RPUBLIQUE ALGRIENNE DMOCRATIQUE ET POPULAIRE

Ministre du Commerce

Direction Gnrale du Contrle Economique et de la Rpression des Fraudes

Direction des Laboratoires dEssais et dAnalyses de la Qualit

Sous-Direction des Procdures et Des Mthodes Officielles D'analyses

MTHODES OFFICIELLES D'ANALYSES

Physico-Chimiques et Microbiologiques

Janvier 2016
 RPUBLIQUE ALGRIENNE DMOCRATIQUE ET POPULAIRE
__________________

MINISTRE DU COMMERCE

DIRECTION GNRALE DU CONTRLE

CONOMIQUE ET DE LA RPRESSION
DES FRAUDES

Direction des Laboratoires dEssais

et dAnalyses de la Qualit

MTHODES OFFICIELLES D'ANALYSES

MICROBIOLOGIQUES ET PHYSICHO-CHIMIQUES
RELATIVES AUX LAITS ETPRODUITS DRIVS
 Sommaire

Mthodes microbiologiques
1. Arrt du 27 m ars 2004 rendant obl igatoire une m thode de dnombrement des germes
01
totaux 30 C pour les poudres de lait et de lactosrum. (JO n 32 - 2004)
2. Arrt du 27 m ars 2004 r endant obl igatoire un e m thode de c ontrle m icrobiologique
04
pour le lait strilis. (JO n 32 - 2004)
3. Arrt du 27 m ars 2004 r endant obl igatoire un e mthode de d nombrement de s
05
organismes microbiens pour le lait ferment. (JO n 32 - 2004)
4. Arrt du 24 mai 2004 rendant obligatoire une mthode de dnombrement des coliformes
07
dans les laits ferments. (JO n 43 - 2004)
5. Arrt du 24 m ai 2004 rendant obligatoire une mthode de recherche des staphylocoques
09
coagulase positive pour le lait en poudre. (JO n 43 - 2004)

6. Arrt du 24 m ai 2004 rendant obl igatoire un e mthode de d nombrement de s m icro-

organismes caractristiques par un e t echnique d e comtage des colonies 37 C dans l e 11
yaourt. (JO n 43 - 2004)
7. Arrt du 11 s eptembre 2004 r endant obl igatoire une m thode d e p rparation de s
chantillons pour e ssai e t di lutions e n vue de l examen m icrobiologique. 16
(JO n 70 - 2004)
8. Arrt du 11 s empembre 2004 r endant o bligatoire un e m thode de contrle
20
microbiologique pour le lait pasteuris. (JO n 70 - 2004)

9. Arrt du 11 s eptembre 2004 r endant obl igatoire une m thode de d nombrement de s

24
coliformes pour les crmes glaces et les glaces au lait. (JO n 70 - 2004)

10. Arrt du 23 j anvier 2005 r endant obligatoire une mthode de recherche des salmonella
28
dans le lait et les produits laitiers. (JO n 42 - 2005)

11. Arrt du 23 janvier 2005 rendant obligatoire une mthode danalyse microbiologique
39
du beurre. (JO n 42 - 2005)

12. Arrt du 23 janvier 2005 rendant obligatoire une mthode de prlvement dchantillons
43
et danalyse bactriologiques des glaces et crmes glaces. (JO n 42 - 2005)

13. Arrt du 25 s eptembre 2005 rendant obl igatoire une m thode d e r echerche de Listeria
49
monocytognes dans le lait et les produits laitiers. (JO n 03 - 2006)
 Mthodes physico-chimiques
14. Arrt du 16 aot 2012 rendant obligatoire une mthode de dtermination de la teneur en
58
matire sche dans le lait, la crme et le lait concentr non sucr. (JO n 54 - 2013)
15. Arrt du 8 dcembre 2013 rendant obligatoire une mthode de dtermination de la
61
teneur en matire sche des fromages et des fromages fondus. (JO n 25 - 2014)
16. Arrt du 27 aot 2013 rendant obligatoire la mthode de dtermination de la teneur en
64
azote protique dans le lait. (JO n 38 - 2014)
17. Arrt du 17 dcembre 2013 rendant obligatoire la mthode de dtermination de la teneur
67
en matire grasse dans le fromage. (JO n 67 - 2014)

18. Arrt du 17 dcembre 2013 rendant obligatoire la mthode de dtermination de la teneur

71
en matire grasse dans le lait. (JO n 74 - 2014)

19. Arrt du 17 dcembre 2013 rendant obligatoire la mthode de dtermination de la teneur

80
en azote dans le lait. (JO n 65 - 2014)

20. Arrt du 18 octobre 2015 rendant obligatoire la mthode de dtermination pparation de

l'chantillon pour essai en vue de l'analyse physique et chimique du lait. 87
(JO n 58 - 2015)

21. Arrt du 18 octobre 2015 rendant obligatoire la mthode de dtermination de l'acidit

89
titrable dans le lait sec. (JO n 58 - 2015)
12 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 32
ARRETES, DECISIONS ET AVIS
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 5 Safar 1425 correspondant au 27 mars 2004
rendant obligatoire la mthode de dnombrement
des germes totaux 30 C pour les poudres de
lait et de lactosrum.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 03-215 du 7 Rabie El Aouel
1424 correspondant au 9 mai 2003, modifi, portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 29 Safar 1414
correspondant au 18 aot 1993 relatif aux spcifications et
la prsentation de certains laits de consommation ;
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt par larrt interministriel du
25 Ramadhan 1418 correspondant au 24 janvier 1998
relatif aux spcifications microbiologiques de certaines
denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de
dnombrement des germes totaux 30 C dans les
poudres de lait et de lactosrum.
Art. 2. Pour le dnombrement des germes totaux
30 C dans les poudres de lait et de lactosrum,
les laboratoires du contrle de la qualit et de la
rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet effet
doivent employer la mthode danalyse microbiologique
dcrite en annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 5 Safar 1425 correspondant au 27 mars
2004.
Noureddine BOUKROUH.
3 Rabie Ethani 1425
23 mai 2004
ANNEXE
Mthode de dnombrement des germe totaux 30 C
pour les poudres de lait et de lactosrum
1/ Dfinition :
On appelle germes totaux , les germes microbiens
dnombrs par la prsente mthode. Le rsultat du
dnombrement est exprim en nombre de germes totaux
par gramme de poudre.
2/ Principe :
On procde une srie de dilution de lchantillon
reconstitu 47 2 C, que lon mlange avec le milieu
prescrit dans des botes de Ptri. Aprs incubation 30 C
pendant 72 heures, on compte des colonies.
3/ Appareillage et verrerie :
3.1 Appareils
3.1.1 Autoclave fonctionnant 120 C
3.1.2 Four air chaud fonctionnant jusqu 170 C.
3.1.3 Etuve bactriologique rgle une temprature
uniforme de 30 + 1 C
3.1.4 PH-mtre, avec compensation de temprature.
3.1.5 Loupe, grossissement 2,5.
3.1.6 Appareil de comptage lumineux.
3.1.7 Compteur - enregistreur.
3.1.8 Bain-marie 47 + 2 C.
3.1.9 Balance.
3.2. Verrerie :
Toute la verrerie doit tre strilisable.
3.2.1 Rcipient en verre pour la pese du lait en poudre.
3.2.2 Flacons de dilution dune contenance de 150 200
ml, avec bouchons ou capsules vis appropris.
3.2.3 Grands flacons (1000 ml ou plus ) pour la
prparation du milieu de culture.
3.2.4 Tubes essai, de 151/15 mm environ, destins
contenir le milieu culture.
3.2.5 Pipettes gradues ( 1 et 10 ml )
3.2.6 Bote de Ptri en verre transparent et incolore de
90 mm environ de diamtre intrieur et de 15 20 mm de
hauteur la profondeur intrieure doit tre de 12 mm
minimum. Le fond de cette bote doit tre plat et ne
prsenter ni irrgularits ni renflements. Les couvercles
doivent sadapter la bote.
01
3 Rabie Ethani 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 32 13
23 mai 2004

On peut utiliser des botes de Ptri en matire 4.2.2.4 Ajuster le milieu un pH de 7,0 - 7,1 en utilisant
plastique et des pipettes pr-strilises destines NaOH (1N) ou HCI (1N).
ntre utilises quune seule fois.
4.2.3 Rpartir par quantits de 10 12 ml dans les tubes
3.2.7 Perles de verres ( voir 6.2.1.4 ). essais.
4.2.4 Striliser pendant 15 minutes dans lautoclave
3.3. Matriels divers :
120 C;
3.3.1 Entonnoirs de filtration pour la prparation des 4.2.5 Vrifier le pH du milieu 45 C (ce pH doit tre
milieux. de 6,9 0,1).
3.3.2 Papiers-filtres rapides sadaptant aux entonnoirs 4.2.6 Le milieu doit tre conserv dans lobscurit,
(3.3.1). une temprature ne dpassant pas 5 C Prendre soin
dviter lvaporation.
3.3.3 Coton non absorbant, non toxique aprs
strilisation. 5/ Diluant :
3.3.4 Ractifs pour ajuster le pH. Tous les produits doivent tre de qualit analytique.

3.3.4.1 NaOH environ 1 N. 5.1 Solution de Ringer non dilue.

3.3.4.2 HCI environ 1 N. Composition :

4/ Milieu de culture :
4.1 Composition
Extrait de levure...................................................... 2,5 g
Tryptone.................................................................. 5,0 g
Glucose.................................................................... 1,0 g
Lait crm en poudre............................................. 1,0 g
Glose................................................................ 10 15 g
selon les proprits glifiantes de la glose utilise.
NaCI.................................................................9,00 g
KCI..................................................................0,42 g
Ca CI 2 (anhydre)............................................0,24 g
NaHCO3..........................................................0,20 g
Eau distille.....................................................1000 ml
(dans un appareil distiller en verre)
On peut utiliser un tampon au citrate ( raison de
15 g de citrate tri-sodique anhydre par 1000 ml) pour
les poudres faible solubilit.

Eau distille........................................................ 1000 ml On peut galement employer une solution de

(dans un appareil distiller en verre). peptone 0,1 % en lieu et place de la solution de
pH 6,9 0,1. Ringer dilue au quart.

Lextrait de levure, la tryptone, le glucose, le lait 5.2 Prparation :

crm en poudre et la glose doivent tre de qualit
bactriologique.
Le lait crm en poudre ne contiendra pas de
substances inhibitrices.
4.2 Prparation
4.2.1 Prparation partir de milieux en poudre.
4.2.1.1 Suivre les instructions du fabriquant mais
ajouter du lait crm en poudre (cf. 4.1).
4.2.1.2 Si ncessaire, ajuster le pH 7,0 - 7,1 en
utilisant NaOH (1 N) ou HCL (1N).
4.2.2 Prparation partir dingrdients spars.
5.2.1 Prparer la solution non dilue de Ringer en
dissolvant les sels (5.1) dans leau et, avant usage, diluer
une partie de cette solution avec trois parties deau
distille dans un appareil distiller en verre pour obtenir
une solution de Ringer dilue au quart.
5.2.2 Rpartir la solution dilue de faon obtenir aprs
strilisation des quantits de 90 2 ml dans les flacons de
dilution.
On peut prparer le diluant partir de tablettes
prtes lemploi.
5.2.3 Striliser pendant 15 minutes dans lautoclave
120 C.

4.2.2.1 Dissoudre successivement lextrait de levure, la 6/ Mthode :

tryptone, le glucose et le lait crm en poudre dans leau,
en chauffant si ncessaire. 6.1 Prparation de la verrerie
4.2.2.2 Ajouter la glose et porter bullition jusqu ce 6.1.1 Toute la verrerie doit tre nettoye soigneusement
que la glose soit compltement fondue ou chauffer la avant emploi.
vapeur pendant environ 30 minutes.
6.1.2 Les tubes essais, les pipettes et les flacons
4.2.2.3 Filtrer sur papier filtre. doivent tre bouchs avec du coton avant leur strilisation.

02
14 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 32
Pour la strilisation, on peut galement envelopper les
pipettes dans du papier aluminium ou dans tout autre
matriau appropri.
6.1.3 La strilisation des pipettes et des boites de Ptri
seffectuera de prfrence dans un four air chaud
pendant une heure et une temprature comprise entre
165 et 170 C, mais il est galement possible de striliser
ce matriel lautoclave pendant 120 C .
Dans ce dernier cas, ne pas fermer les rcipients dans
lesquels le matriel est strilis.
Scher la verrerie ainsi strilise dans lautoclave ou
dans un four air chaud.
6.2. Prparation des dilutions
6.2.1 Prparation de dilution au 1/10 (reconstitution de
la poudre).
6.2.1.1 Rchauffer un flacon contenant 90 ml de diluant
47 2 C au bain-marie.
6.2.1.2 Peser 10 g de lait en poudre dans un rcipient en
verre strilis en procdant de faon aseptique.
6.2.1.3 Introduire la poudre dans le flacon de dilution
contenant le diluant 47 2 C.
6.2.1.4 Pour dissoudre la poudre, la mouiller en faisant
tourner lentement puis en secouant doucement le flacon
pendant 10 secondes environ, 25 fois avec un mouvement
dune amplitude de 30 cm environ.
Des perles en verre peuvent contribuer une
meilleure reconstitution. Si lon y recourt, les ajouter
au flacon avant strilisation.
6.2.1.5 Remettre le flacon au bain-marie et le maintenir
pendant 5 minutes en agitant de temps autre le contenu.
6.2.1.6 Agiter une fois et effectuer le dnombrement.
Le volume final du lait reconstitu est denviron 97,5
ml et non de 100 ml, mais cet cart est ngligeable.
6.2.2. Prparation des dilutions au 1/100 et plus.
6.2.2.1 A laide dune pipette strile transfrer 10 ml de
lait reconstitu dans 90 ml de diluant strile en veillant
ne pas enfoncer lextrmit de la pipette de plus dun
centimtre au-dessous de la surface. On obtient ainsi la
dilution au 1/100.
6.2.2.2 Mlanger en agitant 25 fois avec un mouvement
dune amplitude de 50 cm environ.
6.2.2.3 On peut poursuivre les dilutions dcimales en
utilisant chaque fois une nouvelle pipette pour passer
dune dilution lautre comme prvue au 6.2.2.1.
6.3. Ensemencement des botes de Ptri.
6.3.1 Prparer au moins deux botes partir de chaque
dilution choisie de faon obtenir au moins deux botes
comprenant de 20 300 colonies.
03
3 Rabie Ethani 1425
23 mai 2004
Normalement il suffit de choisir deux dilutions parmi
les dilutions au 1/10, au 1/100 ou au 1/1000, mais si lon
prvoit une numration trs leve, il faudra procder
dautres dilutions.
6.3.2 Utiliser une nouvelle pipette strile de 1 ml pour
ensemencer 1 ml de chaque dilution dans les botes de
Ptri.
6.4. Rpartition de la glose dans les botes de Ptri
6.4.1 Faire bouillir le milieu et le refroidir aussi vite
que possible une temprature de 45 47 C.
6.4.2 Verser dans chaque bote 10 12 ml du milieu
fondu, refroidir une temprature de 45 47 C
6.4.3 Immdiatement aprs avoir vers le milieu, le
mlanger par cinq mouvements de va-et-vient, suivis de
cinq mouvements circulaires dans le sens des aiguilles
dune montre suivis de cinq mouvements de va-et-vient
excuts perpendiculairement aux premiers et suivis enfin
de cinq mouvements circulaires dans le sens contraire des
aiguilles dune montre.
6.4.4 Laisser reposer les botes jusqu la solidification
du milieu, les retourner et les placer dans ltuve. Le
temps qui scoule entre la prparation des dilutions, et la
rpartition de la glose dans les botes ne doit pas dpasser
15 minutes.
Il importe que les oprations dcrites aux points 6.2,
6.3 et 6.4 soient excutes labri de la lumire.
6.5 Incubation des botes de Ptri.
Les botes sont mises incuber, leur fond tant tourn
vers le haut 30 1 C pendant 72 2 heures ; il est
prfrable de ne pas les empiler plus de quatre
(maximum six).
Les piles de botes ne doivent pas se toucher, ni tre en
contact avec les parois ou la partie suprieure de ltuve.
6.6 Numration des colonies
6.6.1 Les colonies doivent tre comptes dans les
4 heures qui suivent la fin de la priode dincubation pour
faciliter la numration. Il est recommand dutiliser un
appareil de comptage lumineux muni dune loupe et dun
compteur-enregistreur.
6.6.2 Ne tenir compte, pour exprimer les rsultats, que
des botes dans lesquelles se sont dveloppes de 20 300
colonies.
6.6.3 Calculer la moyenne arithmtique partir des
chiffres obtenus dans les botes ensemences avec la
mme dilution.
6.6.4 Si les botes correspondant plusieurs dilutions
donnent des rsultats compris entre ces limites, ne tenir
compte que de la moyenne des rsultats.
6.6.5 Si une numration dpasse peine 300 colonies et
si la dilution suivante est peine infrieure 20 colonies,
prendre la moyenne.
6.6.6 Si lcart est important, recommencer lpreuve.
3 Rabie Ethani 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 32
23 mai 2004
6.6.7 Si une bote a plus du quart de sa surface
recouvert de colonies envahissantes, elle doit tre carte.
7/ Expression des rsultats.
7.1 Nombre de germes par g = nombre de colonies
dtermines selon le processus expos en 6.6 multipli par
linverse de la dilution. Il ny a lieu de tenir compte que
de deux chiffres significatifs.
7.2 Pour un nombre de trois chiffres, arrondir au zro le
plus proche. Si le troisime chiffre est 5, arrondir au
chiffre infrieur si les deux premiers chiffres sont des
nombres pairs et au chiffre suprieur si les deux premiers
sont des nombres impairs par exemple.
236 240
234 230
235 240
225 220
245 240
7.3 Si les botes correspondant la dilution la plus
faible contiennent moins de 20 colonies on considrera
que le nombre de germes est infrieur 20 fois linverse
de cette dilution.
Si les botes correspondant la dilution la plus leve
contiennent plus de 300 colonies, on considrera que le
nombre de germes est suprieur 300 fois linverse de
cette dilution.
8/ Rptabilit
La diffrence entre les rsultats de dnombrement faits
en double (rsultats obtenus simultanment ou rapidement
lun aprs lautre par le mme oprateur) ne doit pas
scarter de plus de 30 % du rsultat le plus bas.
crms et destins la consommation en tant que tels,
Arrt du 5 Safar 1425 correspondant au 27 mars 2004
rendant obligatoire la mthode de contrle
microbiologique pour le lait strilis.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 03-215 du 7 Rabie El Aouel
1424 correspondant au 9 mai 2003, modifi, portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 29 Safar 1414
correspondant au 18 aot 1993 relatif aux spcifications et
la prsentation de certains laits de consommation ;
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt par larrt interministriel du
25 Ramadhan 1418 correspondant au 24 janvier 1998
relatif aux spcifications microbiologiques de certaines
denres alimentaires ;
15
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de contrle
microbiologique pour le lait strilis.
Art. 2. Pour le contrle microbiologique du lait
strilis, les laboratoires du contrle de la qualit et de la
rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet effet
doivent employer la mthode danalyse microbiologique
dcrite en annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 5 Safar 1425 correspondant au 27 mars
2004.
Noureddine BOUKROUH.
ANNEXE
Mthode de contrle microbiologique
pour le lait strilis
1/ Objet :
Cette mthode est applicable tous les types de laits
striliss liquides, entiers, partiellement ou entirement
(Ces dispositions excluent les laits concentrs, sucrs ou
non ainsi que les laits aromatiss).
2/ Echantillonnage et prparation des chantillons.
2.1 Echantillonnage
Lchantillonnage (nombre des chantillons et
frquence) doit tre bas sur des principes statistiques.
A chaque chantillonnage on doit prlever trois
rcipients par chantillon except dans les pays climat
tempr o deux rcipients par chantillon suffisent.
2.2 Prparation des chantillons
Les rcipients doivent tre propres et secs avant leur
ouverture et avant incubation. Avant douvrir le rcipient
son contenu doit tre bien mlang (par inversions
rptes).
Tous les instruments utiliss pour le prlvement de
portions de lait dans les rcipients doivent tre propres et
striles.
Toutes les prcautions normales de laboratoire doivent
tre prises pour viter une contamination des chantillons.
04
16 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 32
3/ Contrle effectuer avant incubation (sur au
moins un des chantillons ou rcipients).
3.1 Test de stabilit lthanol.
Mlanger le volume dune solution aqueuse dthanol
68% (v/v) un volume de lait. Sil ne se forme pas de
prcipit, le lait a satisfait lpreuve de stabilit
lthanol et on doit procder aux tests ci-aprs.
3.2 Acidit titrable exprime en g dacide lactique pour
100 ml de lait strilis.
3.3 Examen microscopique direct.
3.4 Examen organoleptique : prsence ou absence de
prcipit, sdiment, odeur ou saveur anormale.
4/ Incubation.
(si le lait a satisfait au test de stabilit lthanol)
4.1 Incuber lun des rcipients non ouverts ou lun des
chantillons 30 1 C pendant 14 jours.
4.2 Incuber les rcipients non ouverts ou lchantillon
restant 55 1 C pendant 7 jours.
Dans les climats temprs, lincubation 55 1 C peut
tre omise.
5/ Contrles effectuer aprs incubation
5.1 Test de stabilit lthanol.
Mlanger un volume dune solution aqueuse dthanol
68% (v/v) un volume de lait. Si le lait satisfait
lpreuve de stabilit lthanol on doit procder aux tests
ci-aprs :
5.2 Acidit titrable, exprime en g dacide lactique pour
100 ml de lait.
5.3 Dnombrement des colonies linoculum doit tre
quivalent 0,1 ml de lait.
5.4 Examen organoleptique; prsence ou absence de
prcipit, sdiment, odeur ou saveur anormale.
6 Exigences imposes pour que lchantillon puisse
tre reconnu satisfaisant
6.1/ Avant incubation.
Lchantillon doit satisfaire lpreuve de lthanol
(3.1)
6.2 Aprs incubation
6.2.1 Lchantillon doit satisfaire lpreuve de
stabilit lthanol (5.1).
6.2.2 La diffrence entre lacidit titrable avant et aprs
incubation ne doit pas tre suprieure 0,02 exprime en
g dacide lactique pour 100 ml de lait.
6.2.3 La numration des germes ne devra pas dpasser
10 par inoculum (5.3).
6.2.4 Lodeur et la saveur de lchantillon ne doivent
pas tre diffrentes de lodeur et de la saveur normales
dun lait strile incub pendant un laps de temps prolong.
3 Rabie Ethani 1425
23 mai 2004
6.2.5 Laspect physique doit tre normal, on ne doit
constater aucune trace de coagulation ou de protolyse et
doit correspondre celui dun lait strilis ayant subi une
incubation prolonge.
7/ Apprciation de la qualit dun lot
7.1 Cette opration doit se fonder sur une interprtation
statistique des rsultats obtenus sur lchantillon.
Arrt du 5 Safar 1425 correspondant au 27 mars 2004
rendant obligatoire la mthode de dnombrement
des organismes microbiens pour le lait ferment.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 03-215 du 7 Rabie El Aouel
1424 correspondant au 9 mai 2003, modifi, portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 29 Safar 1414
correspondant au 18 aot 1993 relatif aux spcifications et
la prsentation de certains laits de consommation ;
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt par larrt interministriel du
25 Ramadhan 1418 correspondant au 24 janvier 1998
relatif aux spcifications microbiologiques de certaines
denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de
dnombrement des organismes microbiens pour le lait
ferment.
Art. 2. Pour le dnombrement des organismes
microbiens du lait ferment, les laboratoires du contrle
de la qualit et de la rpression des fraudes et les
laboratoires agrs cet effet doivent employer la
mthode danalyse microbiologique dcrite en annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 5 Safar 1425 correspondant au 27 mars
2004.
Noureddine BOUKROUH.
05
3 Rabie Ethani 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 32
23 mai 2004
ANNEXE
Mthode de dnombrement des organismes
microbiens dans le lait ferment.
1/ Dfinition :
On entend par organismes de contamination tous
microorganismes autres que ceux responsables de
fermentations spcifiques du type de lait ferment
considr.
Les levures faisant partie de la flore spcifique
certains types de laits ferments ne doivent pas tre
considres comme des organismes de contamination.
2/ Principe
Un chantillon de lait ferment est ensemenc sur un
milieu rendu exempt de glucides qui est incub deux
reprises; on dnombre ensuite les organismes de
contamination.
3/ Appareillage et verrerie :
Matriel courant de laboratoire.
4/ Milieu de culture :
Le milieu de culture a la composition suivante :
Glysate (*) ou quivalent........................................7,5 g
Trypticase (*) ou quivalent.....................................7,5 g
Chlorure de sodium (NaCL).....................................5,0 g
Glose (*).................................................................4,0 g
Eau distille.........................................................1000 ml
Le pH du milieu aprs strilisation....................7,6 0,1
(*) rendu exempt de glucides.
5/ Diluant :
Solution de Ringer au quart.
La composition de la solution concentre de Ringer est
la suivante :
Chlorure de sodium (NaCI)....................................9,00 g
Chlorure de potassium (KCI).................................0,42 g
Chlorure de calcium anydre (CaCI2).....................0.24 g
06
17
Bicarbonate de sodium (NaHCO3)........................0.20 g
Eau distille (dans un appareil en verre).............1000 ml
Pour lemploi, ajouter une partie de la solution
prcdente trois parties deau distille (dans un appreil
en verre).
On peut galement employer une solution de
peptone 0,1 % au lieu et place de la solution de
Ringer dilue au quart.
On peut galement prparer le diluant partir de
tablettes prtes lemploi.
Tous les ractifs doivent tre de qualit
analytique.
6/ Mode opratoire
6.1 Prparation des dilutions
6.1.1 Lchantillon sera conserv dans un rfrigrateur
(3 4 C) jusqu lanalyse bactriologique qui sera
effectue dans un dlai maximum de 24 h aprs le
prlvement.
6.1.2 Prlever, en sentourant des prcautions
aseptiques habituelles, un chantillion de 10 g de lait
ferment quon dposera dans un flacon ou rcipient
appropri, ferm vis ou bouch, contenant 90 ml dune
solution de Ringer au quart et quelques perles de verre.
Mlanger soigneusement en agitant le flacon 25 fois
de haut en bas avec une amplitude de 30 cm environ.
Le liquide est utiliser pour la numration 1 ml
correspondant 100 mg de lait ferment.
6.1.3 Afin dobtenir la dilution au 1/100, transfrer
aseptiquement 1 ml du liquide (6.1.2) 9 ml de solution
de Ringer au quart, en mlangeant. Prparer, si ncessaire,
une srie de dilutions au 1/1000 partir de la dilution au
1/100.
6.2 Incubation
On fera incuber les botes de Ptri
dabord pendant 48 2 heures 30 1 C;
puis pendant 48 2 heures 20 1 C.
7 Expression des rsultats
Exprimer le rsultat du dnombrement en nombre de
microorganismes par gramme de lait ferment,
cest--dire le nombre de colonies x inverse de la dilution.
Dans certains cas, les bactries lactiques donnent
naissance des points de colonies . Ces dernires ne
doivent pas tre comptes comme organismes de
contamination. En cas de doute, effectuer lpreuve de la
catalase sur un nombre reprsentatif de colonies.
16 Joumada El Oula 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43
4 juillet 2004
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 4 Rabie Ethani 1425 correspondant au
24 mai 2004 rendant obligatoire une mthode de
dnombrement des coliformes dans les laits
ferments.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 18 aot 1993 relatif aux
spcifications et la prsentation de certains laits de
consommation ;
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt, relatif aux spcifications
microbiologiques de certaines denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de
dnombrement des coliformes dans les laits ferments.
Art. 2. Pour le dnombrement des coliformes dans
les laits ferments, les laboratoires du contrle de la
qualit et de la rpression des fraudes et les laboratoires
agrs cet effet doivent employer la mthode
microbiologique dcrite en annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 4 Rabie Ethani 1425 correspondant au
24 mai 2004.
Noureddine BOUKROUH.
0,1.
ANNEXE
Mthode de dnombrement des coliformes dans les
laits ferments
1/ Dfinition :
Aux fins de la prsente mthode la dnomination
coliforme sapplique aux bactries en forme de
bacilles Gram ngatives, arobies et facultativement
anarobies, non sporules fermentant le lactose avec
formation de gaz et dacide.
7
2/ Principe :
Trois sries de dilutions en parallle, obtenues partir
de lchantillon de lait ferment, sont ensemences sur un
milieu slectif au Brillant Green Lactose Bile Broth
dans des tubes essais contenant de petits tubes de
Durham. On incube les tubes pendant 48 heures 37 C.
A partir des tubes positifs (production de gaz dans les
cloches de Durham) on dtermine le nombre le plus
probable de bactries coliformes par g de lait ferment en
se rfrant au tableau NPP (nombre le plus probable) pour
trois sries parallles.
3/ Appareillage et verrerie :
Matriel courant de laboratoire.
4/ Milieu de culture :
4.1 Composition
La composition du milieu Brillant Green Lactose Bile
Broth est la suivante :
Peptone ou glisate................................................. 10 g
Lactose.................................................................... 10 g
Bile de buf dshydrate........................................ 20 g
Vert brillant........................................................0,0133 g
Eau distille (dans un appareil en verre)............ 1000 ml
4.2 Prparation
Pour prparer 1000 ml du milieu, dissoudre le peptone
et le lactose dans environ 500 ml deau distille.
Dissoudre 20 g de bile de buf anhydre dans 200 ml
deau distille. Le pH de cette solution doit tre compris
entre 7,0 et 7,5. Mlanger les deux solutions, ajuster le pH
mesur laide dune lectrode de verre, 7,4 ajouter
13,3 ml dune solution aqueuse 0,1% de vert brillant. Le
volume est complter 1000 ml avec de leau distille.
Verser 10 ml de milieu dans les tubes essais.
Ces tubes sont munis de cloches de Durham. Aprs le
remplissage, striliser pendant 15 minutes dans des
autoclaves rgls 121 C. Aprs strilisation, le pH
mesur laide dune lectrode de verre doit tre de 7,2
5/ Diluant :
Solution de Ringer au quart.
La composition de la solution concentre de Ringer est
la suivante :
Chlorure de sodium (NACL)..................................9,00 g
Chlorure de potassium (KCL)................................0,42 g
Chlorure de calcium anhydre (CaCL2)...................0,24 g
Bicarbonate de sodium (NaHCO3).........................0,20 g
07
 16 Joumada El Oula 1425
8 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43 4 juillet 2004

Eau distille (dans un appareil en verre).............1000 ml NOMBRE LE PLUS PROBABLE (NPP) POUR
TROIS SERIES PARALLELES
Pour lemploi, ajouter une partie de la solution
prcdente trois parties deau distille (dans un appareil
en verre). NPP NPP
Index Index
La solution dilue sera strilise par chauffage pendant (pour (pour
Tubes positifs de Tubes positifs de
15 minutes 121 C. 10 g) 10 g)
On peut galement employer une solution de 10 g 1,0 g 0,1 g
10 g 1,0 g 0,1 g
peptone 0,1 % au lieu et place de la solution de
Ringer dilue au quart. 2 3
0 0 0 0 2 4,0
Tous les ractifs doivent tre de qualit 0 0 1 0,3 2 3 0 3,0
analytique. 0 1 0 0,3 2 3 1 3,5
0 1 1 0,6 2 3 2 4,0
6/ Mode opratoire : 0 2 3 0 0 2,5
0 0,6
1 0 0 0,4 3 0 1 4,0
6.1 Prparation des dillutions
1 0 1 0,7 3 0 2 6,5
6.1.1 Lchantillon sera conserv dans un rfrigrateur 1 0 2 1,1 3 1 0 4,5
(3 4 C) jusqu lanalyse bactriologique qui sera 1 1 0 0,7 3 1 1 7,5
effectue dans un dlai maximum de 24 h aprs le 1 1 1 1,1 3 1 2 11,5
prlvement. 1 2 0 1,1 3 1 3 16,0
1 2 1 1,5 3 2 0 9,5
6.1.2 Prlever, en sentourant des prcautions 1 3 0 1,6 3 2 1 15,0
aseptiques habituelles, un chantillon de 10 g de lait 2 0 0 0,9 3 2 2 20,0
ferment que lon dposera dans un flacon ou rcipient 2 0 1 1,4 3 2 3 30,0
appropri, ferm vis ou bouch, contenant 90 ml dune 2 0 2 2,0 3 3 0 25,0
solution de Ringer au quart et quelques perles de verre. 2 1 0 1,5 3 3 1 45,0
Mlanger soigneusement en agitant le flacon 25 fois de 2 1 1 2,0 3 3 2 110,0
haut en bas avec une amplitude de 30 cm environ. 2 1 2 3,0 3 3 3 140,0
2 2 0 2,0
Le liquide est utiliser pour la numration; 1 ml 2 2 1 3,0
correspond 100 mg de lait ferment. 2 2 2 3,5
6.1.3 Afin dobtenir la dilution au 1 /100, transfrer
aseptiquement 1 ml du liquide (6.1.2) 9 ml de solution Le NPP dtermine le nombre de bactries coliformes
de Ringer au quart, en mlangeant. Prparer, si ncessaire, dans la quantit de lait ferment (en rgle gnrale 1 g ou
une srie de dilutions au 1/1000 partir de la dilution au 0,1 g ou 0,01 g) ayant servi ensemencer en parallle
1/100. les trois premiers tubes partir desquels on constitue
lindex.
6.2. Ensemencement du milieu
6.2.1 Ensemencer les tubes de Brillant Green Lactose Le nombre de bactries coliformes sera exprim par le
Bile Broth avec 1 g de lait ferment et avec les dilutions nombre le plus probable (NPP) par g de lait ferment. Si
prpares connues, indiqu en 6.1.3. Mlanger tous les tubes sont positifs, il faut rpter lanalyse en
soigneusement, en vitant dintroduire des bulles dair utilisant des dilutions plus leves (par exemple 0,1 g,
dans les tubes de Durham. 0,01 g et 0,001 g ou encore plus leves).
6.2.2 Ensemencer en parallle dans trois tubes chaque
quantit dchantillon et chaque dilution; effectuer au Si lon trouve un chiffre-index ne figurant pas dans le
moins trois sries, par exemple 1g, 0,1g et 0,01g. En tableau NPP, on peut en conclure quune erreur a t
gnral, on doit prvoir un nombre de dilutions au commise dans le mode opratoire.
dixime suffisant pour rpondre aux exigences du tableau
ci-dessous.
7/ Expression des rsultats
6.3. Incubation
(NPP) Les rsultats sont exprims en tant que nombre le
Incuber les tubes ensemencs pendant 48 heures 2h plus probable de bactries coliformes par g du produit,
30C 1 C; selon les indications du tableau.

6.4. Dtermination du nombre le plus probable de

bactries coliformes
Le test est considr comme positif lorsquil y a
production visible de gaz dans les tubes de Durham. Le
nombre de tubes positifs est dterminant pour la lecture du
nombre le plus probable (NPP) de bactries coliformes
selon le tableau ci-dessous pour trois sries parallles.
8/ Rptabilit
Les diffrences entre les rsultats de dtermination
effectues en double (rsultats obtenus simultanment
ou rapidement lun aprs lautre par le mme analyste)
ne doit pas scarter de plus de 30% du rsultat le
plus bas.

08
16 Joumada El Oula 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43
4 juillet 2004
Arrt du 4 Rabie Ethani 1425 correspondant au 24
mai 2004 rendant obligatoire une mthode de
recherche des staphylocoques coagulase
positive pour le lait en poudre.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 18 aot 1993 relatif aux
spcifications et la prsentation de certains laits de
consommation ;
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt, relatif aux spcifications
microbiologiques de certaines denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de recherche
des staphylocoques coagulase positive pour le lait en
poudre.
Art. 2. Pour la recherche des staphylocoques
coagulase positive pour le lait en poudre. les laboratoires
du contrle de la qualit et de la rpression des fraudes et
les laboratoires agrs cet effet doivent employer la
mthode danalyse microbiologique dcrite en annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 4 Rabie Ethani 1425 correspondant au
24 mai 2004.
Noureddine BOUKROUH.
ANNEXE
RECHERCHE DES STAPHYLOCOQUES
A COAGULASE POSITIVE DANS LE LAIT
EN POUDRE
1/ Principe :
On inocule le lait reconstitu correspondant 0,1g de
poudre dans des bouillons denrichissement (dans celui de
Giolitti et Cantoni ou, sil sagit de poudres fabriques
depuis moins de 15 jours, dans le bouillon sal lactos au
rouge de phnol). Aprs incubation, on repique les tubes
sur milieu E.T.G.P.A de Baird-Parker (3.3). Les colonies
de staphylocoques qui se dveloppent sur le milieu de
Baird-Parker sont soumises lpreuve de la coagulase.
9
2/ Reconstitution du lait en poudre et prparation
des dilutions.
La reconstitution du lait en poudre et la prparation des
dilutions se font selon les conditions appropries.
3/ Formules des milieux et directives pour leur
prparation.
3.1 Milieu de Giolitti et Cantoni
3.1.1 Milieu de base
Tryptone....................................................................10 g
Extrait de viande..........................................................5 g
Extrait de levure..........................................................5 g
Chlorure de lithium.....................................................5 g
Mannitol....................................................................20 g
Chlorure de sodium.....................................................5 g
Glycine.....................................................................1,2 g
Pyruvate de sodium....................................................3 g
Eau distille.........................................................1000 ml
Faire dissoudre les produits dans leau en chauffant et
en agitant pour obtenir une dissolution complte. Refroidir
50-60 C et ajuster le pH 6,9 0,1. Rpartir raison
de 19 ml dans des tubes de 20 x 200. Autoclaver 20 mn
115 C. Avant utilisation, chasser lair par chauffage
100 C pendant 20 mn. Refroidir.
3.1.2 Solution de tellurite de potassium
Tellurite de potassium.................................................1 g
Eau distille...........................................................100 ml
Dissoudre le tellurite de potassium dans leau. Striliser
par filtration.
On devra sassurer au pralable, par des essais
bactriologiques, que le tellurite de potassium dont on
dispose convient pour cet usage. Il est recommand en
toute circonstance de porter grande attention et il faut
souligner limportance dun choix judicieux de ce produit
en ce qui concerne son origine et les garanties quil offre.
3.1.3 On prpare en outre une glose 2% (dans leau
distille) que lon strilise laucolave (20 mn 120 C)
et qui sert former un bouchon anarobie au-dessus du
milieu liquide (voir 4.1).
3.1.4 Mode demploi
Juste avant lutilisation, chauffer les tubes de milieu de
base (3.1.1) pendant 20 mn 100 C pour chasser lair.
Refroidir 45 C et ajouter 0,1 ml de la solution de
tellurite de potassium (3.1.2).
3.2 Bouillon sal lactos au rouge de phnol
Extrait de viande de buf.........................................1,5 g
Protose-peptone......................................................7,5 g
Chlorure de sodium...................................................75 g
09

10 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43
Lactose.....................................................................7,5 g
Rouge de phnol...................................................0,025 g
Eau distille.........................................................1000 ml
Faire dissoudre les produits dans leau en chauffant et
en agitant pour obtenir une dissolution complte. Refroidir
temprature ambiante et ajuster le pH 7,4 0,1.
Rpartir raison de 9 ml dans des tubes de 18 x 180.
Autoclaver 20 mn 120 C.
3.3 Milieu E.T.G.P.A. de Baird-Parker
3.3.1 Milieu de base
Tryptone....................................................................10 g
Extrait de buf............................................................5 g
Extrait de levure..........................................................1 g
Chlorure de lithium.....................................................5 g
Glose................................................................15 20 g
(selon le pouvoir glifiant de la glose utilise)
Eau distille.........................................................1000 ml
Faire dissoudre les produits dans leau en chauffant et
en agitant pour obtenir une dissolution complte. Refroidir
50-60 C et ajuster le pH 6,8 0,1.
Rpartir raison de 90 ml dans des flacons col vis
bouchs baklite. Autoclaver 15 mn 120 C.
3.3.2 Solution de glycine
Glycine..................................................................... 20 g
Eau distille...........................................................100 ml
Aprs complte dissolution, autoclaver 15 mn 120 C.
3.3.3 Solution de tellurite de potassium
Tellurite de potassium.................................................1 g
Eau distille...........................................................100 ml
Aprs complte dissolution, striliser par filtration. On
devra sassurer au pralable, par des essais
bactriologiques, que le tellurite de potassium dont on
dispose convient pour cet usage. Il est recommand en
toute circonstance de porter grande attention et il faut
souligner limportance dun choix judicieux de ce produit
en ce qui concerne son origine et les garanties quil offre.
3.3.4 Emulsion de jaune duf
Tremper des ufs frais une minute environ dans une
dilution (1+1000) dune solution sature de HgCI2.
Briser les coquilles aseptiquement et sparer les jaunes
des blancs. Mlanger les jaunes avec une solution saline
physiologique (3+7, v/v) pendant 5 secondes environ dans
un mlangeur grande vitesse.
3.3.5 Mode demploi
A 90 ml de milieu de base pralablement fondu et
maintenu 45 C 1 C, ajouter aseptiquement les
solutions suivantes amenes 45 C :
10
16 Joumada El Oula 1425
4 juillet 2004
a) 6,3 ml de la solution de glycine (3.3.2) ;
b) 1 ml de la solution de tellurite de potassium (3.3.3) ;
c) 5 ml dmulsion de jaune duf (3.3.4) ;
Bien mlanger les prparations a, b et c dans le milieu
fondu et rpartir immdiatement en botes de Ptri
raison de 15 ml par bote.
Ces botes coules peuvent tre conserves 48 heures
+ 4 C. Immdiatement avant lutilisation, tendre sur la
surface des botes 0,5 ml dune solution 20% (p/v) de
pyruvate de potassium strilise par filtration, scher les
botes 50 C en position horizontale, la surface de la
glose en dessus. Inoculer les botes ds quelles sont
sches.
Conserver la solution de pyruvate 3-5 C et la
remplacer chaque mois.
4/ Mode opratoire
4.1 Si la fabrication de la poudre de lait a t faite plus
de 15 jours avant lanalyse, ou si elle est de date inconnue
ajouter 1ml de lait reconstitu correspondant 0,1 g de
poudre de lait dans un tube de bouillon denrichissement
de Giolitti et Cantoni (3.1.4).
Bien mlanger linoculum avec le milieu en vitant
toute introduction dair. On coule ensuite au-dessus du
milieu un bouchon de glose 2% (3.1.3) fondue et on
laisse solidifier.
4.2 Sil sagit de poudres fabriques depuis moins de 15
jours ajouter 1 ml de lait reconstitu dans un tube de
bouillon sal lactose au rouge de phnol (on peut utiliser
galement le milieu de Giolitti et Cantoni comme en 4.1).
4.3 Incuber pendant 24 h 37 C lun et/ou lautre des
milieux denrichissement ensemencs (cest--dire 4.1
et/ou 4.2).
4.3.1 Repiquer selon 4.6 et 4.7 les tubes de bouillon
denrichissement de Giolitti et Cantoni prsentant un
noircissement ou un prcipit noirtre.
4.3.2 Repiquer selon 4.7 les tubes de bouillon sal
lactos au rouge de phnol ayant vir au jaune.
4.4. Incuber les autres tubes 24 h supplmentaires et les
repiquer selon 4.6 et 4.7.
4.5 Le procd pour repiquer les tubes de bouillon
denrichissement aprs leur incubation est donn en 4.6 et
4.7.
4.6 Dans le cas du milieu de Giolitti et Cantoni,
enlvement du bouchon de glose selon la technique
suivante :
Avec une spatule, dcouper le bouchon de glose selon
deux diamtres perpendiculaires et, si ncessaire, passer
ensuite la spatule autour du bouchon.
Placer le tube sur lagitateur de faon faire tomber les
morceaux de bouchon au fond du tube et, en mme temps,
mettre les bactries en suspension.
4.7 Avec une anse de platine, prlever environ
0,001 ml de culture dveloppe dans le bouillon
denrichissement, taler la surface dune bote
renfermant le milieu E.T.G.P.A. de faon obtenir des
colonies spares.
16 Joumada El Oula 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43
4 juillet 2004
4.8 Incuber les botes retournes 24 h 37 C 1 C.
4.9 Soumettre au moins 3 colonies typiques lpreuve
de la coagulase (4.12). Les colonies typiques de
staphylococcus aureus sont noires, brillantes avec une
mince bordure blanche et entoures dune zone claire
stendant dans le milieu opaque.
4.10 Si au bout de 24 h aucun dveloppement ne sest
produit ou si lon observe seulement des colonies
atypiques, incuber 24 h supplmentaires 37 C 1 C.
4.11 Si des colonies se sont dveloppes (daprs 4.10)
en soumettre trois au moins lpreuve de la catalase.
Pour cela prendre, avec un fil de platine une partie de
chacune de ces colonies et la mlanger sur une lame une
goutte deau oxygne 3,0% (10 volumes). Si lon
observe une production de gaz, soumettre la colonie
correspondante lpreuve de la coagulase (selon 4.12).
4.12 Epreuve de la coagulase
4.12.1 Inoculer chaque colonie dans un petit tube
contenant 0,3 ml de bouillon cur/cervelle strille.
Incuber 20-24 h 37 C 1 C.
4.12.2 Ajouter dans un petit tube 0,1 ml de cette culture
0,3 ml de plasma de lapin additionn de 0,1 %
dE.D.T.A.
4.12.3 Incuber 37 C 1 C et examiner les tubes en
vue de la formation dun coagulum, chaque heure pendant
4 h, puis aprs 24 h.
5. Conclure la prsence de staphylocoques coagulase
positive dans lchantillon de poudre de lait, si trois
colonies au moins obtenues selon 4.9 ou 4.11 coagulent le
plasma de lapin.
vivants.
Arrt du 4 Rabie Ethani 1425 correspondant
au 24 mai 2004 rendant obligatoire une
mthode de dnombrement des micro-organismes
caractristiques par une technique de comptage
des colonies 37 C dans le yaourt.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 16 Joumada Ethania 1419
correspondant au 7 octobre 1998 relatif aux spcifications
techniques des yaourts et aux modalits de leur mise la
consommation ;
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt, relatif aux spcifications
microbiologiques de certaines denres alimentaires ;
11
11
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de
dnombrement des micro-organismes caractristiques par
la technique de comptage des colonies 37 C dans le
yaourt.
Art. 2. Pour le dnombrement des micro-organismes
caractristiques par la technique de comptage des colonies
37 C dans le yaourt, les laboratoires du contrle de la
qualit et de la rpression des fraudes et les laboratoires
agrs cet effet doivent employer la mthode danalyse
microbiologique dcrite en annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 4 Rabie Ethani 1425 correspondant au
24 mai 2004.
Noureddine BOUKROUH.
ANNEXE
Mthode de dnombrement des micro-organismes
caractristiques par une technique de comptage
des colonies 37 C dans le yaourt
Objet et domaine dapplication
La mthode est applicable aux yaourts dans lesquels
deux micro-organismes caractristiques sont prsents et
1/ Dfinition
1.1 Lactobacillus bulgaricus : micro-organisme
thermophile formant des colonies lenticulaires souvent en
forme dtoile, de 1 3 mm de diamtre, sur milieu MRS
acidifi (selon DeMan, Rogosa et Sharpe)
Aspect microscopique : btonnets gnralement courts,
mais quelquefois de forme allonge. Ils sont non sporuls,
grampositifs, non mobiles, catalase ngative.
1.2 Streptococcus thermophilus : micro-organisme
thermophile formant des colonies lenticulaires de 1 2
mm de diamtre sur M 17. Aspect microscopique : cellule
sphrique ou ovode (Cocci) (0,7 - 0,9 m de diamtre),
par paire ou en chanes longues. Elles sont gram
positives-catalase ngatives.
2/ Principe
2.1 Ensemencement des dilutions dcimales de
lchantillon dans :
milieu MRS acidifi, suivi dune incubation en
anarobiose pendant 72 h 37 C, pour le dnombrement
de L bulgaricus,

12 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43
milieu M 17, suivi dune incubation en arobiose
pendant 48 h 37 C, pour le dnombrement de S.
thermophilus.
2.2 Comptage des colonies et confirmation par tests
appropris.
2.3 Calcul du nombre de micro-organismes
Calcul du nombre de micro-organismes caractristiques
par gramme dchantillon partir du nombre de colonies
obtenu sur les botes slectionnes des dilutions
permettant de donner un rsultat significatif.
3/ Diluants, milieux de culture et ractifs
3.1 Composants de base
Pour amliorer la reproductibilit des rsultats, il est
recommand dutiliser, pour la prparation du diluant, des
composants de base dshydrats ou une prparation
complte dshydrate.
Les prescriptions du fabricant doivent tre suivies
scrupuleusement.
Les ractifs chimiques doivent tre de qualit analytique
reconnue.
Leau utilise doit tre de leau distille dans le verre ou
dsionise exempte de substances susceptibles dinfluer
sur la croissance des micro-organismes dans les
conditions de lessai :
il convient de vrifier cet aspect priodiquement,
particulirement dans le cas de leau dminralise,
il convient dutiliser des solutions dhydroxyde de
sodium ou dacide chlorhydrique (environ 0,1 mol/l) afin
dajuster le pH des diluants, sauf indication contraire.
3.2 Diluant
Composition
Peptone 1 (hydrolysat tryptique de casine) .......... 0,5 g
Peptone 2 (hydrolysat tryptique de viande) ............ 0,5 g
Eau .................................................................... 1000 ml
Prparation
Dissoudre les peptones dans leau. Rpartir la solution
par ml dans des flacons de 150 ml de capacit.
Striliser 121 C pendant 15 mn.
On peut employer des polypeptones qui sont des
mlanges de peptone 1 et peptone 2.
3.3 Milieux de culture
3.3.1 Milieu MRS acidifi
Composition
Peptone 1 ................................................................. 10 g
Extrait de viande ...................................................... 10 g
Extrait de levure dshydrat ...................................... 5 g
16 Joumada El Oula 1425
4 juillet 2004
Glucose (c6 H 12 06) .................................................. 20 g
Tween 80 (sorbitanne monolate) ........................... 1 ml
Hydrogno-orthophosphate dipotassique
(K2HPO4) ................................................................... 2 g
Actate de sodium, trihydrat
(CH3CO2 Na3H2O) ..................................................... 2 g
Citrate dammoniaque (C6H607(NH4)2)..................... 2 g
Sulfate de magnsium heptahydrat
(MnSO 47H2o) ........................................................ 0,2 g
Sulfate de manganse ttrahydrat
(MnSO 4H20) ...................................................... 0,05 g
Agar-agar.............................................................. 9-18 g
Eau .................................................................... 1000 ml
Prparation
Dissoudre les composants dans leau en bullition.
Laisser refroidir 5 C et ajuster le pH laide dacide
actique (3.4.3) en contrlant avec le pH-mtre (4.1.8) de
sorte quaprs strilisation il soit de 5,4 25 C.
Rpartir le milieu par quantit de 100 ml dans des
flacons de 150 ml ou par quantit de 200 ml dans des
flacons de 250 ml. Striliser 121 C pendant 15 mn.
On peut galement utiliser les milieux MRS prts
lemploi, dans ce cas, il faut les contrler avec le milieu
prpar daprs la prsente mthode.
Avant de commencer lexamen bactriologique, faire
fondre compltement la quantit ncessaire de milieu
dans un bain-marie en bullition ou en vapeur dans un
rcipient partiellement ferm. Refroidir le milieu
fondu dans le bain-marie (4.1.7).
Pour contrler la temprature de la glose, il est
recommand de placer un thermomtre dans un mme
volume de solution de glose la mme concentration
que celle du milieu, contenue dans un rcipient spar,
identique celui utilis pour le milieu. Cette solution
servant au contrle de la temprature doit tre
soumise aux mmes conditions de chauffage et de
refroidissement que le milieu proprement dit.
3.3.2 Milieu M17
3.3.2.1 Milieu de base
Composition
Peptone 1 (hydrolysat trypsique de casine)..........2,50 g
Peptone 2 (hydrolysat pepsique de viande)............2,50 g
Peptone 3 (hydrolysat papaenique de soja)............5,00 g
Extrait de levure dshydrate.................................2,50 g
Extrait de viande.....................................................5,00 g
12
16 Joumada El Oula 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43
4 juillet 2004
B-glycrophosphate (sel disodique) (C 3H7O6PNa2)
................................................................................. 19,00 g
Sulfate de magnsium heptahydrat (M gSO47H20)
................................................................................... 0,25 g
Acide ascorbique (C6H806).......................................50 g
Agar-agar...............................................................9-18 g
Eau........................................................................950 ml
Prparation
Dissoudre les composants dans leau en bullition.
Laisser refroidir 50 C et ajuster le pH laide des
ractifs (3.4) en contrlant avec le pH-mtre (4.1.8), de
sorte quaprs strilisation, il soit de 7,1 7,2 25 C.
Rpartir le milieu par quantit de 95 ml dans des flacons
de 150 ml. Striliser 121 C pendant 15mn.
On peut galement utiliser des milieux complets M17
prts lemploi quil convient de contrler avec le
milieu M17 prpar daprs la prsente mthode.
3.3.2.2 Solution de lactose
Composition
Lactose (C12H22O11).................10 g
Eau..........................................100 ml
Prparation
Dissoudre le lactose dans leau, striliser 121 C denviron 90 mm. La profondeur intrieure doit tre de 10
pendant 15 mn.
3.3.2.3 Milieu complet
Composition
Milieu de base (3.3.2.1)..................95 ml
Solution de lactose (3.3.2.2)..................5 ml
Prparation
Immdiatement avant emploi, faire fondre le milieu de
base (3.3.2.1) dans un bain-marie en bullition et laisser
refroidir 48-50 C. Chauffer la solution de lactose
(3.3.2.2) 48-50 C.
Ajouter la solution de lactose au milieu de base et
mlanger soigneusement par des mouvements rotatifs.
Refroidir le milieu dans le bain-marie (4.1.7).
3.4 Ractifs pour ajuster le pH
3.4.1 Hydroxyde de sodium (NaOH) , solution environ
0,1 mol/1.
3.4.2 Acide chlorhydrique (HCI) , solution environ
(0,1 mol/1.
3.4.3 Acide actique (CH3COOH), 100% (glacial).
4e/ Appareillage et verrerie
4.1 Le matriel de laboratoire microbiologique courant,
matriel requis pour la prparation des chantillons et des
dilutions.
4.1.1 Incubateur 37 1C.
4.1.2 Incubateur anarobie, pouvant tre rgl 37 1
C, ou rcipients de culture anarobie, fournissant une
atmosphre de 90% dazote et 10% de dioxyde de
carbone.
13
4.1.3 Mlangeur, soit de type pristaltique avec
rcipients striles en plastique, soit de type rotatif,
pouvant fonctionner une vitesse minimale de rotation de
20000 mn avec rcipients en verre ou en mtal de
capacit approprie.
4.1.4 Agitateur de tubes essais (par exemple, agitateur
vortex).
4.1.5 Matriel de comptage de colonies, comportant un
systme dclairage avec fond noir, muni dune loupe
grossissant 1,5 fois et dun compteur numrique
mcanique ou lectronique.
4.1.6 Loupe grossissement 8-10 fois.
4.1.7 Bain-marie pouvant tre rgl 45 1 C.
4.1.8 PH-mtre, avec compensation de temprature,
dune prcision de 0,1 unit de pH 25 C.
4.1.9 Fioles de dilution, de capacit de 150 - 250 ml et
tubes essais de 18 mm x 180 mm, munis de dispositifs
de fermeture appropris, capsules ou bouchons en
caoutchouc ou en matire synthtique.
4.1.10 Pipettes gradues jusqu la pointe, pouvant
dlivrer 1 ml 0,02 ml ou 10 ml 0,2 ml ou 11 ml 0,2
ml.
4.1.11 Boites de Ptri fond de diamtre intrieur
mm minimum.
Le fond ne doit prsenter aucune irrgularit susceptible
dinfluer sur le dnombrement des colonies.
4.1.12 Spatules en verre ou en mtal.
5e/ Echantillonnage
Lchantillonnage se fait dans des conditions
appropries.
6e/ Mode opratoire
6.1 Prparation de lchantillon et de la prise dessai
Avant douvrir le pot de yaourt, et afin dliminer toute
source de contamination, prendre soin de nettoyer
soigneusement la surface extrieure du rcipient autour de
la zone do sera prlev lchantillon. Le nettoyage peut
tre effectu avec de lthanol 70% (VIV), afin dviter
toute contamination supplmentaire. Ouvrir le pot
aseptiquement.
Pendant cette tape, il est important dobtenir non
seulement une dilution homogne, mais aussi une
fragmentation des chanes de streptocoques et de
lactobacilles en cellules isoles ou en chanes courtes,
de sorte que les rsultats, exprims en nombre total de
micro-organismes vivants par gramme de produit
soient reproductibles et reprsentatifs.
6.1.1 Yaourts sans fruits
Mlanger avec soin le contenu du pot de yaourt laide
dune spatule strile (4.1.12). Peser 10 0,1 g de
lchantillon de yaourt dans un rcipient appropri (par
exemple un tube de centrifugeuse de 200 ml fond rond
en verre renforc, ou le bol du mlangeur, ou encore le
rcipient en plastique du mlangeur pristatique (4.1.3).
13

14 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43
6.1.2 Yaourts aux fruits
Mlanger le contenu total du pot de yaourt pendant 1
minute laide du mlangeur (4.1.3).
Peser 10 0,1 g de lchantillon de yaourt, comme,
6.1.1.
6.2 Examen microscopique
Effectuer un examen prliminaire de plusieurs champs
microscopiques dun frottis de lchantillon de yaourt,
pralablement color au bleu de mthylne (par exemple
laide dune solution thanolique de bleu de mthylne de
6 g/l) afin dapprcier la densit des deux types de
bactries, coques et btonnets, et choisir ainsi la gamme
approprie de dilutions utiliser pour le dnombrement de
chaque type.
6.3 Prparation de la premire dilution
Les oprations dcrites aux paragraphes 6.3 6.5.4
ne doivent pas tre ralises la lumire directe du
soleil
Ajouter le diluant (3.2) la prise dessai (6.1.1) jusqu
ce que la masse de la prise dessai et du diluant soit de 50
g. Mlanger pendant 1 minute laide du mlangeur
(4.1.3). Complter 100 g avec le mme diluant. Une
dilution 10 -1 est ainsi obtenue.
6.4 Prparation des dilutions dcimales
Rpartir le diluant (3.2) laide dune pipette gradue
strile. Transfrer 1 ml de cette dilution dans un deuxime
tube, etc.... en sassurant quune nouvelle pipette est
utilise pour chaque dilution, jusqu ce que la srie de
dilutions ncessaires soit obtenue.
Ne pas plonger la pipette plus de 1 cm au-dessous de
la surface du liquide. Eviter les bulles dair en
remplissant la pipette. Pendant le transfert ne pas
plonger la pipette dans le nouveau diluant.
6.5 Ensemencement et incubation
6.5.1 En oprant en double (pour L. buigaricus et S.
thermophilus), transfrer laide dune pipette strile 1 ml
de chaque dilution dans les botes de Ptri (4.1.11).
6.5.2 Pour L. bulgaricus, verser 12 15 ml du milieu
MRS acidifi (3.3.1) fondu et maintenu 45 1 C dans
un bain-marie (4.1.7), dans chaque bote de Ptri.
Le temps qui scoule entre lensemencement des
dilutions et le remplissage des botes de Ptri avec la
glose ne doit pas tre suprieur 15 minutes (6.5.2 et
6.5.3).
6.5.3 Pour S. thermophilus, filtrer 12 - 15 ml du milieu
M17 (3.3.2), fondu et maintenu 45 C (4.1.7) dans
chaque bote de Ptri.
6.5.4 Immdiatement aprs lavoir vers dans les botes,
mlanger soigneusement linoculum avec le milieu par
rotation des botes. Laisser le mlange se solidifier en
laissant les botes sur une surface frache et horizontale.
16 Joumada El Oula 1425
4 juillet 2004
6.5.5 Incuber les botes de Ptri retournes. Ne pas
empiler plus de 6 botes. Les piles de botes ne doivent pas
se toucher ni tre en contact avec les parois ou la partie
suprieure de lincubateur.
6.5.5.1 Incuber les botes pour le dnombrement de L.
bulgarius pendant 72 h 37 C dans lincubateur
anarobie ou le rcipient de culture en anarobiose (4.1.2).
6.5.5.2 Incuber les botes pour le dnombrement de S.
thermophilus pendant 48 h 37 1 C.
6.6 Comptage des colonies
A lissue de la priode dincubation spcifie (6.5.5.1)
et (6.5.5.2), compter les colonies montrant les
caractristiques de chacun des 2 micro-organismes (1.1 et
1.2) sur les botes contenant entre 10 et 300 colonies.
Examiner les botes en lumire tamise. Pour faciliter le
comptage, on peut utiliser un compteur appropri (4.1.5).
Eviter de confondre des particules non dissoutes
dchantillon ou des matires prcipites avec des
colonies de la taille dune pointe dpingle. Examiner les
colonies douteuses avec soin, laide dune loupe de
grossissement plus fort si ncessaire, afin de distinguer les
colonies des particules trangres. Procder des dilutions
dans le cas o le nombre de colonies dpasse 300.
6.7 Confirmation
Slectionner des colonies partir des botes utilises
pour le dnombrement de telle faon que le nombre
retenu soit gal la racine carre du nombre total de
colonies.
Raliser une coloration de Gram sur ces colonies et
confirmer quelles se prsentent sous forme de btonnets
non sporuls, Gram positif, catalase-ngative dans les cas
des cultures sur milieu MRS, et quelles forment des
chanes de coques ou de diplocoques Gram-positif,
catalase-ngative, dans le cas des cultures sur milieu M17.
7/ Expression des rsultats
7.1 Mthode de calcul
7.1.1 Retenir les dnombrements de botes contenant
entre 10 et 300 colonies, obtenues en 6.6.
7.1.2 Pour chaque micro-organisme caractristique, le
nombre de micro-organismes par gramme dchantillon
est gal :
C
(n1 + 0,1 + n2) d
C est la somme des colonies comptes sur les botes
en 7.1.1 ;
n1 est le nombre de botes comptes la dilution la plus
faible ;
n2 est le nombre de botes comptes la dilution la plus
leve ;
14
16 Joumada El Oula 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43 15
4 juillet 2004

d est la valeur correspondant la dilution partir de C = 295 + 245 + 33 + 40

laquelle les premiers dnombrements ont t retenus. (n1 + 0,1 n2 ) d (2 + 0,1 2 ) 10 -5
Sil y a plus de deux dilutions compter, la formule 613
doit tre modifie pour prendre en compte la dilution = = 278,6 10-5
2,2 10 -5
suivante :
Ainsi pour trois dilutions : Selon 7.1.3 cela correspondant 280 x 10 5
Le nombre estim de L.bulgaricus prsents dans
C lchantillon de yaourt est donc 2,8 x 107/g.
(n1 + 0,1n2 + 0,0 1) d De mme pour S.thermophilus, le nombre estim est de
7.1.3 Arrondir les rsultats obtenus en 7.1.2 deux 4,9 x 108/g de yaourt.
chiffres significatifs. Pour un nombre de 3 chiffres, Ainsi le nombre total de micro-organismes
arrondir le 3me chiffre au zro le plus proche. Si le 3me caractristiques par gramme de yaourt est gal :
chiffre est 5, arrondir au chiffre infrieur dans le cas o les
2 premiers chiffres forment un nombre pair, et au chiffre (2,80 x 107 ) + ( 4,90 x 108 ) = 5,18 x 108
suprieur dans le cas o les 2 premiers chiffres forment un
nombre impair. qui, arrondi selon 7.1.3, donne :
5,20 x 108 /g de yaourt.
par exemple :
pour 234 arrondir 230 7.3 Prcision
235 240 Lexprience montre que si sur deux essais
indpendants, raliss sur le mme chantillon, celui
225 220
donnant les rsultats les plus levs dpasse frquemment
245 240 de 30% celui donnant les rsultats les plus faibles,
lanalyste devra revoir ses conditions opratoires pour
7.1.4 Si tous les dnombrements sont infrieurs 10, dterminer les sources derreurs.
indiquer que le nombre de micro-organismes par gramme
est infrieur 10 x 1/d, d tant la valeur correspondant 8/ Notes sur le mode opratoire
la dilution la plus faible.
Slectivit des milieux de culture
7.1.5 Si tous les dnombrements sont suprieurs 300,
calculer un nombre estim partir des botes ayant un Aucun des deux milieux de culture recommands
nombre de colonies le plus proche de 300 et le multiplier (MRS acidifi et M17) nest entirement slectif. La
par linverse de la valeur correspondant la dilution la plupart des souches de S.thermophilus ne forment pas
plus leve. Donner le rsultat sous la forme : Nombre de colonies visibles sur milieu MRS acidifi aux
estim de micro-organismes par gramme dans le cas le dilutions normalement utilises pour le dnombrement
plus faible. de L. bulgaricus. Toutefois, lorsque le nombre de
lactobacilles dans lchantillon de yaourt est
7.1.6 Le rsultat est exprim par un nombre compris considrablement plus faible que le nombre de
entre1,0 et 9,9 mutipli par 10x, x tant la puissance streptocoques des dilutions faibles doivent tre ralises
approprie de 10. pour le dnombrement de L.bulgaricus.
7.1.7 Le nombre total de micro-organismes Dans ces conditions, quelques S.thermophilus
carctristiques par gramme de yaourt est gal : peuvent former de trs petites colonies ou des colonies de
la taille dune pointe dpingle sur les botes de milieu
NL+ NS MRS acidifi; ces colonies sont faciles distinguer lil
o : nu des colonies de L.bulgaricus qui sont de taille plus
grande.
N L : est le nombre de L. bulgaricus par gramme, Par ailleurs, la plupart des souches de L. bulgaricus
calcul selon 7.1.2. ne forment pas de colonies visibles sur le milieu M17 aux
dilutions normalement utilises pour le dnombrement de
N S : est le nombre de S. thermophilus par gramme, S.thermophilus.
calcul selon 7.1.2. Des souches de L.bulgaricus peuvent cependant
former de petites colonies de la taille dune pointe
7.2 Exemple de calcul dpingle sur le milieu M17, gnralement avec des
chantillons de yaourt ayant un nombre beaucoup plus
Pour un chantillon donn de yaourt, les numrations de lev de lactobacilles que de streptocoques.
L. bulgaricus donnent le rsultat suivant (2 boites de Ptri
par dilution, ont t incubes). Ces petites colonies rugueuses ont gnralement un
aspect laineux ou cotonneux et peuvent facilement tre
Dilution 105 : 295 et 245 colonies ; distingues lil nu (et encore mieux la loupe) des
colonies lisses et lenticulaires de S.thermophilus qui sont
10-6 : 33 et 40 colonies ; plus grandes.

15
24 Ramadhan 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 70
7 novembre 2004
ARRETES, DECISIONS ET AVIS
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 26 Rajab 1425 correspondant au
11 septembre 2004 rendant obligatoire une
mthode de prparation des chantillons pour
essai et dilutions en vue de lexamen
microbiologique.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
la rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 29 Safar 1414
correspondant au 18 aot 1993 relatif aux
spcifications et la prsentation de certains laits de
consommation ;
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au
23 juillet 1994, modifi et complt, relatif aux
spcifications microbiologiques de certaines denres
alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt susvis, le prsent arrt a pour
objet de rendre obligatoire une mthode de prparation
des chantillons pour essai et dilutions en vue de lexamen
microbiologique.
Art. 2. Pour la prparation des chantillons pour
lessai et les dilutions en vue de lexamen
microbiologique, les laboratoires du contrle de la
qualit et de la rpression des fraudes et les laboratoires
agrs cet effet doivent employer la mthode dcrite en
annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 26 Rajab 1425 correspondant au
11 septembre 2004.
Noureddine BOUKROUH.
15
ANNEXE
METHODE DE PREPARATION
DES ECHANTILLONS POUR ESSAI
ET DILUTIONS
EN VUE DE L'EXAMEN MICROBIOLOGIQUE
1. Dfinition
Pour les besoins de la prsente mthode, les dfinitions
suivantes s'appliquent.
1.1 Dilution primaire (suspension mre) Suspension,
solution ou mulsion obtenue aprs qu'une quantit pese
ou mesure du produit analyser (ou de l'chantillon pour
essai prpar partir de ce produit) ait t mlange, si
ncessaire en utilisant un homognisateur et en observant
des prcautions appropries (6), avec neuf fois la mme
quantit de diluant (3), en laissant les grosses particules se
dposer, si elles existent.
Il peut tre ncessaire dans certains cas notamment pour
les produits donnant une suspension mre 1 + 9 visqueuse
ou trop paisse, d'ajouter davantage de diluant. Dans
d'autres cas, pour les rsultats d'essai en rapport avec
certains critres de spcification, une dilution primaire
plus concentre que 1 + 9 peut tre demande. Il devra
tre tenu compte de ce facteur dans la suite des oprations
et/ou dans l'expression des rsultats.
1.2 Dilutions dcimales suivantes : Suspensions,
mulsions ou solutions obtenues en mlangeant un
volume dtermin de la dilution primaire (1.l), avec neuf
fois le mme volume de diluant appropri et en rptant
cette opration sur chaque dilution ainsi prpare jusqu'
obtention d'une gamme de dilutions dcimales approprie
pour l'ensemencement des milieux de culture.
2. Principe
Prparation de la dilution primaire (suspension mre)
(1.1) et, si ncessaire, des dilutions dcimales suivantes
(1.2) en vue de rduire le nombre de micro-organismes
par unit de volume, pour faciliter l'examen
microbiologique.
3. Diluants
3.1 Composants de base
Pour amliorer la fidlit des rsultats, il est
recommand d'utiliser, pour la prparation du diluant, des
composants de base dshydrats ou une prparation
complte dshydrate. Les prescriptions techniques
doivent tre suivies scrupuleusement.
Les produits chimiques doivent tre de qualit
analytique reconnue.
16
 24 Ramadhan 1425
16 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 70 7 novembre 2004

L'eau utilise doit tre de l'eau distille avec un Prparation

appareillage en verre, ou de l'eau dminralise. Elle doit
tre exempte de substances susceptibles d'inhiber la
croissance des micro-organismes dans les conditions de
l'essai. Ceci doit tre contrl priodiquement en
particulier dans le cas de l'eau dminralise.
Dissoudre le sel dans 500 ml d'eau. Ajuster le pH de
sorte qu'aprs strilisation, il soit de 7,2 0,l 25 C,
l'aide d'une solution d'hydroxyde de sodium ou d'acide
chlorhydrique 1 mol/1.

Des solutions d'hydroxyde de sodium ou d'acide Diluer 1000 ml avec de l'eau. Conserver cette solution
chlorhydrique ( 0,l mol/ l environ) doivent tre utilises mre au rfrigrateur.
pour ajuster le pH des diluants, sauf spcifications Avant emploi, ajouter 1 ml de cette solution mre
contraires. ( 20C) 1000 ml d'eau pour l'utiliser en tant que diluant.

3.2 Diluants pour emploi gnral 3.3 Diluants pour emplois particuliers
3.2.1 Solution peptone - sel 3.3.1 Solution de citrate de sodium (pour fromage,
fromage fondu et lait sec Hatmaker)
Composition
Peptone.....1,0 g Composition
Chlorure de sodium (NaCI).........8,5 g Citrate trisodique dihydrat (Na3C6H5O72H20).20,0 g
Eau..........1000 ml Eau ........................ 1000 ml

Prparation Prparation
Dissoudre les composants dans l'eau, en chauffant, Dissoudre le sel dans l'eau en chauffant entre 45 C
si ncessaire. et 50C.
Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation. il soit de Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il soit de
7,0 0,l 25C. 7,5 0,l 25C.

3.2.2 Solution de Ringer dilue au quart 3.3.2 Solution de monohydrogno-phosphate de

potassium (pour le fromage, le fromage fondu, la casine
Composition acide, les poudres de casine lactique, les casinates, les
Chlorure de sodium (NaCI).......2,25 g poudres de lactosrum acides et les acides et la crme
aigre).
Chlorure de potassium (KCI)..............0,105 g
Chlorure de calcium anhydre (CaCI2)..........0,06 g Composition
Hydrognocarbonate de sodium (NaHCO3)......0,05 g Monohydrogno-phosphate de potassium
Eau......1000 ml K2HPO4.........20,0 g
Eau .................1000 ml
Prparation
Dissoudre les sels dans l'eau. Prparation
Dissoudre le sel dans l'eau en chauffant entre 45 C et
Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il soit de
50C.
6,9 0,1 25C.
Ajuster le pH. Pour la dilution primaire de la casine
3.2.3 Solution de peptone acide, de la casine lactique et de la poudre de lactosrum
acide, le pH aprs strilisation doit tre de 8,4 0,1
Composition 25C. Pour les casinates, les fromages, les fromages
Peptone............1, 0 g fondus et la crme aigre, il doit tre de 7,5 0,1.

Eau......1000 ml 3.4 Rpartition, strilisation et conservation du

Prparation
Dissoudre la peptone dans l'eau.
Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il soit
7,0 0,1 25C.
3.2.4 Solution tampon de phosphate
Composition de la solution mre
Dihydrognophosphate de potassium
(KH2PO4)..... 42,5 g
Eau..... 1000 ml
diluant
Rpartir le diluant (3.2 ou 3.3) dans des fioles (4.4) pour
la dilution primaire et dans des tubes essai (4.5) pour
les dilutions dcimales (3.2) en quantits telles
qu'aprs strilisation, chaque fiole (4.4) contienne 9,0 ml
(ou d'autres quantits demandes) et chaque tube essai
(4.5) contienne 9,0 ml de diluant ou un multiple de 9,0 ml
(ou autres quantits demandes).
Boucher les tubes et les fioles.
Striliser l'autoclave 121 C1 pendant 15 minutes
(un temps plus long peut tre ncessaire pour des volumes
plus importants).

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24 Ramadhan 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 70
7 novembre 2004
Si le diluant n'est pas utilis extemporanment le
conserver l'obscurit entre 0 C et 5 C, pendant 1 mois
au maximum dans des conditions vitant toute
modification de son volume ou de sa composition.
Si l'on doit dnombrer plusieurs groupes de
micro-organismes en utilisant des milieux de cultures
diffrents, il peut-tre ncessaire de rpartir tous les
diluants (ou quelques-uns) en quantit suprieure 9,0 ml.
La dimension des tubes essai et des fioles (4.5 et 4.4)
doit tre prvue en consquence.
4. APPAREILLAGE ET VERRERIE
Le matriel usage unique est acceptable au mme titre
que la verrerie rutilisable, si ses spcifications sont
similaires. La verrerie doit pouvoir rsister des
strilisations rptes et tre chimiquement inerte.
Matriel courant de laboratoire de microbiologie,
notamment :
4.1 Appareils pour la strilisation en chaleur sche
(four) ou en chaleur humide (autoclave) (autoclave isol
ou intgr dans un systme de prparation et de rpartition
de milieux).
Le matriel destin entrer en contact avec le diluant,
l'chantillon pour essai, les dilutions, sauf s'il est livr
strile (appareillage en plastique) doit tre strilis.
a) soit au four, en le maintenant une temprature de
170C 175C pendant au moins 1 heure.
b) soit l'autoclave, en le maintenant une temprature
de 121C 1 pendant au moins 20 minutes.
Cependant, les pipettes ne doivent pas tre strilises
l'autoclave, car l'humidit se condense sur les parois
internes lors du refroidissement et affecte la prcision du
volume dlivr.
4.2 Appareillage pour l'homognisation
Un des appareils suivants doit tre utilis :
a) homognisateur rotatif, dont la frquence de rotation
est comprise entre 8000 min-1 et 45000 min-1, avec bols
en verre ou en mtal, muni de prfrence de couvercles, et
rsistant aux conditions de strilisation ;
b) homognisateur de type pristaltique (stomacher),
avec des sacs striles en matire plastique.
Les bols, les sacs en plastique ( type sac stomacher)
doivent avoir une capacit suffisante pour permettre de
mlanger correctement l'chantillon avec la quantit
approprie de diluant. En gnral, le volume du rcipient
doit tre gal environ deux fois le volume de
lchantillon pour lessai avec le diluant.
4.3 Agitateur, capable de mlanger 1 ml ou 2 ml de
l'chantillon pour essai (cas des produits liquides) ou des
dilutions dcimales dans un tube de dimensions
suffisantes, avec 9 ml ou 18 ml de diluant, afin d'obtenir
une suspension homogne et dont le principe est bas sur
un mouvement de rotation excentr du contenu des tubes
essai (par exemple, agitateur Vortex).
17
4.4 Fioles, ayant une capacit suffisante pour
contenir en laissant un espace libre suffisant pour
permettre l'agitation 90 ml de diluant utilis pour la
suspension mre, ou des multiples de 90 ml.
4.5 Tubes essai, ayant une capacit suffisante pour
contenir, en laissant un espace libre suffisant pour
permettre l'agitation, 10 ml (ou un multiple de 10 ml, si
ncessaire) de l'chantillon pour essai (s'il est liquide) ou
de la dilution primaire (autres cas), ou des dilutions
dcimales suivantes.
4.6 Pipettes (bouches avec du coton), ayant une
capacit nominale de 1 ml et une ouverture d'coulement
de 1,75 mm 3 mm de diamtre.
N'utiliser que des pipettes non brches et, quand cela
est ncessaire, avec des graduations bien marques pour
les distinguer nettement du contenu.
4.7 Pipettes gradues (bouches avec du coton), de
relativement grande capacit, par exemple de 10 ml ou
20 ml.
4.8 Billes de verre, d'environ 6 mm de diamtre.
4.9 pH-mtre, compensation de temprature, prcis
0,1 unit de pH.
4.10 Balance, de porte suffisante et prcise 1 % de
la masse nette pese.
4.11 Bain d'eau, rglable 45 C 1.
4.12 Bain d'eau, rglable 37 C 1.
5. ECHANTILLONNAGE
Lchantillonnage se fait dans des conditions
appropries.
6. MODE OPERATOIRE
Pour certaines recherches spcifiques (par exemple,
Salmonella), des techniques spciales ou des prcautions
peuvent tre ncessaires. Pour ces cas des techniques
particulires sont mentionnes dans la mthode en
question.
Les oprations dcrites en 6.1.1 et 6.1.2 ne doivent
pas tre effectues la lumire directe du soleil.
Il convient de prendre les prcautions normales
d'asepsie.
6.1 Prparation de l'chantillon pour essai et de la
dilution primaire
Pour viter d'endommager les micro-organismes par de
brusques changements de temprature, la temprature du
diluant, pendant les oprations dcrites ci-dessous, doit
tre du mme ordre que celle de l'chantillon pour essai,
sauf spcifications contraires.
18

18 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 70
6.1.1 Lait et produits laitiers liquides
Agiter vigoureusement l'chantillon pour essai afin
d'assurer une rpartition aussi uniforme que possible des
micro-organismes, en inversant rapidement 25 fois le
rcipient contenant l'chantillon. Il faut viter la formation
de mousse ou bien la laisser se disperser. L'intervalle
entre le mlange et le prlvement de la prise d'essai ne
doit pas dpasser 3 minutes.
Prlever 1 ml de l'chantillon pour essai l'aide d'une
pipette strile (4.6) et rajouter 9 ml de diluant (3.2) (ou
10 ml d'chantillon pour essai 90 ml de diluant ou 11 ml
99 ml).
Agiter cette dilution primaire (par exemple, 25 fois avec
un mouvement de 300 mm en 7 secondes). On obtient
alors la dilution 10-1.
Prparer les dilutions suivantes selon 6.2.
6.1.2 Lait sec, poudre de lactosrum, babeurre en
poudre et lactose
Mlanger soigneusement le contenu du rcipient ferm
en le secouant de faon rpte par inversion.
Si l'chantillon pour essai enferm dans son emballage
d'origine est trop plein pour permettre un mlange
vigoureux, le transfrer dans un rcipient plus grand.
Mlanger. Ouvrir le rcipient, prlever la prise d'essai
demande l'aide d'une spatule en procdant comme
indiqu ci-dessous.
Refermer immdiatement le rcipient.
Chauffer au bain d'eau (4.11) une fiole contenant 90 ml
d'un diluant adquat (3.2) ou, si ncessaire, pour la
poudre de lait Hatmaker (3.3.1) un pH 7,5 0,1
45C 1.
Peser 10 g de d'chantillon pour essai dans un rcipient
de verre appropri (par exemple, un bcher) et verser
lentement la poudre dans la fiole de dilution contenant le
diluant choisi. Sinon, peser 10 g de lchantillon pour
essai directement dans la fiole avec le diluant.
Afin de dissoudre, tourner lentement pour hydrater la
poudre, puis agiter 25 fois la fiole pendant environ 10
secondes avec un mouvement d'environ 300 mm. On peut
utiliser un homognisateur de type pristaltique (4.2 b)
comme autre moyen d'agitation.
Replacer la fiole dans le bain d'eau pendant 5 minutes
agiter occasionnellement.
Prparer les dilutions suivantes selon 6.2.
Dans le but d'avoir une meilleure reconstitution, en
particulier pour la poudre de lait hatmaker, il peut tre
utile de se servir de billes de verre (4.8). Dans ce cas, il
conviendra de les mettre dans les fioles avant
strilisation.
6.1.3 Fromage et fromage fondu
Soit peser 10 g de l'chantillon pour essai dans une
capsule et les placer dans le rcipient de
l'homognisateur rotatif (4.2 a) ou de l'homognisateur
de type pristaltique (4.2 b), soit peser directement 10 g
d'chantillon pour essai dans le rcipient.
19
24 Ramadhan 1425
7 novembre 2004
Lors de l'utilisation de l'homognisateur rotatif ou de
l'homognisateur de type pristaltique, ajouter 90 ml de
diluant (3.2), (3.3.1) ou (3.3.2) pH 7,5 0,1.
Mlanger jusqu' ce que le produit soit compltement
dispers (1 minute 3 minutes). Dans le cas de
l'homognisateur rotatif, oprer pendant un temps
suffisant pour obtenir un total de 15 000 rvolutions
20 000 rvolutions.
Mme avec l'homognisateur rotatif le plus lent, ce
temps ne doit pas excder 2,5 minutes. L' idal est que la
temprature de dispersion ne dpasse pas 40 C, et en
aucun cas elle ne doit tre suprieure 45 C. Laisser la
mousse se disperser.
Prparer les dilutions suivantes selon 6.2.
6.1.4 Casine acide, casine lactique et poudre acide
de lactosrum
Peser 10 g d'chantillon pour essai dans une capsule.
Les placer dans une fiole de dilution munie de billes de
verre (4.8) contenant 90 ml de diluant
d'hydrognophosphate dipotassique (3.3.2) pH 8,4 0,l
pour les casines acide et lactique.
Laisser pendant 15 minutes temprature ambiante,
puis lever la temprature 37 C 1 au bain d'eau
(4.12).
Garder les fioles 37 C pendant 15 minutes et secouer
vigoureusement par intervalles.
Eviter l'emploi d'un homognisateur rotatif (4.2 a) ou
d'un homognisateur de type pristaltique (4.2 b) cause
de la formation de mousse.
Prparer les dilutions suivantes selon 6.2.
6.1.5 Casinates
Soit peser 10 g d'chantillon pour essai dans une
capsule et les placer dans le rcipient de
l'homognisateur rotatif (4.2a) ou de l'homognisateur
de type pristaltique (4.2b), soit peser 10 g dchantillon
pour essai directement dans le rcipient. Ajouter 90 ml de
diluant d'hydrognophosphate dipotassique (3.3.2) pH
7,5 0,l temprature ambiante.
Mlanger pendant environ 2 minutes. Dans le cas de
l'homognisateur rotatif, oprer pendant un temps
suffisant pour obtenir un total de 15000 rvolutions
20000 rvolutions. Mme avec l'homognisateur rotatif
le plus lent, ce temps ne doit pas excder 2,5 minutes.
Elever la temprature 37 C 1 au bain d'eau (4.12).
Transfrer dans une fiole dilution strile, dans le cas
de l'homognisateur rotatif.
Garder 37 C 1 pendant 15 minutes.
Laisser la mousse se disperser avant de poursuivre.
Prparer les dilutions suivantes selon 6.2.
24 Ramadhan 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 70
7 novembre 2004
6.1.6 Beurre
Peser 10 g d'chantillon pour essai dans un rcipient et
le placer dans le bain deau (4.11) 45 C 1. Garder le
rcipient dans l'eau jusqu' ce que l'chantillon soit juste
fondu.
Ajouter 90 ml de diluant (3.2).
Mlanger. Cette opration est plus facilement ralise
dans l'homognisateur de type pristaltique (4.2b).
On peut galement travailler uniquement sur la phase
aqueuse pour la dilution, comme suit :
Prendre une prise de 50 g contenant environ 8 ml d'eau
et ajouter 42 ml de diluant (3.2.3) rchauff 45 C.
Placer le rcipient dans un bain d' eau (4.11)
45C1 jusqu' ce que le beurre soit fondu. Bien
mlanger et laisser sparer pendant 15 min. au maximum.
Si ncessaire, pour sparer les phases, placer
l'chantillon pour lessai fondu dans un tube centrifuger
strile (ou faire fondre l'chantillon pour essai directement
dans le tube), et centrifuger une frquence de rotation de
1000 min-1 2000 min-1.
Prlever strilement la phase grasse (suprieure) avec
un tube strile reli une pompe vide. Prlever la
couche infrieure.
Prparer les dilutions suivantes selon 6.2.
6.1.7 Produits laitiers congels (y compris les glaces
de consommation)
Procder comme indiqu pour le beurre (6.1.6)
(premire alternative), mais en utilisant un bain d'eau
(4.12) 37 C 1 au maximum.
La temprature de l'chantillon pour essai ne doit pas
dpasser la temprature de ce bain d'eau.
Prparer les dilutions suivantes selon 6.2.
6.1.8 Flans, desserts, lait fermet et crme
Peser 10g dchantillon pour essai dans une fiole (4.4)
contenant des billes de verre (4.8)
Pour les flans, les desserts et la crme douce ajouter
90 ml de diluant (3.2) et agiter pour disperser.
Pour le lait fermet et la crme acide utiliser le diluant
3.3.2 pH 7,5 0,1. On peut utiliser un homognisatur
de type pristalique (4.2 b).
Prparer les dilutions suivantes selon 6.2.
6.2 Dilutions dcimales suivantes :
Dans le cas de la recherche de la prsence ou de
labsence dun micro-organisme dans 0,1ml ou 0,1 g de
produit, il nest pas ncessaire de prparer les dilutions
dcimales.
Introduire avec une nouvelle pipette 1 ml de la dilution
primaire (par exemple 6.1.1 ou 6.1.2) dans un nouveau
tube contenant 9 ml de diluant strile (3.2) en vitant le
contact de la pipette avec le diluant. Utiliser une nouvelle
pipette pour chaque dilution.
19
Si de plus grands volumes doivent tre utiliss,
introduire 10 ml de la dilution primaire dans une fiole
contenant 90 ml de diluant strile (3.2) ou 11 ml de la
dilution primaire 99 ml de diluant strile (3.2).
Dans la pratique courante, quand on exige une dilution
10-3, 1 ml de la dilution primaire devrait tre rajout 99
ml de diluant strile (3.2).
Mlanger soigneusement, soit par aspiration refoulement,
10 fois, avec une nouvelle pipette, soit en utilisant un
agitateur mcanique (4.3) pendant 5 10 secondes pour
obtenir la dilution 10-2.
La vitesse de rotation doit tre choisie de sorte que le
liquide tournoyant affleure 2 3 cm du bord du
rcpient.
Si ncessaire, rpter ces oprations avec le diluant
strile (3.2) en utilsant la dilution 10 -2 et les suivantes
pour obtenir les dilutions 10 -3, 10 -4, etc... jusqu
obtention du nombre appropri de micro-organismes par
millilitre (voir 2).
Lorsque 10 ml plus 90 ml ou 11 ml plus 90 ml ont t
prlevs, ajouter manuellement comme indiqu en 6.1.1.
6.3 Dure des oprations
Le temps qui scoule entre la fin de la prparation de la
dilution primaire et le mlange des dilutions et des
milieux (dcrit selon les mthodes spcifiques) ne doit pas
tre suprieur 15 minutes.
Arrt du 26 Rajab 1425 correspondant au 11
septembre 2004 rendant obligatoire une mthode
de contrle microbiologique pour le lait
pasteuris.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
la rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 29 Safar 1414
correspondant au 18 aot 1993 relatif aux
spcifications et la prsentation de certains laits de
consommation ;
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23
juillet 1994, modifi et complt, relatif aux
spcifications microbiologiques de certaines denres
alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de contrle
microbiologique pour le lait pasteuris.
Art. 2 Pour le contrle microbiologique du lait
pasteuris, les laboratoires du contrle de la qualit et de
la rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet
effet doivent employer la mthode dcrite en annexe.
20

20 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 70
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 26 Rajab 1425 correspondant au
11 septembre 2004.
Noureddine BOUKROUH
3.1 Composition
ANNEXE
METHODE DE CONTROLE MICROBIOLOGIQUE
POUR LE LAIT PASTEURISE
1. Prparation de l'chantillon pour essai
Il est ncessaire de rendre l'chantillon homogne avant
chaque analyse, par exemple, agiter soigneusement en
inversant rapidement 25 fois le premballage, ou
appliquer des techniques appropries donnant des rsultats
identiques.
Ouvrir aseptiquement le premballage aprs avoir
nettoy l'thanol la surface d'ouverture.
Procder l'analyse bactriologique dans un dlai
n'excdant pas trois minutes.
Jusqu'au moment de l'analyse, conserver l'chantillon
6 C.
2. Dilutions dcimales
La prparation des dilutions dcimales est effectue
avec le diluant suivant.
2.1 Composition
Peptone pancratique de casine (tryptone)........1 g
Chlorure de sodium..............................................8,5 g
Eau distille.....................................................1000 ml
2.2 Prparation
Faire dissoudre les composants dans l'eau en chauffant
lgrement. Si ncessaire, ajuster le pH de sorte qu'aprs
strilisation il soit de 7 0,l 25 C.
Rpartir, par exemple, raison de 100 ml dans des
flacons de capacit approprie.
Striliser l'autoclave 121 C 1 pendant vingt
minutes.
2.3 Prparation des dilutions dcimales
Au moment de l'emploi, distribuer aseptiquement le
diluant raison de 9 ml dans des tubes striles de
20 x 200 mm. Pour la prparation des dilutions, utiliser le
diluant temprature ambiante.
Une dilution au 1/10 est obtenue en transfrant
aseptiquement 1 ml de lait l'aide d'une pipette de 1 ml
strile dans 9 ml de diluant (2.1.). Une dilution au 1/100
est obtenue en transfrant 1 ml de la dilution au 1/10
l'aide d'une nouvelle pipette de 1 ml strile dans un second
tube de diluant.
Procder de manire identique pour les dilutions
suivantes.
24 Ramadhan 1425
7 novembre 2004
Mlanger soigneusement chacune des dilutions pendant
5 10 secondes au moyen d'un agitateur mcanique
mouvement de rotation excentr au moment de leur
prparation et avant les ensemencements.
3. Dnombrement des micro-organismes arobies
30 C.
Glose pour dnombrement
Peptone pancratique de casine (tryptone)........5,0 g
Extrait de levure dshydrate...................2,5 g
Glucose anhydre...................................1,0 g
Lait crm en poudre(exempt de substances
inhibitrices)...................................................................10 g
Ou lait crm (exempt de substances inhibitrices) 10 ml
Agar-agar...........................................12 18 g
Eau distille.............................................1000 ml
3.2 Prparation
Faire dissoudre les composants ou le milieu complet
dshydrat dans l'eau en portant bullition. Si
ncessaire, ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il
soit de 7 0,l 25 C.
Rpartir raison de 100 ml dans des flacons de
capacit approprie ou de 12 15 ml dans des tubes de
18 x 180 mm ou 20 x 200 mm.
Striliser l'autoclave 121 C 1 pendant 20 minutes.
Le milieu peut tre conserv trois mois au maximum et
l'obscurit entre 0C et 5C.
3.3 Mode opratoire
Transfrer en double 1 ml des dilutions retenues (2.3)
dans des botes de Ptri striles de 90 ou 100 mm de
diamtre. Couler 12 15 ml de milieu, fondu au pralable
et refroidi dans un bain d'eau 45 C 0,5 (le maintien
dans le bain d'eau ne doit pas excder trois heures).
Mlanger soigneusement l'inoculum au milieu.
Laisser solidifier en posant les botes sur une surface
frache et horizontale.
Placer les botes de Ptri retournes dans une tuve
30C 1 pendant 72h 2 h..
Le dlai entre la prparation des dilutions et
l'introduction de la glose dans les botes ne doit pas
excder 15 minutes.
3.4 Expression des rsultats
Retenir pour comptage, les botes de Ptri contenant un
nombre de colonies compris entre 10 et 300. Utiliser, si
ncessaire, une loupe d'un grossissement de 1,5 au
maximum.
3.5 Mode de calcul
Calculer le nombre de micro-organismes par millilitre
de lait l'aide de la formule suivante :
Nombre/ml = Nombre total de colonies comptes
Volume ensemenc de lchantillon
ou c
(n1 + 0,1 n2) d
21
24 Ramadhan 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 70
7 novembre 2004
o :
c : Somme totale des colonies comptes.
nl : Nombre de botes comptes dans la premire
dilution.
n2 : Nombre de botes comptes dans la seconde
dilution.
d : Facteur de dilution partir duquel les premiers
comptages ont t obtenus.
Exemple : Dilution 10-2 278 et 290 colonies.
Dilution 10-3 33 et 28 colonies.
Nombre/ml : 278 + 290 + 33 + 28 629
= = 28590
(2 + 0,1 x 2) 10-2 0,022
Pour exprimer le nombre de microorganismes, arrondir
le nombre deux chiffres significatifs.
Quand le chiffre qui doit tre arrondi est 5, arrondir de
manire que la valeur indique immdiatement gauche
soit paire.
Dans l'exemple, le rsultat devra tre arrondi 29 000
ou
2,9 x 10 4 si les botes contiennent moins de 10 colonies
donner le nombre de micro-organismes par millilitre sous
la forme moins de 10 x d, d tant l'inverse du facteur
de dilution le plus faible.
Si les botes contiennent plus de 300 colonies, faire une
estimation partir des botes ayant un comptage proche de
300 colonies. Donner le rsultat avec l'indication
nombre estim de micro-organismes par millilitre .
Le rsultat peut-tre exprim par un nombre compris
entre 1 et 9,9 multipli par 10x, x tant la puissance de
10 approprie.
L'exprience montre que si le rsultat le plus lev de
deux essais indpendants sur le mme chantillon dpasse
frquemment le rsultat le plus bas de 30 %, l'analyste
doit exprimer son mode opratoire afin de dterminer les
sources d'erreurs.
4. Dnombrement des coliformes 30 C et des
coliformes fcaux.
Utiliser la glose lactose 0,5 de dsoxycholate de
sodium
4. 1 Composition
Peptone......................................................10 g
Lactose..............................................................10 g
Dsoxycholate de sodium............................0,5 g
Chlorure de sodium.............................................5 g
Citrate de sodium................................................2 g
Agar agar ..............................................12 15 g
Rouge neutre..........................................0,03 g
Eau distille ............................................1000 ml
21
4.2 Prparation
La prparation est extemporane. Prparer la quantit
ncessaire ne pas striliser l'autoclave.
Faire dissoudre les composants ou le milieu
complet dshydrat dans l'eau en portant bullition.
Refroidir le milieu en le maintenant dans un bain d'eau
45 0,5 C.
Eviter de surchauffer le milieu : un chauffage prolong
ou des chauffages rpts diminuent son pouvoir slectif
et nuisent la spcificit de l'preuve.
4.3 Mode opratoire
Transfrer en double 1 ml de lait et 1 ml d'une
dilution au 1/10 (2.3) dans les botes de Ptri striles de
90 ou 100 mm de diamtre.
Couler 12 ml de glose au dsoxycholate et mlanger
linoculum avec le milieu. Laisser solidifier en posant les
botes sur une surface frache et horizontale. Lorsque le
milieu est solidifi, couler environ 4 ml de milieu non
ensemenc. Laisser solidifier nouveau.
4.3.1 Coliformes 30 C
Placer les botes de Ptri retournes dans une tuve
30C 1C pendant 24 heures 2 h.
4.3.2 Coliformes fcaux
Placer les botes de Ptri retournes dans une tuve
44 C 1 C pendant 24 heures 2 h.
4.4 Expression des rsultats
4.4.1 Slection des botes
Retenir pour comptage, les botes de Ptri contenant
moins de 150 colonies caractristiques rouge fonc dun
diamtre dau moins 0,5 mm.
4.4.2 Mode de calcul
Donner le rsultat des coliformes par millilitre de lait
aprs avoir effectu la moyenne arithmtique des colonies
comptes sur botes ensemences par le mme volume de
l'chantillon. Le rsultat peut tre obtenu galement
partir de la moyenne arithmtique entre les valeurs
obtenues par l'examen de 1 ml de lait et dilution dcimale,
sauf lorsque le rapport de la valeur la plus faible est
suprieur 2; dans ce cas, retenir comme rsultat la valeur
la plus faible.
Si les valeurs sont obtenues depuis une dilution
dcimale, multiplier par l'inverse du facteur de dilution.
Le rsultat peut tre exprim par un nombre compris
entre 1 et 9,9 multipli par10x x tant la puissance de
10 approprie.
5. Dnombrement de staphylococcus
Utiliser la glose BAIRD PARKER.
22

22 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 70
5.1 Composition
Peptone pancratique de casine (tryptone)..........10 g
Extrait de levure......................................................1 g
Extrait de viande.....................................................5 g
Glycine .................................................................12 g
Chlorure de lithium.................................................5 g
Agar-agar ..................................................12 20 g
Eau..................................................................1000 ml
Faire dissoudre les composants dans de l'eau en portant
bullition. Si ncessaire, ajuster le pH de sorte qu'aprs
strilisation il soit de 7,2 0,l 25 C.
Rpartir le milieu raison de 90 ml dans des flacons de
capacit approprie.
Striliser l'autoclave 121 C 1 pendant 15 minutes.
Le milieu de base peut tre conserv un mois entre
0 et + 5 C.
5.2 Milieu complet et prparation des botes
Au moment de l'emploi, aprs fusion du milieu de
base (5.1) faire refroidir dans un bain d'eau 50 C et
ajouter 90 ml :
Solution aqueuse 1 % de tellurite de potassium : 1 ml ;
Solution aqueuse 20 % de pyruvate de sodium : 5 ml ;
Emulsion de jaune duf, concentration environ
20 % : 5 ml.
Mlanger soigneusement entre chaque addition et
couler le milieu raison de 28 1 ml dans des boites de
Ptri de 140 mm de diamtre ou de 15 ml ou 20 ml dans
des botes de Ptri de 90 mm ou 100 mm de diamtre
respectivement.
Laisser solidifier, puis scher les botes en les plaant
retournes couvercles largement ouverts, dans une tuve
entre 45 C et 53 C durant 30 minutes.
Procder aux ensemencements dans les 30 minutes qui
suivent la fin du schage.
Les botes contenant la glose Baird Parker non
sches peuvent tre utilises pendant 24 heures
entre 0C et +5 C.
Si l'on suspecte la prsence de Proteus, il est conseill
d'ajouter une solution de sulfamzathine.
Sulfamzathine.....................................0,2 g
Solution d'hydroxyde de sodium 0,l mol/1.........10 ml
Eau Q.S.P..............................................100 ml
Dissoudre la sulfamzathine dans la solution
d'hydroxyde de sodium, complter 100 ml avec de l'eau.
Striliser cette solution par filtration sur membrane.
Au moment de l'emploi, aprs fusion de la glose,
ajouter 27,5 ml de cette solution 100 ml de milieu de
base.
5.3 Mode opratoire
5.3.1 Ensemencement
Selon le format des botes de Ptri, l'ensemencement de
1 ml de lait sera pratiqu de la manire suivante :
24 Ramadhan 1425
7 novembre 2004
Botes de 140 mm : laide d'un taleur en verre strile,
taler la surface du milieu la totalit du volume.
Botes de 90 ou 100 mm : distribuer 1 ml la surface du
milieu de trois botes de Ptri sous forme de trois fractions
sensiblement gales, puis taler en utilisant le mme
taleur pour les trois boites.
Attendre 15 minutes avant de placer les botes de Ptri
retournes dans une tuve 37 1 C pendant 24
48 heures.
5.3.2 Slection des botes et choix des colonies
Aprs 24 et 48 heures d'incubation, marquer sur le fond
des botes les colonies caractristiques et/ou non
caractristiques.
Colonies caractristiques : Colonies noires, brillantes,
convexes, entoures d'une zone transparente qui peut tre
translucide. Aprs 24 heures, peut apparatre dans cette
zone transparente un anneau opalescent immdiatement au
contact des colonies.
Colonies non caractristiques : Colonies noires,
brillantes convexes ou gris noirtre ayant parfois un aspect
mat et une texture sche, dpourvues de zone transparente
(exceptes certaines colonies gris noirtre).
Retenir pour comptage, les botes contenant moins de
250 colonies caractristiques et/ou non caractristiques
par bote de 140 mm; 150 colonies caractristiques et/ou
non caractristiques par boite de 90 ou 100 mm.
Prlever en vue de l'preuve de la coagulase un nombre
maximum de cinq colonies caractristiques et/ou non
caractristiques en tenant compte de leur nombre
respectif.
De manire identique, dix colonies au maximum seront
prleves dans le cas d'un volume rparti en trois fractions
ou en double.
5.3.3 Epreuve de la coagulase
Ensemencer la colonie dans un bouillon cur et incuber
dans une tuve 37 C durant 20 24 heures.
Pour l'preuve de la coagulase, utiliser un plasma de
lapin contenant de l'E.D.T.A. (acide thylne diamine
ttra-actique), dfaut ajouter une solution d'E.D.T.A. de
sorte que la concentration finale dans le plasma rhydrat
soit de 0,l %.
Lpreuve est reconnue positive lorsque le coagulum
occupe plus des trois quarts du volume initial.
5.4 Expression des rsultats
Si au moins 80 % des colonies examines sont
coagulase positive, considrer que la totalit des colonies
dnombres correspond Staphylococcus aureus , sinon,
exprimer le rsultat global en tenant compte des
proportions (colonies caractristiques et colonies non
caractristiques).
Le rsultat peut tre exprim par un nombre compris
entre 9,9 multipli par 10 x, x tant la puissance de 10
approprie.
23
24 Ramadhan 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 70
7 novembre 2004
6. Recherche des Salmonella
6.1 Utiliser les milieux complets dshydrats
correspondant aux indications donnes ci-dessous.
6.2 Mode opratoire
6.2.1 Prenrichissement
Afin de rduire la charge de travail, prlever
aseptiquement de chacune des cinq units, 250 ml de
lait et les rassembler dans un rcipient strile de 1,5 2
litres.
Abandonner la temprature ambiante pendant 1 heure,
si ncessaire, ajuster le pH 6,8 environ. Introduire
aseptiquement 2,25ml d'une solution aqueuse 1 % de
vert brillant. Mlanger soigneusement.
Incuber l'tuve 37 C pendant 20h 2 heures.
6.2.2 Enrichissement
Introduire 10 ml de lait prenrichi dans 100 ml de
bouillon Muller Kauffmann au ttrathionate et au vert
brillant ; faire incuber dans un bain d'eau 43 C 1
pendant quarante-huit heures. Et dans 100 ml de bouillon
au slnite-cystine, faire incuber l'tuve 37 C 1
pendant quarante-huit heures.
6.2.3 Isolement
Aprs l'incubation, pratiquer partir de chaque bouillon
des isolements. Effectuer les isolements la surface de
deux milieux slectifs solides couls de prfrence dans
des botes de Ptri de 140 mm.
Utiliser la glose au vert brillant et au rouge de phnol,
et la glose au sulfate de bismuth.
En raison de l'existence possible de Salmonella
atypiques, lactose +, on peut substituer la glose au vert
brillant et au rouge de phnol par un autre milieu slectif,
par exemple : la glose XLD, la glose Hektoen.
Retourner les botes ltuve 37 C pendant dix huit
vingt heures. Si le dveloppement est insuffisant,
poursuivre lincubation.
Soumettre aux preuves biochimiques classiques un
nombre suffisant de colonies caractristiques ou
douteuses.
Arrt du 26 Rajab 1425 correspondant au
11 septembre 2004 rendant obligatoire une
mthode de dnombrement des coliformes pour
les crmes glaces et les glaces au lait.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
la rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 29 Safar 1414
correspondant au 18 aot 1993 relatif aux spcifications
et la prsentation de certains laits de consommation ;
23
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au
23 juillet 1994, modifi et complt, relatif aux
spcifications microbiologiques de certaines denres
alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt susvis, le prsent arrt a pour
objet de rendre obligatoire une mthode de dnombrement
des coliformes pour les crmes glaces et les glaces au
lait.
Art. 2. Pour le dnombrement des coliformes dans
les crmes glacs et les glaces au lait , les laboratoires du
contrle de la qualit et de la rpression des fraudes et les
laboratoires agrs cet effet doivent employer la
mthode dcrite en annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 26 Rajab 1425 correspondant au
11 septembre 2004.
Noureddine BOUKROUH.
ANNEXE
METHODE DE DENOMBREMENT
DES COLIFORMES DANS LES CREMES
GLACEES ET LES GLACES AU LAIT
1. DEFINITION
On appelle coliformes, les bactries en forme de
btonnets, Gram ngatives, arobies et facultativement
anarobies, non sporules, qui fermentent le lactose avec
formation de gaz et d'acide.
2. PRINCIPE DE LA METHODE
2.1 Mthode de rfrence
Trois sries de dilutions en parallle obtenues partir de
l'chantillon du produit servant ensemencer le milieu
liquide slectif Vert Brillant lactos la bile de buf
dans des tubes essai contenant de petits tubes de
Durham. On incube les tubes pendant 48 heures + 2 h
30C 1.
Les tubes positifs (production de gaz dans les tubes de
Durham) seront soumis confirmation par repiquage
d'une ose dans un nouveau tube du mme milieu. A partir
des tubes pour lesquels le test est positif, aprs
confirmation, on dtermine le nombre le plus probable de
bactries coliformes par g du produit en se rfrant au
tableau du nombre le plus probable (NPP) pour trois sries
parallles.
24

