UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

FACULTAD DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO DE QUMICA

PROFESOR: JORGE CHVEZ PREZ

PRUEBA DE ENSAYO FINAL CURSO DE ENZIMOLOGA

1. Qu criterios considera ud.. (Indique por lo menos 4) se deben considerar para realizar un
trabajo de aislamiento y purificacin de enzimas.

a) Seleccionar la muestra biolgica (fuente)

b) Definir objetivos : Pureza y cantidad requerida
c) Investigar las propiedades de las protenas a purificar
- Tamao
- Propiedades inicas ( punto isoelctrico )
- Hidrofobicidad ( solubilidad )
- Estabilidad ( Temperatura , pH,oxidacin ,reduccin)
- Afinidad por un ligando
d) Contar con un mtodo adecuado para la deteccin de la protena de inters
Monitorear el proceso de purificacin
Cuantificacin de protena total
Detectar especficamente la protena de inters
2. Describa ud. en un organigrama la metodologa a seguir para un proceso de purificacin,
indicando:
a) Cmo se selecciona un buffer
b) Cul es la concentracin ptima para la preparacin de homogenizados
c) Por qu debe mantenerse la cadena de fro?
d) Qu mtodos con son fundamentos son aplicados para la determinacin de protenas
 3. A qu llamamos actividad especfica y qu importancia tiene en la purificacin enzimtica?
Explique cmo se emplea.

Se define a la actividad especfica como la actividad por unidad de masa de protena en la preparacin
enzimtica. Es este trmino ampliamente utilizado en la purificacin de enzimas .En una preparacin
cruda de enzima existe una gran cantidad de protena contaminante, que no tiene nada que ver con la
enzima que tratamos de purificar. A medida que la purificacin avanza, vamos eliminando protena
contaminante. Si la purificacin va bien se conserva la actividad enzimtica pero aumenta la actividad
especfica. Es obvio que la actividad especfica a lo largo de una purificacin llega a un lmite superior
correspondiente a la actividad intrnseca de la enzima pura.

4. Describa el fundamento de la cromatografa de exclusin molecular

5. En que se basa la cromatografa de intercambio inico. Describa los tipos de intercambiadores.

6. Qu es la electroforesis preparativa y a que se denomina PAGE-denaturante?

Que funcin cumplen:
a) Persulfato de amonio

b) TEMED

c) ACRILAMIDA/BISACRILAMIDA

d) SDS
El dodecilsulfato sdico (Sodium Dodecyl Sulphate, SDS, laurilsulfato sdico) es un
detergente aninico que se une a las protenas, desnaturalizndolas en una
conformacin extendida recubierta de molculas de SDS. Como consecuencia, el
tamao de la molcula de protena es directamente proporcional a su longitud en
aminocidos y su carga queda enmascarada por la mayor carga del SDS que la
recubre, que es tambin proporcional a la longitud. Por lo tanto, la movilidad
electrofortica de la protena depende exclusivamente de su masa molecular.
7. Que es el HPLC y cules son sus principales componentes.

8. Respecto al siguiente cuadro

a) Complete el cuadro de purificacin

b) Haga comentarios respecto al procedimiento empleado. (Secuencia, pertinencia,
productividad.