Aula 7 Controle de Microrganismos

Curso Tcnico em Qumica
Disciplina: Microbiologia
Controle de microrganismos
Professora Melissa Kayser

Controle de
micro-
organismos Nveis de controle
Eliminao parcial
Escala Escala Eliminao total
laboratorial industrial
Inibio do crescimento
Evitar
Prevenir ou
contaminao Eliminar riscos
retardar
por micro- sade do
alteraes
organismos consumidor
indesejveis
indesejveis
Eliminao parcial ou Eliminao total
MORTE: Perda irreversvel da capacidade de reproduo

ao microbiocida (morte rpida do microrganismo)
Inibio do crescimento
INIBIO: Bloqueio da multiplicao ao microbiosttica

(microrganismos vivo no multiplica morte lenta)
TRATAMENTOS MICROBICIDAS: so aqueles que matam

os microrganismos.
Esterilizao
Antissepsia
TRATAMENTOS MICROBIOSTTICOS: so aqueles que s

inibem o crescimento microbiano. Parecem mortas, mas
quando o tratamento foi interrompido, elas tornam a crescer.
Desinfeco
Descontaminao
ESTERILIZAO: destri toda a vida microbiana.
ANTISSEPSIA: mata os microrganismos em tecido vivo.
DESINFECO (SANITIZAO): reduz o nmero de

patgenos a um nvel em que no sejam mais um risco de
doena, em matria inanimada.
DESCONTAMINAO: torna segura uma superfcie que foi

fortemente exposta aos microrganismos.
ESTERILIZAR UM INSTRUMENTO TAMBM DESINFETA E

DESCONTAMINA
Tipos de tratamento para controle de microrganismos:
Qumicos: Fsicos:
Produto qumicos Calor

Frio
Eficincia depende: Radiao
Tipo e nmero de microrganismos Filtrao
Estado fisiolgico das clulas
Tempo de exposio Dessecao
Presso osmtica
Os mtodos de controle microrganismos podem atuar de

diferentes formas na clula:
Rompimento das ligaes
das protenas
e cidos nucleicos:
desnaturao
Leses na membrana
e parede:
altera permeabilidade
CALOR
o mais efetivo MICROBICIDA
o melhor mtodo se o material a ser tratado no for sujeito a

danos causados pelo calor
desnaturao de protenas, levando a perda

da integridade celular e morte
O calor penetra, eliminando os microrganismos do objeto
outros tratamentos esterilizam apenas as superfcies que

tocam, como luz ultravioleta e substncias qumicas.
CALOR
Calor seco
Tempo x Temperatura
Oxidao de componentes dos microrganismos
Flambagem
Estufas e fornos
Incinerao
Calor mido
Temperaturas mais baixas Tempo x Temperatura x Umidade
Alto calor latente Desnaturao de cidos nuclicos e protenas
(conserva mais o calor) Fluidificao de lipdeos da membrana
Elevado poder de penetrao Esterilizao
gua em ebulio
CALOR SECO
Flambagem
Ocorre destruio do microrganismo pelo Calor direto a ala

de vidro ou a ala de platina levada chama de um bico de
Bunsen
CALOR SECO
Flambagem
Utilizado para isolamento de culturas pela tcnica de

espalhamento, e na confeco de esfregao para colorao e
visualizao de microrganismos, como na colorao de Gram.
CALOR SECO
Flambagem
Colocar a ala em contato primeiro com a

chama redutora, em que a temperatura
menor, numa inclinao de 45, e depois
na chama oxidante.
Deixar at ficar vermelha.
Esfriar antes de colocar em contato com

os microrganismos.
CALOR SECO
Estufas e fornos
Recomendado quando o contato direto ou o uso do calor mido

com o material considerado indesejvel.
vidrarias, placas, pipetas, tesouras, materiais em ao inox
O material deve estar limpo, deve ser embalado em papel