24 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 70
2.2 Mthode de routine
On ensemence le milieu solide Rouge Violet Bile
Agar coul en botes de Ptri, avec une srie de
dilutions de l'chantillon du produit. Aprs une incubation
de 22h 2 h. 30 C 1, on compte le nombre de
colonies rouges caractristiques. Ce nombre, aprs avoir
t multipli par le facteur de dilution, exprime le nombre
de bactries coliformes par g du produit.
(La mthode au vert brillant figurant au paragraphe 2.1
peut galement, aprs modification, tre utilise en tant
que mthode de routine. Dans ce cas, on omettra
l'ensemencement en sries parallles ncessaires
l'utilisation du tableau du NPP et la confirmation des
tubes positifs).
3. ECHANTILLONNAGE
3.1 Echantillonnage de laboratoire
3.1.1 Dans le cas des crmes glaces ou glaces au lait se
prsentant sous la forme de petits emballages, on
prlvera des units compltes dans leur emballage
d'origine.
3.1.2 Dans le cas de crmes glaces et de glaces au lait
en vrac (pour la vente dans les tea-rooms, dans les
restaurants, ou par distributeurs automatiques pour self
service, etc.) ; et en grands emballages, on prlvera, en
s'entourant de prcautions aseptiques, 30 50 grammes du
produit au total en procdant par sondage des endroits
aussi varis que possible. Ces chantillons seront
conservs -5 C dans des flacons large col, munis de
couvercle vis.
3.1.3 Les chantillons (3.1.1 et 3.1.2) devront tre
maintenus congels avant l'analyse. Ils seront transports
au laboratoire pour analyse, dans des rcipients rfrigrs.
L'analyse devra de prfrence tre effectue
immdiatement.
Dans le cas contraire, conserver les chantillons dans
une enceinte rfrigre -15 C maximum.
3.2 Prparation des chantillons
3.21 Avant ensemensement du milieu, les chantillons
seront liquifis de la faon suivante :
Dans le cas des chantillons prlevs selon 3.11 : ter
lemballage et disposer les chantillons dans un rcipient
strile en verre que lon refermera.
Dans le cas des chantillons prlevs selon 3.12 : les
maintenir dans les flacons.
Ces deux types d'chantillons seront liqufis, dans les
rcipients ou les flacons, en les plaant, juste le temps
ncessaire leur fusion, au bain-marie ou dans un
incubateur, 45C 1.
3.2.2 Mlanger intimement les chantillons liqufis et
prlever, en s'entourant de prcautions aseptiques, 10
grammes (ou un poids voisin exactement connu) dans un
flacon cylindre - conique contenant des perles de verre.
On pourra se servir cet effet d'une cuillre ou d'une
pipette, en fonction de la consistance du produit.
24 Ramadhan 1425
7 novembre 2004
3.2.3 A ces 10 g (ou un poids voisin de ces 10 g)
ajouter dans le flacon contenant des perles de verre, 90 ml
(ou 9 fois le poids voisin de 10 g exactement connu),
d'une solution de Ringer au quart pralablement chauffe
45 C. Aprs avoir bouch le flacon, agiter le contenu
vingt fois par des mouvements d'une amplitude de 30 cm
environ.
4. APPAREILLAGE ET VERRERIE
Matriel courant de laboratoire.
5. MILIEUX DE CULTURE
5.1 La composition du milieu Vert Brillant lactos la
bile de buf est la suivante :
Peptone..............................................................10 g
Lactose .............................................................10 g
Bile de buf dshydrate..............................20 g
Vert brillant........................................0,0133 g
Eau distille (dans un appareil en verre)....1000 ml
5.2 Pour prparer 1000 ml du milieu, dissoudre peptone
et lactose dans environ 500 ml d'eau distille. Dissoudre
20 g de bile de buf anhydre dans 200 ml d'eau distille.
Le pH de cette solution doit tre compris entre 7,0 et 7,5.
Mlanger les deux solutions; ajuster le pH, mesur l'aide
d'une lectrode en verre 7,4; ajouter 13,3 ml d'une
solution aqueuse 0,l% de vert brillant. Le volume est
complter 1000 ml avec de l'eau distille.
5.3 Verser 10 ml du milieu (5.2) dans les tubes essai.
Ces tubes sont munis de tubes de Durham. Aprs le
remplissage, striliser pendant 15 minutes dans des
autoclaves rgls 121 C. Aprs strilisation, le pH doit
tre de 7,2 0,1.
Pour les ensemencements de 10 g, les constituants du
milieu doivent tre augments de 100% et les tubes essai
munis de tubes Durham doivent recevoir 10 ml du milieu.
5.4 La composition du milieu Rouge Violet Bile
Agar suivante :
Extrait de levure..................................................3 g
Peptone ...................................................................7 g
Sels biliaires.........................................................1,5 g
Lactose .....................................................10 g
Chlorure de sodium.....................................5 g
Rouge neutre..........................................0,03 g
Cristal violet.........................................0,002 g
Glose....................................................10 15 g
(en fonction des proprits glifiantes de la glose
utilise).
5.5 Dissoudre les ingrdients dans de l'eau distille ;
laisser reposer pendant quelques minutes ; mlanger
ensuite nergiquement et ajuster le pH 7,4 en le
mesurant l'aide d'une lectrode de verre. Porter
bullition en agitant de temps en temps; laisser bouillir
pendant deux minutes. Refroidir le milieu 45 C environ
et en couler 10 ml par bote de Ptri.
25
24 Ramadhan 1425 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 70
7 novembre 2004
5.6 Le milieu doit tre prpar peu avant l'utilisation et
ne doit pas tre strilis l'autoclave, ce qui attnuerait sa
slectivit. Le milieu doit tre employ, si possible, dans
les trois heures suivant sa prparation.
5.7 Il est recommand d'utiliser pour ces milieux (5.1 et
5.4) une prparation anhydre prte lemploi. Dans ce
cas, les prescriptions techniques doivent tre suivies
scrupuleusement et on prparera toujours un tmoin.
6. DILUANT
Solution de Ringer au quart. La composition de la
solution concentre est la suivante :
Chlorure de sodium (NaCI)...............................9,00 g
Chlorure de potassium (KCI)............................0,42 g
Chlorure de calcium anhydre (CaCI2)..........0,24 g
Bicarbonate de sodium (NaHCO3)................0,20 g
Eau distille (dans un appareil en verre).............1000 ml
Pour l'emploi, ajouter une partie de la solution
prcdente, trois parties d'eau distille. La solution
dilue est strilise par chauffage pendant 15 minutes
120 C.
On peut galement employer une solution de peptone
0,1% en lieu et place de la solution de Ringer dilue au
quart.
On peut galement utiliser des pastilles prtes
lemploi reprsentant une dose toute prpare.
Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique.
7. MODE OPERATOIRE
7.1 Prparation des dilutions
7.1.1 Pour l'ensemencement direct du milieu nutritif
Cas de la mthode de rfrence (2.1) : on introduit
1 ml de l'chantillon dans chacun des trois tubes contenant
10 ml de vert brillant lactos la bile de buf et un tube
de Durham, et on mlange soigneusement cette portion de
l'chantillon avec le milieu nutritif en vitant toutefois la
formation de bulles d'air dans le tube de Durham.
Cas de la mthode de routine (2.2) : on procde de la
mme faon que ci-dessus mais on n'ajoute 1 ml de
l'chantillon qu' un seul tube ( au lieu de trois ).
Si on utilise le milieu Rouge violet Bile Agar , on
introduit directement 1 ml de l'chantillon dans une bote
de Ptri.
7.1.2 On procdera comme suit pour les autres dilutions
Inoculer 1 ml du mlange (3.2.3) directement dans
le milieu nutritif ou dans les botes de Ptri. On obtient
ainsi la dilution 10-1.
10 ml du mlange (3.2.3) sont ajouts 90 ml d'une
solution de Ringer au quart et on inocule 1 ml de ce
mlange dans les milieux nutritifs ou dans les botes de
Ptri. On obtient ainsi la dilution 10-3. On poursuivra de
la mme faon pour les autres dilutions.
26
25
7.2 Ensemencement du milieu
7.2.1 Ensemencement des tubes avec le Vert Brillant
lactos la bile de buf :
Ensemencer les tubes avec la quantit dsire de
l'chantillon et les dilutions correspondantes l'aide d'une
pipette strile. Mlanger soigneusement, en vitant
d'introduire des bulles d'air dans les tubes de Durham;
Ensemencer en parallle dans trois tubes chaque
quantit d'chantillon et chaque dilution et oprer au
moins sur trois dilutions par exemple 1g ; 0,l g et 0,01 g.
En gnral, on doit prvoir un nombre de dilutions
suffisant pour que les trois tubes parallles de la dilution
la plus leve demeurent ngatifs. Ce n'est que par ce
moyen que les rsultats les plus exacts peuvent tre
obtenus.
7.2.2 Ensemencement des botes de Ptri
Introduire dans les botes 1 ml de l'chantillon, et 1 ml
des autres dilutions dsires;
Dans chaque bote, verser 10 ml du milieu
Rouge Violet Bile Agar fondu, amen une
temprature de 45 C.
Immdiatement aprs avoir vers le milieu, le mlanger
l'inoculum par cinq mouvements de va-et-vient, suivis
de cinq mouvements circulaires dans le sens des aiguilles
d'une montre, puis de cinq mouvements de va-et-vient
excuts perpendiculairement aux premiers, et enfin de
cinq mouvements circulaires en sens contraire des
aiguilles dune montre. Aprs glification, recouvrir la
surface de la bote de 4 ml de milieu encore liquide et
laisser glifier.
7.3 Incubation des tubes et des botes de Ptri
7.3.1 Les tubes (par. 7.2) seront incubs pendant 48 h.
2 h 30C 1.
7.3.2 Les botes de Ptri prpares comme dcrit
au paragraphe 7.2.2 ci-dessus sont incubes pendant 22 h.
2 h. 30C 1.
La dure d'incubation doit tre respecte
scrupuleusement.
7.4 Dnombrement des bactries coliformes
7.4.1 Cas de la mthode de rfrence (2.1)
Le test est considr comme positif lorsqu'il y a
production visible de gaz dans les tubes de Durham. Le
nombre de tubes positifs confirms (2.1) est dterminant
pour la lecture du nombre le plus probable (NPP) de
bactries coliformes selon le tableau ci-dessous, pour trois
sries parallles.
Le NPP dtermine le nombre de bactries coliformes
dans le volume de crme glace ou de glace au lait, en
rgle gnrale 1g ou 0,l g ou 0,01 g avec lequel on a
ensemenc en parallle les 3 premiers tubes partir
desquels on constitue l'index.
 24 Ramadhan 1425
26 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 70 7 novembre 2004

Le nombre de bactries coliformes sera exprim par le 8. EXPRESSION DES RESULTATS

nombre le plus probable (NPP) par 1 g de crme glace ou
glace au lait. 8.1 Mthode de rfrence (2.1)

Si tous les tubes sont positifs, il faut rpter
l'analyse en utilisant des dilutions plus leves
(par exemple 0,l g - 0,01 ou 0,001 g ou encore plus
leves). Si l'on trouve un chiffre index ne figurant pas
dans le tableau, on peut conclure qu'une erreur a t
commise dans les manipulations.
7.4.2 Cas de la mthode de routine (2.2)
7.4.2.1 Aprs la dure d'incubation prescrite ci-dessus,
compter lil nu, les colonies rouges caractristiques
des bactries coliformes;
7.4.2.2 Au cas o la mthode simplifie (par 2.2)
faisant appel au Vert Brillant lactos la bile de buf, est
utilise, il faudra dterminer jusqu quelle dilution on
peut dceler une formation de gaz dans les tubes de
Durham. Une formation positive de gaz indique dans
quelle portion de l'chantillon on peut trouver des
coliformes.
Les rsultats feront donc tat de la dtection
bactries coliformes dans 1 g ou 0,l g ou 0,01 g etc.
Nombre le plus probable par g selon le tableau
ci-dessous.
8.2 Mthode de routine (2.2)
8.2.1 Nombre de colonies par g = nombre de colonies
dfini sous 7.4.2.1 multipli par l'inverse de la dilution.
8.2.2 Si l'on utilise la mthode simplifie (2.2) indiquer
le nombre de coliformes positifs dans 1g, 0,lg ou 0,01 g
etc.
9. REPETABILITE
9.1 Mthode de rfrence (2.1)
La diffrence entre les rsultats de dterminations
effectues en double (rsultats obtenus simultanment ou
rapidement l'un aprs l'autre par le mme analyste) ne doit
pas s 'carter de plus de 30 % du rsultat le plus bas.
9.2 Mthode de routine (3.2)
de
Une seule dtermination suffit.

Tableau : NOMBRE LE PLUS PROBABLE (NPP) POUR TROIS SERIES PARALLELES

INDEX NPP INDEX NPP

TUBES POSITIFS DE : (pour 1 g) TUBES POSITIFS DE : (pour 1 g)

1g 0,1 g 0,01 g 1 g 0,1 g 0,01 g

0 0 0 0 2 2 3 4,0
0 0 1 0,3 2 3 0 3,0
0 1 0 0,3 2 3 1 3,5
0 1 1 0,6 2 3 2 4,0
0 2 0 0,6 3 0 0 2,5
1 0 0 0,4 3 0 1 4,0
1 0 1 0,7 3 0 2 6,5
1 0 3 1,1 3 1 0 4,5
1 1 0 0,7 3 1 1 7,5
1 1 1 1,1 3 1 2 11,5
1 2 0 1,1 3 1 3 16,0
1 2 1 1,5 3 2 0 9,5
1 3 0 1,6 3 2 1 15,0
2 0 0 0,9 3 2 2 20,0
2 0 1 1,4 3 2 3 30,0
2 0 2 2,0 3 3 0 25,0
2 1 0 1,5 3 3 1 45,0
2 1 1 2,0 3 3 2 110,0
2 1 2 3,0
2 2 0 2,0
2 2 1 3,0
2 2 2 3,5

27
 8 Joumada El Oula 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
15 juin 2005
ARRETES, DECISIONS ET AVIS
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 13 Dhou El Hidja 1425 correspondant au
23 janvier 2005 rendant obligatoire une mthode
de recherche des salmonella dans le lait et
les produits laitiers.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 04-138 du 6 Rabie El Aouel
1425 correspondant au 26 avril 2004 portant nomination
des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
la rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 18 aot 1993 relatif aux
spcifications et la prsentation de certains laits de
consommation ;
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt, relatif aux spcifications
microbiologiques de certaines denres alimentaires ;
28
7
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions
de larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de recherche
des salmonella dans le lait et les produits laitiers.
Art. 2. Pour la recherche des salmonella dans le lait
et les produits laitiers, les laboratoires du contrle de la
qualit et de la rpression des fraudes et les laboratoires
agrs cet effet doivent employer la mthode danalyse
microbiologique dcrite en annexe. Cette mthode doit
tre galement utilise par le laboratoire lorsquune
expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 13 Dhou El Hidja 1425 correspondant
au 23 janvier 2005.
Noureddine BOUKROUH
ANNEXE
METHODE DE RECHERCHE DES SALMONELLA
DANS LE LAIT ET LES PRODUITS LAITIERS
1. DEFINITIONS :
Dans le cadre de la prsente mthode, les dfinitions
suivantes sont applicables.
1.1 SALMONELLA
Micro-organisme formant des colonies typiques sur des
milieux slectifs solides et possdant des caractristiques
biochimiques et srologiques dcrites lorsque les essais
sont effectus conformment la prsente mthode.
1.2 RECHERCHE DES SALMONELLA
Dtermination de la prsence ou de l'absence de ces
micro-organismes dans une masse ou un volume
dtermin de produit, lorsque l'essai est excut selon la
prsente mthode.
2. PRINCIPE :
En gnral, la recherche des salmonella ncessite 4
phases successives telles qu'indiques de 2.1 2.4
(Voir galement le schma du mode opratoire dans
l'annexe).
 8 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
2.1 PRE-ENRICHISSEMENT DANS UN MILIEU
LIQUIDE
Ensemencement de la prise d'essai dans le milieu de
pr-enrichissement appropri, puis incubation 37 C
durant 16h 20h.
2.2 ENRICHISSEMENT DANS DES MILIEUX
LIQUIDES SELECTIFS
Ensemencement d'un milieu au ttrathionate et d'un
milieu slnite-cystine avec la culture obtenue (2.1)
Incubation du milieu au ttrathionate 43 C et
incubation du milieu slnite cystine 37 C durant
2 priodes de 18h 24h.
2.3 ISOLEMENT ET IDENTIFICATION
A partir des cultures obtenues (2.2), ensemencement des
2 milieux slectifs solides glose au rouge de phnol et au
vert brillant et glose au sulfite de bismuth.
Incubation 37 C et examen aprs 20h 24h,
et si ncessaire, aprs 40h 48h, pour contrler s'il y a
prsence de colonies, prsumes tre des salmonella en
raison de leurs caractristiques.
2.4 CONFIRMATION
Repiquage des colonies prsumes de Salmonella (2.3)
et confirmation au moyen des essais biochimiques et
srologiques appropris.
3. MILIEUX DE CULTURE, REACTIFS ET
SERUMS
3.1 COMPOSANTS DE BASE
Pour amliorer la reproductibilit des rsultats, il est
recommand d'utiliser, pour la prparation des milieux de
culture, des composants de base dshydrats ou des
milieux complets dshydrats.
Les produits chimiques utiliss pour la prparation des
milieux de culture et des ractifs doivent tre de qualit
analytique reconnue.
L'eau utilise doit tre de l'eau distille ou
dminralise, et tre exempte de substances susceptibles
d'inhiber la croissance des micro-organismes dans les
conditions de l'essai.
Lorsque la glose est spcifie, la quantit utilise doit
varier conformment aux prescriptions indiques pour
donner des milieux d'une fermet approprie.
Les mesurages de pH doivent tre effectus l'aide d'un
pH-mtre, ces mesurages se rfrant une temprature de
25C. Les ajustements ventuels sont faits par addition,
soit d'une solution d'acide chlorhydrique 1 mol/l, soit
d'une solution d'hydroxyde de sodium 1 mol/l.
Les milieux de culture prpars et les ractifs ne sont
pas utiliss extemporanment, ils doivent, sauf
spcifications contraires, tre conservs l'obscurit,
une temprature de 4 1C pendant 1 mois au maximum,
dans des conditions qui vitent toute modification de leur
composition.
8 Joumada El Oula 1426
15 juin 2005
3.2 MILIEUX DE CULTURE
3.2.1 MILIEU DE PRE-ENRICHISSEMENT
EAU PEPTONEE TAMPONNEE.
COMPOSITION :
Peptone ..................................................... 10,0 g
Chlorure de sodium ................................ 5,0 g
Hydrogno-orthophosphate disodique
Dodcahydrat (Na2HP04, 12H20).................. 9,0 g
Dihydrogno-orthophosphate de potassium
(KH2PO4 )................................................ 1,5 g
Eau............................................................. 1000 ml
PREPARATION :
Dissoudre les composants dans l'eau en portant
bullition.
Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il soit de
7,0 0,1.
Rpartir le milieu, par quantits de 225 ml, dans des
flacons de 500 ml de capacit ( ou des multiples
de 225 ml dans des flacons de capacit adquate).
Striliser le milieu durant 15 min. 121 1 C.
3.2.2 MILIEU D'ENRICHISSEMENT SELECTIF
Bouillon au ttrathionate (Muller - Kauffmann)
Vert brillant ............................................................ 0,5 g
Eau .............................................................. 100 ml
3.2.2.1 MILIEU DE BASE
COMPOSITION :
Extrait de viande ............................................. 5,0 g
Peptone ......................................................... 10,0 g
Chlorure de sodium .................................... 3,0 g
Carbonate de calcium ............................... 45,0 g
Eau ............................................................ 1000 ml
PREPARATION :
Ajouter les composants de base dshydrats ou le
milieu de base complet dshydrat l'eau, en portant
bullition jusqu' dissolution complte des composants
solubles.
Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il soit de
7,0 0,1
Striliser le milieu de base durant 15 min.
121 1C.
3.2.2.2 SOLUTION DE THIOSULFATE DE
SODIUM
COMPOSITION :
Thiosulfate de sodium pentahydrat
(Na2S203, 5H2O) .................................................. 50,0 g
Eau, quantit suffisante pour ...................... 100 ml
29
 8 Joumada El Oula 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
15 juin 2005 9

PREPARATION : PREPARATION :
Dissoudre le thiosulfate de sodium dans une partie Ajouter aseptiquement au milieu de base les autres
de l'eau. composants dans l'ordre donn ci-dessus. Bien mlanger
les liquides aprs chaque addition.
Complter au volume final. Rpartir strilement le milieu complet, par quantits
Striliser la solution durant 15 min. 121 1C. de 100 ml, dans des flacons striles de 500 ml de
capacit.
3.2.2.3 SOLUTION D'IODE Conserver 0,5 C l'obscurit mais utiliser dans la
semaine qui suit la prparation.
COMPOSITION :
Iode ....................................................................... 20,0 g 3.2.3 PREMIER MILIEU D'IDENTIFICATION :
Iodure de potassium ............................................. 25,0 g Glose au rouge de phnol et au vert brillant
Eau, quantit suffisante pour ....................... 100 ml (Edel & Kampelmacher)

PREPARATION : 3.2.3.1 MILIEU DE BASE

Dissoudre liodure de potassium dans un petit COMPOSITION :

volume d'eau et ajouter l'iode. Extrait de viande en poudre ............................ 5,0 g
Agiter jusqu' dissolution complte. Peptone ..........................................................10,0 g
Complter au volume final. Extrait de levure en poudre ............................ 3,0 g
Conserver la solution dans un rcipient opaque Hydrogno-orthophosphate disodique
compltement ferm. (Na2HPO4) ...........................................................1,0 g
Dihydrogno-orthophosphate de sodium
3.2.2.4 SOLUTION DE VERT BRILLANT (NaH2PO4).............................................................. 0,6 g
COMPOSITION : Agar-agar ................................................... 12,0 18,0 g
Eau .................................................................. 900 ml
Vert brillant ................................................ 0,5 g
Eau .......................................................... 100 ml PREPARATION :
Dissoudre les composants de base dshydrats ou le
PREPARATION : milieu de base complet dshydrat dans l'eau, en portant
bullition.
Ajouter le vert brillant l'eau.
Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il
Conserver la solution au moins une journe soit de 7,0 0,1.
l'obscurit pour permettre l'autostrilisation. Rpartir le milieu de base dans des tubes ou des
flacons striles de 500 ml de capacit maximale.
3.2.2.5 SOLUTION DE BILE DE BUF
3.2.3.2 SOLUTION DE SUCRE AU ROUGE DE
COMPOSITION : PHENOL
Bile de buf dessche ................................ 10,0 g COMPOSITION :
Eau ...............................................................100 ml Lactose ................................................................. 10,0 g
Saccharose ............................................................ 10,0 g
PREPARATION : Rouge de phnol ............................................... 0,09 g
Dissoudre la bile de buf dessche dans l'eau en Eau, quantit suffisante pour ............................... 100 ml
portant bullition ;
PREPARATION :
Striliser la solution durant 15 min. 121 1C. Dissoudre les ingrdients dans l'eau.
Chauffer au bain d'eau durant 20 min 70 C.
3.2.2.6 MILIEU COMPLET Refroidir 55 C et utiliser immdiatement.
COMPOSITION : 3.2.3.3 MILIEU COMPLET
Milieu de base (3.2.2.1) .............................. 900 ml
COMPOSITION :
Solution de thiosulfate de sodium (3.2.2.2) .... 100 ml
Solution d'iode (3.2.2.3) .................................... 20 ml Milieu de base (3.2.3.1) .................................. 900 ml
Solution de vert brillant (3.2.2.4) ........................ 2 ml Solution de sucres au rouge de phnol (3.2.3.2)..100 ml
Solution de bile de buf (3.2.2.5) ............. 50 ml Solution de vert brillant. (3.2.2.4).... 1 ml

30
10 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
PREPARATION :
Ajouter aseptiquement la solution de vert brillant la
solution de sucres au rouge de phnol refroidie 55 C.
Ajouter au milieu de base fondu et maintenu
de 50 55 C et mlanger.
3.2.3.4 PREPARATION DES BOITES
Rpartir le milieu complet refroidi 45 C, par
quantits d'environ 15 ml, dans des botes de Ptri striles
de 90 mm de diamtre et laisser se solidifier.
Juste avant l'emploi, scher soigneusement les botes
de milieu glos, de prfrence aprs avoir retir
les couvercles et retourn les botes, dans une tuve ou un
incubateur rgl 50 5 C durant 30 minutes.
Les botes de milieu glos non sches ne doivent
pas tre conserves plus de 4 h la temprature
du laboratoire ou plus de 24h de 0 5 C.
3.2.4 SECOND MILIEU D'IDENTIFICATION:
GELOSE AU SULFITE DE BISMUTH
COMPOSITION :
Peptone ................................................. 10,0 g
Extrait de buf ....................... 5,0 g
Glucose ................................... 5,0 g
Hydrogno-orthophosphate disodique ....... 4,0 g
Sulfate de fer (II) .................................... 0,3 g
Citrate de bismuth ammoniacal ................ 1,85 g
Sulfite de sodium ...................................... 6,15 g
Agar-agar............................................... 20,0 g
Vert brillant .................................... 0,025 g
Eau ................................................................ 1000 ml
PREPARATION :
Dissoudre les ingrdients dans l'eau, en portant
bullition durant environ 1 min.
Ajuster le pH 7,7 0, 1.
Refroidir entre 45 C et 50 C en agitant doucement
le prcipit en suspension.
Ne pas striliser le milieu.
Rpartir le milieu, par quantits de 20 ml, dans des
botes de Ptri striles ( de 90 mm de diamtre) et laisser
se solidifier.
Juste avant l'emploi, scher soigneusement les botes
de milieu glos, de prfrence aprs avoir retir les cou-
vercles et retourn les botes, dans une tuve ou un incu-
bateur rgl 50 5 C durant 30 minutes.
Utiliser les botes sches entre 24 et 48 h aprs leur
prparation. Les conserver l'obscurit.
3.2.5 GELOSE NUTRITIVE
COMPOSITION :
Extrait de viande ............................................. 3,0 g
Peptone ........................................................... 5,0 g
Agar-agar ...................................................... 12,0 g
Eau ........................................................ 1000 ml
8 Joumada El Oula 1426
15 juin 2005
PREPARATION :
Dissoudre les composants dshydrats du milieu ou
le milieu complet dshydrat dans l'eau, en portant
bullition.
Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il soit de
7,0 0,1.
Rpartir le milieu de culture dans des tubes ou des
flacons striles de 500 ml de capacit maximale.
Striliser le milieu durant 20 minutes 121 1C.
PREPARATION DES BOITES DE GELOSE
NUTRITIVE
Verser environ 15 ml du milieu fondu dans des botes
de Ptri striles (de 90 mm de diamtre) et procder
comme spcifi en (3.2.3.4).
3.2.6 GELOSE AU CITRATE DE FER ET AUX
TROIS SUCRES (GELOSE TSI)
COMPOSITION
Extrait de viande ........................ 3,0 g
Extrait de levure ..................... 3,0 g
Peptone ..................................... 20,0 g
Chlorure de sodium .................... 5,0 g
Lactose ............................................. 10,0 g
Saccharose ................................ 10,0 g
Glucose ............................... 1,0 g
Citrate de fer (III) .................. 0,3 g
Thiosulfate de sodium ............ 0,3 g
Rouge de phnol ..................... 0,024 g
Agar-agar .................................. 12,0 g
Eau ................................................. 1000 ml
PREPARATION :
Dissoudre les composants du milieu dshydrat ou le
milieu complet dshydrat dans l'eau, en portant
bullition.
Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il soit de
7,4 0,1.
Rpartir le milieu, par quantits de 10 ml, dans des
tubes de 17 mm 18 mm de diamtre.
Striliser le milieu durant 10 min 121 1 C.
Laisser reposer en position incline de faon
obtenir un culot de 2,5 cm de profondeur et une pente de
4 cm 5 cm.
3.2.7 GELOSE POUR LA RECHERCHE A
L'UREASE (CLIRISTENSEN)
3.2.7.1 MILIEU DE BASE
COMPOSITION :
Peptone ............................................... 1,0 g
Glucose ....................................................... 1,0 g
Chlorure de sodium............................. 5,0 g
31
 8 Joumada El Oula 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
15 juin 2005 11

Dihydragno-orthophosphate de potassium Rpartir le milieu, par quantits de 5 ml, dans des

tubes de culture d'environ 8 mm de diamtre et 160 mm
(KH2PO4) ............................................................... 2,0 g
de longueur. Striliser le milieu durant 10 minutes
Rouge de phnol ................................. 0,012 g 121 1C.
Agar - agar............................................................. 15,0 g
3. 3 REACTIFS
Eau ........................................................ 1000 ml
3. 3.1 SOLUTION SALINE
PREPARATION :
COMPOSITION :
Dissoudre les composants de base dshydrats ou le
milieu de base complet dshydrat dans l'eau, en portant Chlorure de sodium ................................ 8,5 g
bullition.
Eau ................................................ 1000 ml
Ajuster le pH si ncessaire, de sorte qu'aprs
strilisation, il soit de 6,8 0,1. PREPARATION :
Striliser le milieu de base durant 15 min Dissoudre le chlorure de sodium dans l'eau, en
121 1C. portant bullition.
3.2.7.2 SOLUTION D'UREE Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il soit de
7,0 0,1.
COMPOSITION :
Rpartir la solution dans des flacons ou dans des
Ure ................................................... 400 g tubes, de sorte qu'aprs strilisation, ils contiennent 90
Eau, quantit suffisante pour ..................1000 ml 100 ml de solution.
Striliser la solution durant 15 minutes 121 1C.
PREPARATION :
Dissoudre l'ure dans l'eau. 3. 3. 2 REACTIFS POUR LA RECHERCHE
DE -GALACTOSIDASE
Striliser par filtration et contrler la strilit. ( selon
la technique de strilisation par filtration). 3. 3. 2.1 TOLUENE

3.2.7.3 MILIEU COMPLET 3. 3. 2. 2 SOLUTION TAMPON

COMPOSITION : COMPOSITION :

Milieu de base (3.2.7.1) .................. 950 ml Dihydrogno-orthophosphate de sodium

Solution d'ure (3.2.7.2) .................... 50 ml
PREPARATION :
Ajouter strilement la solution d'ure au milieu de
base pralablement fondu puis refroidi 45 C.
Rpartir le milieu complet, par quantits de 10 ml,
dans des tubes striles.
Laisser reposer en position incline.
(NaH2PO4.) ..................................................... 6,9 g
Hydroxyde de sodium, Sol. 0, 1 mol/l ............ 3 ml
Eau, quantit suffisante pour...............50 ml
PREPARATION :
Dissoudre le dihydrogno-orthophosphate de sodium
dans environ 45 ml d'eau.

3.2.8 MILIEU DE DECARBOXYLATION A LA Ajuster le PH 7,0 0,l avec environ 3 ml de la

LYSINE solution d'hydroxyde de sodium.

COMPOSITION : Complter 50 ml avec de l'eau.

Monohydrochlorure de L-lin ...................... 5,0 g 3.3.2.3 SOLUTION dOrthonitrophnyl - - D -
Extrait de levure ......................................... 3,0 g galactopyranoside (ONPG)
Glucose ............................................... 1,0 g
COMPOSITION :
Pourpre de bromocrsol ....................................... 0,015 g
Eau ........................................................ 1000 ml (ONPG) .... 0,08 g
Eau ........................................................ 15 ml
PREPARATION :
Dissoudre les composants dans l'eau, en portant PREPARATION :
bullition.
Dissoudre l'ONPG dans l'eau 50 C.
Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il soit de
7,0 0,1. Refroidir la solution.

32
12 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42 8 Joumada El Oula 1426
15 juin 2005

3. 3. 2. 4 REACTIF COMPLET PREPARATION :

Dissoudre l'hydroxyde de potassium dans l'eau.
COMPOSITION :
Solution tampon (3.3.2.2) ............................. 5 ml 3.3.4 REACTIFS POUR LA REACTION DE
L'INDOLE
Solution d'ONPG (3.3.2.3) ........................ 15 ml
3.3.4.1 MILIEU TRYPTONE - TRYPTOPHANE
PREPARATION : ( DE L - JUTOV )
Ajouter la solution tampon la solution d'ONPG. COMPOSITION :
3.3.3 REACTIFS POUR LA REACTION DE Tryptone .. 10 g
VOGES-PROSKAUER (VP). Chlorure de sodium ... 5 g
(METHODE RAPIDE DE BARRY ET FEENEY) DL-Tryptophane .... 1 g
Eau ........ 1000 ml
3.3.3.1 MILIEU VP
PREPARATION :
COMPOSITION :
Dissoudre les composants dans l'eau, en portant
Peptone ................................................... 7,0 g
bullition, et filtrer.
Glucose ........................................... 5,0 g Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation il soit de
Hydrogno-orthophosphate dipotassique ............... 5,0 g 7,5 0,1.
(K2HPO4)
Rpartir 5ml de milieu dans chacun des tubes.
Eau ........................................................ 1000 ml Striliser 1e milieu durant 15 min 121 + 1 C.
PREPARATION : 3.3.4.2 REACTIF DE KOWACS
Dissoudre les composants dans l'eau.
COMPOSITION :
Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation , il soit Dimthylarnino-4 benzaldhyde,... 5 g
de 7,0 0 ,1.
Acide chlorhydrique, 1,18 1, 19 g/ml ......... 25 ml
Rpartir 3 ml de milieu dans chacun des tubes. Mthyl - 2 butanol - 2 ........................................... 75 ml
Striliser le milieu durant 15 minutes au maximum,
1211 C. PREPARATION :
Mlanger les composants.
3. 3. 3. 2 SOLUTION DE CREATINE
COMPOSITION : 3.3.5 GELOSE NUTRITIVE SEMI-SOLIDE
Cratine monohydrate (N-amidinosarcosine) 0,5 g COMPOSITION :
Eau .................................................. 100 ml Extrait de viande .... 3,0 g
Peptone ....... 5,0 g
PREPARATION : Agar-agar..4 9 g
Dissoudre la cratine monohydrate dans l'eau. Eau.1000 ml

3.3.3.3 SOLUTIO ETHANOLIQUE DE NAPHTOL-1 PREPARATION :

COMPOSITION : Dissoudre les composants de base dshydrats dans
Naphtol-1 ....................................................... 6 g l'eau, en portant bullition.
Ethanol, 96 % (V/V) ..................... 100 ml Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation, il soit de
7,0 0,1
PREPARATION :
Rpartir le milieu dans des flacons de 500 ml de
Dissoudre le naphtol-1 dans l'thanol. capacit maximale.
Striliser le milieu durant 15 minutes 121 1C.
3.3.3.4 SOLUTION D'HYDROXYDE DE
POTASSIUM
PREPARATION DES BOITES DE GELOSE
COMPOSITION :
Rpartir le milieu complet, rcemment prpar, dans
Hydroxyde de potassium ..... ............... 40 g des botes de Ptri par quantit denviron 15 ml. Les
Eau ................................................. 100 ml botes ne doivent pas tre sches.

33
 8 Joumada El Oula 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
15 juin 2005
3.4 SERUMS
Il existe plusieurs srums anti-salmonella contenant un
ou plusieurs groupes "O" (dnomms anti- srums O
monovalents ou polyvalents), des anti-srums Vi et des
anti-srums contenant des anticorps pour un ou plusieurs
facteurs H (dnomms anti-srums H monovalents).
Pour chaque srum, suivre les instructions d'utilisation .
4. APPAREILLAGE ET VERRERIE
Matriel courant de laboratoire de microbiologie, et
notamment :
4.1 APPAREILLAGE
4.1.1 APPAREILS POUR LA STERILISATION EN
CHALEUR SECHE (FOUR) OU EN CHALEUR
HUMIDE (AUTOCLAVE).
Le matriel en contact avec les milieux de culture, le
diluant et l'chantillon, sauf s'il est livr strile et
particulirement celui en plastique, doit tre strilis :
soit au four en le maintenant une temprature
comprise entre 170 C et 175 C durant au moins 1 heure;
soit l'autoclave en le maintenant une temprature
de 121 1C durant au moins 20 minutes.
Un autoclave est galement ncessaire pour la
strilisation des milieux de culture et des ractifs. Il doit
tre rglable 121 1C.
4.1.2 Enceinte de schage : tuve ou incubateur,
ventil(e) (permettant de scher la surface des milieux
gloss couls en botes), rglable 50 5C.
4.1.3 Incubateur, rglable 37 1C.
4.1.4 Incubateur, rglable 43 0,5C.
4.1.5 Bains marie. rglables 45 1C et 37 1C.
4.1.6 Homognisateurs.
L'un des appareils suivants doit tre utilis :
a) homognisateur rotatif, fonctionnant une
frquence de rotation comprise entre 8000 t/min.
et 45000 t/min , avec des rcipients en verre ou en mtal,
munis de prfrence de couvercles et rsistant aux
conditions de strilisation ;
b) Homognisateur de type pristaltique, avec des sacs
en plastique striles.
Les rcipients ou les sacs en plastique doivent tre de
capacit suffisante pour permettre le mlange correct de
l'chantillon pour essai avec le diluant. En gnral, le
volume du rcipient doit tre gal environ deux fois le
volume de l'chantillon et du diluant.
4.1.7 Anses boucles, en platine ou en nickel-chrome,
d'environ 3 mm de diamtre.
4.1.8 pH-mtre (permettant de mesurer le pH des
milieux et ractifs prpars), avec une prcision de
rglage de 0,1 unit de pH 25 C.
4.1.9 Rfrigrateur (permettant de conserver les
milieux et ractifs prpars), rglable 0 - 5 C
13
4.2 VERRERIE
La verrerie doit pouvoir rsister des strilisations
rptes.
4.2.1 Flacons de culture , pour la strilisation et la
conservation des milieux de culture et l'incubation des
milieux liquides.
4.2.2 Tubes de culture , de 8 mm de diamtre et 160
mm de longueur, pour le milieu de dcarboxylation la
lysine.
4.2.3 Eprouvettes gradue s, pour la prparation des
milieux complets.
4.2.4 Pipettes gradues en verre de 25 ml, 10 ml et 1
ml, gradues respectivement en 0,5 ml et 0,1 ml.
4.2.5. Botes de Ptri.
5. ECHANTILLONNAGE
Lchantillonnage se fait dans des conditions
appropries.
6. PREPARATION DE LECHANTILLON POUR
ESSAI.
6.1 LAIT
Agiter vigoureusement l'chantillon pour essai afin
d'assurer une rpartition aussi uniforme que possible des
micro-organismes , en inversant rapidement 25 fois le
rcipient avec l'chantillon. Il faut viter la formation de
mousse ou bien la laisser se disperser.
L'intervalle entre le mlange et le prlvement de
l'chantillon pour essai ne doit pas dpasser 3 minutes.
6.2 LAIT SEC, POUDRE DE LACTOSERUM,
BABEURRE EN POUDRE , LACTOSE , CASEINE
Mlanger soigneusement le contenu du rcipient
ferm en secouant manuellement et en inversant de faon
rpte. Si le rcipient est trop rempli pour permettre une
agitation vigoureuse, prendre un rcipient plus grand pour
mlanger.
6.3 BEURRE
Faire fondre l'chantillon dans un rcipient strile
dans un bain-marie maintenu 45 C 1 (4.1.5.).
Agiter lorsqu'on fait fondre et retirer le rcipient
immdiatement du bain-marie lorsque l'chantillon vient
d'tre fondu.
6.4 FROMAGE
Habituellement, un (1) chantillon pour laboratoire
constituera l'chantillon pour essai. Procder alors
comme au point (7.1.5).
6.5 GLACES DE CONSOMMATION
Procder comme dans le cas du beurre (6.3) mais en
utilisant un bain-marie maintenu 37 C (4.1.5), de faon
que l'chantillon ne doit pas dpasser cette temprature.
6.6 LAITS FERMENTES, YAOURTS, CREMES-
DESSERT
Mlanger le contenu du rcipient ferm, en secouant
manuellement et en inversant de faon rpte, et ouvrir le
rcipient et mlanger le contenu aseptiquement l'aide
d'une spatule ou d'une cuillre strile.
34
14 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
7. MODE OPERATOIRE
7.1 PRISE D'ESSAI ET PREENRICHISSEMENT
Introduire la prise d'essai dans le milieu de
pr-enrichissement et oprer comme dcrit en (7.1.1)
(7.1.7).
Pour une rcapitulation des modes opratoires de
pr-enrichissement et d'enrichissement, se reporter au
tableau 1.
7.1.1 LAIT
Un pr-enrichissement n'est pas ncessaire, se reporter
(7.2) en utilisant 25 ml de l'chantillon pour essai et
225ml du milieu d'enrichissement, respectivement.
7.1.2 LAIT SEC
Prparer un flacon bouch contenant 225 ml d'eau
distille strile et 1 ml de la solution de vert brillant
(3.2.2.4). Peser aseptiquement 25 g de l'chantillon pour
essai et le verser la surface du liquide dans le flacon.
Boucher le flacon, mais ne pas l'agiter. Laisser
reposer la temprature ambiante durant 60 10 minutes
avant incubation. L'ajustement du pH n'est pas ncessaire.
Si aprs 3 heures d'incubation, le lait sec n'est pas
encore dissout, mlanger le contenu du flacon par
agitation.
7.1.3 LAIT SEC. BABEURRE SEC
Peser aseptiquement 25 g de l'chantillon pour essai
dans un flacon bouch contenant 225 ml d'eau distille
strile.
Agiter jusqu' dissolution et ajouter 1 ml de la
solution de vert brillant (3.2.2.4).
7.1.4 LACTOSE
Peser aseptiquement 25 g de l'chantillon pour essai
dans un flacon bouch contenant 225 ml du milieu de
pr-enrichissement (3.2.1) et agiter jusqu' dissolution.
7.1.5 CASEINE FROMAGE
Peser aseptiquement 25 g de l'chantillon pour essai
dans le rcipient strile d'un homognisateur grande
vitesse ou de type pristaltique (4.1.6) et ajouter 225 ml
du milieu de pr-enrichissement (3.2.1) 45 C.
Mlanger jusqu' ce que la prise d'essai soit
totalement disperse (1 3 minutes).
S'assurer que la temprature de dispersion ne dpasse
pas 45C.
7.1.6 BEURRE
Agiter l'chantillon pour essai fondu, et l'aide d'une
pipette, porter environ 45 C, en introduire 25 ml dans
un flacon contenant 225 ml du milieu de
pr-enrichissernent (3.2.1). Mlanger.
35
8 Joumada El Oula 1426
15 juin 2005
7.1.7 PRODUITS LAITIERS CONGELES
(y compris les glaces de consommation).
Introduire, l'aide d'une pipette, 25 ml de l'chantillon
pour essai fondu, dans un flacon contenant 225 ml du
milieu de pr-enrichissement (3.2.1). Mlanger.
7.1.8. LAITS FERMENTES, YAOURTS, CREMES-
DESSERT
Peser aseptiquement 25 g de l'chantillon pour essai
dans un flacon bouch contenant des billes de verre et
225 ml du milieu de pr-enrichissement (3.2.1) et agiter
pour disperser.
Sauf spcifications contraires, contrler le pH de la
suspension et l'ajuster , si ncessaire, 7,0.
7.1.9 INCUBATION
Incuber les flacons prpars conformment (7.1.2)
jusqu' (7.1.8), 37 C durant 16 h. 20 heures.
7.2 ENRICHISSEMENT
7.2.1 Transfrer, l'aide d'une pipette, 10 ml du milieu
de pr-enrichissement incub (7.1) dans un flacon
contenant 100 ml du milieu d'enrichissement slectif au
ttrathionate (3.2.2).
Dans le cas du lait, transfrer aseptiquement 25 ml de
l'chantillon pour essai dans 225 ml du milieu au
ttrathionate (3.2.2).
7.2.2 Incuber le milieu au ttrathionate inocul durant
18 h. 24 heures 43 C 0,5.
7.3 ENSEMENCEMENT ET IDENTIFICATION
7.3.1 Ensemencer avec une anse, partir de la culture
du milieu d'enrichissement, la surface d'une bote de
glose au vert brillant et au rouge de phnol (3.2.3) et
d'une bote de glose au sulfite de bismuth (3.2.4), de
faon permettre le dveloppement de colonies bien
isoles.
Remettre le milieu d'enrichissement en incubation
(voir 7.3.3).
7.3.2 Incuber les botes (retournes) 37 1C durant
20 h. 24 heures.
7.3.3 Aprs incubation des flacons durant encore 18 h.
24 heures, rpter les oprations d'ensemencement et
d'incubation dcrites en (7.3.1) et (7.3.2).
7.3.4 Examiner les botes (7.3.2) et (7.3.3) aprs
incubation afin de rechercher la prsence de colonies
typiques de salmonella. Si le dveloppement est faible, et
s'il n'y a pas de colonies typiques de salmonella, incuber
nouveau les botes 37 1C durant 18 h. 24 heures et
rexaminer les botes pour rechercher la prsence de
colonies typiques de salmonella.
7.3.5 Les colonies typiques de salmonella peuvent tre
caractrises comme suit :
sur glose au vert brillant / rouge de phnol (3.2.3),
les colonies typiques de salmonella sont roses bordes de
rouge.
sur glose au sulfite de bismuth (3.2.4), les colonies
typiques de salmonella sont brunes ou noires avec un clat
mtallique. Certaines souches donnent des colonies vertes.
 8 Joumada El Oula 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
15 juin 2005 15

Tableau 1 Rcapitulation des modes opratoires de pr-enrichissement et denrichissement

Taille de Milieu Mthode Milieu

Produit de prparation d'enrichissement
l'chantillon de pr-enrichissement*

Lait 50 ml Nant Mlanger 225ml de ttrathionate

(2x25ml)
Lait sec 25 g Eau distille plus solution de vert Imprgner pendant 60 100ml de ttrathionate
brillant 10 mn ne pas mlanger * *
Lacto-srum sec 25 g Eau distille plus solution de vert Mlanger 100ml de ttrathionate
Babeurre sec brillant
Lactose 25 g 225 ml deau peptone tamponne Mlanger 100ml de ttrathionate
Casine, Fromage 25 g 225 ml deau peptone tamponne Mlanger 45C max. 100ml de ttrathionate
Beurre 25 g 225 ml deau peptone tamponne Mlanger 100ml de ttrathionate
Produits 25 ml 225 ml deau peptone tamponne Mlanger 100ml de ttrathionate
laitiers
congels
Laits ferments 25 g 225 ml deau peptone tamponne Mlanger 100ml de ttrathionate
Yaourts, Crmes
dessert

(*) Lorsque le milieu de pr-enrichissement est utilis, Pente

aprs incubation de 20 h 37 C, repiquer 10 ml de
lchantillon incub, mlanger au milieu de pr-
enrichissement dans le milieu denrichissement.
(**) Si aprs 3 h d'incubation, le lait sec n'est pas encore
dissous, mlanger le contenu des flacons par agitation.
7.4 CONFIRMATION
7.4.1 CHOIX DES COLONIES POUR LES
CONFIRMATIONS
A partir de chaque bote de chacun des milieux slectifs
(7.3.5), prlever 5 colonies typiques ou suspectes ou, s'il y
a moins de 5 colonies typiques ou suspectes, les prlever
toutes pour confirmation.
7.4.2 INCUBATION
Ensemencer les colonies slectionnes sur la surface des
botes de glose nutritive (3.2.5) de faon permettre le
dveloppement de colonies bien isoles et incuber les
botes 37 1 C durant 18 h. 24 heures. du liquide.
Aprs incubation, retenir les colonies pures bien isoles
pour les confirmations biochimiques et srologiques.
7.4.3 CONFIRMATION BIOCHIMIQUE
A l'aide d'un fil ensemencement, ensemencer les
milieux suivants avec les colonies pures.
7.4.3.1 GELOSE TSI (3.2.6)
Ensemencer la pente de la glose par des stries et le
culot par piqre.
Incuber durant 24 h 37 1C.
Interprter les modifications du milieu de la faon
suivante :
Culot
Jaune ....................... : glucose positif
(fermentation du glucose)
Rouge ou inchang .. : glucose ngatif
(pas de fermentation du glucose)
Noir ......................... : formation de sulfure d'hydrogne
Bulles ou fissures .... : formation de gaz partir du
glucose
Jaune ..... : lactose et/ou saccharose
positifs (fermentation du
lactose et/ou du saccharose)
Rouge ou inchang. : lactose et saccharose ngatifs
(pas de fermentation du lactose
ni du saccharose)
7.4.3.2 GELOSE POUR LA RECHERCHE
A 1'UREASE (3.2.7)
Ensemencer par des stries la pente de la glose.
Incuber durant 24 h 37 C 1.
La prsence d'urase produit un dgagement
d'ammoniac faisant virer le rouge de phnol au rose puis
au rouge fonc lorsque la raction est positive.
7.4.3.3 MILIEU DE DECARBOXYLATION A LA
LYSINE (3.2.8)
Ensemencer le milieu juste au-dessous de la surface
Incuber durant 24 h 37 1C.
Une couleur violette, aprs incubation indique une
raction positive.
Une couleur jaune indique une raction ngative.
7.4.3.4 REACTIF POUR LA RECHERCHE DE LA
GALACTOSIDASE (3.3.2)
Mettre en suspension une anse de la colonie suspecte
dans un tube contenant 0,25 ml de la solution saline
(3.3.1).
Puis ajouter une goutte de tolune et agiter le tube.
Mettre le tube au bain marie 37 1C durant
plusieurs minutes.
Puis ajouter 0,25 ml du ractif pour la recherche de
la b-galactosidase et mlanger.
Replacer le tube dans le bain marie 37 1C
durant 24 heures.
Une couleur jaune indique une raction positive.
La raction est souvent visible au bout de 20 minutes.

36
16 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42 8 Joumada El Oula 1426
15 juin 2005

7.4.3.5 MILIEU POUR LA REACTION DE INTERPRETATION DES ESSAIS BIOCHIMIQUES

VOGES - PROSKAUER ( V.P) (3.3.3) : Interprter les rsultats selon le tableau 2.
Ensemencer deux tubes par suspension d'une anse de
la colonie suspecte dans 0,2 ml du milieu VP (3.3.3.1) TABLEAU 2
dans chaque tube. INTERPRETATION DES RESULTATS
Incuber un tube la temprature ambiante et lautre (Voir tableau 2).
37 C durant 24 heures.
(1) Les salmonella du sous-genre III (Arizona) donnent
Aprs incubation, ajouter chaque tube 2 gouttes de la une raction positive ou ngative au lactose mais toujours
solution de cratine (3.3.3.2), 3 gouttes de la solution une raction positive la galactosidase.
thanolique naphtol-1 (3.3.3.3), puis 2 gouttes de la
solution dhydroxyde de potassium (3.3.3.4); agiter les (2) Les salmonella du sous-genre II donnent une
deux tubes aprs avoir ajout chaque ractif. raction ngative au lactose, mais peuvent donner une
raction positive la galactosidase.
Un virage du rose au rouge vif dans un dlai de 15
minutes indique une raction positive. 7.4.4 SYSTEMES DE DIAGNOSTIC RAPIDE
7.4.3.6 MILIEU POUR LA REACTION DE Les systmes de diagnostic rapide (3.1) peuvent tre
L'INDOLE (3.3.4) : utiliss la place des oprations dcrites en (7.4.3) pour la
Ensemencer avec une partie de la colonie un tube confirmation biochimique des colonies typiques ou
contenant 5 ml du milieu tryptone-tryptophane (3.3.4.1). suspectes.
Incuber durant 24 h. 37 1 C. Dans ce cas, les instructions dutilisation doivent tre
scrupuleusement suivies.
Aprs incubation, ajouter 2 3 gouttes du ractif
Kowacs (3.3.4.2). 7.4.5 CONFIRMATION SEROLOGIQUE
La formation d'un anneau rouge indique une raction La dtection de la prsence des antignes O, Vi et H des
positive. salmonella est effectue par une agglutination sur lame
avec des srums appropris, sur des colonies pures (7.4.1)
Un anneau jaune - brun indique une raction ngative. aprs l'limination des souches auto-agglutinables.
7.4.5.1 ELIMINATION DES SOUCHES AUTO -
AGGLUTINABLES
TABLEAU 2 Dposer sur une lame de verre parfaitement propre
INTERPRETATION DES RESULTATS une goutte de la solution saline (3.3.1).
Disperser dans cette goutte, une partie de la colonie
Pourcentage (7.4.2) essayer afin d'obtenir une suspension homogne
Essais Raction de souches et trouble.
de positive de salmonella
confirmation ou ngative prsentant Faire osciller la lame durant 30 secondes 60
la raction secondes.
Observer les rsultats sur fond noir, de prfrence
Glucose TSI + 100 avec l'aide d'une loupe.
(Formation dacide) (7.4.3.1) Les souches sont considres comme
Glucose TSI (Formation de auto-agglutinables si les bactries ont flocul en amas
+ 91,9 plus ou moins distincts. La confirmation srologique de
gaz) (7.4.3.1) ces souches auto-agglutinables par les modes opratoires
Lactose TSI (7.4.3.1) - (1) 99,2 spcifis en (7.4.5.2), (7.4.5.3) et (7.4.5.4) est impossible.
Saccharose TSI (7.4.3.1) - 99,5 7.4.5.2 MISE EN EVIDENCE DES ANTIGENES O
Sulfure d'hydrogne TSI + 91,6 Utiliser des souches pures (7.4.2) non
(7.4.3.2.) auto-agglutinables (7.4.5.1).
Dcomposition de l'ure Oprer comme en (7.4.5.1), mais utiliser une goutte
- 100 d'anti-srum O (3.4) la place de la solution saline.
(7.4.3.2)
Dcarboxylation la lysine Utiliser les srums mono ou polyvalents l'un aprs
+ 94,6 l'autre.
(7.4.3.3)
7.4.5.3 MISE EN EVIDENCE DES ANTIGENES Vi
Raction de la - (2) 98,5 Oprer comme en (7.4.5.2), mais utiliser une goutte
galactosidase (7.4.3.4) d'anti-srum Vi (3.4) la place de la solution saline.
7.4.5.4 MISE EN EVIDENCE DES ANTIGENES H
Raction de Voges-Proskauer - 100 Ensemencer la glose nutritive semi-solide (3.3.5)
(7.4.3.5) avec une souche pure non auto-agglutinable (7.4.5.1).
Raction de l'indole - 98,9 Incuber le milieu durant 18 h. 24 heures
(7.4.3.6) 37 1C.

37
 8 Joumada El Oula 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
15 juin 2005 17

Utiliser cette culture pour l'examen des antignes H en
oprant comme en 7.4.5.2, mais en utilisant une goutte de
lanti-srum H (3.4) la place de la solution saline.
7.4.5.5 INTERPRETATION DES REACTIONS
SEROLOGIQUES
Sil y a agglutination, les ractions sont considres
comme positives.
7.4.6 INTERPRETATION DES REACTIONS
BIOCHIMIQUES ET SEROLOGIQUES
7.4.6.1. Les souches sont considres comme tant des
salmonella si elles prsentent des ractions biochimiques
typiques (7.4.3) et donnent des ractions srologiques
positives suivant (7.4.5).
7.4.6.3 Les souches ne sont pas considres comme
tant des salmonella si elles ne prsentent pas de ractions
biochimiques typiques (7.4.3) et ne donnent pas de
ractions srologiques positives suivants (7.4.5).
7.4.7 CONFIRMATION DEFINITIVE
Pour les souches considres comme tant des
salmonella (7.4.6.1) ou pouvant ltre (7.4.6.2), une
identification doit tre effectue en vue dune
dtermination dfinitive du srotype .
8. CULTURES DE CONTROLE
Pour vrifier la capacit des milieux d'enrichissement et
d'identification de supporter le dveloppement de
salmonella, une souche de rfrence isole nouvellement
doit tre utilise pour contrler les milieux
d'enrichissement (7.2).

7.4.6.2 Les souches qui prsentent des ractions Les oprations de contrle doivent alors suivre celles
des cultures du matriau d'essai pour montrer qu'on
biochimiques typiques (7.4.3) mais qui ne donnent pas de retrouve la culture contrle positive.
ractions srologiques positives suivant (7.4.5), les
souches qui ne prsentent pas de ractions biochimiques 9. EXPRESSION DES RESULTATS
typiques (7.4.3), mais donnent des ractions srologiques
Selon les rsultats de l'interprtation, indiquer la
positives suivant (7.4.5), et les souches auto-agglutinables
prsence ou l'absence de salmonella dans la prise d'essai,
qui prsentent des ractions biochimiques typiques (7.4.3) en prcisant la masse, en grammes, ou le volume, en
peuvent tre des salmonella. millilitres, de l'chantillon analys.

Schma du mode opratoire
Prise d'essai : 25 g ou ml
botes de Ptri
Milieu de pr-enrichissement : eau peptone
tamponne ou eau distille plus solution
de vert brillant, 225 ml
Incubation 37 C durant 16h 18h

Enrichissement en milieu
liquide slectif

10 ml de culture ou 25 ml chantillon pour essai, dans le cas du lait

Milieu au ttrathionate, 2 priodes de 18h 24 h

Incubation 37C

Isolement sur milieux slectifs

1er milieu en botes de Ptri 2me milieu
(glose ou rouge de phnol (glose au sulfite
et au vert brillant) de bismuth)
Incubation 37 C durant
20h 24 h (40 h 48 h, si ncessaire)

Cinq colonies caractristiques

(pour chaque bote)

Ensemencement sur glose nutritive

Confirmation biochimique Incubation 37 C durant 18 h 24 h Confirmation srologique

Interprtation des rsultats

38
18 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
Arrt du 13 Dhou El Hidja 1425 correspondant au 23
janvier 2005 rendant obligatoire une mthode
danalyse microbiologique du beurre.
Le ministre du commerce ;
Vu le dcret prsidentiel n 04-138 du 6 Rabie El Aouel
1425 correspondant au 26 avril 2004 portant nomination
des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
la rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les
attributions du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 18 aot 1993 relatif aux
spcifications et la prsentation de certains laits de
consommation ;
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23
juillet 1994, modifi et complt, relatif aux
spcifications microbiologiques de certaines denres
alimentaires ;
Vu larrt du 21 Chabane 1419 correspondant au 10
dcembre 1998 relatif aux spcifications techniques des
beurres et modalits de leur mise la consommation ;
Arrte :
Article. 1er En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt susvis, le prsent arrt a pour
objet de rendre obligatoire une mthode danalyse
microbiologique du beurre.
Art. 2. Pour lanalyse microbiologique du beurre, les
laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent
employer la mthode danalyse microbiologique dcrite
en annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal officiel
de la Rpublique algrienne dmocratique et populaire.
Fait Alger, le 13 Dhou El Hidja 1425 correspondant
au 23 janvier 2005.
Noureddine BOUKROUH.
caoutchouc reli un ballon deux tubulures
ANNEXE
Mthode danalyse microbiologique du beurre
1- Echantillonnage
Le contrle doit porter sur 5 premballages issus d'un
lot de mme fabrication.
Selon la masse conditionne dans un premballage, le
prlvement sera constitu de la manire suivante :
- Poids unitaire infrieur 1 kg : 5 premballages
intacts de 125 g 250 g.
8 Joumada El Oula 1426
15 juin 2005
- Poids unitaire suprieur 1 kg : partir de 5
premballages, prlever chacun 5 morceaux de 200 g
environ. Le prlvement sera ralis au moyen d'une
sonde beurre. Ou prlever d'une manire aseptique par
premballage, l morceau de 300 g 400 g de produit de
forme pyramidale.
Ce nombre de premballages examiner concerne les
beurres et les corps gras base de matire grasse
butyrique.
Pour le beurre concentr, le contrle sera effectu sur
un chantillon reprsentatif de l'unit de fabrication ,le
prlvement sera pratiqu selon les modes dcrits.
Les prlvements seront transports et conservs
jusqu'au moment de l'analyse une temprature positive
n'excdant pas + 6 C.
2- Prparation de l'chantillon pour essai
2.1 Unit premballe :
Dvelopper soigneusement le papier d'emballage et
d'une manire aseptique sans liminer la couche
superficielle, transfrer 50 g de produit dans un godet de
centrifugation capsule visse strile.
2.2 Prlvement opr par sonde beurre
Transfrer d'une manire aseptique 50 g de produit dans
le godet de centrifugation.
2.3 Prlvement sous forme d'une masse pyramidale
A l'aide d'un couteau nettoy l'alcool et flamb,
enlever la couche superficielle sur 1cm environ
d'paisseur et introduire aseptiquement 50 g de produit
dans le godet de centrifugation.
Conservation au rfrigrateur entre 0 C et + 5 C,
jusqu'au moment de la prparation de la phase aqueuse.
3 - Prparation de la phase aqueuse, dilution
primaire
3.1 Beurre cru et beurre pasteuris :
Dans le godet de centrifugation contenant 50 g de
beurre, transfrer 42 ml de solution 2% de phosphate
dipotassique , pH 7,5 0,1 strile (4).
Faire fondre dans un bain-marie n'excdant pas 45 C.
Ds la fusion du beurre, centrifuger 1000-2000 t/min.
pendant 1 2 minutes. Disposer le godet sur un portoir.
Eliminer la matire grasse par aspiration, pour cela
utiliser une pipette courte ou un embout en matire
synthtique strile fixe l'extrmit d'un tube de
communiquant une fiole vide (pige), elle-mme relie
une trompe eau.
Changer de pipette ou d'embout entre chaque
chantillon. Effectuer l'analyse bactriologique sans
tarder.
3.2 Corps gras base de matire grasse butyrique :
Le mode de prparation de la dilution primaire est
semblable celui dcrit en (3.1); toutefois, la quantit de
solution 2% de phosphate dipotassique pH 7,5 0,l
sera calcule selon la teneur en lipides du produit, par
exemple :
39
 8 Joumada El Oula 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
15 juin 2005
Produit dont la teneur en lipides est comprise entre
38 g % et 41 g% utiliser 20 ml de diluant.
Produit dont la teneur en lipides est suprieure ou
infrieure 38 g% et 41 g% : pour 50 g de produit,
utiliser un volume de diluant gal la moiti de la
quantit des lipides prsents dans 100 g de produit.
3.3 Beurre concentr
Le mode de prparation de la dilution primaire est
semblable celui dcrit en (3.1). mais utiliser comme
diluant la solution de tryptone-sel (se reporter 4) raison
de 50 ml.
En se basant sur la composition type de chaque produit,
admettre de manire conventionnelle que 1 ml de la phase
aqueuse, dilution primaire, reprsente 1 g. de produit.
4 - Diluants et prparation des dilutions dcimales
4.1 Diluants
Deux diluants sont utiliss, pour des raisons pratiques,
distribuer les diluants, solution 2% de phosphate
dipotassique pH 7,5 0,1 et solution de tryptone sel (ou
solution de Ringer) de telle sorte qu'aprs strilisation, le
volume soit de 50 ml.
4.2 Dilutions dcimales
Au moment de lemploi, distribuer la solution de
tryptone-sel (ou solution de Ringer) raison de 9 ml dans
des tubes de 20 mm x 200 mm striles.
Mlanger convenablement la dilution primaire par
aspiration et refoulement une dizaine de fois l'aide
d'une pipette de 1 ml strile, puis introduire 1 ml dans un
tube contenant 9 ml de solution de tryptone-sel strile afin
d'obtenir une dilution au 1/10.
Mlanger soigneusement pendant 5 10 secondes au
moyen d'un agitateur mouvement de rotation excentr.
De manire identique, prparer une dilution au 1/100 et
une dilution au 1/1000.
5 - Expression des rsultats
Afin que les rsultats de l'analyse bactriologique
puissent permettre une valuation significative de la
qualit hyginique des fabrications de beurres crus,
beurres pasteuriss, corps gras base de matire grasse
butyrique et beurres concentrs, il y a lieu de se
conformer au protocole dcrit afin de restreindre un
minimum les divergences d'ordre technique.
Dure de l'examen bactriologique : le temps qui
s'coule entre la fin de la prparation de la dilution
primaire et celui du mlange des dilutions avec le milieu
de culture ne doit pas excder 15 minutes.
Temprature d'incubation et refroidissement des
milieux : tous les appareils utiliss, tuves, bains-marie,
doivent tre vrifis priodiquement (au moins deux fois
par mois).
Lecture des rsultats : selon les indications donnes.
Cependant, lorsque les rsultats ne peuvent tre exprims
correctement, recommencer l'analyse en examinant une
gamme plus tendue de dilutions. Si l'examen se situe
au-del des dlais de consommation (limite ou optimale),
le mentionner sur le bulletin d'analyse.
Qualit des milieux de culture : d'une manire
gnrale, il est recommand d'utiliser des milieux
complets dshydrats.
40
19
5.1 Micro-organismes arobies 30 C dits de
contamination
Ce dnombrement est appliqu aux beurres pasteuriss
et concerne les micro-organismes provenant de
contaminations diverses qui peuvent se produire au cours
de la fabrication du beurre. La flore lactique qui a pu tre
ensemence dans la crme selon la technologie employe,
doit tre exclue de ce dnombrement.
5.1.1 Milieu utilis
Composition :
Gelysate.................................7,5 g
Trypticase ou Tryptone ........7,5 g
Chlorure de sodium......................5 g
Glose (exempte d'hydrates de carbone).4 g
Eau distille..........................1000 ml
Ajuster le pH de sorte, qu'aprs strilisation, il soit de
7,6 0,l 25 C.
Striliser l'autoclave 121C pendant 15 minutes.
Conserver au rfrigrateur pendant 1 mois au
maximum.
5.1.2 Ensemencement :
Dposer en double dans des botes de Ptri 1ml de la
dilution 10-1, 1 ml de la dilution 10 -2 et ventuellement 1
ml de la dilution 10 -3. Couler 12 15 ml de milieu puis
mlanger soigneusement l'inoculum avec le milieu.
Laisser refroidir et aprs solidification mettre incuber
30 C pendant 48 h puis 20 C 1 C pendant 48 h.
5.1.3 Lecture des botes :
Retenir pour comptage les botes contenant entre 10 et
300 colonies. Dnombrer toutes les colonies en vitant
d'inclure dans le comptage les colonies en pointe
d'pingle qui reprsentent une flore lactique.
Nanmoins, certaines souches d'espces lactiques
peuvent se dvelopper convenablement et l'attention doit
tre retenue par la rgularit de l'aspect morphologique,
colonies lenticulaires ou rondes ; il est alors conseill
d'effectuer l'preuve de la catalase, celle-ci doit tre
ngative pour les espces lactiques.
5 1.4 Expression des rsultats :
Calculer le nombre de micro-organismes de
contamination par millilitre de dilution primaire,
c'est--dire par gramme de beurre selon le mode de calcul
suivant :
Cas o seuls les comptages d'une dilution sont
retenus :
effectuer la moyenne arithmtique.
Cas o les comptages de deux dilutions successives
sont retenus : appliquer la formule suivante :
c
(n1 + 0,1n2) d
20 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
O c : somme totale des colonies comptes.
n1 : nombre de botes comptes dans la premire
dilution.
n2 : nombre de botes comptes dans la seconde
dilution.
d : facteur de dilution partir duquel les premiers
comptages ont t obtenus.
Tolrance analytique : 3 m soit 3x10 3
5.2 Microorganismes arobies 30 C :
Ce dnombrement est appliqu au beurre concentr.
5.2.1 Milieu : utiliser le milieu dit Plate Count Agar
additionn de lait.
5.2.2 Ensemencement : dposer en double dans des
botes de Ptri 1 ml de la phase aqueuse dilution primaire
et ventuellement 1 ml de la dilution 10 -1 Couler 12 15
ml de milieu, puis mlanger soigneusement l'inoculum
avec le milieu. Laisser refroidir et aprs solidification,
mettre incuber 30 C pendant 72 h.
5.2.3 Lecture des botes :
Retenir pour comptage les botes contenant entre 10 et
300 colonies. Dnombrer toutes les colonies en utilisant si
ncessaire une loupe d'un grossissement de 1,5 au
maximum.
5.2.4 Expression des rsultats :
Calculer le nombre de micro-organismes arobies par
millilitre de dilution primaire, cest dire par gramme de
beurre concentr (5.1.4).
Tolrance analytique : 3 m soit 1,510-3
5.3 Bactries coliformes 30 C
5.3.1 Milieu : glose au dsoxycholate
Composition :
Protose peptone...........................10 g
Lactose..............................................10 g
Dsoxycholate de sodium.........0,5 g
Chlorure de sodium.........................5 g
Citrate de sodium........................2 g
Agar...................................................15 g
Rouge - neutre................................0,03 g
Eau distille.............................1000 ml
Prparer le milieu juste avant l'emploi : ne pas striliser.
5.3.2 Ensemencement
Dposer en double dans des botes de Ptri, 1 ml de la
phase aqueuse, dilution primaire et ventuellement 1 ml
de la dilution 10 -1. Couler le milieu raison de 15 ml
environ. Mlanger soigneusement l'inoculum avec le
milieu. Laisser refroidir puis couler une seconde couche
avec 4 ml 5 ml de milieu non ensemenc. Aprs
solidification, mettre en incubation 30 C pendant 22 h
24 heures.
5.3.3 Lecture des botes
Retenir pour comptage les botes contenant 150
colonies maximum et dnombrer les colonies rouges
typiques d'au moins 0,5 mm de diamtre ; lorsque le
diamtre est difficile estimer, repiquer la colonie dans un
tube de bouillon lactos bili au vert brillant et porter
l'tuve 30C pendant 24 h. 48 heures afin d'observer la
fermentation du lactose.
8 Joumada El Oula 1426
15 juin 2005
5.3.4 Expression des rsultats
Calculer le nombre de coliformes par millilitre de
dilution primaire, C'est--dire par gramme de produit
selon le mode de calcul dcrit en (5.1.4).
Tolrance analytique 3 m pour les beurres pasteuriss et
les corps gras base de matire grasse butyrique soit 30 :
absence de tolrance pour le beurre concentr, plan deux
classes.
5.4 Staphylococcus aureus :
5.4.1 Milieu glose Baird Parker, (E.T.G.P.A).
Couler le milieu complet raison de 15 ml 20 ml dans
des botes de Ptri de 90 mm ou 100 mm de diamtre
respectivement.
Aprs solidification, faire scher les botes retournes,
couvercle entrouvert dans une tuve entre 45 C et 55 C
pendant 30 min. (ou temprature ambiante pendant 2
heures). Pour les botes de Ptri de 140 mm, couler 28 ml
glose Baird Parker.
Si l'on suspecte la prsence de Proteus, il est conseill
d'ajouter une solution de sulfamzathine
Sulfamzathine...............................................0,2 g
Solution d'hydroxyde de sodium (0,1 mol)............10 ml
Eau qsp......................................................100 ml
Avant rpartition et strilisation de la glose Baird
Parker, ajouter par litre de milieu 27,5 ml de la solution de
sulfamzathine.
5.4.2 Ensemencement
Distribuer 1 ml de la phase aqueuse la surface de la
glose Baird Parker d'une bote de Ptri de 140 mm, ou de
3 botes de Ptri de 90 mm 100 mm sous forme
de 3 fractions sensiblement gales, puis taler sans tarder
l'aide d'un taleur en verre strile. Laisser imprgner
pendant 15 minutes temprature ambiante. Mettre
incuber 37 C pendant 24 h. et 48 heures.
5.4.3 Lecture des botes et choix des colonies
Aprs 24 heures et 48 heures d'incubation, marquer sur
les fonds des botes les colonies caractristiques et/ou non
caractristiques :
Colonies caractristiques : colonies noires, brillantes
convexes, entoures d'une zone transparente qui peut tre
translucide. Aprs 24 heures, peut apparatre dans cette
zone transparente un anneau opalescent immdiatement au
contact des colonies.
Colonies non caractristiques : colonies noires,
brillantes, convexes ou gris noirtre ayant parfois un
aspect mat et une texture sche, dpourvues de zone
transparente (except certaines colonies gris noirtre).
Retenir pour le dnombrement les botes qui renferment
150 colonies au maximum, caractristiques et/ou non
caractristiques. Dnombrer les colonies suivant leur
aspect.
Prlever en vue de l'preuve de la coagulase
(ventuellement de la thermonuclase) un nombre de
colonies caractristiques et/ou non caractristiques gal
la racine carre du nombre total des colonies prsentes
dans une bote ou trois botes de Ptri, en tenant compte
de leur nombre respectif.
41
 8 Joumada El Oula 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
15 juin 2005
Lorsque le volume est rparti dans une bote de Ptri de
140 mm, 5 colonies au minimum doivent tre examines
et si leur nombre est infrieur 5, les prlever toutes ;
dans le cas o le volume est rparti sous 3 fractions, 10
colonies au minimum seront examines et si leur nombre
est infrieur, toutes les colonies seront prleves.
5.4.4 Expression des rsultats
Calculer le nombre de staphylococcus aureus par
millilitre de dilution primaire, c'est--dire par gramme de
produit en interprtant les rsultats obtenus de la manire
suivante :
les rsultats douteux l'preuve de la coagulase seront
considrs comme positifs si l'preuve de la
thermonuclase est positive.
Si au moins 80 % des colonies examines sont
coagulase positive, considrer que le nombre prsum,
donn par le comptage reprsente le nombre de
staphylococcus aureus sinon exprimer le rsultat global en
tenant compte des proportions de colonies caractristiques
et de colonies non caractristiques, qui sont coagulase ou
thermonuclase positive.
Lorsque plusieurs dilutions ont t examines, appliquer
le mode de calcul dcrit en (5.1.4).
Tolrance analytique :
3 m pour le beurre cru, les beurres pasteuriss et les
corps gras base de matire grasse butyrique.
Absence de tolrance pour le beurre concentr, plan
2 classes.
5.5 Recherche des salmonella
5.5.1 Prenrichissement :
Bouillon lactos au pourpre de bromocrsol :
Rpartir le bouillon raison de 1125 ml dans des
rcipients de 2 litres large ouverture.
Striliser l'autoclave 121C pendant 15 minutes
Enrichissement :
Emploi dun milieu rparti raison de 100 ml dans des
rcipients de capacit approprie ; le prparer juste avant
l'emploi.
- Bouillon au ttrathionate de sodium (Muller et
Kauffmann) additionn ventuellement de novobiocine,
concentration finale 40 g/ml de milieu; ne pas striliser.
Isolement :
Les gloses slectives suivantes sont recommandes :
Glose au vert brillant et au rouge de phnol (Edel et
Kampelmacher)
Glose au sulfite de bismuth (Wilson Blair)
Glose xylose lysine dcarboxylase(XLD) : utiliser
les milieux qui autorisent l'bullition.
Glose Hektoen.
42
21
Afin d'viter des effets dfavorables au dveloppement
des salmonella par certaines gloses slectives, se
conformer aux recommandations suivantes :
les gloses slectives doivent tre utilises aprs 24
heures, soit au plus tard dans la journe qui suit leur
prparation.
la strilisation des milieux doit tre vite.
les botes prpares seront sches de prfrence
temprature ambiante, par exemple 2 h 25 C; les
conserver l'obscurit la mme temprature ou au
rfrigrateur.
5.5.2 Pr-enrichissement (Jour A)
Afin de rduire la charge de travail, prlever depuis
chacun des cinq godets de centrifugation contenant la
phase aqueuse 25 ml de celle-ci et les rassembler dans un
rcipient de 2 litres contenant 1125 ml de bouillon lactos
au pourpre de bromocrsol.
Mlanger soigneusement. Abandonner 1 heure
temprature ambiante.
Incuber 37 C pendant 22 h 2 heures.
Lecture aprs 18 h. 20 heures ; si le dveloppement
est insuffisant, incuber nouveau pendant 20 h. 24
heures.
5.5.3 Techniques d'enrichissement et d'isolement
Oprer selon le schma suivant :
Jour A + 24 h
Enrichissement
par ensemencement de 10 ml de la culture pr- enrichie
dans
- 100ml de milieu au
ttrationate de sodium
incub au bain marie 43C
pendant 24 h et 48 h.
Jour A + 48 h Isolement
d'une anse boucle sur 2 gloses slectives :
1 - glose au vert brillant et rouge de phnol ou glose
au bismuth de sulfite
2 - glose XLD ou glose Hektoen
Jour A + 72 h
Rpter les isolements tels que dcrits Jour A + 48 h.
Incuber les gloses slectives 37 C.
Effectuer une premire lecture aprs 18 h. 20 heures ;
si le dveloppement est insuffisant, incuber nouveau
pendant 20 h. 24 heures.
22 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
5.5.4 Choix des colonies confirmation
Se rfrer aux indications donnes dans la mthode
relative la recherche des salmonella.
5.5.5 Dtermination srologique
Les souches rpondant aux caractristiques
biochimiques des Salmonella, ou suspectes, seront
soumises la confirmation srologique.
5.5.6 Expression des rsultats
Lorsque lchantillon compos est exempt de
salmonella, le produit est conforme au critre requis.
Si l'chantillon compos prsente des salmonella, il peut
tre conseill de rexaminer sparment les 5 units.
Pour les salmonella, le plan 2 classes est appliqu sans
tolrance analytique.
GLACEES
Arrt du 13 Dhou El Hidja 1425 correspondant au 23
janvier 2005 rendant obligatoire une mthode de
prlvement dchantillons et danalyse
bactriologiques des glaces et crmes glaces.
Le ministre du commerce ,
Vu le dcret prsidentiel n 04 -138 du 6 Rabie
El Aouel 1425 correspondant au 26 avril 2004 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
la rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les
attributions du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 29 Safar 1414
correspondant au 18 aot 1993 relatif aux spcifications et
la prsentation de certains laits de consommation ;
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt, relatif aux spcifications
microbiologiques de certaines denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1 er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de
prlvement dchantillons et danalyse bactriologiques
des glaces et crmes glaces.
Art. 2. Pour le prlvement et lanalyse
bactriologiques des glaces et des crmes glaces, les
laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent
employer la mthode danalyse microbiologique dcrite
en annexe.
8 Joumada El Oula 1426
15 juin 2005
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 13 Dhou El Hidja 1425 correspondant
au 23 janvier 2005.
Noureddine BOUKROUH.
ANNEXE
METHODE DE PRELEVEMENT ET DANALYSE
BACTERIOLOGIQUES DES GLACES
ET CREMES GLACEES
1. PRELEVEMENTS DES GLACES ET CREMES
A. Matriel utiliser
1. Bocaux de 350 ml large ouverture en verre
borosilicat genre pyrex bouchs avec couvercle vis
mtallique possdant un intermdiaire qui sera chang
chaque strilisation. Ces bocaux contiendront des billes
de verre genre pyrex. Ils seront prpars et striliss au
laboratoire.
2. Caisses glacires
3. Matriel de prlvement
Cuillres mtalliques striles long manche; tubes
mtalliques striles, genre sonde fromage mandrin
formant piston pntrant dans le tube.
4. Lampe butane (type lampe souder)
5. Neige carbonique ou mlange de glace pile
et de sel
Ce mlange de glace pile et de sel sera mis dans des
sachets en matire plastique, parfaitement clos.
B. Technique de prlvements
1. Quantit de produit prlever : 100 grammes
environ.
2. Techniques de prlvements
Les prlvements de glaces et crmes glaces doivent
tre effectus en prenant toutes les prcautions dasepsie,
notamment en ce qui concerne l'ouverture et la fermeture
des bocaux.
a) Glaces et crmes glaces conditionnes
Dans les emballages en papier
Dvelopper le papier et faire glisser la glace dans le
bocal sans toucher avec les mains. S'il s'agit de glace
sucette, couper le btonnet aseptiquement au ras de la
glace.
43
 8 Joumada El Oula 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
15 juin 2005
Dans les emballages en carton
Mettre la veille les bocaux prlvements dans la caisse
glacire, avec les sachets contenant de la glace
rafrachir. Au moment du prlvement sortir
aseptiquement la crme glace de l'emballage en carton et
la mettre directement dans les bocaux. Remplacer les
sachets par de la neige carbonique ou par d'autres sachets
contenant le mlange glace plus sel.
b) Glaces et crmes glaces servies par le vendeur
la cuillre
Utiliser les instruments du vendeur sans les flamber.
c) Glaces et crmes glaces vendues au demi-litre ou
au litre
Utiliser une cuillre mtallique flambe.
d) Glaces et crmes glaces vendues au moyen
d'appareils distributeurs
Prendre l'chantillon directement au bec de
l'appareil.
e) Glaces et crmes glaces surgeles
Utiliser le tube mtallique formant la sonde. Celui-ci
sera flamb trs lgrement au moment du prlvement
(ne pas dpasser 50 C). Avec le mandrin formant piston,
pousser la glace pour la mettre dans le bocal.
Pour l'ouverture et la fermeture des bocaux de
prlvements, les prcautions d'usage en matire de
bactriologie doivent tre prises notamment : ouverture du
bocal au dernier moment.
Flambage de l'orifice du bocal et de la partie infrieure
du couvercle juste avant l'introduction du prlvement et
au moment de la fermeture du bocal.
Il. ANALYSE BACTERIOLOGIQUE DES
GLACES ET CREMES GLACEES
l) Prparation des chantillons
a) Premier procd
Les bocaux sortis de la neige carbonique ou de la glace
sont mis l'tuve ou au bain-marie 37 C, au maximum
pendant 1 heure. Ce temps ne doit pas tre dpass, sinon
on aborderait le dbut de la phase logarithmique de
croissance. Dans la pratique, ce rchauffement 37C doit
tre surveill et arrt le plus rapidement possible.
Si la glace a t reue dans la neige carbonique, le
laboratoire doit se dbarrasser de cette neige carbonique
immdiatement, l'extrieur du laboratoire.
Faire les dilutions jusqu' 1/100.000 avec une solution
de tryptone - sel.
Mais partir de la dilution au 1/100, on fera une
dilution au 1/200 ainsi que la dilution au 1/1000.
b) Deuxime procd
Les produits sont placs dans un rfrigrateur + 4
C/ + 6 C jusqu'au moment de la dconglation.
Cette mthode parat plus favorable que le premier
procd pour les petits chantillons (100 200 g) car la
dconglation est rapide et ne favorise pas la
multiplication des psychrotrophes.
23
Aprs leur dconglation, les glaces sont
homognises par une agitation nergique dans le bocal
de prlvement pendant deux trois minutes, mme s'il
s'agit de glaces aux fruits et aux amandes.
Pour les crmes glaces ou glaces enrobes de
chocolat, liminer l'enrobage la pince ou au couteau
strilis et n'examiner que la glace.
Pour les glaces et crmes glaces qui foisonnent :
dtruire la mousse sous vide selon la technique
ci-dessous :
Description de l'appareil : Un flacon avec un bouchon
perc de 2 trous. Dans un des trous, une pipette Pasteur.
L'orifice extrieur de la pipette est obtur par un tampon
de coton. Dans l'autre trou, un tube de verre dont l'orifice
extrieur est obtur par un tampon de coton et reli au
vide.
Le tube o est plac le doigt sert diminuer ou
augmenter le vide pour viter le passage de la crme
glace dans le tube reli la trompe ou la pompe vide.
Manipulation : Boucher la pipette Pasteur avec le
doigt. Faire le vide. De temps en temps, laisser passer
l'air. Agiter le flacon en mme temps. On ne supprime
pas toute la mousse, mais c'est une amlioration.
2. Technique d'examen bactriologique
A. Prparation des dilutions
Faire les dilutions jusqu 1/100.000 avec une solution
tryptone sel.
Mais partir de la dilution 1/100 on fera une dilution au
1/200 ainsi que la dilution 1/1000.
Cette dilution au 1/200 servira dnombrer 200
coliformes par 1 ml.
Formule
Tryptone......................1 g
Chlorure de sodium.................8 g
Eau distille........................1000 ml
pH : 7 - 7,2
Rpartir en tubes ou en flacons. Autoclaver 20 minutes
120 C. Vrifier la strilit du milieu avant de
l'employer.
Chaque dilution est agite soit la main au moins 30
fois, ou mieux l'agitateur mcanique, pendant 2 minutes
au moins, avant de passer la dilution suivante. Chaque
dilution est effectue avec une pipette gradue strile
distincte.
B. Recherches effectuer
En tryptone extrait de levures agar pendant 72 h 2
heures.
Formule de la tryptone extrait de levures Agar
Tryptone..........................................6 g
Extrait de levure..........................3 g
Agar en poudre..................................15 g
Eau distille.................................1000 ml
pH : 7
Rpartir en tubes de 20 x 200 mm raison de 20 ml
par tube. Autoclaver 20 minutes 115 C.
44
24 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
Ensemencer:
1 ml de la dilution au 1/1.000
1 ml de la dilution au 1/10.000
1 ml de la dilution au 1/100.000
0,l ml de la dilution au 1/100.000
Pour faciliter le dnombrement et viter l'envahissement
du milieu par certaines colonies envahissantes utiliser la
technique suivante dite des deux couches : 1 ml du
produit ou des diverses dilutions et port en botes de
Ptri.
Le milieu qui a t pralablement fondu et ramen
45- 50C et vers dans la bote. Ne pas attendre plus de
cinq minutes pour couler le milieu. Mlanger. Laisser
solidifier sur une surface frache et parfaitement
horizontale.
Quand la prparation est solidifie verser en surface une
mince couche de glose blanche (2 mm d'paisseur
environ), pralablement fondue et ramener 45 C.
Laisser solidifier avant de mettre l'tuve.
Formule de la glose blanche
Glose ......................20 g Les deux tubes sont ports au bain-marie 44 C 0,5
Eau distille ...1000 ml pendant 48 heures. Pour conclure la prsence
pH : 7
Rpartir en tubes. Autoclaver 20 min. 120 C.
3. Dnombrement des bactries coliformes avec
idenification d'Eschrichia Coli
En bouillon lactos bili au vert brillant.
Formule du milieu.
Bactopeptone.................................10 g
Lactose......................................10 g
Eau distille...........................786 ml
Bile de buf frache ou solution 10% de bile
dshydrate.......200 ml Extrait de viande............................. 1 g
pH : 7,2
Ajouter alors 13,3 ml d'une solution aqueuse 1/1000
de vert brillant. Rpartir en tubes munis d'une cloche (10
ml par tube de l60 x l6 mm ) . Striliser 20 min.
120 C.
Ensemencer 2 fois.
1 ml de la dilution au 1/10
1 ml de la dilution au 1/100
1 ml de la dilution au 1/200
1 ml de la dilution au 1/1000
Les milieux ensemencs sont mis l'tuve 30 C
pendant 48 heures. Les tubes de milieu gazogne sont
considrs comme contenant des bactries coliformes.
Les Eschrichia Coli sont identifis par le test de
Mackenzie.
8 Joumada El Oula 1426
15 juin 2005
Test de Mackenzie
Pour chaque tube de bouillon lactos bili au vert
brillant qui contient des gaz 30 C. on utilise :
Un tube de bouillon lactose bili au vert brillant
(mme formule que ci-dessus).
Un tube deau peptonne simple dont voici la
mthode :
Peptone..........................................10 g
Chlorure de sodium.........................5 g
Eau distille.............................1000 ml
pH : 7,2
Autoclaver 121 C pendant 20 minutes.
Une anse boucle de chaque tube de bouillon lactos
bili au vert brillant, gazogne, aprs agitation soigneuse
et inocule dans un tube de bouillon lactose bili au vert
brillant.
Une autre anse boucle du mme tube de bouillon
lactose bili au vert brillant, gazogne, aprs agitation
soigneuse et inocule dans un tube d'eau peptone simple.
d'Eschrichia Coli, il faut la fois que le tube de bouillon
lactose bili au vert brillant port au bain-marie 44 C
soit gazogne, et que la recherche de l'indole soit positive
dans le tube d'eau peptone simple qui a t port 44 C.
La recherche de l'indole s'effectue l'aide de l'acide
nitrique nitreux en prsence d'alcool amylique. L'indole
se recherche au bout de 24 heures et 48 heures.
4. Recherche et dnombrement des staphylocoques
pathognes
Premire technique : Sur milieu de Chapman
mannit :
Formule du milieu
Bactopeptone...................................2 g
Protose peptone.............................9 g
Chlorure de sodium...................................................75 g
Mannitol................................................................10 g
Bacto agar.............................................................15 g
Rouge de phnol......................0,025 g
Eau distille.............................1000 ml
pH final : 7,4 - 7,5
Rpartir en tubes de 200 x 22 mm raison de 25 ml par
tube.
Autoclaver 20 min. 120 C. Au moment de l'emploi
couler le milieu en botes de Ptri. Laisser solidifier.
Faire scher l'tuve 37C.
45
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15 juin 2005
Ensemencer sur deux botes diffrentes :
0,l ml du produit non dilu
0,l ml de la dilution au 1/10
Etaler la surface du milieu d'une faon homogne.
Porter l'tuve 37 C. Examiner aprs 24 heures et 48
heures.
On retiendra les colonies blanches ou jaunes entoures
d'un halo jaune (mannitol +).
L'identification des colonies de staphylocoques
pathognes se fera par la mise en vidence de la coagulase
libre et ventuellement par la mise en vidence de la
phosphatase complte par la recherche de l'arobiose
anarobiose. En effet, on peut avoir :
Coagulase + Staphylocoque pathogne
Phosphatase + du germe, pour cela on met 20 gouttes d'eau sale dans un
Coagulase + Staphylocoque pathogne (6% des cas)
Phosphatase - mulsion dense.
Coagulase - Staphylocoque pathogne (4% des cas)
Phosphatase + ou Micrococcus.
Dans ce dernier cas, il faut complter par la recherche
de l'arobiose anarobiose, car certains micrococci
possdent une phosphatase. Mais les micrococci sont
arobies stricts. Les staphylocoques sont arobies
anarobies.
A. Mise en vidence de la coagulase libre
Prlever quelques colonies suspectes. Inoculer chacune
d'elles dans un tube de bouillon diffrent. Porter 24
heures l'tuve 37 C.
A partir des cultures en bouillon : Rechercher la
coagulase et faire un tube tmoin.
Surveiller toutes les heures. Au cas o la coagulase ne
serait positive qu'au bout de 24 heures, refaire un examen
sur d'autres colonies.
Si la coagulase est ngative : Faire la recherche de
l'arobiose anarobiose.
Rechercher la phosphatase.
Recherche de l'arobiose anarobiose :
Prlever de la culture en bouillon avec une pipette
Pasteur ferme. L'inoculer sur toute la .hauteur d'un tube
de milieu V.L. pralablement fondu, rgnrer, et ramener
48C - 50 C.
Mettre 24 heures l'tuve 37 C aprs
refroidissement.
Formule du milieu V.L Milieu l'extrait de viande
et de levure
Peptone trypsique.............................10 g
Chlorure de sodium...........................5 g
Extrait de viande................................4 g
Extrait de levure....................................5 g
Chlorydrate de cystine................0,30 g
Glucose..................................................2 g
Agar en poudre...................................6 g
Eau distille................................1000 ml
25
Porter l'bullition pour dissoudre.
Ajuster pH 7,2 - 7,4 avec de la lessive de soude au
1/10. Faire bouillir.
Filtrer. Rpartir en tubes de 8 ou 9 x 180 mm, sur une
hauteur de 8 cm. Striliser 115 C maximum, pendant
30 minutes.
B. Mise en vidence de la phosphatase
Faire un ensemencement en glose incline partir de
la culture en bouillon. Une anse de la culture en bouillon
est tale sur la surface de la glose. Porter l'tuve 37
C pendant 24 heures.
1. Avec la culture obtenue , on fait une forte mulsion
tube hmolyse. On porte la culture obtenue en glose
dans cette eau physiologique jusqu' obtention d'une
Dans un autre tube hmolyse contenant 0,25 ml de
solution de paranitro phnylphosphate disodique, ajouter
0,25 ml d'une solution d'actate de sodium. Mlanger le
contenu des 2 tubes et incuber 37C pendant 20 minutes.
Si on a une coloration jaune franc : prsence de
phosphatase.
Faire en mme temps un tmoin sans mulsion de
staphylocoque.
(solution de paranitrophnylphosphate disodique 4%
dans l'eau distille).
(solution d'actate de sodium 2,025 g dans 250 ml
d'eau distille).
Certains staphylocoques pathognes peuvent perdre leur
coagulase, mais si on a une phosphatage positive et un
germe arobie anarobie, conclure staphylocoque
pathogne.
2. Autre technique de mise en vidence de la
phosphatase
Premire technique : Mettre 0,50 ml d'eau distille
dans un tube hmolyse, pulvriser avec un agitateur de
verre un comprim de substrat l'a-naphtylphosphate
acide sodique.
Dans cette suspension faire une mulsion partir de la
culture obtenue sur glose.
Incuber 37 C pendant 30 minutes.
Introduire alors un comprim d'orthodiamine bis azote
pralablement pulvris.
En prsence de phosphatase on a une coloration rouge
grenat produite par l'a-naphtol libr. Quand la raction
est ngative la teinte jaune initiale persiste.
L'identification du caractre pathogne doit porter sur
un nombre suffisant de colonies : 5 colonies et plus, s'il y
a 50 colonies suspectes sur la bote; 10 colonies et plus,
s'il y a plus de 50 colonies suspectes sur la bote.
46
26 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
Deuxime technique : Pour la recherche et le
dnombrement du staphylocoque pathogne.
Utilisation du milieu de Baird-Parker la
sulfamzathine.
Formule du milieu
a) Milieu de base
Tryptone........................................................10 g
Extrait de viande de buf................................5 g
Extrait de levure..............................................1 g
Chlorure de lithium.........................................5 g
Agar...............................................................20 g
Solution de sulfarmzathine 0,2%.............25 ml
Eau distille.........................................1000 ml
Prparation de la solution de sulfamzathine
Dissoudre 0,5 g de sulfamzathine dans 25 ml de soude
N/10 et complter 250 ml avec de l'eau distille.
Cette solution peut s'ajouter dans le milieu avant ou
aprs l'autoclavage.
Le milieu de base doit tre autoclav 20 minutes
120C.
Le pH final de la base doit tre ajust 7,2.
Rpartir 20 ml par tube de 20 X 200 mm.
Au moment de l'emploi, faire fondre le milieu de base
au bain-marie bouillant, puis refroidir 45C- 48C.
Ajouter alors les solutions suivantes, filtres et chaudes
par 20 ml de base.
b) Glycine 20%....................................1,2 ml
c) Tellurite de potassium 1%...............0,2 ml
d) Pyruvate de sodium 20%...............1 ml
e) Emulsion de jaune duf......................1 ml
Les solutions b, c et d sont prpares dans de l'eau
distille puis strilises par passage sur filtre Seitz ou sur
bougie Chamberland L 3.
Emulsion du jaune d'uf.
Diluer 5 ml de jaune duf strile prlevs
aseptiquement dans 95 ml d'eau sale, strile.
Vrifier la strilit par culture en bouillon nutritif
ordinaire incuber 30 C pendant 3 jours au moins.
Le milieu complet ainsi obtenu est coul en botes de
Ptri.
Quand le milieu est froid et sec, il est ensemenc avec :
0,l ml de produit non dilu,0,l ml de la dilution au 1/10.
8 Joumada El Oula 1426
15 juin 2005
Les botes inocules sont incubes 37 C et examines
aprs 24 heures, puis 48 heures.
Les staphylocoques pathognes forment des colonies
noires entoures d'une zone d'claircissement du jaune
duf.
Cet aspect est caractristique et spcifique.
Les Proteus Hauseri donnent des colonies identiques,
mais la sulfamzathine inhibe leur dveloppement.
Le milieu complet ne se conserve que 24 heures.
Confirmation du caractre pathogne du
staphylocoque par la recherche de la phosphatase :
On utilise le ractif nitrophnylphosphate-disodique
20 gamma par millilitre, en solution dans un tampon pH
Tris 8 :
Tampon Tris: triphosphate de sodium pur : 121 g/l .
On verse le ractif la surface du milieu Baird Parker
sur lequel les colonies caractristiques se sont
dveloppes.
On incube 30 C pendant une demi (1/2) heure.
Les staphylocoques pathognes, phosphatase + donnent
autour de la colonie une coloration jaune qui se trouve
l'intrieur de la zone d'claircissement.
On vite ainsi la recherche de la coagulase.
5. Recherche des salmonelles
Effectuer cette recherche sur 25 ml de produit.
a) Pr-enrichissement.
25 ml de produit sont ports dans 75 ml de bouillon
ordinaire (double concentration).
Formule du bouillon ordinaire (double
concentration).
Extrait de viande de buf....................2 g
Protose peptone............................20 g
Chlorure de sodium................................................10 g
Eau - distille...............................1000 ml
Rpartir dans des flacons de 150 ml, 75 ml du milieu
double concentration. Autoclaver 20 min. 120 C pH
7,2.
Dans un flacon contenant 75 ml de bouillon ordinaire,
mettre 25 ml de glace ou de crme glace. Incuber 37C
pendant 18 h. 24 heures.
Le pr-enrichissement en bouillon ordinaire doit tre
utilis obligatoirement pour tous les produits surgels.
47
 8 Joumada El Oula 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 42
15 juin 2005 27

b) Enrichissement.
1 ml du contenu de ce flacon est inocul dans un tube
de milieu au slnite, plus cystine.

Incuber 37C, ou mieux 40C pendant 24 heures.

Formule du milieu au slnite plus cystine

Tryptone..........................................................5 g
Lactose............................................................4 g
Phosphate disodique..........................10 g
Slnite acide de sodium.................4 g
Cystine........................................0,01 g
Eau distille.............................1000 ml
PH final 7
Ne pas autoclaver. Rpartir raison de 20 ml par tube
de 200 x 20 mm.

Chauffer en vapeur fluente pendant 30 minutes

conserver au rfrigrateur.

C. Isolement

L'isolement se fait sur glose au dsoxycholate citrate,

lactose, formule de Leifson, modifie par Hynes.
On incube l'tuve 37C pendant 24 h. 48 h.

Les colonies suspectes, quand elles ont t parfaitement

isoles, sont repiques sur milieu de Kligler.

On procde ensuite l'identification.

48
18 Dhou El Hidja 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 03 7
18 janvier 2006

MINISTERE DU COMMERCE

Arrt du 21 Chabane 1426 correspondant au

25 septembre 2005 rendant obligatoire la
mthode de recherche de Listeria monocytogenes
dans le lait et les produits laitiers.

Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 05-161 du 22 Rabie
El Aouel 1426 correspondant au 1er mai 2005 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 29 Safar 1414
correspondant au 18 aot 1993 relatif aux spcifications et
la prsentation de certains laits de consommation ;
Vu larrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt, relatif aux spcifications
microbiologiques de certaines denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire la mthode de recherche
de Listeria monocytogenes dans le lait et les produits
laitiers.
Art. 2. Pour la recherche de Listeria monocytogenes
dans le lait et les produits laitiers, les laboratoires du
contrle de la qualit et de la rpression des fraudes et les
laboratoires agrs cet effet doivent employer la
mthode danalyse microbiologique dcrite en annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 21 Chabane 1426 correspondant
au 25 septembre 2005.
Lachemi DJAABOUBE

49
8 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 03
ANNEXE
METHODE DE RECHERCHE DE LISTERIA MONOCYTOGENES
DANS LE LAIT ET LES PRODUITS LAITIERS
1. Dfinitions
Pour les besoins de la prsente mthode les dfinitions
suivantes s'appliquent.
1.1 Listeria spp :
Microorganismes formant des colonies typiques sur un
milieu slectif solide et possdant les caractristiques
morphologiques, physiologiques et biochimiques dcrites
quand les essais sont effectus selon la prsente mthode.
1. 2 Listeria monocytogenes :
Espce type de Listeria pathogne et qui peut tre
diffrencie des autres espces car elle prsente des
caractristiques biochimiques spcifiques.
1.3 Recherche de Listeria monocytogenes
Dtermination de la prsence ou de l'absence de ce
microorganisme, dans une masse ou un volume
dtermin, quand les essais sont effectus selon la
prsente mthode.
2. Principe
En gnral, la recherche de Listeria monocytogenes,
ncessite au moins quatre tapes successives telles que
dcrites de ( 2.1) (2.4). Et tel quillustr galement par
la reprsentation schmatique du mode opratoire
suivant :
Figure 1
Reprsentation schmatique
du mode opratoire
Enrichissement primaire (25 gr ou 25 ml dans 225 ml
de milieu Fraser au 1/2)
Incubation 30 C pendant 18 24 h
Ensemencement secondaire 0,1ml sur Fraser
en tubes de 10 ml, et
Isolement en stries sur glose Oxford ou Palcam
Incubation 37 C pendant 24 48 h
Slection de trois cinq colonies caractristiques
et isolement en stries sur une autre plaque
de glose Oxford ou Palcam
Incubation 37 C pendant 24 48 h
Purification sur glose TSYEA
Incubation 37 C pendant 24 h
(ou plus, si ncessaire)
Examens complmentaires
18 Dhou El Hidja 1426
18 janvier 2006
2.1 Enrichissement primaire en milieu slectif
liquide
Prise d'essai de 25 gr ou 25 ml d'chantillon dans le
milieu slectif Fraser au demi. Incubation 30 C pendant
18 24 h
2.2 Enrichissement secondaire et isolement primaire.
Aprs la priode dincubation du milieu (2.1) procder :
* dune part, lenrichissement secondaire dans du
bouillon Fraser en tubes raison de 0,1 ml de la solution
obtenue en (2.1), incuber 37C pendant 24h,
* et dautre part, lisolement primaire par stries sur
une plaque de glose Oxford ou Palcam. Lincubation se
fera 37C pendant 24 48 heures.
2.3 Confirmation
Aprs la priode dincubation des milieux (2.2)
procder :
* dune part, lisolement secondaire par stries sur une
plaque de glose Oxford ou Palcam, partir du bouillon
denrichissement secondaire. Lincubation se fera 37C
pendant 24 48 heures,
* et dautre part, la lecture des plaques de glose
Oxford ou Palcam. Observer les colonies caractristiques,
et repiquer trois cinq dentre elles sur milieu TSYEA en
vue dune purification. Lincubation des plaques de glose
TSYEA se fera 37C pendant 24 48 heures.
2.4 Identification biochimique
Aprs la priode dincubation, procder dabord :
* lidentification du genre Listeria base sur laspect
morphologique des colonies, la coloration de Gram et sur
la raction Catalase,
* puis lidentification de lespce Listeria
monocytogenes, base essentiellement sur lhydrolyse de
lesculine, la mobilit 22-25C, les ractions (Vauges
Prauskawer VP) et du rouge de mthyle, lhmolyse ou le
Camp-Test, la fermentation du glucose sans gaz, le type
respiratoire.
3. Milieux de culture et ractifs
3. 1 Milieux de culture
3.1.1 Bouillon denrichissement primaire : milieu de
base.
Composition :
Peptone de protase......... 5,0 g
Tryptone ...... 5,0 g
Extrait de viande de buf ... 5,0 g
Extrait de levure .......... 5,0 g
NaCl ................... 20,0 g
Na2HPO42H2O ............ 12,0 g
KH2PO4 .......... 1,35 g
Esculine ... 1,0 g
Chlorure de lithium . 3,0 g
Eau....... 1000ml
50
18 Dhou El Hidja 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 03
18 janvier 2006
Prparation :
Faire dissoudre les composants dans de leau, puis
chauffer modrment jusqu dissolution complte.
Ajuster le pH 7,2.
Rpartir ensuite le milieu raison de :
225 ml par flacon qui serviront aux enrichissements
primaires ;
10 ml par tube qui serviront aux enrichissements
secondaires.
Striliser ensuite le milieu 121C pendant 15 minutes.
3.1.2 Supplment slectif pour Bouillon Fraser
Au moment de lutilisation du bouillon Fraser au demi
tout comme le bouillon Fraser, ils doivent tre
additionns de leur supplment dont la formule est la
suivante :
Acide nalidixique ...... 22,5 mg
Acriflavine . 28,125 mg
Citrate de Fer (III) ammoniacal ... 1,125 mg
Reconstituer strilement un flacon de supplment par
22,5 ml dun mlange 1/1 eau/thanol strile (soit 11,25
ml deau distille strile et 11,25 ml dthanol ).
Mlanger doucement pour dissoudre.
Ajouter ensuite aseptiquement :
* 2,25 ml de la solution ainsi prpare, 225 ml de
bouillon Fraser au demi ;
* 0,10 ml de la solution ainsi prpare, 10 ml de
bouillon Fraser.
Bien mlanger avant d'introduire linoculum.
Une fois reconstitu, le supplment doit tre
maintenu + 4C, labri de la lumire et ne doit pas
dpasser les 8 jours.
3.1.3. Milieu d'isolement (glose Oxford) milieu de
base
Composition :
Glose Columbia...................39 g
Esculine...........................1 g
Citrate de fer(3+) ammoniacal.........0,5 g
Chlorure de lithium...............15 g
Eau..........................1000 ml
Prparation
Dissoudre les composants dans de leau, puis
chauffer modrment jusqu dissolution complte.
Ajuster le pH 7,2 25C. Rpartir ensuite le milieu
raison de 225 ml par flacon puis striliser 121C
pendant 15 minutes.
3.1.4 Supplment slectif pour glose Oxford.
Composition :
Cycloheximide ................................................... 200 mg
Sulfate de colistine.........................10 mg
Acriflavine.................................2,5 mg
Cfottan......................................1 mg
Fosphomycine......................................5 mg
Ethanol...............................................2,5 ml
Eau.............................................2,5 ml
9
Prparation :
Dissoudre les ingrdients solides dans le mlange
thanol/ eau. Striliser par filtration.
Au moment de lemploi faire fondre le milieu puis le
refroidir une temprature de l'ordre de 48C. Ajouter par
la suite 2,25 ml du supplment slectif Oxford reconstitu.
Homogniser et couler en botes de Ptri striles.
Laisser solidifier sur paillasse puis les scher l'tuve.
Les botes ainsi prpares peuvent galement tre
conserves +4C pendant 4 5 jours.
3.1.5. Milieu d'isolement (glose Palcam) milieu de base
Composition :
Peptone ................................................................. 23,0 g
Amidon ................................................................... 1,0 g
Agar - Agar ........................................................... 20,0 g
Chlorure de sodium ................................................ 5,0 g
D(-) mannitol ........................................................ 10,0 g
Ammonium de fer III citrate .................................. 0,5 g
Esculine .................................................................. 0,8 g
Glucose ................................................................... 0,5 g
Chlorure de lithium .............................................. 15,0 g
Rouge de Phnol ................................................... 0,08 g
Eau .................................................................... 1000 ml
Dissoudre les composants dans de leau, puis chauffer
modrment jusqu dissolution complte. Ajuster le pH
7,2 25C. Rpartir ensuite le milieu raison de 225 ml
par flacon puis striliser 121C pendant 15 minutes.
Prparation :
Au moment de lemploi faire fondre le milieu puis le
refroidir une temprature de l'ordre de 48C. Ajouter par
la suite 2,25 ml du supplment Palcam reconstitu.
Homogniser et couler en botes de Ptri striles.
Laisser solidifier sur paillasse puis les scher l'tuve.
Les botes ainsi prpares peuvent galement tre
conserves +4C pendant 4 5 jours.
3.1.6 Milieu de culture glos : Tryptone soja extrait
de levure (TSYEA)
Composition :
Bouillon tryptone soja .......................................... 30,0 g
Extrait de levure ..................................................... 6,0 g
Agar Agar (1) ................................................. 9 18,0 g
Eau .................................................................... 1000 ml
Digestat enzymatique de casene .......................... 17,0 g
Digestat enzymatique de farine de soja .................. 3,0 g
Chlorure de sodium ................................................ 5,0 g
Hydrognophosphate dipotassique ......................... 2,5 g
Glucose ................................................................... 2,5 g
Dissoudre les composants dans de leau, puis chauffer
modrment jusqu dissolution complte. Ajuster le pH
7,3 25C. Rpartir ensuite le milieu raison de 225 ml
par flacon puis striliser 121C pendant 15 minutes.
Au moment de lemploi, faire fondre le milieu puis le
refroidir une temprature de l'ordre de 48C. Couler en
botes de Ptri, laisser solidifier sur paillasse puis les
scher l'tuve.
Les botes ainsi prpares peuvent galement tre
conserves +4C pendant 4 5 jours.
(1) selon le pouvoir glifiant de lAgar-Agar
51
10 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 03
3.1.7 Glose au sang
Base de glose au sang n 2 (1)................................ 40 g
Eau ........ 1000 ml
Composition :
Peptone de protose ................................................. 15 g
Digestat de foie ....................................................... 2,5 g
Extrait de levure ................................................ 5 g
Chlorure de sodium ................................................... 5 g
Agar-Agar (selon le pouvoir glifiant de l'agar) 12 18 g
Prparation
Dissoudre la base de glose au sang dshydrate
dans l'eau, en portant bullition.
Si ncessaire, ajuster le pH de sorte qu'aprs
strilisation il soit de 7,0 25 C.
Rpartir la base dans des flacons de 500 ml de
capacit maximale.
Striliser lautoclave (4.1.1.2) rgl 121 C
pendant 15 minutes.
Refroidir le milieu 45 C. Ajouter le sang dfibrin
et bien mlanger.
Rpartir le milieu par quantits d'environ 20 ml dans
des botes de Ptri striles et le laisser se solidifier.
3.1.8. Base
Protose peptone ..................................................... 10 g
Extrait de buf .......................................................... 1 g
Chlorure de sodium ................................................... 5 g
Pourpre de bromocrsol ....................................... 0,02 g
Eau .................................................................... 1000 ml
3.1.8.1 Prparation
Dissoudre les composants dans leau en portant
bullition.
Si ncessaire, ajuster le pH de sorte qu'aprs
strilisation il soit de 6,8 25 C.
Rpartir dans des tubes par quantits telles qu'aprs
il reste 9 ml.
Striliser l'autoclave (4.1.1.2) rgl 121C
pendant 20 minutes.
3.1.8.2 Solutions d'hydrates de carbone
Composition :
Hydrate de carbone (2) .............................................. 5 g
Eau ...................................................................... 100 ml
Prparation
Dissoudre sparment chaque hydrate de carbone.
3.1.8.3 Milieu complet
Pour chacun des hydrates de carbone, ajouter
aseptiquement 1 ml de solution (3.1.8.2) 9 ml milieu de
base (3.1.8.1).
Si de plus petits volumes de milieu de base ont t
prpars, ajouter alors galement de plus petits volumes
de solution dhydrate de carbone.
(1) Composition de la base de glose au sang n 2.
(2) 100 ml de solution de L-raminose et 100 ml de
solution de D-xylose sont ncessaires.
18 Dhou El Hidja 1426
18 janvier 2006
3.1.9 Milieu de mobilit
Composition :
Peptone de casine ............................................... 20,0 g
Peptone de viande ................................................... 6,1 g
Agar-agar ................................................................ 3,5 g
Eau .................................................................... 1000 ml
Prparation
Dissoudre les composants dans l'eau en portant
bullition.
Si ncessaire, ajuster le pH de sorte qu'aprs
strilisation il soit de 7,3 25 C.
Rpartir dans des tubes par quantits d'environ 5 ml.
Striliser l'autoclave (4.1.1.2) rgl 121C
pendant 15 minutes.
3.1.10 Essai de CAMP (Christie, Atkins, Munch-
Petersen)
Les botes de glose au sang (3.1.7) peuvent convenir
pour cet essai, mais il est prfrable d'utiliser des botes de
Ptri trs minces couches de glose au sang de mouton
(3.1.10.3).
3.1.10.1 Base
Composition :
Base de glose au sang n 2 (voir 3.1.7) ................. 40 g
Eau .................................................................... 1000 ml
Prparation
Dissoudre la base dshydrate dans l'eau en portant
bullition.
Si ncessaire, ajuster le pH de sorte qu'aprs
strilisation, il soit de 7,0 25 C.
Rpartir dans des tubes ou des flacons par quantits
de 100 ml.
Striliser l'autoclave (4.1.1.2) rgl 121 C pendant
15 min. Laisser refroidir 45 C.
3.1.10.2 Milieu au sang
Composition :
Couche de base (3.1.10.1) ................................... 100 ml
Sang dfibrin de cheval ou de mouton .................. 7 ml
Prparation
Ajouter le sang dfibrin la base fondue et strilise
(3.1.10.1).
3.1.10.3 Milieu complet
Rpartir la base (3.1.8.1) dans des botes de Ptri
striles par quantits d'environ 10 ml et laisser se
solidifier. Verser une trs fine couche du milieu de sang
(3.1.10.2) en utilisant des quantits n'excdant pas 3 ml
par boite.
Laisser se solidifier en une pellicule uniforme. Si le
sang est ajout des botes contenant la base prpare
l'avance, il peut s'avrer ncessaire de chauffer les botes
pendant 20 min. en les plaant dans une tuve rgle
37C avant de verser la pellicule de sang.
Scher les botes avant l'emploi.
52
18 Dhou El Hidja 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 03
18 janvier 2006
3.1.10.4 Cultures de raction CAMP
Une souche faiblement -hmolytique de
Staphylococcus aureus (par exemple, NCTC 1803) et une
souche de Rhodococcus equi (par exemple, NCTC 1621)
sont ncessaires pour raliser l'essai de CAMP. Toutes les
souches de Staphylococcus aureus ne se prtent pas
l'essai de CAMP.
Conserver les cultures de S. aureus, R. equi, L.
monocytogenes, L. innocua et L. ivanovii en ensemenant
les tubes inclins de TSYEA (3.1.6), et en incubant 37
C pendant 24 h 48 h, ou jusqu' ce qu'une croissance se
produise, et les conserver au rfrigrateur (4.1.10) 4 C.
Repiquer les cultures au moins 1 fois par mois.
3.2 Ractif-Solution de proxyde d'hydrogne, 3%
(V/V)
4. Appareillage et verrerie
Striliser tous les appareils qui entreront en contact avec
les milieux de culture, le liquide de dilution ou
l'chantillon, sauf s'il s'agit d'appareils livrs en condition
strile (en particulier les appareils en matire plastique).
4.1 Appareillage
Matriel courant de laboratoire de microbiologie et, en
particulier, ce qui suit.
4.1.1 Appareils pour la strilisation en chaleur sche
(four) ou en chaleur humide (autoclave).
4.1.1.1 Four, rglable 173 C 3.
4.1.1.2 Autoclave, rglable 121 C 1.
4.1.2. Etuve, rglable 30 C 1.
4.1.3 Etuve, rglable 37C 1.
4.1.4 Etuve, rglable 25 C 1.
4.1.5 Bains d'eau, rglables 45 C 1 ou 37 C 1.
4.1.6 Appareillage pour l'homognisation
Utiliser l'un des appareils suivants :
a) homognisateur rotatif, dont la frquence de
rotation est comprise entre 8000 tours/ min et 45000 tours/
min, avec des bols en verre ou en mtal, munis de
couvercles rsistant aux conditions de strilisation; ou
b) homognisateur de type pristaltique
(stomacher), avec des sacs striles en matire
plastique.
Les bols ou les sacs en matire plastique doivent avoir
une capacit suffisante pour permettre de mlanger
correctement la prise d'essai avec la quantit approprie
de diluant. En gnral, le volume du rcipient doit tre
environ le double du volume de la prise d'essai
additionne du diluant.
4.1.7 Anses boucles, en platine/iridi ou en
nickel-chrome, ou en matire plastique, d'environ 3 mm
de diamtre.
11
4.1.8 Fil d'ensemencement, en platine/iridi, en
nickel-chrome ou en matire plastique.
4.1.9 pH-mtre temprature compense pour
mesurer le pH des milieux prpars et des ractifs, prcis
0,l unit de pH 25 C.
4.1.10 Rfrigrateur pour conserver les milieux
prpars et les ractifs, pouvant fonctionner une
temprature comprise entre +2 C et +5 C.
4.1.11 Faisceau de lumire blanche
4.1.12 Miroir, plat ou concave.
4.1.13 Trpied, pour clairer les botes de Ptri.
4.1.14 Microscope contraste de phase, avec objectif
immersion l'huile.
4.2 Verrerie
La verrerie doit rsister des strilisations rptes.
4.2.1 Flacons de culture, pour la strilisation et la
conservation de milieux de culture et l'incubation de
milieux liquides.
4.2.2 Tubes de culture, de 16 mm de diamtre et125
mm de longueur. (Des tubes couvercle mtallique
peuvent tre utiliss).
4.2.3 Eprouvettes gradues, pour la prparation des
milieux complets.
4.2.4 Pipettes gradues, de 25 ml, 10 ml et 1 ml de
capacit, gradues respectivement en 0,5 ml, 0,5 ml et
0,l ml.
4.2.5 Botes de Ptri striles.
4.2.6 Lames pour microscope.
4.2.7 Billes en verre.
5. Echantillonnage
Il est important que le laboratoire reoive un chantillon
rellement reprsentatif, non endommag ou modifi lors
du transport et de l'entreposage.
Il convient de suivre les instructions pour
l'chantillonnage des fins microbiologiques.
6. Prparation de l'chantillon
6.1 Lait
Agiter soigneusement l'chantillon afin d'assurer une
rpartition aussi uniforme que possible des
microorganismes, en retournant rapidement 25 fois le
rcipient contenant l'chantillon. Il faut viter la
formation de mousse ou bien la laisser se disperser si elle
se forme. L'intervalle de temps entre le mlange et le
prlvement de la prise d'essai ne doit pas dpasser 3 min.
6.2 Lait sec, poudre de lactosrum, babeurre en
poudre, lactose, casine, casinate
Mlanger soigneusement le contenu du rcipient ferm
en secouant et en retournant manuellement de faon
rpte. Si le rcipient est trop rempli pour permettre une
bonne agitation, transfrer dans un rcipient plus grand,
puis mlanger.
53
12 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 03
6.3 Beurre
Faire fondre l'chantillon dans un rcipient strile dans
un bain d'eau (4.1.5) maintenu 45 C. Agiter pendant la
fusion et retirer immdiatement le rcipient du bain d'eau
ds que l'chantillon est juste fondu.
6.4 Fromage
Normalement, l'chantillon pour laboratoire peut tre
compos de la pte et de la crote. Les portions du
fromage constituant l'chantillon pour essai devront
faire l'objet d'un accord entre les parties intresses
concernes.
Oprer comme dcrit au point (7.1.5).
6.5 Glaces de consommation
Procder comme dans le cas du beurre (6.3) mais
utiliser un bain d'eau (4.1.5) maintenu une temprature
infrieure 37 C, ne doit pas dpasser cette temprature.
6.6 Laits ferments, yaourts, crmes desserts
Mlanger le contenu du rcipient ferm en secouant et
en retournant manuellement de faon rpte, ou ouvrir le
rcipient et mlanger le contenu aseptiquement en
utilisant une spatule ou une cuillre strile.
7. Mode opratoire
7.1 Ensemencement du milieu d'enrichissement
Pour examiner plus d'une prise d'essai de 25 g d'un lot
spcifi de lait ou de produit laitier et que l'on peut
prouver que le groupement (mise en commun des diverses
prises d'essai) n'affectera pas le rsultat pour le lait ou les
produits laitiers, les prises d'essai peuvent tre regroupes.
Par exemple, s'il faut examiner 10 prises d'essai de 25 g,
on pourra regrouper les 10 units pour former une seule
prise d'essai de 250 g et la dissoudre ou la mlanger dans
2,25 l de milieu d'enrichissement.
Ajouter une prise d'essai au milieu d'enrichissement
(3.1.1) comme dcrit de (7.1.1) (7.1.7).
7.1.1 Lait
Ajouter 25 ml de la prise d'essai 225 ml de milieu
d'enrichissement (3.1.1) et mlanger.
7.1.2 Lait sec, poudre de lactosrum, babeurre en
poudre et casinate
Peser aseptiquement 25 g de l'chantillon pour essai
dans un flacon bouch contenant 225 ml de milieu
d'enrichissement (3.1.1). Dissoudre en agitant.
7.l.3 Casine
Peser aseptiquement 25 g de l'chantillon pour essai
dans le rcipient strile de l'homognisateur (4.l.6) et
ajouter 225 ml de milieu d'enrichissement (3.1.1) 45 C.
Dissoudre soigneusement la prise d'essai par
homognisation (1 min 3 minutes).
54
18 Dhou El Hidja 1426
18 janvier 2006
7.l.4 Beurre
Agiter l'chantillon pour essai fondu, puis l'aide d'une
pipette chauffe environ 45C, transfrer 25 ml dans un
flacon contenant 225 ml de milieu d'enrichissement
(3.1.1). Mlanger soigneusement.
7.1.5 Fromage
Peser 25 g de l'chantillon pour essai dans le
rcipient strile de l'homognisateur,(4.1.6).
Ajouter 225 ml de milieu d'enrichissement (3.1.1)
prchauff 37 C environ. Mlanger soigneusement la
prise d'essai par homognisation.
7.1.6 Produits laitiers congels (y compris les glaces
de consommation)
Transfrer 25 g de l'chantillon pour essai fondu l'aide
d'une pipette dans un flacon contenant 225 ml de milieu
d'enrichissement (2.1) et mlanger.
7.1.7 Laits ferments, yaourts, crmes et desserts
Peser aseptiquement 25 g de l'chantillon pour essai
dans un flacon bouch et contenant des billes en verre
(4.2.7) et 225 ml de milieu d'enrichissement (3.1.1).
Mlanger en agitant.
Si l'on examine des chantillons basse valeur de pH,
vrifier aseptiquement le pH de la suspension avec un
papier indicateur color et, si ncessaire, l'ajuster 7,0
0,5 25 C.
7.2 Incubation
Incuber le milieu d'enrichissement ensemenc pendant
48 h dans l'tuve (4.1.2) rgle 30 C.
7.3 Isolement et identification prsume
7.3.1 Ensemencer en stries avec une anse (4.1.7) partir
du milieu d'enrichissement la surface d'une bote de glose
d'Oxford (3.1.3) pour obtenir des colonies bien isoles.
7.3.2 Retourner la bote et la placer dans l'tuve (4.1.3)
rgle 37 C pendant 48 h.
7.3.3 Examiner la bote pour vrifier la prsence de
colonies typiques de Listeria spp. (colonies entoures par
des halos bruns foncs ou noirs).
7.4 Confirmation
7.4.1 Slection de colonies pour confirmation
A partir de chaque bote de milieu d'isolement (glose
d'Oxford),(3.1.3), slectionner cinq colonies typiques ou
suspectes ou, s'il y a moins de cinq colonies, slectionner
toutes les colonies pour confirmation.
7.4.2 Incubation
Ensemencer en stries les colonies slectionnes sur la
surface des botes par (TSYEA) (7.3.2) d'une faon
permettant aux colonies bien isoles de se dvelopper.
Placer les botes dans l'tuve (4.1.3) rgle 37 C
pendant 24 h ou jusqu' ce que la croissance soit
satisfaisante.
18 Dhou El Hidja 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 03
18 janvier 2006
L'paisseur du milieu de glose (15 ml/bote) est
importante pour une bonne illumination de Henry (voir
ci-dessous).
Examiner les botes l'aide d'un faisceau de lumire
blanche (4.1.11), suffisamment puissante pour bien
clairer les botes et orient de faon clairer le fond de
la bote sous un angle de 45 (voir figure 2).
Lorsquon examine sous cette lumire en clairage
oblique (illumination de Henry) en regardant le dessus de
la bote, les colonies de Listeria spp. sont de couleur
bleue, et prsentent une surface granuleuse.
Si les botes (TSYEA) ne prsentent pas de grandes
colonies typiques bien isoles, il convient d'ensemencer
nouveau en stries une colonie et de procder comme dcrit
prcdemment.
7.4.3 Raction par catalase
Prlever une colonie typique et la mettre en suspension
dans une goutte de solution de proxyde d'hydrogne
3% (3.2) sur une lame.
La prsence de Listeria spp. positives par catalase est
dmontre par la formation de bulles de gaz.
7.4.4 Morphologie et proprits de coloration
7.4.4.1 Prparer une culture dans le milieu (TSYEA)
(3.1.6)correspondant une colonie typique utilise dans la
raction hmolytique (7.4.5).
Choisir une colonie typique et la mettre en suspension
dans un tube contenant du TSYEA. Incuber dans l'tuve
(4.1.4) rgle entre 20 C et 25 C jusqu' l'apparition d'un
trouble important (entre 8 h et 24 h).
Examen des botes pour dceler des colonies suspectes
Raliser une prparation humide en utilisant une anse
remplie de culture incube et l'examiner au microscope
(4.1.4). Les Listeria spp. se prsentent sous forme de
minces btonnets courts ayant une mobilit lente en
pirouette.
Des cultures dveloppes une temprature suprieure
25 C peuvent ne pas prsenter cette mobilit. Il faut
toujours comparer avec une culture connue. Les cocci, les
grands btonnets ou les btonnets prsentant une mobilit
rapide ne sont pas des Listeria spp.
Un essai complmentaire de contrle de la mobilit peut
tre effectu en ensemenant, avec un fil
ensemencement (4.l.8), le milieu de mobilit (3.1.9) par
piqres avec une culture prleve partir d'une colonie
typique de (TSYEA) (7.4.2) et incuber dans l'tuve (4.1.4)
rgle 25 C pendant 48 h.
Examiner la croissance autour des piqres. Les
Listeria spp. sont mobiles et produisent un motif de
croissance typique en ombrelle.
En cas de rsultat ngatif, incuber pendant 5 jours
supplmentaires et observer nouveau les piqres.
7.4.4.2 Effectuer un essai sur une colonie typique sur
(TSYEA) (7.4.2) pour la raction de Gram. Les Listeria
spp. sont des germes Gram positif.
13
7.4.5 Hmolyse
Si les caractristiques morphologiques et
physiologiques et la raction par catalase indiquent la
prsence de Listeria spp., ensemencer les botes de glose
au sang (3.1.7) pour dterminer la raction hmolytique.
Bien scher la surface de glose avant l'utilisation.
Tracer une grille sur le fond de la bote pour dfinir une
trame de 20 25 espaces par bote.
Prendre une colonie typique partir de la bote
(TSYEA) et inoculer un espace pour chaque culture
l'aide d'un fil d'ensemencement (4.1.8).
Piquer simultanment des cultures de contrle
positives et ngatives (L. monocytogenes, L. ivanovii et
L. innocua).
Aprs incubation 37 C pendant 48 h dans l'tuve
(4.1.3), examiner les souches d'essai et les cultures de
contrle.
Les L. monocytogenes prsentent des zones claires
troites et lgres (l-hmolyse); les L. innocua ne doivent
prsenter aucune zone claire autour du point de piqre.
Les L. ivanovii prsentent habituellement des zones
larges et bien dlimites de fi-hmolyse. Maintenir les
botes sous une lumire vive pour comparer les cultures en
essai avec des cultures de contrle.
7.4.6 Confirmation biochimique
Pour ces essais, utiliser une culture dans du TSYEA
(7.4.4.1).
7.4.6.1 Utilisation d'hydrate de carbone
Ensemencer chacun des bouillons de fermentation
d'hydrate de carbone (3.1.8.2) avec le contenu d'une anse
ou 0,l ml de culture (TSYEA) (7.4.6).
Incuber 37 C dans l'tuve (4.l.3) pendant 7 jours.
Toutefois, les ractions positives (formation d'acide)
sont rvles par une coloration jaune et se produisent
gnralement dans un dlai de 24 h 48 h.
7.4.6.2 Essai de CAMP
Ensemencer en stries les cultures de S. aureus et R. equi
en lignes simples en travers de la bote de glose au sang
(3.1.7 ou 3.1.10) de telle sorte que les 2 cultures soient
parallles et diamtralement opposes (voir figure 3).
Il est ncessaire d'avoir un inoculum fin et gal. Ceci
peut tre obtenu en utilisant une aiguille d'ensemencement
(4.1.8) ou une anse (4.1.7) maintenue angle droit par
rapport la glose.
Ensemencer en stries la souche d'essai de faon
similaire angle droit par rapport ces cultures de telle
sorte que la culture d'essai et les cultures de raction ne se
touchent pas mais soient distantes d'environ 1 mm 2 mm
en leur cart le plus proche.
Plusieurs souches d'essai peuvent tre ensemences en
stries sur la mme bote.
Simultanment, ensemencer en stries les cultures de
contrle de L. monocytogenes, L. innocua et L. ivanovii.
Si la glose au sang (3.1.7) est utilise incuber les boites
37 C pendant 18 h 24 h, dans l'tuve (4.1.3). Si des
boites double souches sont utilises incuber 37C
pendant 12 h 18 h, dans l'tuve (4.1.3).
55
14 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 03 18 Dhou El Hidja 1426
18 janvier 2006

Considrer la raction comme positive s'il y a une zone
dveloppe de fi-hmolyse l'intersection de la souche
d'essai et de la culture de S. aureus une raction positive.
La raction positive avec R. equi se traduit par la
prsence d'une large tte de flche (5 mm 10 mm)
d'hmolyse.
Ceci se traduit par une petite zone arrondie d'hmolyse
dveloppe, s'tendant seulement sur environ 2 mm
partir de la souche d'essai et l'intrieur de la zone
faiblement hmolytique due la croissance de la culture
de S. aureus. Une raction similaire peut tre observe
l'intrieur de la culture d'essai avec R. equi, mais elle est
considre comme ngative.
Il n'apparat pas de grandes zones d'hmolyse autour de
la culture S. aureus.
7.5 Interprtation des proprits morphologiques et
physiologiques et de la raction biochimique
(voir tableau 1)
Toutes les Listeria spp. se prsentent sous forme de
petits btonnets Gram positifs (uniquement avec les
cultures de 24h) qui prsentent une mobilit l'tat frais et
dans le milieu de mobilit.
Lorsque le bouillon d'enrichissement a t incub
pendant 48 h, puis aprs 7 jours, il convient d'ensemencer
les botes de milieu d'isolement.
Il est possible d'utiliser la mthode pour la dtection
de L. moncytogenes dans des chantillons prlevs sur les
sites de production. Toutefois, aucun essai en commun
n'a encore t entrepris pour savoir si cet organisme est
retrouv dans ces chantillons.
7.7 Cultures de contrle
Afin de s'assurer que les milieux d'enrichissement et
d'identification sont capables de permettre la croissance
des L. monocytogenes, introduire une dilution de la culture
de rfrence de souches rcemment isoles, dans un
flacon de contrle du milieu d'enrichissement (voir 7-2).
Ajouter 10 100 cellules de L. monocytogenes par flacon.
Procder avec les flacons de contrle de la mme faon
qu'avec les cultures d'essai pour dmontrer que la culture
de contrle positive est retrouve.
8. Expression des rsultats
Selon l'interprtation des rsultats qui a t faite
signaler la prsence ou l'absence de L. monocytogenes
dans la prise d'essai, en spcifiant la masse en grammes ou
le volume en millilitres de l'chantillon soumis l'essai.

Elles sont positives la catalase. Les L. monocytogenes 9. Rapport d'essai

utilisent la rhamnose mais pas la xylose.
Les L. monocytogenes, L. ivanovii et L. seeligeri
(raction faible) produisent une a-hmolyse dans les
ensemencements sur la glose au sang.
Retirer la colonie pour examiner l'hmolyse en dessous
de la colonie. Sur les trois Listeria spp. hmolytiques,
seule la L. monocytogenes n'utilise pas la xylose et s'avre
positive pour ce qui concerne l'utilisation de rhamnose.
L. monocytogenes et L. seetigeri (ractions faibles)
prsentent une raction positive l'essai de CAMP avec S.
aureus mais pas avec R. equi.
L. ivanovii ragi avec R. equi mais pas avec S.
aureus. Les autres Listeria spp. prsentent des ractions
ngatives l'essai de CAMP avec les deux cultures de
raction.
Le rapport d'essai doit indiquer la mthode selon
laquelle l'chantillonnage a t effectu, si elle est connue,
la mthode utilise, le rsultat d'essai obtenu, et si la
rptabilit a t vrifie, le rsultat final cit qui a t
obtenu.
Il doit, en outre, mentionner tous les dtails opratoires
non prvus dans la prsente mthode, ou facultatifs, ainsi
que les incidents ventuels susceptibles d'avoir agi sur le
rsultat d'essai.
Le rapport d'essai doit donner tous les renseignements
ncessaires l'identification complte de l'chantillon.
Tableau 1 Raction pour lidentification
de Listeria spp
Production Essai
dacide de CAMP

7.6 Confirmation dfinitive Espce Raminose Xylose S. aureus R. qui

Les souches qui sont considres comme tant des L. monocytognes + +
Listeria spp. (7.5) peuvent tre confirmes par une L. innocua V
identification dfinitive. L. ivanovii + +
Avec le lait cru, il a parfois t observ, qu'en L. seeligeri + (+)
procdant un repiquage du bouillon d'enrichissement L. welshimeri V +
aprs incubation pendant 24 h et 48 h, on pouvait L. grayi
amliorer la sensibilit de la mthode. L. murrayi V

On a observ que la mthode est moins sensible pour V = raction

certains fromages crote lave et certains fromages variable
persills que pour d'autres produits (ainsi, la sensibilit de
la mthode pour le fromage Limburger est plus faible (+) = raction faible
des concentrations de L. monocytogenes infrieures deux + = raction
par gramme environ). Pour certains types de fromages, positive
l'incubation du bouillon d'enrichissement doit tre tendue = pas de raction
7 jours.

56
18 Dhou El Hidja 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 03 15
18 janvier 2006

Observateur regardant perpendiculairement

Faisceau de lumire blanche

Bote

45

Trpied
45

miroire plan

Figure 2- Examen des botes pour dceler des colonies suspectes

R S

Bande troite de-hmolyse L-monocytognes

................................
................................................................................
Pas dhymolyse L-innocua

Large bande de -hmolyse L-ivanovii

Figure 3- Ensemensement des botes pour lessai de CAMP

Remarques

1- Ensemensement de fines botes de glose au sang comme illustr sur le diagramme.

Les lignes verticales reprsentent les stries de s. aureus (S). Les lignes horizontales reprsentent les
stries des cultures dessai les parties hachures indiquent les zones dhmolyse dveloppe.
2- La partie en pointills dlimite la zone dinfluence de la culture de S. aureus.

57
22 Dhou El Hidja 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 54
27 octobre 2013
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 28 Ramadhan 1433 correspondant au 16
aot 2012 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur en matire sche dans
le lait, la crme et le lait concentr non sucr.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n10-149 du 14 Joumada
Ethania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
la rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
lvaluation de la conformit ;
Vu larrt interministriel du 7 Rabie Ethani 1418
correspondant au 10 aot 1997 relatif aux spcifications
techniques des laits concentrs non sucrs et sucrs et aux
conditions et modalits de leur prsentation ;
Vu larrt interministriel du 13 Chabane 1419
correspondant au 2 dcembre 1998 relatif aux
spcifications techniques des laits en poudre et aux
conditions et modalits de leur prsentation ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de
dtermination de la teneur en matire sche dans le lait, la
crme et le lait concentr non sucr.
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en matire
sche dans le lait, la crme et le lait concentr non sucr,
les laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent
employer la mthode jointe en annexe du prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 28 Ramadhan 1433 correspondant au
16 aot 2012.
Mustapha BENBADA.
25
ANNEXE
Mthode de la dtermination de la teneur en matire
sche dans le lait, la crme
et le lait concentr non sucr
La prsente mthode prescrit la technique pour la
dtermination de la matire sche du lait, de la crme et
du lait concentr non sucr.
1. TERMES ET DFINITIONS
Pour les besoins de la prsente mthode, les termes et
dfinitions suivantes sappliquent.
Matire sche : Fraction massique des substances
restant aprs la dessiccation complte spcifie dans la
prsente mthode.
Note La matire sche est exprime en pourcentage
en masse.
2. PRINCIPE
Une prise dessai est pr-sche sur un bain deau
bouillante et leau restante est par la suite vapore dans
une tuve une temprature de 102C 2C.
3. APPAREILLAGE ET MATRIAUX
Sauf indication contraire, utiliser uniquement de leau
distille ou dminralise ou de leau de puret
quivalente.
Matriel courant de laboratoire et en particulier, ce qui
suit.
3.1 Balance analytique
3.2 Dessiccateur, muni dun dshydratant efficace (par
exemple gel de silice rcemment sch, avec un indicateur
hygromtrique).
3.3 Bain deau bouillante, muni douverture de
dimensions rglables.
3.4 Etuve, ventile, thermorgule, pouvant tre
maintenue 102C 2C dans tout lespace de travail.
3.5 Capsules fond plat, de 20 mm 25 mm de
hauteur, de 50 mm 75 mm de diamtre, constitues dun
matriau appropri (par exemple, acier inoxydable, nickel
ou aluminium), munies de couvercles bien ajusts et
pouvant tre ts aisment .
3.6 Bains deau.
3.6.1 Bain deau, rglable entre 35C et 40C.
3.6.2 Bain deau, rglable entre 40C et 60C.
3.7 Homognisateur, lhomognisateur est facultatif
(5.1).
58

26 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 54
4. ECHANTILLONNAGE
Lchantillonnage se fait dans des conditions
appropries.
Il est important que le laboratoire reoive un chantillon
rellement reprsentatif, non endommag ou modifi lors
du transport ou de lentreposage.
5. PREPARATION DE LECHANTILLON POUR
LESSAI
5.1 Lait
Amener lchantillon une temprature de 20C
25C. Mlanger soigneusement afin dobtenir une
prparation homogne de la matire grasse dans
lchantillon. Ne pas agiter trop vigoureusement afin
dviter la mousse ou le barattage de la matire grasse.
Sil est difficile de disperser la couche de crme, chauffer
lentement une temprature de 35C 40C, sur un
bain deau (3.6.1), en mlangeant soigneusement de faon
incorporer la crme qui adhre au rcipient.
Refroidir lchantillon rapidement une temprature de
20C 25C.
Un homognisateur peut tre utilis pour faciliter la
dispersion de la matire grasse.
Note - Des rsultats corrects ne peuvent tre obtenus si
lchantillon contient de la matire grasse liquide
apparente, ou si des particules blanches, de forme
irrgulire, sont visibles et adhrent aux parois du
rcipient.
5.2 Crme
Chauffer lentement lchantillon une temprature de
35C 40C, sur un bain deau (3.6.1). Mlanger ou
remuer la crme avec prcaution et ne pas agiter trop
vigoureusement afin dviter la mousse ou le barattage.
Refroidir rapidement lchantillon une temprature de
20C 25C. Afin de rduire au minimum lvaporation
de leau pendant le mlange, il convient que le rcipient
reste dcouvert aussi brivement que possible.
Note - Des rsultats corrects ne peuvent tre obtenus si
le mlange de lchantillon nest pas homogne ou si
lchantillon prsente un dbut de barattage ou dautres
indices anormaux.
5.3 Lait concentr non sucr
Bien agiter le rcipient en le retournant frquemment.
Ouvrir le rcipient et verser le lait lentement dans un autre
rcipient en verre ou autre matriau appropri, pourvu
dun couvercle tanche, en prenant soin dincorporer
lchantillon la matire grasse ou les autres constituants
pouvant adhrer la paroi du premier rcipient. Agiter
vigoureusement et fermer le rcipient.
22 Dhou El Hidja 1434
27 octobre 2013
Chauffer le rcipient ferm dans un bain deau (3.6.2)
entre 40C et 60C. Toutes les 15mn, sortir le rcipient du
bain et lagiter fortement. Au bout de 2h, retirer le
rcipient et le refroidir une temprature de 20C 25C.
Enlever le couvercle et bien mlanger en remuant
lchantillon avec une cuillre ou une spatule.
Note - Si la matire grasse se spare, on ne peut pas
esprer obtenir des rsultats corrects.
6. MODE OPERATOIRE
6.1 Prparation de la capsule
Chauffer une capsule (3.5) avec son couvercle pos
ct, dans ltuve (3.4) pendant au moins 1h. Mettre le
couvercle sur la capsule et la placer immdiatement dans
le dessiccateur (3.2).
Laisser refroidir temprature ambiante (au moins
30 min) et peser 0,1mg prs.
6.2 Prise dessai
Peser rapidement, 0,1mg prs, 1 g 5 g (suivant la
teneur estime en matire sche) de lchantillon prpar,
dans la capsule prpare (6.1). Dans le cas du lait ou de la
crme, incliner la capsule de faon taler la prise dessai
uniformment au fond de la capsule. Dans le cas du lait
concentr non sucr, ajouter 3 ml 5 ml deau distille ou
deau de puret au moins quivalente, incliner la capsule
de faon mlanger et taler la prise dessai
uniformment au fond de la capsule.
6.3 Dtermination
6.3.1 Placer la capsule, sans le couvercle, sur le bain
deau (3.3) maintenu vigoureusement lbullition, de
sorte que le fond de la capsule soit expos de faon
maximale la vapeur et directement chauff par celle-ci.
Laisser la capsule pendant 30 min.
6.3.2 Retirer la capsule du bain deau et la chauffer,
avec son couvercle pos ct, dans ltuve (3.4) pendant
2h. Mettre le couvercle sur la capsule et la placer
immdiatement dans le dessiccateur (3.2).
6.3.3 Laisser refroidir la capsule temprature ambiante
(au moins 30 min) et peser 0,1 mg prs.
6.3.4 Chauffer nouveau la capsule avec son couvercle
pos cot dans ltuve pendant 1h.
Mettre le couvercle sur la capsule et la placer
immdiatement dans le dessiccateur. Laisser refroidir
comme en (6.3.3) et peser 0,1 mg prs.
6.3.5 Rpter les oprations spcifies en (6.3.4)
jusqu ce que la diffrence de masse entre deux peses
successives ne dpasse pas 1mg. Relever la masse la plus
faible.
59
22 Dhou El Hidja 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 54 27
27 octobre 2013

7. EXPRESSION DES RESULTATS

7.1 Mode de calcul

La matire sche, exprime en pourcentage en masse est

gale :

m2 - m0
x 100
m1 - m 0

m0 est la masse, en grammes, de la capsule et du

couvercle (6.1) ;

m1 est la masse, en grammes, de la capsule, du

couvercle et de la prise dessai (6.2) ;

m2 est la masse, en grammes, de la capsule, du

couvercle et de la prise dessai sche (6.3.5).

Arrondir la valeur obtenue 0,01% (fraction massique)

prs.

7.2 Fidlit

Note - Les valeurs de rptabilit et de reproductibilit

sont exprimes au niveau de probabilit 95% et
proviennent des rsultats dun essai interlaboratoires.

7.2.1 Rptabilit

La diffrence entre deux rsultats individuels, obtenus

sur un produit identique soumis essai par le mme
analyste utilisant le mme appareillage dans un court
intervalle de temps, nexcdera pas les valeurs suivantes
de matire sche pour 100 g de produit, en moyenne plus
dune fois sur 20 dans lapplication normale et correcte de
la mthode :
pour le lait 0,10 g ;
pour la crme 0,20 g ;
pour le lait concentr non sucr 0,30 g.

7.2.2 Reproductibilit

La diffrence entre deux rsultats individuels et

indpendants, obtenus par deux oprateurs travaillant dans
des laboratoires diffrents sur un produit identique,
nexcdera pas les valeurs suivantes de matire sche pour
100 g de produit, en moyenne plus dune fois sur 20 dans
lapplication normale et correcte de la mthode.
pour le lait 0,20 g ;
pour la crme 0,35 g ;
pour le lait concentr non sucr 0,50 g.

60

22 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 25
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 5 Safar 1435 correspondant au 8 dcembre
2013 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur totale en matire sche
des fromages et des fromages fondus.
Le ministre du commerce ;
Vu le dcret prsidentiel n 13-312 du 5 Dhou El Kaada
1434 correspondant au 11 Septembre 2013 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode de dtermination de la
teneur totale en matire sche des fromages et des
fromages fondus.
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur totale en
matire sche des fromages et des fromages fondus, les
laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent
employer la mthode jointe en annexe du prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 5 Safar 1435 correspondant au 8
dcembre 2013.
Mustapha BENBADA.
4 Rajab 1435
4 mai 2014
Annexe
Mthode de dtermination de la teneur totale en
matire sche des fromages et des fromages fondus
La prsente mthode constitue la rfrence pour la
dtermination de la teneur totale en matire sche des
fromages et des fromages fondus.
1. DEFINITION
Pour les besoins de la prsente mthode, la dfinition
suivante s'applique.
Teneur totale en matire sche du fromage
Fraction massique de substances, dtermine selon le
mode opratoire spcifi dans la prsente mthode.
Note - La teneur totale en matire sche est exprime en
pourcentage de la masse (fraction massique).
2. PRINCIPE
Schage d'une prise d'essai pese et mlange avec du
sable par chauffage dans une tuve rgle 102C.
Pese de la prise d'essai sche afin de dterminer la
perte de masse.
3. REACTIFS
Sauf spcification contraire, utiliser exclusivement des
ractifs de qualit analytique reconnue et de l'eau distille
ou dminralise ou de l'eau de puret au moins
quivalente.
3.1 Solution d'acide chlorhydrique (HCL), avec une
fraction massique de 25 %.
3.2 Sable de quartz ou sable de mer
3.2.1 Le sable doit prsenter une granulomtrie lui
permettant de passer au travers d'un tamis en toile
mtallique dont la maille est de 600 m tout en tant
retenu par un tamis dont la maille est de 150 m.
Le sable doit satisfaire aux exigences de l'essai
d'acceptation spcifi en (3.2.2).
3.2.2 Dposer environ 20 g de sable dans une capsule
fond plat (4.4) munie d'une baguette d'agitation (4.5).
Chauffer la capsule ouverte contenant le sable ainsi que
son couvercle et la baguette d'agitation dans l'tuve (4.3)
rgle 102C pendant au moins 2 h. Remettre le
couvercle sur la capsule et laisser cette dernire refroidir
dans le dessiccateur (4.2) jusqu' la temprature de la salle
de pese. Peser la capsule avec son couvercle en place 1
mg prs et enregistrer la masse avec quatre dcimales.
Enlever le couvercle de la capsule et humidifier le sable
avec environ 5 ml d'eau. Mlanger l'eau au sable l'aide
de la baguette d'agitation. Chauffer la capsule ouverte, son
couvercle et la baguette d'agitation dans l'tuve (4.3)
rgle 102C pendant, au moins, 4 h. Remettre le
couvercle sur la capsule et la laisser refroidir dans le
dessiccateur (4.2) jusqu' la temprature de la salle de
pese. Peser la capsule avec son couvercle en place 1 mg
prs et enregistrer la masse avec quatre dcimales. L'cart
entre les deux peses ne doit pas dpasser 1 mg.
61
4 Rajab 1435
4 mai 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 25
3.2.3 Si cette exigence n'est pas satisfaite, traiter le
sable de la manire suivante :
immerger le sable dans une solution d'acide
chlorhydrique (3.1) et l'y laisser pendant trois jours, en
remuant de temps autre. Dcanter autant que faire se
peut le liquide surnageant. Laver le sable l'eau jusqu'
disparition de la raction acide du liquide surnageant.
Chauffer le sable environ 160C pendant, au moins, 4 h.
Renouveler ensuite l'essai d'acceptation dcrit en (3.2.2).
4. APPAREILLAGE
Matriel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui
suit :
4.1 Balance analytique, capable de peser 1 mg prs
et avec une prcision de lecture de 0,1 mg.
4.2 Dessiccateur, rempli d'un dshydratant appropri
(par exemple du gel de silice frachement sch contenant
un indicateur hygromtrique).
En alternative, il est possible d'utiliser une plaque en
mtal ou en verre convenant un schage rapide des
capsules. Cette plaque doit tre installe dans une armoire
ferme au travers de laquelle passe un flux d'air sec.
4.3 Etuve ventile, chauffage lectrique, munie
d'oues de ventilation compltement ouvertes, rglable
(l02 2) C et maintenant une temprature uniforme en
tous points de l'espace de travail. L'tuve doit tre dote
d'un thermomtre appropri.
4.4 Capsules fond plat, en matriau adquat (par
exemple acier inoxydable, nickel ou aluminium), de 20
mm 25 mm de hauteur, de diamtre compris entre 60
mm et 80 mm et dotes de couvercles parfaitement
adapts et faciles enlever.
4.5 Baguettes d'agitation, en verre ou en mtal, avec
une extrmit aplatie et d'une longueur suffisante pour que
la baguette d'agitation repose contre la paroi interne de la
capsule en formant un angle avec celle-ci juste en dessous
du bord.
4.6 Appareil pour broyer ou rper, facile nettoyer et
appropri pour la prparation de l'chantillon pour essai.
5. ECHANTIOLLONNAGE
Il est important que le laboratoire reoive un chantillon
rellement reprsentatif, non endommag ni modifi lors
du transport et de l'entreposage.
L'chantiollonnage se fait selon une mthode
approprie.
Conserver les chantillons pour essai a une temprature
comprise entre 0 C et 20 C depuis l'chantillonnage
jusqu'au dbut du mode opratoire. La composition des
chantillons ne doit pas tre affecte au cours de
l'entreposage.
6. PREPARATION DE L'ECHANTILLON POUR
ESSAI
Avant l'analyse, enlever la crote, la morge ou la
surface moisie du fromage de manire obtenir un
chantillon reprsentatif du fromage tel qu'il est
habituellement consomm.
62
23
Broyer ou rper l'chantillon pour essai en utilisant un
appareil pour broyer ou rper appropri (4.6). Mlanger
rapidement la masse moulue ou rpe et, si ncessaire
pour les fromages pte dure ou semi-dure, la broyer une
seconde fois et mlanger de nouveau soigneusement. Dans
le cas des fromages pte dure et pte semi-dure, les
couper de prfrence en cubes d'environ 15 mm de ct.
Mlanger les cubes en les secouant dans un rcipient.
Broyer ou rper l'chantillon pour essai comme indiqu
prcdemment. Nettoyer l'appareil aprs la prparation de
chaque chantillon.
Si l'chantillon ne peut tre ni broy ni rp, le
mlanger soigneusement par malaxage approfondi, par
exemple dans un mortier l'aide d'un pilon. Prendre garde
d'viter toute perte d'humidit.
Conserver l'chantillon prpar dans un rcipient
hermtique l'air jusqu'au moment de l'analyse, laquelle
doit tre effectue dans les plus brefs dlais aprs le
broyage.
Cependant, si un dlai est invitable, prendre toutes
prcautions pour assurer une conservation adquate de
l'chantillon. En cas de rfrigration, ramener l'chantillon
temprature ambiante. Mlanger soigneusement
l'chantillon pour pallier le transfert d'humidit dans le
fromage qui se produit au cours du refroidissement et du
rchauffement. S'assurer que toute condensation la
surface interne du rcipient est convenablement et
uniformment rincorpore dans l'chantillon pour essai.
Ne pas analyser de fromage broy prsentant un
dveloppement de moisissure non dsir ou des signes de
dtrioration.
7. MODE OPERATOIRE
7.1 Essai blanc
Paralllement la dtermination de la prise d'essai
(7.3), effectuer un essai blanc selon le mme mode
opratoire que pour la prparation de la capsule (7.2) et la
dtermination (7.3), mais sans la prise d'essai.
7.2 Prparation de la capsule
7.2.1 Chauffer la capsule (4.4) ouverte contenant
environ 20 g de sable (3.2) ainsi que son couvercle et la
baguette d'agitation (4.5) dans l'tuve (4.3) rgle
102C. Laisser le contenu de la capsule atteindre 102C,
puis scher le contenu pendant, au moins, 1 h.
La priode de schage indique en (7.2.1), (7.3.3) et
(7.3.6) commence lorsque le contenu de la capsule atteint
la temprature de 102C. Le temps ncessaire pour
atteindre cette temprature dpend de la puissance, de la
frquence, de ventilation et de la taille de l'tuve. Cette
dure de monte en temprature est galement fonction du
nombre de capsules places dans l'tuve, de leur masse et
du matriau les constituant. Il convient que cette
dure de monte en temprature soit dtermine
exprimentalement.
 4 Rajab 1435
24 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 25 4 mai 2014

7.2.2 Remettre le couvercle sur la capsule et la mettre o :

immdiatement dans le dessiccateur (4.2). Laisser
refroidir la capsule jusqu' temprature ambiante dans le
dessiccateur. Une fois la capsule refroidie, la sortir du
dessiccateur et la peser avec son couvercle et la baguette
d'agitation 1 mg prs et enregistrer la masse avec quatre
dcimales.
m0 : est la masse, en grammes, de la capsule prpare
(7.2.2);
m1 : est la masse, en grammes, de la prise d'essai et de
la capsule avant dessiccation (7.3.1);

La priode de refroidissement indique en (7.2.2), m2 : est la masse, en grammes, de la prise d'essai et de

(7.3.4) et (7.3.5) dpend de la capacit de refroidissement la capsule aprs dessiccation (7.3.6);
du dessiccateur mais aussi du nombre de capsules places m3 : est la masse, en grammes, de la capsule utilise
dans le dessiccateur, de leur masse et du matriau les pour l'essai blanc (7.1), pour le mme temps de
constituant. dessiccation (7.3.6) que m2;
Il convient que cette priode de refroidissement soit m4 : est la masse, en grammes, de la capsule prpare
dtermine exprimentalement. (7.2.2) utilise pour l'essai blanc (8.1).
7.3 Dtermination
8.2 Expression des rsultats
7.3.1 Pencher la capsule pour faire glisser le sable d'un
ct de celle-ci. Placer environ 3 g d'chantillon pour Exprimer les rsultats obtenus avec deux dcimales.
essai (6) sur une surface de la capsule exempte de sable, 9. FIDELITE
peser la capsule ainsi que son couvercle et la baguette
d'agitation 1 mg prs et enregistrer la masse avec quatre 9.1 Rptabilit
dcimales.
La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
7.3.2 Mlanger soigneusement la prise d'essai et le sable individuels indpendants, obtenus l'aide de la mme
et rpartir le mlange de manire homogne sur le fond de mthode sur un matriau identique soumis l'essai dans le
la capsule. Laisser l'extrmit aplatie de la baguette mme laboratoire par le mme oprateur utilisant le mme
d'agitation dans le mlange, l'autre extrmit s'appuyant appareillage dans un court intervalle de temps, n'excdera
sur la paroi de la capsule. 0,35 % (en masse) que dans 5 % des cas au plus. .
Note - Il peut tre plus facile de mlanger le sable des 9.2 Reproductibilit
fromages pte dure en ajoutant environ 3 ml d'eau afin
de saturer le sable. La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
individuels, obtenus laide de la mme mthode sur un
7.3.3 Chauffer la capsule, avec son couvercle plac matriau identique soumis l'essai dans des laboratoires
ct d'elle, dans l'tuve (4.3) rgle 102C. Laisser le diffrents par des oprateurs diffrents utilisant des
contenu de la capsule atteindre 102C, puis scher le appareillages diffrents, n'excdera 0,55 % (en masse) que
contenu pendant, au moins, 3 h. dans 5 % des cas au plus.
7.3.4 Remettre le couvercle sur la capsule. Laisser
celle-ci refroidir dans le dessiccateur (4.2) jusqu'
temprature ambiante. Peser la capsule avec son couvercle
1 mg prs et enregistrer la masse avec quatre dcimales.
7.3.5 Chauffer de nouveau la capsule avec son
couvercle comme indiqu en (7.3.3), mais pendant 1 h au
lieu de 3 h. Remettre le couvercle sur la capsule et la
laisser refroidir jusqu' la temprature ambiante dans le
dessiccateur (4.2). Peser de nouveau la capsule avec son
couvercle 1 mg prs et enregistrer la masse avec quatre
dcimales.
7.3.6 Renouveler le mode opratoire dcrit en (7.3.5)
jusqu' observer, entre deux peses successives, une
diminution de masse infrieure ou gale 2 mg ou une
augmentation de masse. Enregistrer la masse minimale de
la capsule.

8. CALCUL ET EXPRESSION DES RESULTATS

8.1 Calcul
Calculer la teneur totale en matire sche de
l'chantillon pour essai, wt, exprime en pourcentage de la
masse, l'aide de l'quation suivante:

(m2 - m0) - (m3 - m4)

Wt = x 100 %
m1 - m0

63
24 Chabane 1435
22 juin 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 38
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 20 Chaoual 1434 correspondant au 27 aot
2013 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur en azote protique
dans le lait.
Le ministre du commerce ;
Vu le dcret prsidentiel n 12-326 du 17 Chaoual 1433
correspondant au 4 septembre 2012 portant nomination
des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou El Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu l'arrt interministriel du 29 Safar 1414
correspondant au 18 aot 1993 relatif aux spcifications et
la prsentation de certains laits de consommation ;
Vu l'arrt interministriel du 7 Rabie Ethani 1418
correspondant au 10 Aot 1997 relatif aux spcifications
techniques des laits concentrs non sucrs et sucrs et aux
conditions et modalits de leur prsentation ;
Arrte :
Article ler. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 3 Rajab 1410
correspondant au 30 janvier 1990, modifi et complt,
susvis, le prsent arrt a pour objet de rendre obligatoire
la mthode de dtermination de la teneur en azote
protique dans le lait.
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en azote
protique dans le lait, les laboratoires du contrle de la
qualit et de la rpression des fraudes et les laboratoires
agrs cet effet doivent employer la mthode jointe en
annexe du prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 20 Chaoual 1434 correspondant au
27 aot 2013.
Mustapha BENBADA.
664
9
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION DE LA
TENEUR EN AZOTE PROTEIQUE DANS LE LAIT
La prsente mthode spcifie une technique pour la
dtermination directe de la teneur en azote protique du
lait liquide, entier ou crm.
1. DEFINITION
Pour les besoins de la prsente mthode, la dfinition
suivante s'applique :
Teneur en azote protique :
Rapport de masse des substances, dtermin
directement ou indirectement par le mode opratoire
dcrit dans la prsente mthode.
Note - La teneur en azote protique est exprime sous
forme de pourcentage en masse.
2. PRINCIPE
Prcipitation des protines d'une prise d'essai par
addition de solution d'acide trichloroactique, de sorte que
la concentration finale de l'acide trichloroactique dans le
mlange soit d'environ 12%. Sparation du prcipit de
protines par filtration (le filtrat contient l'azote non
protique), dtermination de la teneur en azote du filtrat
par le mode opratoire dcrit dans la mthode de
dtermination de la teneur en azote dans le lait.
3. REACTIFS
Sauf indication diffrente, utiliser uniquement des
ractifs de qualit analytique reconnue et de l'eau distille
ou dminralise, ou de l'eau de puret au moins
quivalente. Les ractifs utiliser sont ceux spcifis pour
le dosage de l'azote total selon la mthode de
dtermination de la teneur en azote dans le lait, et les
ractifs numrs ci-aprs :
3.1 Solution d'acide trichloroactique (CC13COOH).
Dans une fiole jauge de 100 ml, dissoudre 15,0 g
d'acide trichloroactique dans de l'eau et diluer jusqu'au
repre. Ne pas utiliser de concentrations d'acide
trichloroactique et de volumes de solutions diffrents de
ceux spcifis.
Les performances de la mthode en ce qui concerne la
valeur moyenne et les caractristiques de performances
interlaboratoires seront diffrentes en cas d'utilisation
d'autres concentrations d'acide trichloroactique ou
d'autres volumes de solutions.
3.2 Solution volumtrique standard d'acide
chlorhydrique c(HCl) = (0,1 0,0005) mol/I.
4. APPAREILLAGE
Matriel courant de laboratoire, ainsi que, le matriel
utilis dans la mthode de dtermination de la teneur en
azote dans le lait et en particulier, le matriel suivant :

10 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 38
4.1 Bain d'eau, pouvant tre maintenu une
temprature de 38 C 2 C ;
4.2 Pipette, d'une capacit de 5 ml ;
4.3 Entonnoir de filtration, en verre, de 75 mm de
diamtre ;
4.4 Papier-filtre, exempt d'azote, de 15 cm de
diamtre ;
4.5 Pipette automatique ou pipette piston,
permettant d'obtenir des doses de 10 ml.
5. ECHANTILLONNAGE
L'chantillonnage se fait dans des conditions
appropries.
6. PRPARATION DE L'ECHANTILLON POUR
ESSAI
Chauffer l'chantillon pour essai dans le bain d'eau (4.1)
rgl 38 C 2 C. Bien mlanger, mais dlicatement,
au moyen de retournements rpts du rcipient, sans
causer ni mousse ni barattage. Laisser refroidir
l'chantillon temprature ambiante immdiatement avant
de peser la prise d'essai (7.1).
7. MODE OPRATOIRE
7.1 Prise d'essai
Pipeter environ 5,0 ml 0,1 ml de l'chantillon pour
essai prpar (6) dans un ballon de Kjeldahl ou dans un
tube de minralisation propre et sec, pralablement pes
0,1 mg prs. Peser l'chantillon 0,1 mg prs. Ajouter
immdiatement 5 ml 0,1 ml d'eau au ballon ou au tube
et rincer tout rsidu d'chantillon restant sur le col en
faisant couler l'eau de rinage au fond du ballon ou du
tube.
Note - L'utilisation d'un ballon de Kjeldahl ou d'un tube
de minralisation est fonction de la mthode choisie par le
laboratoire.
7.2 Dtermination directe
7.2.1 Prcipitation et filtration
Ajouter 40 ml 0,5 ml de solution d'acide
trichloroactique (3.1) au ballon de Kjeldahl ou au tube de
minralisation contenant la prise d'essai (7.1) et agiter
pour mlanger le contenu.
Laisser reposer le ballon ou le tube pendant 5 min
environ pour permettre au prcipit de se dposer. Filtrer
le contenu du ballon ou du tube au travers d'un
papier-filtre (4.4) plac dans un entonnoir de filtration
(4.3).
Recuillir le filtrat dans une fiole conique propre. Une
partie du prcipit restera dans le ballon de Kjeldahl ou
dans le tube de minralisation et une autre partie sera
recueillie sur le papier-filtre. Il n'est pas ncessaire de
retirer tout le prcipit du ballon ou du tube.
6655
24 Chabane 1435
22 juin 2014
Immdiatement aprs avoir vers le mlange et pour ne
pas laisser une partie du prcipit le temps de scher sur
le col du ballon ou du tube, ajouter, l'aide d'une pipette
automatique (4.5), 10 ml de la solution d'acide
trichloroactique (3.1).
Utiliser galement cette solution pour rincer tout rsidu
de prcipit restant sur le col, en laissant couler le liquide
de rinage au fond du ballon ou du tube.
Agiter par un mouvement de rotation pour mlanger le
contenu. Verser le contenu ainsi obtenu du ballon ou du
tube au travers du mme papier-filtre. Ajouter ce filtrat
celui qui a t recueilli auparavant dans la fiole conique.
Une nouvelle fois, rincer immdiatement le col du ballon
ou du tube avec une nouvelle dose de 10 ml de solution
d'acide trichloroactique et agiter pour mlanger le
contenu. Verser pour la troisime fois le contenu du ballon
ou du tube au travers du mme papier-filtre, en ajoutant le
filtrat celui qui a t recueilli auparavant dans la fiole
conique.
Le filtrat obtenu doit tre transparent et exempt de
particules de matire. ce stade, le filtrat n'est plus
ncessaire et peut tre mis au rebut de manire
approprie.
Si l'on doit effectuer des essais rpts du mme
chantillon pour essai, deux oprations distinctes de
prcipitation et de filtration doivent tre effectues avec
chaque chantillon pour essai.
7.2.2 Prparation du filtrat
En portant des gants, retirer doucement le papier-filtre
de lentonnoir de filtration et plier le papier pour enfermer
le prcipit. Sil subsiste une trace de prcipit sur la lvre
intrieure ou extrieure du ballon de Kjeldahl ou du tube
de minralisation, essuyer ces rsidus avec le papier filtre
repli, de faon que tout rsidu de prcipit adhre au
papier, puis dposer le papier-filtre son tour dans le
ballon de Kjeldahl ou dans le tube de minralisation.
7.2.3 Minralisation et distillation
Ajouter la quantit approprie de corps facilitant
l'bullition, de sulfate de potassium, de solution de sulfate
de cuivre et d'acide sulfurique au ballon de Kjeldahl ou au
tube de minralisation et poursuivre le processus de
minralisation et de distillation selon le mode opratoire
dcrit, respectivement dans la mthode de dtermination
de la teneur en azote dans le lait.
7.2.4 Essai blanc
Raliser un essai blanc en remplaant la prise d'essai
par un papier-filtre (4.4) lav avec une solution d'acide
trichloroactique (3.1) et en procdant comme dcrit en
(7.2.1) (7.2.3). Toujours titrer les prises d'essai blanc
avec le mme ractif et le mme appareillage que pour les
prises d'essai.
Consigner les valeurs blanc. Si ces valeurs varient,
identifier la cause de ce changement.
24 Chabane 1435
22 juin 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 38
7.3 Dtermination indirecte
En alternative la dtermination directe (7.2), la teneur
en azote protique d'un chantillon pour essai peut tre
calcule en ayant recours une dtermination indirecte
classique.
Cela se fait en soustrayant la teneur en azote non
protique de la teneur en azote total du mme chantillon
pour essai, dtermin selon la mthode de dtermination
de la teneur en azote dans le lait.
Pour exprimer la teneur en protines vraies, le rsultat
obtenu pour la teneur en azote protique est multipli par
6,38.
8. CALCUL ET EXPRESSION DES RESULTATS
8.1 Calcul de la teneur en azote protique
8.1.1 Calculer la teneur en azote protique de
l'chantillon pour essai, wpn, laide de l'quation
suivante :
1,4007 (Vs - Vb) Mr
wpn =
m admis pour exprimer la teneur en azote en tant que teneur
O
Wpn : est la teneur en azote protique de l'chantillon
pour essai, exprime sous forme de pourcentage en
masse ;
Vs : est la valeur numrique du volume, en millilitres,
de l'acide chlorhydrique (3.2) utilis dans la
dtermination, exprime 0,05 ml prs ;
Vb : est la valeur numrique du volume, en millilitres,
de l'acide chlorhydrique (3.2) utilis dans l'essai blanc,
exprime 0,05 ml prs ;
Mr : est la valeur numrique de la molarit exacte de
l'acide chlorhydrique (3.2), exprime quatre dcimales
prs ;
m : est la valeur numrique, en grammes, de la masse de
la prise d'essai (7.1), exprime 0,1 mg prs.
8.1.2 Exprimer les rsultats obtenus quatre dcimales
prs, si c'est ncessaire pour des calculs ultrieurs. S'il
s'agit de rsultats finaux, exprimer la teneur en azote
trois dcimales prs et la teneur en protines deux
dcimales.
Il convient de ne pas arrondir les rsultats avant
l'utilisation finale de la valeur d'essai.
Note - Cela est particulirement vrai lorsque les valeurs
sont appeles tre utilises pour des calculs ultrieurs.
C'est le cas, par exemple, lorsque les valeurs d'essai
individuelles obtenues partir de l'analyse de plusieurs
chantillons sont utilises pour calculer les statistiques de
performance de la mthode concernant les variations
intralaboratoires et interlaboratoires.
11
C'est galement le cas lorsque les valeurs servent de
rfrence pour l'talonnage d'un instrument (par exemple
un analyseur de lait infrarouge), o les valeurs
concernant plusieurs chantillons seront utilises pour un
calcul de rgression simple ou multiple.
Dans ces cas-l, il convient de ne pas arrondir les
rsultats obtenus avant de les utiliser pour les calculs
ultrieurs.
8.2 Calcul de la teneur en protines vraies
8.2.1 Calculer la teneur en protines vraies de
l'chantillon pour essai, Wp, l'aide de l'quation
suivante:
Wp = Wpn x 6,38
O
Wp: est la teneur en protines vraies de l'chantillon
pour essai, exprime sous forme de pourcentage en
masse ;
Wpn : est la teneur en azote protique de l'chantillon
pour essai, exprime sous forme de pourcentage en masse,
quatre dcimales prs (8.1 ) ;
6,38 : est le coefficient multiplicateur gnralement
en protines vraies.
8.2.2 Exprimer les rsultats obtenus pour la teneur en
protines vraies trois dcimales prs, si c'est ncessaire
pour des calculs ultrieurs. S'il s'agit de rsultats finaux
(8.1), deux dcimales suffisent.
9. FIDELITE
9.1 Essai interlaboratoires
Les valeurs de rptabilit et de reproductibilit sont
issues des rsultats d'un essai interlaboratoires. Les
valeurs drives de cet essai peuvent ne pas tre
applicables aux plages de concentration et matrices autres
que celles indiques.
9.2 Rptabilit
La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
individuels indpendants, obtenus l'aide de la mme
mthode sur un matriau identique soumis l'essai dans le
mme laboratoire par le mme oprateur utilisant le mme
appareillage dans un court intervalle de temps, n'excdera
que dans 5 % des cas au plus les valeurs suivantes :
0,0038 % pour la teneur en azote protique ;
0,024 % pour la teneur en protines vraies.
9.3 Reproductibilit
La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
individuels, obtenus l'aide de la mme mthode sur un
matriau identique soumis l'essai dans des laboratoires
diffrents par des oprateurs diffrents utilisant des
appareillages diffrents, n'excdera que dans 5 % des cas
au plus les valeurs suivantes :
0,0092 % pour la teneur en azote protique ;
0,059 % pour la teneur en protines vraies.
6666

22 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 67
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 14 Safar 1435 correspondant au 17
dcembre 2013 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur en matire grasse
dans le fromage.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 13-312 du 5 Dhou
EL Kaada 1434 correspondant au 11 septembre 2013
portant nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
19 Moharram 1436
12 novembre 2014
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Arrte :
Article ler. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode de dtermination de la
teneur en matire grasse dans le fromage.
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en matire
grasse dans le fromage, les laboratoires du contrle de la
qualit et de la rpression des fraudes et les laboratoires
agrs cet effet doivent employer la mthode jointe en
annexe du prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 14 Safar 1435 correspondant au
17 dcembre 2013.
Mustapha BENBADA.
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION
DE LA TENEUR EN MATIERE GRASSE
DANS LE FROMAGE
La prsente mthode dite (Van Gulik) spcifie une
technique pour la dtermination de la teneur en matire
grasse dans les fromages (fraction massique).
Cette mthode est applicable tous les types de
fromages. Cependant, elle peut ne pas donner entirement
satisfaction lorsqu'elle est applique des fromages
moisissures internes (fromages bleus).
1. DEFINITIONS
Pour les besoins de la prsente mthode, les dfinitions
suivantes s'appliquent :
1.1 Mthode Van Gulik
Technique conventionnelle qui, applique un fromage,
donne une teneur en matire grasse, exprime en grammes
pour 100 g de fromage.
1.2 Teneur en matire grasse du fromage
Fraction massique de substances dtermine selon le
mode d'emploi spcifi dans la prsente mthode.
Note - La teneur en matire grasse est exprime en
grammes pour 100 g, numriquement quivalent une
fraction massique en pourcentage.
6677
19 Moharram 1436
12 novembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 67
2. PRINCIPE
Aprs dissolution des protines du fromage au moyen
d'acide sulfurique, il est procd la sparation de la
matire grasse par centrifugation dans un butyromtre de
Van Gulik (4.1), la sparation tant favorise par
l'addition d'une petite quantit d'alcool iso-amylique.
Obtention de la teneur en matire grasse par lecture
directe sur l'chelle du butyromtre.
3. REACTIFS
Utiliser uniquement des ractifs de qualit analytique
reconnue et de l'eau distille ou dminralise ou de l'eau
de puret quivalente.
3.1 Acide sulfurique
L'acide sulfurique doit avoir une masse volumique,
20 C, de (1,522 0,005) g/ml, ce qui correspond une
fraction volumique de 61,72 % 62,63 % de H2S04.
L'acide doit tre incolore ou peine ambr, et ne contenir
aucune impuret pouvant agir sur les rsultats.
3.2 Alcool iso-amylique
3.2.1 Composition
Une fraction volumique d'au moins 99% d'alcool
iso-amylique doit tre compose des alcools primaires
3-mthylbutane-l-ol et 2-mthylbutane-1-ol, les seules
impurets notables tolres tant le 2-mthylpropane-l-ol
et le butane-1-ol. Il doit tre exempt de pentanols
secondaires, de 2-mthylbutane-2- 01, furane-2-al
(furfural,furane- 2-carboxaldhyde, 2-furaldhyde),
d'essence et de drivs du benzne. Seules des traces d'eau
peuvent tre tolres.
3.2.2 Aspect
L'alcool iso-amylique doit tre clair et incolore.
3.2.3 Masse volumique
L'alcool iso-amylique doit avoir une masse volumique
20 C de 0,808 g/ml 0,818 g/ml.
3.2.4 2- Furaldhyde et autres impurets organiques
Un mlange de 5 ml d'alcool iso-amylique et de 5 ml
d'acide sulfurique (3.1) doit avoir au plus une couleur
jaune ou lgrement brune.
3.2.5 Intervalle de distillation
Quand l'alcool iso-amylique est distill sous une
pression de 101,3 kPa, une fraction volumique d'au moins
98% doit tre distill au-dessous de 132 C et une fraction
volumique de pas plus de 5 % en dessous de 128 C.
L'alcool ne doit laisser aucun rsidu aprs distillation.
Si, au cours de la distillation, la pression atmosphrique
est infrieure ou suprieure 101,3 KPa, il est
recommand respectivement d'abaisser ou d'lever les
tempratures indiques de 3,3 C/ KPa.
68
23
3.2.6 Essai de conformit
Un alcool iso-amylique peut satisfaire aux exigences de
(3.2.1 3.2.5) et n'tre pas utilisable pour la mthode Van
Gulik. En consquence, vrifier, avant utilisation,
l'aptitude l'emploi de l'alcool iso-amylique, au moyen
des essais comparatifs suivants effectus avec un alcool
iso-amylique talon.
3.2.6.1 Alcool iso-amylique talon
Distiller un alcool iso-amylique satisfaisant aux
exigences de (3.2.1 3.2.5), avec une colonne de
fractionnement convenable, en prenant une fraction dans
un intervalle de 2 C entre 128 C et 131,5 C (3.2.5).
Effectuer les essais suivants sur cette fraction :
a) Lorsqu'on la contrle par chromatographie
gaz-liquide, elle doit tre compose d'au moins 99 %
(fraction volumique) de mthyl-3 butanol-l et de mthyl-2
butanol-l.Les impurets autres que le mthyl-2 propanol-l
et le butanol-l ne doivent tre prsentes qu' l'tat de
traces.
b) Lorsqu'elle est distille par fractionnement, les
premiers 10 % par volume et les derniers 10 % par
volume recueillis lorsqu'ils sont compars au moyen du
mode opratoire dcrit en (3.2.6.2), doivent donner des
teneurs en matire grasse du lait ne diffrant pas de plus
de 0,015 % par masse.
Si la fraction satisfait ces deux essais, elle peut tre
considre comme alcool iso-amylique talon. L'alcool
iso-amylique talon peut tre utilis pendant plusieurs
annes, pour autant qu'il soit conserv dans un endroit
sombre et frais.
3.2.6.2 Mode opratoire pour les essais comparatifs
Dterminer en double, par la mthode Gerber , la teneur
en matire grasse de quatre chantillons de lait entier
ayant une teneur moyenne en matire grasse, en se servant
du butyromtre dont l'erreur de graduation a t
dtermine, et l'acide sulfurique de qualit convenable.
Dans un chantillon de chaque paire, utiliser 1 ml
d'alcool iso-amylique soumis vrification et, dans l'autre,
1 ml d'alcool iso-amylique talon (3.2.6.1).
Conserver les butyromtres placs au hasard partir de
l'agitation jusqu' la fin de l'opration. Effectuer les
lectures (par deux personnes au moins) 0,02% par masse
de matire grasse prs, et les corriger ensuite pour tenir
compte des erreurs d'chelles des butyromtres.
La teneur moyenne en matire grasse des quatre
chantillons de lait, obtenue avec l'alcool iso-amylique
vrifier, ne doit pas diffrer de plus de 0,015 % par masse
de matire grasse de la valeur moyenne obtenue avec
l'alcool iso-amylique talon.
Au lieu de l'alcool iso-amylique spcifi, on peut
utiliser un alcool iso-amylique artificiel ou de
remplacement, ventuellement color, pourvu qu'il soit
reconnu satisfaisant aux essais selon le mode opratoire
dcrit dans le prsent paragraphe.
 19 Moharram 1436
24 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 67 12 novembre 2014

4. APPAREILLAGE Note - L'acclration centrifuge relative obtenue dans

une centrifugeuse est donne par la formule suivante :
Matriel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui
suit:
1,12 r n2 x 10-6
4.1 Butyromtre Van Gulik ;
4.2 Systme de pesage, adaptable au gros bouchon du O
butyromtre. Une capsule ou une feuille de matire
plastique peut galement tre utilise ; r : est le rayon horizontal effectif, en millimtres ;

4.3 Pipette ou appareillage de mesurage
automatique, permettant de dlivrer l'acide sulfurique
(3.1) ;
4.4 Pipette ou appareillage de mesurage
automatique, permettant de dlivrer (1 0,05) ml
d'alcool iso-amylique (3.2) ;
4.5 Balance analytique, pouvant peser 0,001 g prs ;
n : est la frquence de rotation, en tours par minute.
4.7 Bain d'eau, pour les butyromtres, pouvant tre
maintenus la temprature de (65 2) C et permettant de
maintenir les butyromtres (4.1) en position verticale, les
chelles tant entirement immerges ;
4.8 Thermomtre, appropri, destin vrifier la
temprature du bain d'eau (4.7) ;

4.6 Centrifugeuse, dans laquelle les butyromtres
peuvent tre placs, munie d'un indicateur de frquence de
rotation gradu en nombre de tours la minute, avec une
tolrance maximale de 50 r/min et de prfrence
chargement vertical plutt qu' chargement horizontal.
La centrifugeuse, lorsqu'elle est charge, doit tre
capable d'exercer en 2 min une acclration centrifuge
relative de (350 50) g l'extrmit du bouchon du
butyromtre.
Une telle acclration centrifuge peut tre obtenue avec
des centrifugeuses ayant le rayon effectif suivant (distance
horizontale entre l'axe de la centrifugeuse et l'extrmit
extrieure des bouchons des butyromtres) et fonctionnant
la frquence de rotation indique dans le tableau
suivant :
Rayon effectif de centrifugeuse et frquence de
rotation pour produire une acclration centrifuge de
(350 50) g
4.9 Rpe, ou autre appareil pour broyer le fromage.
5. ECHANTILLONNAGE
Il est important que le laboratoire reoive un chantillon
rellement reprsentatif, non endommag ou modifi lors
du transport et de l'entreposage.
6. MODE OPERATOIRE
6.1 Prparation de l'chantillon pour essai
Retirer la crote ou la partie superficielle tache ou
moisie du fromage, de faon obtenir un chantillon
reprsentatif du fromage, tel qu'il est consomm. Broyer
l'chantillon avec un broyeur appropri (4.9). Mlanger
rapidement la partie broye et, si possible, broyer et
mlanger soigneusement une seconde fois.

Si l'chantillon (par exemple du fromage pte molle)

Rayon effectif Frquence de rotation ne peut pas tre broy, le mlanger avec soin en le
mm 70 r/min
ptrissant nergiquement.
240 1140 Transfrer immdiatement l'chantillon prtrait, ou une
245 1130 portion reprsentative de celui-ci, dans un rcipient muni
d'un couvercle tanche l'air.
250 1120
Effectuer l'analyse, le plus tt possible aprs broyage et
255 1110
mlange. Si un dlai est invitable, prendre toutes les
260 1100 prcautions pour conserver l'chantillon de faon
convenable et pour viter la condensation de la vapeur
265 1090 d'eau l'intrieur du rcipient.
270 1080
Il est recommand de ne pas analyser des fromages
275 1070 broys ou mlangs montrant la pousse de moisissures
non dsires ou les signes d'un dbut d'altration.
300 1020
Nettoyer le dispositif aprs avoir broy chaque
325 980
chantillon.

69
19 Moharram 1436
12 novembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 67
6.2 Prise d'essai
Peser, 0,005 g prs, 3 g de l'chantillon pour essai
(6.1) dans un systme de pesage adapt un bouchon
appropri (4.2) ou dans une capsule, ou sur une feuille de
matire plastique.
6.3 Dtermination
6.3.1 Si l'on utilise un systme de pesage adapt un
bouchon, fermer le col du butyromtre (4.1) avec ce
bouchon muni du systme de pesage contenant la prise
d'essai et ajouter de l'acide sulfurique (3.1) par l'ouverture
troite jusqu' ce que le niveau de l'acide atteigne une
hauteur d'environ les deux tiers de la chambre du
butyromtre et que le systme de pesage soit
compltement recouvert d'acide sulfurique.
Si l'on n'utilise pas le systme de pesage, fermer
l'ouverture troite du butyromtre (4.1) avec le petit
bouchon et introduire l'acide sulfurique par le col jusqu'
ce que le niveau de l'acide atteigne une hauteur d'environ
la moiti de la chambre.
Transvaser le fromage dans le butyromtre. Dans le cas
d'utilisation d'une feuille de matire plastique, introduire
le fromage avec la feuille. Fermer le col avec le gros
bouchon, retourner le butyromtre et enlever le petit
bouchon.
6.3.2 Placer le butyromtre, col en bas (c'est--dire
large ouverture) durant 5 min, dans le bain d'eau (4.7),
(65 2) C.
6.3.3 Retirer le butyromtre du bain d'eau et l'agiter
nergiquement durant l0 s.
6.3.4 Rpter les oprations dcrites en (6.3.2) et (6.3.3)
jusqu' ce que les protines soient compltement
dissoutes. En gnral 1 h est ncessaire pour atteindre ce
rsultat. Poursuivre ces oprations durant 15 min aprs
que les protines ont t dissoutes.
Note - Il est possible d'utiliser un appareil d'agitation
mcanique pour autant qu'il donne les mmes rsultats
qu'avec l'agitation manuelle spcifie ci-dessus.
6.3.5 Retirer le butyromtre du bain d'eau et, aprs avoir
soigneusement agit, ajouter 1 ml d'alcool iso-amylique
(3.2) par l'ouverture troite. Agiter immdiatement durant
au moins 3 s.
6.3.6 Ajouter de l'acide sulfurique par l'ouverture troite
jusqu' ce que le niveau atteigne le trait repre 35 % de
l'chelle. Fermer immdiatement avec le petit bouchon et
retourner le butyromtre.
6.3.7 Agiter le butyromtre nergiquement durant 10 s
ds que la matire grasse est monte dans la chambre du
butyromtre. Retourner nouveau de faon que l'acide
s'coule de la tige. Rpter deux fois les oprations de
retournement et d'agitation.
70
25
6.3.8 Placer le butyromtre, col en bas, dans le bain
d'eau durant 5 min, le niveau de l'eau tant maintenu
au-dessus du sommet de la colonne de matire grasse dans
le butyromtre.
6.3.9 Retirer le butyromtre du bain d'eau, ajuster le
gros bouchon de faon amener la colonne de matire
grasse dans la partie gradue, et centrifuger le butyromtre
une acclration centrifuge relative de (350 50) g
durant 10 min.
6.3.10 Placer le butyromtre, col en bas, dans le bain
d'eau durant 5 min, le niveau de l'eau tant maintenu
au-dessus du sommet de la colonne de matire grasse dans
le butyromtre.
6.3.11 Retirer le butyromtre du bain d'eau et ajuster
soigneusement le gros bouchon afin d'amener l'extrmit
infrieure de la colonne de matire grasse, en la dplaant
au minimum, un trait repre et, de prfrence, un trait
repre chiffr. Oprer de prfrence en tirant lgrement
sur le bouchon et non en l'enfonant de force dans le col.
Noter le trait repre concidant avec l'extrmit
infrieure de la colonne de matire grasse, puis, en ayant
soin de ne pas bouger celle-ci, noter aussi rapidement que
possible le trait repre concidant avec le point le plus bas
du mnisque situ au sommet de la colonne de matire
grasse ; cette lecture doit tre faite la moiti du
plus petit chelon prs (0,25 %).
Pendant les lectures, le butyromtre doit tre tenu
verticalement et l'il doit tre au niveau du point de
lecture.
Note - Si la matire grasse est trouble ou de couleur
fonce, ou s'il y a un dpt noir ou blanc au bas de la
colonne de matire grasse, la valeur obtenue pour la
teneur en matire grasse ne sera pas exacte.
7. EXPRESSION DES RESULTATS
7.1 Mode de calcul
La teneur en matire grasse, exprime en grammes pour
100 g de fromage, est gale
BA
O
A: est la lecture faite l'extrmit infrieure de la
colonne de matire grasse ;
B : est la lecture faite l'extrmit suprieure de la
colonne de matire grasse.
7.2 Rptabilit
La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
individuels indpendants, obtenus l'aide de la mme
mthode sur un matriau identique soumis l'essai dans le
mme laboratoire par le mme oprateur utilisant le mme
appareillage et dans un court intervalle de temps, ne
dpassera pas une valeur correspondant un chelon
(0,5%).
3 Rabie El Aouel 1436
25 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 74 15

ARRETES, DECISIONS ET AVIS

MINISTERE DU COMMERCE

Arrt du 26 Ramadhan 1434 correspondant au 4 aot

2013 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur en matire grasse dans
le lait.

Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 12-326 du 17 Chaoual 1433
correspondant au 4 septembre 2012 portant nomination
des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu l'arrt interministriel du 29 Safar 1414
correspondant au 18 aot 1993 relatif aux spcifications et
la prsentation de certains laits de consommation ;

71
 3 Rabie El Aouel 1436
16 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 74 25 dcembre 2014

Vu l'arrt interministriel du 7 Rabie Ethani 1418
correspondant au 10 aot 1997 relatif aux spcifications
techniques des laits concentrs non sucrs et
sucrs et aux conditions et modalits de leur
prsentation ;
Teneur en matire grasse du lait : fraction massique
de substances, dtermine par la prsente mthode et
exprime comme fraction massique et en pourcentage.
2. PRINCIPE

Vu l'arrt interministriel du 13 Chabane 1419 Une solution ammoniaco-thanolique d'une prise d'essai
correspondant au 2 dcembre 1998 relatif aux est extraite au moyen d'oxyde dithylique et d'ther de
spcifications techniques des laits en poudre et aux ptrole. Les solvants sont limins par distillation ou
conditions et modalits de leur prsentation ; vaporation, puis la masse des substances extraites est
Vu l'arrt du 17 Rajab 1420 correspondant au 27 dtermine.
octobre 1999, modifi et complt, relatif aux
spcifications du lait en poudre industriel et aux 3.RACTIFS
conditions et modalits de sa prsentation, son utilisation
et sa commercialisation ; Sauf indication diffrente, utiliser uniquement des
ractifs de qualit analytique reconnue et de l'eau distille
Arrte : ou dminralise, ou de l'eau de puret, au moins,
quivalente.
Artticle 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, Les ractifs ne doivent pas laisser de rsidu apprciable
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet lorsque la dtermination est effectue selon la mthode
de rendre obligatoire la mthode de dtermination de la spcifie (7.2.2).
teneur en matire grasse dans le lait.
3.1 Hydroxyde d'ammonium, solution contenant une
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en matire fraction massique NH3 d'environ de 25 % ( 20 = 910
grasse dans le lait, les laboratoires du contrle de la g/l).
qualit et de la rpression des fraudes et les laboratoires
agrs cet effet doivent employer la mthode jointe en Note - Si l'on ne dispose pas d'une solution d'hydroxyde
annexe du prsent arrt. d'ammonium cette concentration, une solution plus
concentre, de concentration connue, peut tre utilise
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire (7.4.1).
lorsqu'une expertise est ordonne.
3.2 thanol (C2H5OH), ou thanol dnatur par du
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal mthanol, contenant une fraction volumique d'thanol d'au
officiel de la Rpublique algrienne amocratique et moins, 94% (A.5).
populaire.
3.3 Solution de rouge-Congo
Fait Alger, le 26 Ramadhan 1434 correspondant au 4
aot 2013. Dans une fiole jauge de 100 ml (4.14), dissoudre dans
de l'eau 1 g de rouge-Congo. Ajuster au trait avec de l'eau.
Mustapha BENBADA.
Note - L'utilisation de cette solution, qui permet de
mieux voir l'interface entre le solvant et la couche
ANNEXE aqueuse, est facultative (7.4.2). D'autres solutions
Mthode de dtermination de la teneur aqueuses de colorants peuvent tre utilises pourvu
en matire grasse dans le lait qu'elles ne modifient pas le rsultat de la dtermination.
mthode gravimtrique (mthode de rfrence)
3.4 Oxyde dithylique (C2H5OC2H5), exempt de
proxydes (A.3) et ne contenant pas plus de 2 mg/kg
La prsente mthode spcifie une technique de d'antioxydants, et conforme aux spcifications de l'essai
rfrence pour la dtermination de la teneur en matire blanc (7.2.2, A.l) et (A.4).
grasse du lait de bonne qualit physicochimique. La
mthode est applicable au lait cru de vache, de brebis et de Note - L'utilisation d'oxyde dithylique comporte des
chvre, au lait allg en matire grasse, au lait crm, au risques. Des tudes sont en cours en vue de remplacer
lait conserv chimiquement et au lait liquide ayant subi un l'oxyde dithylique par un autre ractif, condition que
traitement. Elle n'est pas applicable lorsqu'une plus grande celui-ci ne modifie pas le rsultat final de la
prcision est demande pour le lait crm, par exemple dtermination.
pour connatre l'efficacit de l'opration d'crmage.
3.5 Ether de ptrole, ayant un point dbullition compris
Note - Cette mthode est habituellement dite entre 30 C et 60 C, en alternative, pentane
Rose-Gottlieb. (CH3 [CH2]3 CH3) ayant un point dbullition de 36 C,
conforme aux spcifications de lessai blanc (7.2.2, A.1
1. DEFINITION et A.4).

Pour les besoins de la prsente mthode, le terme et la Note - Il est recommand d'utiliser le pentane car il est
dfinition suivants s'appliquent. d'une puret plus leve et de qualit constante.

