AGUAS CONTAMINADAS

LIGADAS A LAS ULCERAS

ESTOMACALES
 UNIVERSIDAD NACIONAL JOS FAUSTINO SNCHEZ CARRIN

FACULTAD DE INGENIERIA AGRARIAS, INDUSTRIAS ALIMENTARIAS Y

AMBIENTAL
ESCUELA ACADEMICA PROFESIONAL INGENIERIA
AMBIENTAL

Asignatura :
Tratamiento De Aguas Industriales

Docente :
Ing. Nunja
Tema : Aguas Contaminadas Ligadas A Las Ulceras Estomacales

Integrantes :
CARBAJAL SOLIS, YAJHAIRA.

PINEDA DOMINGO, DEYSI.

Ciclo :
VII

HUACHO-PERU

2017
 ndice
INTRODUCCIN ............................................................................................................................... 4
PROBLEMA GENERAL...................................................................................................................... 5
PROBLEMAS ESPECFICOS............................................................................................................. 5
OBJETIVO GENERAL ........................................................................................................................ 5
OBJETIVOS ESPECFICOS ............................................................................................................... 5
MARCO TERICO ............................................................................................................................. 6
AGUAS CONTAMINADAS LIGADAS A LAS ULCERAS ESTOMACALES ....................................... 6
Definicin de lcera ........................................................................................................................ 6
Causas de las lceras ...................................................................................................................... 6
Sntomas de la lcera pptica ......................................................................................................... 6
Sntomas de emergencia .................................................................................................................. 7
BASES FISIOPATOLGICAS DE LA LCERA PPTICA O GSTRICA ........................................ 7
Formas ms comunes de lceras ppticas (UP) ............................................................................. 7
1. lcera inducida por AINE. ................................................................................................. 7
2. lcera inducida por estrs. ................................................................................................. 7
3. lcera inducida por Helicobacter pylori. ........................................................................... 8
Descripcin general ........................................................................................................................ 9
Fuentes y prevalencia.................................................................................................................... 10
Vas de exposicin ......................................................................................................................... 10
Relevancia de su presencia en el agua de consumo ...................................................................... 10
Efectos sobre la salud humana...................................................................................................... 10
Transmisin por aguas .................................................................................................................. 10
CMO SE CONTRAE LA INFECCIN? ................................................................................... 11
CMO SE DIAGNOSTICA LA INFECCIN? ........................................................................... 12
Deteccin y aislamiento por cultivo .............................................................................................. 12
Separacin inmunomagntica (IMS) ............................................................................................. 13
Tratamiento cido ......................................................................................................................... 15
PRESENCIA DE HELICOBACTER PYLORI EN AGUA POTABLE ............................................... 16
Evaluacin del mtodo de recuperacin de H. pylori tras filtrado ............................................... 16
1. Metodologa de Rotacin: ................................................................................................. 16
2. Metodologa de Raspado: ................................................................................................. 16
3. Metodologa de Flujo invertido: ....................................................................................... 16
PRESENCIA DE HELICOBACTER PYLORI EN AGUA RESIDUAL .............................................. 19
Deteccin e identificacin mediante Hibridacin in situ con sondas fluorescentes (FISH) ......... 19
 Fijacin de las muestras ............................................................................................................... 19
Condiciones de hibridacin .......................................................................................................... 19
Sondas de hibridacin ................................................................................................................... 20
FISH de H. pylori a partir de muestras ........................................................................................ 22
QU HAY QUE HACER PARA ELIMINAR LA BACTERIA? .................................................... 23
CONCLUSIONES ............................................................................................................................. 24
REFERENCIAS ................................................................................................................................. 25
INTRODUCCIN
El agua es smbolo de vida, ya que sin ella no existira vida alguna, pero en la actualidad este smbolo
de vida est siendo alterado por residuos generados por una serie de actividades, actividades que
realizan los seres humanos para satisfacer sus necesidades (industria, minera, agricultura,
ganadera, etc.).
El control de riesgos biolgicos originados por bacterias o virus patgenos en el agua supone un
importante reto para la promocin de la salud y la prevencin en Salud Pblica.
A nivel mundial, las enfermedades transmitidas a travs de aguas contaminados representan un
problema que en las ltimas dcadas se ha complicado considerablemente. Entre los factores
determinantes se pueden sealar, entre otros, el crecimiento de la poblacin, la urbanizacin en los
pases subdesarrollados, la pobreza, la limitacin de recursos naturales y la demanda de produccin
de alimentos.
Durante siglos el hombre ha utilizado los recursos hdricos, tanto superficiales como subterrneos,
si bien su aprovechamiento no afectaba de modo decisivo al ciclo hdrico. La industrializacin, el
crecimiento de la poblacin y las exigencias crecientes de la sociedad han incrementado de manera
espectacular los usos del agua, incidiendo negativamente en su calidad y en su capacidad natural de
autopurificacin. La naturaleza, a travs del ciclo del agua, acta limpindola como si fuese un filtro
natural; sin embargo, en la actualidad este proceso natural no es suficiente para eliminar todos los
vertidos contaminantes existentes en ella. Un agua de calidad que satisfaga las necesidades humanas
es un recurso cada vez ms escaso, y su posesin constituye un factor esencial de civilizacin, ya que
es un recurso bsico de valor insustituible para la vida
La escasez de recursos hdricos naturales en zonas ridas y semiridas, como es el caso de las
regiones mediterrneas, constituye un grave problema para la poblacin asentada en ellas, en las
que el incremento de la poblacin unido a una escasa pluviometra, irregularmente distribuida en el
tiempo, y a unos limitados recursos superficiales, estn llevando al agotamiento o al deterioro
irreversible de los recursos subterrneos. Por otra parte, muchos de los ros que sirven como fuentes
de agua potable transportan cantidades variables de aguas de desecho, que se ven incrementadas en
los periodos en los que el caudal disminuye. La rpida urbanizacin de los pases desarrollados y de
los que se encuentran en va de desarrollo ha dado lugar a problemas graves en el suministro de
agua y en la eliminacin de desechos.
Debido a la creciente demanda de fuentes de agua utilizable, por el aumento de la poblacin mundial
y la continua expansin de la industria, la reutilizacin de las aguas residuales urbanas perfila como
una fuente adicional de agua merecedora de ser tenida en cuenta en la gestin global de los recursos
hdricos.
Las aguas residuales sin tratar suponen un foco de contaminacin importante para el medio
ambiente, por lo que se hace necesaria la depuracin de stas para su posterior vertido o
reutilizacin. El acceso a fuentes mejoradas de agua potable y un mayor control de los vertidos de
aguas residuales domsticas han sido los mayores logros alcanzados por la comunidad internacional
en los ltimos 10 aos. Ms de 2.5 mil millones de personas han obtenido suministros desde 1990, y
un 91% de la poblacin mundial goza ahora de agua potable de mejor calidad, segn datos de la
Organizacin Mundial de la Salud.
En pases en vas de desarrollo el agua juega un gran papel en la transmisin de enfermedades
causadas por microorganismos. La principal razn de esta situacin es el alto coste que representa
la puesta a punto de procesos de tratamiento y el mantenimiento de infraestructuras apropiadas que
permitan el control sanitario.
La construccin de sistemas de saneamiento y potabilizacin de agua ha supuesto un triunfo en la
lucha contra enfermedades de transmisin hdrica. Pero el agua potable que circula por estos
sistemas de distribucin en los centros urbanos en ocasiones presenta niveles de contaminacin,
aunque bajos, de patgenos y sustancias causantes de enfermedades. Por ello, se hace necesario una
continua vigilancia de los sistemas de distribucin de agua potable para evitar riesgos en la salud
de la poblacin que la consume. Esto est forzando a los suministradores y a la comunidad
investigadora a mejorar el control de la calidad del agua dentro de los sistemas de distribucin y a
buscar nuevas alternativas de tratamiento.