pardo ou em sacos resistentes, com fita adesiva indicadora.
CALOR SECO
Estufas e fornos
170 a 205C
120 min
CALOR SECO
Distribuir o material
Estufas e fornos uniformemente;
Nunca encher mais que 80% da

capacidade;
O tempo s contado quando

atinge a temperatura;
No abrir a porta antes de esfriar;
Ventilao para distribuir o calor;
Controle peridico da
temperatura.
CALOR MIDO
Autoclave
Tempo x Temperatura x Umidade
+
PRESSO
o agente mais seguro e eficiente para fins de

esterilizao, proporcionando temperaturas mais
elevadas que as obtidas por ebulio
121 a 134C
15 a 30 min Meios de cultura, roupas, instrumentos, material
contaminado, equipamentos
CALOR MIDO
Autoclave
Material limpo e embalado, de maneira que

no tenha contato com o ambiente e micro-
organismos aps a esterilizao.
Normalmente se usa papel pardo, ou so

feitos pacotes ou a boca das vidrarias so
tapadas.
Tambm deve se utilizar a fita indicadora, pra

no confundir material contaminado com
esterilizado.
CALOR MIDO
Autoclave
Antes de iniciar o processo, deve-se conferir

o nvel da gua, que deve cobrir as
resistncia, quase encostando no cesto.
O material deve ser distribudo tambm de

maneira uniforme e no ultrapassando 80%
da capacidade.
Deve-se fechar a tampa, apertando as travas

opostas, pra que seja usada a mesma fora,
nos lados opostos.
CALOR MIDO
Autoclave
Ligar a chave no mximo e esperar sair vapor

de gua pela vlvula.
Quando comear a sair vapor, fechar a

vlvula e esperar presso e temperatura
subirem.
Quando atingir 121C , colocar no mdio e

contar o tempo.
CALOR MIDO
Autoclave
Desligar e esperar temperatura e presso baixarem para abrir.
O material sai mido, devendo ser seco em estufa antes de ser

guardado.
CALOR MIDO
gua em ebulio (fervura)
Destri clulas vegetativas, fungos, vrus

10 minutos
Esporos e termoflicos podem resistir

100C
Capaz de eliminar a maioria dos
30 min
patgenos 30 minutos
O problema de utilizar em -Esporos de C. botulinum 5,5 horas

laboratrio que o material
no seria embalado, ficando
sujeito contaminao -Esterilizao 4 a 5 minutos
futura.
FRIO
NO mata a maioria dos microrganismos

MICROBIOSTTICO
armazenamento frio usado para preservao,

armazenamento por perodos limitados.
microrganismos que no morrem permanecem em

estado de congelamento.
CHOQUE FRIO quando uma cultura em crescimento de

repente resfriada, muitos microrganismos so imediatamente
mortos (nitrognio lquido). Tem exceo!
FRIO
Frio em alimentos cristais de gelo
Microrganismos muito pequenos

para que se formem cristais de gelo
dentro
Morrem pela alta fora osmtica que

se desenvolve enquanto a gua
congela no ambiente externo.
Agentes conservantes para criopreservao
Considerando a importncia da conservao de microrganismos por

longos perodos, na tentativa de preveno ou at mesmo na reduo dos
efeitos adversos dos mtodos de preservao de amostras biolgicas, por uma
descoberta acidental, verificaram a proteo efetiva do glicerol sobre materiais
biolgicos. Posteriormente, a ao protetora de outras substncias foram
descobertas e intensamente utilizadas na rotina laboratorial, como o
dimetilsulfxido (DMSO).
Deste modo, uma maior quantidade de gua permanece no estado

lquido sob baixas temperaturas, levando a reduo na concentrao
intracelular de solutos e proporcionando um ambiente menos prejudicial aos
microrganismos durante o congelamento.
Estes compostos so capazes de realizar ligaes com as molculas