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3 Rabie El Aouel 1436
25 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 74
3.6 Mlange de solvants, peu de temps avant l'emploi,
mlanger des volumes gaux d'oxyde dithylique (3.4) et
d'ther de ptrole (3.5).
4. APPAREILLAGE
Note - La dtermination impliquant l'utilisation de
solvants volatiles inflammables, l'appareillage lectrique
utilis doit tre conforme la lgislation concernant les
risques d'utilisation de ces solvants.
Matriel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui
suit.
4.1 Balance analytique, capable de peser 1 mg prs
et avec une prcision d'indication de 0,1 mg.
4.2 Centrifugeuse, dans laquelle les fioles ou les tubes
d'extraction (4.6) peuvent tre soumis une rotation avec
une frquence de 500 tr/min 600 tr/min, afin de produire
une acclration radiale de 80 g 90 g l'extrmit
extrieure des fioles ou des tubes.
Note - L'utilisation d'une centrifugeuse est facultative
mais recommande (7.4.5).
4.3 Appareil de distillation ou d'vaporation,
permettant de distiller les solvants et l'thanol des fioles,
ou de les vaporer des bchers et des capsules (7.4.12)
une temprature n'excdant pas 100 C.
4.4 tuve dessiccation, chauffage lectrique, munie
d'oues de ventilation compltement ouvertes et rglable
une temprature de 102 C 2 C dans l'espace utilis.
L'tuve doit tre munie d'un thermomtre appropri.
4.5 Bain d'eau, pouvant tre maintenu une
temprature comprise entre 35 C et 40 C.
4.6 Fioles d'extraction de la matire grasse, type
Mojonnier.
Note - On peut galement utiliser des tubes d'extraction
de la matire grasse munis d'un siphon ou d'un dispositif
de lavage, mais le mode opratoire est alors diffrent et
est dcrit la note B.
Les fioles doivent tre munies de bouchons en lige de
bonne qualit, ou en une autre matire inaltrable aux
ractifs utiliss [par exemple, caoutchouc silicon ou
polyttrafluorothylne (PTFE)]. Les bouchons en lige
doivent tre lavs l'oxyde dithylique (3.4), maintenus
dans l'eau 60 C ou plus durant au moins 15 min et
ensuite mis refroidir dans l'eau de faon en tre
imprgns au moment de l'emploi.
4.7 Support, pour maintenir les fioles (ou les tubes)
d'extraction de la matire grasse (4.6).
4.8 Flacon de lavage, appropri l'utilisation avec le
mlange de solvants (3.6).
Ne pas utiliser de flacon de lavage en plastique.
17
4.9 Rcipients pour la rcupration de la matire
grasse, par exemple fioles bullition (fioles fond plat)
de l25 ml 250 ml de capacit. fioles coniques de 250 ml
de capacit ou capsules mtalliques.
Si l'on utilise des capsules mtalliques, elles doivent
tre de prfrence en acier inoxydable, fond plat et avoir
un diamtre de 80 mm 100 mm et une hauteur d'environ
50 mm.
4.10 Rgularisateurs d'bullition, exempts de matire
grasse, en porcelaine non poreuse ou en carbure de
silicium (facultatif si l'on utilise des capsules mtalliques).
4.11 Eprouvettes gradues, de 5 ml et 25 ml capacit.
4.12 Pipettes, gradues, de 10 ml de capacit.
4.13 Pinces mtalliques, appropries pour tenir les
fioles, les bchers ou les capsules.
4.14 Fioles jauges, un trait, de 100 ml de capacit.
5. CHANTILLONNAGE
L'chantillonnage se fait dans des conditions
appropries.
Il est important que le laboratoire reoive un chantillon
rellement reprsentatif, non endommag ou modifi lors
du transport et de l'entreposage.
Conserver tous les chantillons liquides, visqueux ou
pteux une temprature comprise entre 2 C et 6 C
partir du moment de l'chantillonnage jusqu'au
commencement du mode opratoire.
6. PRPARATION DE L'CHANTILLON POUR
ESSAI
Amener l'chantillon pour essai une temprature de
38 C 2 C, en utilisant le bain d'eau (4.5). Bien
mlanger l'chantillon, mais doucement, au moyen de
retournements rpts du rcipient, sans causer de mousse
ou de barattage, puis refroidir rapidement l'chantillon
pour essai environ 20 C 2 C. Ne pas refroidir les
chantillons de lait baratt, car ceux-ci doivent tre pess
une temprature situe entre 30 C et 40 C (7.1).
S'il est possible d'obtenir un chantillon pour essai
homogne sans prchauffage une temprature de 38 C
2 C (par exemple pour les chantillons de lait crm),
il convient de suivre le mode opratoire suivant.
Amener la temprature de lchantillon pour essai
20 C 2 C. Mlanger soigneusement afin dassurer une
rpartition homogne de la matire grasse dans
lchantillon pour essai. Ne pas agiter trop vigoureusement,
afin de ne pas causer de mousse de lait ni de barattage de
la matire grasse.
73

18 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 74
Note - Il ne faut pas s'attendre avoir une valeur
correcte de la teneur en matire grasse :
a) si le lait est baratt ;
b) quand une odeur distincte d'acides gras libres est
perceptible ;
c) si pendant ou aprs la prparation de l'chantillon
pour essai, des particules blanches sont visibles sur les
parois du rcipient de l'chantillon ou si des gouttelettes
de matire grasse flottent la surface de l'chantillon.
7. MODE OPERATOIRE
Note 1 - S'il est demand de vrifier que l'on satisfait
aux exigences donnes en ce qui concerne la limite de
rptabilit (9.2), effectuer deux dterminations spares
conformment (7.1) (7.4).
Note 2 - Un autre mode opratoire utilisant des tubes
d'extraction de la matire grasse munis de siphon ou de
dispositif de lavage (la note en 4.6) est dcrit dans la note
B.
7.1 Prise d'essai
Mlanger l'chantillon pour essai (point 6) en retournant
doucement le rcipient trois ou quatre fois. Peser
immdiatement, 1 mg prs, directement ou par
diffrence, dans une fiole d'extraction (4.6), 10 g 11 g de
l'chantillon pour essai.
La prise d'essai doit tre place aussi compltement que
possible dans le bulbe infrieur (troit) des fioles
d'extraction.
7.2 Essais blanc
7.2.1 Essai blans pour la mthode
Effectuer un essai blanc simultanment avec la
dtermination, en utilisant le mme mode opratoire et les
mmes ractifs, mais en remplaant la prise dessai
indique en 7.4.1 par 10 ml d'eau (A.2).
Lorsqu'un lot d'chantillons pour essai est analys, le
nombre de cycles de schage peut varier entre des
chantillons diffrents. Si un chantillon blanc est utilis
pour le lot entier, s'assurer que la valeur blanc utilise
dans le calcul de la teneur en matire grasse d'un
chantillon individuel a t obtenue dans les mmes
conditions que l'chantillon pour essai individuel.
Si la valeur obtenue pour l'essai blanc dpasse
rgulirement 1,0 mg, vrifier les ractifs si cela n'a pas
t fait rcemment (7.2.2). Les corrections faites pour des
valeurs suprieures 2,5 mg doivent figurer dans le
bulletin d'analyse.
3 Rabie El Aouel 1436
25 dcembre 2014
7.2.2 Essai blanc pour les ractifs
Pour vrifier la qualit des ractifs, effectuer un essai
blanc comme mentionn en (7.2.1). En outre, pour les
contrles de masses, utiliser un rcipient de rcupration
de la matire grasse vide, prpar comme spcifi en
(7.3). Les ractifs ne doivent pas laisser de rsidus
suprieur 1,0 mg (A.1).
Si les rsidus des ractifs de l'essai blanc complet sont
suprieurs 1,0 mg, dterminer les rsidus des solvants
sparment en distillant respectivement 100 ml d'oxyde
dithylique (3.4) et d'ther de ptrole (3.5). Utiliser un
rcipient de contrle vide pour obtenir la masse relle de
rsidus qui ne doit pas tre suprieure 1,0 mg.
Il peut arriver que les ractifs contiennent des matires
volatiles qui sont fortement retenues dans la matire
grasse. S'il y a des indications de la prsence de telles
substances, effectuer des essais blanc sur tous les
ractifs et pour chaque solvant, en utilisant pour chacun
un rcipient pour la matire grasse, avec environ 1 g de
matire grasse du beurre anhydre. Si ncessaire, distiller
nouveau les solvants en prsence de 1 g de matire grasse
du beurre anhydre pour 100 ml de solvant. Utiliser les
solvants juste aprs redistillation.
Remplacer les ractifs ou solvants non satisfaisants, ou
redisliller les solvants.
7.3 Prparation du rcipient pour la rcupration de
la matire grasse
Scher, pendant 1 h, un rcipient (4.9) avec quelques
rgularisateurs dbullition (4.10) ltuve (4.4) rgle
102 C 2 C.
Note 1 - Les rgularisateurs d'bullition sont
recommands pour permettre une bullition modre au
cours de l'limination ultrieure des solvants, notamment
dans le cas de rcipients en verre; leur utilisation est
facultative dans le cas de capsules mtalliques.
Protger le rcipient des poussires et le laisser refroidir
la temprature de la salle des balances (rcipients en
verre pendant au moins 1 h, capsules mtalliques pendant
au moins 30 min).
Note 2 - Pour viter un refroidissement insuffisant ou
des priodes de refroidissement exagrment prolonges,
il convient que le rcipient ne soit pas plac dans un
dessiccateur.
A l'aide de pinces (4.13), placer le rcipient sur la
balance. Peser, 1,0 mg prs, le rcipient pour la
rcupration de la matire grasse.
Note 3 - Il convient d'utiliser de prfrence des pinces
pour viter, en particulier, des variations de temprature.
74
3 Rabie El Aouel 1436
25 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 74
7.4 Dtermination
7.4.1 Dbuter la dtermination dans un dlai de 1 h
suivant le pesage de l'chantillon.
Ajouter 2 ml de solution d'hydroxyde d'ammonium
(3.1) la prise d'essai (7.1) se trouvant dans la fiole
d'extraction, ou un volume quivalent d'une solution plus
concentre (note 3.1). Mlanger vigoureusement avec la
prise d'essai dans le bulbe troit de la fiole.
7.4.2 Ajouter 10 ml d'thanol (3.2). Mlanger
doucement, mais fond, en laissant le contenu de la fiole
aller et venir entre les deux bulbes. viter d'amener le
liquide trop prs du col de la fiole.
Ajouter, si ncessaire, 2 gouttes de solution de
rouge-Congo (3.3). Si ncessaire, refroidir de nouveau la
fiole la temprature ambiante.
7.4.3 Ajouter 25 ml d'oxyde dithylique (3.4), Boucher
la fiole avec un bouchon en lige satur deau, ou avec un
bouchon dune autre matire (4.6), mouill avec de l'eau.
Agiter la fiole vigoureusement pendant 1 min, mais sans
excs afin dviter la formation dmulsions persistantes.
Lors de l'agitation, maintenir la fiole en position
horizontale, le bulbe troit tant en haut, en laissant de
temps en temps le liquide du bulbe large passer dans le
bulbe troit. Si ncessaire, refroidir la fiole l'eau
courante jusqu' temprature ambiante. Retirer avec
prcaution le bouchon en lige ou le dispositif de
fermeture et le rincer, ainsi que le col de la fiole, avec une
petite quantit de mlange de solvants (3.6). Utiliser un
flacon de lavage (4.8), de faon que les liquides de rinage
coulent dans la fiole.
7.4.4 Ajouter 25 ml d'ther de ptrole (3.5). Boucher la
fiole avec le bouchon en lige rhumidifi, ou l'autre
bouchon rhumidifi (en le trempant dans l'eau), et agiter
nouveau doucement la fiole pendant 30 s comme dcrit
en (7.4.2). Poursuivre en agitant comme dcrit en (7.4.3).
7.4.5 Centrifuger (4.2) la fiole bouche pendant 1 min
5 min avec une acclration radiale de 80 g 90 g. Si l'on
ne dispose pas de centrifugeuse, laisser la fiole bouche
reposer sur le support (4.7) pendant, au moins, 30 min,
jusqu' ce que la couche surnageante soit claire et
nettement spare de la couche aqueuse. Si ncessaire,
refroidir la fiole l'eau courante jusqu' temprature
ambiante.
7.4.6 Enlever avec prcaution le bouchon en lige ou le
dispositif de fermeture et le rincer, ainsi que l'intrieur du
col de la fiole, avec un peu de mlange de solvants (3.6).
Utiliser un flacon de lavage (4.8) de faon que les liquides
19
de rinage coulent dans la fiole. Si l'interface se situe
au-dessous du fond du col de la fiole, la faire monter ce
niveau en ajoutant doucement de l'eau par le ct de la
fiole (Figure 1), afin de permettre la dcantation du
solvant.
Note - Dans les Figures 1 et 2, il a t choisi l'un parmi
les trois types de flacons spcifis selon les standards
internationaux.
7.4.7 Tenir la fiole dextraction par le bulbe troit,
dcanter avec soin le plus possible de la couche
surnageante dans le rcipient prpar, destin la
rcupration de la matire grasse (7.3), contenant
quelques rgularisations dbullition (4.10) dans le cas des
fioles (facultatif avec les capsules mtalliques). Eviter de
dcanter une partie quelconque de la couche acqueuse
(figure 2).
7.4.8 Rincer l'extrieur du col de la fiole d'extraction
avec un peu de mlange de solvants (3.6). Recueillir les
liquides de rinage dans le rcipient pour la rcupration
de la matire grasse. Prendre soin que le mlange de
solvants ne soit pas projet sur l'extrieur de la fiole
d'extraction. Si ncessaire, liminer le solvant totalement
ou partiellement du rcipient par distillation ou
vaporation comme dcrit en (7.4.12).
7.4.9 Ajouter 5 ml d'thanol (3.2) au contenu de la fiole
d'extraction. Utiliser de l'thanol pour rincer l'intrieur du
col de la fiole et mlanger comme dcrit en (7.4.2).
7.4.10 Effectuer une seconde extraction en
recommenant les oprations dcrites de 7.4.3 7.4.7
inclus, mais en utilisant au lieu de 25 ml, seulement
15 ml d'oxyde dithylique (3.4) et 15 ml d'ther de
ptrole (3.5). Utiliser galement l'oxyde dithylique
pour rincer l'intrieur du col de la fiole
d'extraction.
Si ncessaire, faire monter l'interface au milieu du col
de la fiole d'extraction en ajoutant doucement de l'eau par
le col de la fiole (Figure 1) pour permettre la dcantation
finale des solvants d'tre aussi complte que possible
(Figure 2).
7.4.11 Effectuer une troisime extraction, sans addition
d'thanol, en rptant de nouveau les oprations dcrites
de (7.4.3) (7.4.7) inclus, mais en utilisant de nouveau
seulement 15 ml d'oxyde dithylique (3.4) et 15 ml d'ther
de ptrole (3.5). Utiliser l'oxyde dithylique pour rincer
l'intrieur du col de la fiole d'extraction.
Si ncessaire, faire monter l'interface au milieu du col
de la fiole d'extraction en ajoutant doucement de l'eau par
le col de la fiole ( Figure 1) pour permettre la
dcantation finale des solvants d'tre aussi complte que
possible (Figure 2).
75

20 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 74
Figure 1 - Avant dcantation
Lgende
1 : Solvants
2 : A la seconde et troisime extraction
3 : A la premire extraction
4 : Interface
5 : Couche aqueuse
Note - La troisime extraction nest pas ncessaire pour
du lait ayant une teneur en matire grasse infrieure
0,5 %.
7.4.12 liminer les solvants (thanol compris) aussi
compltement que possible par distillation si l'on utilise
une fiole, ou par vaporation si l'on utilise un bcher ou
une capsule (4.3). Rincer l'intrieur du col de la fiole avec
un peu de mlange de solvants (3.6) avant de commencer
la distillation.
7.4.13 Chauffer pendant 1 h, dans l'tuve dessiccation
(4.4) rgle 102 C 2 C, le rcipient pour la
rcupration de la matire grasse, la fiole tant place en
position incline afin de permettre aux vapeurs de solvants
de s'chapper. Enlever le rcipient pour la rcupration de
la matire grasse de l'tuve et vrifier immdiatement si la
matire grasse est claire ou non. Si la matire grasse n'est
pas claire on peut supposer qu'il y a prsence d'une
matire grasse trangre et l'ensemble de la dtermination
doit tre refait.
Figure 2 - Aprs dcantation
Lgende
1: A la seconde et troisime extraction
2: la premire extraction
3: Couche aqueuse
4: Interface
3 Rabie El Aouel 1436
25 dcembre 2014
Si la matire grasse est claire, protger le rcipient
collecteur de la poussire et le laisser refroidir (pas dans
un dessiccateur) la temprature de la salle des balances
(rcipient en verre pendant, au moins, 1 h, capsule
mtallique pendant au moins 30 min).
Ne pas essuyer le rcipient juste avant la pese. Placer
le rcipient sur la balance au moyen d'une paire de pinces
(4.13). Peser le rcipient pour la rcupration de la
matire grasse 1,0 mg prs.
7.4.14 Chauffer pendant 30 min supplmentaires, dans
l'tuve dessiccation (4.4) rgle 102 C 2 C, le
rcipient pour la rcupration de la matire grasse, la fiole
tant place en position incline afin de permettre aux
vapeurs de solvants de s'chapper. Rpter les oprations
de pese dcrites en (7.4.13), jusqu' ce que la masse du
rcipient d'extraction de la matire grasse diminue de 1,0
mg ou moins, ou augmente, entre deux peses
successives. Noter la masse minimale comme tant la
masse du rcipient d'extraction de la matire grasse et de
la matire extraite.
8. CALCUL ET EXPRESSION DES RESULTATS
8.1 Calcul
Calculer la teneur en matire grasse de lchantillon
laide de lquation suivante :
(m1 - m2)-(m3 - m4)
Wf = x 100 %
m0
O
Wf : est la fraction massique, en pourcentage, de la
matire grasse dans lchantillon ;
m0 : est la masse, en grammes, de la prise dessai (7.1) ;
m1 : est la masse, en grammes, du rcipient pour la
rcupration de la matire grasse et de la matire extraite
dtermine en (7.4.14) ;
m2 : est la masse, en grammes, du rcipient pour la
rcupration de la matire grasse (7.3) ;
m3 : est la masse, en grammes, du rcipient pour la
rcupration de la matire grasse utilis pour lessai
blanc (7.2) et de la matire extraite, dtermine en
(7.4.14) ;
m4 : est la masse, en grammes, du rcipient pour la
rcupration de la matire grasse (7.3) utilis pour lessai
blanc (7.2).
8.2 Expression des rsultats
Arrondir le rsultat deux dcimales.
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25 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 74
9 Fidlit
9.1 Essai interlaboratoires
Les valeurs de rptabilit et de reproductibilit sont
exprimes au niveau de probabilit de 95 % et peuvent ne
pas s'appliquer aux plages de concentrations ou matrices
autres que celles donnes.
9.2 Rptabilit
La diffrence absolue entre deux rsultats dessai
individuels indpendants, obtenus laide de la mme
mthode sur un matriau identique soumis lessai dans
le mme laboratoire par le mme oprateur utilisant le
mme appareillage dans un court intervalle de temps,
nexcdera que dans 5 % des cas, au plus, les valeurs
suivantes relatives la fraction massique de matire
grasse :
0,031 % pour le lait de vache crm ;
0,036 % pour le lait de vache allg en matire
grasse ;
0,043 % pour le lait de vache entier ;
0,030 % pour le lait de chvre ;
0,069 % pour le lait de brebis.
9.3 Reproductibilit
La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
individuels indpendants, obtenus l'aide de la mme
mthode sur un matriau identique soumis l'essai dans
des laboratoires diffrents par des oprateurs diffrents
utilisant des appareillages diffrents, n'excdera que dans
5 % des cas, au plus, les valeurs suivantes relatives la
fraction massique de matire grasse:
0,043 % pour le lait de vache crm ;
0,042 % pour le lait de vache allg en matire
grasse ;
0,056 % pour le lait de vache entier ;
0,052 % pour le lait de chvre ;
0,096 % pour le lait de brebis.
NOTE A
Indication sur les modes opratoires
A.1 Essai blanc pour contrler les ractifs (7.2.2)
Dans cet essai blanc, un rcipient de contrle de la
masse doit tre utilis de faon que les changements des
conditions atmosphriques de la salle des balances ou les
effets de la temprature du rcipient de rcupration de la
matire grasse ne rvlent pas faussement la prsence ou
l'absence des matires non volatiles dans l'extrait des
ractifs. Ce rcipient peut tre utilis comme un
contrepoids dans le cas d'une balance plateaux. Par
ailleurs, il convient que les carts de la masse apparente
(m3 - m4 en 8.1) du rcipient de contrle soient retenus
lors du contrle de la masse du rcipient de rcupration
21
de la matire grasse utilis pour l'essai blanc. Par
consquent, le changement de masse apparente du
rcipient de rcupration de la matire grasse, corrig du
changement apparent de masse du rcipient de contrle,
ne doit pas tre suprieur 1,0 mg.
Il peut arriver que les solvants contiennent des matires
volatiles qui sont fortement retenues dans la matire
grasse. S'il y a des indications de la prsence de telles
substances, effectuer des essais blanc sur tous les
ractifs et pour chaque solvant, en utilisant pour chacun
un rcipient pour la matire grasse, avec environ 1 g de
matire grasse du beurre anhydre. Si ncessaire, distiller
nouveau les solvants en prsence de 1 g de matire grasse
du beurre anhydre pour 100 ml de solvant. Utiliser les
solvants juste aprs redistillation,
A.2 Essai blanc effectu en mme temps que la
dtermination (7.2.1)
La valeur obtenue dans l'essai blanc, effectu
paralllement la dtermination, permet de corriger la
masse apparente des substances extraites partir de la
prise d'essai (ml - m2) par rapport aux matires non
volatiles venant des ractifs et galement des changements
de conditions atmosphriques de la salle des balances et
des diffrences de tempratures entre le rcipient de
matire grasse et la salle des balances, lors des deux
peses (7.4.14) et (7.3).
Dans les conditions favorables (valeur faible dans l'essai
blanc sur les ractifs, temprature stable de la salle des
balances, temps de refroidissement suffisant pour le
rcipient de matire grasse), la valeur sera gnralement
infrieure 1,0 mg et pourra alors ne pas tre prise en
compte dans le calcul, dans le cas de dterminations de
routine. On rencontre assez souvent des valeurs (positives
et ngatives) lgrement suprieures jusqu' 2,5 mg.
Aprs correction de ces valeurs, les rsultats seront
encore prcis. Quand les corrections d'une valeur
suprieure 2,5 mg sont appliques, il convient d'en faire
mention dans le bulletin d'analyse.
Si la valeur obtenue dans l'essai blanc dpasse
rgulirement 1,0 mg, il convient de contrler les ractifs
si cela n'a pas t fait rcemment. Il convient que les
ractifs impurs ou ayant des traces soient remplacs ou
purifis (7.2.2) et (A. 1 ).
A.3 Contrle pour vrifier la prsence de peroxydes
Pour vrifier la prsence de peroxydes, ajouter 1 ml
d'une solution d'iodure de potassium 100 g/l rcemment
prpare, 10 ml d'oxyde dithylique, dans une petite
prouvette munie d'un bouchon en verre, et pralablement
rince avec un peu d'oxyde dithylique. Agiter et laisser
reposer pendant 1 min. Il convient qu'aucune coloration
jaune ne soit constate dans l'une ou l'autre des deux
couches.
D'autres mthodes peuvent tre utilises pour contrler
la prsence de peroxydes.
77

22 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 74
Pour tre sr que l'oxyde dithylique est exempt de
peroxydes, et en reste exempt, traiter l'oxyde dithylique
comme ci-dessous, au moins, 3 jours avant son utilisation.
Couper du zinc en feuille, en bandes pouvant atteindre,
au moins, le milieu du rcipient contenant l'oxyde
dithylique, en utilisant, environ, 80 cm2 de feuille de zinc
par litre d'oxyde dithylique.
Avant utilisation, immerger totalement les bandes
pendant 1 min dans une solution contenant 10 g de sulfate
de cuivre(II) pentahydrat (CuS04,5H20) et 2 ml/1 d'acide
sulfurique concentr (fraction massique de 98 %).
Laver doucement et avec soin les bandes l'eau,
introduire les bandes humides traites au cuivre dans le
rcipient contenant l'oxyde dithylique et laisser les
bandes dans le rcipient.
D'autres mthodes peuvent tre utilises pourvu qu'elles
ne modifient pas le rsultat de la dtermination.
A.4 Oxyde dithylique contenant des antioxydants
L'oxyde dithylique contenant environ 1 mg/kg
d'antioxydants est disponible dans certains pays, en
particulier pour des dterminations de matire grasse.
Cette teneur n'exclut pas son emploi titre de rfrence.
Dans d'autres pays, l'oxyde dithylique pourra avoir des
teneurs plus leves en antioxydants, par exemple jusqu'
7 mg/kg. Dans ce cas, il ne sera utilis que pour des
dterminations de routine, avec un essai blanc
obligatoire effectu simultanment avec les
dterminations, afin de corriger les erreurs systmatiques
dues aux rsidus d'antioxydants.
Sil est employ titre de rfrence, il devra toujours
tre distill avant lemploi.
A.5 Ethanol
Lthanol dnatur autrement que par ajout de mthanol
peut tre utilis, pourvu que lagent dnaturant naffecte
pas les rsultats de la dtermination.
NOTE B
Autre mode opratoire utilisant des tubes dextraction
de la matire grasse munis dun siphon ou dun
dispositif de lavage
B.I Gnralits
Si l'on emploie des tubes d'extraction de la matire
grasse munis d'un siphon ou d'un dispositif de lavage,
utiliser le mode opratoire spcifi dans la prsente
annexe. Les tubes doivent tre munis de bouchons en lige
de bonne qualit ou de bouchons tels que spcifis pour
les fioles en (4.6) (Figure B.l).
3 Rabie El Aouel 1436
25 dcembre 2014
B.2 Mode opratoire
B.2.1 Prparation de l'chantillon pour essai (6).
B.2.2 Prise d'essai
Procder comme spcifi en (7.1), mais en utilisant les
tubes d'extraction de la matire grasse (note en 4.6) et
(Figure B.1).
La prise d'essai doit tre transfre aussi compltement
que possible au fond du tube d'extraction.
B.2.3 Essai blanc (7.2) et (A.2).
B.2.4 Prparation du rcipient pour la rcupration
de la matire grasse (7.3).
B.2.5 Dtermination
B.2.5.1 Effectuer la dtermination sans attendre.
Ajouter 2 ml de solution d'hydroxyde d'ammonium (3.1)
la prise d'essai (B.2.2) se trouvant dans le tube d'extraction
de matire grasse, ou un volume quivalent d'une solution
plus concentre (note 3.1). Mlanger vigoureusement avec
la prise d'essai dans le fond du tube.
B.2.5.2 Ajouter 10 ml d'thanol (3.2). Mlanger
doucement mais compltement avec le mlange au fond
du tube. Ajouter, si on le dsire, 2 gouttes de solution
rouge-Congo (3.3).
B.2.5.3 Ajouter 25 ml d'oxyde dithylique (3.4). Fermer
le tube avec un bouchon en lige satur d'eau, ou avec un
bouchon d'une autre matire (4.6), mouill avec de l'eau.
Agiter le tube vigoureusement, mais sans excs, afin
d'viter la formation d'mulsions persistantes par des
retournements rpts pendant 1 min. Si ncessaire,
refroidir le tube l'eau courante jusqu' temprature
ambiante. Retirer avec prcaution le bouchon en lige ou
le dispositif de fermeture et le rincer, ainsi que le col du
tube, avec une petite quantit de mlange de solvants
(3.6). Utiliser le flacon de lavage (4.8) de faon que les
liquides de rinage coulent dans le tube.
B.2.5.4 Ajouter 25 ml d'ther de ptrole (3.5). Fermer le
tube avec le bouchon en lige rhumidifi ou avec l'autre
bouchon rhumidifi (en le trempant dans l'eau). Agiter
doucement le tube pendant 30s, comme dcrit en
(B.2.5.3).
B.2.5.5 Centrifuger (4.2) le tube ferm pendant 1 min
5 min avec une acclration radiale de 80 g 90 g. Si l'on
ne dispose pas de centrifugeuse, laisser le tube bouch
reposer sur le support (4.7) pendant, au moins, 30 min,
jusqu' ce que la couche surnageante soit claire et
nettement spare de la couche aqueuse. Si ncessaire,
refroidir le tube l'eau courante jusqu' temprature
ambiante.
78
3 Rabie El Aouel 1436
25 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 74 23

B.2.5.6 Retirer avec prcaution le bouchon en lige ou
le dispositif de fermeture et le rincer, ainsi que le col du
tube, avec une petite quantit de mlange de solvants
(3.6). Utiliser le f1acon de lavage (4.8) de faon que les
liquides de rinage coulent dans le tube.
B.2.5.7 Introduire un siphon ou un dispositif de
lavage dans le tube. Enfoncer la longue tubulure
l'intrieur jusqu' ce que l'orifice soit environ 4 mm
au-dessus de l'interface des couches. La tubulure
intrieure doit tre parallle l'axe central du tube
d'extraction.
B.2.5.11 Effectuer une troisime extraction, sans
addition d'thanol, en rptant nouveau les oprations
dcrites de (B.2.5.3) (B.2.5.8), mais en utilisant de
nouveau seulement 15 ml d'oxyde dithylique et 15 ml
d'ther de ptrole et en rinant la longue tubulure situe
l'intrieur du dispositif, comme dcrit en (B.2.5.10).
Note - La troisime extraction n'est pas ncessaire pour
du lait ayant une teneur en matire grasse infrieure
0,5 %.
B.2.5.12 Poursuivre la dtermination comme dcrit de
(7.4.12) (7.4.14).

Transvaser avec prcaution la couche surnageante du

tube dans le rcipient pour la rcupration de la matire Figure B.1 - Exemples de tubes dextraction pour
grasse (7.3) contenant quelques rgularisateurs matire grasse
d'bullition (4.10) dans le cas des fioles (facultatif avec les
capsules mtalliques). viter de dcanter une partie a) avec siphon b) avec systme
quelconque de la couche aqueuse. Rincer l'orifice avec daspiration par le vide
une petite quantit de mlange de solvants, en recueillant
les liquides de rinage dans le rcipient pour la
rcupration de la matire grasse.

Note - La couche surnageante peut tre transfre du

e
e

tube d'extraction de la matire grasse, en utilisant, par

xt.
xt.

4
4

exemple, un bulbe en caoutchouc reli la tige courte afin

0,4
0,4

d'assurer la pression.

B.2.5.8 Desserrer le dispositif du col du tube. Le

soulever lgrement et rincer la partie infrieure de la
longue tubulure interne avec un peu de mlange de 1
solvants (3.6). Abaisser et rintroduire le dispositif et
transvaser les liquides de rinage dans le rcipient de
rcupration de la matire grasse.

Rincer l'orifice externe du dispositif avec un peu de

200 5

200 5

mlange de solvants et recueillir les liquides de rinage 2

dans le rcipient. Si on le dsire, le solvant ou une partie
du solvant peut tre enlev du rcipient, par distillation ou
vaporation, comme dcrit en (7.4.13).

B.2.5.9 Desserrer de nouveau le dispositif du col. Le

soulever lgrement et ajouter 5 ml dthanol dans le tube.
Utiliser lthanol pour rincer la longue tubulure interne. int. 26 1 int. 26 1
Mlanger comme dcrit en (B.2.5.2).

B.2.5.10 Effectuer une seconde extraction en rptant

les oprations dcrites de (B.2.5.3) (B.2.5.8), mais en Lgende
utilisant seulement 15 ml d'oxyde dithylique (3.4)
et 15 ml d'ther de ptrole (3.5). Utiliser l'oxyde 1. Capacit maximale, avec siphon ou systme
dithylique pour rincer la longue tubulure interne pendant daspiration par le vide retir, 105 ml 5 ml.
que l'on retire le dispositif du tube aprs l'extraction
2. Epaisseur de la paroi 1,5 mm 0,5 mm.
prcdente.

79
6 Rabie El Aouel 1436
28 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 75
ARRETES, DECISIONS ET AVIS
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 20 Chaoual 1434 correspondant au 27 aot
2013 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur en azote dans le lait.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 12-326 du 17 Chaoual 1433
correspondant au 4 septembre 2012 portant nomination
des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu l'arrt interministriel du 29 Safar 1414
correspondant au 18 aot 1993 relatif aux spcifications et
la prsentation de certains laits de consommation ;
Vu l'arrt interministriel du 7 Rabie Ethani 1418
correspondant au 10 Aot 1997 relatif aux spcifications
techniques des laits concentrs non sucrs et sucrs et aux
conditions et modalits de leur prsentation ;
Arrte :
Article ler. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode de dtermination de la
teneur en azote dans le lait.
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en azote
dans le lait, les laboratoires du contrle de la qualit et de
la rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet
effet doivent employer la mthode jointe en annexe du
prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 20 Chaoual 1434 correspondant au
27 aot 2013.
Mustapha BENBADA.
15
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION
DE LA TENEUR EN AZOTE DANS LE LAIT
La prsente mthode spcifie une technique pour la
dtermination de la teneur en azote du lait liquide, entier
ou crm, selon le principe de (kjeldahl).
1. DEFINITION
Pour les besoins de la prsente mthode, la dfinition
suivante s'applique :
Teneur en azote :
Rapport de masse dazote dtermin par le mode
opratoire dcrit dans la prsente mthode.
Note - La teneur en azote est exprime sous forme de
pourcentage en masse.
2. PRINCIPE
Minralisation d'une prise d'essai avec un mlange
d'acide sulfurique concentr et de sulfate de potassium, en
utilisant du sulfate de cuivre (II) (3.2) comme catalyseur
pour convertir ainsi l'azote organique prsent en sulfate
d'ammonium. (La fonction du sulfate de potassium est
d'lever le point d'bullition de l'acide sulfurique et de
permettre d'obtenir un mlange oxydant plus fort pour
la minralisation). Addition d'hydroxyde de sodium
excdentaire au minralisat refroidi pour librer de
l'ammoniac. Distillation de l'ammoniac libr dans un
excdent de solution d'acide borique, puis titrage en
utilisant de l'acide chlorhydrique. Calcul de la teneur en
azote partir de la quantit d'ammoniac produite.
3. REACTIFS
Sauf indication diffrente, utiliser uniquement des
ractifs de qualit analytique reconnue et de l'eau distille
ou dminralise, ou de l'eau de puret, au moins,
quivalente.
3.1 Sulfate de potassium (K2SO4), exempt dazote.
3.2 Solution de sulfate de cuivre (II), c (CuSO4) =
5,0 g par 100 ml.
Dans une fiole jauge de 100 ml, dissoudre 5,0 g de
sulfate de cuivre (Il) pentahydrat (CuSO4,5H2O) dans de
l'eau. Diluer jusqu'au repre avec de l'eau, puis mlanger.
3.3 Acide sulfurique (H2SO4), avec un rapport de
masse compris entre 95 % et 98 %, sans azote (P20 =
environ 1,84 g/ml).
3.4 Solution d'hydroxyde de sodium (NaOH),
exempte d'azote, contenant 50 g d'hydroxyde de sodium
par 100 g de solution.
80

16 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 75
3.5 Solution indicatrice
Dissoudre 0,1 g de rouge de mthyle dans de l'thanol
95 % (rapport de volume) et diluer 50 ml avec de
l'thanol. Dissoudre 0,5 g de vert de bromocrsol dans de
l'thanol 95 % (rapport de volume) et diluer 250 ml
avec de l'thanol. Mlanger une dose de la solution de
rouge de mthyle cinq doses de la solution de vert de
bromocrsol ou combiner et mlanger l'ensemble des deux
solutions.
3.6 Solution d'acide borique, c(H3BO3)= 40,0 g/l.
Dans une fiole jauge de 1000 ml, dissoudre 40,0 g
d'acide borique dans 1 litre d'eau chaude. Laisser refroidir
la fiole et son contenu 20 C. Complter au volume avec
de l'eau, ajouter 3 ml de la solution indicatrice (3.5) et
mlanger.
Remarque
Conserver la solution, qui doit tre orange clair, dans
une bouteille en verre de borosilicate. Durant le stockage,
protger la solution de la lumire et des sources de
vapeurs d'ammoniac.
En cas de titrage lectronique du pH avec point final,
l'ajout de la solution indicatrice la solution d'acide
borique peut tre omis. D'autre part, le changement de
couleur peut aussi servir contrler le mode opratoire de
titrage.
3.7 Solution volumtrique standard d'acide
chlorhydrique, c(HCI) = (0,1 0,000 5) mol/l.
Il est recommand d'acheter ce matriau dj
prnormalis, rpondant ces spcifications.
Note - Souvent, les erreurs systmatiques (qui peuvent
tre vites) introduites par un analyste qui dilue un acide
concentr, puis dtermine la molarit de l'acide, peuvent
diminuer la reproductibilit de la mthode.
Il convient que l'analyste n'utilise pas de solution de
titrage de concentration suprieure 0,1 mol/l car cela
rduirait le volume total de titrage par chantillon, et
l'incertitude de lecture de la burette reprsenterait un
pourcentage plus lev de la valeur.
Cela aura un impact ngatif sur la rptabilit et la
reproductibilit de la mthode. Les mmes problmes se
posent, avec le risque d'erreurs supplmentaires, lorsqu'un
autre acide (par exemple l'acide sulfurique) est substitu
l'acide chlorhydrique, Ces substitutions ne sont donc pas
recommandes.
3.8 Sulfate d'ammonium [(NH4)2 SO4)], ayant une
puret minimale de 99,9 % (rapport de masse) sur matire
sche.
Immdiatement avant l'emploi, scher le sulfate
d'ammonium 102C 2C pendant, au moins, 2 h.
Laisser refroidir temprature ambiante dans un
dessiccateur.
3.9.Tryptophane (C11H12N2O2) ou hydrochlorure
de lysine (C6H15CIN2O2), ayant une puret minimale de
99,9 % (rapport de masse).
Ne pas scher ces ractifs dans une tuve avant
lemploi.
6 Rabie El Aouel 1436
28 dcembre 2014
3.10 Saccharose, dont la teneur en azote est infrieure
0,002 % (fraction massique).
Ne pas scher la saccharose dans une tuve avant
l'emploi.
4. APPAREILLAGE
Matriel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui
suit.
4.1 Bain d'eau, pouvant tre maintenu une
temprature de 38C 2 C.
4.2 Ballons de Kjeldahl, d'une capacit de 500 ml ou
800 ml.
4.3 Balance analytique, permettant de peser 0,1 mg
prs.
4.4 Corps facilitant lbullition, par exemple pierre
ponce incandescente, poussire de zinc, pices de
porcelaine dures ou granules d'alundon amphotres
(carbarundum) lisses, d'une puret leve et d'une taille de
mailles de 10.
Ne pas rutiliser ces corps.
Note- Des billes de verre d'environ 5 mm de diamtre
sont parfois utilises, mais celles-ci peuvent tre moins
efficaces pour l'bullition que les granules d'alundon, et
des problmes de formation de mousse pendant la
minralisation risquent davantage de se poser avec les
billes de verre.
4.5 Burette ou pipette automatique, permettant
d'obtenir des doses de 1,0 ml de solution de sulfate de
cuivre (Il) (3.2).
4.6 Eprouvettes gradues, d'une capacit de 50 ml,
100 ml et 500 ml.
4.7 Appareil de minralisation, pour maintenir
les ballons de Kjeldahl (4.2) en position incline
( environ 45), pourvu de rsistances lectriques ou de
becs gaz ne chauffant pas les ballons au-del du niveau
de leur contenu, ainsi que d'un systme d'vacuation des
fumes.
Il convient que la source chauffante soit rglable pour
permettre de contrler le rglage maximal de l'lment
chauffant appliquer durant la minralisation. Prchauffer
la source chauffante au rglage de l'lment chauffant
valuer.
La dure de prchauffage doit tre de 10 min dans le cas
d'un bec gaz et de 30 min dans le cas d'un lment
chauffant lectrique. Dterminer, pour chacun des
lments chauffants, le rglage qui permet de porter
bullition 250 ml d'eau et 5 10 corps facilitant
l'bullition (en partant d'une temprature initiale de 25C)
en 5 min 6 min. Ce rglage correspond au rglage
maximal de l'lment chauffant appliquer durant la
minralisation.
81
6 Rabie El Aouel 1436
28 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 75
4.8 Appareil de distillation, en verre de borosilicate ou
autre matire approprie, pouvant tre quip d'un ballon
de Kjeldahl (4.2), se composant d'une tte anti projections
efficace, reli un condenseur efficace avec tube intrieur
droit et un tube d'coulement fix son extrmit
infrieure.
Le tubage de connexion et le (s) bouchon (s) doivent
tre tanches et de prfrence en noprne. l'lment chauffant sur une temprature suffisamment
4.9 Fioles coniques, d'une capacit de 500 ml, gradues
tous les 200 ml.
4.10 Burette, d'une capacit de 50 ml, gradue, au
moins, tous les 0,01 ml.
Il est galement possible d'utiliser une burette
automatique satisfaisant aux mmes exigences.
4.11 Dispositif de titrage automatique pourvu d'un
pH-mtre.
Il convient que le PH-mtre soit correctement talonn
dans la gamme de pH 4 PH 7 selon les mthodes
normales dtalonnage de PH en laboratoire
5. ECHANTILLONNAGE
Il est important que le laboratoire reoive un chantillon
rellement reprsentatif et n'ayant pas t endommag ou
modifi durant le transport ou le stockage.
L'chantillonnage se fait selon une mthode approprie.
6. PREPARATION DE L'ECHANTILLON POUR
ESSAI
Chauffer l'chantillon pour essai dans le bain d'eau (4.1)
rgl 38 C 2 C. Bien mlanger, mais dlicatement, d'bullition qui permet d'obtenir la teneur maximale en
au moyen de retournements rpts du rcipient, sans
causer ni mousse ni barattage. Laisser refroidir
l'chantillon temprature ambiante immdiatement avant
de peser la prise d'essai (7.1).
Note - Si l'on souhaite appliquer cette mthode des
produits laitiers autres que le lait, voir la remarque
annexe la prsente mthode pour des recommandations
sur la taille de l'chantillon pour essai.
7. MODE OPERATOIRE
7.1 Prise d'essai et prtraitement
Introduire dans le ballon de Kjeldahl (4.2) propre et sec
de 5 10 corps facilitant l'bullition (4.4), 15,0g de sulfate
de potassium (3.1), 1,0 ml de solution de sulfate de cuivre
(II) (3.2), environ 5 ml 0,1 ml de l'chantillon pour
essai prpar (6), pes 0,1 mg prs, et 25 ml d'acide
sulfurique (3.3). A cet effet, utiliser l'acide sulfurique pour
entraner tout rsidu de la solution de sulfate de cuivre
(II) (3.2), du sulfate de potassium ou de la prise d'essai
restant sur le col du ballon.
S'il reste un peu de minralisat brl sur le col, rincer
avec une petite quantit d'eau. Mlanger doucement le
contenu du ballon de Kjeldahl.
17
7.2 Dtermination
7.2.1 Minralisation
Brancher le systme d'vacuation des fumes de
l'appareil de minralisation (4.7) avant de commencer la
minralisation. Chauffer le ballon de Kjeldahl et son
contenu (7.1) sur l'appareil de minralisation en rglant
basse pour que le minralisat brl ne dborde pas en
moussant par le col du ballon de Kjeldahl. Effectuer la
minralisation ce rglage de l'lment chauffant jusqu'
ce que de la fume blanche apparaisse dans le ballon au
bout d'environ 20 min. Augmenter le rglage de l'lment
chauffant jusqu' une position correspondant la moiti
du rglage maximal dtermin en (4.7) et continuer le
chauffage pendant 15 min. Au terme des 15 min,
augmenter le chauffage jusqu'au rglage maximal
dtermin en (4.7). Une fois que le minralisat s'est
clairci (il devient transparent avec une coloration bleu
clair vert), continuer faire bouillir le contenu pendant
1 h 1 h 30 min au rglage maximal. Si le liquide ne bout
pas, il est possible que le rglage final du bec gaz soit
trop faible. La dure totale de la minralisation sera
comprise entre 1 h 48 min et 2 h 15 min.
Pour dterminer le temps d'bullition spcifique
ncessaire pour les conditions d'analyse du lait dans un
laboratoire particulier utilisant un ensemble bien dfini
d'appareils. Slectionner un chantillon de lait haute
teneur en protines et en matires grasses et dterminer sa
teneur en protines en appliquant diffrents temps
d'bullition (de 1 h 1 h 30 min) aprs l'claircissement.
Le rsultat moyen de la teneur en protines augmente
avec le temps d'bullition, se stabilise, puis diminue quand
le temps d'bullition est trop long. Choisir le temps
protines.
Au terme de Ia minralisation, le minralisat doit tre
transparent et exempt de matire non digre. Laisser
refroidir le minralisat temprature ambiante dans des
flacons ouverts pendant environ 25 min. Si les ballons
refroidissent sur les becs encore chauds, le temps pour
atteindre la temprature ambiante sera plus long. A la fin
de cette priode de refroidissement de 25 min, il convient
que le minralisat refroidi soit compltement liquide ou
liquide avec quelques petits cristaux au fond du ballon. Ne
pas laisser le minralisat non dilu dans les ballons
pendant toute une nuit. En effet, le minralisat non dilu
peut se cristalliser lors de cette priode et il sera ensuite
trs difficile de le remettre en solution.
Note - La cristallisation excessive au bout de 25 min est
le rsultat d'une perte d'acide trop importante au cours de
la minralisation et risque de donner des valeurs d'essai
faibles. Cette perte d'acide est cause par une aspiration
excessive des fumes ou par une minralisation trop
longue due un rglage maximal incorrect du bec.
Ajouter 300 ml d'eau dans les ballons de Kjeldahl de
500 ml, ou 400 ml d'eau dans les ballons de Kjeldahl de
800 ml, en utilisant galement l'eau pour liminer tout
rsidu sur le col des ballons.
82

18 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 75
Mlanger compltement le contenu en s'assurant que
tous les cristaux qui se sont forms sont dissous. Ajouter
de 5 10 corps facilitant l'bullition (4.4). Laisser le
mlange refroidir temprature ambiante avant de
procder la distillation. Les minralisats dilus peuvent
tre conservs dans des fioles bouches et utiliss
ultrieurement pour la distillation.
7.2.2 Distillation
Faire circuler l'eau du condenseur pour l'appareil
distillation (4.8). Ajouter 75 ml de solution d'hydroxyde
de sodium (3.4) au minralisat dilu (7.2.1) en versant
dlicatement la solution dans le col inclin du ballon de
Kjeldahl, de faon former une couche au fond du bulbe
du ballon, il convient que linterface entre les deux
solutions soit nette. Pour les deux solutions soit nette.
Pour rduire le risque de perte dammoniac, relier le
ballon de Kjeldahl l'appareil de distillation (4.8)
immdiatement aprs l'adjonction de la solution
d'hydroxyde de sodium dans le ballon. La pointe du tube
d'coulement du condenseur est plonge dans 50 ml de la
solution d'acide borique (3.6) contenue dans une fiole
conique (4.9). Agiter vigoureusement par un mouvement
de rotation le ballon de Kjeldahl jusqu' ce qu'il n'y ait
plus de couches de solution spares visibles dans le
ballon. Placer le ballon sur le bec et mettre en marche le
bec un rglage suffisamment lev pour porter le
mlange bullition. Continuer la distillation jusqu' ce
qu'une bullition irrgulire (bullition pulsatoire)
commence, puis dconnecter immdiatement le ballon de
Kjeldahl et arrter le chauffage. Arrter l'eau du
condenseur. Rincer l'eau l'intrieur et l'extrieur de
l'extrmit du tube d'coulement, recueillir l'eau de
rinage dans la fiole conique et mlanger.
Le dbit de distillation doit permettre de recueillir
environ 150 ml de distillat avant que ne commence
l'bullition irrgulire (bullition pulsatoire). Le volume
total contenu dans la fiole conique sera d'environ 200 ml.
Si le volume de distillat recueilli est infrieur 150 ml, il
est probable qu'une quantit d'eau infrieure 300 ml ait
t ajoute pour diluer le minralisat. L'efficacit du
condenseur doit tre telle que la temprature du contenu
de la fiole conique ne dpasse pas 35C pendant la
distillation en cas d'utilisation d'un point final de titrage
colorimtrique.
7.2.3 Titrage
Titrer le contenu de la fiole conique (7.2.2) avec l'acide
chlorhydrique (3.7) l'aide d'une burette (4.5). Le point
final de titrage est atteint la premire trace de rose dans
le contenu. Estimer la lecture de la burette 0,05 ml prs.
Une plaque agitatrice magntique claire peut faciliter la
visualisation du point final de titrage.
6 Rabie El Aouel 1436
28 dcembre 2014
Il est galement possible de titrer le contenu de la fiole
conique (7.2.2) avec l'acide chlorhydrique (3.7) au
moyen d'un dispositif de titrage automatique talonn
quip d'un pH-mtre (4.11). Le point final de titrage est
atteint au pH 4,6, qui correspond au point le plus haut de
la courbe de titrage (point d'inflection). Lire la quantit de
solution titre utilise sur le dispositif de titrage
automatique.
Note 1- La premire trace de rose est observe entre pH
4,6 et pH 4,3 pour le systme indicateur et la solution
d'acide borique 4 % spcifie dans la prsente mthode.
En pratique, la variation du pH en fonction de l'ajout
d'acide chlorhydrique 0,1 mol/l est trs rapide dans cette
gamme de pH. Il faut environ 0,05 ml d'acide
chlorhydrique 0,1 mol/l pour changer le pH de 0,3 unit
dans la gamme de pH comprise entre 4,6 et 4,3 dans ce
systme.
Note 2- Les statistiques intralaboratoires et
interlaboratoires concernant cette mthode ont t
dtermines l'aide d'un titrage point final
colorimtrique. La comparaison entre les rsultats d'essai,
y compris ceux des essais blanc, obtenus avec un point
final de pH 4,6 et les rsultats d'un titrage point final
colorimtrique a montr que, statistiquement, aucune
diffrence significative n'tait dmontrable entre ces
rsultats.
7.3 Essai blanc
Titrer les prises d'essai blanc en utilisant toujours le
mme acide chlorhydrique (3.7) et la mme burette (4.5)
ou le mme dispositif de titrage automatique quip dun
pH-mtre (4.11) que pour les prises dessai. Raliser un
essai blanc en suivant le mode opratoire dcrit-en (7.1)
(7.2.3), en remplaant la prise d'essai par 5 ml d'eau
avec environ 0,85 g de saccharose (3.10).
Consigner les valeurs blanc. Si ces valeurs varient,
identifier la cause de ce changement.
Note 1- Dans une prise d'essai blanc ou un talon de
rcupration, la saccharose est utilise comme matire
organique pour consommer, lors de la minralisation, une
quantit d'acide sulfurique pratiquement quivalente
celle ncessaire pour une prise d'essai. Si la quantit
d'acide sulfurique libre restant la fin de la minralisation
est insuffisante, la rcupration de l'azote dtermine
suivant les essais de rcupration en (7.4.2) et (7.4.3) sera
faible. Cependant, s'il reste, la fin de la minralisation,
une quantit suffisante d'acide sulfurique libre pour retenir
tout l'azote, mais que les conditions de temprature et de
dure de la minralisation ont t insuffisantes pour
librer totalement l'azote de l'chantillon, sa rcupration
en (7.4.2) sera acceptable tandis qu'elle sera faible en
(7.4.3).
83
6 Rabie El Aouel 1436
28 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 75
Il convient que la quantit de solution titre utilise
pour la prise d'essai blanc soit toujours suprieure
zro. Il convient que les prises d'essai blanc ralises
dans le mme laboratoire soient stables dans le
temps. Les valeurs-types de blanc sont infrieures ou
gales 0,2 ml.
Note 2 - Si la prise d'essai blanc est dj rose avant le
dbut du titrage, cela n'est pas normal. En gnral, dans ce
cas, les fioles coniques ne sont pas propres ou l'eau
contenue dans l'air humide pouvant se condenser
l'extrieur de l'appareil condenseur est entre dans la fiole
de rcupration, entranant sa contamination.
7.4 Essais de rcupration
7.4.1 Il convient de vrifier rgulirement la prcision
du mode opratoire par les essais de rcupration suivants,
raliss conformment au mode opratoire dcrit en (7.1)
(7.2.3).
7.4.2 Vrifier qu'il ne se produit aucune perte
d'azote en utilisant une prise d'essai de 0,12 g de
sulfate d'ammonium (3.8) avec 0,85 g de saccharose
(3.1 0).
Note - La vrification de la rcupration du sulfate
d'ammonium ne donne aucune indication sur la capacit
des conditions de minralisation librer l'azote li aux
structures protiques.
Le pourcentage d'azote rcupr doit tre compris
entre 99 % et 100 % pour toutes les positions de
l'appareil. Pour les rcuprations infrieures 99 %, la
normalit de la solution titre est suprieure la
valeur fixe, o une perte d'azote peut avoir eu lieu
lors de l'tape de minralisation ou de distillation.
Il est possible d'utiliser un mlange de sulfate
d'ammonium et une petite quantit d'acide sulfurique
(la quantit rsiduelle la fin de la minralisation) dans un
ballon de Kjeldahl.
Diluer avec un volume normal d'eau, ajouter la quantit
normale d'hydroxyde de sodium, puis distiller. Si la
rcupration d'azote est toujours faible dans les mmes
proportions, la perte d'azote survient dans l'appareil de
distillation et non pas dans celui de minralisation. La
cause en est probablement la fuite d'un tube dans un
systme traditionnel ou le fait que les pointes du
condenseur ne sont pas immerges totalement dans l'acide
borique ds le dbut de la distillation. Il convient que
l'appareil soit soumis cet essai avant que la rcupration
ne soit vrifie suivant le mode opratoire donn en
(7.4.3).
Si les rcuprations d'azote sont suprieures 100 %,
aucune perte d'azote ne peut tre constate.
19
Dans ce cas, les causes peuvent tre les suivantes :
a) le sulfate d'ammonium est contamin;
b) la normalit relle de la solution titre est infrieure
sa valeur fixe ;
c) l'talonnage de la burette pour la solution titre est
erron ;
d) la temprature de la solution titre est suprieure la
temprature d'talonnage de la burette ;
e) l'coulement de solution titre l'extrieur de la
burette dpasse la vitesse maximale laquelle l'talonnage
de la burette est valable.
7.4.3 Vrifier l'efficacit du mode opratoire de
minralisation en utilisant 0,16 g d'hydrochlorure de
lysine (3.9) ou 0,18 g de tryptophane (3.9) avec 0,67 g de
saccharose (3.10).
Un rapport de masse d'au moins 98 % de l'azote doit
tre rcupr. Si la rcupration est infrieure 98 %
aprs avoir obtenu une rcupration de 99 % 100 % du
sulfate d'ammonium, la temprature ou le temps de
minralisation est insuffisant (e) (suivre le mode
opratoire donn en (7.2.1), premier alina et note 1), ou
alors une partie de l'chantillon n'est pas digre ( savoir
brle) l'intrieur du ballon de Kjeldahl. L'valuation
finale des performances est meilleure si elle est ralise
dans le cadre d'un programme d'essais de performances,
dans lequel les paramtres statistiques intralaboratoires et
interlaboratoires sont calculs sur la base d'une analyse
d'chantillons de lait.
7.4.4 Des rsultats infrieurs obtenus dans l'un ou l'autre
des essais de rcupration (ou suprieurs 100 % en
(7.4.2)) indiquent qu'il y a des erreurs dans le mode
opratoire et/ou des imprcisions de concentration de la
solution d'acide chlorhydrique (3.7).
8. CALCUL ET EXPRESSION DES RESULTATS
8.1 Calcul de la teneur en azote
8.1.1 Calculer la teneur en azote de l'chantillon pour
essai, WN , l'aide de l'quation suivante :
1,4007 (Vs - Vb) Mr
WN =
m
O
WN est la teneur en azote de l'chantillon pour essai,
exprime sous forme de pourcentage en masse ;
84

20 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 75
Vs est la valeur numrique du volume, en millilitres, de
l'acide chlorhydrique (3.7) utilis dans la dtermination
(7.2.3), exprime, au moins, 0,05 ml prs ;
Vb est la valeur numrique du volume, en millilitres, de
l'acide chlorhydrique (3.7) utilis dans l'essai blanc
(7.3), exprime, au moins, 0,05 ml prs ;
Mr est la valeur numrique de la molarit exacte de
l'acide chlorhydrique (3.7), exprime quatre dcimales
prs ;
m est la valeur numrique, en grammes de la masse de
la prise d'essai (7.1), exprime 0,1 mg prs.
8.1.2 Exprimer les rsultats obtenus quatre dcimales
prs, si c'est ncessaire pour des calculs ultrieurs. S'il
s'agit de rsultats finaux (8.1), exprimer la teneur en azote
trois dcimales prs et la teneur en matire azote totale mthode sur un matriau identique soumis l'essai
deux dcimales. Il convient de ne pas arrondir les
rsultats avant l'utilisation finale de la valeur d'essai.
Note - Cela est particulirement vrai lorsque les valeurs
sont appeles tre utilises pour des calculs ultrieurs.
C'est le cas, par exemple, lorsque les valeurs dessai
individuelles obtenues partir de l'analyse de plusieurs
chantillons sont utilises pour calculer les statitistiques
de performance de la mthode concernant les variations
intralaboratoires et interlaboratoires. Cest galement le
cas lorsque les valeurs servent de rfrence pour
l'talonnage d'un instrument (par exemple un analyseur de
lait infrarouge), o les valeurs concernant plusieurs
chantillons seront utilises pour un calcul de rgression
simple ou multiple. Dans ces cas, il convient de ne pas
arrondir les rsultats obtenus avant de les utiliser pour les
calculs ultrieurs.
8.2 Calcul de la teneur en matire azote totale
8.2.1 Calculer la teneur en matire azote totale de
l'chantillon pour essai, Wp, l'aide de l'quation
suivante :
Wp = WN x 6,38
O souhaiter utiliser le mme mode opratoire, avec des
Wp est la teneur en matire azote totale de
l'chantillon pour essai, exprime sous forme de
pourcentage en masse ;
Wn est la teneur en azote de l'chantillon pour essai,
exprime sous forme de pourcentage en masse, quatre
dcimales prs (8.1) ;
6,38 est le coefficient multiplicateur gnralement
admis pour exprimer la teneur en azote en tant que teneur
en matire azote totale.
6 Rabie El Aouel 1436
28 dcembre 2014
8.2.2 Exprimer les rsultats obtenus pour la teneur en
matire azote totale trois dcimales prs, si c'est
ncessaire pour des calculs ultrieurs. S'il s'agit de
rsultats finaux (8.1), deux dcimales suffisent.
9. FIDELITE
9.1 Essai interlaboratoires
Les valeurs de rptabilit et de reproductibilit sont
issues des rsultats dun essai interlaboratoires. Les
valeurs drives de cet essai peuvent ne pas tre
applicables aux plages de concentration et matrices autres
que celles indiques.
9.2 Rptabilit
La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
individuels indpendants, obtenus l'aide de la mme
dans le mme laboratoire par le mme oprateur
utilisant le mme appareillage dans un court intervalle
de temps, n'excdera 0,006 % pour la teneur en azote
(0,038 % pour la teneur en matire azote totale) que dans
5 % des cas au plus.
9.3 Reproductibilit
La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
individuels, obtenus l'aide de la mme mthode sur un
matriau identique soumis l'essai dans des laboratoires
diffrents par des oprateurs diffrents utilisant des
appareillages diffrents, n'excdera 0,0077 % pour la
teneur en azote (0,049 % pour la teneur en matire azote
totale) que dans 5 % des cas au plus.
REMARQUE
Mode opratoire pour l'analyse dautres produits
laitiers lorsqu'une mthode particulire n'existe
pas pour ces produits
1. Gnralits
Le mode opratoire dcrit dans la prsente mthode a
t optimis et ses performances ont t values pour
l'analyse du lait bovin. S'il n'existe aucune mthode
particulire pour le produit concern, un laboratoire peut
modifications mineures, pour la dtermination de la teneur
en azote d'une srie de produits laitiers.
Il convient cependant de noter que le mode opratoire et
ses performances n'ont pas t valids pour ce type
d'application.
2. Mode opratoire
Peser 0,1 mg prs, la masse approprie de prise d'essai
extraite d'un chantillon pour essai correctement prpar,
comme dcrit ci-aprs. Dterminer la teneur en azote en
suivant la mthode dcrite en (7.1) (7.4).
85
6 Rabie El Aouel 1436
28 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 75
Il convient de ne pas modifier les quantits d'acide
sulfurique (3.3) et de solution d'hydroxyde de sodium
(3.4) utilises dans les processus de minralisation et de
distillation. La modification du rapport entre la quantit
d'acide et les autres composants en augmentant la quantit
d'acide fait diminuer le point d'bullition initial du
mlange dans la minralisation et n'est donc pas
recommande.
Il convient d'utiliser un effectif appropri de prise
d'essai en travaillant avec les ractifs spcifis dans la
prsente mthode. L'effectif appropri de prise d'essai
peut tre estim comme suit pour tout chantillon pour
essai.
La quantit optimale de protines par ballon de Kjeldahl
(4.2) doit tre comprise entre 0,15 g et 0,30 g par ballon
pour tout chantillon. Ainsi, si un chantillon moyen de
Cheddar contient 24,00 % de protines, il convient que la
masse de la prise d'essai soit comprise entre 0,625 g et
1,25 g.
Le choix d'utiliser des masses de prise d'essai qui
avoisinent la limite infrieure ou la limite suprieure de la
plage dpend de la quantit d'acide qui sera consomme
par les autres composants de l'chantillon lors de la
minralisation (c'est--dire les matires grasses et les
hydrocarbures).
La prsente mthode dcrit l'ajout de 25 ml (environ
46 g) d'acide sulfurique la prise d'essai dans le ballon de
Kjeldahl. la fin de la minralisation, il doit rester
environ 15 g d'acide sulfurique dans le ballon pour retenir
tout l'azote.
Il convient de noter qu'une quantit d'acide sulfurique
est consomme par la prise d'essai et galement perdue
par vaporation au cours de la minralisation. La perte par
vaporation peut tre gale la quantit consomme par calculer la quantit d'acide consomme par une prise
les matires organiques dans une prise d'essai. La quantit
finale d'acide rsiduel sera fonction de ces deux processus.
Si les pertes d'acide par vaporation sont trs importantes
(en raison d'une aspiration excessive des fumes au cours
de la minralisation ou du fait que le col des ballons est
trop chaud), il se peut qu'il reste trop peu d'acide au terme
de la minralisation, mme si la prise d'essai tait de taille
suffisante.
Une quantit rsiduelle d'acide insuffisante conduira
la cristallisation du minralisat au bout de 25 min
de refroidissement et une faible rcupration
d'azote.
La crme contenant 40 % de matires grasses est un
exemple de produit dlicat. Dans ce cas, la teneur en
protines ou en azote de l'chantillon est faible et la teneur
en matires grasses est leve. On prend pour hypothse
qu'un chantillon moyen de crme contient environ 40 %
21
de matires grasses, 1,9 % de protines et 2,9 % de
lactose. Pour obtenir 0,15 g de protines dans le ballon de
Kjeldahl (4.2), il convient d'utiliser une prise d'essai de
7,89 g. Cette prise d'essai contient alors 3,16 g de matires
grasses, qui consomment dj elles-mmes 56,9 g
(environ 30,9 ml) d'acide sulfurique lors de la
minralisation, sans tenir compte de la perte d'acide
sulfurique par vaporation (en supposant que 1 g de
matire grasse consomme 18 g d'acide sulfurique au cours
de la minralisation). C'est un exemple de cas o la
quantit de prise d'essai doit tre rduite afin d'obtenir une
quantit rsiduelle suffisante d'acide sulfurique la fin de
la minralisation. Dans le cas d'une matire telle que la
crme, il convient d'utiliser une solution titre de
concentration infrieure (par exemple 0,01 mol/1). Dans
de tels cas, il est ncessaire de rduire la quantit de
prise d'essai pour qu'il reste une quantit suffisante
d'acide sulfurique au terme de la minralisation.
La quantit de saccharose requise pour un essai blanc
ou pour les talons de rcupration des produits autres que
le lait bovin peut tre dtermine comme suit :
Il faut tout dabord raliser une estimation des teneurs
approximatives en matires grasses, en protines et en
hydrocarbures pour le type d'chantillon pour essai
concern et de l'effectif approximatif de la prise d'essai
utilise dans la minralisation.
Ensuite, lors de la minralisation, 1 g de matire grasse
consommera environ 18 g d'acide sulfurique ; 1 g de
protines consommera environ 9 g d'acide sulfurique ; et
1 g d'hydrocarbures consommera environ 7 g d'acide
sulfurique.
Sur la base de ces informations, il est possible de
d'essai et la quantit de saccharose ncessaire pour
consommer la mme quantit d'acide lors de la
minralisation. Il convient que la quantit calcule
de saccharose soit utilise pour la prise d'essai
blanc et pour l'talon de rcupration du sulfate
d'ammonium.
Pour l'talon de rcupration d'azote des acides amins
(7.4.3), rduire la quantit de saccharose de l'quivalent
correspondant l'acide qui sera consomm (calcul sous
forme de protines) par l'hydrochlorure de lysine ou le
tryptophane. On prend pour hypothse que la rcupration
d'azote lors de la minralisation pour l'appareil utilis est
la mme pour les chantillons autres que le lait, sans
raliser d'autres expriences de rcupration pour obtenir
des conditions permettant d'atteindre des niveaux
similaires d'acide sulfurique rsiduel la fin de la
minralisation.
86
21 Moharram 1437
4 novembre 2015 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 58
ARRETES, DECISIONS ET AVIS
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 4 Moharram 1437 correspondant au 18
octobre 2015 rendant obligatoire la mthode de
prparation de l'chantillon pour essai en vue de
l'analyse physique et chimique du lait.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 15-125 du 25 Rajab 1436
correspondant au 14 mai 2015, modifi, portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou El Kada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu le dcret excutif n 13-328 du 20 Dhou El Kada
1434 correspondant au 26 septembre 2013 fixant les
conditions et les modalits d'agrment des laboratoires au
titre de la protection du consommateur et de la rpression
des fraudes ;
Vu l'arrt interministriel du 18 aot 1993 relatif aux
spcifications et la prsentation de certains laits de
consommation.
Arrte :
Article. 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode de prparation de
l'chantillon pour essai en vue de l'analyse physique et
chimique du lait.
Art. 2. Pour la prparation de l'chantillon pour essai
en vue de l'analyse physique et chimique du lait, les
laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent
employer la mthode jointe en annexe.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
15
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 4 Moharram 1437 correspondant au 18
octobre 2015.
Bakhti BELAB.
ANNEXE
METHODE DE PREPARATION DE
L'ECHANTILLON POUR ESSAI EN VUE DE
L'ANALYSE PHYSIQUE ET CHIMIQUE DU LAIT
1. Objet et domaine d'application :
La prsente mthode a pour objet de dfinir les
directives gnrales pour la prparation des chantillons
en vue des prises d'essais utilises pour l'analyse physique
et chimique du lait.
2. Principe :
Homognisation mcanique ou manuelle de
l'chantillon pour essai, conditionnement une
temprature de 20 C 5 C et ralisation des prises
d'essais.
3. Appareillage et verrerie :
3.1 Bchers de capacit 400 ml ;
3.2 Baguette en verre d'environ 20 cm de longueur et 8
mm de diamtre, lgrement recourbe l'une des
extrmits et revtue d'un embout en caoutchouc ;
3.3 Homognisateur appropri de nettoyage facile,
muni d'un systme permettant le chauffage et le maintien
du lait une temprature d'environ 40 C.
A dfaut de cet appareil (3.3), utiliser ce qui suit :
3.4 Ensemble pour l'homognisation manuelle ;
3.4.1 Bain marie rgl 40 C ;
3.4.2 Tamis en mtal inoxydable dont les ouvertures
de mailles ne dpassent pas 0,5 mm ;
87

16 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 58
3.4.3 Entonnoir d'un diamtre lgrement suprieur
celui du tamis.
4. Mode opratoire :
4.1 Homognisation de l'chantillon :
Si l'analyse aura lieu immdiatement aprs le
prlvement ou au plus tard dans les deux (2) ou trois (3)
heures qui suivent, une simple agitation de l'chantillon
par retournements successifs du flacon suffit rendre le
contenu homogne.
Dans le cas contraire o l'analyse n'aura lieu que le
lendemain du prlvement ou quelques jours plus tard ou
aprs un dlai plus long, la matire grasse du lait se
rassemble et prend en masse tout le long de la paroi du
flacon ou sous le bouchon.
Il faut donc remettre la matire grasse en suspension
homogne dans la totalit de l'chantillon, soit en utilisant
un appareil mcanique condition qu'il ne modifie en rien
la composition du lait ni de point de vue qualitatif ni de
point de vue quantitatif, soit manuellement et ce, dfaut
de cet appareil (3.3).
4.1.1 Homognisation mcanique :
Le mode opratoire dpend de l'appareil dont on
dispose. Dans tous les cas, il est indispensable de
rcuprer la totalit des dpts qui adhrent aux parois du
flacon de prlvement ou au bouchon.
Il est avantageux de porter l'chantillon une
temprature de 40 C 45 C de manire faire fondre la
matire grasse qui doit tre liquide pour raliser
convenablement l'mulsion.
Note :
Utiliser l'appareil (3.3) selon les spcifications fixes
par le fabricant et veiller en particulier :
ne rien introduire dans l'chantillon ;
ne rien soustraire de l'chantillon durant tout le
mcanisme, soit par rtention de la matire grasse ou de la
casine coagule, soit par perte du srum de lait avant
l'incorporation des caillots ;
viter la formation de mousse ou d'mulsion d'air,
dont la prsence interdit toute mesure valable de la masse
volumique ou toute prise d'essais en volume.
21 Moharram 1437
4 novembre 2015
4.1.2 Homognisation manuelle :
4.1.2.1 Agiter l'chantillon par retournements successifs
rpts et le ramener une temprature d'environ 25 C.
Note :
Cette agitation ne doit pas tre violente, puisque le
flacon est plein ou presque plein. Il faut absolument viter
de provoquer la formation d'une mulsion d'air dans le
lait, pour ne pas fausser les prlvements. Cette premire
agitation n'a pas pour objet de rendre l'chantillon
homogne, mais seulement de dtacher la matire grasse
des parois du flacon et de la rompre en un trs grand
nombre de menus fragments.
4.1.2.2 Verser au dessus du tamis (3.4.2) une partie de
l'chantillon maintenu 25 C environ et la recueillir dans
un bcher (3.1) . Dilacrer les grumeaux l'aide de la
baguette (3.2) en utilisant le reste de l'chantillon.
Transvaser plusieurs reprises dans les bchers (3.1) afin
que l'homognisation soit complte . Si la matire grasse
n'est pas convenablement incorpore au lait, rchauffer
l'chantillon au bain marie (3.4.1) et renouveler les
oprations dcrites en (4.1.2).
4.1.3 Cas particuliers :
4.1.3.1 Il peut arriver que l'chantillon est baratt au
cours du transport, ou instantanment sous l'action de
l'agitateur et que les grumeaux de matire grasse recueillis
sur la passoire soient dj constitus par de vritables
amas de beurre.
Il convient, dans ce cas, de rchauffer l'chantillon
40 C, sous l'action combine du filet de lait chaud et de
l'agitateur, ces amas fondent et se divisent en traversant la
passoire.
Rpter l'opration une ou deux fois, puis refroidir
l'chantillon . Dans ce cas, il est prciser que, la matire
grasse n'est pas finement rincorpore au lait. Le
prlvement correct en vue du dosage de la matire grasse
sera difficile. ce titre, l'homognisation mcanique est
recommande.
4.1.3.2 Dans le cas ou les grumeaux de crme
adhraient fortement au bouchon, dbarrasser celui-ci de
la matire grasse l'aide de l'agitateur caoutchout, le
rincer sous le filet de lait et le laisser dans la passoire ou il
subira d'abondants lavages au cours des transvasements
successifs.
88
21 Moharram 1437
4 novembre 2015 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 58
4.2 temprature de conditionnement :
Le matriel de prlvement tant jaug pour une
temprature de 20 C et des dterminations
physico-chimiques tant effectues cette temprature, il
convient que le local, les ractifs et le lait lui-mme soient
une temprature de 20 C 5 C.
Il convient galement, d'amener le lait cette
temprature le plus rapidement possible.
4.3 Prises d'essais :
Aprs prparation de l'chantillon en vue de l'analyse
physique et chimique, les prises d'essais devront tre
effectues immdiatement . Il est recommand d'effectuer
sans interruption toutes les prises d'essais ncessaires aux
divers dosages.
Dans tous les cas, procder une ultime agitation
mnage de l'chantillon avant chaque prlvement.
Effectuer les prises d'essais soit par pese, soit en
volume. L'expression des rsultats en volume de lait ou en
masse de lait se fera en connaissant la masse volumique
de l'chantillon de lait.
Toutes les prises d'essais en volume doivent tre
effectues 20 C avec de la verrerie convenable gradue
cette temprature.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
Arrt du 4 Moharram 1437 correspondant au 18
octobre 2015 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de l'acidit titrable dans le lait sec.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 15-125 du 25 Rajab 1436
correspondant au 14 mai 2015, modifi, portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou El Kada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
17
Vu le dcret excutif n 13-328 du 20 Dhou El Kada
1434 correspondant au 26 septembre 2013 fixant les
conditions et les modalits d'agrment des laboratoires au
titre de la protection du consommateur et de la rpression
des fraudes ;
Vu l'arrt interministriel du 13 Chabane 1419
correspondant au 2 dcembre 1998 relatif aux
spcifications techniques des laits en poudre et aux
conditions et modalits de leur prsentation ;
Vu l'arrt du 17 Rajab 1420 correspondant au 27
octobre 1999, modifi et complt, relatif aux
spcifications du lait en poudre industriel et aux
conditions et modalits de sa prsentation, sa dtention,
son utilisation et sa commercialisation ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode de dtermination de
l'acidit titrable dans le lait sec.
Art. 2. Pour la dtermination de l'acidit titrable dans
le lait sec, les laboratoires du contrle de la qualit et de la
rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet effet,
doivent employer la mthode jointe en annexe.
lorsqu'une expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 4 Moharram 1437 correspondant au 18
octobre 2015.
Bakhti BELAB.
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION
DE L'ACIDITE TlTRABLE DANS LE LAIT SEC
1. Objet et domaine d'application :
La prsente mthode a pour objet de dfinir une
technique pratique de dtermination de l'acidit titrable
dans tous les types de lait sec.
89

18 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 58
2. Dfinition :
Acidit titrable du lait sec : nombre de millilitres d'une
solution d'hydroxyde de sodium 0,1 mol/l ncessaire
pour neutraliser, en prsence de phnolphtaline, une
quantit de lait reconstitu correspondant 10g de solide
non gras, jusqu' apparition d'une coloration rose.
3. Principe :
Prparation du lait reconstitu par addition d'eau une
prise d'essai de lait sec correspondant exactement 5 g de
solide non gras. Titrage avec une solution d'hydroxyde de
sodium 0,1 mol/l, en utilisant de la phnolphtaline
comme indicateur et du sulfate de cobalt (II) comme
solution colore de rfrence. Multiplication du nombre
de millilitres utiliss pour le titrage par le facteur 2, de
faon obtenir le nombre de millilitres pour 10g de solide
non gras.
La quantit de solution d'hydroxyde de sodium
ncessaire est en fonction de la quantit de substances
tampons prsente l'tat naturel dans le produit et de
l'acidit ou de l'alcalinit apparue ou ajoute.
4. Ractifs :
Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique
reconnue. L'eau utilise doit tre de l'eau distille ou
dminralise, dbarrasse du dioxyde de carbone par
bullition durant 10 min avant l'utilisation.
4.1 Hydroxyde de sodium, solution titre, c(NaOH) =
0,1 0,000 2 mol/l.
4.2 Solution colore de rfrence,
Dissoudre 3g de sulfate de cobalt (II) heptahydrat
(CoSO4 . 7H2O) dans de l'eau et complter 100 ml.
4.3 Solution de phnolphtaline,
Dissoudre 2g de phnolphtaline dans 75 ml d'thanol
95 % (V/V) et ajouter 20 ml d'eau. Ajouter de la solution
d'hydroxyde de sodium (4.1) jusqu' ce qu'une goutte
provoque une faible coloration rose, et complter 100 ml
avec de l'eau.
5. Appareillage :
5.1 Balance analytique,
21 Moharram 1437
4 novembre 2015
5.2 Burette, gradue 0,1 ml, avec une prcision de
0,05 ml.
5.3 Pipettes, de 2 ml de capacit.
5.4 Eprouvettes gradues, de 50 ml de capacit.
5.5 Fioles coniques, col rod, de 100 ml ou de 150 ml
de capacit. munies de bouchons en verre rods.
6. chantillonnage :
L'chantillonnage se fait dans des conditions
appropries.
7. Mode opratoire :
7.1 Prparation de l'chantillon pour essai :
Transvaser l'chantillon dans un rcipient propre et sec
(muni d'un couvercle tanche l'air), d'une capacit
d'environ le double du volume de l'chantillon.
Fermer immdiatement le rcipient et mlanger
soigneusement le contenu au moyen d'agitations et de
retournements rpts du rcipient. Eviter autant que
possible d'exposer l'chantillon l'air au cours de ces
oprations, afin de rduire le plus possible l'adsorption
d'eau.
7.2 Prise d'essai :
Prendre deux fioles coniques (5.5) et introduire, dans
chacune d'elles, (500/a ) 0,01g de l'chantillon pour
essai (7.1).
a tant la teneur de l'chantillon en solide non gras,
exprime en pourcentage avec deux dcimales.
Note - La teneur de l'chantillon en solide non gras peut
tre calcule en soustrayant de 100 la teneur en matire
grasse et la teneur en eau.
7.3 Dtermination :
7.3.1 Prparer le lait reconstitu en ajoutant 50 ml d'eau,
environ 20 C la prise d'essai (7.2) et en agitant
vigoureusement. Laisser reposer environ 20 min.
90
21 Moharram 1437
4 novembre 2015 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 58 19

7.3.2 Ajouter l'une des fioles coniques, 2 ml de la

solution colore de rfrence (4.2) pour avoir un tmoin
de couleur, et mlanger par agitation lgre.

Note - Si l'on a une srie de dterminations effectuer

sur des produits similaires, ce tmoin de couleur pourra
tre utilis pour toute la srie. Cependant, il ne doit pas
tre utilis plus de 2 h aprs sa prparation.

7.3.3 Ajouter la seconde fiole conique, 2 ml de la

solution de phnolphtaline (4.3) et mlanger par agitation
lgre.

7.3.4 Titrer le contenu de la seconde fiole conique par

addition, l'aide de la burette (5.2), en agitant, de la
solution d'hydroxyde de sodium (4.1), jusqu' obtention
d'une faible couleur rose semblable celle du tmoin de
couleur et persistant durant environ 5 secondes. La dure
du titrage ne doit pas dpasser 45 secondes.

Noter le volume de la solution d'hydroxyde de sodium

utilis en millilitres 0,05 ml prs.

8. Expression des rsultats :

8.1 Mode de calcul et formule :

L'acidit titrable est gale :

2xV

o V est le volume, en millilitres, de la solution

d'hydroxyde de sodium (4.1), utilis pour le titrage
(7.3.4).

Exprimer le rsultat avec une dcimale.

8.2 Rptabilit :

La diffrence entre les rsultats de deux dterminations,

effectues simultanment ou rapidement l'une aprs l'autre
par le mme analyste, ne doit pas dpasser 0,4 ml de
solution d'hydroxyde de sodium 0,1 mol/l pour 10g de
solide non gras.

91
 RPUBLIQUE ALGRIENNE DMOCRATIQUE ET POPULAIRE
__________________

MINISTRE DU COMMERCE

DIRECTION GNRALE DU CONTRLE

CONOMIQUE ET DE LA RPRESSION
DES FRAUDES

Direction des Laboratoires dEssais

et dAnalyses de la Qualit

MTHODES OFFICIELLES D'ANALYSES

PHYSICO-CHIMIQUES RELATIVES AUX VIANDES
ET PRODUITS CARNS
 Sommaire
1. Arrt du 19 Octobre 2005 rendant obligatoire une mthode de Dtermination
01
de l'humidit de la viande et des produits de la viande. (JO n 01 - 2006)

2. Arrt du 15 Janvier 2006 rendant obligatoire une mthode de mesurage du pH

04
de la viande et des produits de la viande. (JO n 23 - 2006)

3. Arrt du 25 Dcembre 2005 rendant obligatoire une mthode dchantillonnage

et de prparation de lchantillon pour lessai de la viande et des produits de la 07
viande. (JO n 27 - 2006)

4. Arrt du 21 Fvrier 2006 rendant obligatoire une mthode de dtermination de la

teneur en phosphore totale de la viande et des produits de la viande. (JO n 27 - 2006) 09

5. Arrt du 26 Avril 2006 rendant obligatoire une mthode de dtermination de

la teneur en matire grasse totale de la viande et des produits de la viande. 12
(JO n 33 - 2006)

6. Arrt du 26 Avril 200 6 rendant obligatoire une mthode de dtermination de

la teneur en azote totale de la viande et des produits de la viande. (JO n 37 - 2006) 15

7. Arrt du 29 Mars 2006 r endant obl igatoire une mthode de dtermination de l a

19
teneur en nitrate dans la viande et les produits de la viande. (JO n 43 - 2006)

8. Arrt du 29 Mars 200 6 r endant obl igatoire une m thode de d termination de l a

teneur en nitrites dans la viande et les produits de la viande. (JO n 43 - 2006) 23

9. Arrt du 08 Juillet 2006 rendant obligatoire une mthode de dtermination de la

teneure en azote basique volatil total dans les produits de la pche. 26
(JO n 58 - 2006)

10. Arrt du 08 Juillet 2006 rendant obligatoire une mthode de dtermination de la

teneur en histamine dans les produits de la pche par chromatographie liquide 28
haute performance. (JO n 58 - 2006)

11. Arrt du 08 Juillet 2006 rendant obligatoire une mthode de recherche

et didentification des substances anabolisantes dans la viande et les produits de la 30
viande. (JO n 59 - 2006)

12. Arrt du 12 Novembre 2014 rendant obligatoire la mthode de dtermination de

la teneur en hydroxyproline dans les viandes et les produits base de viande. 33
(JO n 69 - 2014)
13. Arrt du 23 N ovembre 2014 rendant obl igatoire la mthode d e r echerche des
37
polyphosphates dans les viandes et les produits base de viande. (JO n 12 - 2015)

14. Arrt du 25 Mars 2014 r endant obl igatoire la m thode de d tection des agents
colorants dans les viandes et les produits base de viande par chromatographie en 40
couche mince. (JO n 22 - 2015)
12 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 01 8 Dhou El Hidja 1426
8 janvier 2006

MINISTERE DU COMMERCE

Arrt du 16 Ramadhan 1426 correspondant au 19

octobre 2005 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de lhumidit de la viande et des
produits de la viande.

Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 05-161 du 22 Rabie El
Aouel 1426 correspondant au 1er mai 2005 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 19 Chaoual 1417
correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de
prparation et de commercialisation des merguez ;
Vu larrt du 24 Rabie Ethani 1421 correspondant au
26 juillet 2000, modifi et complt, relatif aux rgles
applicables la composition et la mise la
consommation des produits carns cuits ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire la mthode de
dtermination de lhumidit de la viande et des produits
de la viande.
Art. 2 Pour la dtermination de lhumidit de la
viande et des produits de la viande, les laboratoires du
contrle de la qualit et de la rpression des fraudes et les
laboratoires agrs cet effet doivent employer la
mthode dcrite en annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3 Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 16 Ramadhan 1426 correspondant au
19 octobre 2005.
Lachemi DJAABOUBE.

01
8 Dhou El Hidja 1426 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 01
8 janvier 2006
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION
DE LHUMIDITE DE LA VIANDE
ET DES PRODUITS DE LA VIANDE
1. DEFINITION
Humidit des viandes et produits base de viande :
perte de masse obtenue conformment aux conditions
opratoires dcrites ci-aprs. L'humidit s'exprime en
pourcentage en masse.
2. PRINCIPE
Aprs formation d'un mlange homogne de la prise
d'essai avec du sable et de l'thanol, et prsechage de ce
mlange sur un bain d'eau, dessiccation 103 2 C
jusqu' masse constante.
3. REACTIFS
3.1 Sable. Utiliser la fraction de sable qui passe
travers un tamis de 1,4 mm d'ouverture de maille, et qui
reste sur un tamis de 250 m.
Laver le sable l'eau courante, puis le faire bouillir dans
de l'acide chlorhydrique, 20 = 1,19 g/ml, dilu (1+1),
pendant 30 min, en remuant continuellement. Rpter
cette opration avec une nouvelle portion d'acide, jusqu'
ce que l'acide ne vire plus au jaune aprs bullition.
Laver alors le sable avec de l'eau distille jusqu' ce que
la recherche des chlorures donne un rsultat ngatif.
Scher le sable une temprature comprise entre 150 et
160 C et le conserver dans un flacon hermtiquement
ferm.
3.2 Ethanol , au moins 95% (V/V).
4. APPAREILLAGE
4.1 Hachoir viande, type de laboratoire, muni d'une
plaque dont les trous ont un diamtre n'excdant pas 4
mm.
4.2 Capsule plate, en porcelaine ou en mtal (par
exemple, en nickel, en aluminium ou en acier inoxydable),
de 60 mm de diamtre minimal et d'environ 25 mm de
hauteur.
4.3 Fine baguette en verre, aplatie une extrmit et
de longueur lgrement suprieure au diamtre de la
capsule.
4.4 Etuve, chauffage lectrique, rglable 103 2 C.
4.5 Bain d'eau.
4.6 Dessiccateur, garni d'un agent dshydratant
efficace.
4.7 Balance analytique.
5. ECHANTILLON
5.1 Utiliser un chantillon reprsentatif initial d'au
moins 200g, prlev selon la mthode dchantillonnage
et de prparation de lchantillon pour lessai de la viande
et des produits de la viande.
5.2 Conserver l'chantillon de faon viter sa
dtrioration et tout changement dans sa composition.
13
6. MODE OPERATOIRE
6.1 Prparation de l'chantillon
Rendre l'chantillon homogne par au moins deux
broyages dans le hachoir (4.1) et en le mlangeant.
Introduire l'chantillon dans un flacon tanche rempli
compltement et le conserver de faon viter sa
dtrioration et tout changement dans sa composition.
Analyser l'chantillon aussi rapidement que possible, mais
toujours dans les 24 heures.
6.2 Prise d'essai
Scher la capsule (4.2) contenant une quantit de sable
(3.1) gale trois ou quatre fois la masse de la prise
d'essai et la baguette en verre (4.3) pendant 30 min dans
l'tuve (4.4) rgle 103 2 C.
Aprs refroidissement de l'ensemble dans le
dessiccateur (4.6) jusqu' la temprature ambiante, peser
0,001 g prs.
Transvaser de 5 10 g de l'chantillon dans la capsule
et peser nouveau 0,001 g prs.
6.3 Dtermination
Ajouter 5 10 ml d'thanol (3.2), selon la masse de la
prise d'essai, et remuer la masse au moyen de la baguette
en verre (4.3).
Placer la capsule et son contenu sur le bain d'eau (4.5),
rgl une temprature comprise entre 60 et 80 C, de
manire viter les projections, et maintenir le chauffage
jusqu' ce que l'thanol se soit vapor ; agiter de temps
en temps.
Chauffer la capsule et son contenu pendant 2 h dans
l'tuve (4.4) rgle 103 2 C. Retirer la capsule et son
contenu de l'tuve et la placer dans le dessiccateur (4.6).
Laisser refroidir la capsule et son contenu jusqu' la
temprature ambiante et peser 0,001 g prs.
Rpter les oprations de chauffage en tuve, de
refroidissement et de pese jusqu' ce que les rsultats de
deux peses conscutives, spares par un chauffage de 1
h, ne diffrent pas de plus de 0,l % de la masse de la prise
d'essai.
Effectuer deux dterminations sur le mme chantillon
prpar.
7. EXPRESSION DES RESULTATS
7.1 Mode de calcul et formule
L'humidit de l'chantillon w en pourcentage en
masse, est gale :
m1m2
w= x 100%
m1 m0
02
14 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 01 8 Dhou El Hidja 1426
8 janvier 2006

O :

m0 est la masse, en grammes, de la capsule, de la

baguette et du sable;

m1 est la masse, en grammes, de la capsule, de la

baguette, du sable et de la prise d'essai, avant schage;

m2 est la masse, en grammes, de la capsule, de la

baguette, du sable et de la prise d'essai, aprs schage.

Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des

deux dterminations, si les conditions de rptabilit (voir
7.2) sont remplies.

Noter le rsultat avec une dcimale.

7.2 Rptabilit

La diffrence entre les rsultats de deux dterminations,

effectues simultanment, ou rapidement l'une aprs
l'autre par le mme analyste, ne doit pas tre suprieure
0,5g d'humidit pour 100 g d'chantillon.

03
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 23
18
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 15 Dhou El Hidja 1426 correspondant au 15
janvier 2006 rendant obligatoire la mthode de
mesurage du PH de la viande et des produits de
la viande.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 05-161 du 22 Rabie
El Aouel 1426 correspondant au 1er mai 2005 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 19 Chaoual 1417
correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de
prparation et de commercialisation des merguez ;
Vu larrt du 24 Rabie Ethani 1421 correspondant au
26 juillet 2000, modifi et complt, relatif aux rgles
applicables la composition et la mise la
consommation des produits carns cuits ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire la mthode de mesurage
du PH de la viande et des produits de la viande.
Art. 2 Pour le mesurage du PH de la viande et des
produits de la viande, les laboratoires du contrle de la
qualit et de la rpression des fraudes et les laboratoires
agrs cet effet doivent employer la mthode dcrite en
annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3 Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 15 Dhou El Hidja 1426 correspondant
au 15 janvier 2006.
Lachemi DJAABOUBE.
rfrence en un systme dlectrodes associes. A dfaut
ANNEXE
METHODE DE MESURAGE DU PH DE LA
VIANDE ET DES PRODUITS DE LA VIANDE
1. DEFINITION
PH des viandes et produits base de viande :
Rsultat des mesurages effectus selon la mthode
dcrite ci-dessous.
13 Rabie El Aouel 1427
12 avril 2006
Note :
Du fait du taux excessivement lev dlectrolytes dans
la phase acqueuse de nombreux produits base de viande,
et du fait que, dautre part, le PH-mtre est talonn avec
des solutions tampons faible taux dlectrolytes, la
valeur mesure ne peut pas, en gnral, tre considre
comme la valeur thorique du PH.
2. PRINCIPE
Mesurage de la diffrence de potentiel entre une
lectrode en verre et une lectrode de rfrence plonges
dans un chantillon de viande ou de produit base de
viande.
3. LIQUIDES DE NETTOYAGE
3.1 Ethanol, 95% (V/V).
3.2 Oxyde dithylique , satur deau.
3.3 Eau distille ou de puret quivalente.
4. APPAREILLAGE
4.1 PH-mtre, gradu en 0,1 unit PH ou en units plus
petites, et permettant les lectures avec une prcision de
0,05 unit PH. Si le PH-mtre nest pas quip dun
systme de correction de la temprature, lchelle doit
sappliquer des mesurages 20 C.
Lappareil doit tre suffisamment protg des effets
induits provenant des charges lectriques externes pendant
les mesurages.
4.2 Electrode en verre, on peut utiliser des lectrodes
en verre de diffrentes formes gomtriques : sphriques,
coniques, cylindriques ou en forme daiguilles.
Conserver llectrode en verre dans leau de telle faon
que sa membrane soit immerge.
4.3 Electrode de rfrence, par exemple lectrode au
calomel ou lectrode au chlorure dargent contenant une
solution sature de chlorure de potassium.
A dfaut dinstructions particulires, conserver
llectrode en verre dans une solution sature de chlorure
de potassium.
Note :
On peut runir llectrode en verre et llectrode de
dinstructions particulires, conserver celles-ci dans de
leau distille.
4.4 Hachoir viande, type de laboratoire, muni d'une
plaque perfore dont les trous ne dpassent pas 4 mm de
diamtre.
5. ECHANTILLON
5.1 Oprer partir dun chantillon reprsentatif dau
moins 200g.
04
13 Rabie El Aouel 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 23
12 avril 2006
5.2 dterminer immdiatement le PH ou conserver
lchantillon de manire rduire au minimum toute
variation de son PH.
6. MODE OPERATOIRE DES PRODUITS QUI
ONT ETE HOMOGENEISES
6.1 Prparation de l'chantillon pour essai
Except dans les cas dessais non destructifs,
homogniser lchantillon de laboratoire en le faisant
passer deux fois dans le hachoir viande (4.4) et mlanger
(voir 6.6).
6.2 Prise d'essai
Prlever une quantit de lchantillon pour essai,
suffisamment pour immerger ou enrober les lectrodes.
6.3 Etalonnage du PH-mtre
Etalonner le PH-mtre en utilisant une solution tampon
de PH exactement connu et aussi proche que possible du
PH de la solution dterminer (voir 8) la temprature de
mesurage.
Si le PH-mtre ne comprend pas de systme de
correction de temprature, la temprature de la solution
tampon doit tre amene 20 2 C.
6.4 Mesurage :
6.4.1 Introduire les lectrodes dans la prise dessai et
rgler le systme de correction de la temprature du
PH-mtre la temprature de la prise dessai. Sil nexiste
pas de systme de correction de temprature, la
temprature de la prise dessai doit tre amene 20 2
C.
6.4.2 Mesurer en suivant la technique propre au
PH-mtre utilis. Lire le PH directement sur lchelle de
lappareil, 0,05 unit PH prs, lorsquune valeur
constante a t obtenue.
6.4.3 Effectuer trois dterminations sur le mme
chantillon pour essai.
6.5 Nettoyage des lectrodes :
Nettoyer les lectrodes en les essuyant successivement
avec des morceaux douate imbibs doxyde dithylique
(3.2), puis dthanol (3.1).
Enfin, les laver leau (3.3) et les conserver selon les
indications donnes en (4.2) et (4.3).
6.6 Remarque sur le mode opratoire :
Les chantillons de produits trs secs peuvent, en plus,
du traitement normal (voir 6.1), tre homogniss avec
une masse deau gale dans un appareil mlangeur pour
laboratoire, avant de procder au mesurage du PH.
6.7 Expression des rsultats :
6.7.1 Calcul :
Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des
trois valeurs, si les conditions de rptabilit (voir 6.7.2)
sont remplies.
19
Exprimer le PH moyen 0,1 unit de PH prs.
6.7.2 Rptabilit :
La diffrence entre les valeurs extrmes rsultant des
trois mesurages ne doit pas dpasser 0,15 unit de PH.
7. MODE OPERATOIRE POUR LES PRODUITS
NON HOMOGENEISES :
7.1 Prise dessai :
Prlever une quantit de lchantillon pour laboratoire
suffisante pour permettre de mesurer le PH en plusieurs
points.
7.2 Etalonnage du PH-mtre :
Voir (6.3).
7.3 Mesurage :
7.3.1 Lorsquil sagit dune prise dessai de consistance
ferme, mnager une cavit lendroit o est effectu le
mesurage, de faon pouvoir introduire llectrode en
verre sans la casser.
7.3.2 Reprendre les mmes oprations telles que
dcrites aux points (6.4.1) et (6.4.2).
7.3.3 Recommencer le mesurage au mme endroit.
7.3.4 Sil est jug utile de connatre les diffrences de
PH entre plusieurs points dun produit, recommencer les
mesurages en des points diffrents, dont le nombre doit
tre en fonction de la nature et de la taille de lchantillon.
7.4 Nettoyage des lectrodes
Voir (6.5)
7.5 Expression des rsultats
7.5.1 Calcul
Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des
deux valeurs obtenues en un mme point, si les conditions
de rptabilit (7.5.2) sont remplies. Exprimer le PH
moyen pour chaque point 0,1 unit de PH prs.
7.5.2 Rptabilit :
La diffrence entre les deux valeurs obtenues en un
mme point ne doit pas dpasser 0,15 unit de PH.
8. NOTE SUR LE MODE OPERATOIRE
Les solutions tampons suivantes peuvent tre utilises
pour ltalonnage.
Pour la prparation de ces solutions, tous les ractifs
doivent tre de qualit analytique. Utiliser de leau
distille ou de leau de puret quivalente.
05
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 23 13 Rabie El Aouel 1427
20 12 avril 2006

8.1 Solution tampon PH 4,00 20 C, prpare

comme suit :

Peser, 0,001 g prs, 10,211 g dhydrognophtalate de

potassium KHC6 H4 (COO)2 sch pralablement
125 C jusqu masse constante, et le dissoudre dans
leau.
Complter 1.000 ml.
Cette solution a un PH de 4,00 10 C et de 4,01
30 C.

8.2 Solution tampon PH 5,45 20 C, prpare

comme suit :
Mlanger 500 ml dune solution aqueuse 0,2 N dacide
citrique avec 375 ml dune solution aqueuse dhydroxyde
de potassium 0,2 N.
Cette solution a un PH de 5,42 10 C et de 5,48
30 C.

8.3 Solution tampon PH 6,88 20 C, prpare

comme suit :

Peser, 0,001 g prs, 3,402 g de dihydrognophosphate

de potassium (KH2 PO4) et 3,549 g
dhydrognophosphate disodique (Na2 HPO4) et les
dissoudre dans leau, complter 1.000 ml.
Cette solution a un PH de 6,92 10 C et de 6,85
30 C.

06
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 27 27 Rabie El Aouel 1427
12 26 avril 2006

Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423

correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 19 Chaoual 1417
correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de
prparation et de commercialisation des merguez ;
Vu larrt du 24 Rabie Ethani 1421 correspondant au
26 juillet 2000, modifi et complt, relatif aux rgles
applicables la composition et la mise la
consommation des produits carns cuits ;

Arrte :

Article 1er. En application des dispositions de

larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire la mthode
dchantillonnage et de prparation de lchantillon pour
MINISTERE DU COMMERCE lessai de la viande et des produits de la viande.

Arrt du 23 Dhou El Kaada 1426 correspondant au Art. 2. Pour lchantillonnage et la prparation de

25 dcembre 2005 rendant obligatoire la mthode lchantillon pour lessai de la viande et des produits de la
dchantillonnage et de prparation de viande, les laboratoires du contrle de la qualit et de la
lchantillon pour lessai de la viande et des rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet effet
produits de la viande. doivent employer la mthode dcrite en annexe du prsent
arrt.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
Le ministre du commerce, laboratoire lorsquune expertise est ordonne.

Vu le dcret prsidentiel n 05-161 du 22 Rabie Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
El Aouel 1426 correspondant au 1er mai 2005 portant officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
nomination des membres du Gouvernement ; populaire.

Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, Fait Alger, le 23 Dhou El Kaada 1426 correspondant
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la au 25 dcembre 2005.
rpression des fraudes ; Lachemi DJAABOUBE.

07
27 Rabie El Aouel 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 27
26 avril 2006
ANNEXE
Mthode dchantillonnage et de prparation
des chantillons pour lessai de la viande
et des produits de la viande
1. Domaine dapplication
1.1 La prsente mthode donne des instructions
gnrales et spcifie les techniques suivre pour effectuer
un prlvement lmentaire partir de viande et produits
base de viande.
1.2 Une distinction est faite entre les mthodes
dchantillonnage, selon les catgories de produits
suivantes :
a) produits ou lots de viande et produits base de
viande prpars et emballs en units de dimensions
quelconques ou viande en morceaux ne pesant pas plus de
2 kg ;
b) carcasses, pices de carcasses (par exemple,
morceaux de viande frais ou congels, viande dsosse
frache ou congele, ctes de buf ou quartiers, carcasses
de mouton) et viande dcoupe mcaniquement.
1.3 Le volume et la valeur commerciale de ces produits
peuvent ncessiter lemploi dunits secondaires
chantillonner, en utilisant seulement une (des) partie(s)
de chacune des units chantillonner, en tenant compte
du but pour lequel ces units sont dmandes.
2. Mthodes dchantillonnage
2.1 Matriel dchantillonnage et rcipients pour
unit chantillonner :
2.1.1 Conditions gnrales :
Les matriaux des rcipients entrant directement en
contac avec les units chantillonner doivent tre
tanches leau et la graisse, insolubles et non
absorbants.
Les rcipients doivent tre de capacit et de forme
adaptes la taille des units chantillonner qui doivent
tre prleves.
Si lon utilise des flacons, ceux-ci doivent tre bien
ferms laide dun bouchon en caoutchouc ou en matire
plastique convenable, ou dun bouchon neuf de lige, ou
par une capsule mtallique ou en matire plastique qui se
visse.
Les bouchons doivent tre recouverts dune feuille en
matire inerte avant dtre adapts au rcipient qui
contient lchantillon. Les capsules qui se vissent doivent
avoir un revtement en matire inerte tanche aux
liquides.
Les matriaux et le matriel ne doivent pas influencer
les rsultats des examens effectus et doivent en
particulier rpondre aux spcifications appropries
mentionnes aux points (2.1.2) (2.1.3.) Il peut tre
ncessaire de diminuer laction de la lumire et/ou de
loxygne.
13
2.1.2 Matriel et rcipients pour les units
chantillonner en vue de lanalyse chimique.
Le matriel dchantillonnage et les rcipients pour
lunit chantillonner doivent tre secs et propres et ne
doivent pas influencer la composition chimique du
produit.
2.1.3 Matriel et rcipients pour les units
chantillonner en vue de lanalyse sensorielle.
Le matriel dchantillonnage et les rcipients pour
lunit chantillonner doivent tre secs et propres, et ne
doivent pas transmettre de got ou dodeur au produit.
2.2 Nombre dunits chantillonner prlever :
Le nombre dunits chantillonner de faon obtenir
un chantillon lmentaire, aussi reprsentatif que
possible du lot, doit tre en accord avec le plan
dchantillonnage spcifi dans le contrat ou bien accept
par les parties concernes.
Si diffrents types dessais ( savoir chimiques,
physiques et sensoriels) doivent tre raliss, des units
dchantillonnage spares doivent tre prleves pour
chaque type dessai.
2.3 Mthode dchantillonnage :
2.3.1 Viande ou produits base de viande prpars
ou emballs en units de dimensions quelconques ou
viande en morceaux ne pesant pas plus de 2 kg :
Prlever des units ou morceaux entiers constituant des
units lmentaires chantillonner. Prlever le nombre
requis dunits lmentaires chantillonner partir de
chaque lot selon le plan dchantillonnage indiqu au
point 2.2.
2.3.2 Carcasses, viande en morceaux pesant plus de 2
kg et viande dcoupe :
Prlever le nombre requis dunits lmentaires
chantillonner partir du lot, selon le plan
dchantillonnage indiqu au point (1.2) et mettre celles-ci
de ct, soit pour prlever des units secondaires
chantillonner en vue dessais destructifs en laboratoire
(par exemple examen chimique) soit pour des examens
non destructifs (par exemple examen visuel, sensoriel, au
moyen de tampon douate).
Un seul chantillon prlev partir dune carcasse ou
dune autre unit de viande de gros volume ne peut tre
reellement reprsentatif de la totalit. De mme, il est
impossible danalyser lunit de viande entire. Par
consquent, la finalit pour laquelle les units
chantillonner (lementaires ou secondaires) sont
prleves dterminera la technique suivre. Ainsi, en
gnral, des chantillons doivent tre prlevs comme
suit :
08
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 27
14
a) les units secondaires chantillonner dcoupes, de
masse comprise entre 500g et 1kg, et destines un
examen chimique de laboratoire, doivent tre prleves,
quand cela est possible, partir dune surface dj coupe
et de manire ne causer quun minimum de dommages ;
b) les units de matire grasse chantillonner (par
exemple, pour valuer les composs solubles dans les
matires grasses, tels que certains pesticides) doivent tre,
dans toute la mesure du possible, prleves partir de la
matire grasse du rein ;
c) les units chantillonner partir de lexsudat, par
exemple, pour les viandes rfrigres emballes sous vide,
doivent tre prleves soigneusement travers la pellicule
ou aprs ouverture de lemballage, en utilisant des
seringues striles et des fioles ou flacons. Si la viande est
replace dans le lot, la remettre dans un nouvel emballage
sous vide.
2.3.3 Temprature :
Relever la temprature dans chacun des lots
chantillonns dans la mesure o cette opration est
possible.
2.4 Emballage des units chantillonner :
2.4.1 Viande ou produits base de viande prpars
ou emballs en units de dimensions quelconques, ou
viande en morceaux pesant moins de 2 kg :
Si les units sont emballes dans un rcipient tanche
lair, aucun emballage complmentaire nest ncessaire.
Sil nen est pas ainsi, emballer chaque unit
chantillonner dans un rcipient appropri qui est ensuite
soigneusement ferm et scell.
2.4.2 Carcasses, pices de carcasses en morceaux
pesant plus de 2 kg et viande dcoupe :
Emballer chaque unit chantillonner dans un sac en
matire plastique appropri, qui est ensuite soigeusement
ferm et scell.
2.5 Transport et stockage des units
chantillonner :
Les units chantillonner doivent tre expdies au
laboratoire le plus rapidement possible aprs
lchantillonage, tout en tant maintenues, durant ce
temps, la temprature de conservation du produit
concern. Toutefois, les units chantillonner de
produits qui ont t entreposs au froid doivent tre
transportes :
une temprature de 0 C 2 C si lon estime
quelles seront examines dans les 24 h ;
ou congeles une temprature infrieure 24C
dans les autres cas.
Des prcautions doivent tre prises pour viter une
exposition directe la lumire solaire pendant le transport.
Les units chantillonner doivent arriver au laboratoire
non endommages, avec des scells en bon tat.
27 Rabie El Aouel 1427
26 avril 2006
Arrt du 22 Moharram 1427 correspondant au
21 fvrier 2006 rendant obligatoire la mthode
de dtermination de la teneur en phosphore total
de la viande et des produits de la viande.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 05-161 du 22 Rabie
El Aouel 1426 correspondant au 1er mai 2005
portant nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
la rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 19 Chaoual 1417
correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de
prparation et de commercialisation des merguez ;
Vu larrt interministriel du 29 Joumada Ethannia
1420 correspondant au 29 septembre 1999 fixant les
rgles de prparation et de mise la consommation des
viandes haches la demande ;
Vu larrt du 24 Rabie Ethanni 1421 correspondant au
26 juillet 2000, modifi et complt, relatif aux rgles
applicables la composition et la consommation des
produits carns cuits ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de
dtermination de la teneur en phosphore total de la viande
et des produits de la viande.
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en
phosphore total de la viande et des produits de la viande,
les laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent
employer la mthode dcrite en annexe du prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 22 Moharram 1427 correspondant
au 21 fvrier 2006.
Lachemi DJAABOUBE.
09
27 Rabie El Aouel 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 27
26 avril 2006
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION
DE LA TENEUR EN PHOSPHORE TOTAL
DE LA VIANDE ET DES PRODUITS
DE LA VIANDE.
1 . DEFINITION :
On entend par teneur en phosphore total des viandes
et produits base de viande la quantit de phosphore
dtermine conformment la mthode dcrite ciaprs.
La teneur en phosphore s'exprime en pourcentage en
masse de pentoxyde de phosphore.
2. PRINCIPE :
Minralisation de la prise d'essai par de l'acide
sulfurique et de l'acide nitrique.
Prcipitation du phosphore sous forme de
phosphomolybdate de quinoline. Schage et pese du
prcipit.
3. REACTIFS :
Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique.
L'eau utilise doit tre de l'eau distille ou de l'eau de
puret quivalente.
3.1 Acide sulfurique (P20 = 1,84 g/ml).
3.2 Acide nitrique (P20 = 1,40 g/ml).
3.3 Ractif prcipitant.
3.3.1 Dissoudre 70g de molybdate de sodium dihydrat
(Na2MoO4, 2H2O) dans 150 ml d'eau.
3.3.2 Dissoudre 60g d'acide citrique monohydrat [CH2
(CO2H).COH(CO2H).CH2(CO2H).H2O] dans 150 ml
d'eau et ajouter 85 ml d'acide nitrique (3.2).
3.3.3 Ajouter progressivement, en agitant, la solution
(3.3.1) la solution (3.3.2).
3.3.4 A 100 ml d'eau, ajouter 35 ml d'acide nitrique
concentr (3.2), puis 5 ml de quinoline distille.
Ajouter progressivement cette solution au mlange
(3.3.3) en agitant. Laisser reposer pendant 24 h la
temprature ambiante.
Filtrer, ajouter 280 ml d'actone et complter
1000 ml avec de l'eau distille.
Conserver le ractif l'obscurit dans un flacon en
matire plastique bien bouch.
15
4. APPAREILLAGE :
Matriel courant de laboratoire, et notamment :
4.1 Hachoir viande, du type laboratoire, muni d'une
plaque perfore dont les trous ont un diamtre maximal de
4 mm.
4.2 Balance analytique de prcision 0,001g.
4.3 Ballon de Kjeldahl, 250 ml ou fiole col long et
fond rond.
4.4 Systme de chauffage, permettant de chauffer le
ballon de Kjeldahl (4.3) en position incline de telle
manire que la source de chaleur n'atteigne que la partie
du ballon situe au-dessous du niveau du liquide.
4.5 Dispositif d'aspiration des vapeurs d'acide libres
pendant l'attaque chimique.
4.6 Filtre en verre fritt ( 10 16 m).
4.7 Etuve chauffage lectrique, munie d'un rglage de
temprature, capable de maintenir une temprature de
260C 20C.
4.8 Fiole filtrer, 500 ml.
4.9 Dessiccateur, garni d'un dshydratant efficace.
4.10 Pipette Pasteur.
4.11 Rfrigrant eau.
4.12 Bcher ou fiole conique de 250 ml
5. MODE OPERATOIRE :
5.1 Prparation de lchantillon pour essai :
Oprer partir d'un chantillon reprsentatif de 200 g
au minimum. Le rendre homogne en le mlangeant aprs
au moins deux passages dans le hachoir (4.1).
L'introduire dans un flacon tanche, que l'on remplit
compltement, et assurer sa conservation de faon viter
sa dtrioration et tout changement dans sa composition.
Analyser l'chantillon aussi vite que possible, mais
toujours dans les 24 h.
5.2 PRISE D'ESSAI :
Peser, 0,001 g prs, dans le ballon de Kjeldahl (4.3),
environ 5 g de l'chantillon prpar.
10
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 27
16
5.3 Minralisation :
Ajouter 20 ml d'acide nitrique (3.2) et quelques billes de
verre ou rgulateurs d'bullition.
Placer le ballon de Kjeldahl en position incline ( un
angle d'environ 40 par rapport la verticale) sur le
systme de chauffage (4.4). Chauffer pendant 5 mn,
laisser refroidir, puis ajouter 5 ml d'acide sulfurique (3.1).
Chauffer d'abord doucement jusqu' cessation de la
formation de mousse. Chauffer ensuite un peu plus fort.
Ds que la carbonisation commence se produire, ajouter
encore un peu d'acide nitrique l'aide dune pipette
Pasteur (4.11) et continuer le chauffage. Recommencer
cette opration jusqu' cessation de la production de
fumes brunes.
Enfin, chauffer le liquide jusqu' apparition de fumes
blanches.
Refroidir, ajouter avec prcaution 15 ml d'eau et faire
bouillir doucement pendant 10 mn, en rduisant autant
que possible l'vaporation de l'eau (par exemple, en
plaant sur l'orifice du ballon de Kjeldahl un morceau de
verre piriforme).
Le volume total doit tre alors de 50 ml.
Transvaser quantitativement le liquide dans un bcher
ou une fiole conique de 250 ml (4.12). Rincer le ballon de
Kjeldahl plusieurs reprises avec de l'eau. Joindre les
liquides de lavage au contenu de la fiole. Ajouter 10 ml
d'acide nitrique.
5.4 Dtermination :
Ajouter au liquide contenu dans la fiole conique ou le
bcher 50 ml du ractif prcipitant (3.3).
Recouvrir la fiole avec un verre de montre et laisser
bouillir une minute sur une plaque chauffante, place sous
l'appareil d'aspiration (4.5).
Laisser refroidir temprature ambiante en agitant trois
quatre fois au cours du refroidissement.
Filtrer quantitativement sous pression rduite sur un
filtre en verre fritt (4.6), pralablement sch
pendant 30 mn une temprature de 250C puis peser 1
mg prs, aprs refroidissement dans le dessiccateur (4.9).
Laver le prcipit cinq fois sur le filtre avec des
portions de 25 ml d'eau distille.
Scher dans l'tuve (4.7) une temprature de 260C
20C pendant 1 heure.
Laisser refroidir dans le dessiccateur (4.9), puis
effectuer la pese, 0,001 g prs.
11
27 Rabie El Aouel 1427
26 avril 2006
Note :
Dans le cas o la masse du prcipit serait au moins
gale 25 mg, recommencer les oprations avec une prise
d'essai moindre.
Effectuer deux dterminations sur le mme chantillon
prpar.
5.5 Essai blanc :
Effectuer un essai blanc en suivant le mme mode
opratoire et en employant les mmes quantits de tous les
ractifs, l'exclusion de la prise d'essai.
6.EXPRESSION DES RESULTATS
6.1 Mode de calcul et formule
La teneur en phosphore total de l'chantillon, en
pourcentage en masse de pentoxyde de phosphore est
gale :
100 M
0,03207 x M x = 3,207
E E
O :
E : est la masse, en grammes, de la prise d'essai.
M : est la masse, en grammes, du prcipit de
phosphomolybdate de quinoline (5.4).
Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des
deux dterminations, si les conditions de rptabilit sont
remplies (6.2).
Exprimer le rsultat avec deux dcimales.
6.2 Rptabilit :
La diffrence entre les rsultats de deux dterminations
effectues simultanment. ou rapidement l'une aprs
l'autre par le mme analyste, ne doit pas dpasser 0,02 g
de pentoxyde de phosphore pour 100 g d'chantillon.
7. NOTE SUR LE MODE OPERATOIRE :
La minralisation peut tre effectue par incinration en
modifiant en consquence les paragraphes (5.2) et (5.3) et
en reprenant les cendres par 15 ml d'acide nitrique
concentr (3.2). Utiliser un agitateur pour faciliter la
dissolution. Transvaser quantitativement le liquide dans
une fiole conique de 250 ml. Laver la capsule et l'agitateur
plusieurs reprises avec de l'eau. Joindre les liquides de
lavage au contenu de la fiole. Complter 50 ml.
Adapter sur la fiole un rfrigrant ascendant (4.10) et
maintenir bullition pendant 1/2 h. Laisser refroidir et
procder selon le paragraphe (5.4).
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 33 23 Rabie Ethani 1427
30 21 mai 2006

MINISTERE DU COMMERCE

Arrt du 28 Rabie El Aouel 1427 correspondant

au 26 avril 2006 rendant obligatoire la mthode
de dtermination de la teneur en matire grasse
totale de la viande et des produits de la viande.

Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 05-161 du 22 Rabie
El Aouel 1426 correspondant au 1er mai 2005 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
la rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 19 Chaoual 1417
correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de
prparation et de commercialisation des merguez ;
Vu larrt interministriel du 29 Joumada Ethania 1420
correspondant au 29 septembre 1999 fixant les rgles de
prparation et de mise la consommation des viandes
haches la demande ;
Vu larrt du 24 Rabie Ethani 1421 correspondant au
26 juillet 2000, modifi et complt, relatif aux rgles
applicables la composition et la consommation des
produits carns cuits ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de
dtermination de la teneur en matire grasse totale de la
viande et des produits de la viande.

Art. 2. Pour la dtermination de la teneur de la

matire grasse totale de la viande et des produits de la
viande, les laboratoires du contrle de la qualit et de la
rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet effet
doivent employer la mthode dcrite en annexe.

Cette mthode doit tre galement utilise par le

laboratoire lorsquune expertise est ordonne.

Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal

officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 28 Rabie El Aouel 1427 correspondant
au 26 avril 2006.
Lachemi DJABOUBE.

12
23 Rabie Ethani 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 33
21 mai 2006
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION
DE LA TENEUR EN MATIERE GRASSE
TOTALE DE LA VIANDE ET DES PRODUITS
DE LA VIANDE
1. DEFINITION
La teneur en matire grasse totale des viandes et
produits base de viande s'exprime en pourcentage en
masse.
2. PRINCIPE
Traitement de l'chantillon avec de l'acide
chlorhydrique dilu bouillant pour librer les fractions
lipidiques incluses et lies.
Filtration de la masse rsultante et, aprs schage,
extraction, au moyen de n-hexane ou d'ther de ptrole, de
la matire grasse retenue sur le filtre.
3. REACTIFS
Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique
reconnue. L'eau utilise doit tre de l'eau distille ou de
l'eau de puret au moins quivalente.
3.1 Solvant d'extraction, n-hexane ou ther de ptrole,
distillant entre 40C et 60C et ayant un indice de brome
infrieur 1. Le rsidu d'vaporation complte, dans le
cas des deux solvants, ne doit pas dpasser 0,002g pour
100 ml.
3.2 Acide chlorhydrique, solution 4 N environ.
Diluer 100ml d'acide chlorhydrique concentr
(p20 = 1,19g/ml) avec 200 ml d'eau, et mlanger.
3.3 Papier de tournesol bleu.
3.4 Rgularisateurs d'bullition.
4. APPAREILLAGE
Matriel courant de laboratoire, et notamment :
4.1 Hachoir viande, de type laboratoire, muni
d'une plaque dont les trous ont un diamtre n'excdant pas
4 mm.
4.2 Fiole conique, capacit 250 ml.
4.3 Verre de montre ou bote de Ptri, de 80 mm de
diamtre minimal.
4.4 Cartouche d'extraction, en papier filtre dgraiss.
4.5 Coton dgraiss.
4.6 Appareil d'extraction continue ou semi-continue,
par exemple de type Soxhlet, avec une fiole d'extraction
d'environ 150 ml.
4.7 Bain de sable ou bain d'eau, chauff
lectriquement, ou appareil similaire appropri.
13
31
4.8 Etuve chauffage lectrique, rglable 103 2C.
4.9 Dessiccateur, garni d'un agent dshydratant
efficace.
4.10 Balance analytique de prcision 0,001 g.
4.11 Papier filtre plis, filtration moyenne.
5. ECHANTILLON
5.1 Utiliser un chantillon reprsentatif initial d'au
moins 200 g.
5.2 Conserver l'chantillon de faon viter sa
dtrioration et tout changement dans sa composition.
6. MODE OPERATOIRE
6.1 Prparation de l'chantillon
Rendre l'chantillon homogne par au moins deux
broyages dans le hachoir (4.1) et en le mlangeant.
Introduire l'chantillon dans un flacon tanche rempli
compltement et le conserver de faon viter sa
dtrioration et tout changement dans sa composition ;
Analyser l'chantillon aussi rapidement que possible,
mais toujours dans les 24 h. qui suivent
lhomognisation.
6.2 Prise d'essai
Selon la teneur en matire grasse suppose, peser
0,001 g prs, de 3 5 g de l'chantillon broy et les
introduire dans la fiole conique de 250 ml (4.2).
6.3 Dtermination
Scher pendant 1 h l'tuve (4.8) rgle 103 2C, la
fiole de l'appareil d'extraction (4.6) contenant des
rgularisateurs d'bullition (3.4). Laisser refroidir la fiole
jusqu' la temprature ambiante dans le dessiccateur
(4.9) et peser 0,001 g prs.
Ajouter, la prise d'essai, 50 ml d'acide chlorhydrique
(3.2) et couvrir la fiole conique (4.2) avec un petit verre
de montre. Chauffer la fiole conique jusqu' ce que le
contenu commence bouillir; maintenir l'bullition
pendant 1 h et agiter de temps en temps. Ajouter 150 ml
d'eau chaude.
Mouiller le papier filtre (4.11 ) dans un entonnoir avec
de l'eau et verser le contenu chaud de la fiole conique sur
le filtre. Bien laver la fiole et le verre de montre trois fois
avec de l'eau chaude et les scher l'tuve (4.8). Laver le
papier filtre avec de l'eau chaude jusqu' ce que les
liquides de lavage ne modifient pas la couleur d'un papier
de tournesol bleu (3.3). Mettre le papier filtre sur un verre
de montre ou dans une bote de Ptri (4.3) et scher
pendant 1 h l'tuve rgle 103 2C. Laisser refroidir.
Rouler le papier filtre et l'insrer dans la cartouche
d'extraction (4.4). Enlever toute trace de matire grasse du
verre de montre ou de la boite de Ptri en utilisant du
coton (4.5) humidifi avec le solvant d'extraction (3.1) et
mettre galement le coton dans la cartouche d'extraction.
Disposer la cartouche dans l'appareil d'extraction. Le
papier filtre doit tre manipul soit avec des pincettes
susceptibles d'tre rinces, soit avec les doigts gants de
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 33
32
papier. Verser le solvant d'extraction dans la fiole sche
de l'appareil d'extraction. Laver l'intrieur de la fiole
conique utilise pour l'attaque avec l'acide chlorhydrique,
et le verre de montre la couvrant, avec une portion du
solvant d'extraction et l'ajouter dans la fiole d'extraction.
La quantit totale de solvant doit tre d une fois et demie
deux fois la capacit du tube d'extraction de l'appareil.
Adapter la fiole l'appareil d'extraction. Chauffer la fiole
sur le bain de sable, le bain d'eau ou un appareil similaire
(4.7) pendant 4 h.
Aprs extraction, prendre la fiole contenant le liquide
provenant de l'appareil d'extraction et liminer le solvant
par distillation, en utilisant par exemple le bain de sable
ou le bain d'eau.
Laisser vaporer les dernires traces du solvant au bain
d'eau en utilisant, si ncessaire, un courant d'air.
Scher la fiole pendant 1 h I'tuve rgle 103 2C schage.
et, aprs refroidissement la temprature ambiante dans le
dessiccateur, peser 0,001 g prs. Rpter cette opration
jusqu' ce que les rsultats de deux peses successives,
spares par un chauffage dune heure, ne diffrent pas de
plus de 0,1% de la masse de la prise d'essai.
S'assurer que l'extraction est acheve en prenant une
seconde fiole d'extraction et en procdant une extraction
pendant une nouvelle priode de 1 h avec une portion
frache de solvant. L'accroissement de masse ne doit pas
excder 0,l % de la masse de la prise d'essai.
Effectuer deux dterminations sur le mme chantillon
prpar.
14
23 Rabie Ethani 1427
21 mai 2006
7 . EXPRESSION DES RESULTATS
7.1 Mode de calcul et formule
La teneur en matire grasse totale de l'chantillon, en
pourcentage en masse, est gale :
= (m2 m1) x 100
m0
o :
m0 est la masse, en grammes, de la prise d'essai ;
ml est la masse, en grammes, de la fiole et des
rgularisateurs d'bullition ;
m2 est la masse, en grammes, de la fiole des
rgularisateurs d'bullition et de la matire grasse aprs
Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des
deux dterminations, si les conditions de rptabilit, (7.2)
sont remplies.
Noter le rsultat avec une dcimale.
7.2 Rptabilit
La diffrence entre les rsultats de deux dterminations
effectues simultanment, ou rapidement l'une aprs
l'autre, par le mme analyste, ne doit pas tre suprieure
0,5 g de matire grasse totale pour 100 g d'chantillon.
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 37 8 Joumada El Oula 1427
18 4 juin 2006

ARRETES, DECISIONS ET AVIS

ANNEXE
MINISTERE DU COMMERCE
METHODE DE DETERMINATION
Arrt du 28 Rabie El Aouel 1427 correspondant DE LA TENEUR EN AZOTE TOTAL DE LA
au 26 avril 2006 rendant obligatoire la mthode VIANDE ET DES PRODUITS DE LA VIANDE
de dtermination de la teneur en azote total de la
viande et des produits de la viande.
1. DEFINITION
Le ministre du commerce,
Teneur en azote des viandes et des produits base
Vu le dcret prsidentiel n 05-161 du 22 Rabie
El Aoual 1426 correspondant au 1er mai 2005 portant de viande : Quantit dazote correspondant lammoniac
nomination des membres du Gouvernement ; produit et dtermine dans les conditions spcifies
ci-aprs.
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ; 2. PRINCIPE
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions Attaque dune prise dessai par lacide sulfurique
du ministre du commerce ; concentr qui transforme lazote organique en ions
Vu larrt interministriel du 19 Chaoual 1417 ammonium, en prsence de sulfate de cuivre (II) comme
correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de catalyseur; alcalinisation, distillation de lammoniac libr
prparation et de commercialisation des merguez ; dans un excs de solution dacide borique, titrage de
Vu larrt interministriel du 29 Joumada Ethania 1420 lammoniac combin avec lacide borique par lacide
correspondant au 29 septembre 1999 fixant les rgles de chlorhydrique et calcul, partir de lammoniac produit, de
prparation et de mise la consommation des viandes la teneur en azote de lchantillon.
haches la demande ;
Vu larrt du 24 Rabie Ethani 1421 correspondant au
3. REACTIFS
26 juillet 2000, modifi et complt, relatif aux rgles
applicables la composition et la consommation des
Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique
produits carns cuits ;
reconnue. Leau utilise doit tre de leau distille ou de
Arrte : leau de puret au moins quivalente.
Article 1er. En application des dispositions de
3.1 Sulfate de cuivre (II) pentahydrate (CuSO4.5H2O)
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de 3.2 Sulfate de potassium ( K2SO4 ) anhydre.
dtermination de la teneur en azote total de la viande et
des produits de la viande. 3.3 Acide sulfurique, p20 1,84 g/ml.

Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en azote
total de la viande et des produits de la viande, les
laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent
employer la mthode dcrite en annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 28 Rabie El Aouel 1427 correspondant
au 26 avril 2006.
Lachemi DJAABOUBE.
3.4 Hydroxyde de sodium, solution exempte de
carbonate, contenant environ 33 g dhydroxyde de sodium
(NaOH) pour 100 g de solution.
Dissoudre 500 g d'hydroxyde de sodium dans
1000 ml d'eau.
3.5 Acide borique, solution.
Dissoudre 40 g d'acide borique (H3BO3) dans de
l'eau et complter 1000 ml.
3.6 Acide chlorhydrique, solution titre 0,l N, la
normalit tant connue avec quatre dcimales.

15
8 Joumada El Oula 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 37
4 juin 2006
3.7 Indicateur, solution : indicateur mixte (rouge de
mthyle-bleu de mthylne), prpar par dissolution de
2g de rouge de mthyle et de 1g de bleu de mthylne
dans 1000 ml d'thanol 95 % (V/V).
Le changement de couleur de la solution d'indicateur a
lieu pour un pH de 5,4.
Conserver la solution d'indicateur dans une bouteille
fonce dans un endroit sombre et frais.
3.8 Rgularisateurs d'bullition.
3.8.1 Pour l'attaque chimique
Billes en verre, carbure de silicium ou clats de
porcelaine dure.
3.8.2 Pour la distillation
Carbure de silicium ou morceaux de pierre ponce
rcemment incinrs.
4. APPAREILLAGE
Matriel courant de laboratoire, et notamment :
4.1.1 Hachoir viande, de type laboratoire, muni d'une
plaque perfore dont les trous ont un diamtre ne
dpassant pas 4 mm.
4.1.2 Homognisateur.
4.2 Papier sulfuris, d'environ 9 cm x 6 cm.
4.3 Burette, de 50 ml de capacit.
4.4 Matras de Kjeldahl, de 800 ml de capacit
maximale, muni, si ncessaire, d'un bouchon en verre
piriforme s'adaptant librement au sommet du col.
4.5 Appareil d'entranement par la vapeur, ou, en
variante, appareil de distillation ordinaire.
4.6 Dispositif de chauffage, sur lequel le matras
de Kjeldahl peut tre chauff en position incline de
manire que la source de chaleur n'atteigne que la partie
de la paroi du matras situe au-dessous du niveau du
liquide.
4.7 Dispositif d'aspiration, pour les vapeurs d'acide
libres pendant l'attaque chimique.
16
19
4.8 Balance analytique.
5. ECHANTILLON
5.1 Oprer sur un chantillon reprsentatif d'au moins
200g.
5.2 Conserver l'chantillon de faon viter toute
dtrioration et tout changement dans sa composition. Les
agents de conservation, s'il y en a, ne doivent pas contenir
de composants azots en quantits mesurables.
6. MODE OPERATOIRE
6.1 Prparation de l'chantillon pour essai
Rendre l'chantillon homogne par au moins deux
passages dans le hachoir viande (4.1) et mlanger.
Garder l'chantillon dans un flacon ferm, tanche et
rempli compltement, et le conserver de faon viter
toute dtrioration et tout changement dans sa
composition. Analyser l'chantillon ds que possible aprs
l'homognisation, mais toujours dans les 24 h.
6.2 Prise d'essai
Placer quelques rgularisateurs d'bullition (3.8) dans le
matras de Kjeldahl (4.4), puis ajouter environ 15g du
sulfate de potassium anhydre (3.2) et 0,5 g du sulfate de
cuivre(Il) (3.1).
Peser, 0,001g prs, environ 2 g (ou 1,5g dans le cas
d'un chantillon trs gras) de l'chantillon pour essai (6.1)
sur un morceau de papier sulfuris (4.2).
Introduire le papier sulfuris et la prise d'essai dans le
matras de Kjeldahl.
6.3 Dtermination
Ajouter, dans le matras de Kjeldahl, 25 ml de l'acide
sulfurique (3.3). Mlanger doucement la solution par
rotation. Le cas chant, un bouchon piriforme en verre
peut tre introduit dans le col du matras, l'extrmit effile
tant dirige vers le bas.
Placer le matras en position incline (inclinaison
d'environ 40 par rapport la verticale) sur le dispositif
de chauffage (4.6). Le chauffer d'abord doucement,
jusqu' ce que la formation de mousse cesse et que le
contenu se soit compltement liqufi. Puis attaquer en
chauffant vigoureusement et en faisant tourner
priodiquement le matras, jusqu' ce que le liquide soit
compltement limpide et de teinte claire bleu-vert.
Maintenir le liquide bullition durant encore 90 min.
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 37
20
La totalit de l'attaque chimique doit s'effectuer en un
minimum de 2 h. Prendre soin qu'aucun liquide condens
ne coule sur la paroi extrieure du matras. Eviter que trop
d'acide sulfurique ne s'chappe par suite d'une surchauffe
pendant l'attaque chimique, ce qui risquerait d'entraner
une perte d'azote.
Refroidir environ 40 C et ajouter, avec prcaution,
environ 50 ml d'eau. Mlanger et laisser refroidir.
Verser, au moyen d'une prouvette gradue, 50 ml de
la solution d'acide borique (3.5) dans une fiole conique
d'environ 500 ml de capacit, ajouter 4 gouttes de la
solution d'indicateur (3.7), mlanger et placer la
fiole sous le rfrigrant de l'appareil de distillation (4.5)
de faon que l'extrmit de l'allonge plonge dans le
liquide.
Oprer sur le contenu du matras de Kjeldahl selon l'une
des deux techniques suivantes :
a) En cas d'entranement par la vapeur
Transvaser le contenu du matras de Kjeldahl dans
l'appareil de distillation et rincer le matras avec
environ 50 ml d'eau. Ajouter, au moyen d'une prouvette
gradue, 100 ml de la solution d'hydroxyde de sodium
(3.4), en les versant avec soin le long du col inclin du
matras, afin que les deux couches ne se mlangent pas
dans le matras. Relier immdiatement le matras la tte
distiller de l'appareil de distillation. Chauffer le liquide
alcalin en le faisant traverser par la vapeur jusqu'
bullition et maintenir celle-ci durant 20 mn. Chauffer
d'abord lentement afin de rduire un minimum la
formation de mousse. Le volume de distillat recueilli doit
tre d'au moins 150 ml.
b) En cas de distillation ordinaire
Diluer, avec prcaution, le contenu du matras de
Kjeldahl avec 300 ml d'eau et agiter par rotation.
Transvaser, si ncessaire, dans une fiole de 1 litre. Aprs
environ 15 mn, ajouter, au moyen d'une prouvette
gradue, 100 ml de la solution d'hydroxyde de sodium
(3.4), en les versant avec soin le long du col inclin du
matras, afin que les deux couches ne se mlangent pas
dans le matras. Relier immdiatement le matras la tte
distiller de l'appareil de distillation.
Distiller au moins 150 ml du liquide, mme si le
mlange prsente des soubresauts irrguliers. Poursuivre
la distillation jusqu' ce que le mlange commence
prsenter des soubresauts ou jusqu' l'obtention de 250 ml
de distillat. S'assurer que le distillat est effectivement
refroidi et viter que la solution d'acide borique ne
s'chauffe.
17
8 Joumada El Oula 1427
4 juin 2006
Dans les deux cas, juste avant la fin de la distillation,
abaisser la fiole conique afin que l'extrmit de l'allonge
soit au-dessus du niveau du liquide. Rincer l'extrmit de
l'allonge au-dessus du liquide ( l'intrieur et l'extrieur)
avec un peu d'eau. Vrifier que la distillation de
l'ammoniac est acheve, au moyen d'un papier de
tournesol rouge, humect avec de l'eau distille ; sa
couleur ne doit pas tre modifie par le liquide provenant
du rfrigrant. Arrter le chauffage. Si la distillation se
rvle tre incomplte, effectuer une nouvelle
dtermination en se conformant soigneusement aux
indications.
Titrer le contenu de la fiole conique avec la solution
d'acide chlorhydrique (3.6). Noter le volume de solution
d'acide chlorhydrique ncessaire, en l'estimant 0,02 ml
prs.
Effectuer deux dterminations sur des prises d'essais
provenant du mme chantillon pour essai.
6.4 Essai blanc
Effectuer toujours un essai blanc (en double) lorsque
de nouveaux lots de ractifs ou des solutions
frachement prpares sont utiliss. Il est recommand
d'effectuer priodiquement un essai blanc pour les
ractifs et les solutions qui ont dj t utiliss depuis
quelques temps.
Effectuer cet essai blanc selon (6.3) en prenant
uniquement un morceau de papier sulfuris (4.2).
7. EXPRESSION DES RESULTATS
7.1 Mode de calcul et formule
La teneur en azote, exprime en pourcentage en masse,
est gale :
0,0014 x (V1 V0) x 100
m
O
V0 : est le volume, en millilitres, de solution d'acide
chlorhydrique 0,l N, utilis pour l'essai blanc ;
V1 : est le volume, en millilitres, de solution d'acide
chlorhydrique 0,l N, utilis pour la dtermination ;
m : est la masse, en grammes, de la prise d'essai.
Note :
Si la solution titre d'acide chlorhydrique utilise n'a pas
exactement la concentration prvue en (3.6), un facteur de
correction appropri doit tre utilis pour le calcul du
rsultat.
8 Joumada El Oula 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 37
4 juin 2006 21

Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des

deux dterminations si les conditions de rptabilit (7.2)
sont remplies.

Exprimer le rsultat 0,0lg prs d'azote pour 100g

d'chantillon.

7.2 Rptabilit

La diffrence entre les rsultats de deux dterminations

effectues presque simultanment ou rapidement l'une
aprs l'autre par le mme analyste, ne doit pas dpasser
0,10g d'azote pour 100g d'chantillon.

8. REMARQUES

8.1 La dtermination doit tre effectue dans une pice

exempte de vapeur d'ammoniac.

8.2 Il est galement possible d'effectuer le dosage sur

une partie aliquote du contenu du matras de Kjeldahl.
Dans ces conditions, des modifications appropries
doivent tre apportes l'appareillage et au mode
opratoire (quantits et concentrations des ractifs utiliss,
temps de distillation, volume de distillat.

8.3 L'azote provenant de composs organiques non

protiques sera inclus dans la dtermination, et ainsi des
rsultats inexacts de teneur en protines seront obtenus si
la teneur en protines est calcule partir de la teneur en
azote.

Si, outre le rsultat en azote, on veut exprimer le

rsultat en protines, il faut indiquer le coefficient utilis.

18
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43 2 Joumada Ethania 1427
14 28 juin 2006

MINISTERE DU COMMERCE

Arrt du 29 Safar 1427 correspondant au 29 mars

2006 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur en nitrates dans la
viande et les produits de la viande.

Le ministre du commerce,

Vu le dcret prsidentiel n 05-161 du 22 Rabie El

Aoual 1426 correspondant au 1er mai 2005 portant
nomination des membres du Gouvernement ;

Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,

modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;

Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423

correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;

19
2 Joumada Ethania 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43
28 juin 2006
Vu larrt interministriel du 19 Chaoual 1417
correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de
prparation et de commercialisation des merguez ;
Vu larrt interministriel du 29 Joumada Ethania 1420
correspondant au 29 septembre 1999 fixant les rgles de
prparation et de mise la consommation des viandes
haches la demande ;
Vu larrt du 24 Rabie Ethani 1421 correspondant au
26 juillet 2000, modifi et complt, relatif aux rgles
applicables la composition et la consommation des
produits carns cuits;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de
dtermination de la teneur en nitrates dans la viande et les
produits de la viande.
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en nitrates
dans la viande et les produits de la viande, les laboratoires
du contrle de la qualit, et de la rpression des fraudes et
les laboratoires agrs cet effet doivent employer la
mthode dcrite en annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 29 Safar 1427 correspondant au 29 mars
2006.
Lachemi DJAABOUBE.
10g de sel disodique dihydrat de lacide thylne diamine
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION
DE LA TENEUR EN NITRATES DANS LA
VIANDE ET LES PRODUITS DE LA VIANDE
1. DEFINITION
On entend par teneur en nitrates des viandes et produits
base de viande la teneur en nitrates dtermine suivant le
mode opratoire dcrit ci-aprs et exprime en
milligrammes de nitrate de potassium par kilogramme
(parties par million).
2. PRINCIPE
Extraction leau chaude de la viande ou du produit
base de viande, prcipitation des protines et filtration.
Rduction des nitrates extraits dans le filtrat en nitrites
par du cadmium mtallique. Obtention dune coloration
rouge par addition de chlorure de sulfanilamide et de
chlorure de naphtyl-thilne-diamine du filtrat et
mesurage photomtrique une longueur donde de
538 mm.
15
3. REACTIFS
Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique.
Leau utilise doit tre de leau distille ou de puret au
moins quivalente.
3.1 Solutions utilises pour la prcipitation des
protines.
3.1.1 Ractif I
Dissoudre 106g d'hexacyanoferrate de potassium
trihydrat (K4Fe(Cn)6,3H20) dans de leau et complter
1000 ml.
3.1.2 Ractif II
Dissoudre 220g d'actate de zinc, dihydrat
[ZN(CH3COO)2,2H20] et 30 ml dacide actique
cristalisable dans de leau et complter 1000 ml.
3.1.3 Solution sature de borax
Dissoudre 50g de ttraborate de sodium dcahydrat
(Na2B4O7,10H2O) dans 1000 ml deau tide et laisser
refroidir la temprature du laboratoire.
3.2 Zinc en baguettes, denviron 15 cm de longueur et
5 7 mm de diamtre.
3.3 Sulfate de cadmium, solution 30 g/l.
Dissoudre 37g de sulfate de cadmium (3CdSO4,8H2O)
dans de leau et complter 1000 ml.
3.4 Acide chlorhydrique, solution environ 0,IN.
Diluer 8 ml dacide chlorhydrique concentr
(p20 = 1,19 g/ml) dans de leau et complter 1000 ml.
3.5 Solution tampon ammoniacale, pH 9,6 et 9,7.
Diluer 20 ml dacide chlorhydrique concentr
(p20 = 1,19 g/ml) avec 500 ml deau. Mlanger, ajouter
ttraactique [CH2-N (CH2-COOH) CH2-COONa]2,
2H2O et 55 ml dhydroxyde dammonium concentr
(p20 = 0,88 g/ml). Complter 1000 ml avec de leau et
mlanger. Contrler le pH.
3.6 Nitrite de sodium, solutions talons.
Dissoudre 1,000g de nitrite de sodium (NaNO2) dans de
leau et complter 100 ml dans une fiole jauge.
Transfrer, la pipette, 5 ml de cette solution dans une
fiole jauge de 1000 ml. Ajuster au trait repre.
Prparer une srie de solutions talons en transfrant
la pipette 5, 10 et 20 ml de cette solution dans des fioles
jauges de 100 ml et en compltant au trait repre avec de
leau. Ces solutions talons contiennent respectivement
2,5, 5,0 et 10,0g de nitrite de sodium par millilitre.
3.7. Solutions pour le dveloppement de la
coloration.
3.7.1 Solution I
Dissoudre par chauffage au bain deau 2g de
sulfamilamide (NH2-C6H4-SO2-NH2-) dans 800 ml
deau. Refroidir et filtrer si ncessaire, et ajouter, en
agitant, 100 ml dacide chlorhydrique concentr (p20 =
1,19 g/ml). Complter 1000 ml avec de leau.
20
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43
16
3.7.2 Solution II
Dissoudre, dans leau, 0,1g de chlorure de N
naphtyl-1-thylnediamine : (C10H7-NH-CH2-CH2-NH2,
2HC). Complter 100 ml avec de leau.
3.7.3 Solution III
Complter 1000 ml, avec de leau 445 ml dacide
chlorhydrique (p20 = 1,19 g/ml).
Garder ces solutions dans des flacons brun fonc, bien
ferms et les conserver au rfrigrateur, une semaine au
maximum.
3.8 Nitrate de potassium, solutions talons.
Dissoudre 1,465g de nitrate de potassium (KNO3) dans
de leau et complter 100 ml dans une fiole jauge.
Transfrer, la pipette, 5 ml de la solution dans une autre
fiole jauge de 1000 ml et ajuster au trait repre.
Cette solution contient 73,25 g/ml de nitrate de
potassium.
Cette solution talon doit tre prpare le jour mme
de son utilisation.
4. APPAREILLAGE
Matriel courant de laboratoire, et notamment :
4.1 Hachoir viande, de type laboratoire, muni dune
plaque dont les trous ont un diamtre ne dpassant
pas 4 mm.
4.2 Balance analytique.
4.3 Fioles jauges, 100 ml, 200 ml et 1000 ml.
4.4. Pipettes jauges un trait, de 20 ml, 10 ml et si
ncessaire, dune autre capacit, selon le prlvement
aliquote (5.8.1).
4.5 Bain deau bouillante.
4.6 Papier filtre plis, de 15 cm de diamtre environ,
exempt de nitrites et de nitrates.
4.7 Appareil en verre, destin la rduction des
nitrates (voir figure).
4.8 Colorimtre photolectrique ou spectrophotomtre
avec cuves de 1 cm de parcours optique.
4.9 Fiole conique, de 300 ml.
5. MODE OPERATOIRE
5.1 Prparation de lchantillon pour essai
Oprer partir dun chantillon reprsentatif dau
moins 200g.
Rendre lchantillon homogne par au moins deux
passages dans le hachoir viande (4.1) et mlanger.
Le conserver au froid dans un flacon tanche rempli
compltement.
Analyser lchantillon pour essai le plus rapidement
possible, mais toujours dans les 24 h.
2 Joumada Ethania 1427
28 juin 2006
Note :
Dans le cas des produits non cuits, analyser
lchantillon immdiatement aprs homognisation.
5.2 Prparation de la colonne de cadmium
5.2.1 Placer 3 5 baguettes de zinc (3.2) dans la
solution de sulfate de cadmium (3.3) contenue dans un
bcher (1 litre de solution de sulfate de cadmium suffit
pour prparer une colonne de cadmium).
Enlever, toutes les 1 ou 2 h, le cadmium mtallique
spongieux dpos sur les baguettes de zinc, en remuant
celles-ci dans la solution ou en les frottant lune contre
lautre.
5.2.2 Finalement, aprs 6 8 h, dcanter la solution et
laver le dpt deux fois avec 1 litre deau distille, en
prenant soin que le cadmium soit continuellement
recouvert dune couche de liquide.
Transvaser le dpt de cadmium au moyen de 400 ml
de solution dacide chlorhydrique (3.4) dans un appareil
mlangeur pour laboratoire et mlanger pendant 10
secondes.
Remettre le contenu du mlangeur dans le bcher.
Agiter de temps en temps le dpt de cadmium laide
dune baguette de verre. Laisser reposer pendant une nuit
dans la solution dacide chlorhydrique.
5.2.3 Remuer encore une fois, afin dliminer toutes les
bulles dair du cadmium.
Dcanter la solution et laver la bouillie de cadmium
deux fois avec 1 litre deau chaque fois.
Adapter un tampon en fibre de verre au fond de la
colonne en verre destine contenir le cadmium.
Transvaser et laver la cadmium dans la colonne en verre
en utilisant de leau jusqu ce que la hauteur de cadmium
atteigne environ 17 cm. Vider la colonne de temps en
temps pendant le remplissage, mais en prenant soin que le
niveau du liquide ne tombe pas au dessous du
sommet du lit de cadmium. Eliminer les inclusions de gaz
(par exemple laide dune aiguille tricoter), le liquide
doit scouler avec une vitesse maximale de 3 ml/min.
5.3 PRISE DESSAI
Peser, 0,001g prs, 10g de lchantillon pour essai.
5.4 Dprotination
Transvaser quantitativement la prise dessai dans la
fiole conique (4.9) et ajouter, successivement, 5 ml de
solution sature de borax (3.1.3) et 100 ml deau une
temprature minimale de 70C.
Chauffer la fiole pendant 15 min au bain deau
bouillante (4.5) et agiter plusieurs reprises.
Laisser refroidir la temprature ambiante la fiole et
son contenu et ajouter successivement 2 ml du ractif I
(3.1.1) et 2 ml du ractif II (3.1.2). Mlanger
soigneusement aprs chaque addition.
21
2 Joumada Ethania 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43
28 juin 2006
Transvaser dans une fiole jauge de 200 ml (4.3).
Laisser reposer pendant 30 minutes la temprature
ambiante. Complter jusquau trait-repre avec de leau.
Mlanger soigneusement le contenu de la fiole jauge et
filtrer sur un papier filtre plis (4.6).
5.5 Prtraitement de la colonne de cadmium
Laver la colonne de cadmium successivement avec
25ml de solution d'acide chlorhydrique (3.4), 50ml d'eau
et 25 ml de la solution tampon ammoniacale (3.5) dilue
1 + 9. viter que le niveau du liquide dans l'entonnoir ne
tombe au-dessous du sommet du tube adducteur capillaire
de la colonne.
5.6 Contrle du pouvoir rducteur de la colonne de
cadmium
5.6.1 Prlever 20ml de solution talon de nitrate de
potassium (3.8) avec une pipette, les verser dans le
rservoir au sommet de la colonne, et ajouter,
immdiatement aprs, 5ml de la solution tampon
ammoniacale (3.5). Recueillir l'effluent dans une fiole
jauge de 100ml (4.3).
5.6.2 Lorsque le rservoir est presque vide, laver les
parois avec environ 15ml d'eau et rpter la mme
opration avec une autre fraction de 15ml d'eau.
Lorsque cette fraction s'est coule dans la colonne,
remplir le rservoir compltement avec de l'eau.
5.6.3 Aprs avoir recueilli presque 100ml de liquide,
enlever la fiole de la colonne. Ajuster au trait-repre avec
de l'eau.
5.6.4 Introduire, la pipette, 10ml d'luat dans une fiole
jauge de 100ml (4.3) et poursuivre selon les indications
de (5.8.2 5.8.4).
5.6.5 Si la concentration de l'luat en nitrites,
dtermine partir de la courbe d'talonnage (5.9), est
infrieure 0,9 g de nitrate de sodium par millilitre
(c'est--dire 90% de la valeur thorique), la colonne de
cadmium ne peut tre utilise.
5.7 Rduction des nitrates en nitrites
Introduire, la pipette, dans le rservoir situ au
sommet de la colonne, 20ml du filtrat (5.4) et, en mme
temps ou immdiatement aprs, 5ml de solution tampon
ammoniacale (3.5).
Recueillir l'effluent de la colonne dans une fiole jauge
de 100 ml (4.3).
Procder comme spcifi en (5.6.2) et (5.6.3).
5.8 Dtermination
5.8.1 Introduire, la pipette, dans une fiole jauge de
100ml (4.3), une partie aliquote de l'luat (5ml) ne
dpassant pas 25ml et ajouter de l'eau de faon obtenir
un volume de 60ml environ.
5.8.2 Ajouter 10 ml de solution 1 (3.7.1 ) puis 6ml de
solution III (3.7-3), mlanger et laisser la solution pendant
5 minutes la temprature ambiante et l'obscurit.
22
17
5.8.3 Ajouter 2ml de solution II (3.7.2.) mlanger et
laisser la solution pendant 3 minutes la temprature
ambiante et lobscurit. Complter au trait repre avec
de leau.
5.8.4 Mesurer l'absorbance de la solution au colorimtre
photolectrique ou au spectrophotomtre (4.8) dans une
cuve de 1cm de parcours optique longueur d'onde
d'environ 538 nm.
Note
Si l'absorbance de la solution colore obtenue partir de
la prise d'essai est suprieure celle de la solution talon
la plus concentre, recommencer la dtermination en
diminuant la quantit d'luat prleve la pipette en
(5.8.1).
5.8.5 Effectuer deux dterminations sur le mme
chantillon pour essai.
5.9 Courbe dtalonnage
Transfrer, la pipette, respectivement dans quatre
fioles jauges de 100 ml (4.3), 10ml d'eau et 10ml de
chacune des trois solutions talons de nitrite de sodium
(3.6), reprsentant 0g - 2,5g - 5,0g et 10,0 g de
nitrites par millilitre.
Dans chaque fiole, ajouter de l'eau pour obtenir un
volume de 60ml environ, et procder comme dcrit en
(5.8.2) (5.8.4).
Tracer la courbe d'talonnage en portant les
absorbances mesures en fonction des concentrations, en
microgrammes par millilitre de solution talon de nitrite
de sodium.
6. EXPRESSION DES RESULTATS
Calculer la teneur en nitrate de l'chantillon, exprime
en milligrammes de nitrate de potassium par kilogramme,
au moyen de la formule :
10000
KNO3 = 1,465 (cx - NaNO2)
mxV
o:
m : est la masse, en grammes, de la prise d'essai.
V : est le volume, en millilitres, de la partie aliquote
d'luat (5.8.1),
c : est la concentration de nitrite de sodium, en
microgrammes, par millilitre, lue sur la courbe
d'talonnage, correspondant l'absorbance de la solution
prpare partir de la prise d'essai (5.8.4),
NaNO2 : est la teneur en nitrite de l'chantillon,
exprime en milligrammes de nitrite de sodium par
kilogramme.
Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des
deux dterminations si les conditions de rptabilit (6.1)
sont remplies. Noter le rsultat 1mg prs.
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43
18
6.1 Rptabilit
La diffrence entre les rsultats de deux dterminations
effectes simultanment ou rapidement lune aprs lautre,
par le mme analyste, ne doit pas tre suprieure 10 %
de la teneur en nitrates.
Rservoir
(Capacit maximale 45-50 ml)
Solution
int 1,0 1,5 mm
Bouchon en caoutchouc
colonne de cadmium Effluent
int 12 14 mm
ext 7 8 mm
Laine de verre
Joint de caoutchouc int 0,4 0,6 mm
Figure - Appareil de rduction des nitrates
Arrt du 29 Safar 1427 correspondant au 29 mars
2006 rendant obligatoire la mthode
dtermination de la teneur en nitrites dans la
viande et les produits de la viande.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 05-161 du 22 Rabie
El Aoual 1426 correspondant au 1er mai 2005 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 19 Chaoual 1417
correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de
prparation et de commercialisation des merguez ;
Vu larrt interministriel du 29 Joumada Ethania 1420
correspondant au 29 septembre 1999 fixant les rgles de
prparation et de mise la consommation des viandes
haches la demande ;
Vu larrt du 24 Rabie Ethani 1421 correspondant au
26 juillet 2000, modifi et complt, relatif aux rgles
applicables la composition et la consommation des
produits carns cuits ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de
dtermination de la teneur en nitrites dans la viande et les
produits de la viande.
2 Joumada Ethania 1427
28 juin 2006
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en nitrites
dans la viande et les produits de la viande, les laboratoires
du contrle de la qualit et de la rpression des fraudes et
les laboratoires agrs cet effet doivent employer la
mthode dcrite en annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 29 Safar 1427 correspondant au 29 mars
2006.
Lachemi DJAABOUBE.
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION
DE LA TENEUR EN NITRITES DANS LA VIANDE
ET LES PRODUITS DE LA VIANDE
1. DEFINITION
Teneur en nitrites des viandes et produits base de
viande : la teneur en nitrites dtermine suivant le mode
opratoire dcrit ci-aprs et exprime en miligrammes de
nitrite de sodium par kilogramme (parties par million).
de
2. PRINCIPE
Extraction leau chaude de la viande ou du produit
base de viande, prcipitation des protines et filtration.
En prsence des nitrites, il y a obtention dune
coloration rouge par addition de sulfanilamide et de
chlorure de naphtyl-l-thylne-diamine du filtrat et
mesurage photomtrique une longueur donde de
538 nm.
3. REACTIFS
Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique.
Leau utilise doit tre de leau distille ou de leau de
puret au moins quivalente.
3.1 Solutions utilises pour la prcipitation des
protines.
3.1.1 Ractif I
Dissoudre 106g d'hexacyanferrate de potassium
trihydrat (K4Fe(Cn)6,3H20) dans de leau et complter
1000 ml.
3.1.2 Ractif II
Dissoudre 220 g d'actate de zinc, dihydrat
[ZN(CH3COO)2,2H20] et 30 ml dacide actique
cristalisable dans de leau et complter 1000 ml.
3.1.3 Borax, solution sature
Dissoudre 50g de ttraborate disodique dcahydrat
[Na2B4O7,10H20] dans 1000 ml deau tide et laisser
refroidir la temprature du laboratoire.
23
2 Joumada Ethania 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43
28 juin 2006
3.2 Nitrite de sodium : solutions talons.
Dissoudre 1,000g de nitrite de sodium (NaNO2) dans de
leau et complter 100 ml dans une fiole jauge.
Transfrer, la pipette, 5 ml de cette solution dans
une autre fiole jauge de 1000 ml. Complter au trait
repre.
Prparer une srie de solutions talons en transfrant,
la pipette 5, 10 et 20 ml de cette solution dans des fioles
jauges de 100 ml et en compltant au trait repre avec de
leau. Ces solutions talons contiennent respectivement
2,5g, 5,0g et 10,0g de nitrite de sodium par millilitre.
Les solutions talons, ainsi que la solution (0,05 g/l)
de nitrite de sodium dont elles proviennent, doivent tre
prpares le jour de leur utilisation.
3.3 Solutions pour le dveloppement de la coloration
3.3.1 Solution I
Dissoudre par chauffage au bain deau 2g de
sulfanilamide (NH2-C6H4-SO2-NH2) dans 800 ml deau.
Refroidir et filtrer si ncessaire, et ajouter, en agitant, 100
ml dacide chlorihydrique concentr (P20 = 1,19 g/ml).
Complter 1000 ml avec de leau.
3.3.2 Solution II
Dissoudre, dans leau, 0,25g de chlorure de
N naphtyl-l-thylne-diamine :
(C10H7-NH-CH2-CH2-NH2,2HCI). Complter 250 ml
avec de leau.
3.3.3 Solution III
Complter 1000 ml, avec de leau, 445 ml dacide
chlorhydrique (p20 = 1,19 g/ml)
Garder ces solutions dans des flacons brun fonc, bien
ferms et les conserver au refrigrateur, une semaine au
maximum.
4. APPAREILLAGE
Matriel courant de laboratoire, et notamment :
4.1 Hachoir viande, de type laboratoire, muni dune
plaque dont les trous ont un diamtre ne dpassant pas 4
mm.
4.2 Balance analytique.
4.3 Fioles jauges, 100 ml, 200 ml et 1000 ml.
4.4. Pipettes un trait, de 10 ml, et, si ncessaire,
dune autre capacit, selon le prlvement aliquote (6.4.1).
4.5 Bain deau bouillante.
4.6 Colorimtre photolectrique ou spectrophotomtre
avec cuves de 1 cm de parcours optique.
4.7 Papier filtre plis, de 15 cm de diamtre environ,
exempt de nitrites.
4.8 Fiole conique, de 300 ml.
24
19
5. ECHANTILLON
5.1 Oprer partir dun chantillon reprsentatif dau
moins 200 g.
5.2 Prparer immdiatement lchantillon pour essai
(6.1). Si cela nest pas possible, conserver lchantillon,
une temprature comprise entre 0 et 5C, durant 4 jours au
maximum.
6. MODE OPERATOIRE
6.1. Prparation de lchantillon pour essai
Rendre lchantillon homogne par au moins deux
passages dans le hachoir viande (4.1) et mlanger. Le
conserver au froid dans un flacon tanche rempli
compltement.
Analyser lchantillon pour essai le plus rapidement
possible, mais toujours dans les 24 h.
Note :
Dans le cas de produits non cuits, analyser lchantillon
immdiatement aprs homognisation.
6.2 Prise dessai
Peser, 0,001g prs, environ 10g de lchantillon pour
essai.
6.3 Dprotination
6.3.1 Transvaser quantitativement la prise dessai dans
la fiole conique (4.8) et ajouter, successivement, 5 ml de
solution sature de borax (3.1.3) et 100 ml deau une
temprature minimale de 70C.
6.3.2 Chauffer la fiole pendant 15 min au bain deau
bouillante (4.5) et agiter plusieurs reprises.
6.3.3 Laisser refroidir la temprature ambiante la fiole
et son contenu. Ajouter successivement 2 ml du ractif I
(3.1.1) et 2 ml du ractif II (3.1.2). Mlanger
soigneusement aprs chaque addition.
6.3.4 Transvaser dans une fiole jauge de 200 ml (4.3).
Complter jusquau trait repre avec de leau et
mlanger.
Laisser reposer pendant 30 minutes la temprature
ambiante.
6.3.5 Laisser dcanter soigneusement le liquide
surnageant et filtrer sur le papier filtre plis (4.7), de
faon obtenir une solution limpide.
6.4 Colorimtrie
6.4.1 Prlever la pipette une partie aliquote du filtrat
(5 ml) mais pas plus de 25 ml, lintroduire dans une fiole
jauge de 100 ml (4.3) et ajouter de leau pour obtenir un
volume denviron 60 ml.
20 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43 2 Joumada Ethania 1427
28 juin 2006

6.4.2 Ajouter 10 ml de la solution I (3.3.1) puis 6 ml V : est le volume, en millilitres, de la partie aliquote de
de la solution III (3.3.3.), mlanger et laisser la solution filtrat (6.4.1) prleve pour la dtermination
durant 5 min la temprature ambiante et lobscurit. photomtrique ;
c : est la concentration en nitrite de sodium, exprim en
6.4.3. Ajouter 2 ml de la solution II (3.3.2), mlanger et
microgrammes par millilitre, lue sur la courbe
laisser la solution durant 3 10 min la temprature
dtalonnage et correspondant labsorbance de la
ambiante, lobscurit. Complter au trait repre avec de
solution prpare partir de la prise dessai (6.4.4).
leau.
Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique de
6.4.4 Mesurer labsorbance de la solution colore au
rsultats des deux dterminations, si les conditions de
colorimtre photolectrique ou au spectrophotomtre
rptabilit (7.2) sont remplies. Exprimer le rsultat, 1
(4.6), dans une cuve de 1 cm de parcours optique une
mg prs, par kilogramme de produit.
longueur donde denviron 538 nm.
7.2. REPETABILITE
Note :

Si labsorbance de la solution colore obtenue partir
de la prise dessai est suprieure celle de la solution
talon la plus concentre, recommencer les oprations
dcrites en (6.4) en diminuant la quantit de filtrat
prleve la pipette (6.4.1).
6.5 Nombre des dterminations
La diffrence entre les rsultats de deux dterminations
effectues simultanment ou rapidement lune aprs
lautre par le mme analyste, ne doit pas tre suprieure
10 % de la valeur moyenne.

Effectuer deux dterminations spares en partant de

prises dessai prleves sur le mme chantillon pour
essai.

6.6. Courbe dtalonnage

6.6.1 Transfrer la pipette respectivement dans quatre

fioles, jauges de 100 ml (4,3), 10 ml deau et 10 ml de
chacune des trois solutions talons de nitrite de sodium
(3.2), reprsentant 2, 5, 5,0 et 10,0 g de nitrite par
millilitre.

6.6.2 Dans chaque fiole, ajouter de leau pour obtenir

un volume de 60 ml environ et procder comme dcrit de
(6.4.2) (6.4.4).

6.6.3 Tracer la courbe dtalonnage en portant les

absorbances mesures en fonction des concentrations, en
microgrammes par millilitre des solutions talons.

7. EXPRESSION DES RESULTATS

7.1 Mode de calcul et formule

Calculer la teneur en nitrites de lchantillon, exprime

en milligrammes de nitrites de sodium par kg laide de
la formule.
2000
NaNO2 = c x
mxV

o :

m : est la masse, en gramme, de la prise dessai ;

25
27 Chabane 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 58
20 septembre 2006 17

DECISIONS INDIVIDUELLES

ARRETES, DECISIONS ET AVIS

MINISTERE DU COMMERCE Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,

modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
Arrt du 12 Joumada Ethania 1427 correspondant au la rpression des fraudes ;
8 juillet 2006 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur de lazote basique Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
volatil total dans les produits de la pche. correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;

Le ministre du commerce, Vu le dcret excutif n 04-189 du 19 Joumada El Oula

1425 correspondant au 7 juillet 2004 fixant les mesures
Vu le dcret prsidentiel n 06-176 du 27 Rabie Ethani dhygine et de salubrit applicables aux produits de la
1427 correspondant au 25 mai 2006 portant nomination pche et de laquaculture ;
des membres du Gouvernement ;

26
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 58
18
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur de lazote basique volatil total
dans les produits de la pche.
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur de lazote
basique volatil total dans les produits de la pche, les
laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent
employer la mthode dcrite en annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 12 Joumada Ethania 1427 correspondant
au 8 juillet 2006.
Lachemi DJAABOUBE.
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION
DE LA TENEUR EN AZOTE BASIQUE VOLATIL
TOTAL DANS LES PRODUITS DE LA PECHE
1. DEFINITION
La dnomination Azote Basique Volatil Total (ABVT)
s'applique l'ensemble form par l'ammoniac et les
amines volatils.
La quantit dABVT est, pour une denre, directement
fonction du niveau de sa dgradation protique.
2. PRINCIPE DE DOSAGE :
L'ABVT dplac par le carbonate de lithium (base
faible n'hydrolysant ni l'ure, ni les protides et acides
amins) est entran par la vapeur d'eau. Le distillat est
titr par l'acide sulfurique.
3. MATERIEL
ballon Pyrex de 500 ml ;
rfrigrant ;
systme de raccordement tube de rfrigrant
droit ;
bcher de 100 ml.
L'exprience montre qu'il y a intrt utiliser un
montage avec rodages sphriques maintenus par pinces,
qui se dmontent facilement mme chaud et assurent
une tanchit suffisante.
4. REACTIFS
4.1 Eau frachement distille.
4.2 Silicone Rhodorsil (antimousse ). (*)
4.3 Ferrocyanure de potassium 15 % dans l'eau.
27
27 Chabane 1427
20 septembre 2006
4.4 Actate de zinc 30 % dans l'eau.
4.5 Solution de phnol-phtaline 2 % dans l'alcool
90.
4.6 Solution de carbonate de lithium saturation
(environ 8 %).
4.7 Solution aqueuse d'alizarine sulfonate de sodium
0,5%.
4.8 Solution 0,1 N d'acide sulfurique.
5. MODE OPERATOIRE
Peser 10 g du produit analyser. S'il s'agit d'un produit
ayant sjourn dans l'huile (sardines en botes) ou dans un
liquide (thon au naturel) avoir soin de l'essorer entre des
feuilles de papier filtre.
mettre dans un flacon cylindrique de 250 ml ( large
ouverture) avec 50 ml d'eau distille ;
broyer avec un mixer rapide ;
verser le broyat dans le ballon de l'appareil
distiller ;
rincer le flacon et la tige du broyeur avec 50 ml
d'eau.
Verser les eaux de rinage dans le ballon. Puis ajouter
successivement en agitant chaque fois
3 gouttes de Rhodorsil ;
1 ml de solution de ferrocyanure de potassium ;
1 ml de solution d'actate de zinc ;
5 gouttes de solution de phnol-phtaline ;
20 ml de solution de carbonate de lithium.
Cette dernire adjonction s'accompagne d'un virage au
rouge franc de la phnol-phtaline.
Relier aussitt le ballon au rfrigrant descendant dont
l'extrmit aboutira dans un bcher de 100 ml contenant
20 ml d'eau distille et 5 gouttes d'alizarine. Le distillat
doit tomber directement dans ce mlange, la partie
infrieure du rfrigrant tant immerge.
Chauffer le ballon bullition et lorsque le virage au
violet de l'alizarine est amorc, poursuivre encore la
distillation pendant 10 minutes.
Sparer le ballon du rfrigrant.
Rincer l'appareil de distillation et recueillir les eaux de
lavage dans le bcher.
Doser l'A.B.V.T. l'aide de la solution d'acide
sulfurique 0,1 N par le virage au jaune paille de l'alizarine.
(*) Le produit base de silicone vitant la
formation gnante de mousse permet un chauffage rapide,
le ferrocyanure de potassium et lactate de zinc ralisent
une dfcation qui assure le blocage des protides.
En outre ladjonction de quelques fragments de pierre
ponce sulfurique rgularise lbullition.
27 Chabane 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 58
20 septembre 2006
6. EXPRESSION DES RESULTATS
L'ABVT. est exprim en ammoniac (NH3 = 17). Le
rsultat est rapport 100 g de produit. Soit n le nombre
de ml d'acide sulfurique 0,1 N utilis pour la
neutralisation.
On a :
ABVT (mg/100g) = 1,7 x n x 10 = 17n
thon, la sardine, le maquereau, les anchois ou tout produit
Arrt du 12 Joumada Ethania 1427 correspondant au
8 juillet 2006 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur en histamine dans les
produits de la pche par chromatographie liquide
haute performance.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 06-176 du 27 Rabie Ethani
1427 correspondant au 25 mai 2006 portant nomination
des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
la rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 04-189 du 19 Joumada El Oula
1425 correspondant au 7 juillet 2004 fixant les mesures
dhygine et de salubrit applicables aux produits de la
pche et de laquaculture ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur en histamine dans les produits
de la pche par chromatographie liquide haute
performance.
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en
histamine dans les produits de la pche par
chromatographie liquide haute performance, les
laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent
employer la mthode dcrite en annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 12 Joumada Ethania 1427 correspondant
au 8 juillet 2006.
Lachemi DJAABOUBE.
28
19
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION DE LA TENEUR
EN HISTAMINE DANS LES PRODUITS
DE LA PECHE PAR CHROMATOGRAPHIE
LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE
1. OBJET
Cette mthode dcrit le dosage de lhistamine dans le
de la mer ltat frais, congel, fum, sch, appertis ou
ayant subi tout autre traitement.
Lhistamine est une amine provenant de la dgradation
de lhistidine par dcarboxylation. Sa prsence, des
teneurs suprieures 10 mg/100g dans des poissons, est
susceptible de provoquer des phnomnes dintoxication.
2. PRINCIPE
Lhistamine est solubilise dans de lacide
trichloroactique, complexe avec lortho-phtalaldhyde,
spare par chromatographie liquide haute performance
(CLHP) sur phases inverses, puis dtecte par
fluoromtrie.
3. APPAREILLAGE
broyeur ;
balance ;
pompe isocratique pour chromatographie liquide ,
injecteur type RHEODYNE avec boucle dinjection
de 20 l ;
colonne C18 (20 cm x 4 mm) : silice sphrique 5 m
greffe C18 avec ventuellement une pr-colonne ;
dtecteur fluoromtrique flux continu avec une
cellule de 20 l ;
enregistreur intgrateur ;
utilisation ventuelle dun auto-prparateur -
injecteur automatique.
4. REACTIFS
solution dacide trichloroactique 20% (TCA 20%) ;
dichlorhydrate dhistamine (184,07 mM) ;
solution dhistamine 3,33 mg/ml.
Dissoudre 165,6 mg de dichlorhydrate dhistamine dans
100 ml de TCA 10 %.
Diluer au 1/3 puis au 1/100 :
solution dorthophtalaldhyde (OPA) 10 mg/ml
dans du mthanol ;
solution de soude 2 N ;
solution dacide chlorhydrique 3 N ;
actonitrile pour CLHP ;
solution 1 mM de di-potassium hydrogno-phosphate
(K2HPO4).
Dissoudre 174,2 mg de K2HPO4 dans un litre deau
ultra pure :
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 58 27 Chabane 1427
20 20 septembre 2006

solution luante pour la chromatographie : 40 % 200 l NaOH 2N ;

dactonitrile et 60 % de solution 1 mM de K2HPO4 ;
filtre 5 m ;
papier filtre pliss n 127.
5. MODE OPERATOIRE
5.1 Prparation du dfcat trichloroactique
Broyer et homogniser un chantillon reprsentatif de
200 g environ et prlever immdiatement la prise dessai.
5.1.1 Cas des poissons frais et congels
Homogniser 100 g dchantillon avec 50 ml deau
dans un broyeur puis ajouter 50 ml de solution TCA
20 %, mlanger de nouveau et filtrer sur filtre en papier
pliss n 127.
5.1.2 Cas des poissons en conserve
Mme procd avec 50 g de chair goutte, 50 ml deau
et 50 ml de solution TCA 20 %.
100 l OPA 10 mg /ml, attendre 4 minutes;
150 l HCl 3N, passage en CLHP.
Les 20 l injects renferment 4,6 mg dhistamine.
Si la teneur en histamine est faible, faire la raction de
complexation sur le dfcat TCA non dilu, ou faiblement
dilu, par contre, si celle-ci est leve, diluer le dfcat de
sorte obtenir une lecture chromatographique proche de
la solution talon.
Effectuer deux dterminations sur le mme dfcat
prpar.
6. EXPRESSION DES RESULTATS
6.1 Calcul
La teneur en histamine exprime en mg pour 100 g
dchantillon est :

5.1.3 Cas des semi-conserves H = 6,66 x A poisson frais ou congel

Mme procd avec 40 g de chair, 100 ml deau et 50 As
ml de solution TCA 20 %.
H = 10 x A poisson en conserve
5.2 Raction de complexation avec lOPA
Diluer au 1/10 dans de leau dminralise une fraction As
aliquote du filtrat et filtrer sur filtre de 5 m.
H = 15,83 x A poisson semi-conserve
La suite de la raction peut se faire manuellement ou

laide dun auto-prparateur-injecteur.
As
Prlever 100 l de la solution au 1/10, ajouter 900 l o :
deau ultra-pure, alcaniser avec 200 l de NaOH (2N)
puis ajouter 100 l de solution dOPA (10 mg/ml), As = aire du pic dhistamine de lchantillon standard ;
attendre quatre minutes puis bloquer la raction en A = aire du pic dhistamine de lchantillon
ajoutant 150 l dHCl (3N). analyser.
Bien agiter le tube aprs addition de chaque ractif et Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des
respecter rigoureusement les quatre minutes de temps de deux dterminations si les conditions de rptabilit sont
complexation. remplies.
5.3 Passage en chromatographie Exprimer le rsultat :
dbit : 1 ml/min ; - 0,5 mg prs (valeur absolue) pour des teneurs
solvant dlution : 40 % dactonitrile et 60 % de infrieures 10 mg/100g ;
solution 1 mM de K2HPO4 ; - 1 mg prs (valeur absolue) pour des teneurs
volume inject : 20 l ; suprieures 10 mg/100g ;
dtection fluoromtrique : longueur donde
dexcitation 360 nm et longueur donde dmission 6.2 Rptabilit
450 nm ;
La diffrence entre les rsultats de deux dterminations
enregistrement et intgration des aires des pics effectues par le mme analyste ne doit pas excder 5% en
dhistamine ; valeur relative.
le temps dlution est denviron 6 minutes.
6.3 Seuil de dtection
Etalonnage externe (avec auto-prparateur)
- Poisson frais ou congel : 0, 5 mg/100g ;
100 l dune solution dhistamine 3,33. 10-3
mg/ml ; - Poisson en conserve: 0, 75 mg/100g ;
900 l deau ; - Poisson semi-conserve:1 mg/100g.

29
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 59
20
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 12 Joumada Ethania 1427 correspondant au
8 juillet 2006 rendant obligatoire la mthode de
recherche et didentification des substances
anabolisantes dans la viande et les produits de la
viande.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 06-176 du 27 Rabie Ethani
1427 correspondant au 25 mai 2006 portant nomination
des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
la rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu larrt interministriel du 19 Chaoual 1417
correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de
prparation et de commercialisation des merguez ;
Vu larrt interministriel du 29 Joumada Ethania 1420
correspondant au 29 septembre 1999 fixant les rgles de
prparation et de mise la consommation des viandes
haches la demande ;
Vu larrt du 24 Rabie Ethani 1421 correspondant au
26 juillet 2000, modifi et complt, relatif aux rgles
applicables la composition et la consommation des
produits carns ;
Aouel Ramadhan 1427
24 septembre 2006
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de recherche
et didentification des substances anabolisantes dans la
viande et les produits de la viande.
Art. 2. Pour la recherche et lidentification des
substances anabolisantes dans la viande et les produits de
la viande, les laboratoires du contrle de la qualit et de la
rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet effet
doivent employer la mthode dcrite en annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 12 Joumada Ethania 1427 correspondant
au 8 juillet 2006.
Lachemi DJAABOUBE.
ANNEXE
METHODE DE RECHERCHE
ET DIDENTIFICATION DES SUBSTANCES
ANABOLISANTES DANS LA VIANDE
ET LES PRODUITS DE LA VIANDE
1. DOMAINE D'APPLICATION
Cette mthode permet de rechercher et d'identifier des
substances anabolisantes (liste I) dans la viande et les
produits de la viande.
2. PRINCIPE
La chromatographie en couche mince est utilise pour
sparer les diffrents constituants qui sont ensuite rvls
sous la forme de taches diversement colores. La position
relative et la coloration de ces taches en permettent
l'identification. Cet examen est exclusivement qualitatif.
3. REACTIFS
3.1 Cristaux de standards de rfrence
3.1.1 Solution de travail dans du mthanol
(50 ng/l) conservation 4C au rfrigrateur pendant 3
mois.
3.2 Solvants d'entranement (produits purs pour analyse)
Chloroforme/mthanol (98 + V/V)
Prparation de la cuve 3 h avant le dpt conservation
maximum 48 h.
3.3 Rvlateur aprs migration - mlange acide
sulfurique/thanol (50 + 50 : V/V).
30
Aouel Ramadhan 1427 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 59
24 septembre 2006 21

Conservation temprature ambiante. Liste I

3.4 Plaques CCM 20 X 20 cm ou HPTLC 10 X 10 cm. Substances anabolisantes recherches
Chlormadinone actate
4. APPAREILLAGE
Diethylstilboestrol (D.E.S)
4.1 Hotte aspirante
4.2 Etuve 100 C D.E.S dispropionate

4.3 Source d'air chaud Dienestrol

4.4 Pulvrisateur Dienestrol diacetate
4.5 Transilluminateur Nexoestrol
4.6 Cuve chromatographie Nydroxyprogestrone heptanoate
4.7 Seringues 5 l.
Ndroxyprogestrone
5. MODE OPERATOIRE Ndroxyprogestrone actate
Nortestostrone
5.1 Extraction
Nortestostrone propionate
Gnralement par du mthanol (V/V) ou de l'ther
thylique (V/V). Pour les zones d'injection, aprs le Nortestostrone dcanoate
broyage de la zone suspecte, une centrifugation ou une
filtration est conseille. Nortestostrone laurate

5.2 Dpt sur plaque chromatographique (3.4) Oestradiol 17 oc

5.2.1 Dpt prliminaire dun aliquote de la solution Oestradiol diactate
d'origine ( 1 l ) et de l'extrait (10 l).
Oestradiol dipropionate
5.2.2 Selon rsultats (5.2.1) . Dpt des standards,
suspects et de l'chantillon diffrentes concentrations Oestradiol benzoate
(une vaporation pralable peut tre envisage). Oestradiol thinyl
5.3 Migration sur 7 cm dans une cuve sature contenant
50 ml mlange chloroforme/mthanol (3.2). Progestrone
Testostrone
Laisser scher l'air libre.
5.4 Vaporisation avec une solution d'acide sulfurique Testostrone propionate
50 % dans l'thanol (3.3). Testostrone nanthate
Noter les taches colores. Testostrone (mthyl)

Placer dans une tuve 100C pendant 10 minutes. Trenbolone actate

Zranol.
5.5 Lecture sous transilluminateur.

5.6 Identification Liste II

Par comparaison la couleur des taches (des traces) Standards de rfrence

apparues dans l'extrait et les standards de rfrence
(liste II). Oestradiol -1
5.7 Confirmation
+ testostrone -2
5.7.1 Co-Chromatographie
Actate de trenbolone -2
Ajouter au dpt de l'chantillon 1 l de la solution du
standard correspondant. + D.E.S -1

Poursuivre (5.2), (5.3), (5.4) et (5.5). Mthyl testostrone -1

Vrifier aprs rvlation, passage sous transilluminateur + progestrone -2

qu'aucune nouvelle tache n'est apparue, que seule la tache
prsume soit intensifie. Mdroxy progestrone actate -1

31
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 59 Aouel Ramadhan 1427
22 24 septembre 2006

+ propionate de testostrone-2

Nandrolone dcanoate

Nandrolone -1

+ D.E.S dipropionate -2

Oestradiol benzoate

Cholestrol -2

+ thylne oestradiol -1

32

22 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 69
ARRETES, DECISIONS ET AVIS
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 19 Moharram 1436 correspondant au 12
novembre 2014 rendant obligatoire la mthode
de dtermination de la teneur en hydroxyproline
dans les viandes et les produits base de viande.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 14-154 du 5 Rajab 1435
correspondant au 5 mai 2014 portant nomination des
membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu le dcret excutif n 12-214 du 23 Joumada Ethania
1433 correspondant au 15 mai 2012 fixant les conditions
et les modalits d'utilisation des additifs alimentaires
dans les denres alimentaires destins l'alimentation
humaine ;
Vu l'arrt interministriel du 19 Chaoual 1417
correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de
prparation et de commercialisation des merguez ;
Vu l'arrt du 24 Rabie Ethani 1421 correspondant au
26 juillet 2000, modifi et complt, relatif aux rgles
applicables la composition et la mise la
consommation des produits carns cuits ;
10 Safar 1436
3 dcembre 2014
Arrte :
Article. 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire une mthode de dtermination de la
teneur en hydroxyproline dans les viandes et les produits
base de viande.
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en
hydroxyproline dans les viandes et les produits base de
viande, les laboratoires du contrle de la qualit et de la
rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet effet,
doivent employer la mthode jointe en annexe du prsent
arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 19 Moharram 1436 correspondant au
12 novembre 2014.
Amara BENYOUNES.
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION
DE LA TENEUR EN HYDROXYPROLINE
- Viandes et produits base de viande -
La prsente mthode dcrit une technique pour la
dtermination de la teneur en hydroxyproline de toutes
sortes de viandes et produits base de viande, y compris
la volaille.
La mthode est applicable aux viandes et produits
base de viande ne contenant pas plus de 0,5% (m/m)
d'hydroxyproline.
33
10 Safar 1436
3 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 69
1. DEFINITION
Pour les besoins de la prsente mthode, la dfinition
suivante s'applique.
Teneur en hydroxyproline des viandes et produits
base de viande : Teneur en hydroxyproline dtermine
selon le mode opratoire dcrit dans la prsente mthode.
Elle est exprime en pourcentage en masse.
2. PRINCIPE
Hydrolyse d'une prise d'essai par l'acide sulfurique
105 C. Filtration, puis dilution de l'hydrolysat.
Oxydation de l'hydroxyproline par la chloramine T,
puis formation d'un compos de couleur rouge avec le p-
dimthylamino-benzaldhyde. Mesurage photomtrique
la longueur d'onde de 558 nm.
3. REACTIFS
Utiliser uniquement des ractifs de qualit analytique
reconnue et de l'eau distille ou dminralise ou de l'eau
de puret, au moins, quivalente.
3.1 Acide sulfurique, solution c(H2S04) 3 mol/l.
Ajouter 750 ml d'eau dans une fiole jauge de 2 L.
Ajouter lentement, en agitant, 320 ml d'acide sulfurique
concentr (P 20 = 1,84 g/ml). Refroidir temprature
ambiante et complter au trait repre avec de l'eau.
3.2 Solution tampon, pH = 6,8 compose de :
26 g d'acide citrique monohydrat (C6H807,H20) ;
14 g d'hydroxyde de sodium ;
78 g d'actate de sodium anhydre [Na(CH3C02)].
Dissoudre les ractifs dans 500 ml d'eau, et les
transfrer quantitativement dans une fiole jauge de 1 L.
Ajouter 250 ml de propanol-l et ajuster au trait avec de
l'eau.
Cette solution reste stable durant plusieurs semaines, si
elle est conserve 4 C l'abri de la lumire.
3.3 Ractif la chloramine T
Dissoudre 1,41 g de N-chloro-p-tolune sulfonamide,
sel de sodium trihydrat (chloramine T) dans 100 ml de la
solution tampon (3.2).
Cette solution doit tre prpare immdiatement avant
utilisation.
3.4 Ractif colorimtrique
Dissoudre 10 g de p- dimthylamino-benzaldhyde dans
35 ml d'une solution d'acide perchlorique [60 % (m/m)],
puis verser lentement 65 ml de propanol-2.
23
Cette solution doit tre prpare le jour de son
utilisation.
S'il est ncessaire de purifier le p-
dimthylamino-benzaldhyde (voir note 3 en 7.4), oprer
comme suit :
Prparer, chaud, une solution sature de p-
dimthylamino-benzaldhyde dans de l'thanol 70 %
(VIV). Refroidir d'abord la temprature ambiante et
enfin dans un rfrigrateur. Aprs environ 12 h, filtrer sur
un entonnoir de Buchner.
Laver avec un peu d'thanol 70 % (V/V). Dissoudre
de nouveau chaud, dans de l'thanol 70 % (V/V).
Ajouter de l'eau glace et agiter soigneusement.
Poursuivre ces oprations jusqu' l'obtention d'une
quantit suffisante de cristaux blanc laiteux. Laisser une
nuit au rfrigrateur. Filtrer sur l'entonnoir de Buchner,
laver avec de l'thanol 50 % (V/V), puis scher sous
pression rduite en prsence d'oxyde de phosphore(V).
3.5 Hydroxyproline, solutions talons.
Dans une fiole jauge de 100 ml, prparer une
solution mre en dissolvant 50 mg d'acide
hydroxypyrrolidine-carbonique (hydroxyproline) dans de
l'eau. Ajouter 1 goutte de la solution d'acide sulfurique
(3.1) et complter au trait repre avec de l'eau. Cette
solution reste stable durant au moins 1 mois 4 C.
Le jour de l'emploi, introduire dans une fiole jauge de
500 ml, 5 ml de la solution mre et complter au trait
repre avec de l'eau. Prparer ensuite quatre (4) solutions
talons en prlevant 10 ml, 20 ml, 30 ml et 40 ml
de cette solution et en compltant 100 ml avec de
l'eau, afin d'obtenir respectivement des concentrations en
hydroxyproline de 0,5 g/ml, 1 g/ml, 1,5 g/ml et 2
g/ml.
4. APPAREILLAGE
Matriel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui
suit.
4.1 Hachoir lectrique viande, lames horizontales
rotation rapide.
4.2 Ballon hydrolyse, fond rond ou fond plat,
col large, d'environ 200 ml de capacit.
4.3 tuve de schage, rglable 105C 1C.
4.4 Disques de papier filtre, de 12,5 cm de diamtre.
4.5 pH-mtre.
4.6 Feuilles d'aluminium ou de plastique opaques.
34

24 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 69
4.7 Bain d'eau, rglable 60 C 0,5 C.
4.8 Spectromtre, permettant des mesurages une
longueur d'onde de 558 nm 2 nm, ou colorimtre
photolectrique, quip d'un fitre interfrentiel avec
absorption maximale 558 nm 2 nm.
4.9 Cuves en verre, de 10 mm de parcours optique.
4.10 Balance analytique, prcise 0,001 g prs.
4.11 Fioles jauges, de 250 ml de capacit.
4.12 Verres de montre, de 5 6 cm de diamtre.
5. ECHANTILLONNAGE
Il est important que le laboratoire reoive un chantillon
rellement reprsentatif, non endommag ou modifi lors
du transport et de l'entreposage.
Oprer sur un chantillon reprsentatif d'au moins
200 g.
Conserver l'chantillon de faon viter toute
dtrioration et tout changement dans sa composition.
6. PREPARATION DE L'ECHANTILLON POUR
ESSAI
6.1 Viandes crues et produits base de viande crue
Au moyen d'un couteau bien aiguis, dcouper la viande
en petits cubes (d'environ 0,5 cm3 de volume, c'est--dire
d'environ 8 mm de ct) alors qu'elle est encore froide
(trs lgrement en dessous de 0 C).
Placer l'chantillon dans un rcipient que l'on bouchera
hermtiquement, ou bien l'emballer sous pression rduite
dans un sac en plastique thermorsistant. Chauffer ensuite
le rcipient et l'chantillon de manire maintenir une
temprature minimale de 70 C pendant au moins 30 min.
Laisser refroidir et oprer comme en (6.2).
Au cours des tapes suivantes de la prparation de
l'chantillon pour essai et de la pese de la prise d'essai,
s'assurer que l'chantillon reste bien mlang, et, en
particulier, que la graisse et les portions fluides soient
rgulirement rparties.
Note 1 - Ce traitement par la chaleur permet d'attendrir
le tissu conjonctif cru et de le rendre moins rsistant
l'opration d'homognisation au moyen du hachoir.
Cependant, ce traitement peut galement provoquer la
sparation d'un liquide contenant de la glatine. La
prsence de graisse peut demander galement une
attention particulire lors de la prparation d'un
chantillon homogne.
35
10 Safar 1436
3 dcembre 2014
6.2 Viandes cuites et produits base de viande cuite
Homogniser l'chantillon dans le hachoir viande
(4.1). Garder l'chantillon homognis dans un flacon
ferm, tanche et rempli compltement, et le conserver de
faon viter toute dtrioration et tout changement dans
sa composition. Analyser l'chantillon ds que possible,
mais toujours dans les 24 h.
7. MODE OPERATOIRE
7.1 Prise d'essai
Peser 0,001 g prs, dans le ballon hydrolyse (4.2),
environ 4 g de l'chantillon pour essai. S'assurer qu'il ne
reste pas de produit adhrant la paroi latrale du ballon.
7.2 Hydrolyse
7.2.1 Ajouter 30 ml 1 ml de solution d'acide
sulfurique (3.1) dans le ballon. Le recouvrir avec un verre
de montre (4.12) et placer l'ensemble dans l'tuve (4.3)
pendant 16 h (une nuit) 105 C.
7.2.2 Filtrer l'hydrolysat encore chaud sur un disque de
papier filtre (4.4), en recueillant le filtrat dans une fiole
jauge de 250 ml (4.11). Laver le papier filtre et le ballon
trois (3) fois avec des fractions de 10 ml de la solution
d'acide sulfurique (3.1) chaude, et ajouter les liquides de
lavage l27 1'hydrolysat. Complter au trait repre avec
de l'eau et mlanger.
7.3 Dveloppement de la coloration et mesurage de
l'absorbance
7.3.1 l'aide d'une pipette, introduire, dans une fiole
jauge de 250 ml (4.11), un volume V de l'hydrolysat
(7.2.2) permettant d'obtenir, aprs dilution 250 ml, une
concentration en hydroxyproline comprise entre 0,5 g/ml
et 2 glml. Ajuster au trait repre avec de l'eau.
Note 2 - Dans la plupart des cas, V sera de l'ordre de 5
ml 25 ml, selon la quantit de tissu conjonctif prsente
dans l'chantillon.
7.3.2 Introduire 4 ml de cette solution (7.3.1) dans un
tube essais, puis ajouter 2ml du ractif la chloramine T
(3.3). Mlanger et laisser la temprature ambiante durant
20 min 1 min.
7.3.3 Ajouter 2 ml du ractif colorimtrique (3.4),
mlanger soigneusement et coiffer le tube avec une feuille
d'aluminium ou de plastique (4.6).
7.3.4 Porter rapidement le tube dans le bain d'eau (4.7)
rgl 60 C, et chauffer pendant 20 min exactement.
7.3.5 Refroidir le tube pendant au moins 3 min l'eau
courante, et le laisser la temprature ambiante pendant
30 min.
10 Safar 1436
3 dcembre 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 69 25

7.3.6 Mesurer l'absorbance 558 nm 2 nm par rapport 9.1 Rptabilit

l'eau dans une cuve en verre (4.9), au moyen du
spectromtre ou du colorimtre photolectrique quip
d'un filtre interfrentiel (4.8).
7.3.7 Soustraire l'absorbance mesure partir de l'essai
blanc (7.4) et lire la concentration en hydroxyproline de
l'hydrolysat dilu sur la courbe d'talonnage obtenue
comme dcrit en (7.5).
7.4 Essai blanc
Effectuer, en double, les oprations dcrites de (7.3.2)
(7.3.7), mais en remplaant l'hydrolysat dilu par de l'eau.
Note 3 - Si l'absorbance de l'essai blanc dpasse 0,04,
prparer un nouveau ractif colorimtrique (3.4) et, si
ncessaire, purifier le p- dimthylaminobenzaldhyde
(3.4).
7.5 Courbe d'talonnage
7.5.1 Reprendre le mode opratoire dcrit de (7.3.2)
(7.3.7) inclus, mais avec 4 ml de chacune des quatre
solutions talons dilues d'hydroxyproline (3.5) au lieu de
1'hydrolysat dilu.
7.5.2 Porter sur un graphique les valeurs des
absorbances mesures et corriges pour l'essai blanc, en
fonction des concentrations correspondantes des solutions
talons d'hydroxyproline. Runir les points et l'origine en
traant une courbe aussi droite que possible.
Etablir une nouvelle courbe d'talonnage pour chaque
srie d'analyse.
8. Calcul
Pour chaque prise d'essai, calculer la teneur en
hydroxyproline, en pourcentage en masse, l'aide de la
formule :
6,25 c
wh = masse.
mxV
La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
indpendants, obtenus l'aide de la mme mthode sur un
matriau identique soumis l'essai dans le mme
laboratoire et par le mme oprateur utilisant le mme
appareillage et dans un court intervalle de temps, ne
doit pas tre suprieure la valeur de r donne par la
formule :
r = 0,0131 + 0,0322 wh
O
wh : est la moyenne des deux rsultats d'essai, pour la
teneur en hydroxyproline, exprime en pourcentage en
masse.
Rejeter les deux rsultats si la diffrence dpasse la
valeur indique ci-dessus, et raliser deux nouvelles
dterminations.
9.2 Reproductibilit
La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
individuels, obtenus l'aide de la mme mthode sur un
matriau identique soumis l'essai dans des laboratoires
diffrents par des oprateurs diffrents utilisant des
appareillages diffrents, ne doit pas tre suprieure la
valeur de R donne par la formule :
R = 0,0195 + 0,0529 wh
O
wh est la moyenne des deux rsultats d'essai, pour la
teneur en hydroxyproline, exprime en pourcentage en

wh : est la teneur en hydroxyproline, exprime en

pourcentage en masse, obtenue partir de la formule ;
c : est la concentration en hydroxyproline, en micro-
grammes par millilitre, de l'hydrolysat dilu, lue sur la
courbe d'talonnage ;
m : est la masse, en grammes, de la prise d'essai (7.1) ;
v : est le volume, en millilitres, de la partie aliquote de
l'hydrolysat prleve pour la dilution 250 ml (7.3.1).
Exprimer le rsultat 0,01 % prs.

9. Fidlit

La fidlit de cette mthode a t tablie par un essai

interlaboratoires.
Le niveau de probabilit de 95 % a t retenu pour
obtenir les valeurs de rptabilit et de reproductibilit.

36
17 Joumada El Oula 1436
8 mars 2015 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 12
Arrt du 30 Moharram 1436 correspondant au 23
novembre 2014 rendant obligatoire la mthode
de recherche des polyphosphates dans les viandes
et les produits base de viande.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 14-154 du 5 Rajab 1435
correspondant au 5 mai 2014 portant nomination des
membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu le dcret excutif n 12-214 du 23 Joumada Ethania
1433 correspondant au 15 mai 2012 fixant les conditions
et les modalits d'utilisation des additifs alimentaires dans
les denres alimentaires destines l'alimentation
humaine ;
Vu l'arrt interministriel du 19 Chaoual 1417
correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de
prparation et de commercialisation des merguez ;
Vu l'arrt du 24 Rabie Ethani 1421 correspondant au
26 juillet 2000 relatif aux rgles applicables la
composition et la mise la consommation des produits
carns cuits ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire une mthode de recherche des
polyphosphates dans les viandes et les produits base de
viande.
Art. 2. Pour la recherche des polyphosphates dans les
viandes et les produits base de viande, les laboratoires
du contrle de la qualit et de la rpression des fraudes et
les laboratoires agrs cet effet doivent employer la
mthode jointe en annexe du prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
17
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 30 Moharram 1436 correspondant au
23 novembre 2014.
Amara BENYOUNES.
ANNEXE
Mthode de recherche des polyphosphates
Viandes et produits base de viande
La prsente mthode spcifie un mode opratoire pour
la recherche des polyphosphates linaires condenss dans
les viandes et les produits base de viande, aprs
sparation par chromatographie en couche mince.
Etant donn que les phosphates sont progressivement
hydrolyss par les enzymes prsents dans les viandes ou
les produits base de viande et au cours du traitement par
la chaleur des viandes ou des produits base de viande, la
prsente mthode s'applique uniquement la recherche
des polyphosphates ajouts qui sont encore prsents dans
l'chantillon au moment de la recherche.
1. PRINCIPE
Extraction des viandes ou des produits base de viande
par l'acide trichloractique. Dfcation du srum obtenu
au moyen d'un mlange thanol/oxyde dithylique.
Sparation des phosphates par chromatographie en couche
mince. Recherche des polyphosphates par pulvrisation
avec des ractifs pour le dveloppement de la couleur.
2. REACTIFS
Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique
reconnue. L'eau doit tre distille ou une eau de puret, au
moins, quivalente.
Pour les besoins de cette mthode les ractifs suivants
sont utiliss :
2.1 Acide trichloractique.
2.2 Oxyde dithylique.
2.3 Ethanol, 95 % (V/V).
2.4 Cellulose en poudre, de qualit pour
chromatographie en couche mince.
2.5 Amidon soluble.
2.6 Mlange de rfrence
Dissoudre, dans 100 ml d'eau :
200 mg de dihydrognophosphate de sodium
monohydrat (NaH2PO4.H2O),
300 mg de diphosphate ttrasodique dcahydrat
(Na4P2O7.10H20),
200 mg de triphosphate pentasodique (Na5P3O10), et
200 mg d'hexamtaphosphate de sodium
(NaPO3) x [x > 10].
Le mlange de rfrence reste stable 4 C durant, au
moins, 4 semaines.
37

18 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 12
2.7 Solvant de dveloppement
Mlanger 140 ml d'alcool isopropylique, 40 ml d'une
solution d'acide trichloractique 135 g/l et 0,6 ml de
solution d'hydroxyde d'ammonium, P20 = 0,90 g/ml,
environ 25 % (m/m).
Conserver le solvant dans un flacon hermtiquement
clos.
2.8 Ractif de pulvrisation I
Mlanger des volumes gaux d'une solution
de molybdate d'ammonium ttrahydrat
[(NH4)6MO7O24.4H2O] 75 g/l et d'acide nitrique
concentr, P20 = 1,40 g/ml dissoudre 10g d'acide tartrique
dans 100 ml de ce mlange.
Prparer le ractif le jour de son utilisation.
2.9 Ractif de pulvrisation II
Dissoudre 0,5 g d'acide amino-1 naphtol-2 sulfonique-4
dans un mlange form de 195 ml d'une solution di sulfite
de sodium ( mtabisulfite de sodium ; Na2 S2O5) 150 g/l
et 5 ml d'une solution de sulfite de sodium (Na2SO3)
200 g/l dissoudre 40 g d'actate de sodium trihydrat
(NaOOCCH3.3H2O) dans ce mlange.
Conserver le ractif au rfrigrateur dans un flacon brun
hermtiquement clos. Jeter cette solution aprs une
semaine.
Note- Observer toutes les prcautions appropries la
mise en uvre du mode opratoire spcifi dans la
prsente mthode.
3. APPAREILLAGE
Matriel courant de laboratoire, et notamment :
3.1 Plaques de verre, soigneusement dgraisses,
10 cm x 20 cm.
3.2 Dispositif de pulvrisation, pour la prparation de
couches de 0,25 mm d'paisseur. Si un tel dispositif n'est
pas disponible, des plaques prtes l'utilisation en couche
mince de 0,25 mm d'paisseur peuvent tre utilises
condition que l'amidon soit utilis comme liant. Des
plaques contenant du gypse (sulfate de calcium) ne
conviennent pas.
3.3 Mlangeur de laboratoire.
3.4 Dessiccateur.
3.5 Hachoir mcanique viande, type de laboratoire,
muni d'une plaque perfore dont les trous ont un diamtre
ne dpassant pas 4 mm.
3.6 Papier filtre pliss, de 15 cm de diamtre.
3.7 Micropipette, de 1 1, ou microseringue avec vis
micromtrique et bout courb en verre.
38
17 Joumada El Oula 1436
8 mars 2015
3.8 Cuve de dveloppement, de dimensions
appropries, avec couvercle fermant bien, en vue du
dveloppement du chromatogramme en couche mince.
3.9 Sche-cheveux, pouvant produire soit un courant
d'air la temprature ambiante, soit un courant d'air
tide.
3.10 Pulvrisateur.
3.11 Etuve, rglable 60 C.
4. ECHANTILLON
4.1 Oprer sur un chantillon reprsentatif d'au moins
200 g.
4.2 Prparer l'chantillon pour essai le jour de son
arrive au laboratoire.
5. MODE OPERATOIRE
5.1 Prparation des plaques couche mince
Dissoudre 0,3 g d'amidon (2.5) dans 90 ml d'eau
bouillante. Refroidir, ajouter 15 g de poudre de cellulose
(2.4) et homogniser dans le mlangeur de laboratoire
(3.3) durant 1 min.
Appliquer ce mlange sur des plaques de verre (3.1) au
moyen du dispositif de pulvrisation (3.2) et ajuster afin
d'obtenir une couche de 0,25 mm.
Scher les plaques au moyen d'un courant d'air durant
60 min la temprature ambiante sans les dplacer et
ensuite les chauffer durant 10 min 100 C.
Conserver les plaques dans le dessiccateur (3.4).
Il est galement possible d'utiliser des plaques prtes
l'utilisation en couche mince (3.2).
5.2 Prparation de l'chantillon pour essai
Rendre l'chantillon homogne par au moins deux
passages dans le hachoir viande (3.5) et par mlange.
Garder l'chantillon dans un flacon ferm, tanche et
rempli compltement, et le conserver, si ncessaire, au
rfrigrateur. Analyser l'chantillon ds que possible aprs
homognisation, mais toujours dans les 5 h.
5.3 Prparation du srum
5.3.1 Ptrir 50 g de l'chantillon pour essai (5.2) avec 15
ml d'eau entre 40 et 60 C dans un bcher, au moyen d'une
spatule ou d'un agitateur aplati, jusqu' l'obtention d'une
masse homogne, mais en tout cas en moins de 5 min.
5.3.2 Ajouter 10 g d'acide trichloractique (2.1) et
ensuite mlanger soigneusement.
5.3.3 Placer immdiatement au rfrigrateur et l'y
laisser durant 1 h, puis rassembler, sur papier filtre pliss
(3.6), le srum qui s'est spar par dcantation.
17 Joumada El Oula 1436
8 mars 2015 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 12 19

5.3.4 Si le filtrat est trouble, agiter une fois avec un gal
volume d'oxyde dithylique (2.2). Eliminer la couche
thre au moyen d'une pipette troite et ajouter, la
phase aqueuse, un gal volume d'thanol (2.3). Agiter
durant 1 min. Laisser reposer le mlange durant quelques
minutes et filtrer sur papier filtre pliss (3.6).
5.4 Sparation par chromatographie
5.4.1 Verser le solvant de dveloppement (2.7) dans la
cuve de dveloppement (3.8) jusqu' une hauteur de 5 10
mm au-dessus du fond et fermer la cuve avec son
couvercle. Laisser reposer durant, au moins, 30 min
temprature ambiante, l'abri de la lumire solaire et des
courants d'air.
5.5.3 Laisser refroidir la plaque la temprature
ambiante et la replacer ensuite sous la hotte. Pulvriser la
plaque lgrement, mais de faon uniforme, au moyen du
ractif de pulvrisation II (2.9).
Des taches bleues apparaissent immdiatement.
Note- La pulvrisation avec le ractif II n'est pas
absolument ncessaire. Cependant, les taches d'un bleu
intense produites par ce ractif amliorent
considrablement la dtection.
6. INTERPRETATION
Comparer les distances de migration des taches de
phosphate obtenues partir de l'chantillon avec celles
des phosphates du mlange de rfrence.

5.4.2 Appliquer 3 1 du srum, ou 6 1 si le mode
opratoire de (5.3.4) a t utilis pour obtenir un mlange
limpide, la couche de cellulose (5.1) sur une ligne trace
au crayon environ 2 cm de l'extrmit. Obtenir des
taches troites en appliquant 1 1 la fois.
Utiliser, pour le schage, un courant d'air tide produit
par le sche-cheveux (3.9).
Note- Eviter l'air chaud en raison du risque d'hydrolyse
des phosphates.
Une tache d'ortophosphate est toujours prsente. Si
l'chantillon contient des phosphates condenss, une tache
de diphosphate et/ou des taches de phosphates plus haut
degr de polymrisation sont visibles.
Les valeurs du RF des phosphates dans le mlange de
rfrence sont :
orthophosphate de 0,80 0,90 ;
diphosphate (pyrophosphate) de 0,50 0,60 ;
triphosphate de 0,25 0,35 ;
hexamtapolyphosphate (sel de Graham) 0.

5.4.3 Dans les mmes conditions, appliquer 3 l du
mlange de rfrence (2.6) sur la plaque, une distance de
1 1,5 cm partir de la tache de l'chantillon, mais
exactement la mme distance de l'extrmit.
5.4.4 Retirer le couvercle de la cuve et, rapidement mais
avec prcaution, placer la plaque de cellulose dans la
cuve. Remettre immdiatement le couvercle. Dvelopper
la plaque la temprature ambiante, l'abri de la lumire
solaire et des courants d'air.
5.4.5 Poursuivre le dveloppement jusqu' ce que le
solvant ait effectu une ascension d'environ 10 cm partir
du trait de crayon. Retirer la plaque de la cuve et laisser
scher soit durant 10 min l'tuve (3.11) rgle 60 C,
soit durant 30 min la temprature ambiante, soit au
moyen d'un courant d'air.
En gnral, les valeurs du RF des polyphosphates dans
les extraits de viandes et de produits base de viande sont
quelque peu infrieures.
Note- Les corrections pour les diffrences dans les
valeurs du RF des phosphates dans l'chantillon extrait et
dans le mlange de rfrence peuvent tre obtenues en
plaant, sur la mme plaque, un extrait de l'chantillon de
viande frache. Etant donn que la viande frache contient
uniquement des monophosphates, le pourcentage de
correction peut tre obtenu en comparant les distances de
migration de cette tache talant avec la tache
correspondante du mlange de rfrence.

5.5 Recherche des phosphates

5.5.1 Placer la plaque verticalement sous une hotte et

pulvriser la plaque lgrement, mais de faon uniforme,
au moyen du ractif de pulvrisation I (2.8).

5.5.2 Scher la plaque au moyen d'un courant d'air tide

produit par le sche-cheveux. Chauffer ensuite durant, au
moins, 1h dans une tuve rgle 100 C en vue
d'liminer les dernires traces d'acide nitrique. Retirer la
plaque de l'tuve et vrifier l'absence de l'odeur piquante
de l'acide nitrique.

39
 9 Rajab 1436
6 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 22 29 avril 2015

Art. 2. Pour la dtection des agents colorants dans

les viandes et les produits base de viande par
chromatographie en couche mince, les laboratoires du
contrle de la qualit et de la rpression des fraudes et les
laboratoires agrs cet effet, doivent employer la
mthode jointe en annexe du prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.

Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal

officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 23 Joumada El Oula 1435 correspondant
au 25 mars 2014.
MINISTERE DU COMMERCE Mustapha BENBADA.

Arrt du 23 Joumada El Oula 1435 correspondant au
25 mars 2014 rendant obligatoire la mthode de ANNEXE
dtection des agents colorants dans les viandes
et les produits base de viande par METHODE DE DETECTION DES AGENTS
chromatographie en couche mince. COLORANTS DANS LES VIANDES ET LES
PRODUITS A BASE DE VIANDE PAR
CHROMATOGRAPHIE EN COUCHE MINCE
Le ministre du commerce,
1. DOMAINE D'APPLICATION
Vu le dcret prsidentiel n 13-312 du 5 Dhou El Kaada
1434 correspondant au 11 septembre 2013 portant La prsente mthode spcifie une technique de
nomination des membres du Gouvernement ; dtection des agents colorants synthtiques solubles dans
l'eau, dans les viandes et produits base de viande par
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990, chromatographie en couche mince.
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ; Les agents colorants suivants peuvent tre dtects avec
cette mthode :
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
Tartrazine
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ; Jaune de quinoline

Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou El Kaada Jaune-orange FCF

1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif Amarante
l'valuation de la conformit ; Ponceau 4R
Vu le dcret excutif n 12-214 du 23 Joumada Ethania Erythrosine
1433 correspondant au 15 mai 2012 fixant les modalits Bleu Patent V
d'utilisation des additifs alimentaires dans les denres
alimentaires destins l'alimentation humaine ; Bleu indigo
Noir brillant PN
Vu l'arrt interministriel du 19 Chaoual 1417
correspondant au 26 fvrier 1997 relatif aux conditions de Noir 7984
prparation et de commercialisation des merguez ; Vert malachite FCF
Vu l'arrt du 24 Rabie Ethani 1421 correspondant au Bleu VRS
26 juillet 2000, modifi et complt, relatif aux rgles
applicables la composition et la mise la 2. TERME ET DEFINITION
consommation des produits carns cuits ;
Pour les besoins de la prsente mthode, la dfinition
Arrte : suivante s'applique.

Article 1er. En application des dispositions de Dtection des agents colorants

l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
Dtection de la prsence ou de l'absence d'agents
de rendre obligatoire une mthode de dtection des agents
colorants dans les viandes et les produits base de viande colorants conforme la technique spcifie dans la
par chromatographie en couche mince. prsente mthode.

40
9 Rajab 1436
29 avril 2015 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 22
3. PRINCIPE
Les agents colorants sont extraits d'une prise d'essai
avec de l'eau chaude et absorbs sur une poudre de
polyamide. Les agents colorants extraits sont purifis par
chromatographie sur colonne et les colorants sont lus de
la colonne. Les agents colorants sont identifis par
chromatographie en couche mince.
4. REACTIFS
Sauf spcification contraire, utiliser uniquement des
ractifs de qualit analytique reconnue.
4.1 Eau, d'au moins qualit 3 ;
4.2 Ether de ptrole, intervalle d'bullition 40 oC
60 oC ;
4.3 Mthanol ;
4.4 Ammoniaque, solution aqueuse 25 %, p20
= 0,910 g/ml ;
4.5 Acide actique, fraction massique 100 %,
p20 = 1,050 g/ml ;
4.6 Citrate trisodique dihydrat ;
4.7 Propane1-ol ;
4.8 Actate d'thyle ;
4.9 2- Mthyl-2-propanol ;
4.10 Acide propionique ;
4.11 Solution d'luant pour chromatographie sur
colonne.
Mlanger 95 volumes de mthanol (4.3) 5 volumes
d'ammoniaque (4.4).
4.12 Acide actique, solution 50 % dans du mthanol.
Mlanger 1 volume d'acide actique (4.5) 1 volume de
mthanol (4.3) ;
4.13 Poudre de polyamide, taille des particules de 0,05
mm 0,16 mm ;
4.14 Sable, grains fins, lav l'acide chlorhydrique,
neutralis et calcin ;
4.15 Colorants talons de rfrence
La puret des colorants talons risque de varier, il est
donc ncessaire de connatre la puret des colorants
NOTE : Les colorants alimentaires certifis peuvent
aussi tre utiliss comme talons.
4.16 Solutions talons de rfrence pour
chromatographie en couche mince.
Constituer avec de l'eau des solutions spares de
chacun des colorants talons de rfrence (4.15) une
concentration de colorant talon d'environ 1 g/l.
Prparer les solutions de bleu indigo le jour mme de
leur utilisation. D'autres solutions peuvent se conserver
pendant, au moins, 3 mois lorsqu'elles sont stockes dans
le noir (les solutions d'rythrosine se conservent pendant 1
mois).
7
4.17 Eluant pour chromatographie en couche
mince : solution 1.
Peser, 0,1 g prs, 25 g de citrate trisodique dihydrat
(4.6) dans une fiole jauge un trait de 1000 ml.
Dissoudre dans de l'eau, diluer avec de l'eau jusqu'au trait
et mlanger.
Mlanger 80 volumes de cette solution de citrate 20
volumes d'ammoniaque dilue (4.4) et 12 volumes de
mthanol (4.3).
De manire viter ou rduire les perturbations dues
au saffleur ou au safran, il est recommand d'utiliser la
solution chromatographique II (4.18).
4.18 Eluant pour chromatographie en couche
mince : solution II.
Mlanger 6 volumes de propan-1-ol (4.7) 1 volume
d'actate d'thyle (4.8) et 3 volumes d'eau.
4.19 Eluant pour chromatographie en couche
mince : solution III.
Mlanger 50 volumes de 2-mthyl-2-propanol (4.9)
12 volumes d'acide propionique (4.10) et 38 volumes
d'eau.
5. APPAREILLAGE
Matriel courant de laboratoire et, notamment, les
lments suivants :
5.1 Equipement mcanique ou lectrique capable
dhomogniser l'chantillon pour laboratoire,
Ceci inclut une machine de dcoupe rotative vitesse
leve et un hacheur quip d'une plaque dont les
ouvertures ont un diamtre infrieur ou gal 4 mm.
5.2 Tubes de centrifugeuse, en verre, d'une contenance
de 75 ml.
5.3 Fioles fond plat, d'une contenance de 250 ml,
bouchon en verre rod.
5.4 Fioles fond rond, d'une contenance de 100 ml,
avec rodage.
5.5 Centrifugeuse, fonctionnant avec une acclration
radiale d'environ 2 000 gn.
5.6 Evaporateur rotatif
5.7 Colonne de chromatographie, en verre, quipe
d'un filtre fritt et d'un robinet, longueur environ 20 cm,
diamtre environ 30 mm, taille des pores du filtre de 40
m 100 m.
Mettre de la laine de verre dans la colonne et ajouter 1 g
2 g de sable (4.14).
5.8 Rcipient en plastique, d'un volume d'environ 10
ml, avec couvercle.
41

8 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 22
5.9 Plaques de chromatographie en couche mince,
recouvertes d'une couche de poudre cellulosique d'une
paisseur de 0,10 mm ou quivalent.
Des plaques du type prtes l'emploi peuvent tre
utilises.
5.10 Micropipettes, d'une contenance d'environ 5 l.
5.11 pH-mtre, prcis 0,1 unit de pH prs.
6. ECHANTILLIONNAGE
Il est important que le laboratoire reoive un chantillon
qui soit rellement reprsentatif et n'ait pas t
endommag ou modifi lors du transport ou de
l'entreposage.
Partir d'un chantillon reprsentatif d'au moins 200 g.
Entreposer l'chantillon de manire empcher tout
endommagement ou changement de composition.
7. PREPARATION DE L'ECHANTILLON POUR
ESSAI
Homogniser l'chantillon l'aide de l'quipement
appropri (5.1). Veiller ce que la temprature de la
matire de l'chantillon ne s'lve pas au-dessus de 25 C.
Si l'on utilise un hachoir, faire passer l'chantillon dans
l'quipement, au moins, deux fois.
Remplir un rcipient appropri, tanche l'air, avec
l'chantillon prpar. Fermer le rcipient et l'entreposer de
manire viter tout endommagement ou changement de
composition de l'chantillon. Analyser l'chantillon ds
que les conditions pratiques le permettent, mais toujours
dans un dlai de 24 h aprs l'homognisation.
8. MODE OPERATOIRE
Remarques :
1. Si l'chantillon contient de l'indigo, la temprature
ne doit, aucun moment de l'analyse, dpasser 35 C.
Le bleu indigo se dcompose partiellement dans la
solution chromatographique l, c'est pourquoi on doit
utiliser la solution II.
2. L'rythrosine est sensible la lumire. Lorsque
l'analyse se trouve interrompue, les solutions et les
plaques doivent tre entreposes dans le noir. Ceci est
galement valable pour l'indigo.
8.1 Prise d'essai
Peser, 0,1 g prs, 5 g de l'chantillon pour essai
prpar (7) dans un tube de centrifugeuse (5.2).
Pour les chantillons gras, procder conformment
(8.2).
Pour les chantillons non gras, procder conformment
(8.3).
8.2 Echantillons gras
Ajouter environ 20 ml d'ther de ptrole (4.2) dans le
tube de centrifugeuse et mlanger avec une baguette de
verre. Dcanter l'ther de ptrole.
Renouveler cette opration trois fois.
9 Rajab 1436
29 avril 2015
8.3 Echantillons non gras
Ajouter 25 ml d'eau bouillante (8) et mlanger.
Ajouter 25 ml de solution d'luant (4.11).
Vrifier que le pH,est de 9 0,5 en utilisant le
pH-mtre (5. 11) Si ce n'est pas le cas, ajuster le pH avec
de l'acide actique (4.5) ou de l'ammoniaque dilue (4.4).
Bien mlanger. Mettre l'chantillon refroidir dans un
conglateur pendant 15 min (pour empcher la turbidit).
Centrifuger (5.5) pendant 10 min avec une acclration
radiale d'environ 2 000 gn.
Dcanter la solution claire dans une fiole fond plat
(5.3). Pour le bleu indigo, utiliser une fiole fond rond
(5.4).
Ajouter 5 ml d'eau au tube de centrifugeuse contenant le
rsidu. Mlanger et ajouter 10 ml de solution d'luant
(4.11). Mlanger et centrifuger comme indiqu ci-dessus.
Renouveler l'opration jusqu' ce que tout le colorant
soit extrait de l'chantillon et combiner tous les extraits.
Evaporer l'extrait combin sur un bain-marie jusqu'
environ 25 ml de manire liminer le mthanol. Pour
l'indigo, utiliser une fiole fond rond (5.4) et l'vaporateur
rotatif (5.6) 35 C.
Ajouter 25 ml d'eau bouillante (8) et mlanger.
8.4 Transfert des colorants sur la poudre de
polyamide
Avec l'acide actique (4.5), ou l'ammoniaque dilue
(4.4), ajuster le pH entre 4 et 5.
Ajouter 1 g de poudre de polyamide (4.13) la solution
tide (8). Secouer vigoureusement pendant 1 min.
Laisser la poudre sdimenter.
Vrifier qu'il ne reste pas de colorant dans la solution.
Si la solution est colore, ajouter un peu plus de poudre de
polyamide et secouer vigoureusement.
NOTE : Certains colorants naturels ne sont pas
compltement absorbs par la poudre de polyamide,
laissant une solution colore mme quand tous les
colorants synthtiques ont t entirement absorbs. Il est
en gnral possible de dcider en fonction du type
d'chantillon si ces colorants naturels sont prsents ou
non.
Secouer et transfrer la solution tide en suspension
dans la colonne de chromatographie (5.7).
Rincer la fiole fond plat avec trois volumes d'eau
chaude de 10 ml chacun (8) et ajouter les trois volumes de
rinage, un par un, la colonne. Laver nouveau la
colonne trois reprises avec des volumes d'eau chaude de
10 ml (8) et pour finir la laver trois reprises avec trois
volumes de mthanol (4.3) de 5 ml.
Si les colorants naturels sont lus, poursuivre le lavage
de la colonne avec du mthanol (4.3) jusqu' ce que le
mthanol lu soit devenu incolore.
42
9 Rajab 1436
29 avril 2015 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 22 9

8.5 Elution et concentration des colorants isols
Placer une fiole fond rond (5.4) sous la colonne et
luer les colorants de la poudre de polyamide en utilisant
des volumes de solution d'luant (4.11) de 5 ml, un dbit
d'lution de 2 ml/min, jusqu' ce que le polyamide soit
devenu incolore.
Evaporer l'luat jusqu' schage complet l'aide de
l'vaporateur (5.6) une temprature de 35 C
maximum (8)
Ajouter 1 ml ou 2 ml de solution d'luant (4.11) en
fonction de la quantit et du nombre de colorants, et
dissoudre le rsidu. Transfrer la solution colore dans un
rcipient en plastique (5.8).
8.6 Sparation chromatographique en couche mince
Les produits rsiduels sont en gnral provoqus par
une purification inadquate. Si tel est le cas, adsorber le
colorant nouveau avec l'absorbant, laver l'eau chaude
et liminer l'absorbant comme dcrit prcdemment.
8.7 Confirmation
Confirmer l'identit des colorants par chromatographie
du concentr (8.6.2) lorsque les talons sont mlangs
pour les colorants identifis avec le premier
chromatogramme.
En cas de doute, luer le colorant de la plaque avec une
solution neutre (eau ou thanol, ou solution d'actate
d'ammonium 0,2 g/I), un acide (acide chlorhydrique
0,1 mol/I) et une solution alcaline (solution d'hydroxyde
de sodium 0,1 mol/I) et comparer le spectre d'absorption
du colorant celui de l'talon. Se reporter aux spectres
d'absorbance des agents colorants cits en (1).

