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BIOENSAYO
DE
TOXICIDAD
CON
SEMILLAS DE
LECHUGA
[ BIOQUIMICA ]
PRINCIPIO DE LA PRUEBA
Bioensayo de Toxicidad con semillas de
lechuga
El bioensayo de toxicidad con semillas de lechuga (Lactuca sativa) es una
prueba esttica de toxicidad aguda (120 horas de exposicin) en el que se
pueden evaluar los efectos fitotxicos de compuestos puros o de mezclas
complejas en el proceso de germinacin de las semillas y en el desarrollo de las
plntulas durante los primeros das de crecimiento. Como puntos finales para la
evaluacin de los efectos fitotxicos, se determina la inhibicin en la germinacin
y la inhibicin en la elongacin de la radcula y del hipocotilo.
METALES PESADOS
Son aquellos cuya densidad es por lo menos cinco veces mayor que la del agua.
El trmino de metal pesado refiere a cualquier elemento qumico metlico que
tenga una relativa alta densidad y sea txico o venenoso en concentraciones
bajas. Los ejemplos de metales pesados o algunos metaloides, incluyen el
mercurio (Hg), cadmio (Cd), arsnico (As), cromo (Cr), talio (Tl), y plomo (Pb),
entre otros (Lucho et al., 2005a).
Los metales pesados se encuentran generalmente como componentes naturales
de la corteza terrestre, en forma de minerales, sales u otros compuestos. No
pueden ser degradados o destruidos fcilmente de forma natural o biolgica ya
que no tienen funciones metablicas especficas para los seres vivos (Abollino
et al., 2002).
BIOACUMULACION
En el caso de las plantas se incorpora a ellas a travs del agua, aire y/o suelo.
La absorcin de metales pesados por las plantas es generalmente el primer
paso para la entrada de stos en la cadena alimentaria. La absorcin y posterior
acumulacin dependen en primera instancia del movimiento (movilidad de las
especies) de los metales desde la solucin en el suelo a la raz de la planta. En
plantas, el concepto de bioacumulacin se refiere a la agregacin de
contaminantes; algunos de ellos son ms susceptibles a ser fitodisponibles que
otros (Kabata-Pendias, 2000).
TOXICIDAD
Va de contaminacin
Aguas procedentes de desechos de minas, aguas residuales contaminadas de
parques industriales y municipales, filtraciones de presas de jales, etc.
Consecuencias
EL PLOMO
Segn Nriagu, (1978) el plomo ha sido el veneno de la
antigedad porque reside en el suelo y, debido a su baja
solubilidad, resiste la degradacin microbiana; en suma,
permanece biodisponible para el futuro. Este se caracteriza
por:
FUENTES NATURALES
El plomo es un
elemento relativamente
abundante que se
encuentra en aire,
agua, suelo, plantas y
animales. Sus fuentes
naturales son:
Erosion del
suelo
Desgaste de los
depsitos de los
minerales de
plomo
Emanaciones
volcnicas
Su proporcin en la
corteza terrestre es de
aprox. 15ppm (mg/kg)
y la cantidad total se estima en 3.8x1014 toneladas.
FUENTES ANTROPOGENICAS
En la salud humana
El plomo afecta:
En el ambiente
Animales:
El Plomo se acumula en los cuerpos de los organismos
acuticos y terrestres. Estos experimentarn efectos en su
salud por envenenamiento con Plomo.
Suelo:
Las funciones del suelo son alteradas por la intervencin del
Plomo, especialmente en zonas cercanas de las autopistas y
tierras de cultivos, donde concentraciones extremas pueden
estar presentes. Los organismos del suelo tambin sufren
envenenamiento por Plomo, tras la propagacin de las
partculas.
Plantas:
En la vegetacin el plomo se acumula primariamente en las
hojas por deposicin atmosfrica. El plomo presente en la
hoja rompe la cutcula y pasa al interior de la misma, se
acumula en las vesculas y puede originar efectos como
Inhibicin de la mitosis y por tanto del crecimiento de la
planta.
Inhibicin de la sntesis del ATP y del rendimiento
energtico.
Disminucin de la viabilidad de las semillas
FITORREMEDIACIN
FITORREMEDIACION DE MICORRIZAS:
Los HMA son un componente natural de los suelos en la mayora de
los ecosistemas terrestres. Se sabe que ms del 80 % de las plantas
terrestres son capaces de presentar una asociacin simbitica con
ellos y pueden ser considerados como una extensin de las races de
las plantas ya que amplan considerablemente el volumen de suelo
que puede ser explorado y por ende se incrementa la cantidad de
nutrientes que pueden ser obtenidos por la planta (Harrison 1999). El
incremento de nutrimentos es ms evidente cuando las plantas
micorrizadas se encuentran en condiciones adversas para su
crecimiento, como es el caso de suelos contaminados con plomo. Bajo
esta condicin, se ha reportado que en algunos casos las plantas
micorrizadas pueden mostrar mayor captacin de metales pesados por
la raz y aumentar el transporte de estos a la parte area de la planta
(fitoextraccin) (Rabie 2005), mientras que en otros casos el uso de
HMA contribuye a la inmovilizacin del metal en las races de las
plantas (Gaur y Andholeya 2004) o en el suelo (GonzlezChvez et
al. 2004) (fitoestabilizacin). Esto muestra que el resultado de la
micorrizacin de plantas con fines de fitorremediacin de suelos
contaminados depende de la combinacin plantahongometal y est
influenciado por las condiciones del suelo.
