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UNIVERSIDAD TCNICA DE COTOPAXI

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS Y


RECURSOS NATURALES

CARRERA: INGENIERA AGROINDUSTRIAL

MATERIA: MICROBIOLOGA GENERAL E INDUSTRIAL.

TEMA: ELABORACIN Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS


FERMENTADORES DEL TOMATE DE RBOL.

INTEGRANTES
CRIOLLO VANESSA.
CHIMBA ROBERTO.
LEMA FANNY.
LEMA JHONY.
TIGSELEMA YADIRA.
ZAMBRANO IVAN.

CICLO

TERCERO
B

DOCENTE
QUIM. ORLANDO ROJAS.

PERIODO ACADMICO

ABRIL 2017 JULIO 2017


ANTECEDENTES:

El tomate de rbol es una fruta extica originaria de la vertiente oriental de los Andes de
Colombia, Ecuador y Per (Imagen 1). En 1970, se le asign el nombre tamarillo, designacin
comercial generalizada para el tomate de rbol en el mercado mundial (MAG/IICA 2001).

El tomate de rbol perteneciente a la familia Solanaceae, corresponde al tipo biolgico de arbusto


semileoso con follaje grande y flores rosadas con exquisita fragancia, presenta ciclo vegetativo
perenne y su altura alcanza los 2 3 metros (SICA 2001) (Imagen 2). Es una planta de climas
templados y fros. Su temperatura est entre 13 a 24C siendo la ptima entre 16 y 19C. No
necesita gran humedad atmosfrica, por lo que se cultiva frecuentemente en zonas altas de clima
seco. Se desarrolla en una amplia gama de suelos, siendo los mejores los de textura franca, ricos
en materia orgnica (PROEXANT 2007).

Los frutos son bayas aromticas ovoides punteadas en su extremo inferior (Imagen 3), con un
cliz cnico y recubiertos por una cscara gruesa, lisa, brillante y cercea, de sabor amargo en
tonos ladrillo, rojos, naranjas y amarillos segn la variedad. El mesocarpio, nica parte
comestible, es firme, suave, jugoso, agridulce y presenta colores amarillos, rosados o rojos. En el
centro de la fruta, rodeadas de pulpa ms suave que la capa exterior, se encuentran entre 200 y
400 pequeas semillas comestibles, de forma plana y circular (MAG/IICA 2001)

En Amrica Latina, el tomate de rbol es cultivado en forma muy marginal en pases como: Per,
Chile, Bolivia, Argentina, Brasil, Venezuela, Costa Rica, Guatemala, Jamaica, Puerto Rico y
Hait; pero es en Colombia y Ecuador donde se produce ms extensamente. En la actualidad
tambin es cultivado en Zambia, Nueva Zelanda, Sri Lanka, Kenia Zimbabwe e India
(PROEXANT 2007). La principal variedad comercial en Nueva Zelanda es la llamada negra,
obtenida como una variacin entre los tipos amarillos y rojos oscuros. El resultado es una fruta
de tamao grande, color rojo intenso, considerada de mejor calidad (MAG/IICA 2001).

En Ecuador, la fruta se cultiva en zonas de climas templados y frescos de la Sierra ecuatoriana,


en altitudes comprendidas entre 1.200 a 3.000 m.s.n.m. En estas zonas se cultiva alrededor de
5.000 ha, con rendimientos que oscilan entre 60 80 t /ha /ao (SICA 2001). La produccin
Empieza al ao y medio o dos aos despus de la siembra, siendo intensa solamente por 4 5
aos (5 meses /ao) pudiendo durar de 10 a 12 aos (PROEXANT 2007). Las provincias ms
representativas son: Imbabura, Tungurahua y Pichincha (SICA 2001). La variedad ms difundida
es la tradicional anaranjada, habindose introducido ltimamente el tomate mora de color
morado y pulpa ms rojiza (MAG/IICA 2001).

En la actualidad el Ecuador presenta perspectivas favorables para la captacin de divisas de


cultivos no tradicionales, por ello el pas ha concentrado sus esfuerzos en atender al sector
agrcola hasta ahora descuidado (SICA 2001).

Segn informacin proporcionada por el SIGAGRO (2006)*, a pesar de los problemas en la


produccin, el tomate de rbol es uno de los cultivos no tradicionales ms prometedores, su uso
ha tenido un incremento significativo en los ltimos aos; lo que ha trado como consecuencia,
un aumento sostenido de las reas cultivadas de 2.017 ha en 1996 a 3.043 ha en el 2006.

El tamarillo ha demostrado tener un gran potencial de exportacin para el Ecuador, debido al


importante crecimiento de sus rubros exportados y el constante incremento de la demanda
mundial. En Europa se la consume como fruta fresca, mientras que el consumidor estadounidense
la prefiere procesada. Los principales mercados de destino del tomate de rbol ecuatoriano son:
Holanda, Blgica y Canad (SICA 2001).

Respecto a la adiccin de nutrientes (extracto de levadura y fosfato acido de amonio) garantiza


un aumento del porcentaje de alcohol en la bebida. Se recomienda la utilizacin de levadura de
vino (Saccharomyces cerevisiae) ya que fermenta ms rpido que la levadura de pan, tolera alta
concentracin inicial de azcar, tolera concentracin final de etanol, baja produccin de sub
productos metablicos. Se recomienda adems trabajar a temperatura de 20C. (Lpez y Paredes
1998).

Los cultivos andinos de acuerdo con guerrero (2012), son parte de las variedades trabajadas
ancestralmente por sociedades prehispnicas, constituyendo un gran repositorio de material
vegetal con importancia nica y trascendental. (pg. 101). Estos cultivos como el tomate de rbol,
se han adaptado a los ecosistemas de alturas variadas, condiciones climticas extremas y alta
variabilidad climtica. Muchos de estos cultivos poseen un valor nutricional, desconocido por
gran parte de la poblacin, los que los convierte en frutos de gran inters investigativo.

En la regin interandina ecuatoriana la produccin de tomate de rbol, es todava deficiente,


teniendo como promedio de siembra 0,68 ha. Por cada productor, siendo los principales
productores los pequeos y medianos agricultores de la regin, segn Quinaluisa (2006), en la
ltima dcada aumento la produccin de tomate de rbol de 1370 ha, en 1993 a 4062 ha, en 2001,
motivo por el cual la industria nacional muestra mayor inters en el procesamiento y
manufacturacin del producto (pg. 5)

Las cualidades nutritivas, organolpticas y de salud del fruto, que se pueden resaltar segn Portilla
(2013) son: reduccin de colesterol, calmar migraas, alto contenido de fibra (2.0g/100g de
pulpa), vitamina A (150.0ml/100g de pulpa), Vitamina C (29.0mg/100de pulpa), nivel de caloras
(48.0g/100g de pulpa), rico en minerales como: calcio (9.0mg/100g de pulpa).
JUSTIFICACIN:

El tomate de rbol, fruto originario de nuestro pas, de abundante produccin y rico en nutrientes,
ofrece la posibilidad de acceder a los mercados de frutas y hortalizas, pero la realidad del
comercio interno y externo est cada vez ms caracterizada por la demanda de productos
procesados con alta calidad.