8.6.1 Plaques talons de rfrence

Prparer trois plaques de chromatographie en couche

mince talons de rfrence. Avec une micropipette (5.10),
dposer sur chacune des plaques (5.9) une goutte
d'environ 5 I (diamtre < 5 mm) de chaque solution
talon (4.16). Laisser celles-ci dvelopper sparment,
chacune des plaques avec un luant chromatographique
(4.17, 4.18 et 4.19), dans une cuve non sature jusqu' ce
que le front du solvant se trouve environ 10 cm 12 cm
de la ligne de dpart. Retirer les plaques de la cuve et les
scher l'air sous une cloche de protection. Entreposer les
plaques dans le noir. Les gouttes, l'exception de l'indigo,
sont stables pendant plusieurs annes.

8.6.2 Echantillons

Avec une micropipette (5.10), dposer sur une plaque

de chromatographie en couche mince (5.9) une quantit
juste visible de solution d'chantillon (8.5). Scher avec
un sche-cheveux. Pour l'indigo, scher l'air.

Dvelopper la plaque dans une cuve non sature une

hauteur d'environ 10 cm 12 cm en utilisant une solution
chromatographique approprie (4.17, 4.18 ou 4.19),
c'est--dire la solution qui permet d'obtenir la sparation
des colorants la meilleure dans l'chantillon (1).

Il est parfois ncessaire de prparer une deuxime

plaque chantillon et de la dvelopper dans l'un ou l'autre
des luants pour obtenir la sparation la meilleure
possible.

Retirer la plaque de la cuve et la scher l'air sous une

cloche de protection.

Comparer les gouttes d'chantillons la plaque talon

de rfrence approprie (8.6.1).

Il est recommand d'utiliser diffrentes quantits de

solutions d'chantillons dans le cas o les colorants sont
mlangs, car les colorants en prsence peuvent avoir des
concentrations diffrentes.

43
 RPUBLIQUE ALGRIENNE DMOCRATIQUE ET POPULAIRE
__________________

MINISTRE DU COMMERCE

DIRECTION GNRALE DU CONTRLE

CONOMIQUE ET DE LA RPRESSION
DES FRAUDES

Direction des Laboratoires dEssais

et dAnalyses de la Qualit

MTHODES OFFICIELLES D'ANALYSES

PHYSICO-CHIMIQUES RELATIVES AUX
CORPS GRAS D'ORIGINE ANIMALES
ET VGTALES
 Sommaire

1. Arrt du 29 Mai 2011 relatif la mthode de prparation de l chantillon

01
dans les corps gras dorigine animale et vgtale. (JO n 64 - 2011)

2. Arrt du 29 Mai 201 1 relatif la mthode de dtermination de l 'indice de

saponification dans les corps gras d'origine animale et vgtale. 02
(JO n 64 - 2011)

3. Arrt du 29 Mai 2011 relatif la mthode de d termination d e l 'indice d e

04
peroxyde des corps gras dorigine animale et vgtale. (JO n 64 - 2011)

4. Arrt du 27 Juin 2011 relatif la mthode de dtermination de la teneur en

eau et en matires volatiles des corps gras dorigine animale et vgtale. 08
(JO n 65 - 2012)

5. Arrt du 27 Juin 2011 relatif la mthode de dtermination de la teneur en

impurets insolubles dans les corps gras dorigine animale et vgtale. 10
(JO n 65 - 2012)

6. Arrt du 27 Juin 2011 relatif la mthode de dtermination de l indice de

12
rfraction des corps gras dorigine animale et vgtale. (JO n 65 - 2012)

7. Arrt d u 3 Aot 2011 relatif la mthode de dtermination d e la teneur en

chlorure de sodium dans les corps gras dorigine animale et vgtale. 14
(JO n 66- 2012)

8. Arrt du 3 Aot 2011 relatif l a mthode de dtection rapide de la prsence

d'un seul anti-oxygne dans les corps gras dorigine animale et vgtale. 15
(JO n 66- 2012)

9. Arrt du 3 Aot 2011 relatif la mthode de dtermination de la densit

17
relative 20 C des corps gras dorigine animale et vgtale. (JO n 66- 2012)

10. Arrt du 21 Aot 2011 relatif la mthode de d termination de l indice

dacide et d'acidit des corps gras d'origine animale et vgtale. 19
(JO n 68 - 2012)

11. Arrt du 21 Aot 2011 relatif la mthode de dtermination de l'indice

24
diode dans les corps gras dorigine animale et vgtale. (JO n 9 - 2013)

24 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 64
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 26 Joumada Ethania 1432 correspondant au
29 mai 2011 rendant obligatoire la mthode de
prparation de l'chantillon des corps gras
d'origine animale et vgtale.
Le ministre du commerce ;
Vu le dcret prsidentiel n 10-149 du 14 Joumada
Ethania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02- 453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05 - 465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu l'arrt interministriel du 21 Chabane 1419
correspondant au 10 dcembre 1998 relatif aux
spcifications techniques des beurres et aux modalits de
leur mise la consommation ;
Vu l'arrt interministriel du 2 Dhou El Hidja 1422
correspondant au 14 fvrier 2002 fixant la liste des
additifs autoriss dans les denres alimentaires ;
01
2 Moharram 1433
27 novembre 2011
Arrte :
Article ler. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode de prparation de
l'chantillon des corps gras d'origine animale et vgtale.
Art. 2. Pour la prparation de l'chantillon des corps
gras d'origine animale et vgtale, les laboratoires du
contrle de la qualit et de la rpression des fraudes et les
laboratoires agrs cet effet doivent employer la
mthode jointe en annexe du prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 26 Joumada Ethania 1432 correspondant
au 29 mai 2011.
Mustapha BENBADA.
ANNEXE
METHODE DE PREPARATION DE
L'ECHANTILLON DES CORPS GRAS
D'ORIGINE ANIMALE ET VEGETALE
1. PRINCIPE
Homognisation par agitation de la matire grasse,
rendue liquide si ncessaire par chauffage une
temprature approprie. S'il y a lieu, sparation des
substances insolubles par filtration, et limination de l'eau
par schage l'aide de sulfate de sodium anhydre.
2. REACTIFS
Sulfate de sodium, anhydre.
3. APPAREILLAGE
3.1 Etuve chauffage lectrique, rglable.
3.2 Entonnoir filtration, chauffant.
4. MODE OPERATOIRE
4.1 Homognisation et filtration.
4.1.1 Echantillon fluide, limpide et sans sdiment.
Rendre l'chantillon pour laboratoire le plus homogne
possible par agitation du rcipient maintenu ferm.
4.1.2 Echantillon fluide, trouble ou contenant des
sdiments.
2 Moharram 1433 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 64
27 novembre 2011
4.1.2.1 Pour la dtermination de la teneur en toutes
sortes d'impurets volatiles et/ou insolubles, agiter
nergiquement le rcipient qui contient l'chantillon pour
laboratoire jusqu' ce que les sdiments se soient
compltement dtachs des parois du rcipient et soient
uniformment rpartis au sein de l'huile. Vrifier qu'il ne
reste pas de sdiments sur les parois du rcipient, s'il en
reste, les dtacher compltement (ouvrir le rcipient si
ncessaire) et les incorporer soigneusement avec toute
l'huile.
4.1.2.2 Pour toutes les autres dterminations, introduire
le rcipient contenant l'chantillon pour laboratoire dans
l'tuve (3.1) rgle 5OC, l'y maintenir jusqu' ce que
l'chantillon ait atteint cette temprature et procder
ensuite comme indiqu en 4.1.1. Si, la suite du
chauffage et du mlange, l'chantillon n'est pas
parfaitement limpide, filtrer l'huile en oprant l'intrieur
de l'tuve maintenue 50 C ou l'aide de l'entonnoir
filtration chauffant (3.2). Eviter des temps de sjour dans
l'tuve plus longtemps qu'il est ncessaire, de faon
viter toute modification du corps gras par oxydation ou
polymrisation. Le filtrat obtenu doit tre parfaitement
limpide.
4.1.3 Echantillon concret
4.1.3.1 Pour la dtermination de la teneur en toutes
sortes d'impurets volatiles et/ou insolubles, et pour toutes
les dterminations relatives l'tat d'oxydation du corps
gras, chauffer avec prcaution l'chantillon pour
laboratoire jusqu' ce qu'il commence tre liquide et
malaxer nergiquement afin de le rendre aussi homogne
que possible.
4.1.3.2 Pour toutes les autres dterminations, faire
fondre l'chantillon pour laboratoire en le maintenant dans
l'tuve (3.1) rgle une temprature suprieure d'au
moins l0C la temprature de fusion du corps gras en
question. Si la suite du chauffage, l'chantillon est
parfaitement limpide, procder comme indiqu en (4.1.1),
s'il est trouble ou s'il contient un sdiment, le filtrer la
temprature adopte en oprant l'intrieur de l'tuve ou
l'aide de l'entonnoir filtration chauffant (3.2).
Le filtrat obtenu doit tre parfaitement limpide.
4.2 Schage
Si l'chantillon homognis contient encore de l'eau
(en particulier dans le cas des huiles acides, des acides
gras des corps gras concrets), il doit, pour les
dterminations dont les rsultats peuvent tre influencs
par une prsence d'eau (par exemple indice d'iode), tre
pralablement sch en prenant toutes les prcautions
utiles pour viter son oxydation.
Dans ce but, maintenir le moins longtemps possible,
dans l'tuve (3.1) rgle une temprature suprieure d'au
moins de 10C la temprature de fusion, de prfrence
sous azote une partie de l'chantillon homognis (4.1.1),
(4.1.2) ou (4.1.3), selon le cas, aprs avoir ajout du
sulfate de sodium anhydre raison de 1 2 g pour 10 g de
corps gras.
Ne jamais scher une temprature dpassant 50C.
25
Note :
Le sulfate de sodium perd sa proprit d'agent
dshydratant des tempratures dpassant 32,4 C. Il peut
donc tre ncessaire de scher sous pression rduite. Les
corps gras pour lesquels il est ncessaire d'avoir une
temprature de dessiccation suprieure 50 C doivent
tre dissous dans un solvant et ensuite schs.
Agiter vigoureusement l'chantillon chauff avec le
sulfate de sodium anhydre, puis filtrer. Si le corps gras se
solidifie en refroidissant, oprer l'intrieur de l'tuve ou
l'aide d'un entonnoir filtration chauffant (3.2), une
temprature approprie qui ne doit jamais dpasser 50C.
5. CONSERVATION : il convient de conserver les
chantillons dans des conditions appropries en tenant
compte de la nature de chaque chantillon concern et des
essais effectuer.
Arrt du 26 Joumada Ethania 1432 correspondant au
29 mai 2011 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de lindice de saponification des
corps gras dorigine animale et vgtale.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 10-149 du 14 Joumada
Etania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou El Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu l'arrt interministriel du 21 Chabane 1419
correspondant au 10 dcembre 1998 relatif aux
spcifications techniques des beurres et aux modalits de
leur mise la consommation ;
Vu l'arrt interministriel du 2 Dhou El Hidja 1422
correspondant au 14 fvrier 2002 fixant la liste des
additifs autoriss dans les denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode de dtermination de
l'indice de saponification des corps gras d'origine animale
et vgtale.
Art. 2. Pour la dtermination de l'indice de
saponification des corps gras d'origine animale et
vgtale, les laboratoires du contrle de la qualit et de la
rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet effet
doivent employer la mthode jointe en annexe du prsent
arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
02

26 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 64
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal 3.2 Acide chlorhydrique, solution titre c (HCL) = 0,5
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et mol/I.
populaire.
Fait Alger, le 26 Joumada Ethania 1432 correspondant
au 29 mai 2011.
Mustapha BENBADA.
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION DE L'INDICE
DE SAPONIFICATION DES CORPS GRAS
D'ORIGINE ANIMALE ET VEGETALE
La prsente mthode spcifie une technique pour la aux alcalis, col rod.
dtermination de l'indice de saponification des corps gras
d'origine animale et vgtale. L'indice de saponification
est une caractristique des acides gras libres et estrifis adaptable la fiole conique (4.1).
prsents dans l'chantillon analys.
1. TERME ET DEFINITION
Pour les besoins de la prsente mthode, le terme et la
dfinition suivants s'appliquent.
Indice de saponification : nombre de milligrammes
d'hydroxyde de potassium ncessaire pour saponifier 1 g
de matire grasse dans les conditions spcifies dans la
prsente mthode.
2. PRINCIPE
Ebullition reflux chantillon avec une solution
thanolique d'hydroxyde de potassium, puis titrage de
l'excs d'hydroxyde de potassium, par une solution titre
d'acide chlorhydrique,
3. REACTIFS
Utiliser uniquement des ractifs de qualit reconnue et
de l'eau dminralise ou de l'eau de puret au moins
quivalente.
3.1 Hydroxyde de potassium, solution c (KOH) = 0,5
mol/l dans l'thanol 95 % (fraction volumique).
Cette solution doit tre incolore ou jaune paille. Une
solution stable et incolore peut tre obtenue selon l'un des
modes opratoires suivants :
a) - Faire bouillir reflux 1 litre d'thanol avec 8g
d'hydroxyde de potassium et 5g de copeaux d'aluminium,
durant 1 h, puis distiller immdiatement. Dissoudre dans
le distillat la quantit requise d'hydroxyde de potassium
( peu prs 35g). Laisser reposer pendant plusieurs jours,
puis dcanter le liquide clair surnageant dans un flacon en
verre brun pour le sparer du carbonate de potassium
dpos.
b) - Ajouter 4g de tert-butoxyde d'aluminium 1 litre
d'thanol et laisser le mlange reposer pendant plusieurs
jours.
Dcanter le liquide surnageant et dissoudre dans ce
liquide la quantit requise d'hydroxyde de potassium.
Laisser reposer pendant plusieurs jours, puis dcanter le
liquide clair surnageant dans un flacon en verre brun pour
le sparer du carbonate de potassium dpos. Suprieur 300
03
2 Moharram 1433
27 novembre 2011
3.3 Phnolphtaline, solution (p = 0,1g/100ml) Dans
l'thanol 95 % (fraction volumique).
3.4 Bleu alcalin 6b, solution (p =2,5g/100ml) dans
l'thanol 95% (fraction volumique),
3.5 Rgularisateurs d'bullition.
4. APPAREILLAGE
Matriel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui
suit.
4.1 Fiole conique de capacit 250 ml, en verre rsistant
4.2 Rfrigrant reflux, avec rodage en verre
4.3 Dispositif de chauffage ( par exemple bain d'eau,
plaque lectrique chauffante, ou tout autre appareil
appropri).
Ne pas utiliser de flamme nue.
4.4 Burette, de capacit 50 ml, gradue en 0,1 ml ou
burette automatique.
4.5 Pipette, de capacit 25 ml ou pipette automatique.
4.6 Balance analytique.
5. ECHANTILLONNAGE
Il est important que le laboratoire reoive un chantillon
reprsentatif, n'ayant pas t endommag ou modifi
pendant le transport ou l'entreposage.
6. PREPARATION DE L'ECHANTILLON POUR
ESSAI
Mlanger les chantillons pour essai et les filtrer
soigneusement s'il y a des impurets visibles.
7. MODE OPERATOIRE
7.1 Prise d'essai
Peser, 5 mg prs, environ 2 g d'chantillon pour essai
(article 6) dans une fiole conique (4.1),
La prise d'essai de 2g a t dtermine sur la base
d'indice de saponification de 170 200. Pour d'autres
indices de saponification, il convient de modifier la masse
de faon neutraliser la moiti environ de la solution
thanoque d'hydroxyde de potassium. Les
recommandations concernant la masse de la prise d'essai
sont prsentes au tableau 1.
Tableau 1 Masse de la prise d'essai
Indice de saponification prvu Masse de la prise d'essai
150 200 2,2g 1,8g
200 250 1,7g l,4g
250 300 1,3g 1,2g
1,l g l,0g
2 Moharram 1433 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 64
27 novembre 2011
7.2 Dtermination
7.2.1 Ajouter, la prise d'essai, l'aide de la pipette
(4.5), 25 ml de la solution thanolique d'hydroxyde de
potassium (3.1) et quelques rgularisateurs d'bullition
(3.5) .Relier le rfrigrant reflux (4.2) la fiole, placer la
fiole sur le dispositif de chauffage (4.3) et faire bouillir
doucement, en agitant de temps en temps, pendant 60
minutes, sauf pour les corps gras point de fusion lev,
difficiles saponifier, pour lesquels le temps d'bullition
doit tre de deux heures (2 h).
7.2.2 Ajouter, la solution chaude, de 0,5 1 ml de la
solution de phnolphtaline (3.3) et titrer avec l'acide
chlorhydrique (3.2) jusqu' disparition de la couleur rose
de l'indicateur. Si la solution est fortement colore, utiliser
0,5 ml 1 ml de solution de bleu alcalin (6b) (3.4).
7.3 Essai blanc
Effectuer un essai blanc en suivant le mme mode
opratoire qu'en (7.2), en utilisant galement 25,0 ml de la
solution thanolique d'hydroxyde de potassium (3.1), mais
en omettant la prise d'essai.
8. EXPRESSION DES RESULTATS
L'indice de saponification est gal :
(Vo - V1) x c x 56,1
Is =
m spcifications techniques des beurres et aux modalits de
o :
VO : est le volume, en millilitres, de l'acide
chlorhydrique (3.2), utilis pour essai blanc ;
V1: est le volume, en millilitres, de l'acide
chlorhydrique (3.2), utilis pour la dtermination ;
c : est la concentration exacte, dacide chlorhydrique
(3.2) ;
m : est la masse, en grammes, de la prise d'essai (7.1).
Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des
deux dterminations, si les conditions de rptabilit (9.2)
sont remplies.
Donner le rsultat sous forme de nombre entier.
9. REPETABILITE
La diffrence absolue entre deux rsultats individuels
indpendants, obtenus l'aide de la mme mthode sur un
matriau identique dans le mme laboratoire par le mme
oprateur utilisant le mme appareillage dans un court
intervalle de temps, n'excdera que dans 5% des cas au
plus la limite de rptabilit.
10. REPRODUCTIBILITE
La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
individuels, obtenus l'aide de la mme mthode sur un
matriau identique soumis l'essai dans des laboratoires
diffrents par des oprateurs diffrents utilisant des
appareillages diffrents, n'excdera que 5% des cas au
plus la limite de reproductibilit,
04
27
Arrt du 26 Joumada Ethania 1432 correspondant au
29 mai 2011 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de lindice de proxyde des corps
gras dorigine animale et vgtale.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 10-149 du 14 Joumada
Etania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu l'arrt interministriel du 21 Chabane 1419
correspondant au 10 dcembre 1998 relatif aux
leur mise la consommation ;
Vu l'arrt interministriel du 2 Dhou El Hidja 1422
correspondant au 14 fvrier 2002 fixant la liste des
additifs autoriss dans les denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode de dtermination de
l'indice de proxyde des corps gras d'origine animale et
vgtale.
Art. 2. Pour la dtermination de l'indice de proxyde
des corps gras d'origine animale et vgtale, les
laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent
employer la mthode jointe en annexe du prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 26 Joumada Ethania 1432 correspondant
au 29 mai 2011.
Mustapha BENBADA.

28 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 64
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION DE L'INDICE
DE PEROXYDE DES CORPS GRAS D'ORIGINE
ANIMALE ET VEGETALE
(Dtermination avec point d'arrt iodomtrique)
1 - TERME ET DEFINITION :
Pour les besoins de la prsente mthode, le terme et la
dfinition suivants s'appliquent.
Indice de proxyde ( IP) :
Quantit de substances de l'chantillon, exprime en
termes d'oxygne actif, qui oxydent l'iodure de potassium
dans les conditions spcifies dans la prsente mthode.
Note : L'indice de proxyde est gnralement exprim
en miliquivalents ( mq) d'oxygne actif par kilogramme
d'huile, mais il peut galement tre exprim ( en units SI)
en millimoles (mmol) d'oxygne actif par kilogramme
d'huile. La valeur en mmol d'oxygne actif par
kilogramme reprsente la moiti de la valeur exprime en
mq d'oxygne actif par kilogramme. L'indice de
peroxyde (mq d'oxygne actif par kilogramme) multipli
par la masse quivalente d'oxygne actif (gale 8 ) est
gale la quantit d'oxygne en milligrammes par
kilogramme d'huile.
2 - PRINCIPE
Dcoudre l'chantillon d'essai dans de l'iso-octane et de
l'acide actique glacial, puis ajouter l'iodure de potassium.
Dterminer visuellement l'iode libr par les peroxydes,
l'aide d'un indicateur l'amidon et d'une solution talon de
thiosulfate de sodium. Dterminer visuellement la fin du
titrage.
3 - REACTIFS
Sauf indication contraire, utiliser uniquement des
ractifs de qualit analytique reconnue. Tous les ractifs
doivent tre exempts d'oxygne dissous.
3.1 Eau, dminralise, bouillie et refroidie 20c.
3.2 Acide actique glacial, fraction massique de 100%,
dgaz dans une cuve ultrasons sous vide ou purg sous
courant de gaz inerte pur et sec (dioxyde de carbone ou
azote).
3.3 Iso - octane, dgaz dans une cuve ultrasons sous
vide ou purg sous courant de gaz inerte pur et sec
(dioxyde de carbone ou azote).
3.4 Mlange d'acide actique glacial/iso-octane,
prpar en mlangeant 60 ml d'acide actique glacial et 40
ml d'iso-octane (fraction volumique d'acide actique
glacial : densit, p = 60ml/l00ml, fraction volumique
d'iso-octane: densit, p = 40ml/l00ml).
Le mlange est dgaz dans une cuve ultrasons sous
vide ou purg sous courant de gaz inerte pur et sec
(dioxyde de carbone ou azote).
05
2 Moharram 1433
27 novembre 2011
3.5 Iodure de potassium, exempt d'iode et d'iodates.
3.6 Solution d'iodure de potassium sature,
concentration massique = 175g/100ml, dissoudre environ
14g d'iodure de potassium dans environ 8g d'eau
rcemment porte bullition et revenue temprature
ambiante.
Veiller maintenir la solution l'tat satur (cristaux
non dissous). La conserver l'abri de la lumire et en
prparer une nouvelle chaque jour. Contrler la solution
par l'essai suivant : ajouter deux gouttes de solution
d'amidon 0,5 ml d'iodure de potassium dans 30 ml de
solution d'acide actique glacial/iso-octane. Si la
formation d'une couleur bleue ncessite plus d'une goutte
de solution talon de thiosulfate de sodium 0,1 mol/1,
liminer la solution d'iodure de potassium.
3.7 Solution talon de thiosulfate de sodium 0,1 N,
C (Na2 S2 O3 ) = 0,1 mol/l.
Pour la prparation de cette solution, utiliser
uniquement de l'eau rcemment porte bullition, si
possible purge avec de l'azote. Cette solution peut tre
utilise pendant un mois et conserve dans un flacon en
verre ambr.
3.8 Solution talon de thiosulfate de sodium 0,01 N,
C (Na2 S2 O3 ) = 0,01 mol/1 (7.2).
Il est ncessaire de prparer frachement cette solution
partir de la solution talon 0,1 mol/1 de thiosulfate de
sodium prpare prcdemment, ou bien d'en dterminer
le titre tous les jours. L'exprience montre que la stabilit
est limite et dpend de la valeur du pH et de la teneur en
dioxyde de carbone libre. Utiliser uniquement de l'eau
rcemment porte bullition, si possible purge avec de
l'azote.
3.9 Solution d'amidon, concentration massique
=1g/l00ml. Mlanger 0,5 g d'amidon dans une petite
quantit d'eau froide. Ajouter ensuite ce mlange 50 ml
d'eau bouillante tout en remuant, laisser bouillir quelques
secondes, puis laisser immdiatement refroidir.
Une nouvelle solution doit tre prpare chaque jour.
Il est recommand d'utiliser de l'amidon de pomme de
terre pour la iodomtrie, tant donn que cet amidon
permet d'obtenir un bleu plus fonc. Des ractifs
quivalents peuvent tre utiliss.
3.10 Etalon d'iodore de potassium ( KIO3), matriel
de rfrence.
3.11 Acide chlorhydrique, c(HCL) = 4 mol/l.
4 - APPAREILLAGE
4. Appareillage courant de laboratoire et, en particulier,
ce qui suit :
4.1 Erlenmeyer, de 250 ml, col rod et muni d'un
bouchon en verre rod.
2 Moharram 1433 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 64
27 novembre 2011
4.2 Burette, d'une capacit de 10 ml ou 25 ml, gradue
au moins tous les 0,05 ml, dote de prfrence d'un
systme de mise zro automatique.
4.3 Unit de dosage manuel ou automatique, de 20 ml
de capacit, avec une rsolution d'au moins 10 I et une
prcision de 0,15 % ( par exemple une burette piston ).
4.4 Pipettes, de 0,5 ml, Iml, I0ml, (ou pipettes
automatiques ).
4.5 Eprouvettes gradues, de 50 ml et 100 ml .
4.6 Balance analytique ; lecture 0,001 g prs.
4.7 Agitateur magntique, dot d'un barreau aimant
(de 2,5 cm) et d'une plaque chauffante.
4.8 Fiole jauge, de 1000 ml.
4.9 Fiole jauge, de 250 ml.
4.10 Fiole jauge, de 500 ml.
4.11 Four micro-ondes.
Il est possible d'utiliser un four micro-ondes pour
fondre rapidement et facilement les chantillons solides.
L'utilisation d'un four micro-ondes n'entranera pas
d'augmentation de l'indice de peroxyde, s'il est utilis avec
prcaution et de manire approprie. Les conditions
adaptes doivent tre vrifies par des essais pralables.
5 - ECHANTILLONAGE
Il convient qu'un chantillon reprsentatif ait t envoy
au laboratoire. Il convient qu'il n'ait t ni endommag ni
modifi lors du transport ou de l'entreposage.
6 - PREPARATION DE L'ECHANTILLON POUR
ESSAI
La prise d'essai destine la dtermination de l'indice
de peroxyde doit tre prleve en priorit et l'indice de
peroxyde doit tre dtermin immdiatement.
Homogniser l'chantillon, de prfrence sans
chauffage et l'abri de l'air. Eviter tout rayonnement
solaire direct. Chauffer avec prcaution les chantillons
solides 10 C au dessus de leur point de fusion. Les
chantillons ayant des impurets visibles doivent tre
filtrs.
Pour certains produits, la quantit extraite de corps gras
ou d'huile peut tre infrieure 5 g ou l'indice de
peroxyde du corps gras suprieur 30 mq d'oxygne
actif par kilogramme. Dans ces cas- l, il convient que
l'utilisateur choisisse une prise d'essai plus faible.
06
29
7 - MODE OPERATOIRE
7.1 Gnralits
Suivre toutes les tapes la lumire du jour diffuse ou
la lumire artificielle. Eviter toute exposition directe aux
rayons du soleil. Veiller ce que tous les rcipients soient
exempts de composs oxydants ou rducteurs.
Conserver les solutions talons de thiosulfate de sodium
dans des flacons en verre ambr.
7.2 Prparation et dtermination du titre de la
solution talon de thiosulfate de sodium 0,01N
7.2.1 Prparation de la solution talon de thiosulfate
de sodium 0,01 N
A l'aide d'une pipette ( 4.4) transvaser 100 ml de la
solution talon de thiosulfate de sodium 0,1 N( 3.7 ) dans
une fiole jauge de 1000 ml ( 4.8 ) . Complter au trait de
jauge avec de l'eau rcemment porte bullition ( 3.1 )
Aprs homognisation, transvaser la solution talon de
thiosulfate de sodium 0,01N obtenue dans un flacon en
verre ambr.
Chaque jour, prparer frachement la solution talon de
thiosulfate de sodium 0,01 N partir de la solution de
ltalon de thiosulfate de sodium 0,1 N prpare
prcdemment, ou bien dterminer le titre. L'exprience
montre que la stabilit est limite et dpend de la valeur
du PH et de la teneur en dioxyde de carbone libre. Utiliser
uniquement de l'eau rcemment porte bullition, si
possible purge avec de l'azote.
7.2.2 Dtermination du titre de la solution talon de
thiosulfate de sodium 0,01 N (dtermination du
facteur)
Peser, 0,001 mg prs, 0,27 g 0,33 g d'iodate de
potassium (KIO3) dans une fiole jauge (250 ml ou 500
ml ) ( 4.9 ou 4.10 ) , puis remplir au trait de jauge de l'eau
(3.1) rcemment porte bullition, puis refroidie
temprature ambiante.
A l'aide d'une pipette (4.4) transfrer 5 ml ou 10 ml de
cette solution d'iodate de potassium dans un erlenmeyer
de 250 ml (4.1). Ajouter 60 ml d'eau rcemment porte
bullition, 5ml d'HCL 4mol/1 (3.11) et 25 mg 50 mg
d'iodure de potassium (3.5 ) ou 0,5 ml de la solution
sature de potassium (3.6).
Titrer cette solution en utilisant la mtbode
iodomtrique (visuelle) afin de dterminer le facteur de la
solution talon de thiosulfate de sodium 0,01 N (7.2.1) .
Calculer la concentration exacte, C stand, de la solution
talon de thiosulfate de sodium 0,01 N l'aide de
l'quation suivante :
mKIO3 x V1 x 6 x 1000 x Pkio3
C stand =
mKIO3 x V2 x V3 x Cthio x 100
 2 Moharram 1433
30 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 64 27 novembre 2011

O : 8. CALCUL ET EXPRESSION DES RESULTATS

mKIO3 : est la masse d'iodate de potassium, en grammes ; L'ndice de peroxyde (IP) en mq d'oxygne actif par
6 : est la masse quivalente du titre (1 mol KIO3 = 3 kilogramme est calcul l'aide de l'equation suivante :
mol2,) ;
V1 : est le volume de la solution d'iodate de potassium (V - Vo) X Cthio X Cstand x l000
utilis pour la dtermination du titre ( 5 ml ou 10 ml ) ; IP =
V2 : est le volume total de la solution d'iodate de m
potassium, en millilitres ( 250 ml ou 500 ml ) ; O:
V3 : est le volume de la solution talon de thiosulfate de V : est le volume de la solution talon de thiosulfate de
sodium 0,01 N utilis pour la dtermination en millilitres ; sodium 0,01N utilis pour la dtermination, en millilitres ;
P K03 : est la concentration massique de l'iodate de Vo : est le volume de la solution talon de thiosulfate de
potassium, en grammes pour 100 g ; sodium 0,01N utilis pour l'essai blanc, en millilitres;
MK103 est la masse molculaire de l'iodate de C stand : est la concentration exacte de la solution
potassium (214 g/mol) ; talon de thiosulfate de sodium 0,01 N, dtermine selon
Cthio : Est la concentration de la solution talon de 7.2, en moles par litre.
thiosulfate de sodium 0,01N, en moles par litre (= 0,01 ).
Cthio : est la concentration approximative de la solution
7.3 Dtermination de l'indice de peroxyde
talon de thiosulfate de sodium 0,01 N , en moles par litre
7.3.1 Purger l'erlenmeyer (4.1) pralablement nettoye ( = 0,01 ) ;
avec soin sous courant d'azote ou de dioxyde de carbone.
y Peser 1 mg prs : m : est la masse de la prise d'essai, en grammes.
a) Une prise d'essai de 5,0 0,1 g pour des indices de Le rsultat de la dtermination doit tre indiqu une
peroxyde attendus entre 1 et 30 ; ou dcimale prs.
b) Une prise d'essai de 10,0 0,1 g pour des indices de
peroxyde attendus entre 0 et 1.
Avant utilisation, rincer l'erlenmeyer avec la solution
d'acide actique glacial/iso- octane ( 3.4 ) pour qu'il ne
contienne plus aucune substance oxydante ou rductrice.
7.3.2 Dissoudre la prise d'essai dans 50 ml de la
solution d'acide actique glacial iso - octane en remuant
doucement.
Pour les matires grasses de points de fusion levs
(graisses solides et animales), ajouter avec soin 20 ml
d'iso - octane (3.3) la graisse fondue en remuant
doucement, puis ajouter immdiatement 30 ml d'acide
actique glacial ( 3.2 ) .Chauffer galement l'chantillon
aprs dilution si ncessaire.
7.3.3 Ajouter 0,5 ml de la solution sature d'iodure de
potassium ( 3.6 ), boucher l'erlenmeyer puis mlanger
l'aide d'un agitateur magntique ( 4.7 ) en vitant qu'un
tourbillon trop important ne se forme, ou bien
manuellement sans entre d'air, pendant exactement 60 s
(utiliser un chronomtre prcis 1 s ) .
7.3.4 Ouvrir la fiole conique, ajouter immdiatement
100 ml d'eau dminralise, rincer le bouchon en verre
rod et agiter.
7.3.5 Titrer immdiatement l'iode libr avec la solution
talon de thiosulfate de sodium 0,01 N (3.8 ) pour passer
de couleur jaune orange jaune ple, ajouter alors 0,5 ml
de la solution d'amidon ( 3.9 ) ; poursuivre le titrage pour
passer du violet l'incolore. Arrter le titrage ds que la
solution est incolore pendant 30 s.
Note 1: La phase titre est la phase infrieure. Avec la
solution talon de thiosulfate de sodium 0,01 N (3.8 ), il
est ncessaire d'attendre 15 s 30 s de voir la couleur
changer.
Note 2 : Pour les indices de peroxyde infrieurs 1, la
solution d'amidon peut tre ajoute au dbut du titrage.
7.3.6 Dans un essai blanc parallle, un volume de
solution de thiosolfate 0,01 N infrieur ou gal 0,1 ml
doit tre utilis. Si l'essai blanc ncessite un volume
suprieur, remplacer la solution sature d'iodure de
potassium car elle pourrait ne pas convenir.

07
21 Moharram 1434
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 65
5 dcembre 2012
ARRETES, DECISIONS ET AVIS
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 25 Rajab 1432 correspondant au 27 juin
2011 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur en eau et en matires
volatiles des corps gras dorigine animale et
vgtale.
Le ministre du commerce ;
Vu le dcret prsidentiel n10-149 du 14 Joumada
Ethania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
la rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n02- 453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05 - 465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
lvaluation de la conformit ;
Vu larrt interministriel du 21 Chabane 1419
correspondant au 10 dcembre 1998 relatif aux
spcifications techniques des beurres et aux modalits de
leur mise la consommation ;
Vu larrt interministriel du 2 Dhou El Hidja 1422
correspondant au 14 fvrier 2002 fixant la liste des
additifs autoriss dans les denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur en eau et en matires volatiles
des corps gras dorigine animale et vgtale.
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en eau et
en matires volatiles des corps gras dorigine animale et
vgtale, les laboratoires du contrle de la qualit et de la
rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet effet
doivent employer la mthode jointe en annexe du prsent
arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 25 Rajab 1432 correspondant au 27 juin
2011.
Mustapha BENBADA.
13
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION
DE LA TENEUR EN EAU ET EN MATIERES
VOLATILES DES CORPS GRAS D'ORIGINE
ANIMALE ET VEGETALE
1- METHODE DE DETERMINATION
Deux mthodes de dtermination, par schage, de la
teneur en eau et en matires volatiles des corps gras
d'origine animale et vgtale sont dcrites ci-aprs :
Mthode A, utilisant un bain de sable ou une plaque
chauffante.
Mthode B, utilisant une tuve de schage.
La mthode A est applicable tous les corps gras.
La mthode B est applicable seulement aux corps gras
non siccatifs et ayant un indice d'acide infrieur 4. En
aucun cas, les huiles lauriques ne doivent tre analyses
selon cette mthode.
2- DEFINITION
Teneur en eau et en matires volatiles : perte de masse
subie par le produit aprs chauffage 103C 2C, dans
les conditions de la prsente mthode et exprime en
pourcentage en masse.
3- PRINCIPE
Chauffage d'une prise d'essai 103C 2C jusqu'
l'limination complte de l'eau et des matires volatiles et
dtermination de la perte de masse.
4- METHODE A
4.1 Appareillage
Matriel courant de laboratoire, et notamment :
4.1.1 Balance analytique
4.1.2 Capsule en porcelaine ou en verre, fond plat,
80 90 mm de diamtre et d'environ 30 mm de
profondeur.
4.1.3 Thermomtre, gradu d'environ 100 mm de
longueur et muni de rservoir mercure renforc et d'une
chambre de pression la partie suprieure.
4.1.4 Bain de sable ou plaque chauffante.
4.1.5 Dessiccateur, garni d'un agent dshydratant.
4.2 Mode opratoire
4.2.1 Prparation de l'chantillon pour essai
Prparer l'chantillon pour essai conformment la
mthode officielle.
08
14
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 65
4.2.2 Prise d'essai
Peser, 0.001 g prs, environ 20 g de l'chantillon
(4.2.1) dans la capsule (4.1.2) pralablement sche, pese
avec le thermomtre.
4.2.3 Dtermination
Chauffer la capsule contenant la prise d'essai (4.2.2) sur
le bain de sable ou sur la plaque chauffante (4.1.4).
suivant la temprature du produit d'environ 10C/min
jusque vers 90C et en agitant constamment avec le
thermomtre.
Rduire la vitesse d'lvation de la temprature en
observant la vitesse de dgagement des bulles de vapeur
qui se dtachent du fond de la capsule, et laisser la
temprature monter jusqu' 103C 2C. Ne pas dpasser
105C. Poursuivre l'agitation en raclant le fond de la
capsule jusqu'au moment o tout dgagement de bulles
cesse.
Pour s'assurer que toute l'eau sest vapore, rpter
plusieurs fois le chauffage 103C 2C, en refroidissant
95C entre les priodes de chauffage.
Laisser ensuite refroidir la capsule avec le thermomtre
dans le dessiccateur (4.1.5) jusqu' la temprature
ambiante et peser 0,001g prs. Rpter ces oprations
jusqu ce que la diffrence entre les rsultats de deux
peses successives ne dpasse pas 2 mg.
4.2.4 NOMBRE DE DETERMINATIONS
Effectuer deux dterminations sur des prises d'essai
provenant du mme chantillon pour essai (4.2.1)
5. METHODE B
5.1 Appareillage
Matriel courant de laboratoire.
5.1.1 Balance analytique.
5.1.2 Vase en verre, fond plat, denviron 50 mm de
diamtre et d'environ 30 mm de hauteur.
5.1.3 Etuve chauffage lectrique, rglable
103 C 2C.
5.1.4 Dessiccateur, garni d'un agent dshydratant
efficace.
5.2 Mode opratoire
5.2.1 Prparation de l'chantillon pour essai
Prparer l'chantillon pour essai conformment la
mthode officielle.
5.2.2 Prise d'essai
Peser, 0.001g prs, environ 5 ou 10g de l'chantillon
pour essai (5.2.1), selon la teneur prsume en eau et en
matires volatiles, dans le vase (5.1.2) pralablement
sch et tar.
09
21 Moharram 1434
5 dcembre 2012
5.2.3 Dtermination
Maintenir le vase contenant la prise d'essai (5.2.2)
durant 1h dans l'tuve (5.1.3) rgle 103C.
Laisser refroidir dans le dessiccateur (5.1.4) jusqu' la
temprature ambiante et peser 0.001g prs.
Rpter les oprations de chauffage, de refroidissement
et de pese, mais avec des sjours successifs dans l'tuve
de 30 min chacun, jusqu' ce que la perte de masse entre
deux peses successives ne dpasse pas 2 ou 4 mg, selon
la masse de la prise d'essai.
NOTE :
Une augmentation de la masse de la prise d'essai aprs
un chauffage rpt indique qu'une auto-oxydation du
corps gras a eu lieu. Dans ce cas, prendre pour le calcul du
rsultat la masse minimale trouve ou utiliser de
prfrence la mthode A.
5.2.4 Nombre de dterminations
Effectuer deux dterminations sur les prises d'essai
provenant du mme chantillon pour essai (5.2.1).
6. EXPRESSION DES RESULTATS
La teneur en eau et en matires volatiles, exprime en
pourcentage en masse, est gale :
m1 - m2
x 100
m1 - m0
O :
m0 : est la masse, en grammes, de la capsule (4.1.2) et
du thermomtre (4.1.3) ou du vase en verre (5.1.2).
m1 : est la masse en grammes, de la capsule, du
thermomtre et de la prise d'essai (4.2.2), ou du vase de la
prise d'essai (5.2.2), avant chauffage.
m2 est la masse en grammes, de la capsule du
thermomtre et du rsidu (4.2.3), ou du vase et du rsidu
(5.2.3), aprs chauffage.
Remarque
Dans le cas de la mthode B, remplacer la capsule
( 4.1.2 ) par le vase en verre ( 5.1.2 ).
Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des
deux dterminations si la condition de rptabilit (7) est
remplie.
Donner les rsultats avec deux dcimales.
7. REPETABILITE
La diffrence entre les rsultats de deux
dterminations, effectues simultanment ou rapidement
l'une aprs l'autre par le mme analyste, ne doit pas
dpasser 0,05 g d'eau et de matires volatiles pour 100 g
d'chantillon.
21 Moharram 1434
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 65
5 dcembre 2012
Arrt du 25 Rajab 1432 correspondant au 27 juin
2011 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur en impurets
insolubles dans les corps gras dorigine animale
et vgtale.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 10-149 du 14 Joumada
Ethania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
la rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02- 453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou El Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
lvaluation de la conformit ;
Vu larrt interministriel du 21 Chabane 1419
correspondant au 10 dcembre 1998 relatif aux
spcifications techniques des beurres et aux modalits de
leur mise la consommation ;
Vu larrt interministriel du 2 Dhou El Hidja 1422
correspondant au 14 fvrier 2002 fixant la liste des
additifs autoriss dans les denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur en impurets insalubres dans
les corps gras dorigine animale et vgtale.
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en
impurets insolubles dans les corps gras dorigine animale
et vgtale, les laboratoires du contrle de la qualit et de
la rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet
effet doivent employer la mthode jointe en annexe du
prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 25 Rajab 1432 correspondant au 27 juin
2011.
Mustapha BENBADA.
15
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION
DE LA TENEUR EN IMPURETES INSOLUBLES
DANS LES CORPS GRAS DORIGINE VEGETALE
ET ANIMALE
1. DEFINITION :
Teneur en impurets insolubles.
Quantit de poussires et autres matires trangres
insolubles dans le n-hexane ou lther de ptrole, dans les
conditions spcifies dans la prsente mthode.
La teneur est exprime en pourcentage en masse.
Ces impurets comprennent des impurets mcaniques,
des matires minrales, des hydrates de carbone, des
matires azotes, diverses rsines, des savons de calcium,
des acides gras oxyds, des lactones dacides gras et
(en partie) des savons alcalins, des hydroxy-acides gras et
leurs glycrides.
2. PRINCIPE :
Traitement dune prise dessai par un excs de n-hexane
ou dther de ptrole puis filtration de la solution obtenue.
Lavage du filtre et du rsidu avec le mme solvant.
Schage 103C 2C puis peser.
3. REACTIFS :
Utiliser uniquement des ractifs de qualit analytique
reconnue.
3.1 n. hexane ou dfaut, ther de ptrole ayant un
intervalle de distillation compris entre 30C et 60C et
ayant un indice de brome infrieur 1.
Le rsidu lvaporation complte ne doit pas tre,
pour les deux solvants, suprieur 0,002 g pour 100 ml.
3.2 kieselguhr, purifi, calcin, de perte de masse de
0,2 %, aprs chauffage 900C (chauff au rouge).
4. APPAREILLAGE :
Matriel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui
suit :
4.1 Balance analytique , prcise 0,001g prs.
4.2 Etuve chauffage lectrique, rglable
103 C 2C.
4.3 Fiole conique, 250 ml de capacit avec bouchon en
verre rod.
4.4 Dessiccateur, garni dun agent dshydratant
efficace.
4.5 Papier-filtre sans cendres (teneur maximale en
cendres de 0,01 %, en masse), indice de rtention de 98%,
en masse, pour particules de dimensions suprieures
2,5 m1, ou filtre en fibre de verre quivalent, de 120 mm
de diamtre, ainsi quun vase en mtal (aluminium de
prfrence) ou en verre muni dun couvercle bien adapt.
(variante 4.6, pour tous les produits, sauf les huiles
acides).
10
16
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 65
4.6 Creuset filtrant, en verre, de qualit P16
(ouverture de pores de 10m 16m), dun diamtre de
40 mm et de 50 ml de capacit, et fiole filtrer. (Variante
4.5 incluant les corps acides).
4.7 Etuve, chauffage lectrique, pouvant fonctionner
103 C 2 C.
5. ECHANTILLONNAGE :
Il est important que le laboratoire reoive un chantillon
rellement reprsentatif, non endommag ou modifi lors
du transport et de lentreposage.
6. PREPARATION DE LECHANTILLON POUR
ESSAI :
Prparer lchantillon pour essai conformment la
mthode de prparation de lchantillon.
7. MODE OPERATOIRE :
7.1 Prise dessai :
Peser, 0,01g prs, environ 20 g de lchantillon pour
essai dans la fiole conique (4.3).
7.2 Dtermination :
7.2.1 Scher soit le papier-filtre, le vase et son
couvercle, soit le creuset filtrant (4.6) dans ltuve (4.2)
rgle 103C. Laisser refroidir dans le dessiccateur (4.4)
et peser 0,001g prs.
7.2.2 Ajouter 200 ml de n-hexane ou ther de ptrole
(3.1) dans la fiole contenant la prise dessai (7.1), boucher
la fiole et agiter.
Pour lhuile de ricin, la quantit de solvant peut tre
augmente afin de faciliter lopration et il peut tre
ncessaire dutiliser une fiole de plus grande capacit.
Laisser reposer une temprature voisine de 20C
durant environ 30 min.
7.2.3 Filtrer sur le papier-filtre plac dans un entonnoir
appropri, ou sur le creuset filtrant en utilisant, si
ncessaire, une lgre aspiration.
Laver le papier-filtre ou le creuset filtrant en versant de
petites portions du mme solvant quen (7.2.2) mais avec
la quantit strictement ncessaire pour que le dernier
filtrat soit exempt de matires grasses. Chauffer le solvant,
si ncessaire, jusqu' une temprature maximale de 60C
afin de dissoudre toutes les matires grasses solidifies sur
le filtre.
7.2.4 Si on sest servi dun papier-filtre, le retirer de
lentonnoir, le disposer dans le vase, laisser svaporer
lair la majeure partie du solvant restant sur le filtre et
terminer lvaporation dans ltuve rgle 103C.
Retirer de ltuve, fermer le vase avec son couvercle :
laisser refroidir dans le dessiccateur (4.4) et peser
0,001g prs.
7.2.5 Si on sest servi dun creuset filtrant, laisser
svaporer lair la majeure partie du solvant restant sur
le creuset et terminer lopration dans ltuve rgle
103C. Retirer de ltuve, laisser refroidir dans le
dessiccateur (6.4) et peser 0,001 g prs.
21 Moharram 1434
5 dcembre 2012
7.2.6 Si on dsire dterminer la teneur en impurets
organiques, il est ncessaire dutiliser un papier-filtre sans
cendres, pralablement sch et pes. Dans ce cas, le
papier-filtre contenant les impurets insolubles devra tre
incinr et la masse de cendres obtenues devra tre
soustraite de la masse des impurets insolubles.
La teneur en impurets organiques, exprime en
pourcentage en masse, devra tre alors calcule en
multipliant cette diffrence de masse par 100/m0, o m0
est la masse, en grammes, de la prise dessai.
7.2.7 Si on analyse des huiles acides, garnir le creuset
filtrant avec du Kieselguhr (3.2) comme suit. Dans un
Bcher en verre de 100ml, prparer un mlange avec 2 g
de Kieselguhr et environ 30 ml dther de ptrole (3.1).
Verser le mlange dans un creuset filtrant, sous pression
rduite, afin dobtenir une couche de Kieselguhr sur le
filtre en verre.
Scher le creuset filtrant en verre ainsi prpar dans
ltuve (4.2) rgle 103C, pendant 1 h. Laisser refroidir
dans le dessiccateur (4.4) et peser 0,001g prs.
8. EXPRESSION DES RESULTATS :
La teneur en impurets insolubles, exprime en
pourcentage en masse, est gale :
m2 m1
W = x 100
m0
O
m0 est la masse, en grammes, de la prise dessai (7.1)
m1 est la masse, en grammes, du vase et de son
couvercle et du papier-filtre ou du creuset filtrant (7. 1).
m2 est la masse, en grammes, du vase et de son
couvercle et du papier-filtre contenant le rsidu sec (7.2.1)
ou du creuset filtrant et du rsidu sec (7.2.5).
Donner les rsultats avec deux dcimales.
9. REPETABILITE :
La diffrence absolue entre deux rsultats dessais
individuels indpendants, obtenus laide de la mme
mthode sur un matriau identique soumis lessai dans
le mme appareillage dans un court intervalle de temps,
nexcdera que dans 5% des cas au plus une valeur de
0,01g dimpurets par 100g dchantillon ne contenant pas
plus de 0,10% (en masse) dimpurets insolubles.
10. REPRODUCTIBILITE :
La diffrence absolue entre deux rsultats dessais
individuels, obtenus laide de la mme mthode sur un
matriau identique soumis lessai dans des laboratoires
diffrents par des oprateurs diffrents utilisant des
appareillages diffrents, nexcdera que, dans 5% des cas
au plus, une valeur de 0,06g dimpurets par 100g
dchantillon ne contenant pas plus de 0,10 % (en masse)
dimpurets insolubles.
11
21 Moharram 1434
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 65
5 dcembre 2012
Arrt du 25 Rajab 1432 correspondant au 27 juin
2011 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de lindice de rfraction des corps
gras dorigine animale et vgtale.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 10-149 du 14 Joumada
Ethania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
lvaluation de la conformit ;
Vu larrt interministriel du 21 Chabane 1419
correspondant au 10 dcembre 1998 relatif aux
spcifications techniques des beurres et aux modalits de
leur mise la consommation ;
Vu larrt interministriel du 2 Dhou El Hidja 1422
correspondant au 14 fvrier 2002 fixant la liste des
additifs autoriss dans les denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire la mthode de
dtermination de lindice de rfraction des corps gras
dorigine animale et vgtale.
Art. 2. Pour la dtermination de lindice de rfraction
des corps gras dorigine animale et vgtale, les
laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet
doivent employer la mthode jointe en annexe du prsent
arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 25 Rajab 1432 correspondant au 27 juin
2011.
Mustapha BENBADA.
17
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION DE LINDICE
DE REFRACTION DES CORPS GRAS D'ORIGINE
ANIMALE ET VEGETALE
1. DEFINITION :
Lindice de rfraction d'une substance est le rapport de
la vitesse de la lumire une longueur d'onde dfinie dans
le vide sa vitesse dans la substance.
En pratique, la vitesse de la lumire dans l'air est
utilise la place de celle dans le vide et la longueur
d'onde choisie est, sauf indication contraire, celle de la
moyenne des raies D du sodium (589.6 nm).
L'indice de rfraction d'une substance donne varie avec
la longueur d'onde de la lumire incidente et avec la
temprature.
La notation est ntD o t est la temprature en degrs
celsius.
2. PRINCIPE :
Mesurage l'aide d'un rfractomtre convenable de
l'indice de rfraction de l'chantillon liquide une
temprature constante.
3. REACTIFS :
3.1 -Bromonaphtalne, ou laurate d'thyle, de qualit
pour rfractomtre et d'indice de rfraction connu. CH3
(CH2)4 20C (ND 1,4119).
3.2 Trichlorthylne, ou autres solvants tels que hexane,
ther de ptrole actone, tolune, pour le nettoyage du
prisme du rfractomtre.
4. APPAREILLAGE :
Matriel courant de laboratoire, et notamment :
4.1 Rfractomtre, par exemple type ABBE,
susceptible de dterminer l'indice de rfraction 0.0001
prs entre nD =1,3000 et nD = 1,7000.
Ce rfractomtre doit tre ajust de faon donner, la
temprature de 20C pour l'eau distille, un indice de
1,3330.
4.2 Source de lumire : Lampe vapeur de sodium.
La lumire blanche peut tre utilise si le rfractomtre
est quip d'un systme de compensation achromatique.
La lame de verre, d'indice de rfraction connu.
4.3 Bain d'eau, rglable la temprature laquelle les
mesures sont effectuer (cas des chantillons solides).
5. ECHANTILLONNAGE :
Lchantillonnage se fait dans des conditions
appropries.
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18
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 65
6. MODE OPERATOIRE :
6.1 Prparation de l'chantillon pour essai :
Prparer l'chantillon pour essai conformment la
mthode officielle.
L'indice de rfraction doit tre dtermin sur le corps
gras parfaitement anhydre et filtr.
Dans le cas d'un chantillon solide, transfrer
l'chantillon prpar dans un rcipient convenable et le
placer dans le bain d'eau (4.5), rgl la temprature
laquelle les mesurages sont effectuer. Laisser un temps
suffisant pour que la temprature de l'chantillon se
stabilise.
6.2 Rglage de l'appareil :
Vrifier le rglage du rfractomtre (4.1) en mesurant
l'indice de rfraction de la lame de verre (4.3) selon les
instructions du fabricant ou en mesurant l'indice de
rfraction de l-bromonaphtalne ou du laurate d'thyle
(3.1).
6.3 Dtermination :
Mesurer l'indice de rfraction de l'chantillon aux
tempratures suivantes :
a) 20C pour les corps gras compltement liquides
cette temprature ;
b) 40C pour les corps gras compltement fondus
cette temprature;
c) 50C pour les corps gras compltement fondus cette
temprature mais pas 40C ;
d) 60C pour les corps gras compltement fondus
cette temprature mais pas 50C ;
e) 80C ou plus pour les autres corps gras totalement
hydrogns ou des cires.
Maintenir la temprature du prisme du rfractomtre
la valeur constante ncessaire au moyen d'une circulation
d'eau assure par le bain d'eau (4.4) rgl 0,1C prs.
Contrler la temprature de l'eau sortant du
rfractomtre en utilisant un thermomtre de prcision
convenable. Immdiatement avant le mesurage, abaisser la
partie mobile du prisme en position horizontale. Essuyer
la surface du prisme d'abord avec un chiffon doux, ensuite
avec un tampon d'ouate mouill par quelques gouttes de
solvant (3.2).
Effectuer les mesurages conformment aux instructions
opratoires de l'appareil utilis.
Lire l'indice de rfraction 0,0001 prs en valeur
absolue et noter la temprature du prisme de l'appareil.
13
21 Moharram 1434
5 dcembre 2012
Immdiatement aprs le mesurage, essuyer la surface
du prisme avec un chiffon doux, puis avec un tampon
d'ouate mouill aprs quelques gouttes de solvant (3.2).
Mesurer deux autres fois l'indice de rfraction et
calculer la moyenne arithmtique des trois mesurages.
6.4 Nombre de dterminations :
Effectuer deux dterminations sur des prises d'essai
provenant du mme chantillon pour essai.
7. EXPRESSION DES RESULTATS :
7.1 Mode de calcul et formules :
Si la diffrence entre la temprature de mesurage t1 et
la temprature de rfrence t est infrieure 3C, l'indice
de rfraction nDt la temprature de rfrence t est donn
par la formule :
a) Si t1 > t
nDt = nD t1 + ( t1 - t ) F
b) Si t1 < t
nDt = nDt1 + ( t - t1 ) F
o :
t1 : est la temprature de mesurage ;
t : est la temprature de rfrence ;
F : est le facteur de correction, fonction de la
temprature, gale :
0,00035 pour t = 20C, pour les huiles ;
0,00036 pour t = 40C, t = 50C, t = 60C pour les
graisses concrtes et les mlanges d'acides gras ;
0,00037 pour t = 80C ou plus, pour les cires.
Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des
valeurs obtenues pour les deux dterminations (5.4) si la
condition de rptabilit (6.2) est remplie.
Noter le rsultat arrondi la quatrime dcimale.
Note
Dans l'expression des rsultats, il faut tenir compte du
fait que la prsence d'acides gras libres abaisse fortement
l'indice de rfraction.
Si l'indice d'acide est 2, ajouter 0,000045 par unit
d'indice d'acide.
7.2 Rptabilit :
La diffrence entre les valeurs obtenues pour les deux
dterminations (5.4) effectues rapidement l'une aprs
l'autre par le mme analyste, ne doit pas dpasser 0,0002
unit d'indice de rfraction. Sinon, rpter les
dterminations.
14 25 Moharram 1434
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 66 9 dcembre 2012

MINISTERE DU COMMERCE

Arrt du 3 Ramadhan 1432 correspondant au

3 aot 2011 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur en chlorure de sodium
dans les corps gras dorigine animale et vgtale.

Le ministre du commerce,

Vu le dcret prsidentiel n 10-149 du 14 Joumada

Ethania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant
nomination des membres du Gouvernement ;

Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,

modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
la rpression des fraudes ;

Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423

correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;

Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou El Kaada

1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
lvaluation de la conformit ;

Vu larrt interministriel du 21 Chabane 1419

correspondant au 10 dcembre 1998 relatif aux
spcifications techniques des beurres et aux modalits de
leur mise la consommation ;

Vu larrt interministriel du 2 Dhou El Hidja 1422

correspondant au 14 fvrier 2002 fixant la liste des
additifs autoriss dans les denres alimentaires ;

Arrte :

Article 1er. En application des dispositions de

larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur en chlorure de sodium dans les
corps gras dorigine animale et vgtale.

Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en chlorure

de sodium dans les corps gras dorigine animale et
vgtale, les laboratoires de contrle de la qualit et de la
rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet effet
doivent employer la mthode jointe en annexe du prsent
arrt.

Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire

lorsquune expertise est ordonne.

Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal

officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.

Fait Alger, le 3 Ramadhan 1432 correspondant

au 3 aot 2011.
Mustapha BENBADA.

14
25 Moharram 1434
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 66
9 dcembre 2012
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION
DE LA TENEUR EN CHLORURE DE SODIUM
DANS LES CORPS GRAS D'ORIGINE ANIMALE
ET VEGETALE
1. OBJET ET DOMAINE D'APPLICATION
La prsente mthode de dtermination de la teneur en
chlorure de sodium est applicable toutes les margarines.
2. PRINCIPE
Aprs avoir fait fondre la margarine par ladjonction
deau bouillante, on titre les chlorures du mlange avec
une solution titre de nitrate dargent, en prsence de
chromate de potassium comme indicateur, selon la
mthode de Mohr.
3. REACTIFS
Les ractifs utiliss doivent tre de qualit analytique
reconnue.
3.1 Solution titre de nitrate dargent, 0,l N.
3.2 Solution de chromate de potassium 5 % (m /v)
dans leau distille.
4. APPAREILLAGE
4.1 Balance analytique
4.2 Erlenmeyers, dune capacit de 250 ml.
4.3 Burette, gradue en dixime de millilitre (1/10).
5. MODE OPERATOIRE
5. 1 Prparation de lchantillon
Ramollir lchantillon dans un rcipient clos en le
chauffant sur un bain-marie une temprature aussi faible
que possible pour ne pas rompre lmulsion.
Agiter frquemment le rcipient contenant lchantillon
durant le processus de ramollissement afin de mlanger
avec soin lchantillon.
Retirer le rcipient du bain-marie et agiter
nergiquement intervalles frquents jusqu ce que
lchantillon soit refroidi et ait pris la consistance dune
crme paisse. On peut se servir dun agitateur
mcanique.
5.2 Essai blanc
Faire un essai blanc en employant les mmes ractifs
dans les mmes proportions et en suivant le mme mode
opratoire que celui dcrit l'alina (5.3), lexclusion
de lchantillon.
15
5.3 Dosage
Peser 0,01g prs approximativement 5g de
lchantillon dans lerlenmeyer. Ajouter avec prcaution
100 ml deau distille bouillante. Laisser reposer 5 10
minutes, en agitant de temps autre, jusqu' ce que le
mlange atteigne 50 55 C (temprature de dosage).
Ajouter 2 ml de la solution de chromate de potassium
(3.2). Mlanger en agitant. Tout en continuant dagiter,
titrer avec la solution de nitrate dargent (3.1) jusqu' ce
que le virage la couleur rouge brique persiste pendant
trente secondes (30s).
6. EXPRESSION DES RESULTATS
La teneur en chlorure de sodium (exprime en
pourcentage m/m de NaCl) est donne par la formule
suivante:
5,85.(V1 V0).N
m0
O :
V0 est le volume, en millilitres, de la solution de nitrate
dargent utilise pour lessai blanc.
V1 est le volume, en millilitres, de la solution de nitrate
dargent utilise pour la prise dessai.
N est la normalit de la solution de nitrate dargent.
m0 est la masse, en grammes, de la prise dessai.
Arrondir le rsultat 0,01 % prs.
7. REPETABILITE
La diffrence entre les rsultats de deux dterminations
parallles (rsultats obtenus simultanment ou rapidement
lun aprs lautre par le mme analyste) ne doit pas
excder 0,02 g de chlorure de sodium pour 100 g de
produit.
Arrt du 3 Ramadhan 1432 correspondant au
3 aot 2011 rendant obligatoire la mthode de
dtection rapide de la prsence dun seul
anti-oxygne dans les corps gras d'origine
animale et vgtale.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 10-149 du 14 Joumada
Ethania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
la rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02- 453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
15
16
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 66
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou El Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
lvaluation de la conformit ;
Vu larrt interministriel du 21 Chabane 1419
correspondant au 10 dcembre 1998 relatif aux
spcifications techniques des beurres et aux modalits de
leur mise la consommation ;
Vu larrt interministriel du 2 Dhou El Hidja 1422
correspondant au 14 fvrier 2002 fixant la liste des
additifs autoriss dans les denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire la mthode de dtection
rapide de la prsence dun seul anti-oxygne dans les
corps gras d'origine animale et vgtale.
Art. 2. Pour la dtection rapide de la prsence dun
seul anti-oxygne dans les corps gras d'origine animale et
vgtale, les laboratoires de contrle de la qualit et de la
rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet effet
doivent employer la mthode jointe en annexe du prsent
arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 3 Ramadhan 1432 correspondant
au 3 aot 2011.
Mustapha BENBADA.
BHA.
ANNEXE
METHODE DE DETECTION RAPIDE
DE LA PRESENCE DUN SEUL ANTI-OXYGENE
DANS LES CORPS GRAS D'ORIGINE ANIMALE
ET VEGETALE
1. DEFINITION :
La prsente mthode exprimentale dcrit trois
techniques rapides de dtection de la prsence ou de
l'absence d'un anti-oxygne dans les corps gras d'origine
animale et vgtale.
Ces techniques sont applicables respectivement : au
butylhydroxyanisol (BHA), au butyl-hydroxy-tolune
(BHT), aux gallates, lorsqu'un seul de ces anti-oxygnes
est suppos prsent et connu d'avance.
2. METHODE DE DETECTION DU BHA
2.1 PRINCIPE :
Aprs dissolution ventuelle de la prise d'essai dans
l'hexane, extraction du BHA l'aide d'une solution
thanolique et formation d'un complexe de coloration
bleue avec le dichloro-2,6 p.benzoquinone-4 chloroimide
en prsence de borax.
25 Moharram 1434
9 dcembre 2012
2.2 REACTIFS :
Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique et
l'eau utilise doit tre de l'eau distille ou de leau de
puret au moins quivalente.
2.2.1 n-hexane.
2.2.2 Ethanol, solution 30% (V/V).
2.2.3 Dichloro-2,6 p.benzoquinone-4 chloroimide
2.2.4 Borax (ttraborate de sodium), solution 20 g/l.
2.3 APPAREILLAGE :
Tubes essai.
2.4 MODE OPERATOIRE :
2.4.1 Prise d'essai :
Peser 0,5g prs, dans un tube essai (2.3), 4 g de
l'chantillon de corps gras.
2.4.2 Dtection :
Si la matire grasse est concrte, dissoudre la prise
d'essai l'aide de 10 ml d'hexane (2.2.1). Ajouter 15ml de
la solution thanolique (2.2.2), puis 2 ml de la solution de
borax (2.2.4) et quelques cristaux (environ 0,05 g) de
dichloro-2.6 benzoquinone-4-chloroimide (2.2.3) agiter
en retournant plusieurs fois le tube essai.
La phase aqueuse se colore en bleu au bout de 10 mn
environ en prsence du BHA.
2.5 LIMITE DE DETECTION :
La limite de dtection se situe vers 50 mg/kg (ppm) de
3. METHODE DE DETECTION DU BHT
3.1 PRINCIPE :
Extraction du BHT par l'actonitrile pur. Formation, en
prsence de dianisidine et de nitrite de sodium, d'un
complexe de coloration rose qui est extrait par le
chloroforme.
3.2 REACTIFS :
Les ractifs doivent tre de qualit analytique et l'eau
utilise doit tre de l'eau distille ou de qualit
quivalente.
3.2.1 Chloroforme
3.2.2 Actonitrile
3.2.3 Dianisidine (dimthoxy-3, 3; diamino-4, 4
diphnyle)
Peser environ 200 mg de dianisidine dans une fiole
jauge de 100 ml et les dissoudre dans 40 ml de mthanol.
Complter au trait-repre avec une solution aqueuse
d'acide chlorhydrique N.
Cette solution se conserve quelques jours l'abri de la
lumire.
16
25 Moharram 1434
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 66
9 dcembre 2012
3.2.4 Nitrite de sodium, solution 3g /l
3.2.5 Corps gras non oxyd
3.3 APPAREILLAGE :
3.3.1 Fioles coniques de 50 ml avec bouchons.
3.3.2 Tubes essai
3.3.3 Eprouvette de 10 ml
3.4 MODE OPERATOIRE :
3.4.1 Prise d'essai :
Peser 1g prs, dans une fiole conique de 50 ml (3.3.1),
10g de l'chantillon de corps gras.
3.4.2 Dtection :
Ajouter la prise d'essai, avec une prouvette (3.3.3),
5 ml d'actonitrile (3.2.2). Boucher et agiter
vigoureusement. Laisser dcanter et refroidir.
Verser le surnageant dans un tube essai (3.3.2) et
ajouter successivement 5 ml de la solution de dianisidine
(3.2.3) et 2 ml de la solution de nitrite de sodium (3.2.4),
Agiter. Il apparat une coloration orange dans tous les
cas, mme en labsence d'anti-oxygne. Ajouter alors 2 ml
de chloroforme (3.2.1) et agiter nouveau.
La prsence de BH'I' se traduit par une coloration rose
plus ou moins intense de la phase chloroforme que l'on
devra comparer celle de l'essai blanc (3.4.3).
3.4.3 Essai blanc :
Effectuer un essai blanc dans les mmes conditions
opratoires mais en utilisant comme prise d'essai un corps
gras non oxyd (3.2.5). On observe parfois une trs lgre
coloration, ce qui rend cet essai ncessaire.
3.5 LIMITE DE DETECTION :
La limite de dtection se situe vers 10 mg / kg ( ppm )
de BHT.
4. METHODE DE DETECTION DES GALLATES
4.1 PRINCIPE :
Mise en solution d'une prise d'essai dans l'hexane.
Formation avec les gallates d'un complexe de coloration
rose en prsence d'hydroxyde d'ammonium concentr.
4.2 REACTIFS :
Les ractifs doivent tre de qualit analytique, et l'eau
utilise doit tre de l'eau distille ou de qualit
quivalente.
4.2.1 n-hexane
4.2.2 Hydroxyde d'ammonium concentr
17
17
4.3 APPAREILLAGE :
Fiole conique de 50 ml.
4.4 MODE OPERATOIRE :
4.4.1 Prise d'essai :
Peser, 0,5g prs, dans une fiole conique de 50 ml
(4.3), 5g de l'chantillon de corps gras.
4.4.2 Dtection :
Dissoudre la prise d'essai l'aide de 20 ml d'hexane
(4.2.1). Ajouter 10 ml d'hydroxyde d'ammonium
concentr (4.2.2) et agiter modrment.
La phase ammoniacale se colore en rose en prsence de
gallates. La coloration est d'autant moins intense que la
masse molaire des gallates est plus leve.
4.5 LIMITE DE DETECTION :
La limite de dtection se situe vers 50 mg/kg (ppm) de
gallates.
Arrt du 3 Ramadhan 1432 correspondant au
3 aot 2011 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la densit relative 20C des
corps gras dorigine animale et vgtale.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 10-149 du 14 Joumada
Etania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant
nomination des membres du Gouvernement;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
la rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou El Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
lvaluation de la conformit ;
Vu larrt interministriel du 21 Chabane 1419
correspondant au 10 dcembre 1998 relatif aux
spcifications techniques des beurres et aux modalits de
leur mise la consommation ;
Vu larrt interministriel du 2 Dhou El Hidja 1422
correspondant au 14 fvrier 2002 fixant la liste des
additifs autoriss dans les denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire la mthode de
dtermination de la densit relative 20C des corps gras
dorigine animale et vgtale.
18 25 Moharram 1434
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 66 9 dcembre 2012

Art. 2. Pour la dtermination de la densit relative 3. CALCUL ET EXPRESSION DES RESULTATS

20C des corps gras dorigine animale et vgtale, les
laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression Densit relative t/20C dans l'air
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent
employer la mthode jointe en annexe du prsent arrt. m2
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire m1 [ (1 + + (t 20) ]
lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal o :
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire. m2 : masse en grammes de l'huile ou de la graisse
utilise pour lexamen.
Fait Alger, le 3 Ramadhan 1432 correspondant au
3 aot 2011. m1 : masse en grammes de l'eau utilise dans le test
Mustapha BENBADA. d'talonnage.

t : temprature ambiante.
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION : est le coefficient de dilatation cubique du verre la
DE LA DENSITE RELATIVE A 20C DES CORPS temprature donne. Il est gal :
GRAS DORIGINE ANIMALE ET VEGETALE
0.00003 pour le verre normal.
1. DEFINITION
0.00001 pour le verre au borosilicate.
La densit relative une temprature de 20C d'une
huile ou d'une graisse est le quotient de la masse dans 4. NOTE
l'atmosphre d'un certain volume de cette huile ou une
temprature donne t par la masse du mme volume d'eau Sous rserve que la starine ne se spare absolument
20C, les peses tant faites avec les poids ajusts de pas de l'huile ou de la graisse une temprature proche de
faon quilibrer les poids de laiton dans l'air. 20C et que l'huile ou la graisse ne contiennent aucune
quantit visible d'humidit ou d'impurets, la densit
2. MODE OPERATOIRE relative peut tre dtermine n'importe quelle
temprature situe entre (t 5)C.
Etalonner comme suit, une fiole densit relative ou un
pycnomtre (de 25ml au moins de capacit) : nettoyer et On calcule la densit relative tC partir du chiffre
scher la fiole, puis la peser ; la remplir d'eau distille ainsi obtenu en ajoutant ce chiffre 0.00069 pour
rcemment bouillie et refroidie et la plonger dans un bain chaque degr centigrade dont la temprature observe
d'eau la temprature de 20C jusqu' ce qu'elle atteigne excde 20C ou en soustrayant 0.00069 pour chaque degr
cette temprature. centigrade dont la temprature observe est infrieure
Si l'on utilise une fiole, mettre en place le bouchon de 20C .
telle manire que le tube capillaire soit compltement
rempli d'eau, puis maintenir le tout 20C jusqu' ce qu'il 5. DENSITE RELATIVE DE QUELQUES HUILES
n'y ait plus de variation de volume. Essuyer le bouchon. COMESTIBLES
Si l'on utilise un pycnomtre, ajuster au trait le niveau du
liquide. Densit relative
Retirer la fiole ou le pycnomtre du bain, l'essuyer 20C/eau 20C
extrieurement, laisser reposer quelque temps et peser.
Huile de colza 0.910 - 0.920
Vider et scher la fiole ou le pycnomtre. Le remplir
avec la prise d'essai d'huile ou de graisse prcdemment Huile de tournesol 0.918 - 0.923
amene au voisinage de la temprature de 20C.
Maintenir la fiole ou le pycnomtre dans un bain rgl Huile de carthame 0.922 - 0.927
20C jusqu' ce qu'elle atteigne cette temprature. Si l'on
Huile de soja 0.919 - 0.925
utilise une fiole, mettre en place le bouchon de telle
manire que le tube capillaire soit compltement rempli Huile d'arachide 0.914 - 0.917
d'huile ou de matire grasse, puis maintenir le tout la
temprature de 20C jusqu' ce qu'il n'y ait plus de Huile d'olive 0.910 - 0.916
variation de volume.
(vierge et raffine)
Essuyer le bouchon. Si l'on utilise un pycnomtre,
ajuster au trait le niveau de l'huile ou de la graisse. Huile de mas 0.917 - 0.925
Retirer l'appareil du bain, le scher extrieurement, le Huile de coton 0.918 - 0.926
laisser reposer pendant un peu de temps et le peser. Faire
toutes les peses dans l'air avec des poids ajusts de Huile de ssame 0.915 - 0.925
manire quilibrer les poids de laiton dans l'air.

18
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 68
26
MlNISTERE DU COMMERCE
Arrt du 21 Ramadhan 1432 correspondant au 21
aot 2011 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de l'indice d'acide et d'acidit des
corps gras d'origine animale et vgtale.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 10-149 du 14 Joumada
Etania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu l'arrt interministriel du 21 Chabane 1419
correspondant au 10 dcembre 1998 relatif aux
spcifications techniques des beurres et aux modalits de
leur mise la consommation ;
Vu l'arrt interministriel du 2 Dhou El Hidja 1422
correspondant au 14 fvrier 2002 fixant la liste des
additifs autoriss dans les denres alimentaires ;
19
2 Safar 1434
16 dcembre 2012
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode de dtermination de
l'indice d'acide et d'acidit des corps gras d'origine
animale et vgtale.
Art. 2. Pour la dtermination de l'indice d'acide et
d'acidit des corps gras d'origine animale et vgtale, les
laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent
employer la mthode jointe en annexe du prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 21 Ramadhan 1432 correspondant au 21
aot 2011.
Mustapha BENBADA.
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION DE L'INDICE
D'ACIDE ET D'ACIDITE DES CORPS GRAS
D'0RIGINE ANIMALE ET VEGETALE
1. Domaine d'application
La prsente mthode spcifie deux mthodes
(titrimtrique et potentiomtrique) de dtermination des
acides gras libres dans les corps gras d'origine animale et
vgtale.
Les acides sont exprims, de prfrence, par l'indice
d'acide ou en alternative, par l'acidit calcule
conventionnellement.
La mthode est applicable aux corps gras d'origine
animale et vgtale. Elle n'est pas applicable aux cires.
2. Dfinition
Dans le cadre de la prsente mthode, les dfinitions
suivantes sont applicables :
2.1 Indice d'acide : Nombre de milligrammes
d'hydroxyde de potassium ncessaires pour neutraliser les
acides gras libres prsents dans 1 g de corps gras.
2.2 Acidit : Expression conventionnelle du
pourcentage d'acides gras libres.
Selon la nature du corps gras, l'acidit peut aussi tre
exprime comme indiqu dans le tableau 1.
Si le rsultat indique simplement " acidit " sans autre
prcision, elle est, par convention, exprime en
pourcentage d'acide olique.
Si l'chantillon contient des acides minraux, ceux-ci
sont, par convention, dtermins comme acides gras.
2 Safar 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 68
16 dcembre 2012 27

Tableau 1 La concentration exacte de la solution thanolique

d'hydroxyde de potassium doit tre connue et vrifie
immdiatement avant l'emploi. Utiliser la solution
prpare au moins cinq (5) jours avant l'emploi et
NATURE MASSE dcante dans un flacon en verre brun ferm avec un
DU CORPS GRAS EXPRESSION MOLAIRE bouchon en caoutchouc.
G/MOL.
La solution doit tre incolore ou jaune paille.
Huile de coprah, huile de Acide 200 Note 2
palmiste et huiles laurique
similaires Une solution incolore stable d'hydroxyde de potassium
peut tre prpare de la faon suivante :
Huile de palme Acide 256
palmitique
Porter et maintenir durant 1 h l'bullition reflux
Huiles de certaines Acide 338 1000 ml d'thanol avec 8 g d'hydroxyde de potassium et
crucifres rucique 0,5 g de rognures d'aluminium. Distiller immdiatement.
Dissoudre dans le distillat la quantit requise d'hydroxyde
Tous autres corps gras Acide 282 de potassium.
olique
Laisser reposer durant plusieurs jours et dcanter le
liquide clair surnageant du prcipit de carbonate de
potassium.
3. Mthode titrimtrique
La solution peut aussi tre prpare sans distillation de
3.1 Gnralits la faon suivante :
Cette mthode convient particulirement aux corps gras A 1000 ml d'thanol, ajouter 4 ml de butylate
qui ne sont pas fortement colors. d'aluminium et laisser reposer le mlange durant quelques
jours.
3.2 Principe
Dcanter le liquide surnageant et y dissoudre la quantit
Mise en solution d'une prise d'essai dans un mlange de requise d'hydroxyde de potassium. Cette solution est prte
solvants, puis titrage des acides gras libres prsents l'aide pour l'emploi.
d'une solution thanolique d'hydroxyde de potassium.
3.3.3 Phnolphtaline, solution 10 g/l dans l'thanol
3.3 Ractifs 95 96% (V/V) ou bleu alcalin (dans le cas de corps gras
fortement colors) solution 20 g /l dans l'thanol 95
Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique 96% (V/V).
reconnue et l'eau utilise doit tre de l'eau distille.
3.4 Appareillage
3.3.1 Oxyde dithylique/thanol 95% (V/V) mlange
1 + 1 (V/V). Matriel courant de laboratoire, et notamment :

Avertissement 3.4.1 Balance analytique.

L'oxyde dithylique est trs inflammable et peut former 3.4.2 Fiole conique, de 250 ml de capacit.
des proxydes explosifs. Il doit tre utilis en prenant des
prcautions particulires. 3.4.3 Burette, de 10 ml de capacit, gradue en 0,1 ml.

Neutraliser exactement, au moment de l'emploi, avec la 3.5 Echantillonnage

solution d'hydroxyde de potassium (3.3.2) en prsence de
0,3 ml de la solution de phnolphtaline (3.3.3) pour L'chantillonnage se fait dans des conditions
100 ml de mlange. appropries.

3.6 Mode opratoire

Note 1

S'il n'est pas possible d'utiliser l'oxyde dithylique, un 3.6.1 Prparation de l'chantillon pour essai
mlange de solvants form d'thanol et de tolune peut
tre utilis. Si ncessaire, l'thanol peut tre remplac par Prparer l'chantillon pour essai conformment la
le propanol-2. mthode de prparation de l'chantillon.

3.6.2 Prise d'essai

3.3.2 Hydroxyde de potassium, solution thanolique
titre, c(KOH) = 0,1 mol/l, ou, si ncessaire, Prlever une prise d'essai, selon l'indice d'acide
c(KOH) = 0,5 mol/1. prsum, daprs les indications du tableau 2.

20
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 68 2 Safar 1434
28 16 dcembre 2012

Tableau 2 4.2 Ractifs

Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique

reconnue, et l'eau utilise doit tre de l'eau distille.
INDICE DACIDE MASSE PRECISION
PRESUME DE LA PRISE DE LA PRISE
DESSAI g DESSAI g 4.2.1 Mthylisobutylctone, neutralis au moment de
l'emploi avec la solution isopropanolique d'hydroxyde de
potassium (4.2.2) en prsence de phnophtaline, jusqu'au
<1 20 0.05 virage au rose.

14 10 0.02 4.2.2 Hydroxyde de potassium, solution titre,

c(KOH) = 0,1 mol/l ou 0,5 mol/l.
4 15 2.5 0.01
4.2.2.1 Hydroxyde de potassium, solution titre,
15 75 0.5 0.001 c(KOH) = 0,1 mol/l dans du propanol 2 :

>75 0.1 0.0002 Dissoudre 7 g d'hydroxyde de potassium en pastilles

Peser la prise d'essai dans la fiole conique (3.4.2)
3.6.3 Dtermination
dans du propanol 2 et complter 1000 ml avec du
propanol 2.
4.2.2.2 Hydroxyde de potassium, solution titre
c(KOH) = 0,5 mol/l dans du propanol - 2 :

Dissoudre la prise d'essai (3.6.2) dans 50 150 ml du Dissoudre 35 g d'hydroxyde de potassium en pastilles
mlange oxyde dithylique / thanol (3.3.1) pralablement dans du propanol - 2 et complter 1000 ml avec du
neutralis. propanol 2.

Titrer, en agitant avec la solution d'hydroxyde de 4.2.2.3. Etalonnage

potassium 0,1 mol/l (3.3.2) (voir note 3) jusqu' virage
de l'indicateur (coloration rose de la phnolphtaline
persistant durant au moins 10 secondes).
Note 3
1/ Dans le cas d'indices trs faibles (< 1), il est
prfrable de faire passer un lger courant d'azote dans la
solution d'essai.
2/ La solution thanolique titre d'hydroxyde de
potassium (3.3.2) peut tre remplace par une solution
aqueuse d'hydroxyde de potassium ou de sodium lorsque
le volume d'eau introduit n'entrane pas une sparation de
phases.
Si la quantit ncessaire de solution d'hydroxyde de
potassium 0,1 mol/l dpasse 10 ml, utiliser une solution
0,5 mol/l.
Si la solution devient trouble pendant le titrage,
ajouter une quantit suffisante du mlange de solvants
(3.3.1) pour donner une solution claire.
3.6.4 Nombre de dterminations
Effectuer deux dterminations sur le mme chantillon
pour un essai.
4. Mthode potentiomtrique
La prsente mthode est d'application gnrale, mais
elle est plus particulirement destine aux corps gras bruts
de couleur fonce en raison de la difficult d'application,
dans ce cas, de la mthode titrimtrique .
La concentration exacte de la solution doit tre
dtermine immdiatement avant emploi.
Peser 0,0002 g prs 0,15 g ( pour la solution 4.2.2.1)
ou 0,75g (pour la solution 4.2.2.2) d'acide benzoque de
puret 99,9%, l'introduire dans un bcher (4.3.2) et le
dissoudre dans 50 ml de mthylisobutyctone (4.2.1).
Introduire les lectrodes du pH-mtre (4.3.4),
dclencher l'agitateur (4.3.5) et titrer avec la solution
d'hydroxyde de potassium (4.2.2.1 ou 4.2.2.2) jusqu'au
point d'quivalence (voir note 5 - 1 en 4.5.3)
La concentration de la solution d'hydroxyde de
potassium (4.2.2.1 ou 4.2.2.2) exprime en moles par litre,
est donne par la formule :
1000 x m0
122 ,1 x v0
O
m0 est la masse, en grammes, d'acide benzoque utilis
pour l'talonnage ;
V0 est le volume, en millilitres, de la solution
d'hydroxyde de potassium (4.2.2.1 ou 4.2.2.2) utilis.
4.3 Appareillage
Matriel courant de laboratoire, et notamment :
4.3.1 Balance analytique

4.1 Principe 4.3.2 Bcher de 150 ml de capacit, forme haute.

Titrage potentiomtrique des acides gras libres prsents 4.3.3 Burette de 10 ml de capacit, gradue en 0,1 ml
dans une prise d'essai l'aide d'une solution
isopropanolique d'hydroxyde de potassium en milieu non 4.3.4 pH-mtre, quip d'lectrodes en verre et au
aqueux. calomel.

21
2 Safar 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 68
16 dcembre 2012
Le contact entre la solution sature de chlorure de
potassium et la solution d'essai doit tre effectu travers
une plaque de porcelaine ou de verre fritt d'au moins
3 mm d'paisseur.
Note 4
Il y a intrt conserver durant 12 h avant les titrages
l'lectrode en verre dans l'eau distille, ou mieux, dans la
mthylisobutylctone. La scher trs doucement avec un
papier filtre avant d'effectuer le mesurage. La rincer
immdiatement aprs le dosage avec de la
mthylisobutylctone, puis avec un propanol 2, enfin avec
de l'eau distille.
Si l'lectrode ne fonctionne pas de faon satisfaisante,
essayer de la rgnrer en la conservant durant 24 h dans
une solution isopropanolique d'acide chlorhydrique
1 mol/l. Aprs ce traitement, laver l'lectrode l'eau
distille, puis avec du propanol - 2 et de la
mthylisobutylctone.
L'emploi de plaques de porcelaine ou de verre fritt
paisses pour assurer le contact entre la solution sature
de chlorure de potassium et la solution d'essai vite les
courants de diffusion et les potentiels parasites.
4.3.5 Agitateur, de prfrence agitateur magntique
4.4 Echantillonnage
L'chantillonnage se fait dans des conditions
appropries.
4.5 Mode opratoire
4.5.1 Prparation de l'chantillon pour essai
Prparer l'chantillon pour essai conformment la
mthode de prparation des chantillons.
4.5.2 Prise d'essai
Dans le bcher (4.3.2) peser 0,01 g prs, 5 10 g de
l'chantillon pour essai.
4.5.3 Dtermination
Dissoudre la prise d'essai (4.5.2) dans 50 ml de
mthylisobutylctone (4.2.1).
Introduire les lectrodes du pH-mtre (4.3.4),
dclencher l'agitateur (4.3.5) et titrer avec la solution
d'hydroxyde de potassium (4.2.2.1 ou 4.2.2.2) selon
l'acidit prsume de l'chantillon, jusqu'au point
d'quivalence.
Note 5
1 Le point dquivalence est gnralement voisin de
la valeur 10 lue sur lchelle des pH et peut tre dtermin
graphiquement en lidentifiant sur la courbe de
neutralisation au point dinflexion.
Il est galement possible de le calculer en prenant la
valeur pour laquelle la drive premire de la variation du
pH en fonction de la quantit de la solution dhydroxyde
de potassium ajoute est maximale, ou la valeur pour
laquelle la drive seconde sannule.
22
29
2 Le point d'inflexion n'est pas possible dterminer
dans le cas des huiles de coton brutes.
Dans ce cas, utiliser une dtermination conventionnelle
du point d'inflexion arbitrairement fix au pH du point
d'quivalence de la neutralisation de l'acide olique par
l'hydroxyde de potassium dans le solvant utilis pour le
titrage, comme dcrit ci-aprs.
Dissoudre environ 0,282 g d'acide olique dans 50 ml
de mthylisobutylctone (4.2.1). Tracer la courbe de
neutralisation de l'acide olique par la solution
d'hydroxyde de potassium (4.2.2) utilis. Lire sur la
courbe le pH du point d'inflexion (correspondant en
principe l'addition de 10 ml de solution d'hydroxyde de
potassium 0,1 mol/l). A partir de cette valeur, lire sur la
courbe de neutralisation de l'huile de coton le volume de
solution d'hydroxyde de potassium utilis pour neutraliser
l'huile de coton.
4.5.4 Nombre de dterminations
Effectuer deux dtermination sur le mme chantillon
pour essai
5. Expression des rsultats
5.1 Expression en indice d'acide
L'indice d'acide est gal :
56,1 x V x C
m
O :
56,1 : est la masse molaire, exprime en grammes par
mole, de l'hydroxyde de potassium ;
V : est le volume, en millilitres, de la solution titre
d'hydroxyde de potassium utilis ;
C : est la concentration exacte, en moles par litre, de la
solution titre d'hydroxyde de potassium utilise ;
m : est la masse, en grammes, de la prise d'essai.
Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des
deux dterminations.
5.2 Expression en acidit
L'acidit peut tre calcule partir des rsultats obtenus
pour la dtermination de l'indice d'acide, soit par la
mthode titrimtrique (3), soit par la mthode
potentiomtrique (4).
L'acidit exprime en pourcentage en masse est
gale :
M 1OO VxCxM
V.C x =
1000 m 10 . m
O :
V : est le volume, en millilitres, de la solution titre
d'hydroxyde de potassium utilise ;
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 68 2 Safar 1434
30 16 dcembre 2012

C : est la concentration exacte en moles par litre, de la

solution titre d'hydroxyde de potassium utilis ;
M : est la masse molaire, en grammes par mole, de
l'acide adopt pour l'expression du rsultat (voir
tableau 1).
m : est la masse en grammes de la prise d'essai.

Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des

deux dterminations.

23
29 Rabie El Aouel 1434
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 09
10 fvrier 2013
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 21 Ramadhan 1432 correspondant au 21
aot 2011 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de l'indice d'iode des corps gras
d'origine animale et vgtale.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 10-149 du 14 Joumada
Ethania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu l'arrt interministriel du 21 Chabane 1419
correspondant au 10 dcembre 1998 relatif aux
spcifications techniques des beurres et aux modalits de
leur mise la consommation ;
Vu l'arrt interministriel du 2 Dhou El Hidja 1422
correspondant au 14 fvrier 2002 fixant la liste des
additifs autoriss dans les denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode de dtermination de
l'indice d'iode des corps gras d'origine animale et
vgtale.
15
Art. 2. Pour la dtermination de l'indice d'iode des
corps gras d'origine animale et vgtale, les laboratoires
du contrle de la qualit et de la rpression des fraudes et
les laboratoires agrs cet effet doivent employer la
mthode jointe en annexe du prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 21 Ramadhan 1432 correspondant au
21 aot 2011.
Mustapha BENBADA.
ANNEXE
METHODE DE DETERMINAT1ON DE LINDICE
DIODE DES CORPS GRAS D'ORIGINE ANIMALE
ET VEGETALE
1- DEFINITION
Indice d'iode : Quantit de monochlorure d'iode,
exprime en grammes d'iode, absorbe par 100g du
produit dans les conditions opratoires dcrites dans la
prsente mthode.
2- PRINCIPE
Addition une prise d'essai d'une solution de
monochlorure d'iode dans un mlange form d'acide
actique et de ttrachlorure de carbone. Aprs un temps
donn de raction, rduction de l'excs de monochlorure
d'iode par addition d'une solution d'iodure de potassium et
d'eau et titrage de l'iode libr par une solution titre de
thiosulfate de sodium.
3- REACTIFS
Tous les ractifs utiliss doivent tre de qualit
analytique.
L'eau utilise doit tre de l'eau distille ou de l'eau de
puret au moins quivalente.
24
16
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 09
3.1 - Iodure de potassium, solution 100g/l, exempte
d'iode libre ou d'iodate.
3.2 - Empois d'amidon, Mlanger 5g d'amidon,
soluble, avec 30ml d'eau, ajouter ce mlange 1000ml
d'eau bouillante et laisser bouillir durant 3 minutes.
3.3- Thiosulfate de sodium, solution titre 0.1 N.
3.4 - Acide actique cristallisable, exempt d'thanol et
de matires oxydables.
3.5 - Ttrachlorure de carbone, exempt de matires
oxydables.
NOTE 1
Vrifier l'absence de matires oxydables dans chacun
des ractifs (3.4) et (3.5), en agitant 10ml du ractif avec
1 ml de solution sature de bichromate de potassium,
et 2 ml d'acide sulfurique concentr, masse volumique
20 = 1,84g/ml. Aucune coloration verte ne doit
apparatre.
3.6 - Monochlorure d'iode, solution dans un mlange
acide actique / ttrachlorure de carbone (ractif de Wijs).
Ce ractif existe dans le commerce, il peut tre prpar
de la manire suivante :
Dans un flacon en verre brun de 1500 ml, peser 9 g de
trichlorure d'iode (lCL3), les dissoudre dans un mlange
form de 700 ml de l'acide actique cristallisable (3.4) et
de 300 ml du ttrachlorure de carbone (3.5).
Prendre 5 ml de la solution et ajouter 5 ml de la solution
d'iodure de potassium (3.1) et 30 ml d'eau.
Titrer l'iode libr avec la solution de thiosulfate de
sodium (3.3), en prsence de quelques gouttes de l'empois
d'amidon (3.2) comme indicateur. Ajouter l0g d'iode pur
bisublim au ractif et les dissoudre compltement par
agitation. Titrer l'iode libre comme prcdemment.
Cette teneur doit tre gale une fois et demie celle de
la premire dtermination. Dans le cas contraire, ajouter
une faible quantit d'iode pur bisublim jusqu' ce que la
teneur dpasse lgrement la limite d'une fois et demie,
car il ne doit subsister aucune trace de trichlorure d'iode,
ce dernier provoquant des ractions secondaires.
Laisser dcanter la solution, puis verser le liquide
limpide dans un flacon jaune ou brun. Si la solution est
conserve dans un flacon bien bouch, l'abri de la
lumire, elle peut tre utilise pendant plusieurs mois.
NOTE 2
Si l'on ne dispose pas de trichlorure d'iode, le ractif de
Wijs peut tre prpar partir de monochlorure d'iode
(ICL), de la manire suivante :
Dissoudre 19 g de monochlorure d'iode dans 700 ml
d'acide - actique cristallisable (3.4) et 300 ml de
ttrachlorure de carbone.
25
29 Rabie El Aouel 1434
10 fvrier 2013
Aprs addition de quelques milligrammes d'iode pur
bisublim, titrer l'iode libre comme dcrit
prcdemment.
Diluer, si ncessaire, avec le mlange de solvant
spcifi, jusqu' ce que 5 ml de ractif correspondent
environ 10 ml de la solution de thiosulfate de sodium
(3.3).
La composition correcte du ractif devrait tre
dtermine selon le mode opratoire suivant :
A) Dans une fiole col large, d'environ 250 ml, munie
d'un bouchon en verre rod, introduire 50 ml d'une
solution d'acide chlorhydrique 50% (V/V) et 50 ml de
ttrachlorure de carbone.
Ajouter exactement 25 ml de ractif de Wijs, prpar
partir de monochlorure d'iode et mlanger.
Titrer l'iode prsent dans la couche rouge-violet du
ttrachlorure de carbone avec une solution d'iodate de
potassium 0,04N, en agitant vigoureusement jusqu' ce
que la couche devienne incolore.
Si la couche de ttrachlorure de carbone est dj
incolore, cela signifie que le ractif de Wijs ne contient
pas d'iode libre et donc le rapport de l'iode au chlore est
infrieur 1; dans ce cas, il est ncessaire d'ajouter, aux
25 ml de la solution prpare du ractif de Wijs, une
quantit d'iode pur bisublim permettant de dvelopper la
coloration rouge-violet.
Calculer ensuite la quantit d'iode ncessaire pour la
totalit du ractif de Wijs et la dissoudre dans cette
solution.
Recommencer encore une fois comme dcrit
prcdemment et titrer l'iode prsent dans la couche
rouge-violet du ttrachlorure de carbone avec une solution
d'iodate de potassium 0,04N.
B) Dans une deuxime fiole col large, d'environ 250
ml, munie d'un bouchon en verre rod, introduire
exactement 25 ml de ractif de wijs renfermant
suffisamment d'iode.
Ajouter 15 ml d'une solution d'iodure de potassium
150 g/l et environ 150 ml d'eau.
Agiter et titrer l'iode libr au moyen de la solution de
thiosulfate de sodium (3.3) comme indicateur, agiter
vigoureusement la fin du titrage.
CALCUL :
Iode V1 T1 + V2 T2
=
Chlore V1 T1 V2 T2
O :
V1 est le volume, en millilitres, de la solution
thiosulfate de sodium (3.3), utilis pour dterminer l'iode
du monochlorure diode.
29 Rabie El Aouel 1434 17
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 09
10 fvrier 2013

V2 est le volume, en millilitres, de la solution diode de Faire fondre l'chantillon, si ncessaire, une
potassium 0,04 N, utilis pour dterminer l'iode libre. temprature d'environ 10C au dessus du point de fusion
et filtrer, cette temprature, sur un papier filtre sec pour
T1 est la normalit exacte de la solution de thiosulfate filtration rapide sur lequel on aura plac 4g de sulfate de
de sodium (3.3) utilise. sodium anhydre et 1 g d'adjuvant de filtration.
T2 est la normalit exacte de la solution d'iode de Le filtrat doit tre parfaitement limpide.
potassium utilise. 6.2 - Dtermination
Il est noter que lorsqu'il s'agit de vrifier seulement si La dtermination doit tre effectue la temprature
le ractif de wijs contient rellement un lger excs ambiante.
d'iode, on peut s'arrter au titrage dcrit en A du mode
opratoire. Peser la prise d'essai, 0.001 g prs, dans une nacelle
en verre (4.1). L'introduire dans un flacon de 250 ml (4.2).
Au moment o la couche de ttrachlorure de carbone se Ajouter 15 ml du ttrachlorure de carbone (3.5) pour
colore, soit directement aprs addition de 25ml du ractif dissoudre la matire grasse. Ajouter exactement 25 ml du
de wijs la solution d'acide chlorhydrique et de ractif de wijs (3.6), boucher, agiter doucement et placer
ttrachlorure de carbone, soit aprs avoir dissous une le flacon dans un endroit sombre.
quantit suffisante d'iode pur bisublim dans le ractif de
wijs, il est vident que le rapport dterminer est plus Pour les produits ayant un indice d'iode infrieur 150,
laisser le flacon dans un endroit sombre durant 1 h ; pour
grand que 1. ceux ayant un indice d'iode suprieur 150, et pour des
produits polymriss ou des produits considrablement
4 - APPAREILLAGE oxyds, le laisser durant 2h.
Matriel courant de laboratoire, et notamment : Aprs ce temps, ajouter 20 ml de la solution d'iodure de
potassium (3.1) et 150 ml d'eau.
4.1 Nacelles en verre, de capacit approprie la prise
d'essai. Titrer avec la solution de thiosulfate de sodium (3.3)
jusqu ce que la couleur jaune due a l'iode ait presque
4.2 Flacons col large, munis de bouchons rods disparu. Ajouter quelques gouttes de l'empois damidon
(par exemple, verre fioles l'indice d'iode), de capacit (3.2) et poursuivre le titrage jusquau moment o la
environ 250 ml. couleur bleu disparat aprs avoir agit trs
vigoureusement.
4.3 Burettes, de 50 ml gradues en 0.1 ml.
Note 4
4.4 - Pipettes, de 20 et 25 ml.
Il est possible d'effectuer un titrage potentiomtrique.
4.5 Balance analytique. Effectuer deux dterminations sur le mme chantillon
pour essai.
Note 3
L'appareillage doit tre parfaitement propre et sec. 6.3- Essai blanc
Effectuer, en mme temps, un essai blanc dans les
5 ECHANTILLONNAGE mmes conditions.
La prparation de l'chantillon pour essai des corps gras 7- EXPRESSION DES RESULTATS
d'origine animale et vgtale se fait dans les conditions
appropries. 7.1- Mode de calcul et formule
L'indice d'iode est gal :
6 - MODE OPERATOIRE
6.1- Prise d'essai 12,69T1 (V3 - V4)

La masse de la prise d'essai varie de la faon suivante, m
selon l'indice d'iode prsum : O :
T1 est la normalit exacte de la solution de thiosulfate
de sodium (3.3) utilise ;
INDICE DIODE PRISE DESSAI
PRESUME EN GRAMMES V3 est le volume, en millilitres, de la solution de
thiosulfate de sodium (3.3), utilis pour essai blanc ;
infrieur 5 3,00 V4 est le volume, en millilitres, de la solution de
5 20 1,00 thiosulfate de sodium (3.3) utilis pour la dtermination ;
m est la masse, en grammes, de la prise d'essai.
21 50 0,40
51 100 0,20 7.2 - Rptabilit
101 150 0,13 La diffrence entre les rsultats de deux dterminations,
effectues simultanment ou rapidement l'une aprs l'autre
151 200 0,10 par le mme analyste, ne doit pas dpasser 0.4 unit
d'indice d'iode.

