRATASE
(ALA-D)

*p<0.05 *p<0.05
BIOMARCADORES DE GENOTOXICIDADE

Teste Cometa

*p<0.05 *p<0.05
BIOMARCADORES DE GENOTOXICIDADE

Microncleos

*p<0.05 *p<0.05
BIOMARCADORES DO SISTEMA IMUNOLGICO

Expresso de CD 80+ em moncitos

*p<0.05 *p<0.05
Expresso de CD 86+ em moncitos

*p<0.05 *p<0.05
CORRELAES

AttM-U Tempo Exposio

r= -0.40 (p<0.001)
ALA-D r= -0.67 (p<0.001)

Cometa r= 0.26 (p<0.05) r= 0.40 (p<0.001)

Microncleos r= 0.49 (p<0.001) r= 0.52 (p<0.001)

r= -0.36 (p<0.01) r= -0.32 (p<0.01)


CD80+ em

moncitos

r= -0.41 (p<0.001) r= -0.56 (p<0.001)


CD86+ em
BIOMARCADORES HEPTICOS
Frentistas Frentistas Sta Valores de
Sta Maria (n=54) Cruz do Sul Referncia
(n=37)

Albumina (g/dL) 4,6 0,1 4,9 0,1 3,5 5,5

AST (U/L) 25,1 1,3 24,2 1,1 10 37

ALT (U/L) 25,4 2,9 21,5 1,8 10 - 37


7 - 45
GGT (U/L) 30,1 3,0 31,6 3,8
5 - 25

Valores expressos em mdia EP.


BIOMARCADORES RENAIS

Marcadores Clssicos de Funo Renal


Frentistas Frentistas Sta Valores de
Sta Maria (n=54) Cruz do Sul Referncia
(n=37)

Creatinina (mg/dL) 0,9 0,1 0,9 0,1 0,4 1,3

Uria (mg/dL) 30,2 1,1 27,6 1,1 15 40


2,5 7,0
cido rico (mg/dL) 4,5 0,1 4,5 0,2
1,5 6,0
Valores expressos em mdia EP.
BIOMARCADORES PRECOCES DE DANO RENAL

MICROALBUMINRIA

*p<0.05 *p<0.05
Biomarcadores Precoces de Dano Renal

N-Acetil-Glucosaminidase (NAG-U)

*p<0.05 *p<0.05
ANTIOXIDANTES EXGENOS

Frentistas Frentistas Sta Valores de

Sta Maria (n=54) Cruz do Sul Referncia

(n=37)

Vitamina C (mg/L) 4,7 0,4 6,1 0,6 4 15

Vitamina E (mol/L) 20,8 0,9 21,8 1,2 12 42

Retinol (mol/L) 2,1 0,1 2,5 0,1 1,05 2,80

Licopeno (mol/L) 0,9 0,1 0,8 0,1 0,4 0,6

-Caroteno
Valores expressos (mol/L)
em mdia EP. 0,31 0,18 0,35 0,15 0,19 1,58
CIDO TRANS, TRANS-MUCNICO URINRIO (AttM-U):

Santa Maria: 5,3% AttM-U > 1600 g/g creatinina


Santa Cruz: 8,8% AttM-U > 1600 g/g creatinina

HEMOGRAMA:

Santa Maria: Santa Cruz:

7,4% Eritrcitos 21,6% Eritrcitos


18,5% Hb 13,5% Hb
9,3% Ht 21,6% Ht
3,7% Leuccitos
Inibio ALA-D: SM 24,2% e
SC 20,2
Comprometimento sntese hemoglobina: ANEMIA??

Sistema Imunolgico Comprometido: CD86+ em moncitos

Sistema Renal: Alteraes glomerulares e tubulares precoces

Dano de DNA: Cometa e MN


MATERIAIS E MTODOS

Grupos de Estudo

88 Indivduos Grupo No Exposto (n=28)


Indviduos No-Fumantes
No Expostos Ocupacionalmente ao Benzeno

Grupo Exposto (n=60)


Frentistas de Postos de Gasolina/RS
No-Fumantes (n=44)
Fumantes (n=16)
Tempo Exposio Mnimo 6 meses

Todos os participantes do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido.


Questionrio sobre sade em geral, estilo de vida, tabagismo e histrico ocupacional.
As amostras de urina e de sangue foram coletadas no final da jornada de trabalho aps 3 dias consecutivos
55
de exposio.
MATERIAIS E MTODOS

Monitoramento Ambiental

Exposio Ambiental Individual aos Compostos BTX

Amostradores Passivos (SKC 575-002) durante toda jornada de trabalho.