El tomate de rbol posee cualidades fsicas, nutritivas y organolpticas similares a las mejores
frutas que actualmente se consume. Resalta por sus propiedades de reduccin de colesterol, alto
contenido de fibra, vitaminas A y C, bajo nivel de caloras, rico en minerales como: calcio, hierro
y fsforo; altos niveles de protena y caroteno; adems, fortalece el sistema inmunolgico y la
visin, funciona como antioxidante y es fuente de pectina (MAG/IICA 2001).

La capacidad microbiana ayuda a optimizar muchos procesos biotecnolgicos, razn por la cual
el trabajo de aislamiento, identificacin y caracterizacin de especies, que se canalizan en la
coleccin de cepas, en el laboratorio estn destinadas a un fin productivo, siendo as un prembulo
para posteriores investigaciones de aplicaciones en procesos de la industria alimenticia y
produccin vincola.

La investigacin microbiolgica de frutos fermentables locales como el tomate de rbol, permitir


un significativo desarrollo en la industria local, disminuyendo la necesidad de comprar insumos
en el exterior, mediante el uso de cepas que presentan una mayor adaptabilidad a las condiciones
ambientales y climticas, aportando un potencial a la pequea industria de nuestro pas.
OBJETIVOS.

General:
Conocer las taxas presentes que se encuentren en un tomate de rbol mediante un anlisis
microbiolgico

Especficos:

Elaborar la fermentacin del zumo de tomate de rbol.


Identificar una muestra para la siembra respectiva para el aislamiento de cepas
producidas.
Aislar y purificar los microorganismo fermentador del tomate
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA.

El aislamiento de microorganismos fermentadores del tomate de rbol, se dara por el motivo de


cultivar sepas que se produzcan al fermentar el mismo lo cual nos dara como resultado la
obtencin de microorganismos que mejoren la calidad del producto fermentado adems de esto
nos servira a nivel comercial industrializar este producto andino con el fin de obtener un valor
agregado, adems de la entrega de cepas aisladas para fermentar esta fruta en particular as
obtendremos un producto de calidad.
I. MARCO TEORICO

COMPOSICIN

El tomate de rbol es una fuente de Vitaminas A, B6, C y E, rico en el hierro y el potasio. Tambin
bajo en caloras y alto en la fibra. Los datos de la composicin nutricional deben interpretar por
100 g de la porcin comestible.

Se consume como fruta fresca, es materia prima en la industria para la preparacin de jugos,
compotas, conservas dulces, jaleas, gelatina, mermelada y concentrados congelados, es
considerado en fruto terapia como una de las frutas que fortalecen el cerebro, y contribuyen a
curar migraas y cefaleas severas, y por su gran aporte nutricional este fruto contiene sustancias
como el cido gamma amino butrico que baja la tensin arterial.

Cuadro 1. Composicin Nutricional del tomate.

Caloras 80 Ca

Agua 87,9 g

Protena 1,9 g

Grasa 0,16 g

Cenizas 0,7 g

Carbohidratos 11,6 mg

Fibra 1,1 g

Calcio 2,0 mg

Hierro 2,0 mg
Fosforo 36,0 mg
Vitamina C 20 %
CARACTERSTICAS

Reino: Plantea

Divisin: Solanceas

Familia: Solanceae

Especie: Cyphornandra Retacea

Es un arbusto de 3 a 4 m de altura con hojas simples y aovadas o codadas, por lo general


integra.

Es originaria de los Andes, se encuentra en huertos familiares desde el norte de Argentina


hasta el sureste de Mxico y en las Antillas.

Crece en clima de bosques hmedos montanos, con temperatura entre 13 y 24 C.

Es una planta delicada al frio y a los vientos, con hojas alternas, enteras, en los extremos
de las ramas, con peciolo robusto de 4 a 8 cm de longitud.

El limbo presenta de 15 a 30 cm de longitud, con forma ovalada, acuminado, de color


verdee oscuro, un poco spero al tacto.

Las hojas finas tienen una fina pubescencia en ambas caras, la nerviacin es marcada y
sobresaliente, las flores son pequeas, de 1,3 a 1,5 cm de dimetro, de color blanco
rosceo dispuestas en pequeos racimos terminales.

Tienen 5 ptalos y 5 estambres amarillos, florecen en mayo junio.

El fruto es una baya ovoide de 4 a 8 cm x3 a 4 cm, con un largo pednculo en el que


persiste el cliz de la flor.

La piel es lisa, de color rojo o anaranjado en la madurez, con estras de color ms claro.
La pulpa es jugosa, algo acida, de color naranja, roja con semillas.

Usos

Los frutos se pueden utilizar en jugos, dulces y postres. El fruto o las hojas, previamente
calentadas, se aplican en forma tpica contra la inflamacin de amgdalas o anginas
especialmente. Para la gripe, se debe consumir el fruto fresco en ayunas. Se sabe que el fruto
posee alto contenido de cido ascrbico (Rodrguez, 2001).

Componentes.

El componente mayoritario del tomate de rbol es el agua. Es un fruto de moderado valor calrico,
a expensas de su aporte de hidratos de carbono. Es bajo en caloras y alto en fibra, destaca su
contenido de provitamina A y C, de accin antioxidante, y en menor proporcin contiene otras
vitaminas del grupo B, como la B6 o piridoxina, necesaria para el buen funcionamiento del
sistema nervioso. Su contenido de fibra (soluble, pectina) es alto; mejora el trnsito intestinal.

La vitamina C interviene en la formacin de colgeno, huesos y dientes, glbulos rojos y


favorecen la absorcin del hierro de los alimentos y la resistencia a las infecciones. La
provitamina A o beta caroteno se transforma en vitamina A en nuestro organismo conforme este
lo necesita. La vitamina A es esencial para la visin, el buen estado de la piel, el cabello, las
mucosas, los huesos y para el buen funcionamiento del sistema inmunolgico. Ambas vitaminas,
cumplen adems una funcin antioxidante.
Diagrama 1. Tratamientos previos de los frutos del tomate de

rbol.
FERMENTACIN

La fermentacin alcohlica es un proceso biolgico de fermentacin en plena ausencia


de aire (oxgeno - O2), originado por la actividad de algunos microorganismos que procesan
los hidratos de carbono (por regla general, azcares: por ejemplo, la glucosa, la fructosa,
la sacarosa, es decir, cualquier sustancia que tenga la forma emprica de la glucosa, es decir,
una hexosa) para obtener como productos finales: un alcohol en forma de etanol

ELABORACIN.