26
 RPUBLIQUE ALGRIENNE DMOCRATIQUE ET POPULAIRE
__________________

MINISTRE DU COMMERCE

DIRECTION GNRALE DU CONTRLE

CONOMIQUE ET DE LA RPRESSION
DES FRAUDES

Direction des Laboratoires dEssais

et dAnalyses de la Qualit

MTHODES OFFICIELLES D'ANALYSES

PHYSICO-CHIMIQUES RELATIVES AUX
CRALES ET PRODUITS DRIVS
 Sommaire

1. Arrt du 23 Fvrier 2012 rendant obligatoire une mthode de dtermination 01

de la masse de 1000 grains dans les crales et les lgumineuses. (JO n 01 - 2013)

2. Arrt du 06 Fvrier 2012 rendant obligatoire une mthode de dtermination 03

de la teneur en eau dans les crales et produits craliers. (JO n 08 - 2013)

3. Arrt du 06 Juin 2012 rendant obligatoire une mthode de l'acidit grasse dans les 06
farines et les semoules de bl. (JO n 35 - 2013)

4. Arrt du 06 Juin 2012 rendant obligatoire une mthode de dosage du taux de

08
cendres par incinration dans les, lgumineuses et produits drivs. (JO n 35 - 2006)
23 Safar 1434
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 01
6 janvier 2013
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du Aouel Rabie Ethani 1433 correspondant au
23 fvrier 2012 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la masse de 1000 grains dans les
crales et les lgumineuses.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 10-149 du 14 Joumada
Etania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02- 453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Arrte :
Article ler. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode de dtermination de la
masse de 1000 grains dans les crales et les
lgumineuses.
Art. 2. Pour la dtermination de la masse
de 1000 grains dans les crales et les lgumineuses,
les laboratoires du contrle de la qualit et de la
rpression des fraudes et les laboratoires agrs
cet effet doivent employer la mthode dcrite en
annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsqu'une expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le Aouel Rabie Ethani 1433 correspondant
au 23 fvrier 2012.
Mustapha BENDADA.
27
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION DE LA MASSE
DE 1000 GRAINS
DANS LES CEREALES ET LES LEGUMINEUSES
1. DEFINITION
masse de 1000 grains tels quels : masse de 1000
grains avec leur teneur en eau existant au moment de la
dtermination ;
masse de 1000 grains sur sec : masse de 1000 grains,
rectifie de manire tenir compte de leur teneur en eau
existant au moment de la dtermination.
2. PRINCIPE
Pese d'une quantit de l'chantillon, sparation et pese
des grains entiers. Comptage des grains entiers et par rgle
de trois, obtention de la masse de 1000 grains.
3. MATERIEL
balance prcise 0,01 g.
pince (pour saisir les grains).
compteur de grains (c'est un appareil appropri
pour le comptage des grains par exemple : compteur
photolectrique). A dfaut d'appareil appropri, le
comptage pourra tre manuel.
4. MODE OPERATOIRE
4.1 Nombre de dterminations
effectuer deux dterminations sur le mme
chantillon pour laboratoire.
4.2 Dtermination de la masse de 1000 grains tels
quels
Prlever au hasard une quantit peu prs gale la
masse de 500 grains de l'chantillon tel quel. (Le
manipulateur exerc value facilement cette quantit).
Dans le cas contraire effectuer quelques essais sur
l'chantillon donn.
Slectionner les grains entiers et les peser 0,0 lg
prs. Compter les grains entiers ensuite l'aide du
compteur de grains ou, dfaut de compteur, faire un
comptage manuel. Les grains de crales habituellement
non vtus doivent tre, le cas chant, dbarrasss de leur
enveloppe florale.
4.3 Dtermination de la masse de 1000 grains
sur sec.
Prlever un autre chantillon pour essai du mme
chantillon pour laboratoire et en dterminer la teneur en
eau des grains entiers, exempts d'impurets selon la
mthode propre au produit concern.
01
28 23 Safar 1434
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 01 6 janvier 2013

5. EXPRESSION DES RESULTATS Dans le cas contraire, refaire les essais.

5.1 Mode de calcul et formules
Exprimer le rsultat en indiquant la masse de 1000
5.1.1 La masse mH en gammes, de 1000 grains tels grains en grammes :
quels est donne par la formule suivante :
avec deux chiffres dcimaux si la masse est
mo x 1000 infrieure 10 g ;
mH =
N avec un chiffre dcimal, si la masse est gale ou
suprieure l0g, mais ne dpasse pas 100 g ;
O :
mo : est la masse, en grammes, des grains entiers de la par un nombre entier si la masse est suprieure
quantit prleve 100 g.
N : est le nombre de grains entiers trouvs dans la
masse mo 5.3 Rptabilit

5.1.2 La masse ms, en grammes, de 1000 grains sur sec La diffrence entre les rsultats des deux dterminations
est donne par la formule : (voir 4.1), effectues simultanment ou rapidement l'une
aprs l'autre par le mme analyste, ne doit pas dpasser
mH x (100 H) 6 % pour les grains ayant une masse suprieure 25 g par
ms = 1000 grains et 10 % pour les autres grains.
100
O :
mH : est la masse, en grammes de 1000 grains tels 6. NOTES SUR LE MODE OPERATOIRE
quels.
6.1 Echantillon contenant des grains dcortiqus et
H : est la teneur en eau, exprime en pourcentage en
non dcortiqus.
masse des grains tels quels.
Lorsque l'chantillon renferme des grains dcortiqus et
NOTE
non dcortiqus mlangs, compter les deux sortes de
La masse sur sec est gale la masse telle quelle grains sparment et les traiter indpendamment.
diminue de la masse d'eau qui y est contenue.
6.2 Echantillon contenant des grains jumeaux
5.2. Rsultat d'avoine.
Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des
deux dterminations si les conditions de rptabilit sont Sparer les grains jumeaux d'avoine l'un de l'autre et les
remplies (voir 5.3). compter comme deux grains.

02
25 Rabie El Aouel 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 08
6 fvrier 2013 33

ARRETES, DECISIONS ET AVIS

MINISTERE DU COMMERCE

Arrt du 13 Rabie El Aouel 1433 correspondant au 6

fvrier 2012 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur en eau dans les
crales et produits craliers.

Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n l0-149 du 14 Joumada
Ethania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;

03
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 08
34
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode de dtermination de la
teneur en eau dans les crales et produits craliers.
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en eau dans
les crales et produits craliers, les laboratoires du
contrle de la qualit et de la rpression des fraudes et les
laboratoires agrs cet effet doivent employer la mthode
jointe en annexe du prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 13 Rabie El Aouel 1433 correspondant
au 6 fvrier 2012.
Mustapha BENBADA.
133C, les rsultats aprs des priodes de chauffage des
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION DE LA
TENEUR EN EAU
DANS LES CEREALES ET PRODUITS
CEREALIERS
(Mthode pratique avec ou sans broyage et sans
conditionnement)
1. DEFINITION
La teneur en eau est la perte de masse, exprime en
pourcentage, subie par le produit dans les conditions
dcrites dans la prsente mthode.
2. PRINCIPE
Schage du produit une temprature comprise entre
130C et 133C, pression atmosphrique normale, aprs
broyage ventuel du produit.
3. APPAREILLAGE
3.1 Balance analytique
3.2 Broyeur correspondant aux caractristiques
suivantes :
construit en matriau n'absorbant pas d'humidit ;
permettant un broyage rapide et uniforme, sans
provoquer d'chauffement sensible du produit et en vitant
au maximum le contact avec l'air extrieur ;
pouvant tre rgl de manire obtenir pour les
particules des dimensions adquates.
25 Rabie El Aouel 1434
6 fvrier 2013
3.3 Capsule mtallique, non attaquable dans les
conditions de l'essai (ou dfaut, capsule en verre
thermorsistant), munie d'un couvercle suffisamment
tanche et de surface utile permettant d'obtenir une
rpartition homogne et sans tassement de la prise d'essai
(par exemple diamtre de 50 mm et hauteur de 30 mm).
3.4 Etuve isotherme, chauffage lectrique, rgle de
faon que la temprature de l'air et des plateaux porte
chantillons, au voisinage des prises d'essai, soit comprise
entre 130C et 133C en rgime normal.
L'tuve doit avoir une capacit calorifique, telle que
rgle pralablement une temprature de 131C, elle
puisse atteindre nouveau cette temprature, moins de 45
min (de prfrence moins de 30 min) aprs la mise en
place du nombre maximal de prises d'essai pouvant scher
simultanment.
L'efficacit de la ventilation doit tre dtermine l'aide
d'une semoule de bl dur, ayant 1 mm de dimension
maximale des particules comme matriau d'essai. La
ventilation doit tre telle, aprs insertion du nombre
maximal de prises d'essai que l'tuve peut recevoir et
schage une temprature comprise entre 130C et
mmes prises d'essai durant 2 h, puis durant 1 h
supplmentaire, ne prsentent pas entre eux d'cart
suprieur 0,15 g d'eau par 100 g d'chantillon.
3.5 Thermomtre mercure pour le contrle de la
temprature l'intrieur de l'tuve.
3.6 Dessiccateur plaque mtallique ou en
porcelaine paisse perfore contenant un agent
dshydratant efficace.
3.7 Pince mtallique
4. MODE OPERATOIRE
4.1 Nombre de dterminations
Effectuer deux dterminations sur le mme chantillon
pour laboratoire.
4.2 Prparation des capsules
Avant utilisation, les capsules dcouvertes et leurs
couvercles doivent :
scher l'tuve durant 15 min 130C,
refroidir dans le dessiccateur jusqu' la temprature
du laboratoire (entre 30 min et 45 min).
4.3 Prparation de l'chantillon pour essai
4.3.1 Produits ne ncessitant pas de broyage
Les produits qui n'ont pas de particules de dimensions
suprieures 1,7 mm, et dont moins de 10 % (m/m) sont
suprieures 1 mm et plus de 50 % (m/m) infrieures
0,5 mm, n'ont pas besoin d'tre broys avant la
dtermination.
04
25 Rabie El Aouel 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 08
6 fvrier 2013
4.3.2 Produits ncessitant un broyage
Les produits ne correspondant pas aux caractristiques
granulomtriques mentionnes en (4.3.1) doivent tre
broys.
Pour cela, oprer comme suit :
rgler le broyeur (3.2) de manire obtenir les
caractristiques granulomtriques dsires puis broyer une
petite quantit de l'chantillon pour laboratoire et la
rejeter ;
broyer ensuite, rapidement une quantit de
l'chantillon de manire avoir une prise d'essai d'environ
5 g.
4.4 Prise d'essai
4.4.1 Produit ne ncessitant pas de broyage
Peser rapidement, 1 mg prs, une quantit de
substance d'environ 5 g dans la capsule (3.3) tare,
couvercle compris 1 mg prs.
4.4.2 Produits ncessitant un broyage
Verser la totalit de la mouture obtenue dans la capsule
tare comme (4.4.1). Adapter rapidement le couvercle et
peser 1 mg prs.
REMARQUES
avant d'effectuer le prlvement sur l'chantillon de
laboratoire il est ncessaire de bien l'homogniser ;
il faut manipuler les capsules l'aide de la
pince ( 3.7 ) et non avec les doigts.
4.5 Dshydratation
Introduire la capsule dcouverte contenant la prise
d'essai et son couvercle dans l'tuve (3.4) et les y laisser
sjourner pendant 2 heures (90 min dans le cas des
farines), temps compt partir du moment o la
temprature de l'tuve est nouveau comprise entre 130C
et 133C.
05
35
Le temps d'tuvage coul, retirer rapidement la capsule
de l'tuve et la placer dans le dessiccateur (3.6) o elle
restera jusqu' atteindre la temprature du laboratoire (en
gnral entre 30 et 45 min). La peser ensuite 1 mg prs.
REMARQUES
ne jamais introduire de produits humides dans une
tuve contenant des prises d'essai en fin de dshydratation,
cela aurait pour consquence de rhydrater partiellement
ces dernires ;
dans le cas d'essais en srie, ne jamais superposer les
capsules dans le dessiccateur.
5. EXPRESSION DES RESULTATS
5.1 Mode de calcul et formules
La teneur en eau exprime en pourcentage en masse du
produit telle quelle est donne par la formule ci-aprs :
m1 m2
x 100
m1 m0
o :
m0 est la masse, en grammes, de la capsule et de son
couvercle ;
m1 est la masse, en grammes, de la capsule, du
couvercle et de la prise d'essai avant schage ;
m2 est la masse, en grammes, de la capsule, du
couvercle et de la prise d'essai aprs schage.
5.2 RESULTAT
Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des
valeurs obtenues des deux dterminations si les conditions
de rptabilit (5.3) le permettent. Dans le cas contraire,
recommencer les dterminations. Arrondir le rsultat
0.05% prs.
5.3 REPETABILITE
La diffrence entre les rsultats des deux dterminations
(4.1), effectues simultanment ou rapidement l'une aprs
l'autre par le mme analyste, ne doit pas excder 0.15 g
d'eau pour 100 g d'chantillon.
28 Chabane 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 35
7 juillet 2013
ARRETES, DECISIONS ET AVIS
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 16 Rajab 1433 correspondant au 6 juin 2012
rendant obligatoire la mthode de dtermination
de l'acidit grasse dans les farines et les semoules
de bl.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 10-149 du 14 Joumada
Etania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 3 Rajab 1410
correspondant au 30 janvier 1990, modifi et complt,
relatif au contrle de la qualit et la rpression des
fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Arrte :
Articles 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode de dtermination de
l'acidit grasse dans les farines et les semoules de bl.
Art. 2. Pour la dtermination de l'acidit grasse dans
les farines et les semoules de bl, les laboratoires du
contrle de la qualit et de la rpression des fraudes et les
laboratoires agrs cet effet doivent employer la
mthode jointe en annexe du prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 16 Rajab 1433 correspondant au 6 juin
2012,
Mustapha BENBADA.
06
15
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION
DE L'ACIDITE GRASSE DANS LES
FARINES ET LES SEMOULES DE BLE
La prsente mthode dcrit une technique de
dtermination de l'acidit grasse dans les farines et les
semoules de bl. Cette mthode s'applique galement aux
ptes alimentaires.
1. DEFINITION
L'acidit grasse est l'expression conventionnelle des
acides, essentiellement des acides gras libres, extraits dans
les conditions qui suivront. Elle est exprime en grammes
d'acide sulfurique pour l00g de matire sche.
2. PRINCIPE
Mise en solution des acides dans l'thanol 95 % (v/v)
la temprature du laboratoire, centrifugation et titrage
d'une partie aliquote de la solution surnageante par
l'hydroxyde de sodium.
3. REACTIFS
Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique et
l'eau utilise doit tre de l'eau distille.
3.1 Ethanol (alcool thylique) 95 % (v/v).
3.2 Hydroxyde de sodium (NaOH) : solution titre
0,05N dans l'eau distille dont on aura limin le dioxyde
de carbone par bullition. Cette solution doit tre exempte
de carbonates et doit tre conserve dans un flacon en
verre inactinique.
Le titre de la solution doit tre vrifi immdiatement
avant chaque srie de dtermination de l'acidit.
3.3 Phnolphtaline solution 1g pour 100 ml dans
l'thanol 95% (v/v).
4. APPAREILLAGE
4.1 Balance prcise 0,01g.
4.2 Broyeur permettant un broyage rapide et uniforme,
sans provoquer d'chauffement sensible du produit et en
vitant au maximum le contact avec l'air extrieur (cas des
semoules et des ptes alimentaires).
4.3 Tamis en toile mtallique de 1mm d'ouverture de
maille pour les farines et de 160m et de 500m
d'ouverture de maille pour les semoules et ptes
alimentaires.

16 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 35
4.4 Centrifugeuse 5000-6000 tours/min.
4.5 Tubes de centrifugeuse de 45 ml en verre ou en
plastique neutre bouchs hermtiquement.
4.6 Tubes de 50 ml en verre ou en plastique neutres
bouchs hermtiquement.
4.7 Pipettes prcises de 10 et 20 ml.
4.8 Fioles coniques ou erlenmeyers de 250 ml.
4.9 Micro-burette, gradue en 0,01 ml.
4.10 Agitateur rotatif mcanique, 30-60 tours/min.
5. CONDITIONS DE CONSERVATION
Les chantillons ne doivent pas tre conservs la
temprature du laboratoire plus d'une journe, l'acidit
augmente pendant le stockage. Les conserver en flacons
tanches 4C environ. Avant chaque prlvement, pour
analyse, laisser cet chantillon revenir la temprature du
laboratoire dans le flacon tanche.
6. MODE OPERATOIRE
6.1 Nombre de dterminations
Faire deux dterminations sur le mme chantillon pour
essai.
6.2 Prparation de l'chantillon pour essai
6.2.1 Cas des farines : Prlever environ 50 g de farine et
les tamiser l'aide du tamis de 1mm d'ouverture de maille
(4.3), de manire dsagrger les agglomrats
ventuellement prsents.
6.2.2 Cas des semoules et des ptes alimentaires :
Broyer environ 50 g de produit l'aide du broyeur (4.2)
de telle manire que la totalit du broyat passe au travers
du tamis de 500 m d'ouverture de maille (4.3) et qu'au
moins 80 % passent au travers du tamis de 160 m
d'ouverture de maille (4.3).
6.3 Dtermination de la teneur en eau
Effectuer immdiatement la dtermination de la teneur
en eau selon la mthode de dtermination de la teneur en
eau dans les crales et produits craliers.
6.4 Prise d'essai
Peser 0,01g prs environ 5g de l'chantillon pour
essai, aprs l'avoir bien homognis.
6.5 Dtermination
6.5.1 Extraction
- Introduire la prise d'essai dans le tube de
centrifugeuse.
- y ajouter la pipette 30 ml d'thanol (3.1) et fermer le
tube hermtiquement.
07
28 Chabane 1434
7 juillet 2013
- Agiter pendant une heure l'aide de l'agitateur rotatif
mcanique (4.10) en oprant une temprature de 20C
5C. Centrifuger ensuite deux reprises et successivement
pendant 2 min.
Ces deux centrifugations sont plus efficaces qu'une
seule de plus longue dure car elles permettent d'liminer
les particules restant en suspension.
NOTE
Si les tubes de centrifugeuse prconise par cette
mthode ne s'adaptent pas l'agitateur rotatif
mcanique (4.10), il y a lieu d'utiliser les tubes de 50 ml
(4.6) pour l'extraction et d'effectuer ensuite un
transvasement pour la centrifugation.
6.5.2 Titrage
Prlever la pipette 20 ml du liquide surnageant
parfaitement limpide et les verser dans une fiole conique
(4.8) ;
Ajouter 5 gouttes de phnolphtaline (3.3) ;
Titrer l'aide de la micro-burette (4.9) avec la
solution d'hydroxyde de sodium 0,05 N (3.2), jusqu'au
virage au rose ple persistant quelques secondes.
6.6 Essai blanc
Titrer l'acidit apporte par l'alcool (3.1), en oprant sur
20ml d'thanol suivant les conditions (6.5 .2).
7. EXPRESSION DES RESULTATS
7.1 Mode de calcul et formules
7.1.1 Acidit exprime en grammes d'acide sulfurique
pour 100 g de matire telle quelle :
7,35 X (v1 - v0) x T
m
7.1.2 Acidit exprime en gramme d'acide sulfurique
pour 100g de matire sche :
7,35 X (v1 - v0) x T
m-H
o :
V1 : est le volume, en millilitres, de la solution
d'hydroxyde de sodium utilise pour la dtermination ;
V0 : est le volume, en millilitres, de la solution
d'hydroxyde de sodium utilise pour l'essai blanc ;
m : est la masse, en grammes, de la prise d'essai ;
T : est le titre exact de la solution d'hydroxyde de
sodium utilise ;
H : est la teneur en eau, en pourcentage en masse, de
l'chantillon pour essai.
28 Chabane 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 35
7 juillet 2013
7.2 Rsultat
Faire le calcul avec 4 dcimales.
Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des
deux dterminations si les conditions de rptabilit (voir
7.3) sont remplies. Dans le cas contraire, refaire l'essai en
double.
Exprimer le rsultat 0,001 % (m/m) prs.
7.3 Rptabilit
La diffrence entre les rsultats des deux dterminations
(voir 6.1) effectues simultanment ou rapidement l'une
aprs l'autre par le mme analyste ne doit pas dpasser
0,002 g d'acide sulfurique pour 100 g de matire sche.
Arrt du 16 Rajab 1433 correspondant au 6 juin 2012
rendant obligatoire la mthode de dosage du taux
de cendres par incinration dans les crales,
lgumineuses et produits drivs.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 10-149 du 14 Joumada
Etania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode de dosage du taux de
cendres par incinration dans les crales, lgumineuses et
produits drivs.
Art. 2. Pour le dosage du taux de cendres par
incinration dans les crales, lgumineuses et produits
drivs, les laboratoires du contrle de la qualit et de la
rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet effet
doivent employer la mthode jointe en annexe du prsent
arrt ;
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
17
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 16 Rajab 1433 correspondant au 6 juin
2012.
Mustapha BEN BADA
ANNEXE
METHODE DE DOSAGE DU TAUX DE CENDRES
PAR INCINERATION DANS LES CEREALES,
LEGUMINEUSES ET PRODUITS DERIVES.
La prsente mthode spcifie une technique de dosage
des cendres dans les crales, les lgumineuses et leurs
produits de mouture destins l'alimentation humaine.
Les matriaux et produits sources sont :
a) les graines de crales ;
b) les farines et les semoules ;
c) les produits de mouture (sons et produits forte
teneur en son, remoulages) ;
d) les farines de crales composes ;
e) les produits drivs des crales autres que les
produits de mouture ;
f) les lgumineuses et leurs produits drivs.
La prsente mthode n'est applicable ni aux amidons et
produits drivs des amidons, ni aux produits destins
l'alimentation animale, ni aux semences.
1. Dfinition
Pour les besoins de la prsente mthode la dfinition
suivante s'applique :
Cendres : rsidu incombustible obtenu aprs
incinration selon la technique dcrite dans la prsente
mthode.
2. Principe
Incinration d'une prise d'essai jusqu' combustion
complte des matires organiques puis pese du rsidu
obtenu. Le rsidu obtenu est floconneux aprs incinration
550 C et vitrifi aprs incinration 900 C. De faon
gnrale, les produits contenant des sels (chlorure de
sodium, pyrophosphate par exemple) doivent tre
incinrs (550 10) C.
Le Tableau ci-aprs rsume les tempratures
d'incinration utiliser en fonction des produits.
08
 28 Chabane 1434
18 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 35 7 juillet 2013

Tempratures d'incinration et type de produits. Dans les deux cas, le matriau utilis doit permettre de
respecter les valeurs de fidlit.

Les capsules doivent tre nettoyes par immersion

Type de produits Tempratures dincinration
complte pendant au moins 1 h dans une solution aqueuse
d'acide chlorhydrique (3.1) puis rince l'eau courante et
Farines (550 10) C (900 25) C ensuite l'eau distille.

Semoules (550 10) C (900 25) C Aprs rinage, les nacelles en quartz ou en silice
doivent tre sches dans une tuve (4.7) pendant le temps
Graines de crales (550 10) C (900 25) C ncessaire l'limination de l'eau.

Autres produits de
4.3 Four moufle lectrique, avec circulation
mouture (par exemple
d'air adquate, comportant un systme de rglage de
sons, produits forte (550 10) C
la temprature et une enceinte rfractaire non
teneur en sons,
susceptible de perdre des particules la temprature
remoulages)
d'incinration, et pouvant tre rgl (900 25) C ou
(550 10) C.
Prparations composes
(550 10) C
base de crales
4.4 Dessiccateur robinet, muni d'une plaque perfore
Produits drivs des en aluminium ou en porcelaine, et garni de pentoxyde de
crales autres que diphosphore (3.2) comme dshydratant.
(550 10) C
les produits de
mouture 4.5 Balance analytique, avec une prcision de 0,01 mg.

Lgumineuses et leurs 4.6 Diviseur rifles ou conique.

(550 10) C
produits drivs
4.7 Etuve, pour le schage des capsules incinration.
3. Ractifs
5. chantillonnage
Sauf indication contraire, utiliser uniquement des
ractifs de qualit analytique reconnue et de l'eau Il est important que le laboratoire reoive un chantillon
distille ou de l'eau dminralise ou de puret rellement reprsentatif, non endommag ou modifi lors
quivalente.
du transport et de l'entreposage.
3.1 Acide chlorhydrique, solution aqueuse, mlange
part gale d'HCI ( fraction volumique 35 % ) et 6. Prparation de lchantillon pour essai
d'eau.
Pour les graines ou les produits contenant des graines
3.2 Pentoxyde de diphosphore, purifi (P4O10).
entires, homogniser et diviser lchantillon pour
obtenir une quantit reprsentative et compatible avec
3.3 thanol.
le type de broyeur (4.1) utilis. Broyer lchantillon
4. Appareillage ainsi obtenu. Les autres produits ne ncessitent pas de
broyage.
4.1 Broyeur, facile nettoyer et ayant un espace mort
aussi rduit que possible et apte assurer un broyage 7. Mode opratoire
rapide et uniforme.

4.2 Capsule incinration, de capacit au moins 7.1 Dtermination de la teneur en eau

gale 20 ml, de forme rectangulaire ou circulaire,
fond plat et ayant une surface utile au moins gale
12 cm2. Des matriaux appropris inaltrables dans
les conditions de temprature de l'essai sont les
suivants :
a - 900 C - platine ou rhodium ;
b - 550 C - quartz ou silice ;
Procder pralablement la dtermination de la teneur
en eau de l'chantillon pour essai pour les crales autres
que le mas ou les lgumineuses. Il est recommand de
traiter les lgumineuses et leurs drives avec un temps de
schage de 90 min et un prconditionnement si la fraction
massique de l'eau est infrieure 7 % ou suprieure
13 %.

09
28 Chabane 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 35
7 juillet 2013
7.2 Prparation des capsules incinration
Pour les capsules incinration convenant pour l'essai
900 C, (4.2), les porter pralablement nettoyes la
temprature d'incinration utilise en les plaant dans le
four moufle (4.3) pendant 5 min, les laisser refroidir
dans le dessiccateur (4.4) puis les peser (4.5) 0,1 mg
prs.
Pour les capsules incinration convenant pour
l'essai 550 C, les nettoyer et les placer dans une
tuve (4.7) durant le temps ncessaire au schage
( par exemple 90 min 130 C ). Immdiatement
avant emploi, sortir les capsules de l'tuve et les
laisser refroidir dans un dessiccateur (4.4) puis les peser
(4.5) 0,1 mg prs.
7.3 Prparation de la prise d'essai
partir de l'chantillon pour essai prpar selon (6) et
soigneusement homognis, peser (4.5) rapidement
0,1 mg prs une prise d'essai comprise entre 3,9 g
et 4,1 g dans le cas d'une incinration 900 C et entre
4,9 g et 5,1 g dans le cas d'une incinration 550 C.
Dans le cas des produits faible densit, la prise d'essai
peut tre comprise entre (2 0,1) g et (3 0,1) g. Dans la
capsule incinration prpare et tare comme dcrit en
(7.2), rpartir le produit, sans le tasser, en une couche
uniforme.
7.4 Princinration
Placer la capsule et son contenu l'entre du four port
la temprature d'incinration. A 900 C, les produits
s'enflamment spontanment. A 550 C, Il est ncessaire
d'ajouter de l'thanol (3.3) pour les enflammer. Pour une
princinration 550 C, il est permis d'introduire les
nacelles dans le four froid et de laisser le four monter en
temprature.
7.5 Incinration
Attendre que le produit ait fini de brler puis
introduire la capsule l'intrieur du four. Fermer la
porte du four. Poursuivre l'incinration jusqu'
combustion complte du produit, y compris des
particules charbonneuses contenues dans le rsidu,
soit 1 h aprs la remonte du four 900 C, et 4 h
minimum 550 C.
Une fois l'incinration termine, retirer la capsule du
four, et la mettre refroidir dans le dessiccateur (4.4).
Pour maintenir l'efficacit du dessiccateur, ne pas
superposer les capsules. Ds que la capsule a atteint la
temprature ambiante (soit 15 min 20 min pour les
capsules en platine et 60 min 90 min minimum pour les
capsules en quartz ou en silice), peser 0,1 mg prs et
rapidement en raison du caractre hygroscopique des
cendres.
10
19
Dans le cas de l'incinration 550C, des prcautions
particulires doivent tre prises l'entre d'air et lors de
l'ouverture du dessiccateur pour ne pas entraner les
rsidus floconneux.
7.6 Nombre de dterminations
Effectuer au moins deux dterminations sur le mme
chantillon pour essai.
8. Expression des rsultats
Le taux de cendre, en fraction massique par rapport la
matire sche exprim en pourcentage, est donn par
lquation (1) :
100 100
wa,d = ( m2 m1 ) x x (1)
m0 100 wm
O :
m0 : est la masse, en grammes, de la prise d'essai
(7.3) ;
m1 : est la masse, en grammes, de la capsule
d'incinration (7.2) ;
m2 : est la masse, en grammes, de la capsule
d'incinration (7.2) et du rsidu d'incinration (7.5) ;
wm : est la teneur en eau, en pourcentage par masse, de
l'chantillon (7.1) ;
Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des
deux dterminations si les conditions de rptabilit (9)
sont remplies.
Exprimer le rsultat 0,01 % (par masse) prs.
Si besoin est, le taux de cendre, en fraction massique
par rapport la matire humide exprim en pourcentage,
wa,w est donn par l'quation (2) :
100
wa,w = ( m2 m1 ) x (2)
m0
9. Rptabilit
La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
individuels indpendants, obtenus l'aide de la mme
mthode sur un matriau identique soumis l'essai dans le
mme laboratoire par le mme oprateur utilisant le mme
appareillage et dans un court intervalle de temps, ne
dpassera pas plus de 5 % des cas.
 RPUBLIQUE ALGRIENNE DMOCRATIQUE ET POPULAIRE
__________________

MINISTRE DU COMMERCE

DIRECTION GNRALE DU CONTRLE

CONOMIQUE ET DE LA RPRESSION
DES FRAUDES

Direction des Laboratoires dEssais

et dAnalyses de la Qualit

MTHODES OFFICIELLES D'ANALYSES

MICROBIOLOGIQUES RELATIVES AUX EAUX

MINRALES ET AUX EAUX DE SOURCE
 Sommaire

1. Arrt du 24 juin 2012 rendant obligatoire la mthode de dnombrement des

01
micro-organismes revivifiables dans leau. (JO n 21 - 2013)

2. Arrt du 31 dcembre 2012 rendant obligatoire la mthode de recherche et de

dnombrement des organismes coliformes, organismes coliformes 05
thermotolrants et des escherichia coli prsums dans leau. (JO n 31 - 2013)

3. Arrt du 13 juin 2012 rendant obligatoire la mthode de recherche et de

dnombrement des spores de micro-organismes anarobies sulfito-ductrices 12
(Clostridia). (JO n 36 - 2013)

4. Arrt du 5 dcembre 2012 rendant obligatoire la mthode de dtection et de

dnombrement de Pseudomonas aeruginosa dans leau par filtration sur 15
membrane. (JO n 51 - 2013)
 12 Joumada Ethania 1434
20 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 21 23 avril 2013

ARRETES, DECISIONS ET AVIS

MINISTERE DU COMMERCE

Arrt du 4 Chabane 1433 correspondant au 24 juin

2012 rendant obligatoire la mthode de
dnombrement des micro-organismes
revivifiables dans l'eau.

Le ministre du commerce,

01
12 Joumada Ethania 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 21
23 avril 2013
Vu la loi n 05-12 du 28 Joumada Ethania 1426
correspondant au 4 aot 2005, modifie et complte,
relative l'eau ;
Vu le dcret prsidentiel n 10-149 du 14 Joumada
Ethania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu l'arrt interministriel du 22 Dhou El Hidja 1426
correspondant au 22 janvier 2006, modifi et complt,
fixant les proportions d'lments contenus dans les eaux
minrales naturelles et les eaux de source ainsi que
les conditions de leur traitement ou les adjonctions
autorises ;
Vu l'arrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt, relatif aux spcifications
microbiologiques de certaines denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode de dnombrement des
micro-organismes revivifiables dans l'eau.
Art. 2. Pour le dnombrement des micro-organismes
revivifiables dans l'eau, les laboratoires du contrle de la
qualit et de la rpression des fraudes et les laboratoires
agrs cet effet, doivent employer la mthode jointe en
annexe du prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 4 Chabane 1433 correspondant au 24
juin 2012.
Mustapha BENBADA.
21
ANNEXE
METHODE DE DENOMBREMENT DES
MICRO-ORGANISMES REVIVIFIABLES
DANS L'EAU
La prsente mthode spcifie une technique de
dnombrement des micro-organismes revivifiables
prsents dans l'eau par comptage des colonies se formant
dans un milieu de culture nutritif glos aprs incubation
en arobiose 36 C et 22 C.
La mthode vise mesurer l'efficacit de
fonctionnement du procd de traitement des
alimentations publiques en eau potable et, plus
gnralement de tous les types d'eau. Elle est plus
particulirement applicable l'analyse des eaux
destines la consommation humaine, y compris
des eaux en rcipients ferms et des eaux minrales
naturelles.
1. DFINITION
Pour les besoins de la prsente mthode, la dfinition
suivante s'applique :
Micro-organismes revivifiables : Toute bactrie,
arobie, levure ou moisissure, capable de former des
colonies dans le milieu spcifi et dans les conditions
d'essai dcrites ci-dessous.
2. PRINCIPE
Ensemencement, par mlange dans un milieu de culture
spcifi coul dans des botes de ptri, de volumes
mesurs d'un chantillon ou de ses dilutions. Incubation
d'un jeu de botes 36 C pendant 44 h et d'un autre jeu
22 C pendant 68 h.
Calcul du nombre d'units formant des colonies par
millilitre (UFC/ml) d'chantillon partir du nombre de
colonies formes dans le milieu.
3. APPAREILLAGE ET VERRERIE
Matriel courant de laboratoire de microbiologie et
notamment :
3.1 Appareillage pour la strilisation en chaleur
humide (autoclave) ;
3.2 tuve capable de maintenir une temprature de
(36 2) C ;
3.3 tuve capable de maintenir une temprature de
(22 2) C ;
02

22 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 21
3.4 Botes de ptri en verre ou en matire plastique
de diamtre 90 mm ou 100 mm ;
3.5 Bain d'eau ou quipement similaire, capable de
maintenir une temprature de (45 1) C ;
3.6 Appareil pour le comptage des colonies muni d'un
systme d'clairage sur fond noir.
4. CHANTILLONNAGE
Prlever les chantillons d'eau conformment aux
instructions d'chantillonnage, de manipulation et de
conservation.
Analyser l'eau fournie en rcipients ferms, y compris
les eaux minrales naturelles, dans les 12 h suivant
l'embouteillage, et les maintenir une temprature de
(5 3) C durant cette priode.
5. MILIEUX DE CULTURE ET DILUANTS
5.1 Composants de base
Pour la prparation du milieu, utiliser des composants
de qualit uniforme et des produits chimiques de qualit
analytique, ou bien utiliser un milieu de culture
quivalent complet dshydrat et suivre les instructions
du fabricant.
Pour prparer le milieu, utiliser de l'eau distille dans un
appareil en verre et exempte de substances pouvant
inhiber la croissance dans les conditions de l'essai.
Note : L'utilisation de produits chimiques d'autres
qualits est permise, sous rserve de dmontrer qu'ils ont
une performance gale pour l'essai.
5.2 Diluant
Pour les dilutions, utiliser le diluant base de peptone
indiqu dans la mthode de dnombrement des
micro-organismes sur milieu de culture, lignes directrices
gnrales.
5.3 Glose l'extrait de levure
Tryptone (Peptone de casine, pancr.).................... 6,0 g
Extrait de levure dshydrat.................................... 3,0 g
Glose en poudre ou en paillettes................. 10 g 20 g
(en fonction du pouvoir glifiant)
Eau .................................................................... 1000 ml
03
12 Joumada Ethania 1434
23 avril 2013
Ajouter les composants ou le milieu complet
dshydrat, l'eau et dissoudre par chauffage.Ajuster le
pH, si ncessaire, de faon qu'aprs strilisation il soit de
7,2 0,2 25 C.
Rpartir le milieu par volumes de 15 ml 20 ml dans
des tubes, flacons ou autres rcipients. Pour conserver des
volumes plus importants, utiliser des rcipients de
capacit allant jusqu' 500 ml. Striliser l'autoclave (3.1)
(121 3) C pendant (15 1) min.
Pour l'emploi, faire fondre le milieu, le laisser refroidir
et le maintenir (45 1) C au moyen du bain d'eau (3.5).
Il est recommand de ne pas garder le milieu plus de 4 h
45 C, aprs quoi le milieu doit tre rejet.
6. MODE OPRATOIRE
6.1 Prparation et ensemencement
Prparer l'chantillon, procder aux dilutions et
ensemencer les milieux de cultures selon la mthode de
dnombrement des micro-organismes sur milieu de
culture, lignes directrices gnrales.
Utiliser la mthode par incorporation (la mthode de
dnombrement des micro-organismes sur milieu de
culture, lignes directrices gnrales).
Placer un volume de la prise d'essai (ou de ses dilutions)
n'excdant pas 2 ml dans la bote de ptri, ajouter 15 ml
20 ml de milieu fondu (5.3) et mlanger avec prcaution
par rotation lente.
Laisser le milieu se solidifier. Le temps entre l'addition
de la prise d'essai (ou ses dilutions) et l'addition du milieu
fondu ne doit pas excder 15 min. Ensemencer au moins
une bote par temprature d'incubation.
6.2 Incubation et examen
Retourner les botes et incuber un jeu (36 2) C
pendant (44 4) h. Incuber l'autre jeu (22 2) C
pendant (68 4) h. Examiner les botes aussitt qu'elles
sont retires des tuves. Si cela n'est pas possible, les
conserver (5 3) C et les examiner dans les 48 h.
Rejeter toute bote prsentant une croissance confluente.
6.3 Comptage des colonies
Pour chaque temprature d'incubation, et selon les
procdures dcrites dans la mthode de dnombrement
des micro-organismes sur milieu de culture, lignes
directrices gnrales, compter les colonies prsentes dans
chaque bote et calculer le nombre estim d'units formant
les colonies prsentes dans 1 ml d'chantillon.
12 Joumada Ethania 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 21 23
23 avril 2013

7. EXPRESSION DES RSULTATS

Exprimer les rsultats sous la forme du nombre d'units

formant des colonies par millilitre (UFC/ml) d'chantillon
pour chaque temprature d'incubation.

En l'absence de colonie dans les botes ensemences

avec les volumes d'essai de l'chantillon non dilu,
exprimer le rsultat comme tant non dtect dans un
millilitre. Si les botes ensemences avec les plus fortes
dilutions utilises contiennent plus de 300 colonies,
exprimer les rsultats sous la forme > 300 ou
uniquement en tant que valeurs approximatives.

04
7 Chabane 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 31
16 juin 2013
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 18 Safar 1434 correspondant au
31 dcembre 2012 rendant obligatoire la
mthode de recherche et de dnombrement des
organismes coliformes, organismes coliformes
thermotolrants et des escherichia coli prsums
dans l'eau.
Le ministre du commerce,
Vu la loi n 05-12 du 28 Joumada Ethania 1426
correspondant au 4 aot 2005, modifie et complte,
relative l'eau ;
Vu le dcret prsidentiel n 12-326 du 17 Chaoual 1433
correspondant au 4 septembre 2012 portant nomination
des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu l'arrt interministriel du 22 Dhou El Hidja 1426
correspondant au 22 janvier 2006, modifi et complt,
fixant les proportions d'lments contenus dans les eaux
minrales naturelles et les eaux de source ainsi que les
conditions de leur traitement ou les adjonctions
autorises ;
Vu l'arrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt, relatif aux spcifications
microbiologiques de certaines denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode de recherche et de
dnombrement des organismes coliformes, organismes
coliformes thermotolrants et des escherichia coli
prsums dans l'eau.
Art. 2. Pour la recherche et le dnombrement des
organismes coliformes, organismes coliformes
thermotolrants et des escherichia coli prsums dans
l'eau, les laboratoires du contrle de la qualit et de la
rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet effet
doivent employer la mthode jointe en annexe du prsent
arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
17
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 18 Safar 1434 correspondant au 31
dcembre 2012.
Mustapha BENBADA.
ANNEXE
METHODE DE RECHERCHE ET DE
DENOMBREMENT DES ORGANISMES
COLIFORMES, ORGANISMES COLIFORMES
THERMOTOLERANTS ET DES ESCHERICHIA
COLI PRESUMES.
(Mthode du nombre le plus probable)
La prsente mthode prescrit une technique de
recherche et de dnombrement des organismes coliformes,
des organismes coliformes thermotolrants et des
escherichia coli prsums par culture dans un milieu
liquide dans des tubes multiples et calcul de leur nombre
le plus probable dans l'chantillon.
Cette mthode peut tre applique tous les types d'eau,
mme ceux contenant une quantit apprciable de
particules en suspension.
Le choix des essais utiliss pour la recherche et la
confirmation des organismes du groupe coliforme, y
compris escherichia coli, peut tre considr comme
faisant partie d'une squence continue. L'importance de la
confirmation pour un chantillon donn dpend en partie,
de la nature de l'eau et en partiel des raisons ayant conduit
cet examen. Dans la pratique, la recherche d'escherichia
coli prsums dans l'eau comme indiqu en (1.3) fournit
gnralement une indication sur la pollution fcale
rcente.
1. DFINITIONS
Pour les besoins de la prsente mthode, les dfinitions
suivantes s'appliquent.
1.1 Organismes coliformes :
Organismes capables de former des colonies en
arobiose 35 C 0,5 C ou 37 C 0,5 C sur un
milieu lactos slectif et diffrentiel, avec production
d'acide (et d'aldhyde) dans les 24 h.
1.2 Organismes coliformes thermotolrants :
Organismes coliformes rpondant la dfinition donne
en (1.1), prsentant les mmes proprits de fermentation
dans les 24 h, 44 C 0,25 C ou 44,5 C 0,25 C.
1.3 Escherichia coli prsums :
Organismes coliformes thermotolrants rpondant la
dfinition donne en (1.1) qui produisent, en plus, du gaz
partir du lactose (et du mannitol) ainsi que de l'indole
partir du tryptophane dans les 24 h, soit 44 C 0,25 C,
soit 44,5 C 0,25 C.
05

18 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 31
2. PRINCIPE
Ensemencement d'une srie de tubes essai contenant
un milieu de culture slectif lactos avec des prises d'essai
de l'chantillon dilu ou non.
Examen des tubes essai aprs une incubation de 24 h
et de 48 h 35 C ou 37 C ; repiquage partir de chaque
tube essai montrant une turbidit avec une production de
gaz dans un milieu de confirmation plus slectif et, si l'on
recherche les escherichia coli prsums, sur un milieu sur
lequel peut tre prouve la formation d'indole.
Incubation de ces milieux de confirmation pendant 48 h
au plus 35 C ou 37 C pour la recherche d'organismes
coliformes, et 44 C pendant 24 h au plus pour les
organismes coliformes thermotolrants et les escherichia
coli prsums.
Au moyen de tables statistiques, calcul du nombre le
plus probable (NPP) d'organismes coliformes,
d'organismes coliformes thermotolrants et de escherichia
coli prsums, susceptibles d'tre prsents dans 100 ml de
l'chantillon, partir du nombre de tubes donnant des
rsultats de confirmation positifs.
3. DILUANTS, MILIEUX DE CULTURE ET
RACTIFS
3.1 Produits de base
Pour la prparation des milieux de culture et des
ractifs, utiliser des ingrdients de qualit homogne et
des produits chimiques de qualit analytique ; suivre les
instructions donnes dans "le tableau B" ( Pour des
informations sur la conservation, voir la mthode de
dnombrement des micro-organismes sur milieu de
culture). Il est possible galement d'utiliser des milieux
complets dshydrats, suivre alors la lettre les
instructions les concernant.
Pour la prparation des milieux, utiliser de l'eau distille
ou de l'eau dsionise, exempte de substances susceptibles
d'inhiber la croissance bactrienne dans les conditions de
l'essai.
3.2 Diluant
Pour prparer les dilutions de l'chantillon, utiliser l'un
des diluants recommands dans le "tableau "B." Prparer
le diluant conformment aux instructions donnes dans" le
tableau B.
3.3 Milieux d'isolement
Utiliser un ou plusieurs des milieux de culture suivants :
Les instructions pour la prparation sont donnes dans
"le tableau B".
3.3.1 Bouillon lactos
3.3.2 Bouillon de Mac Conkey
3.3.3 Milieu lactos amlior au glutamate et au
formiate
3.3.4 Bouillon au lauryltryptose (lactose)
06
7 Chabane 1434
16 juin 2013
3.4 Milieux de confirmation
Utiliser un ou plusieurs des milieux suivants :
3.4.1 Milieux pour la production de gaz
3.4.1.1 Bouillon (bili) lactos au vert-brillant
3.4.1.2 Milieu (EC)
3.4.2 Milieu pour la production d'indole ( Eau
tryptone.)
3.4.3 Milieu pour tube essai unique pour
production de gaz et d'indole
Bouillon tryptos au mannitol, au laurylsulfate et au
tryptophane.
3.5 Ractifs
3.5.1 Ractif de Kovacs pour la recherche de l'indole
3.5.2 Ractif l'oxydase pour la recherche de
l'oxydase
4. APPAREILLAGE
Matriel courant de laboratoire microbiologique,
y compris :
4.1 Four air chaud pour strilisation en chaleur
sche et autoclave
Outre l'appareillage livr strile, la verrerie et tout autre
matriel doivent tre striliss conformment aux
instructions donnes dans la mthode de dnombrement
des microorganismes sur milieu de culture.
4.2 Incubateur ou bain d'eau, rglable 35 C
0,5 C ou 37 C 0,5 C.
4.3 Incubateur ou bain d'eau, rglable 44 C
0,25 C ou 44,5 C 0,25 C.
4.4 pH-mtre.
5. CHANTILLONNAGE
Prlever les chantillons et les transmettre au
laboratoire conformment la mthode de dnombrement
des micro-organismes sur milieu de culture.
6. MODE OPRATOIRE
6.1 Prparation de l'chantillon et ensemencement
des milieux
Pour la prparation de l'chantillon et des dilutions et
l'ensemencement des milieux d'isolement avec les prises
d'essai, suivre les instructions donnes dans la mthode de
dnombrement des micro-organismes sur milieu de
culture. Ensemencer des tubes essai contenant un milieu
d'isolement double concentration avec des prises d'essai
de 5 ml ou plus.
7 Chabane 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 31
16 juin 2013
6.2 Incubation des tubes
Faire incuber les tubes ensemencs 35 C 0,5 C ou
37 C 0,5 C pendant 48 h.
6.3 Examen des tubes essai
Examiner les cultures en tubes essai aprs incubation
pendant 18 h 24 h et considrer comme ractions
positives, les tubes prsentant une turbidit due une
croissance bactrienne et la formation de gaz dans les
cloches de Durham, ainsi qu'une production d'acide si le
milieu d'isolement contient un indicateur de pH. Faire
incuber nouveau les tubes essai qui ne prsentent
aucun de ces changements et les examiner nouveau
aprs 48 h pour rechercher une raction positive.
6.4 Essais de confirmation
Il convient de noter que les ractions positives dans les
tubes essai contenant un milieu d'isolement n'indiquent
que la prsence d'organismes coliformes prsums. Il est
donc important de procder des essais de confirmation.
6.4.1 Repiquage, incubation et examen
Faire un repiquage partir de chaque tube de milieu
d'isolement prsentant un rsultat positif dans un ou
plusieurs tubes contenant des milieux de confirmation
(3.4) pour la production de gaz et d'indole.
Note 1 : Si on utilise le bouillon lactos le moins
inhibiteur pour l'isolement, il est recommand de repiquer
sur l'un des deux milieux de confirmation les plus slectifs
[bouillon (bili) lactos au vert-brillant ou bouillon EC]
pour confirmation.
6.4.1.1 Organismes coliformes
Pour confirmer la prsence d'organismes coliformes,
faire incuber un tube essai de bouillon (bili) lactos au
vert-brillant (3.4,1.1) 35 C ou 37 C et rechercher la
production de gaz dans les 48 h.
6.4.1.2 Organismes coliformes thermotolrants et
escherichia coli prsums
Pour confirmer la prsence d'organismes coliformes
thermotolrants, faire incuber un autre tube essai de
milieu EC (3.4.1.2) 44 C pendant 24 h et rechercher la
production de gaz.
Pour confirmer la prsence d'escherichia coli prsums,
faire incuber un tube essai d'eau tryptone (3.4.2) pour
la recherche d'indole 44 C pendant 24 h. Puis ajouter
0,2 ml 0,3 ml de ractif de Kovacs (3.5.1) dans le tube
contenant de l'eau tryptone : l'apparition d'une coloration
rouge aprs l'avoir mlang avec prcaution indique la
prsence d'indole.
19
Note 2 : L'utilisation d'un bouillon tryptos au
mannitol, au laurylsulfate et au tryptophane permet de
montrer la production de gaz et d'indole par les
escherichia coli.
Note 3 : La dtection d'escherichia coli prsums est
considre comme une preuve suffisante de pollution
fcale. Toutefois, des essais complmentaires des
escherichia coli peuvent tre effectus, si ncessaire (6.5).
Note 4 : Lorsqu'on procde des repiquages de
colonies sur membranes dans des tubes de milieux de
confirmation, il est prfrable de repiquer galement sur
bote de milieu nutritif glos pour l'essai l'oxydase.
6.5 Essai l'oxydase
Certaines bactries prsentes dans l'eau peuvent, de
nombreux gards, tre conformes la dfinition des
organismes coliformes, mais elles ne peuvent produire de
gaz partir du lactose qu' des tempratures infrieures
37 C. Elles donnent donc des rsultats ngatifs lors des
essais de confirmation normaliss pour les organismes
coliformes et leur prsence dans l'eau n'est donc pas
considre comme significative. Parce que les espces
d'aromones qui se prsentent naturellement dans l'eau
interfrent seulement une temprature de 37 C et en
dessous, il est seulement ncessaire d'effectuer l'essai
l'oxydase en dterminant des coliformes.
6.5.1 Effectuer l'essai l'oxydase avec des cultures
pures d'organismes en faisant fermenter le lactose,
cultivs sur un milieu nutritif la glose, comme suit :
placer 2 ou 3 gouttes de ractif l'oxydase
nouvellement prpar (3.5.2) sur un papier filtre dans une
boite de ptri ;
avec une tige de verre, un coton-tige ou une boucle
en platine (non en nickel-chrome), taler une partie de la
culture sur le papier filtre prpar (voir note 4) ;
considrer l'apparition d'une coloration bleu violet
fonc dans les 10 s comme une raction positive.
Note 5 : Chaque fois qu'est employ le ractif
l'oxydase, effectuer des essais de contrle avec des
cultures d'organismes connues pour donner une raction
positive (Pseudomonas aeruginosa) ainsi qu'avec une
culture donnant une raction ngative (escherichia coli).
7. EXPRESSION DES RSULTATS
A partir du nombre de tubes de milieu d'isolement ayant
donn des ractions positives aux essais confirmatifs,
calculer, par rfrence aux tables statistiques de la
mthode de dnombrement des micro-organismes sur
milieu de culture, le nombre le plus probable d'organismes
coliformes, d'organismes coliformes thermotolrants et
d'escherichia coli prsums prsents dans 100 ml
d'chantillon.
07

20 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 31
Tableau A
Informations microbiologiques complmentaires
lies l'examen de l'eau et la recherche d'organismes
du groupe coliforme
Pour l'examen de routine de l'eau, le groupe coliforme
peut tre dcrit gnralement en termes microbiologiques
quoique non taxonomiques comme suit :
les organismes coliformes sont des bactries en forme
de btonnets, Gram ngatif, ne formant pas de spores,
prsentant une raction ngative l'oxydase, pouvant
crotre en arobiose, et ventuellement en anarobiose en
prsence de sels bilis (ou autre driv tensio-actif
prsentant des proprits d'inhibition de croissance
similaires), et galement capables de faire fermenter le
lactose (et le mannitol) avec production d'acide, de gaz et
d'aldhyde dans les 48 h lorsqu'on les fait incuber une
temprature comprise entre 35 C et 37 C.
Les organismes coliformes thermotolrants sont des
organismes coliformes qui prsentent les mmes
proprits biologiques et de fermentation lorsqu'on les fait
incuber une temprature de 44 C 44,5 C.
les escherichia coli prsums sont des organismes
coliformes thermotolrants qui sont galement capables de
produire de l'indole partir du tryptophane.
On peut considrer comme un escherichia coli
prsum, un escherichia coli qui donne galement un
rsultat positif lors de l'essai au rouge de mthyle et peut
dcarboxyler de l'acide L-glutamique, mais qui n'est pas
capable de produire de l'actylmthylcarbinol, d'utiliser le
citrate comme seule source de carbone ou de crotre dans
un bouillon au cyanure de potassium (KCN).
Tableau B
Milieux de culture, ractifs et diluants
MILIEU D'ISOLEMENT
Bouillon lactos
Milieu double concentration
Peptone ................................................................... 10 g
Lactose .................................................................... 10 g
Extrait de viande ....................................................... 6 g
Eau distille ...................................................... 1000 ml
dissoudre les ingrdients dans de l'eau bouillante.
ajuster le pH si ncessaire de sorte qu'aprs
strilisation il soit de 6,9 0,2. Prparer un milieu simple
concentration par dilution du milieu double concentration
avec un volume gal d'eau distille.
08
7 Chabane 1434
16 juin 2013
Bouillon de MacConkey
Milieu double concentration.
Sels Bilis ............................................................... 10 g
Peptone ................................................................... 40 g
Lactose .................................................................... 20 g
Chlorure de sodium ................................................ 10 g
Pourpre de bromocrsol [solution thanolique 1%
(V/V)] ................................................................... 2 ml
Eau distille ...................................................... 1000 ml
dissoudre la peptone, le chlorure de sodium et les
sels bilis dans l'eau en chauffant et conserver 4 C
pendant toute une nuit. Filtrer alors que le mlange est
froid, ajouter le lactose et dissoudre.
ajuster le pH 7,4 0,2 et ajouter le pourpre de
bromocrso1. Obligatoire
Milieu simple concentration
Prparer le milieu simple concentration par dilution
du milieu double concentration avec un volume gal d'eau
distille ou le prparer directement en divisant par deux la
concentration des ingrdients.
Rpartir le milieu simple concentration par volumes
de 5 ml et le milieu double concentration par volumes de
10 ml ou 50 ml dans des tubes essai ou des flacons
contenant une cloche de Durham. Placer en autoclave
115 C pendant 10 min.
Milieu lactos amlior au glutamate et au formiate
Milieu double concentration
Lactose .................................................................... 20 g
Sel de sodium de l'acide L( +) glutamique .......... 12,7 g
Monochlorhydrate de L(+) arginine .................. 0,048 g
Acide L( -) aspartique .......................................... 0,04 g
L(-) Cystine ......................................................... 0,04 g
Formiate de sodium ............................................... 0,5 g
Monohydrognophosphate de potassium .............. 1,8 g
Chorure d'armmonium .............................................. 5 g
Sulfate de magnsium (MgS04, 7H20) ................ 0,02 g
Chlorure de calcium (CaCI2, 2H20) .................... 0,02 g
Cristaux de citrate de fer (III) .............................. 0,02 g
Thiamine (hydrochlorure d'aneurine) ................ 0,002 g
Acide nicotinique ............................................... 0,002 g
Acide pantothnique .......................................... 0,002 g
Pourpre de bromocrsol [ solution 1 % (m/m) dans
l'thanol] ............................................................... 2 ml
Eau distille, complter ................................. 1000 ml
7 Chabane 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 31
16 juin 2013
Le milieu est prpar de prfrence par quantits de
10 litres ou plus, s'il n'est pas rparti dans des tubes essai
immdiatement, il convient de ne pas incorporer le lactose
et la thiamine et de les ajouter uniquement avant
l'utilisation. Il est plus facile d'ajouter certains ingrdients
sous forme de solutions spares prpares comme suit :
Solution 1
Monochlorate de L(+) arginine ............................ 0,4 g
Acide L(-) aspartique .......................................... 0,48 g
Eau distille .......................................................... 50 ml
Chauffer pour dissoudre.
Solution 2
L(-) cystine ............................................................ 0,4 g
hydroxyde de sodium (5 mol/l) ............................ 10 ml
Eau distille .......................................................... 90 ml
Chauffer pour dissoudre.
Solution 3
Acide nicotinique ................................................. 0,02 g
Acide pantothnique ............................................ 0,02 g
Eau distille ............................................................ 5 ml
Chauffer froid.
Solution 4
Cristaux de citrate de fer ....................................... 0,2 g
Eau distille .......................................................... 10 ml
Chauffer pour dissoudre.
Solution 5
Chlorure de calcium (CaCl2, 2H20) .......................... 5g
Eau distille ........................................................ 100 ml
Acide chlorhydrique concentr ........................... 0,1 ml
Dissoudre froid et striliser 121 C pendant 20 min.
Conserver comme solution mre.
Solution 6
Solution de thiamine 0,1 % strile dans de l'eau
distille.
Il est prfrable de prparer cette solution en ajoutant le
contenu d'une ampoule (100 mg) de faon aseptique 99
ml d'eau distille strile. Cette solution doit tre conserve
4 C et ce qui reste de cette solution limin aprs un
dlai de 6 semaines.
09
21
Afin de prparer 10 l de milieu double concentration,
dissoudre les quantits appropries de sel de sodium,
acide L( +) glutamique, de formiate de sodium,
monohydrognophosphate de potassium, de chlorure
d'ammonium et de sulfate de magnsium dans 9 l d'eau
distille chaude. Puis ajouter la totalit des solutions 1, 2,
3 et 4 et 4 ml de la solution 5. Ajuster le pH 6,8 ou plus,
si ncessaire, de sorte que le pH final aprs strilisation
soit de 6,7. Si le mme matriel et les mmes mthodes de
strilisation sont utiliss, il devrait toujours se produire la
mme variation de pH au cours de la strilisation. Des
essais prliminaires peuvent tre ncessaires pour tablir
le pH correct avant strilisation.
Aprs ajustement du pH, ajouter 20 ml d'une solution
thanolique 1% de pourpre de bromocrsol. Complter
pour obtenir un volume final de 10 l. Ceci devrait
ncessiter environ 810 ml d'eau distille. Si le milieu
entier n'est pas utilis immdiatement, le mettre en
bouteille de 500 ml et le placer l'autoclave 115 C
pendant 10 min. Pour l'emploi, ajouter si ncessaire, une
quantit de lactose et de solution de thiamine (solution 6),
laisser dissoudre, puis rpartir en prises de 10 ml et 50 ml.
Chaque tube essai ou flacon doit contenir une cloche de
Durham. Il est important de s'assurer, qu'aprs passage
l'autoclave et avant l'emploi, la cloche de Durham soit
compltement remplie de milieu. Sinon, on risque
d'obtenir un rsultat positif erron pour la production de
gaz. Striliser 115 C pendant 10 min ou placer dans
une tuve 100 C durant 30 min pendant trois jours
conscutifs.
Milieu simple concentration
prparer un milieu simple concentration en diluant le
milieu double concentration avec un gal volume d'eau
distille et rpartir, en volume de 5 ml, dans des tubes
contenant une cloche de Durham ;
striliser 115 C pendant 10 min ou placer dans
une tuve 100 C durant 30 min pendant trois jours
conscutifs
Note 6 : L'addition d'hydrolysat de casine 0,1%
(m/m) exempt de vitamine peut donner des rsultats plus
rapides.
Bouillon tryptos au laurylsulfate
Milieu double concentration
Tryptose .................................................................. 40 g
Lactose .................................................................... 10 g
Chlorure de sodium ................................................ 10 g
Monohydrognophosphate de potassium .............. 5,5 g
Dihydrognophosphate de potassium .................... 5,5 g
Laurylsulfate de sodium de haute puret ............... 0,2 g
Eau distille ...................................................... 1000 ml

22 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 31
ajouter le tryptose, le chlorure de sodium, le lactose
et les phosphates l'eau et chauffer pour dissoudre ;
ajouter le laurylsulfate de sodium et mlanger
doucement pour viter la formation de mousse ;
ajuster le pH 6,8 0,2 ;
prparer un milieu simple concentration en diluant le
milieu double concentration avec un volume gal d'eau
distille ;
rpartir le milieu simple concentration en volumes
de 5 ml et le milieu double concentration en volumes de
10 ml et de 50 ml. Chaque tube essai ou flacon doit
contenir une cloche de Durham ;
placer l'autoclave 115 C pendant 10 min ;
MILIEUX DE CONFIRMATION
Bouillon (bili) lactos au vert-brillant (pour production
de gaz)
Peptone ................................................................... 10 g
Lactose .................................................................... 10 g
Bile de buf dshydrate ....................................... 20 g
Vert-brillant [solution 0,1 %( m/m)] ................. 13 ml
Eau distille, complter ................................. 1000 ml
dissoudre la peptone dans 500 ml d'eau distille ;
ajouter 20g de bile de buf dshydrate dissoute
dans 200 ml d'eau distille. Cette solution devrait avoir un
pH compris entre 7,0 et 7,5 ;
complter avec de l'eau distille environ 975 ml ;
ajouter le lactose et ajuster le pH 7,4 ;
ajouter la solution de vert-brillant et complter avec
de l'eau distille 1000 ml ;
rpartir en prises de 5 ml dans des tubes essai
contenant des cloches de Durham renverses et placer
l'autoclave 115 C pendant 10 min.
Milieu (EC) (pour production de gaz)
Tryptose ou trypticase ............................................ 20 g
Lactose ...................................................................... 5 g
Mlange de sels bilis ou sels bilis n 3 .............. 1,5 g
Monohydrognophosphate de potassium ................. 4 g
Dihydrognophosphate de potassium .................... 1,5 g
Chlorure de sodium .................................................. 5 g
Eau distille ...................................................... 1000 ml
Avant strilisation, rpartir dans des tubes essai de
sorte que le milieu recouvre au moins partiellement la
cloche de Durham aprs strilisation.
Le pH devrait tre de 6,9 aprs strilisation.
10
7 Chabane 1434
16 juin 2013
Eau tryptone (pour raction l'indole)
Certaines peptones donnant des rsultats satisfaisants
dans les essais 35 C ou 37 C ne sont pas satisfaisantes
pour l'essai l'indole 44 C. La tryptone s'est avre
satisfaisante et est recommande.
Tryptone ................................................................. 20 g
Chlorure de sodium .................................................. 5 g
Eau distille ...................................................... 1000 ml
dissoudre les ingrdients dans l'eau et ajuster le pH
7,5 ;
Rpartir en volume de 5 ml et placer l'autoclave
115 C pendant 10 min ;
Note 7 : L'addition de tryptophane D ou DL 0,1%
(m/m) peut amliorer la performance du milieu.
Bouillon tryptos au mannitol, au laurylsulfate et au
tryptophane
(Flacon unique pour production de gaz et d'indole)
Tryptose .................................................................. 20 g
Manitol ..................................................................... 5 g
Chlorure de sodium .................................................. 5 g
Monohydrognophosphate de potassium ........... 2, 75 g
Dihydrognophosphate de potassium .................. 2,75 g
Laurylsulfate de sodium ........................................ 0,1 g
Tryptophane L(-) ................................................... 0,2 g
Eau distille ...................................................... 1000 ml
ajouter l'eau le tryptose, le chlorure de sodium, le
mannitol, les phosphates et le tryptophane et chauffer pour
dissoudre ;
ajouter le laurylsulfate de sodium et mlanger
doucement pour viter la formation de mousse ;
ajuster le pH pH 6,8 0,2 ;
rpartir par volumes de 5 ml dans des tubes
contenant une cloche de Durham ;
placer l'autoclave 115 C pendant 10 min.
RACTIFS
Ractif de Kovacs pour l'indole
p-Dimthylaminobenzaldhyde ................................ 5 g
Alcool amylique ................................................... 75 ml
Acide chlorhydrique (p = 1,18 g/ml) .................... 25 ml
7 Chabane 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 31 23
16 juin 2013

dissoudre l'aldhyde dans l'alcool amylique ; dissoudre les ingrdients et rpartir en volumes
utilisables ;
ajouter l'acide concentr avec soin. Mettre l'abri de
la lumire et conserver 4 C. striliser l'autoclave 121 C 1 C pendant 15
min. Le pH final devrait tre de 7,0 0,1.
Note 8 : La coloration du ractif doit aller du jaune clair
au brun clair; certains chantillons d'alcool amylique Solution tampon au phosphate
s'avrent insatisfaisants et donnent une coloration fonce
avec l'aldhyde.
Dihydrognophosphate de potassium ............... 42,5 mg
Ractif l'oxydase
Chlorure de magnsium ..................................... 190 mg
Dichlorate de p-phnylne diamine ....................... 0,1 g
Eau distille ...................................................... 1000 ml
Eau distille .......................................................... 10 ml

Ce ractif ne se conserve pas et doit donc tre prpar en Prparation

petites quantits avant chaque utilisation.
a) Solution de phosphate
DILUANTS
Diluant la peptone (0,1 %) dissoudre 34 g de phosphate dans 500 ml d'eau
distille ;
Peptone ..................................................................... 1 g
ajuster le pH 7,2 0,5 avec une solution
Eau distille ...................................................... 1000 ml d'hydroxyde de sodium 1 mol/l et complter 1000 ml
avec de l'eau distille.
dissoudre la peptone dans environ 950 ml d'eau ;
ajuster le pH avec la solution d'hydroxyde de sodium b) Solution de chlorure de magnsium
ou une solution d'acide chlorhydrique (l mol/l) de sorte
qu'aprs strilisation, il soit de 7,0 0,1 ; dissoudre 38 g de chlorure de magnsium dans
1000 ml d'eau distille.
complter avec de l'eau pour obtenir 1000 ml,
rpartir en volumes utilisables et placer l'autoclave Solution finale
121 C 1 C pendant 15 min.
Solution saline peptone Pour l'utilisation, ajouter 1,25 ml de la solution de
phosphate (a) et 5,0 ml de solution de chlorure de
Peptone ..................................................................... 1 g magnsium (b) 1000 ml d'eau distille. Rpartir en
volumes utilisables et striliser l'autoclave 121 C
Chlorure de sodium ............................................... 8,5 g 1 C pendant 15 min. Le pH final doit tre de 7,0 0,1.
Eau distille ...................................................... 1000 ml
Glose nutritive

dissoudre les constituants dans environ 950 ml d'eau

porte bullition ; Extrait de viande .................................................... 1,0 g

ajuster le pH avec l'hydroxyde de sodium ou la Peptone .................................................................. 1,0 g

solution d'acide chlorhydrique (l mol/l) de sorte qu'aprs
strilisation il soit de 7,0 0,1 ; Chlorure de sodium ................................................. 5 g

complter avec de l'eau pour obtenir 1000 ml, Glose ..................................................................... 15 g

rpartir en volumes utilisables et placer l'autoclave
121 C 1 C pendant 15 min.
verser les ingrdients dans l'eau et chauffer pour
Solution de Ringer (dilue au quart) dissoudre ;

Chlorure de sodium ............................................. 2,25 g ajuster le pH environ 8,2 au moyen d'hydroxyde de

sodium (l mol/l) et faire bouillir pendant 10 min ;
Chlorure de potassium ..................................... 0, 1 05 g
Chlorure de calcium (anhydre) ............................ 0,12 g clarifier par filtration et rgler le pH 7,2 7,4 ;

Hydrognocarbonate de sodium ......................... 0,05 g rpartir dans des flacons de 100 ml de

Eau distille ...................................................... 1000 ml capacit et passer l'autoclave 121 C 1 C
pendant 15 min.

11

22 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 36
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 23 Rajab 1433 correspondant au 13 juin
2012 rendant obligatoire la mthode de recherche
et de dnombrement des spores de
micro-organismes anarobies sulfito-rductrices
(Clostridia).
Le ministre du commerce,
Vu la Loi n 05-12 du 28 Joumada Ethania 1426
correspondant au 4 aot 2005, modifie et complte,
relative l'eau ;
Vu le dcret prsidentiel n 10-149 du 14 Joumada
Ethania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu l'arrt interministriel du 22 Dhou El Hidja
1426 correspondant au 22 janvier 2006, modifi et
complt, fixant les proportions d'lments contenus dans
les eaux minrales naturelles et les eaux de source ainsi
que les conditions de leur traitement ou les adjonctions
autorises ;
Vu l'arrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt, relatif aux spcifications
microbiologiques de certaines denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode de recherche et de
dnombrement des spores micro-organismes anarobies
sulfito-rductrices.
Art. 2. Pour la recherche et le dnombrement des
spores micro-organismes anarobies sulfito-rductrices,
les laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent
employer la mthode jointe en annexe du prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 23 Rajab 1433 correspondant au 13 juin
2012.
Mustapha BENBADA.
12
9 Ramadhan 1434
18 juillet 2013
ANNEXE
MTHODE DE RECHERCHE ET DE
DNOMBREMENT DES SPORES DE
MICRO-ORGANISMES ANAROBIES
SULFITO-RDUCTEURS (CLOSTRIDIA)
La prsente mthode spcifie la recherche et le
dnombrement des spores de micro-organismes
anarobies sulfito-rducteurs (clostridia) par
enrichissement dans un milieu liquide.
Le principe de la mthode est applicable tous les types
d'eau, y compris les eaux troubles.
1- DEFINITION
Pour les besoins de cette mthode, la dfinition suivante
est applicable :
clostridia: micro-organismes anarobies formant des
spores et sulfito-rducteurs, appartenant la famille des
Bacillaces et au genre Clostridium.
2-PRINCIPE
La recherche des spores de micro-organismes
anarobies sulfito-rducteurs (clostridia) dans un
chantillon d'eau de volume dtermin, passe par les
tapes suivantes ;
2.1 - Slection des spores
Slection des spores dans l'chantillon, par chauffage
pendant une priode de temps suffisante pour que les
bactries vgtatives soient dtruites.
2.2 - Culture par enrichissement
Recherche et numration des spores des organismes
anarobies sulfito-rducteurs par inoculation de volumes
de l'chantillon dans les milieux liquide d'enrichissement,
suivie de l'incubation 37 1C pendant 44 4h dans des
conditions anarobies.
3 - MILIEUX DE CULTURE ET REACTIFS
3.1 - Principaux matriaux
Pour amliorer la reproductibilit des rsultats, il est
recommand d'utiliser, pour la prparation des diluants et
des milieux de culture, des composants de base
dshydrats ou des milieux complets dshydrats. De la
mme faon, des prparations commerciales de ractifs
peuvent tre utilises. Les prescriptions du fabricant
doivent tre suivies scrupuleusement.
Les produits chimiques utiliss pour la prparation des
milieux de culture et des ractifs doivent tre de qualit
analytique reconnue.
L'eau utilise doit tre de l'eau distille ou
dminralise, exempte de substances susceptibles
d'inhiber la croissance des micro-organismes dans les
conditions de l'essai.
Les mesures du pH doivent tre effectues au pHmtre,
et rapportes la temprature de 25C.
9 Ramadhan 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 36 23
18 juillet 2013

Si les milieux de culture prpars ne sont pas utiliss
extemporanment, ils doivent, sauf spcification contraire,
tre conservs l'obscurit environ 4C pendant 1 mois
au maximum.
3.2 - Milieux de culture et diluant
3.2.1 - Diluant
Utiliser un des diluants indiqus dans la mthode de
dnombrement des micro-organismes dans le milieu de
culture.
3.2.2 - Milieu renforc spcial pour les clostridia
(DRCM)
3.2.2.1 - Milieu de base simple concentration
Composition
Viande digre dans la peptone tryptique........... 10 g
Extrait de viande................................................. 10 g
Extrait de levure.................................................. 1,5 g
Amidon................................................................ 1 g
Actate de sodium hydrat.................................. 5 g
Glucose................................................................ 1 g
Chlorhydrate de L - cystine................................. 0,5 g
Eau..................................................................... 1000 ml
Prparation
Mlanger la peptone, l'extrait de viande, l'actate de
sodium ainsi que l'extrait de levure 800 ml d'eau.
Avec les 200 ml d'eau distille qui restent, prparer une
solution d'amidon comme suit : mlanger l'amidon avec
un peu d'eau froide de manire faire une pte. Chauffer
le reste de l'eau jusqu' ce qu'elle commence bouillir et
l'introduire lentement dans la pte, tout en agitant
constamment.
Ajouter alors cette solution d'amidon au premier
mlange et chauffer jusqu' ce que le point d'bullition
soit atteint et que le mlange se dissolve.
A la fin, ajouter le glucose et le chlorhydrate de
L-cystine : dissoudre.
Transvaser des aliquotes, respectivement, de 10 ml et de
50 ml du milieu, dans des flacons avec bouchons vis, de
capacits respectivement de 25 ml et 100 ml.
Striliser l'autoclave 121 1 C pendant 15 mn.
3.2.3 - sulfite de sodium ( Na2S203 ), solution
4 % ( m/m).
Dissoudre 4 g de sulfite de sodium anhydre dans 100 ml
d'eau. Striliser par filtration. Conserver entre 2 et 5 C.
Il est conseill de prparer une nouvelle solution tous
les 14 jours.
3.2.4 - Citrate de fer ( III ) ( C6H5O7Fe ) , solution
7% (m/m).
Dissoudre 7 g de citrate de fer (III) dans 100 ml d'eau,
striliser par filtration.
Conserver entre 2 et 5 C.
Il est conseill de prparer une nouvelle solution tous
les 14 jours.
3.2.5 - Milieu complet
3.2.5.1 - Le jour de l'analyse, mlanger des volumes
gaux des solutions de sulfite de sodium (3.2.3) et de
citrate de fer (III) (3.2.4).
3.2.5.2 - Ajouter 0,5 ml du mlange (3.2.5.1) dans
chaque flacon de milieu de concentration simple (3.2.2.1)
qui vient d'tre chauff et refroidir.
3.2.5.3 - Ajouter 0,4 ml du mlange ( 3.2.5.1 ) chaque
volume de 10 ml et 2 ml du mlange chaque volume de
50 ml du milieu double concentration, ces volumes tant
traits de manire semblable.
4- APPAREILLAGE ET VERRERIE DE
LABORATOIRE
Verrerie et matriel de laboratoire couramment
employs pour la bactriologie, sont :
4.1 - Flacons ou fioles avec bouchons vis, en verre ou
borosilicat, de capacits 200 ; 100 et 25 ml.
4.2 - Pipettes volumtriques, de capacits 10 et 1 ml.
4.3 - Bains d'eau, contrles thermiquement.
4.4 - Tubes essai, de 150 mm x 13 mm.
4.5 - Fil de fer.
4.6 - Incubateurs, rglables 37 1C.

Ajuster le pH en le faisant passer de 7, 1 7, 2 avec une 5- ECHANTILLONNAGE

solution d'hydroxyde de sodium 1 mol / 1.
L'chantillonnage se fait dans des conditions
Transvaser une aliquote de 25 ml du milieu dans des appropries.
flacons avec bouchons vis de 25 ml de capacit.
6- MODE OPERATOIRE
Striliser l'autoclave 121 1 C pendant 15 min.
6.1 - Traitement des chantillons
3.2.2.2 - Milieu de base double concentration
Se rfrer la mthode de dnombrement des
Prparer le milieu de base double concentration comme micro-organismes sur milieu de culture en ce qui concerne
en 3.2.2.1, mais rduire le volume d'eau distille de la mthode suivre pour la conservation et le traitement
moiti. des chantillons.

13
 9 Ramadhan 1434
24 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 36 18 juillet 2013

6.2 - Slection des spores (technique)

Avant qu'il soit procd l'essai, l'chantillon d'eau doit

tre chauff dans un bain d'eau 75 5C pendant 15 mn
partir du moment o cette temprature a t atteinte. Un
flacon similaire contenant le mme volume d'eau que
celui de l'chantillon pour essai doit tre utilis
paralllement comme tmoin afin de vrifier le temps de
chauffage ncessaire. La temprature de l'eau dans le
flacon tmoin peut tre enregistre de manire permanente
l'aide d'un thermomtre.

6.3 - Inoculation et incubation

Ajouter 50 ml de l'chantillon (6.2) un flacon

capuchon vis contenant 50 ml du milieu double
concentration (3.2.5.3) .

Ajouter 10 ml de l'chantillon (6.2) une srie de cinq

flacons capuchon vis de 25 ml contenant 25 ml du
milieu double concentration (3.2.5.3).

Ajouter 1 ml de l'chantillon (6.2) une srie de cinq

flacons capuchon vis de 25 ml contenant 25 ml du
milieu simple concentration (3.2.5.2).

Si ncessaire, ajouter 1 ml d'une dilution au 1/10 de

l'chantillon (6.2) une srie de cinq flacons capuchon
vis contenant 25 ml du milieu simple concentration
(3.2.5.2).

Afin de procder un examen qualitatif de 100 ml d'eau

potable ou d'eau en bouteille sans faire un comptage du
NPP, utiliser une fiole de 200 ml contenant un mlange de
100 ml du milieu double concentration (3.2.5.3 ) et de
100 ml de l'chantillon ( 6.2 ) .

Si ncessaire , remplir tous les flacons avec le milieu

simple concentration ( 3.2.5.2 ) de faon amener le
liquide au niveau du col et s'assurer qu'il ne renferme
qu'un trs petit volume d'air; fermer alors les flacons
hermtiquement ou incuber dans des conditions
anarobies.

Incuber les flacons inoculs 37 C 1 C pendant

44 4 h.

Note : Des volumes contenant du bouillon de culture

dans des flacons en verre hermtiquement ferms peuvent
exploser en raison de la production de gaz . L'utilisation
d'un fil de fer chauff au rouge et plac dans le milieu
avant incubation peuvent favoriser l'anarobiose.

6.4 - Interprtation

Les flacons dans lesquels on observe un noircissement

rsultant de la rduction de sulfite et de la prcipitation du
sulfure de fer (II) doivent tre considrs comme tant
positifs.

7- EXPRESSION DES RESULTATS

Exprimer les rsultats en conformit avec la mthode de

dnombrement des micro-organismes sur milieu de
culture.

14
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 51
22
Arrt du 21 Moharram 1434 correspondant au 5
dcembre 2012 rendant obligatoire la mthode
de dtection et de dnombrement de
Pseudomonas aeruginosa dans l'eau par filtration
sur membrane.
Le ministre du commerce,
Vu la loi n 05-12 du 28 Joumada Ethania 1426
correspondant au 4 aot 2005, modifie et complte,
relative l'eau ;
Vu le dcret prsidentiel n 12-326 du 17 Chaoual 1433
correspondant au 4 septembre 2012 portant nomination
des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05 - 465 du 4 Dhou El Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu l'arrt interministriel du 22 Dhou El Hidja 1426
correspondant au 22 janvier 2006, modifi et complt,
fixant les proportions d'lments contenus dans les eaux
minrales naturelles et les eaux de source ainsi que les
conditions de leur traitement ou les adjonctions
autorises ;
Vu l'arrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt, relatif aux spcifications micro
biologiques de certaines denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire la mthode de dtection et
de dnombrement de Pseudomonas aeruginosa dans l'eau
par filtration sur membrane.
Art. 2. Pour la dtection et le dnombrement de
Pseudomonas aeruginosa dans l'eau par filtration sur
membrane, les laboratoires du contrle de la qualit et de
la rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet
effet doivent employer la mthode jointe en annexe du
prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 21 Moharram 1434 correspondant au
5 dcembre 2012.
Mustapha BENBADA.
culture et des diluants. Prparer le milieu comme suit et
ANNEXE
Mthode de dtection et de dnombrement de
Pseudomonas aeruginosa dans l'eau par filtration sur
membrane
La prsente mthode spcifie une technique permettant
d'isoler et de dnombrer Pseudomonas aeruginosa dans
des chantillons d'eau embouteille, par filtration sur
8 Dhou El Hidja 1434
13 octobre 2013
membrane. Cette mthode peut galement tre
applique d'autres types d'eau prsentant une faible
flore interfrente, par exemple les eaux de piscine et
les eaux destines la consommation humaine.
1. DFINITION
Pour les besoins du prsent document, la dfinition
suivante s'applique.
1.1 Pseudomonas aeruginosa
Micro-organismes se dveloppant sur des milieux
slectifs contenant du ctrimide et produisant de la
pyocyanine ou micro-organismes se dveloppant sur des
milieux slectifs contenant du ctrimide, oxydase
positive, donnant lieu une fluorescence sous
rayonnement ultraviolet (360 20) nm et galement
capables de produire de l'ammoniac partir
d'actamide.
2. PRINCIPE
2.1 Filtration
Un volume mesur de l'chantillon d'eau ou une dilution
de l'chantillon est filtr sur une membrane filtrante de
porosit 0,45 m. La membrane filtrante est place sur le
milieu slectif et incube dans les conditions spcifies
pour le milieu.
2.2 Dnombrement
Le nombre de Pseudomonas aeruginosa prsums est
obtenu par comptage du nombre de colonies
caractristiques formes sur la membrane filtrante aprs
incubation. Les colonies produisant de la pyocyanine sont
considres comme Pseudomonas aeruginosa confirms
mais les colonies qui produisent une fluorescence ou
celles de couleur brun rougetre ncessitent une
confirmation.
2.3 Confirmation
Repiquage des colonies confirmer partir de la
membrane sur des botes de glose nutritive (mais voir
annexe B). Aprs incubation, les cultures qui ne
prsentaient initialement pas de fluorescence sont
soumises au test de recherche de l'oxydase, puis les
cultures oxydase positive sont soumises au test de
production de fluorescine et examines pour dceler leur
aptitude ventuelle produire de l'ammoniac partir
d'actamide.
Les cultures qui prsentaient initialement une
fluorescence sont examines pour dceler leur aptitude
ventuelle produire de l'ammoniac partir d'actamide.
3. DILUANTS, MILIEUX DE CULTURE ET
RACTIFS
Sauf spcifications contraires, utiliser des ractifs de
qualit analytique pour la prparation des milieux de
ajouter les agents slectifs aux concentrations donnes ou
utiliser des milieux et ractifs disponibles dans le
commerce, prpars conformment aux instructions du
fabricant. Prparer les milieux et ractifs en utilisant de
l'eau distille ou de l'eau de puret quivalente et exempte
de substances pouvant inhiber la croissance dans les
conditions de l'essai.
15
8 Dhou El Hidja 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 51
13 octobre 2013
3.1 Milieu de culture
Pour dterminer Pseudomonas aeruginosa, utiliser le
milieu suivant :
3.1.1 Base glose pour Pseudomonas glose CN
3.1.1.1 Composition
Peptone de glatine................................................16,0 g
Hydrolysat de casine............................................10,0 g
Sulfate de potassium
(Anhydre) (K2SO4)................................................10,0 g
Chlorure de magnsium
(Anhydre) (MgCl2)..................................................1,4 g
Glycrol..................................................................10 ml
Glose.......................................................11,0 g 18,0 g
Eau (distille ou quivalent)..............................1 000 ml
Note La quantit de glose requise dpend du
pouvoir glifiant. Respecter les instructions du fabricant
de la glose utilise.
Supplment CN
Bromure d'hexadcyltrimthyl ammonium
(ctrimide)...................................................................0,2 g
Acide nalidixique.................................................0,015 g
3.1.1.2 Prparation
Mettre en suspension la peptone, l'hydrolysat de
casine, le sulfate de potassium, le chlorure de magnsium
et la glose dans 1 000 ml d'eau distille (ou l'quivalent).
Ajouter 10 ml de glycrol. Porter bullition jusqu'
dissolution complte et striliser l'autoclave
(l213) C pendant 15 min. Laisser le milieu refroidir
(45 50) C.
Ajouter le supplment CN rhydrat dans 2 ml d'eau
distille strile, bien mlanger et ajouter au milieu de base
strile fondu. Mlanger de nouveau et verser dans des
botes de Petri striles de faon obtenir une paisseur
minimale de glose de 5 mm. Il convient que le pH final
du milieu solidifi soit gal 7,1 0,2 25 C. Conserver
les botes ainsi prpares l'abri de la lumire, en vitant
toute dessiccation, une temprature de (5 3) C et les
utiliser dans un dlai d'un mois. Ne pas conserver la
glose fondue pendant plus de 4 h. Ne pas faire fondre de
nouveau le milieu.
3.2 Milieux de confirmation et ractifs
3.2.1 Milieu de King B
3.2.1.1 Composition
Peptone...................................................................20,0 g
Glycrol...................................................................10 ml
Hydrognophosphate
de potassium (K2HPO4)...........................................1,5 g
Sulfate de magnsium heptahydrat
(MgSO4,7H2O).........................................................1,5 g
Glose.....................................................................15,0 g
Eau (distille ou quivalent)..............................1 000 ml
16
23
3.2.1.2 Prparation
Dissoudre les composants dans l'eau par chauffage.
Laisser refroidir une temprature de (45 50) C et
ajuster le pH 7,2 0,2 25 C, en utilisant soit de l'acide
chlorhydrique, soit de l'hydroxyde de sodium. Rpartir le
milieu en aliquotes de 5 ml dans des tubes de culture
bouchs et autoclavs (121 3) C pendant 15 min.
Laisser les tubes refroidir et se solidifier en position
incline.
Conserver l'abri de la lumire (5 3) C et les
utiliser dans les trois (3) mois.
3.2.2 Bouillon d'actamide
3.2.2.1 Composition
Solution A
Dihydrognophosphate de
potassium (KH2PO4)................................................1,0 g
Sulfate de magnsium (anhydre) (MgSO4).............0,2 g
Actamide................................................................2,0 g
Chlorure de sodium (NaCI).....................................0,2 g
Eau (distille ou quivalent, exempte
d'ammoniac)..............................................................900 ml
Dissoudre les composants dans l'eau et ajuster ensuite le
pH 7,0 0,5, 25 C, en utilisant soit de l'acide
chlorhydrique, soit de l'hydroxyde de sodium.
Attention - L'actamide est cancrigne et irritant.
Des prcautions particulires doivent donc tre prises
lors de la pese, de la prparation et de la mise au
rebut du milieu.
Solution B
Molybdate de sodium
(Na2MoO4, 2H2O)...................................................0,5 g
Sulfate de fer heptahydrat
(FeSO4,7H2O)........................................................0,05 g
Eau........................................................................100 ml
3.2.2.2 Prparation
Pour prparer le bouillon d'actamide, ajouter 1 ml de la
solution (B) 900 ml d'une solution (A) frachement
prpare (3.2.2.1). Ajouter de l'eau sous agitation
constante jusqu' obtention d'un volume total de 1 litre.
Rpartir ce mlange en aliquotes de 5 ml dans des tubes
de culture. Boucher les tubes et les striliser l'autoclave
(121 3) C pendant 15 min. Conserver l'abri de la
lumire (5 3) C et les utiliser dans les trois (3) mois.
3.2.3 Glose nutritive
3.2.3.1 Composition
Peptone.....................................................................5,0 g
Extrait de viande......................................................1,0 g
Extrait de levure.......................................................2,0 g
Chlorure de sodium (NaCl)......................................5,0 g
Glose.....................................................................15,0 g
Eau.....................................................................1 000 ml
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 51 8 Dhou El Hidja 1434
24 13 octobre 2013

3.2.3.2 Prparation 4.4 Membranes filtrantes striles, ayant une porosit

nominale de 0,45 m.
Dissoudre les composants dans l'eau par chauffage.
Striliser l'autoclave (121 3) C pendant 15 min. Il 5. ECHANTILLONNAGE
convient que le pH du milieu ainsi prpar et solidifi soit
gal 7,4 0,2 25 C. Scher les botes pour liminer
toute humidit excessive de la surface, avant utilisation. L'chantillonnage se fait dans les conditions
Conserver les botes ainsi prpares l'abri de la appropries.
lumire (5 3) C et les utiliser dans un dlai d'un
mois. 6. MODE OPRATOIRE
3.2.4 Ractif pour la recherche de l'oxydase 6.1 Gnralits

3.2.4.1 Composition Appliquer la technique de filtration sur membrane

Dichlorhydrate dettramthyle-p-
phnylnediamine.....................................................0,1 g
Eau..........................................................................10 ml
3.2.4.2 Prparation
Immdiatement avant utilisation, dissoudre le
dichlorhydrate de ttramthyle-p-phnylnediamine dans
l'eau et mettre l'abri de la lumire. Ce ractif n'tant pas
stable, le prparer en petites quantits juste avant de
l'utiliser.
Il est galement possible d'utiliser des tests oxydase
disponibles dans le commerce.
3.2.5 Ractif de Nessler
3.2.5.1 Composition
Chlorure mercurique (HgCi2)....................................10 g
Iodure de potassium (KI).............................................7 g
Hydroxyde de sodium (NaOH).................................16 g
Eau (exempte d'ammoniac).......................jusqu' 100 ml
Dissoudre 10g de HgCi2 et 7 g de KI dans une petite
quantit d'eau, puis en agitant, ajouter ce mlange
lentement une solution d'eau froide de 16 g de NaOH
dissous dans 50 ml d'eau. Diluer 100 ml. Conserver dans
de la verrerie borosilicate ferme par un bouchon en
caoutchouc l'abri de la lumire du soleil, pendant une
dure maximale d'un an.
Note : Le chlorure mercurique (HgCl2) est toxique -
viter toute ingestion.
4. APPAREILLAGE ET VERRERIE
Utiliser le matriel courant des laboratoires de
microbiologie.
4.1 Verrerie
Avant utilisation, striliser toute la verrerie
(170 5) C pendant 1 h, au four ou (121 3) C
pendant 15 min, l'autoclave.
4.2 Incubateur, rglable (36 2) C.
4.3 Lampe rayonnement ultraviolet, pouvant
mettre un rayonnement d'une longueur d'onde de
(360 20) nm.
dcrite dans la mthode de dnombrement des
micro-organismes sur milieu de culture, lignes directrices
gnrales.
6.2 Filtration sur membrane
Filtrer des volumes de l'chantillon d'eau ou des
portions d'une dilution sur une membrane filtrante strile
en esters de cellulose de diamtre de pore nominal de
0,45 m. Comme spcifi dans la mthode de
dnombrement des micro-organismes sur milieu de
culture, lignes directrices gnrales, placer chaque
membrane sur une bote de Petri contenant de la glose
avec supplment CN (3.1) en veillant ne pas
emprisonner d'air sous la membrane.
6.3 Incubation des botes
Incuber les botes de Petri (36 2) C pendant
(44 4) h dans des rcipients et protger contre toute
dessiccation.
6.4 Examen des membranes
Examiner les membranes pour vrifier la croissance des
cultures aprs (22 2) h et (44 4) h.
Compter toutes les colonies produisant une
pigmentation bleu-vert (pyocyanine) comme
Pseudomonas aeruginosa confirms.
Examiner les membranes sous rayonnement
ultraviolet. Il convient d'viter toute exposition
prolonge l'clairage UV car les colonies peuvent
tre tues et donc ne pas se dvelopper sur les milieux
de confirmation. Compter les colonies ne produisant
pas de pyocyanine et donnant lieu une fluorescence
comme Pseudomonas aeruginosa prsums et
confirmer leur identit en utilisant le bouillon d'actamide
dcrit ci-aprs.
Compter toutes les autres colonies produisant une
pigmentation brune-rougetre et ne produisant pas de
fluorescence comme Pseudomonas aeruginosa prsums
et confirmer leur identit en utilisant un test oxydase, le
bouillon d'actamide et le milieu de King B dcrit
ci-aprs. La lecture aprs (22 2) h est ralise dans le
cas de colonies envahissantes, lesquelles peuvent
apparatre au bout de (44 4) h. Il est recommand de
prendre en compte le dnombrement le plus lev pour
calculer le nombre de Pseudomonas aeruginosa dcrit
en (7).
Le Tableau 1 rcapitule la slection des colonies et les
tapes de confirmation.

17
8 Dhou El Hidja 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 51
13 octobre 2013
Tableau 1 - tapes requises pour la confirmation des colonies se dveloppant sur la glose CN
Description des colonies Ammoniac partir Production
sur glose CN dactamide doxydase
Bleu-vert NTa
Fluorescence + NT
(pas bleu-vert)
Brun rougetre + +
Autres types NT
a NT : Non test.
6.5 Confirmation
6.5.1 Glose nutritive
Repiquer toutes les colonies ncessitant une
confirmation ou, si cela est irralisable, autant de colonies
que possible (la mthode de dnombrement des
micro-organismes sur milieu de culture, lignes directrices
gnrales partir de la membrane et incuber pendant
(22 2) h (36 2) C). Vrifier la puret des
repiquages et soumettre les colonies initialement
brunes-rougetres au test de recherche de l'oxydase
(6.5.2).
6.5.2 Test oxydase
Verser 2 ou 3 gouttes de ractif pour la recherche de
l'oxydase (3.2.4) frachement prpar sur un morceau de
papier-filtre plac dans une bote de Petri.
l'aide d'une anse mtallique en platine (pas en Nichle-
chrome) ou en plastique, d'une baguette ou d'une pipette
en verre, taler une partie de la culture sur le papier-filtre
prpar. La raction est considre comme positive
lorsqu'une coloration bleu-pourpre fonc apparat dans les
10 s. Il est galement possible d'utiliser des tests oxydase
disponibles dans le commerce en suivant les instructions
du fabricant.
6.5.3 Milieu de King B
Repiquer les colonies brunes rougetres oxydase
positive obtenues en (6.5.1) sur un milieu de King B et
incuber cinq jours au plus, une temprature de
(36 2) C. Examiner quotidiennement la culture sous un
rayonnement UV et noter la prsence d'une ventuelle
fluorescence. Enregistrer comme positive toute
fluorescence apparue dans les cinq jours.
6.5.4 Bouillon d'actamide
Ensemencer un tube l'aide du repiquage obtenu en
(6.5.1) et incuber (36 2) C pendant (22 2) h.
Ajouter 1 ou 2 gouttes de ractif de Nessler (3.2.5) et
examiner les tubes afin de dceler une production
ventuelle d'ammoniac se traduisant par une coloration
allant du jaune au rouge brique, selon la concentration.
25
Fluorescence sur Confirms comme
milieu King B Pseudomonas aeruginosa
NT NT OUI
NT OUI
+ OUI
NT NT NON
6.5.5 Dnombrement
Compter comme Pseudomonas aeruginosa
confirms toutes les colonies produisant de la pyocyanine
(pigmentation bleu-vert) ou oxydase positive, donnant lieu
une fluorescence sous rayonnement UV (6.4) et
(6.5.3.) et capables de produire de l'ammoniac partir
d'actamide (6.5.4).
Note Les colonies qui prsentent une fluorescence
sur la premire membrane sont toujours oxydase positive
et n'ont donc pas besoin d'tre soumises au test oxydase
(Tableau 1).
7. EXPRESSION DES RESULTATS
A partir du nombre de colonies caractristiques
dnombres sur les membranes et en tenant compte du
nombre d'essais de confirmation raliss, calculer le
nombre de Pseudomonas aeruginosa confirms
prsents dans un volume d'eau dtermin. Pour l'eau
minrale, l'eau de source et les autres eaux en bouteille, le
volume est de 250ml. Pour les autres eaux, le volume est
gnralement de 100 ml.
Calculer le nombre de Pseudomonas aeruginosa par
volume d'chantillon d'eau tudi comme suit :
P + F ( cF / nF ) + R ( cR / nR )
P : est le nombre de colonies bleu-vert, toutes ayant t
comptes comme cibles confirmes ;
F : est le nombre de colonies fluorescentes ;
R : est le nombre de colonies brun rougetre ;
nF : est le nombre de colonies fluorescentes ayant fait
l'objet d'une dtection de production d'ammoniac ;
cF : est le nombre de colonies fluorescentes ayant
produit de l'ammoniac ;
nR : est le nombre de colonies brun rougetre ayant fait
l'objet d'une dtection de production d'ammoniac, d'une
recherche de l'oxydase et de fluorescence sur le milieu de
King B ;
18
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 51 8 Dhou El Hidja 1434
26 13 octobre 2013

cR : est le nombre de colonies brun rougetre ayant

produit de l'ammoniac, oxydase positive et fluorescentes
sur le milieu de King B.

Une autre solution consiste exprimer les rsultats

qualitativement en indiquant la prsence ou l'absence de
Pseudomonas aeruginosa dans le volume d'eau tudi.

Note A

Informations complmentaires sur

Pseudomonas aeruginos

Pseudomonas aeruginosa est l'espce type du genre

Pseudomonas.

C'est une bactrie Gram ngative, non sporule,

oxydase positive et catalase positive. Elle prsente un
mtabolisme oxydatif tel qu'indiqu par l'essai selon Hugh
et Leifson, rduit gnralement les nitrates au-del des
nitrites et produit de l'ammoniac partir de la dgradation
de l'actamide.

La plupart des souches (98 %) produisent un

pigment fluorescent soluble dans l'eau. La majorit
des souches sont capables de crotre 42 C mais pas
4 C, ce qui diffrencie Pseudomonas aeruginosa de
Pseudomonas fluorescens qui crot 4 C et non
42 C. Elle liqufie la glatine et hydrolyse la casine
mais pas l'amidon. Plus de 90 % des souches produisent le
pigment pyocyanine (bleu-vert).

Note B

Autres milieux

Il est possible d'utiliser d'autres milieux que la glose

nutritive condition qu'ils ne soient pas slectifs et qu'ils
ne contiennent pas d'hydrate de carbone fermentescible.

19
 RPUBLIQUE ALGRIENNE DMOCRATIQUE ET POPULAIRE
__________________

MINISTRE DU COMMERCE

DIRECTION GNRALE DU CONTRLE

CONOMIQUE ET DE LA RPRESSION
DES FRAUDES

Direction des Laboratoires dEssais

et dAnalyses de la Qualit

MTHODES OFFICIELLES D'ANALYSES

RELATIVES AUX DIVERS PRODUITS
 Sommaire

1. Arrt du 11 O ctobre 2006 relatif la mthode de dosage de laflatoxine B1, et la

somme des aflatoxine B1, B2, G1 et G2 dans les crales, les fruits a coque et les 01
produits drivs. (JO n 06 - 2007)

2. Arrt du 21 nove mbre 2011 rendant obl igatoire l a mthode de dtermination de

la teneur en iode dans le sel alimentaire. (JO n 07 - 2013) 05

3. Arrt du 31 m ars 2013 r endant obl igatoire l a m thode de d termination de l a

teneur en chlorures des produits drivs des lgumes. (JO n 49 - 2013) 07
2 Moharram 1428 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 06
21 janvier 2007
ARRETES, DECISIONS ET AVIS
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 19 Ramadhan 1427 correspondant au
11 octobre 2006 rendant obligatoire la mthode
de dosage de laflatoxine B1 et la somme des
aflatoxines B1, B2, G1 et G2 dans les crales, les
fruits coque et les produits drivs.
Le ministre du commerce ;
Vu le dcret prsidentiel n 06-176 du 27 Rabie Ethani
1427 correspondant au 25 mai 2006 portant nomination
des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-467 du 8 Dhou El Kaada
1426 correspondant au 10 dcembre 2005 fixant les
conditions et les modalits de contrle aux frontires de la
conformit des produits imports ;
Vu larrt du 14 Joumada Ethania 1416 correspondant
au 7 novembre 1995 relatif aux spcifications techniques
et aux rgles applicables limportation des produits
alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de dosage de
laflatoxine B1 et la somme des aflatoxines B1, B2, G1 et
G2 dans les crales, les fruits coque et les produits
drivs.
Art. 2. Pour le dosage de laflatoxine B1 et la somme
des aflatoxines B1, B2, G1 et G2 dans les crales, les fruits
coque et les produits drivs, les laboratoires du contrle
de la qualit et de la rpression des fraudes et les
laboratoires agrs cet effet doivent employer la
mthode dcrite en annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 19 Ramadhan 1427 correspondant au
11 octobre 2006 .
Lachemi DJAABOUBE.
19
ANNEXE
METHODE DE DOSAGE DE LAFLATOXINE B1
ET DE LA SOMME DES AFLATOXINES B1, B2, G1
et G2 DANS LES CEREALES, LES FRUITS
A COQUE ET LES PRODUITS DERIVES
1. DOMAINE DAPPLICATION
Cette mthode est applicable pour la determination des
teneurs en aflatoxines suprieures 8 g/kg.
2. PRINCIPE
Lchantillon pour essai est extrait avec un mlange
deau et de mthanol. Lextrait dchantillon est filtr,
dilu avec de leau et dpos sur une colonne
dimmunoaffinit contenant des anticorps spcifiques des
aflatoxines B1, B2, G1 et G2. Les aflatoxines sont isoles,
purifies et concentres sur la colonne et libres des
anticorps avec du mthanol. Les aflatoxines sont
quantifies par chromatographie liquide haute
performance en phase inverse (CLHP) avec dtection par
fluorescence et drivation post-colonne liode.
3. REACTIFS
3.1 Gnralits
Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique
reconnue.
3.2 Chlorure de sodium.
3.3 Iode sous forme de cristaux.
3.4 Aflatoxines, sous forme de cristaux ou de film, en
ampoules.
protger suffisamment de la lumire du jour le
laboratoire o sont effectues les analyses ;
protger de la lumire les solutions daflatoxines (les
conserver dans lobscurit, utiliser une feuille
daluminium ou de la verrerie ambre).
3.5 Actonitrile, de qualit CLHP.
3.6 Mthanol, de qualit analytique.
3.7 Mthanol, pour CLHP.
3.8 Tolune
3.9 Solvant dextraction
Mlanger 7 parties en volume de mthanol (3.6) avec 3
parties en volume deau.
01
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 06 2 Moharram 1428
20 21 janvier 2007

3.10 Colonne dimmunoaffinit

La colonne dimmunoaffinit (IA) contient des
anticorps dirigs contre les aflatoxines B1, B2, G1 et G2. La
capacit minimale de liaison de la colonne
dimmunoaffinit ne doit pas tre infrieure 100 ng
daflatoxine B1 et la rcupration pour les aflatoxines B1,
B2 et G1 ne doit pas tre infrieure 80 %, et 60 %
pour laflatoxine G2, lorsquon applique sur la colonne
dIA une solution talon de 5 ng de chaque toxine
dans 15 ml dun mlange de mthanol et deau (une partie
en volume de mthanol pour 1 + 3,4 parties en volume
deau). Il convient que la colonne dIA comprenne un
rservoir de solvant appropri, par exemple une seringue
avec un adaptateur.
3.11 Phase mobile
Mlanger 3 parties en volume deau avec 1 partie en
volume dactonitrile (3.5) et 1 partie en volume de
mthanol (3.7). Dgazer la solution avant de lutiliser.
3.12 Ractif de drivation post-colonne
Dissoudre 100 mg diode (3.3) dans 2 ml de mthanol
(3.6). Ajouter 200 ml deau. Agiter pendant 1 heure puis
filtrer avec un filtre de 0,45 m de porosit (4.8). Prparer
la solution la semaine mme de lutilisation et la stocker
dans lobscurit ou dans un flacon en verre brun. Agiter
pendant 10 min. avant utilisation.
3.13 Mlange de tolune/actonitrile
Mlanger 98 parties en volume de tolune (3.8) avec 2
parties en volume dactonitrile (3.5).
3.14 Solutions mres daflatoxines
Aflatoxine Mi g/mol i
m2/mol
B1 312 1930
B2 314 2040
G1 328 1660
G2 330 1790
Tableau 1 - Masse molculaire relative et absorptivit
molaire des aflatoxines B1, B2, G1 et G2 (mlange de
tolune et dactonitrile).
3.15 Solution mre daflatoxines mlanges
Prparer une solution mre contenant 500 ng/l
daflatoxine B1, 125 ng/l daflatoxine B2, 250 ng/l
daflatoxine G1 et 125 ng/l daflatoxine G2 dans le
mlange tolune/actonitrile (3.13). Lorsque la solution
doit tre stocke, peser le rcipient et enregistrer toute
modification quand la solution doit tre utilise.
Envelopper soigneusement le rcipient avec une feuille
daluminium et stocker environ 4 C.
3.16. Solutions talons daflatoxines mlanges
Transvaser chaque quantit spcifie dans le tableau (2)
de la solution mre daflatoxines mlanges (3.15) dans
une srie de trois fioles jauges de 2 ml (4 C).
Laisser les solutions svaporer sec sous un flux
dazote temprature ambiante. Ajouter 1 ml de mthanol
dans chaque rcipient, mlanger, diluer jusquau trait avec
de leau et mlanger nouveau. Prparer la solution le
jour de lutilisation.