Dessoro com Diclorometano.

Cromatografia Gasosa/Deteco por Ionizao de Chama.

56
RESULTADOS E DISCUSSO

~9,5 anos ~11, 3 anos

57
RESULTADOS E DISCUSSO

Monitoramento Ambiental

r= 0.83; p<0.001
ACGIH
1600 g m-3

75400 g m-3

434000 g m-3

BAIXOS NVEIS DE EXPOSIO AOS COMPOSTOS BTX

58
RESULTADOS E DISCUSSO

Biomonitoramento

Biomarcadores de Exposio
Baixos Nveis de Exposio

500 g g-1 creat.

1,6 g g-1 creat.

(r= 0.35; p<0.01; n= 88)

59
(ACGIH, 2011)
RESULTADOS E DISCUSSO

Biomonitoramento
Biomarcadores Hematolgicos

VALORES DE
REFERNCIA

60
RESULTADOS E DISCUSSO

Biomonitoramento
Biomarcadores Hematolgicos
Enzima -Aminolevulinato Desidratase (ALA-D)

#
# ** # *
* *
x

x
Anemia 61
RESULTADOS E DISCUSSO

Biomonitoramento
Biomarcadores Hematolgicos
Enzima -Aminolevulinato Desidratase (ALA-D)

16% 30,3% 22%


Inibio ALA-D

** **
* * EROS

Outros Mecanismos
de Inibio

62
RESULTADOS E DISCUSSO

Biomonitoramento
Biomarcadores Hematolgicos: ALA-D

Envolvimento BENZENO e TOLUENO na inibio da ALA-D

63
RESULTADOS E DISCUSSO

Biomonitoramento
Biomarcadores Hematolgicos: ALA-D

Exposio Crnica
Benzeno

Inibio Sntese ALA-D

+ Estudos so necessrios para verificar o possvel envolvimento da ALA-D no desenvolvimento


da anemia induzida pelo benzeno. 64
RESULTADOS E DISCUSSO

Biomonitoramento
Biomarcadores do Sistema Imunolgico
Molculas de Adeso CD80 e CD86
Resposta Imune
Ativao Clulas T

Mecanismo Patognico
da Leucemia

Pacientes leucmicos apresentam menor expresso de CD80 e CD86.

EXPOSIO OCUPACIONAL BENZENO X LEUCEMIA


CD80 e CD86
BIOMONITORAMENTO
65
(Chanan-Khan et al., 2011; Dai et al., 2009; Mohamed et al., 2012; Zhao et al., 2012)
A

*
*

* * ** **

66
RESULTADOS E DISCUSSO

Biomonitoramento

Biomarcadores do Sistema Imunolgico: CD80 e CD86

Envolvimento BENZENO e TOLUENO na


supresso das molculas de adeso

67
RESULTADOS E DISCUSSO

Biomonitoramento

Biomarcadores do Sistema Imunolgico: CD80 e CD86

BENZENO 68
RESULTADOS E DISCUSSO

Biomonitoramento

Biomarcadores do Sistema Imunolgico: CD80 e CD86

(r= -0.32; p<0.01; n= 88) (r= -0.56; p<0.001; n= 88)

+ Estudos so necessrios para verificar o envolvimento do benzeno na regulao


da expresso de CD80 e CD86, e para verificar se estas molculas podem atuar
como preditoras de alteraes relacionadas ao desenvolvimento de leucemia.
69
RESULTADOS E DISCUSSO

Biomonitoramento
Biomarcadores Hepticos

Transaminases Hepticas (AST e ALT)

VALORES DE
REFERNCIA

70
RESULTADOS E DISCUSSO

Biomonitoramento

Biomarcadores Hepticos: AST e ALT

Envolvimento BENZENO e TOLUENO

71
RESULTADOS E DISCUSSO

Biomonitoramento

Biomarcadores Hepticos: AST e ALT

BENZENO
72
RESULTADOS E DISCUSSO

Biomonitoramento

Biomarcadores de Efeito: AST e ALT

(r= 0.66; p<0.01; n= 88) (r= 0.56; p<0.001; n= 88)

AST e ALT Ferramentas importantes no biomonitoramento contnuo de


trabalhadores expostos ao benzeno.