Pesado: se pesa el valor de fruto que se desea obtener adems nos sirve de gua para realizar los
diferentes clculos.

Pelado: es necesario pelar la fruta ya que posee una capa amarga que altera el producto final.

Lavado: se lo realiza con agua y a mano esto con el fin de remover restos de tierra y materiales
orgnicos.

Pulpatado: se lo realiza en una licuadora en proporcin de 1-1 con relacin agua fruta.

Filtrado: se utiliza lienzo para evitar que pasen partculas pequeas de materiales contaminantes.

Anlisis del mosto: se mide la acidez, pH y brix para poder realizar ajustes o correccin del
mosto.

Correccin del mosto: se recomienda ajustar los grados brix a 21 que se determina mediante el
brixometro esto se consigue mediante la adicin de azcar. La acidez se debe tener un valor de
0,8%. El pH de la acidez recomendada debe ser de 3,5.

Sulfitado: se realiza para evitar la accin de microorganismos ajenos a la fermentacin para lo


cual se aade 0,1 kg de metasulfito de potasio.
Tratamiento enzimtico: el mosto obtenido se lo tratara con pectinas en dos concentraciones
diferentes 0.02 ml/lt y 0,04ml/lt.

Dosificacin de nutrientes: se recomienda la adicin de fosfato de cido amonio en una


proporcin de 1g/lt esto con el fin de acelerar la fermentacin.

Reposo: se deja reposar el mosto durante un lapso de tres horas esto con el fin de permitir la
aireacin del mismo para as lograr la completa disolucin del anhdrido sulfuroso proveniente
del metasulfito de sodio el cual al ser un reductor capta el oxgeno del aire que se ha disuelto en
el mosto.

Inoculacin: se usa saccharomices cereviciae previamente calentada con agua azucarada 12 brix
a 40 C por 15 minutos en agua en una proporcin de 7 gramos de levadura por cada 25 de mosto.

Fermentacin: se coloca el mosto en recipientes de fermentacin plstica sulfatadas y equipadas


de trampas de agua para evitar la entrada de agua y permitir la salida de dixido de carbono. Se
lo debe realizar a temperatura ambiente se debe chequear peridicamente los grados brix y pH.

Trasiego: consiste en separar el vino tierno del sedimento formado en las fermentaciones se lo
realiza luego de dos semanas de haber iniciado la fermentacin mediante una manguera
higienizada y se lo pasteuriza a 60 C por 20 minutos.

Clarificacin: se lo realiza mediante las enzimas 3XL, SPL, en una proporcin recomendada por
un experto, despus de esto se realiza un anlisis de acidez y pH.
Diagrama de flujo de la fermentacin del tomate.
MICROORGANISMOS PRESENTES EN LA FERMENTACIN.

Saccharomyces cerevisiae. Se conoce como levadura silvestre, por lo que corresponde a una
especie no cultivada, Produce fermentacin superficial.

Saccharomyces carisbergenis (s. uvarum). Especie cultivada, seleccionada, realiza su actividad


fermentativa en el fondo de los recipientes. Se considera como la levadura autentica cervecera

Saccharomyces pastorianus. Son clulas ovalas en forma de salchicha, su actividad


fermentativa es de fondo. No conveniente en la industria cervecera. Es resistente a altas
concentraciones de alcohol y anhdrido sulfuroso.

Trulas. Se reproducen por gemacin, de forma esfrica u oval, de distintos colores, su presencia
en cervezas causa turbidez. No son saccharomyces. Su actividad alcoholizante es escasa. Se
encuentran en gran cantidad en mostos de uvas atacadas por podredumbre.

Brettanomyces. Son asporgenas. Son clulas esfricas, ovales o alargadas, se desarrollan


lentamente formando cadenas de clulas Producen acidez. Desprenden olor a extractos de malta.
Fermentacin tarda.

Saccharomyces elipsoideus. Es la autntica levadura del vino, alto poder fermentativo. Domina
todo el proceso de fermentacin. Tiene gran resistencia al dixido de azufre (SO2)

Kloeckera apiculatis. Clulas en forma de limn, se conocen como levaduras falsas, comunes
en flores, frutas y suelo. Muy activas al inicio de la fermentacin. Son perjudiciales para los vinos
en los que dan sabores anormales y producen acidez.
MTODOS DE AISLAMIENTO

El aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales se realiza, en la mayora de los casos,


mediante la produccin de colonias aisladas en cultivos slidos.
El crecimiento explosivo de las bacterias permite producir un gran nmero de ellas a partir de una
nica clula inicial de forma que, tras un periodo de incubacin en las condiciones ambientales
adecuadas, se produce una colonia observable a simple vista y formada por individuos iguales
(un clon bacteriano). Sin embargo, no todos los microorganismos presentes en las muestras
ambientales son cultivables (microorganismos no cultivables). Esto es debido a dificultades
intrnsecas en el cultivo (microorganismos parsitos de otros), al desconocimiento de los
requerimientos especficos de cultivo, y a la existencia de grupos de microorganismos que deben
mantenerse en equilibrio para poder sobrevivir (casos de sintrofa por ejemplo).
Se estima que en slo en torno al 1% de las bacterias del suelo al 0,1 - 0,01 % de las bacterias
marinas son cultivables. Existen procedimientos de enriquecimiento del nmero de bacterias de
ambientes naturales para facilitar su aislamiento.

DISEO DE UN MEDIO DE CULTIVO

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes


que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. Puesto que la
diversidad metablica de los microorganismos es enorme, la variedad de medios de cultivo es
tambin muy grande. La mayora de los medios de cultivo se comercializan en forma de
liofilizados que es preciso rehidratar. La preparacin de un medio de cultivo se reduce en general
a pesar la cantidad de medio y redisolverla en agua destilada (libre de inhibidores del crecimiento)
siguiendo las instrucciones del fabricante. Las sustancias termolbiles se esterilizan por filtracin
y se aaden al resto de los componentes previamente esterilizados en el autoclave.

Esterilizacin.

Significa la eliminacin de toda forma de vida de un medio o material, lo que se lleva a cabo
generalmente por medios fsicos, por ejemplo, filtracin, o por muerte de los organismos por
calor, productos qumicos u otra va. Esta definicin excluye por lo tanto cualquier tcnica que
resulte solamente en un dao a los microorganismos o atenuacin de la actividad de cualquier
tipo.

Los constituyentes habituales de los medios de cultivo son:

1. Agar. Se utiliza como agente solidificante. Es un polisacrido que se obtiene de ciertas algas
marinas. Las bacterias no son capaces de degradarlo.

2. Azcares. Son una fuente de carbono para los microorganismos. Los ms empleados son la
glucosa, la lactosa y la sacarosa.

3. Extractos. Son preparados de ciertos rganos o tejidos animales o vegetales obtenidos con
agua y calor.

4. Peptonas. Son protenas hidrolizadas, se obtienen por digestin qumica o enzimtica de


protenas animales o vegetales.