de gua, levando a uma significativa reduo na formao e no tamanho dos
cristais de gelo intracelular, os quais danificam a membrana celular.
FRIO
Congelamento:
-20 a -70C
Nitrognio lquido:
-196C
Refrigerao:
4 a 7C
RADIAO
Radiao com luz visvel e com comprimento de onda mais

longo no significativamente letal aos microrganismos.
Microrganismos evoluram vrios

mecanismos de reparos de DNA para
corrigir danos
= LAMBDA
RADIAO
Os tipos de radiao que matam bactrias diretamente so

todos de comprimento de onda menores do que a luz visvel:
Luz ULTRAVIOLETA (10 a 400nm)

Radiao IONIZANTE ( at 0,001nm)
Raramente utilizada em laboratrios de

microbiologia pela complexidade da
tcnica, mas apresenta aplicao
comercial considervel
(alimentos, vidros, plsticos)
O comprimento de onda UV mais letal de aproximadamente

265nm, por trazer dano ao DNA que absorve ao mximo nesse
comprimento de onda.
UVA Luz Negra 315:400 nm
Bronzeado;
Formao da catarata;
UVB Regio do eritema 280:315nm

Regio potencialmente carcinognica;
Protetores solares;
UVC Bactericida e Germicida - < 280 nm

Protegidos pela camada de oznio;
Lmpadas de vidro bloqueiam completamente esses raios.
Eritema: Colorao avermelhada da pele ocasionada por vasodilatao capilar.

RADIAO
A LUZ UV mata micro-

organismos somente em
SUPERFCIES, no
penetrando nem mesmo
em vidro.
RISCO sade humana

por dano CRNEA.
Cmara de fluxo laminar

FILTRAO
As clulas microbianas podem ser

removidas de lquidos ou gases por
filtrao.
mais demorada e cara, j que um

novo filtro deve ser usado a cada vez,
comparada a autoclave.
Ento apenas lquidos e solues

sensveis ao calor so filtrados.
NO remove a maioria dos vrus, mas o

processo adequado para boa parte
dos propsitos rotineiros de laboratrio.
FILTRAO
Os filtros so chamados de FILTROS

DE MEMBRANA, que so folhas de
nitrocelulose uniformemente porosa
(0,45m de dimetro).
Solues de vitaminas, antibiticos e

outros compostos sensveis ao calor
so normalmente filtrados antes de
serem adicionados a um meio.
UM MTODO QUE NO ESTERELIZA

DESSECAO (secagem)
Remoo de gua evaporao ou sublimao.
Evaporao: no comumente utilizada em laboratrio por

causar mudanas qumicas, porm amplamente aplicada na
indstria.
Diminuio da gua
Concentrao dos slidos

DESSECAO (secagem)
Sublimao converso direta de um estado slido para um

gasoso (congelamento e aps vcuo parcial).
LIOFILIZAO
Ex. Preservao de materiais perecveis como protenas,

produtos que contm sangue e culturas de referncia.
DESSECAO
Tcnica de conservao a longo prazo.

Liofilizao
A tcnica se baseia na remoo da gua intracelular de
materiais biolgicos congelados, por sublimao, evitando a
formao de cristais de gelo, capazes de provocar danos s
estruturas celulares, alm da degradao de enzimas presentes
no citosol, levando a morte dos agentes.
Basicamente, a liofilizao pode ser definida como um

processo de desidratao sob condies de vcuo, constitudo
por trs etapas: congelamento, desidratao primria e
desidratao secundria.
Liofilizao
O congelamento promove a inrcia do material a ser
liofilizado, gerando uma interrupo das reaes qumicas e
atividades biolgicas, sendo por isso uma das fases mais
crticas.
Posteriormente, a amostra biolgica sofre desidratao

por meio de sublimao, seguindo-se com o emprego de
temperaturas de secagem, sob presses reduzidas.
A liofilizao amplamente empregada na manuteno