PROBLEMA GENERAL
Como influye las aguas contaminadas en la aparicin de ulceras estomacales en la
poblacin

PROBLEMAS ESPECFICOS
Otras infecciones a causa del consumo de aguas contaminadas
Otras causas de las ulceras estomacales
Grado de dao en la poblacin

OBJETIVO GENERAL
Identificar que microorganismo y/o sustancia, presentes en las aguas contaminadas, causa
la aparicin de las ulceras estomacales

OBJETIVOS ESPECFICOS
Identificar qu tipo de agua contaminada presenta el microorganismo y/o sustancia que
causa las ulceras
Que otras enfermedades puede causar este microorganismo al ingerirlo
Como poder identificar la presencia de este microorganismo en las aguas que ingerimos
Tratamiento a las aguas contaminadas con esta sustancia y/o microrganismo causante de
las ulceras
MARCO TERICO
AGUAS CONTAMINADAS LIGADAS A LAS ULCERAS ESTOMACALES
Definicin de lcera
Una lcera es una prdida de sustancia, es decir una erosin circunscrita de la superficie cutnea
o mucosa que tiene poca tendencia a curar mediante el proceso de granulacin y cicatrizacin, por
el contrario, tiende a extenderse en superficie y a profundizar.

Figura 1: Diferentes capas del estmago. La lcera pptica afecta, al menos, la muscular de la
mucosa, y no sobrepasa la muscular propia

Causas de las lceras

La lcera puede estar provocada por numerosas causas:

Fsicas: quemaduras, congelaciones, radiaciones, etc.

Qumicas: sustancias custicas.
Microbianas: ulceracin de ndulos tuberculosos, de sifilomas, etc.

Sntomas de la lcera pptica

Malestar abdominal es el sntoma ms comn, tanto de las lceras duodenales como las
gstricas.
Este malestar se siente en cualquier lugar entre el ombligo y el esternn y usualmente es un
dolor sordo o ardiente
se presenta cuando el estmago esta vacoentre las comidas o durante la noche
se puede aliviar brevemente al ingerir alimento, en el caso de las lceras duodenales, o al
tomar anticidos tanto para la lcera pptica como la duodenal
dura de minutos a horas
va y viene por varios das o semanas

Puede haber otros sntomas que incluyen

prdida de peso
falta de apetito
hinchazn
eructos
 nuseas
vmitos
Algunas personas presentan tan slo sntomas leves o no presentan sntomas.

Sntomas de emergencia
Una persona que tenga cualquiera de los siguientes sntomas debe llamar inmediatamente a un
mdico:

dolor de estmago agudo, repentino, persistente e intenso

heces sanguinolentas o negras
vmito con sangre o vmito que parece poso de caf
Estos sntomas de alarma pueden ser seales de un problema grave, tal como
Hemorragia: cuando el cido o la lcera pptica rompe un vaso sanguneo
Perforacin: cuando la lcera pptica perfora totalmente la pared del estmago o el duodeno
Obstruccin: cuando la lcera pptica bloquea el trayecto de los alimentos tratando de salir
del estmago

