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Ciencia e Investigacin 2010; 13(2): 81-86

Facultad de Farmacia y Bioqumica Edicin impresa: ISSN 1561-0861


UNMSM 2010 Edicin electrnica: ISSN 1609-9044

COMPOSICIN QUMICA DEL ACEITE ESENCIAL DE Tagetes


elliptica SMITH CHINCHO Y ACTIVIDADES ANTIOXIDANTE,
ANTIBACTERIANA Y ANTIFNGICA
Chemical composition of essential oil from Tagetes elliptica Smith chincho and antioxi-
dant, antibacterial and antifungal activities
Ingrid K. Segovia B.1, Lucybel L. Surez de la Cruz1, Amrico J. Castro L.1, Silvia Surez C.2, Julio R. Ruiz Q.3,
1
Instituto de Ciencias Farmacuticas y Recursos Naturales Juan de Dios Guevara Facultad de Farmacia y Bioqumica.
2
Centro de Investigacin de Bioqumica y Nutricin Alberto Guzmn Barrn Facultad de Medicina. 3 Instituto de
Microbiologa y Parasitologa Simn Prez Alva Facultad de Farmacia y Bioqumica. Universidad Nacional Mayor de San
Marcos
RESUMEN
El presente trabajo de investigacin tuvo por finalidad determinar cualitativamente los componentes qumicos, as como
las actividades antibacteriana, antifngica y antioxidante del aceite esencial de las hojas de Tagetes elliptica Smith chincho,
oriundo de la provincia de Huaraz, regin Ancash; el cual se obtuvo por el mtodo de destilacin por arrastre con vapor de
agua. Posteriormente se determinaron las constantes fisicoqumicas, y luego se hizo la determinacin de su composicin
qumica por cromatografa de gases / espectometra de masas (CG/EM). Por los mtodos de difusin en agar y dilucin en
agar se determinaron las actividades antimicrobiana y concentracin mnima inhibitoria (CMI), respectivamente, frente a
los siguientes microorganismos: S. aureus ATCC 25933, S. epidermidis (cepa clnica), B. subtilis (cepa ambiental), E. coli (cepa
clnica), P. aeruginosa ATCC 27853, Klebsiella (cepa clnica) y C. albicans ATCC 10231. En las pruebas realizadas, el aceite
esencial evidenci actividad antibacteriana frente a cinco cepas, mostrndose Klebsiella resistente debido a que present un
halo de inhibicin menor de 18 mm; frente a Candida albicans ATCC 10231, demostr actividad antifngica significativa. La
CMI frente a S. aureus, E. coli y P. aeruginosa fue de 7,62 x 10-1 g/mL; para S. epidermidis 97,5 x 10-1 g/mL; para B. subtilis 390
g/mL x 10-1 y para C. albicans 780 g/mL x 10-1. Respecto a la actividad antioxidante, se realizaron dos pruebas de captacin de
radicales libres denominadas: captacin del radical difenilpicrilhidrazilo (DPPH) y captacin del radical superxido producido
por pirogalol; obtenindose los siguientes resultados: IC50=97,5 g/mL e IC50= 47,5 g/mL; respectivamente, los cuales no
fueron significativos, teniendo en cuenta los patrones de Trolox y Vitamina C, respectivamente.
Palabras Clave: Tagetes elliptica, aceite esencial, actividad antimicrobiana, actividad antioxidante.

SUMMARY
The present research was aimed to determine qualitatively the chemical constituents and antibacterial, antifungal
and antioxidant activity of essential oil from leaves of Tagetes elliptica Smith chincho, native of the province of
Huaraz, Ancash region, which was obtained by the method of distillation with water vapor. Later physicochemical
constants were determined, and then made the determination of chemical composition by Gas Chromatography / Mass
Spectrometry (GC/MS). By the methods of agar diffusion and agar dilution were determined antimicrobial activities
and minimum inhibitory concentration (MIC), respectively, against the following microorganisms: S. aureus ATCC
25933, S. epidermidis (clinical isolate), B. subtilis (environmental strain), E. coli (clinical isolate), P. aeruginosa ATCC
27853, Klebsiella (clinical isolate) and C. albicans ATCC 10231. In tests, the essential oil evidenced antibacterial activity
against five strains, being resistant Klebsiella because it showed an inhibition zone <18 mm; against Candida albicans
ATCC 10231, showed significant antifungal activity. The MIC against S. aureus, E. coli, P. aeruginosa was 7,62 x 10-1 g/
mL and S. epidermidis, 97,5 g/mL; to B. subtilis 390 g/mL and C. albicans 780 g/mL. With regard to antioxidant
activity, there were two tests known as free radical scavenging: Capturing the difenilpicrilhidrazil radical (DPPH) and
superoxide radical uptake produced by pyrogallol, with the following results: IC50 = 97,5 g/mL and IC 50 = 47,5 g/mL;
respectively, which were not significant, taking into account patterns of Trolox and Vitamin C, respectively.
Keyword: Tagetes elliptica, essential oils, antimicrobial activity, antioxidant activity.