73
RESULTADOS E DISCUSSO

Biomonitoramento
Biomarcadores Renais

Biomarcadores Clssicos de Funo Renal Valores de Referncia / p > 0,05

Microalbuminria e NAG Biomarcadores de Dano Renal Precoce

A B
* **
* **

74
RESULTADOS E DISCUSSO

Biomonitoramento
Biomarcadores Renais
(r= 0.30; p<0.01; n= 88)

Alteraes em Clulas
Glomerulares e Tubulares Renais

Biomarcadores importantes no biomonitoramento do benzeno.

75
(Franchini et al., 1983; Gonzalez-Yebra et al., 2006; Jarosinska et al., 2008; Ohno et al., 2007; Prozialeck et al., 2009)
76
MATERIAIS E MTODOS

Grupos de Estudo

105 Indivduos

70 Trabalhadores Expostos a 35 Indivduos no Expostos


Baixos Nveis de Benzeno Ocupacionalmente

Critrios de Excluso
Fumantes
Doenas Diagnosticadas
Tempo de Exposio Menor do que 6 Meses
Uso de Medicamentos/vitaminas antioxidantes
Anlise no Realizada

Frentistas (n=43) Controles (n=28)

77
RESULTADOS E DISCUSSO

Biomarcadores de Genotoxicidade

Exposio Ocupacional ao Benzeno

(r= 0.25; p<0.001; n= 71)


Falta de reparo das quebras nas
fitas de DNA contribui para a
formao de MN

78
(Angelini et al., 2011; Pandey et al., 2008)
RESULTADOS E DISCUSSO

Biomarcadores de Dano Oxidativo


Dano Protico

A B
* *

79
RESULTADOS E DISCUSSO

Biomarcadores de Dano Oxidativo


Dano Protico

Benzeno Oxidao e Nitrosilao de Protenas

Formao de 3-NT
Perda Funo
Formao Peroxinitrito
Protica
Carbonilao Protenas

80
RESULTADOS E DISCUSSO

(r= 0.59; p<0.001; n= 71) (r= 0.25; p<0.05; n= 71)

(r= 0.38; p<0.001; n= 71)

Envolvimento do Estresse Oxidativo na Genotoxicidade


causada pelo Benzeno
81
RESULTADOS E DISCUSSO

Antioxidantes Endgenos

Inibio da SOD Inibio da CAT Inibio da GST

nions Superxido Perxido de Perxido de


Formao Peroxinitrito Hidrognio Hidrognio

(Otitoloju et al., 2011; Ulakoglu et al., 1998; Verma & Rana, 2011) 82
RESULTADOS E DISCUSSO

Antioxidantes Endgenos

Envolvimento do benzeno na diminuio da defesa antioxidante do


organismo.

GSH e GST so depletadas com o objetivo de proteger o organismo das


EROs produzidas durante a biotransformao do benzeno.

GSH e GST biotransformao do benzeno cido fenilmercaptrico.

83
RESULTADOS E DISCUSSO

(r= -0.37; p<0.01; n= 71) (r= -0.25; p<0.05; n= 71)

A depleo dos mecanismos antioxidantes ocorre na tentativa de conter o desenvolvimento


de danos de DNA etiologicamente relacionada com o estresse oxidativo.

GSH e GST desempenham papel importante na proteo dos danos genticos causados
pelo benzeno.

Indivduos com baixos nveis de GSH e/ou atividade de GST podem estar menos
protegidos do que indivduos com maior nveis destes antioxidantes.
84
(Fracasso et al., 2010)
RESULTADOS E DISCUSSO

Antioxidantes Exgenos

(r= -0.30; p<0.05; n= 71) (r= -0.34; p<0.01; n= 71)

85
RESULTADOS E DISCUSSO

TRIAGEM E BIOMONITORAMENTO DOS RISCOS OCUPACIONAIS

86
EXPOSIO OCUPACIONAL A BAIXAS CONCENTRAES DE BENZENO
ESTO FORTEMENTE ASSOCIADAS A ALTERAES PRECOCES

Sugerindo a contribuio para desenvolvimento de


patologias em longo prazo

CRITRIOS QUANTITATIVOS PARA O INDICADOR


BIOLGICO DE EXPOSIAO IMPRESCINDVEL

87
OBRIGADA!
LATOX - Laboratrio de Toxicologia
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Telefone:
88 (51) 3308-5297