BASES FISIOPATOLGICAS DE LA LCERA PPTICA O GSTRICA

Formas ms comunes de lceras ppticas (UP)
Las tres formas ms comunes de lceras ppticas (UP) son: la asociada a la infeccin por
Helicobacter pylori, la causada por AINE y la lcera por estrs.
1. lcera inducida por AINE.
Este tipo de lesiones se establecen a consecuencia de la administracin de estos frmacos
incluso a bajas dosis, a corto, medio y largo plazo, pudindose presentar stas, con diferentes
intensidades estando en relacin con la composicin qumica del frmaco y las condiciones
especficas de cada paciente.
Las propiedades fisicoqumicas y el mecanismo de accin de estos frmacos, estn
directamente implicados en la patogenia de las lesiones gastrointestinales, al inhibir la
sntesis de prostaglandinas (PG). Las PG tienen un efecto citoprotector de la mucosa
gstrica ya que aumentan, la secrecin de mucus, la secrecin de bicarbonato, el flujo
sanguneo y la restauracin epitelial. Por tanto, su inhibicin altera los mecanismos de
proteccin y permite que los cidos biliares, la pepsina y el cido clorhdrico ataquen a la
mucosa.
Las lesiones originadas en la mucosa gastroduodenal se producen por tanto, por un efecto
txico local dependiente de las propiedades fisicoqumicas del frmaco, y por un efecto
txico sistmico tras la absorcin y activacin heptica del frmaco, mediado ste por el
mecanismo de accin farmacolgico que es la inhibicin de la sntesis de PG.
2. lcera inducida por estrs.
Se suele dar en pacientes politraumatizados y en grandes quemados, enfermos con
hipertensin endocraneal, despus de una ciruga muy mutilante, en pacientes con sepsis y
 en aquellos que han sufrido un shock hemorrgico. Aparece tambin en enfermos sometidos
a ventilacin mecnica y en general en los pacientes ingresados en unidades de cuidados
intensivos con motivo de enfermedades graves.
Estas lesiones son indistinguibles de las anteriores y adems poseen una incidencia mucho
menor. Los factores psicolgicos son slo agentes precipitantes
Algunos autores han descrito un tipo de personalidad en el que las personas diagnosticadas
de lcera, poseen una mayor dificultad para superar las situaciones adversas pero no est
del todo confirmado.
3. lcera inducida por Helicobacter pylori.
Helicobacter pylori es un bacilo espiral flagelado Gram () que se adquiere principalmente
en la infancia , productor de ureasa que se encuentra en el estmago de cerca del 90 - 95%
de los pacientes con ulcera duodenal (UD) y del 60-80% de aquellos con lceras gstricas
(UG), adems la infeccin por este germen es la ms frecuente a escala mundial.
En pases desarrollados las tasas de prevalencia varan segn cohorte de nacimiento y clase
social. As las tasas de prevalencia tienden a ser mucho mayores ( del 50% al 80%) en los
nacidos antes de 1950, en comparacin con la tasas de los nacidos ms recientemente (menos
del 20%) . En muchos pases en vas de desarrollo la infeccin an tiene una prevalencia
muy alta (del 80% al 95%), independientemente del periodo de nacimiento.
Existe una alta prevalencia de esta infeccin entre la poblacin, sin embargo no todos los
infectados desarrollarn lceras o gastritis, sino que la mayora pueden estar asintomticos
durante toda su vida. Se sabe que Helicobacter pylori slo puede colonizar el epitelio de tipo
gstrico. Su capacidad de adhesin a la superficie del epitelio celular le permite quedar
situado por debajo de la capa de moco y debido a su actividad ureasa, que hidroliza la urea
y la transforma en amonio, puede crear un microentorno alcalino que le permite sobrevivir
en el estmago, adems el 60% de las cepas de Helicobacter pylori secretan toxinas
vacuolizantes.
Actualmente se ha demostrado que la infeccin por Helicobacter pylori acta modificando
la secrecin de cido en el estmago. Este microorganismo coloniza preferentemente el antro
gstrico, donde provoca una disminucin de la concentracin de somatostatina y una
disminucin de la poblacin de clulas D (productoras de somatostatina). Por este motivo,
se pierde el efecto inhibitorio sobre la gastrina, con la consiguiente hipergastrinemia que
origina un aumento de clulas parietales y un aumento de la secrecin cida.
De hecho, se ha demostrado que tanto la secrecin cida basal como la estimulada por la
pentagastrina se encuentra aumentada en pacientes con UD e infeccin por Helicobacter
pylori cuando se compara con pacientes no infectados o con infectados asintomticos. An
no se conoce el mecanismo de transmisin de la bacteria, aunque hay dos vas que son las
ms aceptadas:
1. La va oral-oral: a travs de la saliva y secreciones del estmago, que es la forma
ms frecuente en Espaa.
2. La va fecal-oral: a travs del consumo de agua contaminada con residuos fecales
o alimentos regados con aguas no depuradas.
Figura2. Distribucin de la infeccin de H. pylori en la poblacin mundial, vinculada con el grado
de desarrollo econmico, (www.helico.com, 2014).

Helicobacter pylori
Descripcin general
Helicobacter pylori, que originalmente se clasific como Campylobacter pylori, es una bacteria
gramnegativa, microaerfila, espiral y mvil. Hay al menos catorce especies de Helicobacter, pero
slo H. pylori tiene capacidad patgena comprobada para el ser humano.

Figura 3: bacteria Helicobacter pylori

Fuentes y prevalencia
El ser humano es, al parecer, el hospedador definitivo de H. pylori. y otros posibles hospedadores
son los gatos domsticos. Hay pruebas de que H. pylori es sensible a las sales biliares, lo cual
disminuira la probabilidad de excrecin por va fecal, aunque se ha aislado en las heces de nios
de corta edad. Helicobacter pylori se ha detectado en el agua. Aunque es poco probable la
proliferacin de H. pylori en el medio ambiente, se ha comprobado su supervivencia durante tres
semanas en biopelculas y hasta 20 a 30 das en aguas superficiales. En un estudio realizado en los
EE. UU. se encontr H. pylori en la mayora de las muestras de aguas superficiales y de aguas
subterrneas poco profundas. No se determin correlacin entre la presencia de H. pylori y la de E.
coli. La contaminacin del medio ambiente puede producirse por las heces de nios con diarrea o
los vmitos de nios y tambin de adultos.

Vas de exposicin
El contacto entre personas dentro de las familias se ha sealado como la fuente de contagio ms
probable, por transmisin oral-oral. Helicobacter pylori puede sobrevivir fcilmente en mucosidades
o vmitos; sin embargo, es difcil de detectar en muestras bucales o fecales. Tambin se considera
posible la transmisin fecal-oral.

Relevancia de su presencia en el agua de consumo

Se ha sugerido que el consumo de agua contaminada es una fuente potencial de infeccin, pero se
necesitan estudios adicionales para establecer un posible vnculo con la transmisin por el agua. El
ser humano es la fuente principal de H. pylori y el microorganismo es sensible a los desinfectantes
oxidantes. Por lo tanto, para proteger las aguas de consumo de H. pylori pueden aplicarse las
medidas de control siguientes: prevencin de la contaminacin por residuos humanos y desinfeccin
adecuada. El anlisis de Escherichia coli (o bien de coliformes termotolerantes) no es un ndice fiable
de la presencia o ausencia de este microorganismo.

Efectos sobre la salud humana

Helicobacter pylori se encuentra en el estmago y, aunque la mayora de las infecciones son
asintomticas, el microorganismo se ha asociado con gastritis crnica, que puede producir
complicaciones como lceras ppticas o duodenales y cncer de estmago, aunque todava no est
claro si el microorganismo es realmente la causa de estas enfermedades. La mayora de las
infecciones por H. pylori se inician en la infancia y, si no se tratan, son crnicas. Las infecciones
tienen una mayor prevalencia en pases en desarrollo y se asocian con condiciones de
superpoblacin. Son frecuentes las agrupaciones interfamiliares de casos.