5. Fluidos corporales. Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero sanguneo son
aadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos microorganismos patgenos.

6. Sistemas amortiguadores. Son sales que se aaden al medio para mantener el pH dentro del
rango ptimo del crecimiento bacteriano. Ej.: fosfatos bisdicos o bipotsicos.

7. Indicadores de pH. Son indicadores cido-base que se aaden para detectar cambios de pH
en el medio.

8. Agentes reductores. Sustancias que se aaden al medio para crear las condiciones que
permitan el desarrollo de los grmenes microaerfilos o anaerobios.

9. Agentes selectivos. Sustancias como el cristal violeta, las sales biliares etc. que a determinadas
concentraciones en el medio actan como agentes selectivos frente a determinados
microorganismos.
Medios de cultivo

Es un material alimenticio que se usa en el laboratorio para el desarrollo de los microorganismos.


Una vez que ha sido preparado, un medio de cultivo puede ser inoculado (es decir, se le aaden
organismos) y a continuacin incubado en condiciones que favorezcan el crecimiento microbiano.
El crecimiento de los microorganismos es el cultivo. Un cultivo puro contiene un nico tipo de
microorganismos. Los medios de cultivo deben contener los nutrientes y factores de crecimiento
necesarios y deben estar exentos de cualquier microorganismo contaminante.
Uno de los sistemas ms importante para la identificacin de microorganismos es observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales parpadas en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los microorganismos es el cultivo.
Para que el las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una
serie de condiciones como son: temperatura, grados de humedad y presin de oxigeno adecuadas,
as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los
nutrientes y factores de criamiento necesarios y debe estar exento de todos microorganismos
contaminantes.

Condiciones fsicas de un medio de cultivo

Las condiciones qumicas del medio de cultivo estn cubiertas, el crecimiento y desarrollo de
los microorganismos no tendr lugar si se desconocen las siguientes condiciones fsicas:

Temperatura.

Cada especie tiene su temperatura ptima de crecimiento.


Mesfilos: 35-37C
Psicrfilos: 15-20C
Termfilos: 50-60C
Presin osmtica.

La mayora de las bacterias crece en 0.1 a 1% NaCl. Las halfilas requieren concentraciones
superiores. Para que el las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grados de humedad y presin de oxigeno
adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener
los nutrientes y factores de criamiento necesarios y debe estar exento de todos microorganismos
contaminantes.

Humedad.

Todas bacterias necesitan un ambiente mucho ms hmedo para su desarrollo que los hongos. En
condiciones ambientales adversas, algunas especies producen estructuras de resistencia a la
desecacin llamadas esporas que permanecen viables durante tiempo prolongado hasta que el
ambiente sea propicio para la germinacin.

Luz. Es importante para los microorganismos fotosintticos.

Ph. La mayora de las bacterias crece en medio neutro o ligeramente alcalino (7 7.6)

Cultivar Bacterias en una placa Petri

1. Prepara el agar. El agar es una sustancia gelatinosa que se usa para cultivar bacterias.
Est hecho de un tipo de alga roja que proporciona una superficie de crecimiento ideal
para muchos tipos distintos de bacterias. Algunos tipos de agar contienen nutrientes
aadidos (como la sangre de oveja), lo cual ayuda a promover un crecimiento bacteriano
ms slido.
El tipo de agar ms fcil de usar para este experimento es el agar nutritivo que viene en
forma de polvo. Necesitars 1,2 g (aproximadamente 1/2 cucharadita) de polvo de agar
para cada placa de Petri de 10 cm (4 pulgadas) que deseas usar.
En un plato o bol resistente al calor, mezcla 1/2 cucharadita de agar nutritivo en polvo con
60 ml (aproximadamente 1/4 taza) de agua caliente. Multiplica estas cantidades por la
cantidad de placas de Petri que planeas usar.

Coloca el bol o plato en el microondas y ponlo a hervir durante 1 minuto, vigilndolo para
asegurarte de que la solucin de agar no hierva en exceso.

Una vez que la solucin est lista, el polvo de agar debe estar disuelto por completo y el
lquido debe ser claro.

Deja enfriar la solucin de agar durante varios minutos antes de proseguir.

2. Prepara las placas de Petri.

Las placas de Petri son recipientes pequeos de base plana que estn hechos de plstico o
vidrio transparente. Estn constituidas de dos mitades: una tapa y una base, las cuales
encajan entre s. Esto protege el contenido del aire contaminado indeseable, pero tambin
permite que escapen los gases que producen las bacterias.

Las placas de Petri deben estar bien esterilizadas antes de usarlas para cultivar bacterias;
de otro modo, los resultados del experimento podran verse afectados. Las placas de Petri
recin compradas deben venir esterilizadas y selladas en empaques de plstico.

Saca la placa de Petri de su paquete y separa las dos mitades. Con mucho cuidado, vierte
la solucin de agar caliente en la mitad inferior de la placa de Petri, solo lo suficiente para
formar una capa por encima del fondo de la placa.

Vuelve a colocar rpido la mitad superior de la placa de Petri para evitar que las bacterias
transmitidas por el aire contaminen el experimento. Reserva la placa de Petri durante 30
minutos a 2 horas, hasta que la solucin de agar se enfre y se endurezca (cuando est lista,
se parecer a gelatina cuajada).

3. Refrigera las placas de Petri hasta que estn listas para su uso.

Si no planeas usar de inmediato las placas de Petri llenas de agar, debes almacenarlas en el
refrigerador hasta que ests listo para continuar con el experimento.

Guardar las placas de Petri en el refrigerador evita que se evapore el agua al interior de
ellas (las bacterias necesitan un ambiente hmedo para crecer). Tambin permite que la
superficie del agar se endurezca ligeramente, lo cual evita que la rasgues o le hagas hueco
al momento de trasladar tus muestras de bacterias.

Al momento de guardar las placas de Petri en el refrigerador, debes colocarlas boca abajo.
Esto ayudar a evitar que cualquier condensacin de agua en la tapa gotee sobre el agar e
interrumpa la superficie en crecimiento.

Las placas de Petri llenas de agar se conservarn el refrigerador hasta un par de meses.
Cuando ests listo para usarlas, retralas del refrigerador y deja que alcancen la
temperatura ambiente antes de introducir tus muestras.

4. Introduce las bacterias en las placas de Petri.

Una vez que la solucin de agar se haya endurecido y las placas de Petri estn a temperatura
ambiente, ya ests listo para la parte divertida: introducir las bacterias. Hay un par de mtodos
para hacerlo: el contacto directo o la recoleccin de muestras.