Por otro lado, es ampliamente conocido que los HMA pueden producir
una gran cantidad de micelio externo. Tambin es conocido que la
pared celular de este micelio est compuesta mayormente por quitina y
que este compuesto estructural provee una eficiente superficie para la
adsorcin de los metales pesados del suelo (Galliet al. 1994,
GonzlezChvez et al. 2004). Este potencial de adsorcin se debe a
que las hifas del hongo presentan una mayor afinidad (2 a 4 veces
ms) que las races (Joner et al. 2000), por lo que la inoculacin de
plantas tolerantes con HMA podran incrementar significativamente la
estabilizacin de metales pesados contenidos en el suelo.
2.5
ABSORCION DE METALES POR LAS
PLANTAS
Las plantas han desarrollado mecanismos altamente especficos
para absorber y acumular nutrientes, sin embargo, algunos
metales y metaloides no esenciales son absorbidos y
acumulados en la planta debido a que presente un
compartimiento electroqumico similar a los elementos nutritivos
requeridos.
La absorcin de metales pesados por las plantas es
comunmente el paso inicual para su entrada en la cadena
alimenticia. La absorcin y posterior acumulacin dependen del
movimiento de los metales desde la solucin del suelo a la raiz
de la planta, su transporte y movilizacin hacia las raices y los
tallos. Despues de este proceso de absorcin en los vegetales,
los metales estn disponibles para los herbivoros y humanos a
traves de la cadena alimenticia.
Otro mecanismo de ingreso de sustancias potencialmente
txicas a las plantas como los metales pesados en mediante la
absorcin foliar. La disponibilidad a travs de las hojas de
algunos elementos de traza provenientes de fuentes puede tener
un impacto significativo en la contaminacin de las plantas y
tambin es de particular importacia en la aplicacin de
fertilizantes foliares. La absorcin foliar es mediada por una fase
de penetracin cuticular y un mecanismo de carcter metablico
que considera la acumulacin de los elementos contra una
gradiente de concentracin.
Las plantas capaces de absorber y acumular metales sobre lo
establecido como normal para otras especies en los mismos
suelos se llaman hiperacumuladoras generalmente tiene poco
biomasa debido a que ellas utilizan ms energa en los
mecanismos necesarios para adaptarse a altas concentraciones
de metal en sus tejidos.
La absorcin y traslocacin de plomo por depositacin
atomosfrica en las hojas puede llegar a ser un 73% - 95% del
contenido de plomo total en las plantas de hoja como la lechuga
donde tiene un raango de 8 micro gramos de peso seco.
MECANISMOS DE RESPUESTA DE
LAS PLANTAS A LA PRESENCIA
DE METALES PESADOS
Las estrategias para evitar que los metales pesados aumenten en las plantas son
diversas. Extracelularmente se incluyen las micorrizas, la pared celular y exudados
extracelulares. La tolerancia puede adems involucrar la membrana plasmtica y el
citosol. Dentro del protoplasto existe una variedad de mecanismos potenciales, por
ejemplo, para la reparacin de los daos de estrs se ha involucrado a proteinas de
choque trmico o a las metalotionenas, as como la quelacin de metales por cidos
orgnicos, aminocidos o pptidos, o su compartamentalizacin a procesos metablicos
para el transporte dentro de la vacuola (Hall, 2002). Esta gama de mecanismos esta
resumido en la Figura.
Quelantes intracelulares
Por otro lado, a nivel intracelular los metales forman complejos con un
ligando existente o sintetizado de nuevo, que pueden ser cidos
orgnicos, algunos aminocidos, metalotionenas y fitoquelatinas,
siendo los dos ltimos los ms importantes (Rauser, 1999; Cobbett,
2000).
MATERIALES
1. Papel toalla
2. Tubos de ensayo
3. Mascarilla
4. Probetas
5. Placa Petri
6. Leja
7. Gotero
8. Matraz Erlenmeyer
9. Bureta
10. Agua destilada
11. Semillas de lechuga
PROCEDIMIENTO
7.
RESULTADOS
MEDICIONES DE LA PLACA 1 DE CONTROL:
Placa Con 20 Semillas + 3ml De Agua
RESULTADOS GENERALES:
Muestras
N semillas
Muestras
Se dej germinar la muestra por 3 das (el tiempo adecuado son 120
horas pero por cuestin de tiempo no se pudo dar). Al examinar la
muestra despus de este tiempo se observ que solo creci el de la
placa control que estaba con agua.
Plomo en el apoplasto
PARED CELULAR
MEMBRANA PLASMTICA
EFECTOS FISIOLGICOS
I) A altas concentraciones de Pb
Los efectos ocasionados por el plomo a altas concentraciones son:
Disminucin del 14 al 30 % en la germinacin de semillas de
arroz y reduccin del crecimiento de semillas de 13 a 45 % con
1mM Pb (Verma y Dubey, 2003)
Reduccin del nmero de semillas en germinacin y
encogimiento del hipoctilo de Lupinus (Wozny, et al., 1982).
Inhibicin de crecimiento de la raz a 10-2 - 10-6 M Pb in vitro o
con un contenido superior a 10 mg / kg de contenido de plomo
en el suelo (Breckle, 1991).
A nivel celular el plomo inhibe las actividades de enzimas que
contienen grupos sulfhidrilo (-SH) necesarios para su actividad
(Van Assche y Clijsters, 1990).
II) A bajas concentraciones de Pb
Efectos bioqumicos
RECOMENDACIONES:
Utilizar guantes en el movimiento de las semillas para evitar su
contaminacin con algunos agentes externos.
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'Bativia'cultivada en un suelo salino de la Sabana de Bogata, 19 de
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