Transmisin por aguas

Aunque el nicho natural de H. pylori es el estmago humano, para su transmisin indirecta el
organismo necesita sobrevivir en el medio ambiente externo. Mientras que la principal ruta de
transmisin queda lejos de estar clara, la prevalencia de la infeccin por H. pylori muestra una fuerte
correlacin con el acceso al agua. La transmisin de H. pylori por el agua puede ser particularmente
importante en regiones del mundo donde la calidad del agua es baja, pudiendo ocasionar la
diferencia de prevalencia de H. pylori entre pases desarrollados y en vas de desarrollo
Se han realizado numerosos estudios epidemiolgicos para determinar el poder del agua como fuente
de transmisin de H. pylori. Bunn et al. (2002) realizaron estudios en 65 nios nacidos en una zona
rural de Keneba, en Gambia (africa), donde la disponibilidad de agua se redujo inesperadamente y
se procedi al empleo de aguas superficiales como agua de bebida. Durante el primer ao, la
proporcin de nios infectados por H. pylori aument de tal forma que el 85% de los bebs dieron
positivo al test de la urea. Cuando la calidad del agua y la accesibilidad fue restaurada, H. pylori
fue adquirido a una edad ms avanzada. Se realizaron anlisis de las fuentes de abastecimiento de
agua y, a pesar de que no se consigui cultivar la bacteria a partir de las biopelculas, s se detect
ADN de H. pylori, sugiriendo su presencia en los sistemas de almacenaje del agua.
El nico precedente de aislamiento mediante cultivo de H. pylori a partir de agua no tratada fue el
trabajo publicado por Lu et al., 2001, en el que se analizaron muestras procedentes de la Ciudad de
Jurez, Mxico, empleando la tcnica de PCR y cultivo para la deteccin de H. pylori. Obtuvieron
aislados de H. pylori en un 17% de las muestras analizadas, confirmndolos mediante PCR del 16S
ADNr.
H. pylori sobrevive durante periodos de tiempo ms largos en concentraciones salinas fisiolgicas,
bajas temperaturas y valores de pH entre 5.8 y 6.9 (Shahamat et al., 1993). Los ros, arroyos y lagos
tienen una cierta capacidad tamponadora al disolver gases y minerales, lo que puede prevenir
rpidas fluctuaciones de pH, posibilitando la presencia de H. pylori y la contemplacin del medio
ambiente como nicho de H. pylori.
Analizaron muestras procedentes de dos ros y muestras de agua residual con el fin de detectar la
presencia de Helicobacter pylori mediante el uso de la tcnica molecular FISH (Hibridacin in situ
con sondas fluorescentes). Tras la realizacin del estudio detectaron la presencia de H. pylori en dos
de las muestras procedentes de ro y en una procedente de aguas residuales, constatando que H.
pylori puede encontrarse en el ambiente bajo condiciones desfavorables para su desarrollo.
Analizaron 24 muestras de agua procedentes de distintos puntos de cuatro ros de Japn, y
consiguieron detectar ADN de H. pylori mediante PCR. Este estudio apoya la teora de que H. pylori
puede sobrevivir en ambientes naturales como ros y lagos, durante periodos de tiempo prolongados,
por lo que podran ser posibles reservorios y vas de transmisin del patgeno.

CMO SE CONTRAE LA INFECCIN?

La infeccin se adquiere en la infancia transmitida de persona a persona, generalmente. Los
animales domsticos no son portadores de Helicobacter pylori y no pueden contagiar la infeccin.
Una vez adquirida, la infeccin se mantiene a lo largo de la vida a no ser que se realice un
tratamiento adecuado. Una parte importante de la poblacin espaola (en los adultos de ms de 40
aos, ms del 50%) es portadora del germen. En la gran mayora de ellos el germen da lugar
solamente a una mnima inflamacin en el estmago que no produce molestias ni implica riesgos. Se
calcula que solamente uno de cada 10 portadores desarrolla una lcera en relacin con la infeccin.
Por este motivo, actualmente no se recomienda buscar la infeccin y mucho menos realizar
tratamiento en individuos que no presentan molestias digestivas.
CMO SE DIAGNOSTICA LA INFECCIN?
El diagnstico se puede realizar por dos tipos de mtodos. Los que necesitan de una endoscopia se
denominan invasivos y los que se pueden realizar sin endoscopia no invasivos. Si su mdico observa
una lcera puede coger una muestra del estmago para estudio al microscopio o para realizar una
prueba rpida (que se denomina Test rpido de la ureasa, durante la endoscopia se toma una muestra
de estmago y se introduce en un pocillo. Si la gelatina que contiene el pocillo se vuelve de color
rosa la prueba es positiva -hay infeccin- mientras que sigue de color amarillo es negativa.). En caso
de que no se necesite endoscopia las pruebas se denominan no invasivas. De estos, los ms utilizados
la deteccin de anticuerpos en sangre (serologia) y la prueba del aliento, que es muy fiable y no
requiere pinchazo ni endoscopia. Es simplemente beber un lquido con sabor a limn y soplar en un
pequeo tubo. Es una de las pruebas ms utilizadas, tanto para el test inicial como para controlar la
respuesta al tratamiento. Es importante saber que la mayora de las pruebas se alteran si usted est
tomando antibiticos o medicamentos para la lcera. As es posible que tenga la infeccin por
Helicobacter pylori y la prueba no la detecte. Consulte a su mdico sobre si el tratamiento que recibe
interfiere o no con las pruebas e informe de lo que est tomando a la persona que recoja el test del
aliento.