Contacto directo: es el traslado de las bacterias a la placa de Petri usando el contacto


directo, por ejemplo, tocando el agar. Una de las formas ms comunes de hacerlo es
simplemente presionar ligeramente la yema de tu dedo (ya sea antes o despus de lavarte
las manos) sobre la superficie del agar.
Recoleccin de muestras: con este mtodo, puedes recolectar bacterias de casi cualquier
superficie y trasladarlas a la placa de Petri; lo nico que necesitas son algunos hisopos.
Simplemente toma un hisopo y psalo sobre cualquier superficie que se te ocurra (el
interior de tu boca, un picaporte, las teclas del teclado de tu computadora o los botones de
tu control remoto), luego psalo por la superficie del agar (sin rasgarla). Estos lugares
albergan muchas bacterias y deben proporcionar algunos resultados interesantes (y
desagradables) en un par de das.

Si deseas, puedes colocar ms de una muestra de bacterias en cada placa de Petri. Lo nico
que necesitas hacer es dividir la placa en cuadrantes (cuartos) y colocar una muestra
distinta de bacterias en cada uno de ellos.

5. Etiqueta y sella las placas de Petri.

Una vez que hayas introducido las bacterias, debes volver a colocar la tapa en la placa de Petri y
sellarla con un poco de cinta adhesiva.

Asegrate de etiquetar cada placa de Petri con el nombre de la fuente de las bacterias que
contiene, de otro modo no sabrs cul es cul. Puedes hacerlo usando un poco de cinta
adhesiva y un marcador.

Como una medida de precaucin adicional, puedes colocar cada placa de Petri en una
bolsa con cierre hermtico. Esto proporcionar una capa adicional de proteccin contra
las colonias de bacterias peligrosas que podran desarrollarse, pero an te permitir ver el
contenido de la placa de Petri.

Coloca las placas de Petri en un lugar oscuro y clido. Deja las placas de Petri en un lugar
oscuro y clido donde las bacterias puedan desarrollarse sin perturbaciones, durante varios
das. No olvides almacenarlas boca abajo, de modo que las gotas de agua no interrumpan
el crecimiento de las bacterias.
La temperatura ideal para el crecimiento de las bacterias es entre 20 y 37 C (70 y 98 F).
Si es necesario, puedes colocar las placas de Petri en un lugar fro, pero las bacterias
crecern con mayor lentitud.

Deja que las bacterias se desarrollen durante 4 a 6 das, ya que eso les dar a los cultivos
suficiente tiempo para crecer. Una vez que las bacterias empiecen a crecer, podras notar
un olor particular que proviene de las placas.

SIEMBRAS DE CEPAS

Materiales

Mandil Pipeta de 10 ml.


Cofia Mecheros.
Guantes de ltex Algodn
Mascarilla Gaza.
Autoclave. Alcohol antisptico.
Cocineta. Caja Petri.
Papel aluminio. Agua de peptona.
Agua destilada. Papel empaque
Matraz Erlenmeyer de 250 o Saburadestroza
300ml. Caja Petri con el cultivo a
Probeta de 100 o 250 ml. purificar del higo

METODOLOGA

MTODOS Y TCNICAS DE ESTERILIZACIN


Esterilizacin es el proceso mediante el cual se matan o eliminan todas las formas de vida microbiana.
Mtodos fsicos
Calor

La utilizacin de este mtodo y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de exposicin y la


temperatura. Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la accin del calor

Calor Hmedo

El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Este efecto se debe


principalmente a dos razones:

El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas son producidas por
reacciones que eliminan agua.
El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms elevado que el aire.

Autoclave

Se realiza la esterilizacin por el vapor de agua a presin. Esteriliza a 120 a una atmsfera de presin
(estas condiciones pueden variar) y se deja el material durante 20 a 30 minutos.

Equipo

Consta de una caldera de cobre, sostenida por una camisa externa metlica, que en la parte inferior recibe
calor por combustin de gas o por una resistencia elctrica, esta se cierra en la parte superior por una tapa
de bronce. Esta tapa posee tres orificios, uno para el manmetro, otro para el escape de vapor en forma
de robinete y el tercero, para una vlvula de seguridad que funciona por contrapeso o a resorte.

Funcionamiento:

Se coloca agua en la caldera, procurando que su nivel no alcance a los objetos que se disponen sobre una
rejilla de metal. Se cierra asegurando la tapa, sin ajustar los bulones y se da calor, dejando abierta la
vlvula de escape hasta que todo el aire se desaloje y comience la solidificacin de vapor en forma de
chorro continuo y abundante.
Tyndalizacin

Esterilizacin por accin discontinua del vapor de agua, se basa en el principio de Tyndal Las bacterias
que resisten una sesin de calefaccin, hecha en determinadas condiciones, pueden ser destruidas cuando
la misma operacin se repite con intervalos separados y en varias sesiones. Se efecta por medio de la
autoclave de Chamberland, dejando abierta la vlvula de escape, o sea funcionando a la presin normal.
Rpido calentamiento y penetracin

Calor seco Produce desecacin de la clula, es esto txicos por niveles elevados de electrolitos, fusin
de membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los
microorganismos que estn en contacto con stos.

La accin destructiva del calor sobre protenas y lpidos requiere mayor temperatura cuando el material
est seco o la actividad de agua del medio es baja.

Estufas Es una doble cmara, el aire caliente generado por una resistencia, circula por la cavidad
principal y por el espacio entre ambas cmaras, a temperatura de 170 C para el instrumental metlico y
a 140 C para el contenido de los tambores.

Se mantiene una temperatura estable mediante termostatos de metal, que al dilatarse por el calor, cortan
el circuito elctrico.