INTRODUCCIN los Andes, la existencia de tres regiones geogrficas y


la diversidad de pisos ecolgicos (1).

P
er posee una rica variedad en especies
vegetales, debido a las condiciones Los aceites esenciales son una compleja mezcla
geogrficas favorables de la Cordillera de natural de metabolitos secundarios voltiles, aislados

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Ciencia e Investigacin 2010; 13(2): 81-86 Composicin qumica del aceite de T. elliptica y actividad antioxidante, antibacteriana y antifngica

de plantas mediante mtodos como destilacin, Tabla 1. Caractersticas organolpticas del aceite esencial de
Tagetes elliptica Smith.
extraccin con solventes, etc. Los principales
Olor Sui generis
constituyentes de los aceites esenciales son mono y
Color Amarillo
sesquiterpenos, incluyendo carbohidratos, teres,
Sabor Picante-astringente
aldehdos y cetonas, los que son responsables de la Aspecto general Lquido transparente y fluido
fragancia y propiedades biolgicas de las plantas
medicinales. Los aceites esenciales cubren un amplio Tabla 2. Propiedades fisicoqumicas del aceite esencial de
espectro de actividades farmacolgicas, demostrando Tagetes elliptica.
propiedades antiinflamatorias, antibacterianas, Propiedades fsicoqumicas Valores
antifngicas, antioxidantes y anticancergenas.
Densidad relativa 0,78 g/mL
Otras cumplen actividad biocida contra diversos ndice de refraccin 1,448
organismos como virus, protozoos, insectos y plantas. Rotacin especfica (-) 3 25
Durante mucho tiempo se han utilizado en el campo ndice de acidez 1,8424 mg/mL
de la cosmtica, en la elaboracin de perfumes, la
conservacin de alimentos y aromaterapia (2,3).
Tabla 3. Anlisis por Cromatografa de Gases y Espectrometra
T. elliptica Smith chincho es empleada, de Masas CG/EM
por su agradable aroma, en potajes locales como Tiempo de
pachamancas y algunos aderezos, y como paliativo Componentes qumicos Retencin
(minutos)
en el sndrome menstrual). Gran parte de su utilidad
2-Metil-1-butil acetato 2,51
proviene de su contenido en aceites esenciales, los
2(10)- pineno, (1S, 5S)-(-)- 4,37
cuales le brindan el aroma caracterstico.
1r--pineno 5,47
El presente estudio se orienta a determinar la
4-etil-4 metil-1-hexeno 6,41
composicin qumica, la actividad antioxidante,
1-pentanol, 5-(ciclopropil metileno)- 7,13
antibacteriana y antifngica del aceite esencial de T.
3-t-butil-6-metil-2H-pirano 8, 8
elliptica Smith, debido a hiptesis e investigaciones
anteriores realizadas sobre aceites esenciales I-verbenona 11, 05
y su potencial efecto y de esta manera brindar Metoxicitronelal 12,6
informacin para futuros estudios y aplicaciones Isocariofileno 15,4
de la mencionada especie con el fin de aprovechar - cadineno 16,97
nuestros recursos naturales como alternativa de Cadina-3,9-dieno 17,9
salud frente a los antibiticos convencionales y a los - cadinol 21,23
antioxidantes artificiales, cuyos efectos secundarios cido ciclopropanocarboxlico, 2-metil- 32, 41
2, 6-di-t-butil-4-metilfenil ster
han producido diversos problemas en pacientes y
Forbol 34,15
consumidores, tales como resistencia bacteriana,
reacciones adversas y predisposicin a enfermedades Ambrosin 38,72
oncolgicas (4,5). Butanimida 49,41

MATERIAL Y MTODOS
agua. Se utilizaron 5,75 kg de hojas frescas, que se
Coleccin de la Muestra colocaron en la tolva del destilador, procedindose
La planta en estudio fue colectada en el poblado a la destilacin y posterior decantacin del aceite.
Monterrey, a orillas del ro Santa, en la provincia de Se elimin todo rastro de agua con sulfato de sodio
Huaraz, regin Ancash, a 2700 msnm. Posteriormente anhidro, guardndose el aceite en un frasco de
las hojas fueron separadas del tallo y de las vidrio color mbar y conservndolo en refrigeracin
inflorescencias, y pesadas en una balanza comn para a 4 C (6).
continuar con la extraccin del aceite esencial. La Anlisis fisicoqumico del aceite esencial
identificacin taxonmica de la especie se realiz Densidad relativa
en el Museo de Historia Natural de la Universidad Se realiz en un picnmetro aforado a un volumen
Nacional Mayor de San Marcos. fijo.
Extraccin del aceite esencial ndice de refraccin
Se aplic el mtodo por arrastre con vapor de Se efectu con un refractmetro, emplendose