de diferentes microrganismos e considerada uma tcnica de
conservao a longo prazo.
PRESSO OSMTICA
So usadas altas concentraes de sal ou

acar para preservar alimentos pela mesma
razo da secagem: microrganismos no
conseguem crescer sem gua.
A alta fora osmtica pode

danificar as clulas por
plasmlise.
PRODUTOS QUMICOS
Halognios: Cloro e Iodo
Ruptura de membrana plasmtica
lcoois: lcool 70% Desnaturao de protenas
Sabes e detergentes: controle

mecnico, podem conter
antimicrobianos
Aldedos: glutaraldedo e
formaldedo
Esterilizantes gasosos: xido de

etileno
Acido peractico

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Curso Tcnico em Qumica

Professora Melissa Kayser

Eliminao parcial ou Eliminao total

MORTE: Perda irreversvel da capacidade de reproduo

INIBIO: Bloqueio da multiplicao ao microbiosttica

TRATAMENTOS MICROBICIDAS: so aqueles que matam

TRATAMENTOS MICROBIOSTTICOS: so aqueles que s

ESTERILIZAO: destri toda a vida microbiana.

ANTISSEPSIA: mata os microrganismos em tecido vivo.

DESINFECO (SANITIZAO): reduz o nmero de

DESCONTAMINAO: torna segura uma superfcie que foi

ESTERILIZAR UM INSTRUMENTO TAMBM DESINFETA E

Tipos de tratamento para controle de microrganismos:

Produto qumicos Calor

Os mtodos de controle microrganismos podem atuar de

o mais efetivo MICROBICIDA

o melhor mtodo se o material a ser tratado no for sujeito a

desnaturao de protenas, levando a perda

O calor penetra, eliminando os microrganismos do objeto

outros tratamentos esterilizam apenas as superfcies que

Ocorre destruio do microrganismo pelo Calor direto a ala

Utilizado para isolamento de culturas pela tcnica de

Colocar a ala em contato primeiro com a

Deixar at ficar vermelha.

Esfriar antes de colocar em contato com

Recomendado quando o contato direto ou o uso do calor mido

vidrarias, placas, pipetas, tesouras, materiais em ao inox

O material deve estar limpo, deve ser embalado em papel

Nunca encher mais que 80% da

O tempo s contado quando

No abrir a porta antes de esfriar;

Ventilao para distribuir o calor;

o agente mais seguro e eficiente para fins de

Material limpo e embalado, de maneira que

Normalmente se usa papel pardo, ou so

Tambm deve se utilizar a fita indicadora, pra

Antes de iniciar o processo, deve-se conferir

O material deve ser distribudo tambm de

Deve-se fechar a tampa, apertando as travas

Ligar a chave no mximo e esperar sair vapor

Quando comear a sair vapor, fechar a

Quando atingir 121C , colocar no mdio e

Desligar e esperar temperatura e presso baixarem para abrir.

O material sai mido, devendo ser seco em estufa antes de ser

gua em ebulio (fervura)

Destri clulas vegetativas, fungos, vrus

Esporos e termoflicos podem resistir

O problema de utilizar em -Esporos de C. botulinum 5,5 horas

NO mata a maioria dos microrganismos

armazenamento frio usado para preservao,

microrganismos que no morrem permanecem em

CHOQUE FRIO quando uma cultura em crescimento de

Frio em alimentos cristais de gelo

Microrganismos muito pequenos

Morrem pela alta fora osmtica que

Considerando a importncia da conservao de microrganismos por

Deste modo, uma maior quantidade de gua permanece no estado

Estes compostos so capazes de realizar ligaes com as molculas

Radiao com luz visvel e com comprimento de onda mais

Microrganismos evoluram vrios

Os tipos de radiao que matam bactrias diretamente so

Luz ULTRAVIOLETA (10 a 400nm)

Raramente utilizada em laboratrios de

O comprimento de onda UV mais letal de aproximadamente