Mtodos Qumicos
Con aldehdos Son agentes alquilantes que actan sobre las protenas, provocando una modificacin
irreversible en enzimas e inhiben la actividad enzimtica. Estos compuestos destruyen las esporas.
Glutaraldehdo Consiste en preparar una solucin alcalina al 2% y sumergir el material a esterilizar de
20 a 30 minutos, y luego un enjuague de 10 minutos.
Este mtodo tiene la ventaja de ser rpido y ser el nico esterilizante efectivo fro. Puede esterilizar
plstico, goma, vidrio, metal, etc.
Formaldehdo Se utilizan las pastillas de para formaldehido, las cuales pueden disponerse en el fondo
de una caja envueltas en gasa o algodn, que despus pueden ser expuesta al calor para un rpida
esterilizacin (accin del gas formaldehdo). Tambin pueden ser usadas en Estufas de Formol, que son
cajas de doble fondo, en donde se colocan las pastillas y se calienta hasta los 60
Esterilizacin por gas-plasma de Perxido de Hidrgeno
Es proceso de esterilizacin a baja temperatura la cual consta en la transmisin de perxido de hidrgeno
en fase plasma (estado entre lquido y gas), que ejerce la accin biocida.
Dispositivos empleados en la transferencia de muestras microbianas:
Los utensilios utilizados para la transferencia de muestras son los siguientes:
Hisopo, pipeta (para uso microbiolgico son terminales y la parte superior o boquilla debe estar protegida
con filtro de algodn), pipeta pasteur, cable de Kolle o portasa con alambre de platino dispuesto en forma
de: aguja, asa, esptula y/o gancho.
En la transferencia de microorganismos se emplean agujas, asas de inoculacin, hisopos, pipetas o pipetas
pasteur que debern esterilizarse previamente. La utilizacin de estos dispositivos, as como de los
diferentes medios de cultivo tienen aplicaciones especficas. Por ejemplo:
Los medios lquidos se preparan en tubos o matraces que se cubren con tapones de algodn o tapones
especiales. Un cultivo lquido puede ser transferido mediante un asa microbiolgica, un hisopo, pipeta o
pipeta pasteur; el inculo se deposita dentro del caldo o medio lquido. En este tipo de cultivos los
microorganismos presentan un desarrollo particular que se manifiesta en la superficie o a travs de todo
el lquido. Una de las ventajas que presenta este tipo de cultivo se refiere a la posibilidad de agitarlos
acelerando la velocidad de microorganismos anaerobios, por otra parte, en este tipo de cultivos, las
poblaciones se encuentran suspendidas y es fcil homogenizarlas, lo que permite estandarizar la
concentracin del inculo. La desventaja que presentan es que en ellos es difcil detectar contaminacin
a simple vista.
Los medios semislidos se preparan en tubos, se inoculan con aguja de siembra (asa recta) o pipeta
pasteur; en este ltimo caso es necesario calentar el medio y cuando se encuentra en estado lquido y a
una temperatura de aproximadamente 42C se agrega el inculo, se homogeniza y se deja solidificar.
Estos medios se emplean para estudiar la movilidad de los microorganismos y para favorecer la
separacin de microorganismos con diferentes requerimientos de oxgeno.
Los medios slidos se preparan en tubos o matraces dependiendo de la cantidad o de las necesidades,
despus de esterilizarlos, estos se inclinan o vierten en cajas de Petri. La siembra se realiza con el asa,
inoculando la superficie del agar con mucha suavidad; en estos medios, los microorganismos al
multiplicarse forman agregados que se hacen visibles a simple vista; a estos agregados se les denominan
colonias, las que presentan caractersticas que varan con el tipo de microorganismo cultivado y el medio
de cultivo empleado. En cualquier medio de cultivo es de primordial importancia ajustar el pH, ya que
aun cuando la mayora de los microorganismos crecen mejor en pH neutro, algunos requieren de pH
alcalino o cido, por lo que al proporcionar un pH adecuado se favorecer el crecimiento del
microorganismo de inters y la obtencin del cultivo. Con este mismo propsito durante la incubacin
se deben proporcionar las condiciones adecuadas para el microorganismo en estudio. El crecimiento
ptimo de los microorganismos se presenta a temperaturas que la mayora de las veces estn relacionadas
con la de su hbitat natural. Algunos microorganismos crecen por debajo de 15C, otros requieren
temperaturas ms elevadas (30 a 45C) y algunos hasta 80C. Para alcanzar y mantener estas temperaturas
se puede usar una incubadora microbiolgica o un bao de agua a temperatura constante, en tanto que
para los microorganismos que presentan su crecimiento ptimo a temperaturas entre 20 y 25C se pueden
incubar en la gaveta o cajn del laboratorio, a temperatura ambiente. En general las incubadoras
microbiolgicas satisfacen las necesidades en cuanto a los rangos de temperatura requeridas por los
microorganismos. La desventaja que tienen es que estos aparatos funcionan con are seco, lo que
determina la deshidratacin de los medios de cultivo. Por lo tanto, el crecimiento de cualquier cultivo
experimental que se realice en incubadora no debe prolongare por ms de nueve das.
Con relacin a las necesidades gaseosas, no todos los microorganismos crecen en presencia de oxgeno
atmosfrico; los que slo crecen en presencia de are se llaman aerobios obligados; los que slo crecen
en ausencia de oxgeno se denominan anaerobios obligados o estrictos, un tercer grupo se adapta a las
dos condiciones y se le conoce como facultativos. Existe una cuarta categora que comprende bacterias
que requieren oxgeno, pero slo lo utilizan cuando ste existe en concentraciones reducidas; a estos se
les llama microaeroflicos.
El desarrollo de estos diferentes grupos se favorece mediante la agitacin de los cultivos o mediante la
exclusin de oxgeno para lo que se emplean sustancias reductoras o equipos especiales. Las bacterias
son organismos procariticos, se encuentran ampliamente distribuidas en la naturaleza, habitan en el
agua, el suelo, en la superficie o en el interior de plantas y animales incluyendo al hombre. Pueden vivir
en forma libre o en simbiosis con otros organismos, ya sea como parsitos, comensales o mutualistas.
Fisiolgicamente este grupo presenta caractersticas muy variables, hay bacterias mviles e inmviles
fotosintticas y quimio trficas, auttrofas y hetertrofas; se desarrollan en un rango muy amplio de
temperatura, pH y condiciones gaseosas. En el estudio de cultivos bacterianos algunos de los criterios
que se emplean para caracterizarlas incluyen: tamao, morfologa celular, forma de agrupacin, reaccin
a la tincin de Gram, formacin de esporas, movilidad, presencia de inclusiones de reserva y
caractersticas culturales en medios lquidos y slidos en los que presentan patrones de desarrollo en
cuanto a la forma, tamao, elevacin y color de las colonias.
Tcnicas de siembra
Mtodo de siembra por estra en placa
Es el mtodo ms fcil y el ms usado para obtener cultivos axnicos. Para ello, con un asa de siembra
se toma una muestra de la poblacin mixta y a continuacin se hacen estras sobre la superficie de un
medio slido preparado en una placa Petri (a las placas Petri tambin se les denomina simplemente
placas). Conforme se van haciendo estras en zigzag con el asa, cada vez se van depositando en la
superficie del medio menos microorganismos. A continuacin, se flamea el asa, se toca en la regin
donde se han realizado las ltimas estras y se contina la siembra con la misma tcnica, en la superficie
de medio sin sembrar an. Repitiendo este proceso varias veces se logra separar clulas individuales. A
continuacin, las placas se incuban en un lugar adecuado, permitiendo que las clulas aisladas
experimenten un nmero suficiente de divisiones para formar colonias visibles. Aunque cada colonia
posiblemente representa un clon derivado de una sola clula, no podemos asegurarlo. Quizs, dos clulas
quedaron depositadas tan juntas que han originado una nica colonia mixta. Por tanto, para asegurarnos
de que hemos obtenido un cultivo axnico, conviene repetir el procedimiento a partir de una colonia bien
aislada en la primera placa. Las colonias que se desarrollen la segunda vez sern, casi con toda seguridad,
cultivos axnicos.
Mtodos de vertido en placa y extensin en placa
En estos mtodos, las suspensiones de clulas microbianas se diluyen antes de su siembra en placa. Se
siguen estas tcnicas cuando la muestra contiene tantos microorganismos, que la dilucin no se puede
realizar en una sola etapa. Por ejemplo, una suspensin con mil millones de clulas por mililitro debe ser
diluida 10 veces para obtener una suspensin con un centenar de clulas por mililitro, Por tanto, se
realizan diluciones seriadas (en varias etapas), normalmente de diez en diez, pero a veces de cien en cien.
Para realizar diluciones de diez en diez, se aade 1 ml de la suspensin bacteriana a 9 ml (de medio estril
o solucin salina, igualmente estril. Se agita vigorosamente para diluir las clulas y el proceso se repite
cuantas veces sea necesario. A continuacin, se puede proceder de dos maneras diferentes. En el mtodo
de vertido en placa, las muestras diluidas se mezclan con agar fundido y se vierten en placa. Algunas
colonias quedarn embebidas en el agar y otras crecern en la superficie. Las colonias superficiales se
extendern y sern ms grandes.
En el segundo mtodo (extensin en placa), las muestras diluidas se siembran directamente en la
superficie de la placa de agar, extendindolas con ayuda de un asa de Diralsky de cristal estril. La
suspensin se absorbe en el agar, dejando las clulas microbianas sobre la superficie. En ambas tcnicas
las placas se incuban hasta la aparicin de las colonias. Como en el mtodo de siembra por estra, no
existe la seguridad de que las colonias que aparecen en las placas sembradas por extensin o en el agar
solidificado sembrado por el mtodo del vertido en placas sean cultivos axnicos hasta que se repita el
proceso. Las dos tcnicas de siembra por dilucin presentan la ventaja de que permiten obtener un mayor
nmero de colonias aisladas que el mtodo de siembra por estra, por tanto, se eligen cuando se ha de
seleccionar una cepa a partir de una mezcla con varios tipos de microorganismos.