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aproximadamente 0,5 mL del


aceite esencial.
Rotacin ptica y = - 0,0872x + 0,3187
0,35
Se realiz en un polarmetro Carl R2 = 0,9879
Zeiss. 0,30

Absorbancia a 517 nm
ndice de acidez
En un frasco Erlenmeyer se 0,25
colocaron 1 mL de muestra con
20 mL de una solucin 1:1 de 0,20
alcohol etlico de 96 y ter;
0,15
luego se titul con hidrxido de
potasio 0,025 N. 0,10
Anlisis por Cromatografa
de Gases y Espectrometra de 0,05
Masas
Se obtuvieron los espectros 0,00
por Cromatografa de Gases 0 1 2 3 4
/ Espectrometra de Masas Concentracin de Trolox g/mL
luego comparar con estndares IC 50: 2,04 g/mL
almacenados en libreras Figura 1. Curva de captacin de DPPH del Trolox
virtuales y as determinar la
composicin cualitativa del aceite
esencial.

Determinacin de la 0,35 y = - 0,1327x + 0,3279


actividad antibacteriana y R2 = 0,9958
antifngica por el mtodo 0,30
Absorbancia a 517 nm

de difusin en agar y
dilucin en agar para la CMI 0,25
Mtodo de difusin en agar
0,20
En esta prueba se enfrenta la
bacteria o la levadura contra 0,15
una muestra de aceite esencial,
en medio de crecimiento 0,10
slido Agar Meller Hinton
o Agar Dextrosa Sabouraud, 0,05
segn sea el caso. La actividad
antibacteriana y antifungica se 0,00
0 390 780 1170 1560
expresa por la formacin de un
halo de inhibicin .
(7) Concentracin de aceite asencial de Tagetes eliptica Smith
g/mL
IC 50: 975 g/mL
Mtodo de dilucin en agar
(Concentracin Mnima Figura 2. Curva de captacin de DPPH del aceite esencial de Tagetes elliptica Smith
Inhibitoria)
Utilizado para la determinacin de la conoce como Concentracin Mnima Inhibitoria
Concentracin Mnima Inhibitoria. Esta prueba (CMI) (7).
se basa en la ausencia de crecimiento bacteriano
o fngico a una determinada concentracin del Determinacin de la actividad antioxidante
aceite esencial, para ello se enfrentan diluciones Captacin del radical libre difenilpicrilhidrazilo
dobles seriadas del aceite esencial, preparado en (DPPH)
el medio de cultivo, versus inculos bacterianos Se basa en la reduccin del radical libre estable, 2,2
y fngicos. La menor concentracin de aceite que difenil picril hidrazilo, mediante la captacin de
inhibe el crecimiento de la bacteria o levadura se un tomo de hidrgeno que dona el antioxidante

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Tabla 4. Actividad Antibacteriana y Antifngica del aceite esencial de Tagetes elliptica Smith
Halo de inhibicin Frmaco antibiticos Frmacos Antifngicos
Microorganismo (mm) (mm) (mm)
100% 50% 10% Oxa Clor Cipro Nist Keto
S. aureus (ATCC5933) 65 5,56 46 2,82 25 3 25 20 NSP
S. epidermidis (cepa clnica) 56 42,67 7,37 19,33 2,52 14 R NSP
B. subtilis (cepa ambiental) 33,67 0,58 27,2 3,83 17 1,41 23 18 NSP
E. coli (cepa clnica) 25 1,41 21 1,41 14,5 0,71 NSP 19 R
P. aeruginosa (ATCC 27853) 32 6,93 27 4,58 20,25 5,56 NSP R 30
C. albicans (ATCC 10231) 47,5 0,71 44 2,83 28 2,83 38 25

(sustancia atrapadora de radicales Tabla 5. Concentracin Mnima Inhibitoria del aceite esencial de Tagetes elliptica Smith
libres). Se cuantifica midiendo la (chincho).
reduccin de la absorbancia a 517 Concentracin mnima Inhibitoria (CMI)
Microorganismo
m (8,9). V/V(L/mL) P/V(L/mL) %(V/V)
Captacin del radical S. aureus (ATCC5933) < 9,76 x 10-4 < 7,62 x 10-1 < 9,76 x 10-5
superxido producido por S. epidermidis (cepa clnica) 0,125 97,5 0,0125
pirogalol B. subtilis (cepa ambiental) 0,5 390 0,05
Se basa en la autooxidacin E. coli (cepa clnica) < 9,76 x 10-4 < 7,62 x 10-1 < 9,76 x 10-5
espontnea del pirogalol en P. aeruginosa (ATCC 27853) < 9,76 x 10-4 < 7,62 x 10-1 < 9,76 x 10-5
medio bsico. Al generarse el C. albicans (ATCC 10231) 1 780 0,1
radical O2 en el medio de reaccin
se acelerar la autooxidacin
del pirogalol. La presencia de
un secuestrador del radical
anin superxido O2 inhibir la 0,07 y = - 0,0145x + 0,0643
reaccin de autooxidacin del R2 = 0,9841
pirogalol (10). 0,06
Absorbancia a 325 nm