Deteccin y aislamiento por cultivo

El mtodo tradicional por excelencia para la deteccin e identificacin de microorganismos es la
observacin de su crecimiento en sustancias nutritivas preparadas en el laboratorio. La capacidad
de recuperacin de bacterias a partir de una muestra viene determinada principalmente por la
tcnica empleada, la naturaleza de la muestra, el nmero de microorganismos presentes en ella y el
estado fisiolgico de las clulas presentes.
Para el aislamiento a partir de muestras altamente contaminadas, como es el caso de las muestras
ambientales o de alimentos, es necesaria una primera fase de enriquecimiento, que consiste en
incubar la muestra en un medio lquido selectivo, para eliminar parte de la microbiota acompaante,
durante un periodo de 24-48 horas en las condiciones ambientales adecuadas, segn el tipo de
microorganismo. En el caso de Helicobacter pylori, se incuba en condiciones de microaeroflia (10
% de dixido de carbono, 5 % de oxgeno y 85% de nitrgeno) a una temperatura de 37 C durante
24-48 horas.
Los medios de cultivo basan su utilidad en la combinacin de antibiticos para inhibir el crecimiento
de la microbiota acompaante, y la adicin de nutrientes para estimular el crecimiento del
microorganismo a detectar. El aislamiento se consigue con la tcnica de siembra por triple estra en
medios de cultivos slidos. Una vez se obtienen colonias del patgeno, se siembran en un medio de
mantenimiento para conseguir un cultivo masivo. Posteriormente se realizan los ensayos para su
identificacin.
Se han empleado una gran variedad de medios de cultivo, selectivos o no selectivos, para el
aislamiento de helicobacters gstricos. Uno de los medios ms usados para el primer aislamiento en
muestras de biopsia fue el medio de Skirrow, que contiene Agar Brucella Sangre suplementado con
trimetoprim, vancomicina, polimixina B y anfotericina B. Otros autores emplean el medio Agar
Sangre de Caballo, que contiene Agar Blood Columbia con un 5 % de sangre de caballo,
suplementado con la mezcla de antibiticos propuesta por Dent, con vancomicina, lactato de
trimetoprim, cefsulodina y anfotericina B.
Tambin se emplea un medio comercial para el aislamiento selectivo de H. pylori, Agar Pylori
(Biomrieux, Francia) que contiene peptona de casena, peptona de soja, extracto de carne, NaCl,
agar, plasma de caballo, polyvitex y una mezcla de antibiticos.
Debido a las dificultades en el aislamiento de Helicobacter en muestras de heces o ambientales,
diversos autores han intentado mejorar estos medios de cultivo, para permitir un mejor aislamiento
de las bacterias, sobre todo en muestras muy contaminadas, como es el caso de aguas o alimentos.
Jiang y Doyle (2002) realizaron estudios para evaluar la supervivencia y crecimiento de H. pylori
en medios de enriquecimiento, probando distintos suplementos como mucina, sulfato frrico o
piruvato sdico, lo que aumenta el nivel de microorganismos detectados. Degnan et al. (2003)
desarrollaron un nuevo medio con una nueva mezcla de suplementos de crecimiento al que aadieron
anfotericina B, polimixina B y un indicador rojo fenol para detectar la produccin de ureasa.
Fernndez et al. (2006) realizaron estudios para ver la selectividad de dicho medio selectivo en
muestras de agua de mar y moluscos, y concluyeron que era apropiado para el aislamiento de H.
pylori en muestras de agua de mar.
A pesar de todas estas modificaciones, todava no existe ningn medio ptimo para el aislamiento de
Helicobacter en muestras ambientales, ya que la microbiota acompaante enmascara, en caso de
que lo hubiera, el crecimiento de H. pylori.
Para favorecer la eliminacin de esta microbiota se han desarrollado tcnicas alternativas,
utilizadas previamente al cultivo en medio slido. Dos de las tcnicas de eliminacin de microbiota
acompaante ms usadas en el aislamiento de H. pylori son la separacin inmunomagntica (IMS)
y el tratamiento cido.

Separacin inmunomagntica (IMS)

La separacin inmunomagntica (IMS) es una tcnica rpida y fiable para la separacin de
patgenos en muestras heterogneas, como sangre, alimentos y muestras fecales (Olsvik et al., 1994).
La IMS utiliza partculas superparamagnticas (Fe2O3 y Fe3O4) que estn cubiertas con una
delgada envoltura de polmeros, encerrando el material magntico. Esto proporciona una superficie
apropiada para la adsorcin de varias molculas de reactivos. Segn la aplicacin que se le quiera
dar a la IMS existen distintos ligandos: anticuerpos, una protena o antgeno, sondas de ADN o ARN
o cualquier otra molcula con afinidad para la muestra diana que se dese aislar.
Las perlas magnticas sensibilizadas con anticuerpos para antgenos de superficie de la bacteria se
usan para separar y concentrar microorganismos de la muestra. El proceso de separacin consta de
dos pasos fundamentales: en el primero, la suspensin que contiene las bacterias diana se mezcla
con las perlas magnticas sensibilizadas. De esta forma se produce la unin anticuerpoantgeno
(complejo magntico) alrededor de las perlas magnticas y las bacterias se adhieren a las perlas,
formando agregados en un extremo del tubo gracias a la accin de un imn. En el segundo paso, el
complejo magntico se lava varias veces para eliminar los contaminantes no deseados, incluyendo
posibles inhibidores de la PCR que pudieran encontrarse en la muestra. La flexibilidad del sistema
permite aislar prcticamente cualquier diana, dependiendo del ligando especfico empleado. Para
muchas de las aplicaciones no es necesario revertir la unin de la molcula diana, ya que se puede
emplear sta directamente unida a la perla inmunomagntica. A esta estrategia se le llama
aislamiento positivo.
La estrategia de una separacin de aislamiento negativo consiste en que la muestra de inters es
obtenida por eliminacin de los componentes no deseados presentes en una muestra heterognea. El
sobrenadante que contiene la muestra diana intacta se recupera para posteriores anlisis y ensayos.