PROCEDIMIENTO

a) Preparacin y esterilizacin de materiales de vidrio.


1. Contar la cantidad necesaria de papel aluminio que se utilizara para realizar la esterilizacin de
los materiales de vidrio.

2. Las pipetas las colocamos horizontalmente sobre el papel aluminio y continuamos a envolver,
realizamos esto para que no exista contaminacin hacia la pipeta que no utilizaremos.

3. Las cajas Petri las colocamos una sobre otra siempre con la tapa arriba ya que si la colocamos a
lo contrario al momento de utilizarlas se pueden romper y lo cubrimos con el papel aluminio
totalmente.

4. Procedemos a colocar agua en el autoclave.

5. Colocamos en el autoclave los materiales de vidrio correctamente envueltos hasta que alcance la
temperatura adecuada de 121 C y un tiempo de 30 min ya que sern esterilizados totalmente los
materiales.

6. Se deber Esperar hasta que la temperatura mencionada se reduzca hasta la temperatura ambiente
y continuamos a abrir el autoclave y sacar el material ya esterilizado.
b) Medio de cultivo slido.

1. Observar y leer determinadamente el instructivo del envase para preparar el medio de cultivo
deshidratado de saburadestroza.
2. Realizar los diferentes clculos de la cantidad necesaria para la preparacin.
3. Pesar la cantidad calculada del medio deshidratado de saburadestroza en una balanza. Esta
operacin debe ser rpida para evitar que la humedad del ambiente afecte al resto del contenido
del frasco.
4. Colocamos 4.6 gr de agar nutritivo de saburadestroza en un matraz de 200ml y procedemos a
disolver agitando bien el matraz.

5. Debemos tapar el matraz y calentar hasta que haya una disolucin total, a 9 C para ello debemos
agitar consecutivamente.

6. Continuamos a esterilizar el medio de cultivo en la autoclave a temperatura de 121 C y de


presin durante 30 minutos (dependiendo de la cantidad de material).

7. Transportamos las cajas Petri ya esterilizadas en la cmara de rayos UV y procedemos a colocar


el medio de cultivo esterilizado en las cajas Petri en una poca cantidad.

8. Esperamos a que el medio de cultivo se solidifique en la biomasa.

c) Purificacin de las cepas.


1. Esterilizar un asa de siembra por flameado en la llama de un mechero.
2. Introducirla en la suspensin bacteriana para recoger una muestra.
3. Sembrar haciendo estras sobre la superficie de un medio slido en una placa Petri,
4. Volver a esterilizar el asa, tocar en la zona de la placa ya sembrada y hacer un segundo grupo de
estras en una regin nueva de la placa. Repetir el proceso una tercera y una cuarta vez, hasta
conseguir que los grupos de clulas se diluyan y se separen clulas aisladas.
5. Despus de la incubacin, se desarrollan colonias aisladas. Para estar seguro de que el cultivo es
puro, repetir el proceso entero; para ello tomar una colonia aislada y sembrar por estras una
segunda placa.
PURIFICACION DE CEPAS

Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos de
bacterias, se siembra en un medio de cultivo slido donde las clulas que se multiplican no cambian de
localizacin; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisin binaria una
colonia macroscpica compuesta por decenas de millones de clulas similares a la original. Si esta
colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecer como cultivo puro de un solo tipo de
bacteria. (Luque, 2009)

MATERIALES
Cajas de petri
agar nutritivo(sabouraud dextrosa)
Mechero
Asas de inoculacin
1 incubadora
1 refrigerador
Compaa de flujo laminar
Toallas de papel
Autoclaves
Balanzas analticas
Alcohol antisptico
Muestra del mosto de tomate de rbol.

PROCEDIMIENTO Y METODOLOGIA

MTODOS DE AISLAMIENTO

El aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales se realiza, en la mayora de los casos, mediante
la produccin de colonias aisladas en cultivos slidos. El crecimiento explosivo de las bacterias permite
producir un gran nmero de ellas a partir de una nica clula inicial de forma que, tras un periodo de
incubacin en las condiciones ambientales adecuadas, se produce una colonia observable a simple vista
y formada por individuos iguales (un clon bacteriano).
MTODO DE SIEMBRA POR ESTRA EN PLACA
Es el mtodo ms fcil y el ms usado para obtener cultivos axnicos. Para ello, con un asa de siembra
se toma una muestra de la poblacin mixta y a continuacin se hacen estras sobre la superficie de un
medio slido preparado en una placa Petri (a las placas Petri tambin se les denomina simplemente
placas). Conforme se van haciendo estras en zigzag con el asa, cada vez se van depositando en la
superficie del medio menos microorganismos. A continuacin, se flamea el asa, se toca en la regin
donde se han realizado las ltimas estras y se contina la siembra con la misma tcnica, en la superficie
de medio sin sembrar an. Repitiendo este proceso varias veces se logra separar clulas individuales. A
continuacin, las placas se incuban en un lugar adecuado, permitiendo que las clulas

Aisladas experimenten un nmero suficiente de divisiones para formar colonias visibles. Aunque cada
colonia posiblemente representa un clon derivado de una sola clula, no podemos asegurarlo. Quizs,
dos clulas quedaron depositadas tan juntas que han originado una nica colonia mixta. Por tanto, para
asegurarnos de que hemos obtenido un cultivo axnico, conviene repetir el procedimiento a partir de una
colonia bien aislada en la primera placa. Las colonias que se desarrollen la segunda vez, sern, casi con
toda seguridad, cultivos axnicos.