RESULTADOS 0,05
Cambio en la

Los valores obtenidos de 0,04


las pruebas fisicoqumicas,
instrumentales y microbiolgicas 0,03
se muestran en las tablas 1, 2, 3,
4 y 5. 0,02

Determinacin de la 0,01
actividad antioxidante
0,00
Captacin del radical libre 0 1 2 3 4
difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
Concentracin de vitamina C g/mL
Los resultados obtenidos de
IC 50: 2,3 g/mL
la capacidad de captacin
Figura 3. Curva de captacin del radical superxido producido por pirogalol de la
del radical DPPH del aceite vitamina C
esencial de Tagetes elliptica
Smith comparado con el Trolox se presentan en ndice de refraccin, rotacin especfica e ndice
las Figuras 1 y 2. de acidez (11).
La composicin qumica cualitativa
DISCUSIN
determinada por Cromatografa de Gases /
Las caractersticas del aceite esencial de Espectrometra de Masa (CG/EM) en base al tiempo
Tagetes elliptica Smith chincho se determinaron de retencin (RT) del aceite esencial, nos indica que
a travs de las pruebas de densidad relativa, est conformado por componentes con actividad

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mm; mientras que en otros


estudios fue inferior (19, 20).
0,08
y = - 0,0006x + 0,0068 Para Pseudomonas
0,07 R2 = 0,9906 aeruginosa la actividad fue
significativa con un halo de
Absorbancia a 325 nm

0,06 inhibicin de 32 6,93 mm;


mientras que en otros estudios
Cambio en la

0,05
reportan menor actividad (21).
0,04 Para Candida albicans
(levadura) la actividad
0,03
antifngica fue significativa con
0,02 un halo de inhibicin de 47,5
0,71 mm; siendo inferior a la
0,01 reportada en otros estudios (22).
0,00
0 15,83 31,67 47,49 63,32 79,15 CONCLUSIONES
Concentracin de aceite esencial de Tagetes elliptica
g/mL Los componentes qumicos
IC 50: 47,5 g/mL que se elucidaron del aceite
Figura 4. Curva de captacin del radical superxido del aceite esencial de Tagetes esencial de las hojas de Tagetes
elliptica Smith
elliptica Smith fueron: 2-metil-
1-butil acetato; 2(10)-pineno,
biolgica tipo -pineno y l-verbenona, -cadinol, (1S,5S)-(-)-; 1R--pineno;4-etil-4-metil1hexeno;
-cadineno, isocariofileno, forbol y ambrosin. Otros 1-pentanol, 5 -(ciclopropil metileno)-; 3-t-butil-6-
estudios publicados revelan similares resultados metil-2Hpirano; l-verbenona; metoxicitronelal;
estableciendo que los aceites esenciales estn isocariofileno; -cadineno; cadina-3,9dieno;
conformados principalmente por compuestos -cadinol; cido ciclopropanocarboxlico 2-metil-
alifticos, monoterpenos y sesquiterpenos con 2,6 -di-t-butil -4-metilfenil ster; forbol; ambrosin
actividad biolgica (12). y butanimida.
La actividad antibacteriana del aceite esencial El aceite esencial de Tagetes elliptica Smith
de Tagetes elliptica Smith para Staphylococcus present actividad antibacteriana significativa frente
aureus fue significativa con un halo de inhibicin a los siguientes microorganismos: Staphylococcus
de 65 15,56 mm al 100%; mientras que en otros aureus, Staphylococcus epidermidis, Bacillus subtilis,
estudios como el de Alzamora y col., la actividad fue Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa. Asimismo
inferior (13). present actividad antifngica significativa frente a
Esta mayor actividad se debera a la presencia de: Cndida albicans.
Isocariofileno, l-verbenona y -pineno (14,15). El aceite esencial no present actividad
La actividad antibacteriana para Staphylococcus antioxidante significativa en comparacin a las
epidermidis fue significativa con un halo de inhibicin sustancias de referencia: Trolox y vitamina C.
de 56 mm al 100%; mientras que en los estudios de
Sarac y col.(16) se encontr que el aceite esencial de REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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