Figura 4. Diagrama de una separacin inmunomagntica (www. Invitrogen.com)

La tcnica IMS se utiliza como paso previo para la deteccin de microorganismos por mtodos
moleculares o por cultivo. Puede combinarse con tcnicas como la Hibridacin in situ con Sondas
Fluorescentes (FISH) o la Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR), obtenindose una mayor
eficiencia en el diagnstico de algunas bacterias, virus y parsitos. Tambin se puede realizar un
cultivo en placa de los complejos magnticos para la obtencin de colonias del microorganismo
diana.
Esta tcnica, asociada a la PCR, ha mostrado resultados muy prometedores para la deteccin de E.
coli O157:H7 (Fu et al., 2004), Salmonella entrica y Listeria monocytogenes. Enroth y Engstrand
en 1995, detectaron en heces y agua, ADN de Helicobacter pylori, mediante la aplicacin de la
tcnica de IMS y posterior PCR. Osaki et al. (1997) emplearon este mtodo para el aislamiento de
H. pylori de muestras fecales de ratones. Tras la separacin inmunomagntica en heces, detectaron
H. pylori, pero no lo consiguieron cultivar.
Consiguieron aislar H. pylori a partir de agua municipal no tratada de la Ciudad Jurez en Mxico,
usando la separacin inmunomagntica para concentrar las clulas, utilizando anticuerpos
monoclonales de ratn, anti-IgG de Helicobacter pylori sobre Dynabeads M-280 y posterior siembra
en agar Columbia con sangre. Este trabajo demostr por primera vez la presencia de H. pylori en el
medio ambiente, as como la posibilidad de su cultivo.
Emplearon la tcnica de IMS para reducir el nivel de microbiota acompaante presente en muestras
de agua potable de grifos pblicos y bocas de riego de Inglaterra con el fin de mejorar la deteccin
de helicobacters, entre ellos H. pylori, mediante la tcnica de cultivo. Los resultados obtenidos
indicaban que la IMS no mejoraba especficamente la recuperacin de H. pylori u otros
helicobacters.

Tratamiento cido
Helicobacter pylori es capaz de producir determinadas enzimas que le sirven para sobrevivir y
colonizar la mucosa gstrica. Entre estas se encuentra la ureasa, que hidroliza la urea y origina
dixido de carbono y amoniaco, mediante la reaccin CO(NH2)2 ---> 2NH3 + CO2, creando un
microambiente alcalino y permitiendo que H. pylori sobreviva en condiciones cidas.
Nilsson et al. (2002) observaron que formas cocoides de H. pylori no presentaban una reduccin en
ATP cuando se realizaba una incubacin durante 4-12 horas de ste patgeno en medio GB, diseado
para Nisseria gonorrhoeae, con un 5 % de suero de caballo acidificado hasta pH 5 con un contenido
de 5mM de urea, lo que demostrara que H. pylori es capaz de sobrevivir en ambientes acidificados
en forma viable no cultivable como mecanismo de supervivencia.
Shao et al. (2008) estudiaron el perfil proteico, mediante MALDI-TOF-MS, que presentaban cepas
de H. pylori cuando se les someta a ambientes acidificados. Observaron que las cepas del patgeno
presentaban perfiles proteicos que se diferenciaban en 36 protenas, todas implicadas en el
metabolismo de la hidrlisis de la urea, respecto a los perfiles proteicos de las cepas de H. pylori no
sometidas a ambientes con pH cidos, lo que demuestra que H. pylori es capaz de adaptar su
metabolismo para sobrevivir en ambientes cidos.
Esta caracterstica distintiva se puede utilizar para favorecer el aislamiento de H. pylori frente otras
bacterias presentes en el agua y las biopelculas, mediante la reduccin del pH de la suspensin
bacteriana antes del cultivo.
Brick et al. (2004) observaron que las cepas de H. pylori H509 y H4780 presentaban tolerancia a
condiciones cidas, obteniendo una recuperacin de H. pylori en cultivo en medio Dent sin
diferencias significativas entre los distintos tiempos de exposicin (0, 1, 2.5, 5 y 10 minutos) de las
cepas del patgeno al ambiente cido. Otras cepas de H. pylori, tales como H899, H5027 y H502,
mostraban una menor tolerancia, puesto que la recuperacin mediante cultivo disminua conforme
el tiempo de exposicin al cido aumentaba. Concluyeron que las distintas cepas de H. pylori
presentan niveles de tolerancia a condiciones de acidez diferentes y que las presencias de
concentraciones de sustancia cidas posiblemente son inductoras del paso de la bacteria al estado
de viable no cultivable, como indicaba Nilsson et al. (2002).
PRESENCIA DE HELICOBACTER PYLORI EN AGUA POTABLE
Evaluacin del mtodo de recuperacin de H. pylori tras filtrado
La tcnica ms utilizada para la recuperacin de bacterias desde agua potable es la filtracin. El
mayor problema que presenta la filtracin es la posible prdida de bacterias a la hora de
transferirlas desde la membrana al tampn o caldo homogenizador para su posterior anlisis. Por
ello se realiz un ensayo para evaluar y establecer la metodologa ms eficiente en la recuperacin
de H. pylori desde la membrana tras la filtracin.
Para la realizacin del ensayo se emple la cepa NCTC 11637 de H. pylori, la cual se cultiv en
ASC (Anejo A.1) en condiciones de microaeroflia a 37 C, durante 72 horas.
Tras la incubacin se recogi material celular para realizar una suspensin de clulas en tampn
PBS 1X (Anejo B.2.) estril. Del inculo se realiz el recuento en placa, mediante la realizacin de
diluciones seriadas del mismo, en tubos de 9 mL de agua destilada esterilizada. De cada dilucin se
sembraron 100 L en placas de ASC, que se incubaron en condiciones ptimas para el patgeno,
durante 48 horas, para el posterior recuento.
En el ensayo de recuperacin se prepararon tres matraces cada uno con 100 mL de agua potable
esterilizada en autoclave a 120 C. A cada matraz se le inocul 1 mL del inculo inicial y se
homogeniz mediante agitacin. Posteriormente se realiz la filtracin del contenido de los
matraces a travs de membranas estriles de tamao de poro de 0.45 m (Whatman, Maidstone
Inglaterra). A cada una de las tres membranas se le aplic un tratamiento distinto para la
recuperacin de H. pylori:
1. Metodologa de Rotacin: La membrana se transfiri aspticamente a un tubo de 50 mL
con 10 mL de caldo de enriquecimiento (Caldo Brucella adicionado con un 5 % de Suero
Fetal Bovino, SFB). Durante 10 minutos el tubo se mantuvo en rotacin para facilitar el
desprendimiento de las clulas al caldo.
2. Metodologa de Raspado: La membrana se transfiri aspticamente a un tubo de 50 mL
que contena 10 mL del mismo caldo de enriquecimiento. Posteriormente se realiz un
raspado de la membrana con una esptula estril (Cell Scraper, Corming Incorporated,
Costar, Mxico) para facilitar el desprendimiento de las clulas al caldo.
3. Metodologa de Flujo invertido: La membrana se invirti en la rampa de filtracin y se
filtraron 20 mL de tampn PBS 1X, recogiendo en un matraz el tampn con las clulas
desprendidas de la membrana. Posteriormente se centrfug el filtrado y se elimin el
sobrenadante. El sedimento se resuspendi en 10 mL del caldo de enriquecimiento en un
tubo de 50 mL.
Se recogieron alcuotas de 1mL de cada uno de los tubos de 50 mL para el posterior anlisis
mediante DVC-FISH (apartado 1.4) y cultivo en placa. Los protocolos seguidos para los diferentes
anlisis se describen en apartados posteriores.
En este mismo ensayo se evalu el medio de cultivo en placa ms efectivo para la recuperacin de
H. pylori. Se utilizaron dos tipos de bases para elaborar Agar Dent (Anejo A.1): Agar Base
Selectivo para Campylobacter (Medio Dent-C) y Agar Sangre Columbia (Medio Dent-B).
Simultneamente se utilizaron dos metodologas de siembra diferentes en los dos medios de cultivo
a evaluar: sobre membrana de tamao de poro de 0.65 m (Whatman, Maidstone, Inglaterra) y
mediante siembra en masa.
De las alcuotas de 1mL recogidas de cada uno de los tubos de 50 ml, procedentes de cada mtodo
de recuperacin, se procedi a la realizacin de siembras de 100 L de muestra, en masa y sobre
membrana de tamao de poro de 0.65 m. En este caso, las placas en las que se haba depositado
la membrana se mantuvieron a temperatura ambiente en condiciones aerobias durante 20 minutos.
Posteriormente se retir la membrana de las placas de cultivo y se incubaron en condiciones
ptimas para H. pylori.
Figura 5. Recuperacin sobre membrana de H. pylori tras filtracin
PRESENCIA DE HELICOBACTER PYLORI EN AGUA RESIDUAL
Deteccin e identificacin mediante Hibridacin in situ con sondas
fluorescentes (FISH)
Para la deteccin e identificacin de H. pylori mediante Hibridacin in situ con sondas
fluorescentes se realiz el protocolo establecido por Moreno, descrito a continuacin:

Fijacin de las muestras

Para llevar a cabo la fijacin de las clulas se tom una alcuota de 1 mL de muestra a
analizar. A continuacin, se procedi a su centrifugacin (8 minutos-8000 rpm). El
precipitado se resuspendi en PBS 1X. Al tratarse de una bacteria Gram-negativa se
aadi paraformaldehido (PFA, Anejo B.3) en proporcin 1:3 y se mantuvo durante 3
horas a 4 C. El propsito de este tratamiento es generar una delgada malla que mantiene
la estructura interna celular y la cohesin tisular, puesto que el PFA establece enlaces
covalentes con los grupos amino libres presentes en las protenas y forma puentes cruzados
entre s y con las protenas adyacentes. Su objetivo es detener el proceso autoltico de las
clulas y conservarlas, en la medida de lo posible, en el estado en que se encontraban
durante la vida.
Por lo tanto, es un mtodo histolgico destinado a facilitar la obtencin de preparaciones
duraderas que conserven su estructura morfolgica.
Se procedi a los lavados de las muestras con PBS 1X para eliminar el PFA y, tras los
mismos, se resuspendi el precipitado con etanol absoluto y PBS 1X en una proporcin 1:1
y se almacen a -20 C (Moreno et al., 2001).

Condiciones de hibridacin
Un volumen de 5 L de las muestras fijadas se deposit sobre los pocillos de los
portaobjetos de hibridacin, tratados previamente con gelatina (Anejo B.3). A
continuacin, se dejaron secar al aire, y se procedi a realizar tres deshidrataciones
sucesivas, sumergiendo el portaobjetos en volmenes de 100 mL de etanol a
concentraciones de 50, 80 y 100 %, durante 3 minutos en cada uno.
Una vez secos, cada uno de los pocillos se cubri con 10 L de tampn de hibridacin (0.9
M/L NaCl, 0.01 % SDS, 20 mM/L Tris-HCl y X% formamida, pH 7.6) (Anejo B.3)
conteniendo 50 ng de sonda marcada con el correspondiente fluorocromo.
Para obtener una ptima hibridacin, se pueden modificar las condiciones de hibridacin
para que stas sean ms astringentes. El nivel de astringencia se puede ajustar variando
tanto la concentracin de formamida o la temperatura de hibridacin. La formamida tiene
como funcin debilitar los puentes de hidrogeno de los duplex ADN-ADN y ADN-ARN, por
lo que la unin entre las bases nucleicas debe ser altamente especfica para evitar el
desanillamiento.
El portaobjetos se introdujo en posicin horizontal en un tubo de 50 mL, en el que se
introdujo previamente una base de papel de celulosa humedecida con el mismo tampn de
hibridacin. La reaccin se llev a cabo a 46 C y en oscuridad segn Moreno et al.
(2001). El tiempo de hibridacin fue de 2 horas.
Se procedi al lavado del portaobjetos con una solucin de lavado (20 mM/L Tris-HCl,
0.01 % SDS, 5mM/L EDTA) (Anejo B.3) atemperada a 48 C, primero vertiendo una
pequea cantidad sobre el mismo para arrastrar el tampn de hibridacin y a
continuacin, sumergindolo en 50 ml de la misma para eliminar el resto de sonda que no
se hubiera unido al ARNr. El tiempo de lavado fue de 15 minutos, mantenindose a 48 C
en oscuridad. Al tampn de lavado se le aadi una concentracin de NaCl condicionada
por el porcentaje de formamida utilizado en la hibridacin.
Tras los 15 minutos de lavado, los portaobjetos se lavaron con agua ultrapura y se secaron
al aire en oscuridad. A continuacin, se montaron con FluoroGuard Antifade Reagent
(Bio-Rad), entre cubre y portaobjetos, para reducir la prdida de fluorescencia de las
sondas cuando la muestra est siendo visionada, y se visualizaron en un microscopio de
epifluorescencia Olimpus BX 50 con los filtros U-MWB, U-MWIB y U-MWIG. Las
fotografas se realizaron con la cmara DP-10 de Olympus.