PROCEDEIMIENTO:

Dividir cada una de las cajas Petri por la parte de atrs en cuatro cuadrantes
Esterilizar el asa con el calor del mechero
Dejar enfriar el asa y tomar la muestra de la colonia
Inocular la muestra haciendo 4 o 5 estrias simples muy juntas de lado a lado por primer cuadrante
de la caja
Flamear el asa de inoculacin y hacer girar la caja un cuarto de vuelta
Abrir la caja y con el asa esterilizarla y fra tocar la superficie recin hechas en un punto alejado
del inicio. Realizar el mismo paso en el tercer cuadrante y en el cuarto cuadrante sin flamear el
asa de siembra har una estra ms abierta.
Las cajas con la base hacia arriba se incuban a 35 grados centgrados durante 24-48 horas.
RESULTADOS Y DISCUCIONES

Las purificaciones realizadas fueron correctamente pues obtuvimos los resultados esperados en nuestras
6 cajas Petri en donde realizamos la siembra por estriado despus de haber seleccionado nuestras sepas
las cuales se las escogi por su color su forma y su tamao. Lo que no pudimos es saber que tipo de
microorganismos contena cada cepa por lo cual a continuacin tenemos los posibles microorganismos
que se pudieran obtener en los cultivos microbiolgicos.
Durante la fermentacin del tomate de rbol los microorganismos que estn presentes y que actan como
fermentadores son levaduras como Sacharomyces sp, bacterias acido lcticas Lactobacillus sp y
diplococos Gram positivos, como Pediococcus sp.
Sacharomyces sp : es un hongo unicelular, un tipo de levadura utilizado industrialmente en la
fabricacin de pan, cerveza y vino. En su ciclo de vida alternan dos formas, una haploide y otra diploide.
Ambas formas se reproducen de forma asexual por gemacin. En condiciones muy determinadas la forma
diploide es capaz de reproducirse sexualmente. En estos casos se produce la meiosis en la clula
formndose un asca que contiene cuatro ascosporas haploides.
Lactobacillus sp: son un gnero de bacterias Gram positivas anaerobias aerotolerantes, denominadas as
debido a que la mayora de sus miembros convierten la lactosa y algunos monosacridos en cido lctico,
dando lugar a la fermentacin lctica.
Habitualmente son benignas e incluso necesarias, habitan en el cuerpo humano y en el de otros animales;
estando presentes, por ejemplo, en el tracto gastrointestinal y en la vagina. Muchas especies son
importantes en la descomposicin de la materia vegetal.
Diplococos: Los diplococos son un conjunto de bacterias que se caracterizan por ser cocos tienen forma
esferica asociados formando parejas de esferas. Entre los diplococos patgenos ms caractersticos
encontramos a:
Streptococcus pneumoniae: Neumococo o diplococo Gram positivo.
Streptococcus pneunoniae NO es estrictamente un diplococo, es un coco en cadena que a veces
se observa en parejas. Actualmente est agrupado dentro de los streptococcus y, como tal, es
gram(+). Los diplococos, clsicamente, son todos gram (-)
Neisseria gonorrhoeae: Diplococo Gram negativo.
Moraxella catarrhalis: Diplococo Gram negativo.
Neisseria meningitidis.

Pediococcus sp.: es un gnero de bacterias del cido lctico Gram-positivas de la familia


Lactobacillaceae. Normalmente se presentan en pares o ttradas, siendo las nicas bacterias del cido
lctico con forma de coco que se dividen a lo largo de dos planos de simetra. Son bacterias puramente
homofermentativas, usualmente consideradas contaminantes de la cerveza y vino aunque en algunas
cervezas tales como la de tipo Lambic es deseable su presencia. Ciertos Pediococcus producen diacetil,
lo que proporciona un aroma a mantequilla o butterscotch a algunos vinos (tales como Chardonnay) y
unos pocos tipos de cerveza. Las especies de Pediococcus a menudo se utilizan en el proceso de
conservacin del forraje denominado ensilado.
Observamos la misma morfologa que las cepas tomadas mayor crecimiento en los resultados de la
levadura Saccharomyces. Sp propio del tomate de rbol.

CONCLUSIN

El tomate tiene sus propias microorganismos presentes y que es de mucho uso industrial como el
de Saccharomyces elipsoideus que sirve para la elaboracin de vino en fin tiene mucgas
caractersticas mismo del fruto el tomate de rbol tiene vitamina c y nutrientes (extracto de
levadura y fosfato acido de amonio) garantiza un aumento del porcentaje de alcohol en la bebida.
Se recomienda la utilizacin de levadura de vino (Saccharomyces cerevisiae) ya que fermenta
ms rpido.

RECOMENDACIONES

Para un mejor resultado se recomienda tener al agar nutritivo apropiado para la determinacin de
levaduras.
Contar con todos los materiales necesarios para acceder a un resultado ptimo
Aplicar las tcnicas de aislamiento ms adecuado para tener resultados ptimos y seguir los pasos
para poder purificar las cepas y tener colonas exactas de las mismas morfologas.
BIBLIOGRAFIA

Tomate de rbol o Tamarillo (en lnea). Disponible en


http://www.victoriananursery.co.uk/vegetable_seeds_and_plants/vegetable
_plants/tamarillo_tree_tomato_plant/l/tamarillo.jpg

Planta de Tomate de rbol (en lnea). Disponible en


http://www.ceniap.gov.ve/ceniaphoy3/articulos/n9/arti/arnal_e2/arti/arnal_e 2.htm

http://www.unne.edu.ar/unnevieja/Web/cyt/cyt/2001/5-Agrarias/A-077.pdf

Microorganismos presentes en el tomate de rbol ( en lnea).disponible en

http://bibliotecadigital.agronet.gov.co/bitstream/11348/6381/1/20061127162055_Interaccion%2
0microorganismo%20antracnosis%20tomate%20de%20arbol.pdf

Microbiologa del tomate (en lnea). Disponible en


http://helvia.uco.es/xmlui/bitstream/handle/10396/9925/2013000000724.pdf?sequence=1

ANEXOS

Imagen 1 imagen 2

La muestra que se va analizar Desinsectacin de la muestra


Imagen 3 imagen 4

Coger la 1 ml de la muestra colocar en agua de pentona

Imagen 5 imagen 6

Mezclamos bien la muestra con el agua de pentona colocamos 1 ml de la muestra con agua de

pentona en las cajas petri

Imagen 7 imagen 8

Listo para poner en incubacin resultados obtenidos levaduras