Sondas de hibridacin
En todas las hibridaciones se emple una combinacin de tres sondas EUB338 (Tabla 9),
complementarias de una regin del ARNr 16S del dominio Eubacteria como control
positivo, ya que hibridan con todas las bacterias que pueden estar presentes en una
muestra (Amann et al., 1995).

Tabla 1. Secuencias de las sondas EUB338-I-I-III

Las sondas EUB338 fueron sintetizadas y marcadas por TIB MOLBIOL (Berlin,
Alemania), con tetramethylrhodamine-5-isothyocyanate (TRICT), que emite en el espectro
del rojo (520 nm), o con 5 (6)carboxyfluorescein-N-hydroxysuccinimide ster (FLUOS),
que emite en el espectro del verde (495 nm).
SONDA HPYL. Para la deteccin de H. pylori mediante hibridacin in situ, se emple la
sonda HPYL diseada por Moreno et al. (2001), complementaria a una regin especfica
del ARNr 16S. La secuencia de la sonda es la siguiente:

Tabla 2. Secuencia de la sonda HPYL

Para aumentar la eficiencia de la reaccin de hibridacin, se dise una sonda LNA

basada en la misma secuencia, sintetizada por EXIQON (Woburn, USA):

Tabla 3. Secuencia de la sonda HPYL-LNA

La concentracin de formamida aadida a la solucin de hibridacin tanto para la sonda

HPYL como la HPYL-LNA fue del 30%.
En la deteccin de genes de resistencia a la claritromicina, la combinacin de sondas
utilizadas en el proceso fueron la sonda especfica HPYL-LNA, para determinar la
presencia de H. pylori, y el mix CLAR, constituido por las sondas CLAR-I, CLAR-II y
CLAR-III (Trebesius et al., 2000) para la deteccin de las mutaciones en el 23S que le
dotan de resistencia al antibitico. El porcentaje de formamida utilizado fue del 30 %.
Tabla 4. Secuencias de las sondas CLAR-I-II-III

FISH de H. pylori a partir de muestras

La hibridacin in situ con sondas fluorescentes se realiz a partir de alcuotas de 1 mL de
las muestras a analizar, directas y enriquecidas, siguiendo el protocolo descrito
previamente en este captulo. La hibridacin se llev a cabo con las sondas EUB338 I-II-
III y HPYL-LNA
En cada proceso de hibridacin se incorpor en un pocillo del portaobjetos gelatinizado
clulas fijadas de la cepa NCTC 11637 de H. pylori como control positivo.
Para la deteccin de cepas de H. pylori que presentaran en sus genes 23S ARNr
mutaciones de resistencia a la claritromicina, se realiz la hibridacin de las muestras con
las sondas HPYL-LNA y el mix CLAR I-II-III, a una concentracin de formamida de 30 %.
Del mismo modo que en los ensayos anteriores, en cada hibridacin se incorpor como
control positivo la cepa NCTC 11637, que presenta en el 23S ARNr la mutacin de
resistencia a la claritromicina.
Figura 6. Deteccin de H. pylori en agua procedente de depuradora, mediante tcnicas
moleculares y cultivo
QU HAY QUE HACER PARA ELIMINAR LA BACTERIA?
La infeccin por Helicobacter pylori que se desarrolla en el interior de la luz gstrica es un
lugar inhspito, donde no llegan las clulas que se encargan de defender al organismo.
Tampoco llegan bien muchos antibiticos. Por esto es necesario asociar varios
medicamentos antiulcerosos y antibiticos para conseguir eliminar la infeccin. El
tratamiento que se recomienda actualmente, agrupa tres medicamentos distintos (dos
antibiticos y un frmaco que disminuye la produccin de cido por el estmago). Se
administran durante una semana. Antes de iniciar el tratamiento hay que cerciorarse de que
no se es alrgico a ninguno de estos medicamentos.

CONCLUSIONES
El agua es una gran fuente de enfermedades patgenas y entre ellas tenemos a la
ulcera inducida por la presencia de la bacteria H. pylori que est presente, no solo
en las aguas superficiales sin trata, sino tambin en el agua potable que sera una
situacin potencialmente grabe, ya que esta est distribuida a la mayor parte de la
poblacin que se sienten seguros al beber esta agua. Y sin saberlo y ni siquiera
sospecharlo ya estn infectados por esta bacteria. Que representa un mayor ndice
de causa de mortalidad y que ms del 70 % de la poblacin mundial presenta esta
bacteria en el estmago.

H. pylori es capaz de sobrevivir a las concentraciones de cloro libre residual que se

encuentran en los puntos finales de la red de distribucin, lo que debera ser
considerado al evaluar el riesgo potencial del consumo de agua potable de fuentes
pblicas.

En el 17.4 % de las muestras de agua potable y en el 41.6 % de aguas residuales

positivas para H. pylori se han detectado cepas resistentes a la claritromicina.
Estos resultados ponen de manifiesto el riesgo adicional que el agua puede suponer
para la expansin de las resistencias, y los consiguientes fallos teraputicos en la
prctica clnica.
Referencias
Dunn BE, Cohen H y Blaser MJ, 1997: Helicobacter pylori. Clinical Microbiology
Reviews, 10:720741.
Hegarty JP, Dowd MT y Baker KH, 1999: Occurrence of Helicobacter pylori in surface
water in the United States. Journal of Applied Microbiology, 87:697701.
Hulten K et al., 1996: Helicobacter pylori in drinking-water in Peru. Gastroenterology,
110:10311035.
Mazari-Hiriart M, Lpez-Vidal Y y Calva JJ, 2001: Helicobacter pylori in water systems
for human use in Mexico City. Water Science and Technology, 43:9398.
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Ingrid Ferrer Lpez- Jos Manuel Prez Pozo- Juan Manuel Herreras Gutirrez
https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/000206.htm
http://saludbio.com/articulo/enfermedades/ulceras-estomago-duodeno-sintomas-causas
http://noticias.universia.net.mx/ciencia-nn-tt/noticia/2011/07/15/846840/agua-
contaminada-principal-causa-gastritis-ulceras.html