Dissoudre de laflatoxine B1, B2, G1 et G2 sparment Prlev sur Concentration massique

dans le mlange tolune/actonitrile (3.13) afin dobtenir Solution la solution mre ng/ml
des solutions spares contenant 10 g/ml.. talon
(l) (3.15) B1 B2 G1 G2
Pour dterminer la concentration exacte daflatoxine
1 60 15,0 3,75 7,50 3,75
dans chaque solution mre, enregistrer le spectre
dabsorption entre une longueur donde de 330 nm et 370 2 40 10,0 2,50 5,00 2,50
nm dans les cuves en quartz de 1 cm (4.8) dun 3 20 5,00 1,25 2,50 1,25
spectromtre, le mlange tolune/actonitrile (3.13) tant 4 10 2,50 0,625 1,25 0,625
la cuve de rfrence.

Calculer la concentration massique de chaque Tableau 2 - Prparation des solutions talons

aflatoxine, i exprime en microgrammes par millilitre,
laide de lquation (1) ci aprs :
i = max Mi 100
i d
o :
max : est labsorbance dtermine au maximum du
spectre dabsorption ;
Mi : est la masse molculaire relative de chaque
aflatoxine, en grammes par mole ;
i : est labsorptivit molaire de chaque aflatoxine dans
le mlange tolune/actonitrile (3.13), en mtres carrs
par mole ;
d : est le trajet optique de la cellule, en centimtres.
Mi et i : sont exprims dans le tableau (1) ci-aprs :
Les valeurs indiques dans ce tableau sont donnes
titre indicatif. La gamme talon couvre les
concentrations des chantillons.
3.17 Acide sulfurique, c(H2SO4) = 2 mol/l
4. APPAREILLAGE
4.1 Appareillage courant de laboratoire
La verrerie de laboratoire entrant en contact avec les
solutions aqueuses daflatoxines doit tre plonge dans de
lacide sulfurique (2 mol/l) pendant plusieurs heures, puis
bien rince leau (3 fois par exemple) afin de retirer
toute trace dacide. Vrifier (3.16) labsence dacide avec
du papier pH.

02
2 Moharram 1428 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 06
21 janvier 2007
- Ce traitement est ncessaire car lutilisation de
verrerie lave sans acide peut provoquer des pertes
daflatoxines.
Dans la pratique, ce traitement est ncessaire pour les
ballons fond rond, les fioles jauges, les prouvettes
gradues, les flacons ou tubes pour solutions dtalonnage
et extraits finaux (notamment les fioles des
chantillonneurs automatiques) et les pipettes Pasteur
lorsquelles sont utilises pour transvaser des solutions
dtalonnage ou des extraits.
4.2 Broyeur, comprenant un bol de 500 ml et un
couvercle.
4.3 Papier-filtre pliss, par exemple de 24 cm de
diamtre.
4.4 Papier-filtre microfibres de verre, par exemple
de 11 cm de diamtre.
4.5 Fioles jauges, par exemple de 2 ml.
4.6 Spectromtre, pouvant balayer des longueurs
dondes comprises entre 200 nm et 400 nm.
4.7 Cuves en quartz, avec un trajet optique de 1 cm et
sans absorption sensible dans les longueurs dondes
comprises entre 300 nm et 370 nm.
4.8 Filtre membrane pour les solutions aqueuses,
en polyttrafluorothylne (PTFE), de 4 mm de diamtre
et de 0,45 m de porosit.
4.9 Appareillage CLHP, se composant des lments
suivants :
4.9.1 Pompe de chromatographie liquide, adapte
pour un dbit de 1 ml/min.
4.9.2 Systme dinjection, vanne dinjection munie
dune boucle de 50 l ou systme quivalent.
4.9.3 Colonne analytique de sparation en phase
inverse, par exemple C18, garantissant lobtention dune
rsolution des pics daflatoxines B1, B2, G1 et G2 partir
de la ligne de base, ces pics tant bien distincts des autres
pics.
longueur de 250 mm ;
diamtre intrieur de 4,6 mm ;
particules sphriques de 5 m.
Il est possible dutiliser des colonnes plus courtes.
4.9.4 Systme de drivation post-colonne, comprenant
une deuxime pompe sans impulsion (non pristaltique) et
une pice en T sans volume mort, avec un tube en
polyttrafluothylne (PTFE) ou en acier inoxydable
dune longueur comprise entre 3000 mm et 5000 mm et
dun diamtre intrieur de 0,5 mm, ainsi quun bain de
chauffage ou un racteur de post-colonne pour la raction
liode.
03
21
4.10 Dtecteur de fluorescence, avec une longueur
donde dexcitation rgle 365 nm et une longueur
donde dmission 435 nm (pour les instruments
filtre : longueur donde dmission > 400 nm). Il doit
tre possible de dtecter au minimum 0,05 ng daflatoxine
B1 par volume dinjection (en loccurrence 50 l).
5. MODE OPERATOIRE
5.1 Extraction
Peser 25 g, 10 mg prs, dchantillon pour essai
homognis dans le bol du broyeur, ajout 5 g de
chlorure de sodium (3.2) et 125 ml de solvant dextraction
(3.9), puis homogniser au moyen dun mlangeur
pendant 2 minutes grande vitesse.
Il convient de vrifier que la vitesse de mlange ne
diminue pas lefficacit de lextraction.
Filtrer avec un papier-filtre pliss (4.3). Introduire au
moyen dune pipette 15 ml (V2 ) du filtrat dans une fiole
conique de dimensions appropries, Ajouter 30 ml deau,
boucher la fiole et mlanger. Avant de commencer la
chromatographie sur colonne dimmunoaffinit, filtrer
lextrait dilu sur un papier-filtre microfibres de verre
(4.4). Il convient que le filtrat (V3) soit limpide ; dans le
cas contraire, filtrer nouveau. Traiter immdiatement
selon (5.2).
5.2 Purification
Prparer la colonne dimmunoaffinit puis procder la
purification. A laide dune pipette, dposer 15 ml (V4) du
deuxime filtrat (V3) dans le rservoir de solvant de la
colonne (3.10). Recueillir lluat de mthanol ou
dactonitrile (en fonction du produit) dans la fiole jauge
de 2 ml (4.5). Diluer jusquau trait avec de leau (V5).
Mlanger, puis procder conformment (5.3).
Pour leur analyse par CLHP, les solutions chantillons
et les solutions talons doivent contenir le mme solvant
ou le mme mlange de solvants.
- Les mthodes de dpt sur les colonnes
dimmunoaffinit, le lavage de la colonne et lluant
variant lgrement dun fabricant de colonne lautre, il
convient de suivre de faon prcise les instructions
spcifiques fournies avec les colonnes.
Veiller ne pas dpasser la capacit maximale de la
colonne.
5.3 Conditions demploi de la CLHP
Raccorder lorifice de sortie de la colonne de sparation
lun des bars en T (4.9.4) laide dun petit morceau de
tube dun diamtre intrieur de 0,25 mm par exemple.
Raccorder au deuxime bras du T lorifice de sortie de la
deuxime pompe sans pulsion devant dlivrer le ractif
pour la drivation post-colonne. Raccorder lune des
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 06
22
extrmits dun serpentin en PTFE ou en acier inoxydable
(4.9.4) au troisime bras du T, et lautre extrmit au
dtecteur. A laide dune tuve ou dun bain-marie,
maintenir le serpentin une temprature de raction de
70C.
Les rglages suivants ont t jugs appropris lors de
lutilisation de la colonne spcifie en (4.9.3) :
dbit pour la phase mobile (colonne) : 1,0 ml/min ;
dbit du ractif post-colonne : 0,3 ml/min ;
volume inject : 50 l.
Laisser le systme fonctionner pendant 10 min afin de
le stabiliser. En cas dutilisation dun intgrateur, rgler la
sensibilit du dtecteur de fluorescence ou de lintgrateur
afin dobtenir un rapport signal/bruit de 5/1 pour 0,125 ng
daflatoxine G2 dans 50 l.
En cas dutilisation dun enregistreur sur papier, rgler
la commande du dtecteur de fluorescence afin dobtenir
une chelle de dplacement de 30 % 40 % avec 0,125
ng daflatoxine G2 dans 50 l. Faire passer le deuxime
filtrat (V3) dans la colonne, laver cette dernire
conformment aux instructions du constructeur et liminer
les luats.
5.4 Identification
Identifier chaque pic daflatoxine du chromatogramme
provenant de lanalyse de lchantillon pour essai, en
comparant les temps de rtention ceux des talons de
rfrence correspondants.
5.5 Courbe dtalonnage
Prparer la courbe dtalonnage pour chaque aflatoxine
en injectant 50 l des solutions talons 1, 2, 3 et 4 (tableau
2).
5.6 Dosage
La dtermination quantitative se fait selon la mthode
de ltalonnage externe avec intgration de la surface du
pic ou mesure de la hauteur du pic qui est ensuite
compare la valeur correspondante de la substance
talon.
Injecter par volume de 50 l le mlange talon dans la
boucle en suivant les instructions du fabricant de
linjecteur. Llution des aflatoxines se fait dans lordre
G2, G1, B2, B1, avec des temps de rtention respectifs
denviron 6 min, 8 min, 9 min et 11 min et il convient que
les pics soient bien rsolus. Le cas chant, ajuster les
temps de rtention en modifiant la concentration en
mthanol du solvant de la phase mobile (3.11).
Injecter 50 l (V6) dextrait dchantillon purifi (5.2)
dans la boucle dinjection.
2 Moharram 1428
21 janvier 2007
6. CALCUL DES RESULTATS
Calculer la masse de lchantillon pour essai mt , en
grammes, prsent dans la fraction du deuxime filtrat
prlev pour la colonne dIAC (V 4) laide de lquation
(2) ciaprs :
mt = mo V2 x V4
V1 x V3
o :
mo : est la masse de la prise dessai (5.1), en grammes
(mo = 25 g) ;
V1 : est le volume total du filtrat (5.1), en millilitres
(V1 = 125 ml) ;
V2 : est le volume de la fraction du premier filtrat (5.1),
en millilitres (V2 = 15 ml) ;
V3 : est le volume total du deuxime filtrat (5.1), en
millilitres (V3 = 45 ml) ;
V4 : est le volume de la fraction du deuxime filtrat
(5.2), en millilitres (V4 = 15 ml) ;
Calculer la fraction massique de chaque aflatoxine, wi ,
en microgrammes par kilogramme dchantillon, laide
de lquation (3) ci-aprs (mthode dtalonnage
externe) :
wi = V5 x mi
V6 x mt
o :
V5 est le volume de lluat (5.2), en microlitres (V5 =
2000 l) ;
V6 est le volume de lluat inject (5.6), en microlitres
(V6 = 50 l) ;
mi est la masse, en nanogrammes, de chaque
aflatoxine ; i prsente dans le volume dinjection,
correspondant la surface ou la hauteur mesure des
pics releve sur la courbe dtalonnage ;
mt est la masse de lchantillon pour essai, en
grammes, prsent dans la fraction du deuxime filtrat
prlev pour la colonne dIC (V4) (selon lquation 2 ).
Ajouter les fractions massiques des quatre aflatoxines
pour obtenir la fraction massique de la somme des
aflatoxines.
7. REPETABILITE
La diffrence absolue entre deux rsultats dessai
unique sur un matriau dessai identique, obtenus par un
oprateur utilisant le mme appareillage, dans lintervalle
de temps le plus court possible, ne dpassera pas la limite
de rptitivit (r) dans plus de 5 % des cas.
8. REPRODUCTIBILITE
La diffrence absolue entre deux rsultats dessai
unique et portant sur un matriau dessai identique, entre
deux laboratoires, ne dpassera pas la limite de
reproductibilit (R) dans plus de 5 % des cas obtenus.
04
18 Rabie El Aouel 1434 31
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 07
30 janvier 2013

Cette mthode doit tre galement utilise par le

laboratoire lorsqu'une expertise est ordonne.

Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal

officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 25 Dhou El Hidja 1432 correspondant
au 21 novembre 2011.
Mustapha BENDADA.

ANNEXE

METHODE DE DETERMINATION
DE LA TENEUR EN IODE DANS LE SEL
ALIMENTAIRE

1. OBJET ET DOMAINE D'APPLICATION

La prsente mthode dtermine le dosage de la teneur
en iode dans le sel alimentaire.

MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 25 Dhou El Hidja 1432 correspondant au
21 novembre 2011 rendant obligatoire la
mthode de dtermination de la teneur en iode
dans le sel alimentaire.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 10-149 du 14 Joumada
Ethania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 90-40 du 30 janvier 1990
rendant obligatoire la vente du sel iod pour la prvention
de la carence en iode ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode de dtermination de la
teneur en iode dans le sel alimentaire.
2. DEFINITION
L'iodation du sel alimentaire se fait par addition d'iodate
de potassium KI03. La teneur en iode du sel iod est
dtermine par une mthode volumtrique : l'iodomtrie.
3. PRINCIPE
a) Par addition d'un acide et d'iodure de potassium (KI),
l'iodate de potassium (KI03) contenu dans le sel est rduit
en iode molculaire (I2). Cette quantit d'iode I2 est
quivalente la quantit d'iodate dans le milieu (sel) ;
b) L'iode libr est titr par une solution de thiosulfate
de sodium standard (Na2S203).
L'amidon est utilis comme indicateur de fin de titrage.
4. REACTIFS
Ractifs purs pour analyser ;
Eau distille : laisser bouillir pendant 5 mn, la
refroidir, la conserver dans des flacons bruns l'abri de la
lumire, de l'oxygne, de l'air et du froid.
Thiosulfate de sodium (Na2S203,5H20, PM = 248,2)
solution mre : 0,1 M ou 0,1 N ;
solution de dosage: 0,002 M ou 0,002 N.
Iodate de potassium (KI03, PM = 214)
solution talon 0,050 g/I.
Iodure de potassium (KI) 10% (P/V)
.
Acide actique glacial (CH3COOH) ou acide
sulfurique ( H2S04) 2N

Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en iode Solution d'amidon 0,25% (P/V).

dans le sel alimentaire, les laboratoires du contrle de la
qualit et de la rpression des fraudes et les laboratoires 4.1 Prparation des ractifs
agrs cet effet doivent employer la mthode dcrite en
annexe. Thiosolfate de sodium (Na2S203)

05
32
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 07
Solution mre : 0,1 M (ou O,1 N ou M/10 = N/10)
Dissoudre 24,82 g de Na2S203,5H20 dans une fiole
jauge avec de l'eau distille, complter le volume
1 litre.
Solution de dosage : (0,002 N ou N/500)
Pipeter 20 ml de la solution mre 0,1 N dans une fiole
jauge de 1000 ml, complter le volume 1000 ml.
Solution talon de KI03 0,05 g/l
Solution mre de KI03 10 g/l : dissoudre 10 g de
KI03 dans 1 litre d'eau distille.
Solution de dosage : introduire 5 ml de solution mre
dans une fiole jauge de 1000 ml, complter le volume
1000 ml.
Solution de KI 10 % : dissoudre 10 g de KI dans une
fiole de 100 ml, complter le volume 100 ml.
Note : Cette solution doit tre prpare au moment de
l'emploi.
Solution d'amidon 0,25% (P/V) : dissoudre 2,5 g
d'amidon soluble dans 100 ml d'eau distille, ajouter
900 ml d'eau distille chaude, et 5 mg de HgI2 ou de
KCN.
faire bouillir pendant 5 minutes ;
ajouter 1 g d'acide salicylique ;
refroidir, boucher.
Acide actique glacial ou bien acide sulfirique 2 N.
Dans une fiole jauge de 100 ml, introduire 80 ml d'eau
distille, y ajouter avec prcaution 5,56 ml de H2S04
(d = 1,83 96,3 %), complter le volume avec de l'eau
distille 100 ml.
4.2. Etalonnage de la solution de thiosulfate
(0,002 M ou N/500)
Dans un erlenmeyer contenant environ 800 ml d'eau
distille :
introduire 5 ml de la solution talon de KI03
( 0,05 g/l) ;
ajouter 5 ml de solution de KI 10 % et 5 ml d'acide
actique pur ;
boucher et laisser reposer 5 minutes l'obscurit ;
titrer par la solution de Na2S203 (0,002N) jusqu'
obtention d'une couleur jaune ple ;
ajouter 5 ml de la solution d'amidon, on obtient une
coloration bleue ;
continuer titrer par le thiosulfate jusqu' la
disparition de la couleur bleue, soit V = volume de
Na2S203 utilis et N = Normalit de la solution de
Na2S203.
Calcul : N = 0,007/V.
06
18 Rabie El Aouel 1434
30 janvier 2013
5. APPAREILLAGE
Matriel courant de laboratoire.
6. ECHANTILLONNAGE
L'chantillonnage se fait selon les normes en vigueur.
7. MODE OPERATOIRE
peser 10 0,01 g de sel tester, pralablement
dessch au dessiccateur ;
introduire le sel dans un erlenmeyer de 250 ml ;
le dissoudre dans 100 ml d'eau distille, bouillie et
refroidie ;
ajouter 1 ml d'acide actique glacial ;
ajouter 1 ml de KI 10 %, on obtient une coloration
jaune, boucher et laisser reposer pendant 5 minutes
l'obscurit ;
titrer avec la solution de thiosulfate 0,002 m jusqu'
obtention d'une coloration jaune ple ;
ajouter alors 5 ml de solution d'amidon, on obtient
une coloration bleue ;
continuer titrer avec la solution de thiosulfate
jusqu' la disparition de cette coloration bleue ;
noter le volume de solution de thiosulfate ncessaire
au dosage : (V1) ;
paralllement faire un tmoin dans les mmes
conditions, sur 100 ml d'eau distille, bouillie et refroidie.
noter le volume (V2) ;
doser chaque chantillon deux reprises.
8. EXPRESSION DES RESULTATS
Calcul de la teneur en iode
Formule gnrale :
Iode (mg / kg sel) = (V1 - V2) x 4,232.
Iodate de potassium en (mg/kg sel) = (V1 - V2) x
7,1387
V1 = Volume de Na2S203 ncessaire au titrage de l'iode
dans le sel.
V2 = Volume de Na2S203 ncessaire pour le tmoin.
(Eq. mg) 1 = 127/6 = 21,16
(Eq. mg) (KI03) = 214/6 = 35, 66.
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 49 26 Dhou El Kaada 1434
32 2 octobre 2013

MINISTERE DU COMMERCE

Arrt du 19 Joumada El Oula 1434 correspondant au

31 mars 2013 rendant obligatoire la mthode de
dtermination de la teneur en chlorures des
produits drivs des lgumes.

Le ministre du commerce;
Vu le dcret prsidentiel n12-326 du 17 Chaoual 1433
correspondant au 4 septembre 2012 portant nomination
des membres du gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu le dcret excutif nl2-214 du 23 Joumada Ethania
1433 correspondant au 15 Mai 2012 fixant les conditions
et les modalits d'utilisation des additifs alimentaires dans
les denres alimentaires destines la consommation
humaine ;
Vu l'arrt interministriel du 21 Rabie Ethani 1418
correspondant au 24 aot 1997 relatif aux conserves de
pure de tomates ;

Arrte :

Article ler. En application des dispositions de

l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode de dtermination de la
teneur en chlorures des produits drivs des lgumes.

07
26 Dhou El Kaada 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 49
2 octobre 2013
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en
chlorures des produits drivs des lgumes, les
laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent
employer la mthode jointe en annexe du prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 19 Joumada El Oula 1434 correspondant
au 31 mars 2013.
Mustapha BENBADA
ANNEXE
Mthode de dtermination de la teneur en chlorures
des produits drivs des lgumes
La prsente mthode spcifie une technique de
dtermination de la teneur en chlorures des produits
drivs des lgumes.
Si les produits drivs des lgumes contiennent des
pigments anthocyaniques naturels, la prsente mthode de
dtermination de la teneur en chlorure est applicable
moyennant certaines modifications spcifies dans le
point 7.
1. DFINITION
Teneur en chlorures des produits drivs des lgumes :
Totalit des chlorures, dtermins conformment la
mthode spcifie, exprims en pourcentage en masse de
chlorure de sodium.
2. PRINCIPE
Prcipitation des chlorures par addition d'un excs d'une
solution titre de nitrate d'argent et titrage de cet excs de
nitrate d'argent avec une solution titre de thiocyanate de
potassium.
3. RACTIFS
Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique
reconnue.
L'eau utilise doit tre de l'eau distille ou de l'eau de
puret au moins quivalente.
3.1 Nitrobenzne.
3.2 Acide nitrique, solution environ 4 N.
Mlanger 1 volume d'acide nitrique (P20 1,39 1,42 g/ml)
avec 3 volumes d'eau.
3.3 Nitrate d'argent, solution titre O,1 N.
Scher le nitrate d'argent (AgN O3) durant 2 heures
150 C et le laisser refroidir dans un dessiccateur.
Dissoudre, dans de l'eau, 16,989 g du nitrate d'argent
sch et complter 1000 ml dans une fiole jauge.
33
3.4 Thiocyanate de potassium, solution titre 0,1 N.
Dissoudre, dans de l'eau, 9,72 g de thiocyanate de
potassium (KSCN) et complter 1000 ml dans une fiole
jauge.
Etalonner la solution obtenue avec la solution de nitrate
d'argent (3.3), en prsence de la solution de sulfate double
d'ammonium et de fer (III) (3.5).
3.5 Sulfate double d'ammonium et de fer (III)
[(NH4)2 SO4, Fe (S04)3, 24H2O],solution aqueuse
sature, acidifie l'aide d'acide nitrique (5ml d'acide
nitrique,P20 1,39 1,42 g/ml, pour100 ml de solution).
4. APPAREILLAGE
Matriel courant de laboratoire, et notamment :
4.1 Homognisateur, ou mortier [pour le cas des
produits pais, pteux ou solides (5.1.3)].
4.2 Bcher, de 250 ml de capacit.
4.3 Fiole jauge, de 250 ml de capacit.
4.4 Pipettes, permettant de dlivrer respectivement
3,5,20 ml.
4.5 Fiole conique, de 200 ml de capacit.
4.6 Burettes, de 25 ml de capacit.
5. MODE OPERATOIRE
5.1 Prparation de l'chantillon pour essai
5.1.1 Produits contenant des phases solides et
liquides distinctes
S'il existe une spcification, effectuer la dtermination
sur phase indique dans cette spcification.
S'il n'existe pas de spcification et dans le cas de
produits rcemment prpars, bien mlanger la totalit de
l'chantillon pour laboratoire et effectuer la dtermination
sur l'chantillon homognis.
5.1.2 Produits liquides
Bien mlanger l'chantillon pour laboratoire.
5.1.3 Produits pais, pteux ou solides
Broyer l'chantillon pour laboratoire dans un
homognisateur ou dans un mortier (4.1). Si ncessaire,
dcouper le produit en petits morceaux avant le broyage.
Bien mlanger l'chantillon pour laboratoire.
5.2 Prise d'essai
Peser, 0,01 g prs, environ 25 g de l'chantillon pour
essai (5.1) dans le bcher de 250 ml (4.2).
5.3 Dtermination
5.3.1 Prparation de la solution d'essai
Ajouter, la prise d'essai (5.2), 100 ml d'eau chaude en
mlangeant le contenu du bcher jusqu' l'obtention d'une
consistance homogne. porter le contenu du bcher
bullition et l'y maintenir durant 1 min.
Refroidir, transvaser quantitativement le contenu du
bcher dans la fiole jauge de 250 ml (4.3) et complter au
trait repre avec de leau.
08
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 49
34
Mlanger soigneusement, laisser reposer durant, 15
min, puis filtrer sur un papier filtre pliss en recueillant le
filtrat dans un rcipient sec.
5.3.2 Titrage
Prlever, l'aide d'une pipette (4.4), 20 ml du filtrat
(5.3.1) et les introduire dans la fiole conique (4.5), ajouter
5 ml de la solution d'acide nitrique (3.2) et 5 ml de la
solution de sulfate double d'ammonium et de fer (III)
(3.5).
Verser, l'aide d'une burette (4.6), un volume (V1) de la
solution de nitrate d'argent (3.3) suffisant pour obtenir,
aprs la prcipitation des chlorures, un excs de solution
de nitrate d'argent compris entre 5 et 10 ml.
Ajouter 3 ml du nitrobenzne (3.1) et agiter
vigoureusement le contenu de la fiole pour coaguler le
prcipit.
Note - L'usage du nitrobenzne exige des prcautions
spciales, ce produit tant toxique.
Titrer l'excs de nitrate d'argent avec la solution de
thiocyanate de potassium (3.4) jusqu' l'obtention d'une
couleur brun-rouge persistant durant 5 min.
Noter le volume (V2) de la solution de thiocyanate de
potassium utilis.
5.3.3 Nombre de dterminations
Effectuer deux dterminations sur des prises d'essai
provenant du mme chantillon pour essai (5.1).
6. EXPRESSION DES RESULTATS
6.1 Mode de calcul et formule
La teneur en chlorures, exprime en pourcentage en
masse de chlorure de sodium, est donne par la formule :
0,5845 X (V 1 - V 2) x V 3
m x V4
O:
V 1 : est le volume, en millilitres, de la solution de
nitrate d'argent (3.3) utilis (5.3.2) ;
V 2 : est le volume, en millilitres, de la solution de
thiocyanate de potassium (3.4) utilis (5.3.2) ;
V 3 : est le volume, en millilitres, auquel a t port le
filtrat par dilution (5.3.1) ;
V 4 : est le volume, en millilitres de la partie aliquote du
filtrat dilu, prleve en vue du titrage (5.3.2) ;
m : est la masse, en grammes, de la prise d'essai (5.2).
Notes
1. Si le titre de la solution de thiocyanate de potassium
n'est pas exactement O,lN, un facteur de correction
appropri doit tre appliqu V2 pour le calcul du
rsultat.
09
26 Dhou El Kaada 1434
2 octobre 2013
2. Si le mode opratoire spcifi en (5) a t
scrupuleusement suivi, V3 = 250 ml et V4 =20 ml; la
formule prcdente est alors rduite :
7,30625 X (V 1 - V 2)
m
Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des
rsultats des deux dterminations, si les conditions de
rptabilit (6.2) sont remplies
Exprimer le rsultat avec deux dcimales.
6.2 Rptabilit
La diffrence entre les rsultats de deux dterminations,
effectues simultanment ou rapidement l'une aprs l'autre
par le mme analyste, sur le mme chantillon pour essai,
ne doit pas dpasser 0,05 g de chlorure de sodium pour
100 g de produit.
7. CAS PARTICULIER : Produits contenant des
pigments anthocyaniques
Lorsque des pigments anthocyaniques sont prsents,
ceux-ci gnent le titrage, il est donc ncessaire de les
liminer par dcomposition permanganique. La mthode
doit alors tre modifie de la faon suivante :
7.1 Ractifs
Outre les ractifs spcifis dans le point 3 :
7.1.1 Permanganate de potassium, solution sature
(environ 6,5 g de KMn04 pour 100 ml d'eau).
7.1.2 Nitrite de sodium, ou nitrite de potassium,
cristallis.
7.2 Mode opratoire
7.2.1 Oprer selon (5.1) (5.3.1) inclus.
7.2.2 Prlever, l'aide d'une pipette (4.4), 20 ml du
filtrat (5.3.1) et les introduire dans la fiole conique (4.5).
Ajouter environ 20 ml de la solution d'acide nitrique (3.2)
et, l'aide d'une pipette (4.4), exactement 20 ml (V 1) de
la solution de nitrate d'argent (3.3).
Porter bullition et maintenir douce bullition
durant 2 3 min.
Verser ensuite, par fractions de 0,5 1 ml, environ 5
10 ml de la solution de permanganate de potassium
(7.1.1), en poursuivant lbullition douce. Le liquide doit
devenir incolore ; sinon, ajouter quelques cristaux de
nitrite de sodium ou de potassium (7.1.2) jusqu ce que la
dcoloration soit obtenue. Maintenir lbullition durant
5 min aprs que la dcoloration de la solution aura t
obtenue.
Refroidir, ajouter 5 ml de la solution de sulfate double
d'ammonium et de fer (III) (3.5).
Poursuivre le mode opratoire comme dcrit dans le
4e alina de (5.3.2). (L'addition de nitrobenzne n'est pas
ncessaire).
 RPUBLIQUE ALGRIENNE DMOCRATIQUE ET POPULAIRE
__________________

MINISTRE DU COMMERCE

DIRECTION GNRALE DU CONTRLE

CONOMIQUE ET DE LA RPRESSION
DES FRAUDES

Direction des Laboratoires dEssais

et dAnalyses de la Qualit

MTHODES OFFICIELLES D'ANALYSES

RELATIVES LA MICROBIOLOGIE DES ALIMENTS
(MTHODES HORIZONTALES)
 Sommaire

1. Arrt du 29 juillet 2012 rendant obligatoire la mthode horizontale pour le

dnombrement des bactries sulfito-rductrices se dveloppant en conditions 01
anarobies. (JO n 51- 2013)

2. Arrt du 28 mai 2014 rendant obligatoire la mthode de prparation des

chantillons, de la suspension mre et des dilutions dcimales en vue de lexamen 04
microbiologique. (JO n 38- 2014)

3. Arrt du 21 mai 2014 rendant obligatoire la mthode de dnombrement des

staphylocoques coagulase positive (staphylococcus aureus et autres espces). 07
(JO n 68- 2014)

4. Arrt du 31 juillet 2014 rendant obligatoire la mthode utilisant le milieu glos au

plasma de lapin et au fibrinogne pour le dnombrement des staphylocoques 13
coagulase positive. (JO n 68- 2014)

5. Arrt du 2 juin 2015 rendant obligatoire une mthode horizontale pour le

dnombrement des levures et moisissures par cmptage des colonies dans les 17
produits, dont l'activit d'eau est suprieure 0,95. (JO n 48- 2015)

6. Arrt du 2 juin 2015 rendant obligatoire une mthode horizontale pour le

dnombrement des levures et moisissures par cmptage des colonies dans les 22
produits, dont l'activit d'eau est infrieure ou gale 0,95. (JO n 52- 2015)
8 Dhou El Hidja 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 51
13 octobre 2013
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 10 Ramadhan 1433 correspondant au 29
juillet 2012 rendant obligatoire la mthode
horizontale pour le dnombrement des bactries
sulfito-rductrices se dveloppant en conditions
anarobies.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 10-149 du 14 Joumada
Ethania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05 - 465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu l'arrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt, relatif aux spcifications
microbiologiques de certaines denres alimentaires ;
Arrte :
Article ler. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode horizontale pour le
dnombrement des bactries sulfito-rductrices se
dveloppant en conditions anarobies.
Art. 2. Pour le dnombrement des bactries
sulfito-rductrices se dveloppant en conditions
anarobies, les laboratoires du contrle de la qualit et de
la rpression des fraudes et les laboratoires agrs cet
effet doivent employer la mthode jointe en annexe du
prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 10 Ramadhan 1433 correspondant au 29
juillet 2012.
Mustapha BENBADA.
ANNEXE
METHODE HORIZONTALE POUR LE
DENOMBREMENT DES BACTERIES
SULFITO-REDUCTRICES SE DEVELOPPANT EN
CONDITIONS ANAEROBIES
La prsente mthode spcifie une mthode horizontale
pour le dnombrement des bactries sulfito-rductrices se
dveloppant en conditions anarobies. Elle est applicable
aux :
produits destins l'alimentation humaine et
animale ;
19
chantillons d'environnement dans le domaine de la
production et de la distribution des aliments.
1. DFINITION
Pour les besoins de la prsente mthode, la dfinition
suivante s'applique.
1.1 Bactries sulfito-rductrices se dveloppant en
conditions anarobies
Bactries formant des colonies dnombrables typiques
dans les conditions spcifies dans la prsente mthode.
2. PRINCIPE
2.1 Ensemencement dans la masse de deux botes de
Ptri (ou de deux tubes) de milieu au sulfite de fer avec
une quantit spcifie de l'chantillon pour essai si le
produit initial est liquide, ou avec une quantit spcifie
de suspension mre dans le cas d'autres produits.
Prparation de deux autres botes (ou tubes) de glose,
dans les mmes conditions, avec des dilutions dcimales
de l'chantillon pour essai ou de la suspension mre.
2.2 Incubation en anarobiose des botes (ou tubes)
37 C 1 C pendant 24 h 48 h ( lecture finale au bout
de 48 h ), ventuellement 50 C si l'on suspecte la
prsence des bactries thermophiles. Dnombrement de
colonies caractristiques de couleur noire. La couleur
noire des colonies et des alentours est due la formation
du sulfure de fer (II) rsultant de la raction entre les ions
sulfurs et les ions trivalents ferriques [ Fe (III) ] prsents
dans le milieu.
2.3 Calcul du nombre de bactries sulfito-rductrices
par millilitre ou par gramme d'chantillon, partir du
nombre de colonies obtenues sur les boites (ou tubes).
3. MILIEU DE CULTURE ET DILUANT
3.1 Glose pour le dnombrement : glose au sulfite
de fer.
3.1.1 Composition
Digestat enzymatique de casine 15 g
Digestat enzymatique de soja 5g
Extrait de levure 5g
Disulfite de sodium (Na2S2O5) 1g
Citrate de fer (III) ammoniacal 1g
Agar-agar 9 g 18 ga
Eau 1000 ml
a Selon le pouvoir glifiant de l'agar-agar.
3.1.2 Prparation
Dissoudre les ingrdients dans l'eau en chauffant. Si
ncessaire, ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation il
soit de 7,6 0,2 25 C.
01
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 51
20
Verser des portions de 250 ml de milieu dans des
flacons de 500 ml.
Si le dnombrement est effectu l'aide de tubes (4.5),
verser 20 ml 25 ml de milieu dans les tubes. Striliser
l'autoclave pendant 15 min 121C.
Dsarer le milieu juste avant son utilisation.
3.2 Diluant peptone - sel
4. APPARIELLAGE ET VERRERIE
Matriel courant de laboratoire de microbiologie et, en
particulier ce qui suit :
4.1 Matriel d'homognisation, pour les chantillons
d'aliments solides.
4.2 Bain d'eau, pouvant tre maintenu une
temprature comprise entre 44 C et 47 C.
4.3 Jarres pour anarobiose, dots d'un quipement
permettant de gnrer une atmosphre anarobie, et
comprenant un systme de vrification des conditions
anarobies.
4.4 Incubateur, pouvant tre maintenu 37 C 1 C
et, si ncessaire, 50 C 1C.
4.5 tubes essais, de dimensions 16 mm x 160 mm, et
fioles ou flacons de 500 ml de capacit.
5. ECHANTILLONNAGE
Il est important que le laboratoire reoive un chantillon
vraiment reprsentatif, non endommag ni modifi lors du
transport et de l'entreposage.
6. MODE OPERATOIRE POUR LA
PREPARATION DE L'ECHANTILLON POUR
ESSAI
6.1 Gnralits
Une reprsentation schmatique du mode opratoire est
donne au tableau ci-dessous.
6.2 Prise d'essai, suspension mre et dilutions
Il peut tre ncessaire d'effectuer un traitement
thermique de la suspension mre pour liminer les formes
vgtatives de bactries formant des spores et/ou les
bactries non sporules. Les tempratures et les temps de
chauffage varient selon les besoins, allant de
combinaisons produisant un effet de pasteurisation
marqu un effet d'activation des spores par la chaleur
(par exemple 75 C pendant 20 min) une bullition de
plusieurs minutes. Dans ce cas, le rsultat peut tre donn
en nombre de spores de bactries sulfito-rductrices se
dveloppant en conditions anarobies.
6.3 Ensemencement
Prendre deux botes de Petri striles. A l'aide d'une
pipette strile, transfrer dans chaque bote 1 ml
d'chantillon pour essai si le produit tester est liquide, ou
1 ml de suspension mre pour les autres produits.
Prendre deux autres botes de Petri striles. A l'aide
d'une nouvelle pipette strile, transfrer 1 ml de la
premire dilution dcimale (10-1) de l'chantillon pour
essai si le produit est liquide, ou 1 ml de la deuxime
dilution dcimale (10-2) de la suspension mre pour les
autres produits.
8 Dhou El Hidja 1434
13 octobre 2013
Rpter la procdure dcrite avec les dilutions
suivantes, en utilisant une nouvelle pipette strile pour
chaque dilution.
Ajouter dans chacune des botes de Petri environ 15 ml
de glose au sulfite de fer (3.1) refroidi l'aide d'un bain
d'eau (4.2) une temprature comprise entre 44C et
47C. Il convient que le temps coul entre
l'ensemencement des botes de Petri et l'addition du milieu
glos n'excde pas 15 min. Bien mlanger l'inoculum
avec le milieu glos l'aide de mouvements horizontaux,
puis laisser le milieu se solidifier.
Aprs solidification du milieu, verser dans la bote 5 ml
10 ml du mme milieu, de manire recouvrir la couche
prcdente.
Dans le cas o des tubes sont utiliss, inoculer 1 ml de
chacune des dilutions dans chacun de deux tubes
contenant le milieu glos, conservs une temprature
comprise entre 44 C et 47 C. Mlanger dlicatement en
vitant la formation de bulles d'air, puis laisser le milieu
se solidifier l'aide d'un bain d'eau (4.2).
Aprs solidification du milieu, verser dans chaque tube
2 ml 3 ml du mme milieu, de manire recouvrir la
couche prcdente.
6.4 Incubation
Aprs solidification, incuber les botes de Petri dans des
jarres pour anarobiose (4.3) 37C 10C pendant
24 h 48 h.
Si l'on suspecte la prsence de bactries thermophiles,
prparer une deuxime srie de botes de Ptri (voir 6.3).
Incuber ces botes 50 C 1 C.
Si des tubes sont utiliss, l'incubation dans des jarres
pour anarobiose n'est pas ncessaire.
6.5 Comptage des colonies
Lire les rsultats aprs 24 h et aprs 48 h, selon le degr
de coloration noire et le taux de croissance des
micro-organismes. Les colonies noires, ventuellement
entoures d'une zone noire, sont dnombres comme des
bactries sufito-rductrices.
Note 1 Il peut se produire un noircissement diffus et
non spcifique du milieu, surtout lorsque l'inoculation est
effectue dans des tubes de glose au lieu de botes de
Ptri. La croissance des bactries anarobies, qui
produisent seulement de l'hydrogne (pas de H2S), peut
galement rduire le sulfite prsent et provoquer un
noircissement gnral du milieu.
Dnombrer les colonies sulfito-rductrices dans chaque
boite contenant moins de 150 colonies caractristiques et
moins de 300 colonies au total.
Il est possible que les nombres spcifis ci -dessus
soient trop levs pour les tubes; dans ce cas ne tenir
compte que des tubes dans lesquels les colonies sont bien
spares.
Note 2 La prsente mthode se prte galement au
dnombrement des seules Clostridia. Dans ce cas, aprs
avoir obtenu des colonies caractristiques, prlever cinq
d'entre elles dans chaque boite utilise, puis confirmer le
genre Clostridium au moyen d'essais de confirmation (par
exemple essais portant sur le pouvoir respiratoire, sur la
formation de spores).
02
8 Dhou El Hidja 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 51
13 octobre 2013 21

Tableau

reprsentation schmatique du mode opratoire

1 x g prise d'essai + 9 x g diluant

Traitement thermique pour liminer

Suspension mre les bactries vgtatives ( voir 6.2 )
afin d'obtenir le rsultat en nombre
de spores de bactries ou en
nombre de spores de Clostridia
Dilution (voir 6.2) thermophiles ( voir Note 2 en 6.5 )

En cas de suspicion de bactries Glose au sulfite de fer (3.1).

thermophiles (voir 6.4) Incubation 37 C 1 C Pendant
24 h 48 h (voir 6.4)

Glose au sulfite de fer (3.1).

Incubation 50 C 1 C Pendant Interprtation des rsultats :
24 h 48 h (voir 6.4) Rsultat donnant le nombre de
bactries sulfito-rductrices se
dveloppant en conditions
anarobies.
Interprtation des rsultats :
Rsultat donnant le nombre de
bactries sulfito-rductrices se
dveloppant en conditions Essais de confirmation (voir Note 2
anarobies. en 6.5) portant sur :
le pouvoir respiratoire
la formation de spores
Essais de confirmation (voir Note 2 Rsultat donnant le nombre de
en 6.5) portant sur : Clostridia.
le pouvoir respiratoire
la formation de spores
Rsultat donnant le nombre de
Clostridia thermophiles.

03

12 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 38
Arrt du 28 Rajab 1435 correspondant au 28 mai
2014 rendant obligatoire la mthode de
prparation des chantillons, de la suspension
mre et des dilutions dcimales en vue de
l'examen microbiologique.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 14-154 du 5 Rajab 1435
correspondant au 5 mai 2014 portant nomination des
membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05- 465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu l'arrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt, relatif aux spcifications
microbiologiques de certaines denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire une mthode de prparation des
chantillons, de la suspension mre et des dilutions
dcimales en vue de l'examen microbiologique.
Art. 2. Pour la prparation des chantillons, de la
suspension mre et des dilutions dcimales en vue de
l'examen microbiologique, les laboratoires du contrle de
la qualit et de la rpression des fraudes et les laboratoires
agrs cet effet, doivent employer la mthode jointe en
annexe.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alge, le 28 Rajab 1435 correspondant au 28 mai
2014.
Amara BENYOUNES.
analytique reconnue et approprie pour l'analyse
ANNEXE
METHODE DE PREPARATION
DES ECHANTILLONS, DE LA SUSPENSION
MERE ET DES DILUTIONS DECIMALES EN VUE
DE L'EXAMEN MICROBIOLOGIQUE
La prsente mthode dfinit les rgles gnrales pour la
prparation de la suspension mre et des dilutions
dcimales ralises en arobiose, en vue des examens
microbiologiques des produits destins la consommation
humaines ou l'alimentation animale.
24 Chabane 1435
22 juin 2014
I. TERMES ET DEFINITIONS
Pour les besoins de la prsente mthode les termes et les
dfinitions suivantes s'appliquent :
1.1 suspension mre (premire dilution)
Suspension, solution ou mulsion obtenue aprs qu'une
quantit pese ou mesure du produit analyser (ou de
l'chantillon pour essai prpar partir de ce produit) a t
mlange avec une quantit neuf fois gale de diluant, en
laissant se dposer les particules grossires, s'il y en
existe. (3 et les notes 1 et 2 en 6.1)
1.2 Dilutions dcimales suivantes
Suspensions ou solutions obtenues en mlangeant un
volume mesur de la suspension mre (1.1) avec un
volume neuf fois gal de diluant et en rptant cette
opration sur les dilutions suivantes, jusqu' obtention
d'une gamme de dilutions dcimales approprie pour
l'inoculation des milieux de culture.
2. PRINCIPE
Prparation de la suspension mre (1.1), de faon
obtenir une rpartition aussi uniforme que possible des
micro-organismes contenus dans la prise s'essai.
Prparation, si ncessaire, de dilutions dcimales (1.2)
en vue de rduire le nombre de microorganismes par unit
de volume pour permettre, aprs incubation, d'observer
leur ventuel dveloppement (cas des tubes) ou d'effectuer
le dnombrement des colonies (cas des botes), comme
prcis dans chaque mthode spcifique.
NOTE - Pour restreindre le domaine de dnombrement
un intervalle donn ou si des nombres levs de
micro-organismes sont attendus, il est possible
d'ensemencer uniquement les dilutions dcimales
ncessaires (deux dilutions successives au minimum).
3. DILUANTS
3.1 Composants de base
Pour amliorer la reproductibilit des rsultats, il est
recommand d'utiliser, pour la prparation du diluant, des
composants de base dshydrats ou une prparation
complte dshydrate. les instructions du fabricant
doivent tre suivies scrupuleusement.
Les produits chimiques doivent tre de qualit
microbiologique.
L'eau utilise doit tre de l'eau distille ou de qualit
quivalente.
3.2 Diluants d'emploi gnral
3.2.1 Solution de peptone - sel
3.2.1.1 Composition
Digestat enzymatique de casine ............................... 1 g
Chlorure de sodium ( NaCl) ................................... 8,5 g
Eau .................................................................... 1000 ml
04
24 Chabane 1435
22 juin 2014 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 38
3.2.1.2 Prparation
Dissoudre les composants dans l'eau, en chauffant si
ncessaire.
Si ncessaire, ajuster le pH de sorte qu'aprs
strilisation il soit de 7 0,2 25 C.
3.2.2 Eau peptone tamponne
3.2.2.1 Composition
Digestat enzymatique de tissus animaux ................. 10 g
Chlorure de sodium ( NaCl) ...................................... 5 g
Hydrognophosphate disodique dodcahydrat (Na2
HPO4, 12 H2O) ............................................................ 9 g
Dihydrognophosphate de potassium (KH2PO4) .. 1,5 g
Eau .................................................................... 1000 ml
3.2.2.2 Prparation
Dissoudre les composants dans l'eau, en chauffant si
ncessaire.
Si ncessaire, ajuster le pH de sorte qu'aprs
strilisation il soit de 7 0,2 25 C.
3.3 Rpartition et strilisation du diluant
Rpartir le diluant (3.2) en volumes ncessaires la
prparation des suspensions mres dans des fioles (4.4) de
capacit approprie.
Rpartir le diluant (3.2) en volumes ncessaires la
prparation des dilutions dcimales dans des tubes essai
(4.5) ou fioles (4.4) en quantit telle qu'aprs strilisation,
chaque tube ou fiole contienne 9 ml. L'incertitude de
mesure de ce volume final, aprs strilisation, ne doit pas
excder 2 %
Note : S'il est prvu de dnombrer plusieurs groupes de
micro-organismes au moyen de milieux de culture
diffrents, il peut tre ncessaire de rpartir tous les
diluants (ou quelques-uns seulement) en quantits
suprieures 9 ml, la dimension des fioles (4.4) et des
tubes essai (4.5) tant prvue en consquence.
Boucher les tubes ou les fioles.
Striliser l'autoclave 121C pendant 15 min.
4 - APPAREILLAGE ET VERRERIE
Matriel courant de laboratoire de microbiologie et, en
particulier, ce qui suit.
4.1 Appareils pour la strilisation en chaleur sche
(four) et en chaleur humide (autoclave).
4.2 Appareillage pour homognisation.
4.3 Agitateur mcanique.
4.4 Fioles, de capacits appropries.
4.5 Tubes essai, de capacits appropries
05
13
4.6 Pipettes gradues coulement total, de 1 ml et
10 ml de capacit nominale, gradues respectivement en
0,1 ml et 0,5 ml.
4.7 pH - mtre, ayant une prcision de lecture de 0,1
unit pH 25 C, permettant de raliser des mesures
prcises 0,1 unit pH.
4.8 Balance, capable de peser 0,01 g prs.
5. ECHANTILLONNAGE
L'chantillonnage se fait dans des conditions
appropries.
6. MODE OPERATOIRE
6.1 prise d'essai et suspension mre (Premire
dilution)
Dans un bol ou dans un sac en plastique striles, peser,
avec une incertitude de mesure de 5 %, une masse m
(g), ou mesurer, avec une incertitude de mesure de 5 %,
un volume v (ml) (au minimum 10 g ou 10 ml, sauf
spcification contraire) reprsentatifs de l'chantillon pour
essai.
Ajouter une quantit de diluant gale 9 x m (g) ou 9 x
v (ml). Cette quantit peut tre mesure de prfrence en
masse, avec une incertitude de mesure de 5%, ou en
volume, avec une incertitude de mesure de 5 %.
Note 1 : Il peut tre ncessaire dans certains cas,
notamment pour les produits donnant une suspension
mre 1 + 9 trop visqueuse ou trop paisse, d'ajouter
davantage de diluant. 11 convient alors d'en tenir compte
dans la suite des oprations et / ou dans l'expression des
rsultats.
Note 2 : Cette premire dilution conditionne en partie la
valeur de la limite infrieure de dnombrement, qui
dpend galement de la technique utilise (par exemple
ensemencement dans la masse avec un inoculum de 1 ml
dans une suspension 1/10, pour laquelle cette limite est de
10 micro-organismes par gramme). S'il est ncessaire,
pour certains dnombrements dans certains produits, de
descendre en dessous de cette limite, il est possible
d'utiliser un volume infrieur de diluant. I1 convient de
noter que l'ensemencement de cette suspension, mre peut
ventuellement entrainer des difficults lies au
dsquilibre du rapport inoculum / milieu (inhibition de la
croissance microbienne par concentration accrue des
composants de l'aliment).
Pour viter d'endommager les micro-organismes par de
brusques changements de temprature, la temprature du
diluant pendant les oprations dcrites ci-aprs, doit tre
proche de la temprature ambiante, sauf produits
particuliers.
Homogniser le mlange.
Si ncessaire , laisser les grosses particules se dposer
durant 15 min au maximum. Les systmes de filtration
donnant des rsultats quivalents peuvent tre utiliss.
Dans le cas du dnombrement des spores, un
chauffage de la suspension mre (par exemple pendant 10
min 80C) doit tre pratiqu immdiatement aprs sa
prparation, suivi d'un refroidissement rapide.
 24 Chabane 1435
14 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 38 22 juin 2014

6.2 Dilutions dcimales suivantes

Transvaser, l'aide d'une pipette strile (4.6) et avec

une incertitude de mesure de 5%, 1 ml de la suspension
mre dans un tube contenant 9 ml de diluant la
temprature approprie.

Note : Si un plus grand volume est ncessaire, il est

possible d'ajouter un volume dtermin de suspension
mre (plus 1 ml), avec une incertitude de mesure de 5%,
dans une fiole (4.4) contenant neuf fois le volume de
diluant strile.

Pour une prcision optimale, ne pas introduire la pipette

dans la suspension mre de plus de 1 cm.

Eviter tout contact entre la pipette (4.6) contenant

l'inoculum et le diluant strile.

Mlanger soigneusement la prise d'essai et le diluant, en

utilisant de prfrence un agitateur mcanique (4.3)
pendant 5 s 10 s, pour obtenir la dilution 10-2.

Si ncessaire, rpter ces oprations sur la dilution 10-2

et les dilutions dcimales suivantes en utilisant chaque
dilution une nouvelle pipette strile afin d'obtenir les
dilutions 10-3, 10-4, etc... jusqu' obtention du nombre
appropri de micro-organismes.

6.3 Dure des oprations

Le temps qui s'coule entre la fin de la prparation de la

suspension mre et le moment o l'inoculum entre en
contact avec le milieu de culture ne doit pas dpasser 45
min, en limitant 30 min le temps sparant la prparation
de la suspension mre (6.1) du dbut de la prparation des
dilutions dcimales suivantes.

Note : Si la temprature ambiante du laboratoire est

trop leve, il convient de rduire ces deux dures
maximales.

06
30 Moharram 1436
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 68
23 novembre 2014
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 21 Rajab 1435 correspondant au 21 mai
2014 rendant obligatoire la mthode de
dnombrement des staphylocoques coagulase
positive (staphylococcus aureus et autres espces).
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 14-154 du 5 Rajab 1435
correspondant au 5 mai 2014 portant nomination des
membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou El Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu l'arrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt relatif aux spcifications
microbiologiques de certaines denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire une mthode de dnombrement des
staphylocoques coagulase positive.
Art. 2. Pour le dnombrement des staphylocoques
coagulase positive, les laboratoires du contrle de la
qualit et de la rpression des fraudes et les laboratoires
agrs cet effet doivent employer la mthode jointe en
annexe du prsent arrt.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 21 Rajab 1435 correspondant au
21 mai 2014.
Amara BENOUNES.
suspension mre et des dilutions dcimales en vue de
ANNEXE
Mthode horizontale pour le dnombrement des
staphylocoques coagulase positive
(Staphylococcus aureus et autres espces)
(Technique utilisant le milieu glos de Baird-Parker et
inclusion des donnes de fidlit)
17
La prsente mthode spcifie une technique horizontale
pour le dnombrement des staphylocoques coagulase
positive dans les produits destins la consommation
humaine ou l'alimentation animale, par comptage des
colonies obtenues sur milieu solide (milieu de
Baird-Parker) aprs incubation en arobiose 35 C
ou 37 C.
1 - Termes et dfinitions :
Pour les besoins de la prsente mthode, les termes et
dfinitions suivants s'appliquent :
1.1 - Staphylocoques coagulase positive,
Bactries formant des colonies caractristiques et/ou
non caractristiques la surface d'un milieu de culture
slectif et donnant une raction positive la coagulase.
lorsque l'essai est effectu selon la prsente mthode.
1.2 - Dnombrement des staphylocoques coagulase
positive, dtermination du nombre de staphylocoques
coagulase positive trouv par millilitre ou par gramme
d'chantillon, lorsque l'essai est effectu selon la prsente
mthode.
2 - Principe :
2.1 - Ensemencement en surface d'un milieu glos
slectif coul dans deux sries de botes, avec une quantit
dtermine de l'chantillon pour essai si le produit
examiner est liquide, ou de la suspension mre dans le cas
d'autres produits.
Dans les mmes conditions, ensemencement des
dilutions dcimales obtenues partir de l'chantillon pour
essai ou de la suspension mre, raison de deux botes par
dilution.
2.2 - Incubation de ces botes 35 C ou 37 C
(la temprature est indique dans le bulletin d'analyse) en
arobiose et examen aprs 24 h et 48 h.
2.3 - Calcul du nombre de staphylocoques coagulase
positive par millilitre ou par gramme d'chantillon, partir
du nombre de colonies caractristiques et/ou non
caractristiques obtenues dans les botes retenues aux
niveaux de dilution donnant un rsultat significatif, et
confirmes par un rsultat positif de l'essai de la
coagulase.
3 - Diluant et milieux de culture :
3.1 - Diluant
Voir la mthode de prparation des chantillons, de la
l'examen microbiologique - Rgles gnrales pour la
prparation de la suspension mre et des dilutions
dcimales.
3.2 - Milieu glos de Baird-Parker (le milieu glos
est celui de Baird - Parker avec addition de
sulfamzathine dans le cas o l'on suspecte la prsence de
Proteus).
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JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 68
NOTE : des milieux commercialiss peuvent tre
utiliss. Dans ce cas. il convient de se conformer
strictement aux prescriptions du fabricant.
3.2.1 - Milieu de base :
3.2.1.1 - Composition :
Digestat pancratique de casine............................. 10 g
Extrait de levure......................................................... 1 g
Extrait de viande........................................................ 5 g
Pyruvate de sodium................................................. 10 g
L-Glycine................................................................ 12 g
Chlorure de lithium................................................... 5 g
Agar-agar................................................... 12 g 22 g a)
Eau, pour obtenir un volume final de 1000 ml.
a) (Selon le pouvoir glifiant de l'agar-agar).
3.2.1.2 - Prparation
Dissoudre les composants ou le milieu complet
dshydrat dans l'eau, en portant bullition.
Si ncessaire, ajuster le pH de sorte qu'aprs
strilisation il soit de 7,2 0,2 25 C.
Rpartir le milieu, par quantits de 100 ml, dans des
flacons ou fioles (4.5) de capacit approprie.
Striliser le milieu 121C pendant 15 min.
3.2.2 - Solutions :
3.2.2.1 - Solution de tellurite de potassium :
3.2.2.1.1 - Composition :
Tellurite de potassium a (K2 Te03) ........................... 1 g
Eau...................................................................... 100 ml.
a : Il est recommand de s'assurer au pralable que le
tellurite de potassium dont on dispose convient pour cet
essai (3.2.2.1.2).
3.2.2.1.2 - Prparation :
Dissoudre compltement le tellurite de potassium dans
leau, en chauffant le moins possible.
Il convient que la poudre soit rapidement soluble. Si un
compos blanc insoluble est prsent dans l'eau, ne pas
retenir la poudre.
Striliser par filtration sur des membranes de 0,22 m
de porosit.
La solution peut tre conserve au maximum 1 mois
+3 C 2 C.
Eliminer la solution si un prcipit blanc se forme.
08
30 Moharram 1436
23 novembre 2014
3.2.2.2 - Emulsion de jaune d'uf ( une
concentration d'environ 20 % ou selon les instructions du
fabricant).
NOTE : Si une prparation commerciale est disponible,
il convient de l'utiliser.
Utiliser des ufs frais de poule coquille intacte.
Nettoyer les ufs avec une brosse l'aide d'un dtergent
liquide.
Les rincer l'eau courante puis dsinfecter les coquilles,
soit en les plongeant dans l'thanol 70 % (fraction
volumique) pendant 30 s et les laissant scher l'air, soit
en les pulvrisant d'alcool suivi de flambage.
En oprant de faon aseptique, casser chaque oeuf et
sparer le jaune du blanc par transferts rpts du jaune
d'une demi-coquille dans l'autre. Placer les jaunes dans un
flacon strile (4.5) et ajouter quatre fois leur volume d'eau
strile. Mlanger vigoureusement. Chauffer le mlange
dans le bain d'eau (4.4) rgl 47 C pendant 2 h et
entreposer +3 C 2 C pendant 18 h 24 h pour laisser
se former un prcipit. Recueillir aseptiquement le liquide
surnageant dans un flacon rcemment strilis pour
l'utilisation.
L'mulsion peut tre conserve 72 h au maximum +
3 C 2 C.
3.2.2.3 - Solution de sulfamzathine (sulfamthazine,
sulfadimidine) :
NOTE : A tre utilise seulement dans le cas o l'on
suspecte la prsence d'espces de Proteus dans
l'chantillon pour essai.
3.2.2.3.1 - Composition :
Sulfamzathine........................................................ 0,2 g
Solution d'hydroxyde de sodium, c(NaOH) 0,1
mol/l........................................................................... 10 ml
Eau......................................................................... 90 ml
3.2.2.3.2 - Prparation :
Dissoudre la sulfamzathine dans la solution
d'hydroxyde de sodium.
Complter 100 ml avec de l'eau.
Striliser par filtration sur des membranes de 0,22 m
de porosit.
La solution peut tre conserve au maximum 1 mois +
3 C 2 C.
3.2.3 - Milieu complet :
3.2.3.1 - Composition :
Milieu de base (3.2.1).......................................... 100 ml
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23 novembre 2014
Solution de tellurite de potassium............. (3.2.2.1) 1 ml
Emulsion de jaune d'uf (3.2.2.2).......................... 5 ml
Solution de sulfamzathine (3.2.2.3) (si ncessaire)
............................................................................... 2,5 ml
3.2.3.2 - Prparation :
Faire fondre le milieu de base, puis le refroidir
environ 47 C au moyen du bain d'eau (4.4).
Ajouter, de faon aseptique, les deux autres solutions
(3.2.2.1 et 3.2.2.2) et, si ncessaire (si l'on suspecte la
prsence d'espces de Proteus dans l'chantillon pour
essai), la solution de sulfamzathine (3.2.2.3), chaque
solution tant pralablement rchauffe au bain d'eau
47 C, en mlangeant soigneusement aprs chaque
addition.
3.2.4 - Prparation des botes de milieu glos :
Couler la quantit ncessaire du milieu complet (3.2.3),
dans des botes de Petri striles de faon obtenir une
paisseur de glose d'environ 4 mm, et laisser se solidifier.
Les botes peuvent tre conserves, avant schage, 24 h
au maximum +3 C 2 C.
NOTE : pour la dure de conservation de botes
prpares industriellement, il convient de suivre les
instructions du fabricant.
Avant utilisation, scher les botes, de prfrence avec
le couvercle enlev, et avec la surface de la glose tourne
vers le bas, dans une tuve rgle entre 25 C et 50 C,
jusqu' disparition des gouttelettes la surface du milieu.
3.3 - Bouillon cur-cervelle :
3.3.1 - Composition :
Digestat enzymatique de tissus animaux.................. 10 g
Extrait dshydrat de cervelle de veau.................. 12,5 g
Extrait dshydrat de coeur de buf.......................... 5 g
Glucose....................................................................... 2 g
Chlorure de sodium.................................................... 5 g
Hydrognorthophosphate disodique anhydre
(Na2HP04)............................................................... 2,5 g
Eau..................................................................... 1000 ml
3.3.2 - Prparation :
Dissoudre les composants ou le milieu complet
dshydrat dans l'eau, en chauffant si ncessaire.
Ajuster le pH de sorte qu'aprs strilisation il soit de 7,4
0,2 25 C.
Rpartir le milieu de culture, par quantits de 5 ml 10
ml, dans des tubes ou fioles (4.5) de capacit approprie.
Striliser le milieu 121 C pendant 15 min.
09
19
3.4 - Plasma de lapin :
Utiliser un plasma dshydrat de lapin, disponible dans
le commerce, et le rhydrater en se conformant aux
instructions du fabricant.
Si l'on ne peut se procurer du plasma de lapin
dshydrat, diluer un plasma de lapin frais et strile 1
volume pour 3 volumes d'eau strile.
Si du citrate de potassium ou du citrate de sodium a t
utilis comme anticoagulant du plasma, ajouter une
solution d'EDTA (acide thylne diamine ttraactique)
de manire avoir 0,1 % d'EDTA dans le plasma
rhydrat ou dilu (le plasma oxalat ou hparin ne
demande pas d'EDTA).
A dfaut d'instructions du fabricant, le plasma rhydrat
ou dilu doit tre utilis extemporanment.
Avant utilisation, contrler chaque lot de plasma avec
des souches de staphylocoques coagulase positive ainsi
qu'avec des souches de staphylocoques coagulase
ngative.
4 - Appareillage et verrerie :
NOTE : Le matriel usage unique est acceptable au
mme titre que la verrerie rutilisable, condition que ses
spcifications soient convenables.
Matriel courant de laboratoire de microbiologie et en
particulier, ce qui suit.
4.1 - Appareil pour la strilisation en chaleur sche
(four) et en chaleur humide (autoclave).
4.2 - Etuve, permettant de maintenir les milieux
inoculs, les botes et les flacons l'intrieur d'une plage
de tempratures de 35 C 1 C ou 37 C 1 C.
4.3 - Enceinte de schage ou tuve, pouvant tre
maintenue une temprature entre 25 C 1 C et 50 C
1 C.
4.4 - Bain d'eau, ou dispositif similaire, rglable
47 C 2 C.
4.5 - Tubes essai, flacons ou fioles avec des
bouchons vis, de capacits appropries, pour la
strilisation et la conservation des milieux de culture et
l'incubation des milieux liquides ; en particulier, tubes
striles hmolyse, ou flacons fond rond de dimensions
10 mm, 75 mm, environ.
4.6 - Botes de Ptri, striles, en verre ou en matire
plastique.
4.7 - Fil droit, et pipette Pasteur.
4.8 - Pipettes gradues coulement total, de 1 ml,
2 ml et 10 ml de capacit nominale, gradues
respectivement en 0,1 ml et 0,5 ml.
20
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 68
4.9 - taleurs, striles, en verre ou en matire plastique.
4.10 - pH-mtre, ayant une prcision de lecture de
0,01 unit pH 25 C, permettant de raliser des
mesures prcises 0,1 unit pH.
5 - Echantillonnage
L'chantillonnage et la prparation des chantillons
doivent tre effectus dans des conditions appropries.
Il est important que le laboratoire reoive un chantillon
reprsentatif, non endommag ou modifi lors du
transport et de l'entreposage.
6 - Mode opratoire :
6.1 - Prise d'essai, suspension mre et dilutions
Voir la mthode de prparation des chantillons, de la
suspension mre et des dilutions dcimales en vue de
l'examen microbiologique-Rgles gnrales pour la
prparation de suspension mre et des dilutions dcimales.
6.2 - Ensemencement
6.2.1 - Transfrer, l'aide d'une pipette strile (4.8), 0,1
ml de l'chantillon pour essai s'il est liquide ou 0,1 ml de
suspension mre (dilution 10-1) pour les autres produits,
la surface de chacune des deux botes de milieu glos
(3.2.4).
Rpter l'opration avec la dilution 10-2 et les dilutions
suivantes si ncessaire.
6.2.2 - S'il est ncessaire, pour certains produits, de
procder l'estimation de petits nombres de
staphylocoques coagulase positive, les limites du
dnombrement peuvent tre augmentes d'une puissance
de 10 en ensemenant 1 ml de l'chantillon pour essai s'il
est liquide, ou 1 ml de la suspension mre pour les autres
produits, soit la surface d'une grande bote (140 mm) de
milieu glos, soit la surface de trois (3) petites botes
(90 mm) de milieu glos. Dans les deux cas, effectuer ces
oprations en double, de faon avoir deux grandes botes
ou six petites botes.
6.2.3 - Etaler soigneusement l'inoculum le plus
rapidement possible la surface du milieu glos en
vitant de toucher les bords de la bote avec l'taleur (4.9).
Laisser scher les botes, avec leur couvercle en place,
pendant, environ, 15 min la temprature ambiante.
6.3 - Incubation :
Retourner les botes prpares selon 6.2.3, les incuber
pendant 24 h 2 h, puis les rincuber pendant 24 h 2 h
supplmentaires dans l'tuve (4.2) 35 C ou 37 C.
(la temprature est indique dans le bulletin d'analyse).
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6.4 - Slection des botes et interprtation
6.4.1 - Aprs 24 h 2 h d'incubation, marquer sur le
fond des botes les positions des colonies caractristiques
ventuellement prsentes (note 1).
Incuber nouveau toutes les botes 35 C ou 37 C
(la temprature est indique dans le bulletin d'analyse)
durant 24 h 2 h supplmentaires, et marquer les
nouvelles colonies caractristiques. Marquer galement
les colonies non caractristiques ventuellement prsentes
(note 2).
Ne retenir pour le dnombrement que les botes
renfermant au maximum 300 colonies dont 150 colonies
caractristiques et/ou non caractristiques au niveau de
deux dilutions successives. Il faut qu'une des botes
renferme au moins 15 colonies.
Choisir, en vue de la confirmation (6.5), un nombre
dtermin A (en gnral 5 colonies caractristiques s'il n'y
a que des colonies caractristiques, ou 5 colonies non
caractristiques s'il n'y a que des colonies non
caractristiques, ou 5 colonies caractristiques et 5
colonies non caractristiques si les deux types sont
prsents, partir de chaque bote).
S'il y a moins de 15 colonies caractristiques et/ou non
caractristiques sur les botes ensemences avec un
produit liquide non dilu ou avec la dilution la plus faible
pour les autres produits, il est possible de faire une
estimation comme dcrit en (6.4.3) et en (7.2).
NOTE 1 : Les colonies caractristiques sont noires ou
grises, brillantes et convexes (l mm 1,5 mm de diamtre
aprs 24 h d'incubation et 1,5 mm 2,5 mm de diamtre
aprs 48 h d'incubation) et sont entoures d'une aurole
claire qui peut tre partiellement opaque. : Aprs, au
moins, 24 h d'incubation, un anneau opalescent peut
apparatre dans cette zone claire immdiatement au
contact des colonies.
NOTE 2 :
Les colonies non caractristiques ont la mme taille que
les colonies caractristiques et peuvent prsenter l'une des
morphologies suivantes :
colonies noires et brillantes avec ou sans bord blanc
troit; la zone claire et l'anneau opalescent sont absents ou
peine visibles ;
colonies grises dpourvues de zone claire.
Les colonies non caractristiques sont surtout formes
de souches de staphylocoques coagulase positive
contaminant, par exemple, les produits laitiers, les
crevettes et les abats. Ce sont moins souvent des souches
de staphylocoques coagulase positive qui contaminent
les autres produits.
10
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JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 68
23 novembre 2014
NOTE 3 : Les autres colonies sont celles
ventuellement prsentes sur les botes et qui n'ont pas
l'apparence dcrite dans les notes 1 et 2 pour les colonies
caractristiques et non caractristiques. Ces colonies sont
considres comme faisant partie de la flore annexe.
6.4.2 - Si 1 ml d'inoculum a t rparti sur trois botes
(7.2.2), effectuer les oprations de dnombrement et de
confirmation sur l'ensemble de ces botes comme s'il
s'agissait d'une seule bote.
6.4.3 - Pour faire une estimation de petits nombres de
staphylocoques coagulase positive, retenir toutes les
botes qui contiennent des colonies caractristiques et non
caractristiques. Retenir toutes ces colonies en vue de la
confirmation sans sortir des limites fixes ci-dessus.
6.5 - Confirmation (recherche de la coagulase)
l'aide d'un fil strile (4.7), prlever une partie de
chaque colonie slectionne (6.4) et l'ensemencer dans un
tube ou dans un flacon de bouillon cur-cervelle (3.3).
Incuber 35 C ou 37 C (la temprature est indique
dans le bulletin d'analyse) pendant 24 h 2 h.
Ajouter aseptiquement 0,1 ml de chaque culture 0,3
ml de plasma de lapin (3.4) ( moins que d'autres
quantits soient spcifies par le fabricant) dans des tubes
striles hmolyse ou flacons (spcifis en 4.5) et incuber
35 C ou 37 C (la temprature est indique dans le
bulletin d'analyse).
En inclinant le tube, examiner la coagulation du plasma
aprs 4 h 6 h d'incubation et, si le test est ngatif,
rexaminer aprs 24 h d'incubation, ou examiner aprs les
temps d'incubation prconiss par le fabricant.
Considrer que la raction la coagulase est positive
quand le coagulum occupe plus de la moiti du volume
initialement occup par le liquide.
A titre de contrle ngatif, ajouter, pour chaque lot de
plasma, 0,1 ml de bouillon cur - cervelle strile (3.3) la
quantit recommande de plasma de lapin (3.4) et faire
incuber sans ensemencement. Pour que la raction soit
valable, le plasma du tube tmoin ne devra pas montrer de
signes de coagulation.
7 - Expression des rsultats
7.1 - Cas gnral
7.1.1 - Calcul du nombre de staphylocoques
coagulase positive identifis pour chaque bote
retenue :
Calculer, pour chacune des botes, le nombre de
staphylocoques coagulase positive identifis, selon
l'quation suivante :
21
bc bnc
= x Cc + x Cnc
Ac Anc
O
Ac : Nombre de colonies caractristiques soumises au
test de la coagulase (6.5) ;
Anc : Nombre de colonies non caractristiques soumises
au test de la coagulase (6.5) ;
bc : Nombre de colonies caractristiques qui ont
rpondu positivement au test de la coagulase ;
bnc : Nombre de colonies non caractristiques qui ont
rpondu positivement au test de la coagulase ;
Cc : Nombre total de colonies caractristiques repres
sur la bote (6.4) ;
Cnc : Nombre total de colonies non caractristiques
repres sur la bote (6.4) ;
Arrondir un nombre entier.
7.1.2 - Calcul du nombre N de staphylocoques
coagulase positive identifis prsents dans la prise
d'essai :
Pour celles des botes qui contiennent 300 colonies au
maximum, dont 150 colonies caractristiques et/ou non
caractristiques pour deux dilutions successives, calculer
le nombre de staphylocoques coagulase positive pour
chaque bote tel qu'il est indiqu en (7.1.1) et calculer le
nombre N de staphylocoques coagulase positive
identifis prsents dans l'chantillon pour essai, en tant
que moyenne pondre partir des deux dilutions
successives l'aide de l'quation suivante :
N=
V (n1 + 0,1 n2 ) d
O :
: Somme des colonies de staphylocoques
coagulase positive identifies sur l'ensemble des botes
retenues ;
V: Volume de l'inoculum appliqu chaque bote, en
millilitres ;
n1 : Nombre de botes retenues la premire dilution ;
n2 : Nombre de botes retenues la seconde dilution ;
d : Taux de dilution correspondant la premire
dilution retenue (la suspension mre est une dilution).
Arrondir deux chiffres significatifs les rsultats
obtenus.
11
22
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 68
Noter le rsultat comme tant le nombre de
staphylocoques coagulase positive par millilitre (produit
liquide) ou par gramme (autre produit), exprim par un
nombre compris entre 1 et 9,9 multipli par 10x, o x est
la puissance approprie de 10.
7.1.3 - Exemple : Un dnombrement d'un produit aprs
ensemencement avec 0,1 ml de produit a donn les
rsultats suivants :
- la premire dilution retenue (10-2) : 65 colonies
caractristiques et 85 colonies caractristiques (aucune
colonie non caractristique) ;
-3
- la deuxime dilution retenue (10 ) : 3 colonies
caractristiques et 7 colonies caractristiques (aucune
colonie non caractristique).
Ont t repiques :
- parmi les 65 colonies, 5 colonies dont toutes les 5 se
sont rvles tre coagulase positive ; d'o a = 65 ;
- parmi les 85 colonies, 5 colonies dont 3 se sont
rvles tre coagulase positive ; d'o a = 51;
- parmi les 3 colonies, 3 colonies dont toutes les 3 se
sont rvles tre coagulase positive ; d'o a = 3 ;
- parmi les 7 colonies, 5 colonies dont toutes les 5 se
sont rvles tre coagulase positive ; d'o a =7.
65 + 51 + 3 +7
N= = 57272
0,22 x 10-2
Le rsultat, aprs arrondissement, est 5,7 x 104.
7.2 - Estimation de petits nombres :
7.2.1 - Si les deux botes, au niveau de l'chantillon
pour essai (produits liquides) ou de la suspension mre
(autres produits), contiennent chacune moins de 15
colonies identifies, exprimer l rsultat comme suit.
a) Pour les produits liquides, nombre estim de
staphylocoques coagulase positive par, millilitre :
N=
V x2
O :
: Somme des colonies de staphylocoques
coagulase positive identifies (7.1.1) sur les deux botes
retenues ;
V : Volume tal sur chaque bote.
b) : Pour les autres produits, nombre estim de
staphylocoques coagulase positive par gramme :
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Ne =
Vx 2 x d
O :
: Somme des colonies de staphylooques
coagulase positive identifies (7.1.1) sur les deux botes
retenues ;
d : Taux de dilution de la suspension mre ;
V : Volume tal sur chaque bote.
7.2.2 - Si les deux botes, au niveau de l'chantillon
pour essai (produits liquides) ou de la suspension mre
(autres produits), ne contiennent aucune colonie de
staphylocoques coagulase positive et si l'ensemencement
a t effectu avec 0,1 ml d'chantillon, exprimer le
rsultat comme suit ( cas gnral d'un inoculum de
0,1 ml) :
moins de 10 staphylocoques coagulase positive par
millilitre (produits liquides) ;
moins de 10/d staphylocoques coagulase positive
par gramme (autres produits), o d est le taux de dilution
de la suspension mre.
Si l'ensemencement a t effectu avec 1 ml
d'chantillon, exprimer le rsultat comme suit :
moins de 1 staphylocoque coagulase positive par
millilitre (produits liquides) ;
moins de 1/d staphylocoque coagulase positive par
gramme (autres produits).
8 - Fidlit :
8.1- Rptabilit
La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
individuels indpendants (transforms en log 10) (nombre
de staphylocoques coagulase positive par gramme ou par
millilitre) o le rapport, sur une chelle normale, entre le
plus lev et le plus bas des deux rsultats d'essai obtenus
l'aide de la mme mthode sur un matriau identique
soumis l'essai dans le mme laboratoire , par le mme
oprateur utilisant le mme appareillage dans un intervalle
de temps le plus court possible, n'excdera que dans 5%
des cas au plus la limite de rptabilit.
8.2- Reproductibilit
La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
individuels (transforms en log10) (nombre de
staphylocoques coagulase positive par gramme ou par
millilitre), o le rapport, sur une chelle normale, entre le
plus lev et le plus bas des deux rsultats d'essai obtenus
l'aide de la mme mthode, sur un matriau identique
soumis l'essai dans des laboratoires diffrents, par des
oprateurs diffrents utilisant des appareillages diffrents,
n'excdera que dans 5% des cas au plus la limite de
reproductibilit.
12

14 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 14
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 4 Chaoual 1435 correspondant au 31 juillet
2014 rendant obligatoire la mthode utilisant le
milieu glos au plasma de lapin et au
fibrinogne pour le dnombrement des
staphylocoques coagulase positive.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 14-154 du 5 Rajab 1435
correspondant au 5 mai 2014 portant nomination des
membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
13
4 Joumada Ethania 1436
25 mars 2015
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu l'arrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt, relatif aux spcifications
microbiologiques de certaines denres alimentaires ;
Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire une mthode utilisant le milieu
glos au plasma de lapin et au fibrinogne pour le
dnombrement des staphylocoques coagulase positive.
Art. 2. Pour le dnombrement des staphylocoques
coagulase positive, les laboratoires du contrle de la
qualit et de la rpression des fraudes et les laboratoires
agrs cet effet doivent employer la mthode jointe en
annexe.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 4 Chaoual 1435 correspondant au 31
juillet 2014.
Amara BENYOUNES.
ANNEXE
Mthode utilisant le mileu glos au plasma de lapin et
au fibrinogne pour le dnombrement des
staphylocoques coagulase positive
La prsente mthode spcifie une technique pour le
dnombrement des staphylocoques coagulase positive
(staphylococcus aureus et autres espces) dans les
produits destins la consommation humaine ou
l'alimentation animale, par comptage des colonies
obtenues en milieu solide (milieu au plasma de lapin
et au fibrinogne) aprs incubation en arobiose 35 C
ou 37 C.
1. TERMES ET DEFINITIONS
Pour les besoins de la prsente mthode, les termes et
dfinitions suivants s'appliquent.
1.1 Staphylocoques coagulase positive
Bactries formant des colonies caractristiques en
milieu slectif glos au plasma de lapin et au fibrinogne,
lorsque l'essai est effectu selon la technique spcifie
dans la prsente mthode.
4 Joumada Ethania 1436
25 mars 2015 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 14
1.2 Dnombrement des staphylocoques coagulase
positive
Dtermination du nombre de staphylocoques
coagulase positive trouv par millilitre ou par gramme
d'chantillon, lorsque l'essai est effectu selon la
technique spcifie dans la prsente mthode.
2. PRINCIPE
2.1 Ensemencement en profondeur du milieu glos au
plasma de lapin et au fibrinogne, coul dans deux botes
de Petri, avec une quantit dtermine de l'chantillon
pour essai si le produit est liquide ou avec une quantit
dtermine de la suspension mre dans le cas d'autres
produits.
Dans les mmes conditions, ensemencement des
dilutions dcimales obtenues partir de l'chantillon pour
essai ou de la suspension mre, raison de deux botes par
dilution.
2.2 Incubation de ces botes 35 C ou 37 C pendant
18 h 24 h et, si ncessaire, 24 h supplmentaires.
2.3 A partir du nombre de colonies caractristiques par
bote de Petri, calcul du nombre de staphylocoques
coagulase positive par millilitre ou par gramme
d'chantillon pour essai.
3. DILUANT ET MILIEUX DE CULTURE
3.1 Diluant
Se conformer aux rgles gnrales pour la prparation
de la suspension mre et des dilutions dcimales en vue de
l'examen microbiologique.
3.2 Milieu glos au plasma de lapin et au
fibrinogne.
NOTE- Des milieux commercialiss conformes aux
spcifications de la prsente mthode peuvent tre utiliss.
Cependant, en raison de la variabilit constate des lots de
fabrication du supplment, il est recommand de tester,
avant utilisation, chaque lot de solution de fibrinogne
bovin et de plasma de lapin en effectuant des contrles
positifs et ngatifs.
3.2.1 Milieu de base
Voir la mthode de dnombrement des staphylocoques
coagulase positive (staphylococcus aureus et autres
espces) technique utilisant le milieu glos de
Baird-Parker, l'exception de la rpartition du milieu de
base, raison de 90 ml par flacon.
14
15
3.2.2 Solutions
3.2. 2.1 Solution de tellurite de potassium
Prparer la solution de tellurite de potassium comme
indiqu dans la mthode de dnombrement des
staphylocoques coagulase positive (staphylococcus
aureus et autres espces), technique utilisant le milieu
glos de Baird-Parker.
3.2.2.2 Solution de fibrinogne bovin
3.2.2.2.1 Composition
Fibrinogne bovin............................................. 5g 7g
(Selon la puret du fibrinogne bovin).
Eau strile............................................................. l 00 ml
3.2.2.2.2 Prparation
En oprant aseptiquement, dissoudre le fibrinogne
bovin dans l'eau, juste avant l'utilisation.
3.2.2.3 Solution de plasma de lapin et d'inhibiteur de
trypsine
3.2.2.3.1 Composition
Plasma de lapin avec EDTA pour coagulase (plasma
coagulase EDTA)...................................................... 30 ml
Inhibiteur de trypsine............................................ 30 mg
3.2.2.3.2 Prparation
En oprant aseptiquement, dissoudre les composants
dans l'eau, juste avant l'utilisation.
3.2.3 Milieu complet
3.2.3.1 Composition
Milieu de base (3.2.1 )........................................... 90 ml
Solution de tellurite de potassium (3.2. 2.1 )...... 0,25 ml
Solution de fibrinogne bovin (3.2.2.2)................ 7,5 ml
Solution de plasma de lapin et d'inhibiteur de
trypsine (3.2.2.3)....................................................... 2,5 ml
3.2.3.2 Prparation
Faire fondre le milieu de base, puis le laisser refroidir
48 C 1 C dans un bain d'eau (4.3).
Ajouter de faon aseptique les trois solutions,
pralablement rchauffes 48 C 1 C dans un bain
d'eau et, aprs chaque addition, mlanger soigneusement
par rotation, afin de minimiser la formation de mousse.
Utiliser le milieu complet immdiatement aprs sa
prparation, afin d'viter une prcipitation du plasma.

16 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 14
NOTE- En cas d'utilisation d'une solution
commercialise de fibrinogne bovin et de plasma de
lapin, respecter scrupuleusement les instructions du
fabricant pour la prparation de cette solution et du milieu
complet (notamment la temprature du milieu de base).
Sinon, le milieu peut perdre compltement son activit.
3.3 Prparation des botes de milieu glos
Voir la mthode horizontale pour le dnombrement des
staphylocoques coagulase positive (staphylococcus
aureus et autres espces), technique utilisant le milieu
glos de Baird-Parker.
4. APPAREILLAGE ET VERRERIE
NOTE- Le matriel usage unique est acceptable au
mme titre que la verrerie rutilisable, condition que ses
spcifications soient convenables.
Matriel courant de laboratoire de microbiologie et, en
particulier, ce qui suit :
4.1 Appareil pour la strilisation en chaleur sche
(four) et en chaleur humide (autoclave) ;
4.2 Etuve, permettant de maintenir les milieux inoculs,
les botes et les flacons l'intrieur d'une plage de
tempratures de 35 C 1 C ou 37 C 1 C.
4.3 Bain d'eau, ou dispositif similaire, rglable
48 C 1 C.
4.4 Botes de Petri, striles, en verre ou en matire
plastique.
4.5 Pipettes gradues coulement total, de 1 ml, 2
ml et 10 ml de capacit nominale, gradues
respectivement en 0,1 ml, 0,1 ml et 0,5 ml.
5. ECHANTILLONNAGE
Il est important que le laboratoire reoive un chantillon
reprsentatif, non endommag ou modifi lors du
transport et de l'entreposage.
6. PREPARATION DE L'ECHANTILLON POUR
ESSAI
Prparer l'chantillon pour essai conformment la
mthode de prparation des chantillons, de la suspension
mre et des dilutions dcimales en vue de l'examen
microbiologique.
7. MODE OPERATOIRE
7.1 Prise d'essai, suspension mre et dilution
Voir la mthode de prparation des chantillons, de la
suspension mre et des dilutions dcimales en vue de
l'examen microbiologique .
15
4 Joumada Ethania 1436
25 mars 2015
7.2 Ensemencement et incubation
7.2.1 Prendre deux botes de Petri striles (4.4). A l'aide
d'une pipette strile (4.5), transfrer dans chacune des
botes 1 ml de l'chantillon pour essai si le produit est
liquide, ou 1 ml de la suspension mre dans le cas d'autres
produits.
Prendre deux autres botes de Petri striles, transfrer
dans chacune des botes 1 ml de la premire dilution
dcimale.
Rpter ces oprations avec des dilutions successives,
l'aide d'une nouvelle pipette strile pour chaque dilution
dcimale.
7.2.2 Couler, dans chacune des deux botes de Petri
(7.2.1), le milieu complet (3.2.3) utilis extemporanment
(ne pas le maintenir en surfusion), de faon obtenir une
paisseur d'environ 3 mm.
Mlanger soigneusement l'inoculum au milieu de
culture et laisser solidifier en posant les botes de Petri sur
une surface frache et horizontale.
7.2.3 Aprs solidification complte, retourner les botes
ainsi prpares et les faire incuber l'tuve (4.2) rgle
35 C ou 37 C pendant 18 h 24 h et, si ncessaire,
rincuber pendant 18 h 24 h supplmentaires.
7.3 Comptage des colonies
Aprs une priode d'incubation (7.2.3), les
staphylocoques forment de petites colonies noires ou
grises ou mme blanches, entoures d'un halo de
prcipitation indiquant une activit de coagulase. Des
colonies de proteus peuvent prsenter en dbut
d'incubation un aspect similaire celui des colonies de
staphylocoques coagulase positive. Cependant, aprs 24
h ou 48 h d'incubation, elles prennent un aspect de culture
en nappe plus ou moins bruntre et envahissante qui
permet de ne pas les confondre avec les staphylocoques.
Procder au comptage des colonies caractristiques
pour chaque bote.
NOTE- Comme la glose au plasma de lapin et au
fibrinogne est fonde sur une raction de coagulase, il
n'est pas ncessaire de confirmer cette activit.
8. EXPRESSION DES RESULTATS
8.1 Cas gnral
Retenir celles des botes qui contiennent 300 colonies
au maximum, dont 100 colonies caractristiques au niveau
de deux dilutions successives. Il faut qu'une bote
renferme, au moins, 15 colonies caractristiques.
4 Joumada Ethania 1436
25 mars 2015 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 14
Calculer le nombre N de staphylocoques coagulase
positive prsents par millilitre ou par gramme de produit
en tant que moyenne pondre partir de deux dilutions
successives l'aide de l'quation suivante :
C C : Somme des colonies de staphylocoques coagulase
N=
V (n1 + 0,1 n2 ) d
O :
c : Somme des colonies de staphylocoques
caractristiques sur l'ensemble des botes retenues ;
V : Volume de l'inoculum appliqu chaque bote, en
millilitres ;
n1 : Nombre de botes retenues la premire dilution ;
n2 : Nombre de botes retenues la seconde dilution ;
d : Taux de dilution correspondant la premire
dilution retenue (la suspension mre est une dilution).
Arrondir deux chiffres significatifs les rsultats
obtenus.
Noter le rsultat comme tant le nombre de
staphylocoques coagulase positive par millilitre (produit
liquide) ou par gramme (autre produit), exprim par un
nombre compris entre 1 et 9,9 multipli par 10x, o x est
la puissance approprie de 10.
EXEMPLE
Un dnombrement d'un produit aprs ensemencement
avec 0,1 ml de produit a donn les rsultats suivants :
la premire dilution retenue (10-2) : 66 colonies
caractristiques et 54 colonies caractristiques ;
la deuxime dilution retenue (10-3) : 4 colonies
caractristiques et 7 colonies caractristiques ;
66 + 54 + 4 + 7
N= = 5955
2,2 x 10-2
Le rsultat, aprs arrondissement, est 6 x 10-3.
8.2 Estimation de petits nombres
8.2.1 Si les deux botes, au niveau de l'chantillon pour
essai (produits liquides) ou de la suspension mre (autres
produits), contiennent chacune moins de 15 colonies,
exprimer le rsultat comme suit :
a) pour les produits liquides, nombre estim de
staphylocoques coagulase positive par millilitre :
16
17
C
Ne =
2
O :
positive comptes (7.3) sur les deux botes retenues ;
b) pour les autres produits, nombre estim de
staphylocoques coagulase positive par gramme :
C
Ne =
2xd
O :
C : Somme des colonies de staphylocoques coagulase
positive comptes (7.3) sur les deux botes retenues ;
d : Taux de dilution de la suspension mre.
8.2.2 Si les deux botes, au niveau de l'chantillon pour
essai (produits liquides) ou de la suspension mre (autres
produits), ne contiennent aucune colonie de
staphylocoques coagulase positive, exprimer le rsultat
comme suit :
moins de 1 staphylocoque coagulase positive par
millilitre (produits liquides) ;
moins de 1/d staphylocoque coagulase positive par
gramme (autres produits), o d est le taux de dilution de la
suspension mre.
9. FIDELITE
9.1 Rptabilit
La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
individuels indpendants (nombre de staphylocoques
coagulase positive par gramme ou par millilitre,
transforms en log10) ou le rapport, sur une chelle
normale, entre le plus lev et le plus bas des deux
rsultats d'essai obtenus l'aide de la mme mthode sur
un matriau identique soumis l'essai dans le mme
laboratoire par le mme oprateur utilisant le mme
appareillage dans un intervalle de temps le plus court
possible, n'excdera que dans 5% des cas au plus la limite
de rptabilit.
9.2 Reproductibilit
La diffrence absolue entre deux rsultats d'essai
individuels (nombre de staphylocoques coagulase
positive par gramme ou par millilitre, transforms en
log10) ou le rapport, sur une chelle normale, entre le plus
lev et le plus bas des deux rsultats d'essai obtenus
l'aide de la mme mthode sur un matriau identique
soumis l'essai dans des laboratoires diffrents par des
oprateurs diffrents utilisant des appareillages diffrents,
n'excdera que dans 5% des cas au plus la limite de
reproductibilit.
25 Dhou El Kaada 1436
9 septembre 2015 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 48 17

MINISTERE DU COMMERCE

Arrt du 14 Chabane 1436 correspondant au 2 juin

2015 rendant obligatoire la mthode horizontale
pour le dnombrement des levures et moisissures
par comptage des colonies dans les produits, dont
l'activit d'eau est suprieure 0,95.

Le ministre du commerce ;
Vu le dcret prsidentiel n 15-125 du 25 Rajab 1436
correspondant au 14 mai 2015 portant nomination des
membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou El Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu le dcret excutif n 13-328 du 20 Dhou El Kaada
1434 correspondant au 26 septembre 2013 fixant les
conditions et les modalits d'agrment des laboratoires au
titre de la protection du consommateur et de la rpression
des fraudes ;
Vu l'arrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt, relatif aux spcifications micro
biologiques de certaines denres alimentaires ;

Arrte :

Article 1er. En application des dispositions de

l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode horizontale pour le
dnombrement des levures et moisissures par comptage
des colonies dans les produits, dont l'activit d'eau est
suprieure 0,95.

Art. 2. Pour le dnombrement des levures et

moisissures par comptage des colonies dans les produits,
dont l'activit d'eau est suprieure 0,95, les laboratoires
du contrle de la qualit et de la rpression des fraudes et
les laboratoires agrs cet effet, doivent employer la
mthode jointe en annexe.

Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire

lorsqu'une expertise est ordonne.

Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal

Officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.

Fait Alger, le 14 Chabane 1436 correspondant au

2 juin 2015.

Amara BENYOUNES.

17

18 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 48
ANNEXE
Mthode horizontale pour le dnombrement des
levures et moisissures par comptage des colonies
dans les produits, dont lactivit deau est
suprieure 0,95.
1- Domaine d'application
La prsente mthode spcifie une technique horizontale
pour le dnombrement des levures et des moisissures
viables prsentes dans les produits destins la
consommation humaine ou animale, dont lactivit deau
est suprieure 0,95 [ufs, viande, produits laitiers
(except le lait en poudre), fruits, lgumes, ptes fraches,
etc] au moyen de la technique par comptage des colonies
25 C 1 C.
Cette mthode ne permet pas le dnombrement des
spores de moisissures et ne sapplique pas
lidentification de la flore fongique ou lexamen des
aliments pour la recherche des mycotoxines.
La prsente mthode nest pas approprie pour le
dnombrement de champignons rsistants la chaleur, tels
que les Byssochlamys fulva ou Byssochlamys nivea
prsents dans les fruits et lgumes en conserve ou en
bouteille.
2. Termes et dfinitions
Pour les besoins de la prsente mthode, les termes et
dfinitions suivantes s'appliquent :
2.1 Levure :
Micro-organisme arobie, msophile qui, 25 C et en
utilisant un milieu glos dans les conditions dcrites dans
la prsente mthode, se dveloppe la surface du milieu
en formant des colonies (2.4) prsentant le plus souvent
un contour rgulier et une surface plus au moins convexe.
Des levures se dveloppant en profondeur, plutt qu
la surface dun milieu, peuvent former des colonies
rondes et lenticulaires.
2.2 Moisissure :
Micro-organisme arobie, msophile filamenteux qui,
la surface dun milieu glos et dans les conditions
dcrites dans la prsente mthode, dveloppe
habituellement des propagules ou des germes (2.3) plats
ou duveteux ou des colonies (2.4) prsentant souvent des
fructifications colores et des formes de sporulation.
Des moisissures se dveloppant en profondeur, plutt
qu la surface dun milieu, peuvent former des colonies
rondes et lenticulaires.
Note : Il existe des formes intermdiaires des
micro-organismes. La distinction entre une levure (2.1) et
une moisissure (2.2) peut tre arbitraire.
18
25 Dhou El Kaada 1436
9 septembre 2015
2.3 Propagule ou germe :
Entit viable, capable de se dvelopper dans un milieu
nutritif.
Exemple : Cellule vgtative, groupe de cellules, spore,
groupe de spores ou morceau de myclium fongique.
2.4 Colonie :
Accumulation visible localise de masse microbienne
dveloppe sur ou dans un milieu nutritif solide partir
dune cellule viable.
3. Principe
3.1 Des botes de Petri prpares en utilisant un milieu
de culture slectif dfini sont ensemences.
En fonction du nombre de colonies attendu, une
quantit spcifique de l'chantillon pour essai (si le
produit est liquide) ou de la suspension mre (dans le cas
d'autres produits) ou des dilutions dcimales de
l'chantillon ou de la suspension mre est utilise.
Des botes supplmentaires peuvent tre ensemences
dans les mmes conditions ; en utilisant des dilutions
dcimales obtenues partir de l'chantillon pour essai ou
de la suspension mre.
3.2 Les botes sont ensuite incubes en arobiose
25 C 1 C pendant cinq (5) jours. Puis, si ncessaire,
les botes de glose sont laisses au repos la lumire du
jour pendant un (1) deux (2) jours.
3.3 Les colonies ou propagules sont alors comptes et,
si ncessaire (pour distinguer les colonies de levures et
des bactries). L'identit des colonies douteuses est
confirme par examen la loupe binoculaire ou au
microscope.
3.4 Le nombre de levures et de moisissures par gramme
ou par millilitre d'chantillon est calcul partir du
nombre de colonies ou propagules ou germes obtenus sur
les botes choisies des taux de dilution permettant
d'obtenir des colonies pouvant tre dnombres. Les
moisissures et les levures sont comptes sparment, si
ncessaire.
4. Diluant et milieu de culture
4.1 Diluant
4.1.1 Gnralits
Il est possible d'ajouter des agents tensioactifs, tels que
le poly (oxythylne) sorbitan monoolate [par exemple
Tween 80*] (0,05 %, concentration en masse) pour rduire
l'agglutination des spores de moisissures et des conidies.
Sauf dans le cas d'une prparation spcifique de
l'chantillon pour essai, il est recommand d'utiliser de
l'eau peptone 0,1 % (concentration en masse) comme
diluant.
25 Dhou El Kaada 1436
9 septembre 2015 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 48 19

4.1.2 Composition de l'eau peptone 0,1% Ajouter 10 ml de solution 1 % (concentration en

(concentration en masse) masse) dans l'thanol de chloramphnicol et mlanger.
Rpartir le milieu dans des rcipients appropris (5.5).
Striliser l'autoclave 121 C pendant 15 min.
Digestat enzymatique de tissus 1g
animaux et vgtaux Refroidir immdiatement le milieu dans un bain-marie
(5.3) maintenu une temprature comprise entre 44 C et
Eau 1000 ml 47 C. Rpartir ce milieu par portions de 15 ml dans des
botes de Petri striles (5.6).
4.1.3 Prparation de l'eau peptone 0,1 % laisser le milieu se solidifier et scher
(concentration en masse)
utiliser immdiatement ou conserver dans l'obscurit
jusqu' son utilisation.
Dissoudre les composants dans l'eau, en chauffant si
ncessaire. Note - Eviter l'exposition du milieu la lumire, car
Si ncessaire, ajuster le pH (5.4) 7 0,2 25 C aprs les produits de dcomposition cytotoxiques peuvent
strilisation. causer la sous-valuation de la mycoflore dans les
chantillons.
4.2 Milieu de culture
4.2.1.2.2 Addition facultative de chlorhydrate de
chlorttracycline
4.2.1 Dichloran rose bengalechloramphenicol agar
(DRBC) Lorsque la prolifration bactrienne peut poser un
problme (par exemple dans les viandes crues), il est
4.2.1.1 Composition recommand d'utiliser le chloramphnicol (50 mg/l) et la
chlorttracycline (50 mg/l).
Digestat enzymatique de tissus 5g Dans ce cas, prparer le milieu de base (4.2.1.2),
animaux et vgtaux comme dcrit ci-dessus, avec seulement 50 mg de
chloramphnicol, le rpartir par quantit de 100 ml et
D-Glucose (C6H12O6) 10 g
striliser.
Phosphate monopotassique
Prparer galement une solution avec 0,1%
(KH2PO4) 1g
(concentration en masse) de chlorhydrate de
chlorttracycline dans de l'eau (relativement instable en
Sulfate de magnsium
solution, elle doit tre prpare extemporanment) et
(MgSO4, H2O) 0,5 g
striliser par filtration. Juste avant l'utilisation, ajouter
5 ml de cette solution de manire strile 100 ml du
Dichloran
milieu de base et verser dans les botes. La gentamicine
(2,6-dichloro-4-nitroaniline) 0,002 g
est dconseille, car elle peut causer l'inhibition de
Rose ben gale 0,025 g certaines espces de levures.

Glose 12 g 15 g a 4.2.1.2.3 Addition facultative d'lments trace

Chloramphnicol 0,1 g Pour que les moisissures prsentent toutes leur

Eau, distille ou dionise 1000 ml
a : En fonction du pouvoir glifiant de la glose.
*Des produits quivalents peuvent tre utiliss s'il est
dmontr qu'ils conduisent aux mmes rsultats.
4.2.1.2 Prparation
morphologie, notamment tous les pigments qu'elles
produisent habituellement, elles ont besoin d'lments
trace qui ne sont pas prsents dans le DRBC.
Pour identifier les moisissures dans ce milieu, ajouter la
solution d'lments trace suivante 1 ml par litre de
milieu, avant passage l'autoclave :
ZnSO4, 7H2O : 1g ;
CuSO4, 5H2O : 0,5g ;

4.2.1.2.1 Gnralits 100 ml d'eau, distille ou dionise.

4.2.1.2.4 Addition facultative de Tergitol *

Mettre tous les ingrdients, except le chloramphnicol,
en suspension dans l'eau et porter bullition pour Afin d'viter la prolifration de Mucoraceae dans les
dissoudre compltement. Si ncessaire, ajuster le pH (5.4) botes de glose, il est recommand d'ajouter du Tergitol
5,6 0,2 25 C, aprs strilisation. (1 ml/l) au milieu de culture.

19

20 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 48
4.2.1.3 Essai de performance pour l'assurance de la
qualit du milieu de culture
4.2.1.3.1 Gnralit
Le milieu DRBC est un milieu solide. La productivit et
la slectivit doivent tre soumises essai selon les
spcifications suivantes :
4.2.1.3.2 Productivit
incubation : Cinq (5) jours 25 C 1 C.
souches :
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763 ;
Candida albicans ATCC 10231 ;
Aspergillus niger ATCC 16404 ;
Mucor racemosus ATCC 42647.
Ou souches enregistres comme quivalentes dans
d'autres collections fongiques.
* Des produits quivalents peuvent tre utiliss s'il est
dmontr qu'ils conduisent aux mmes rsultats.
milieux de rfrence : Milieux de culture
Sabouraud Dextrose Agar (SDA).
mthode de contrle : Quantitative.
critres : Rapport de productivit, PR 0,5
raction caractristique : Colonies ou propagules
ou germes caractristiques selon chaque espce.
4.2.1.3.3 Slectivit
incubation : Cinq (5) jours 25 C 1 C.
souches :
Escherichia coli ATCC 25922 ;
Ou Bacillus subtilis ATCC 6633 ;
Ou souches enregistres comme quivalentes dans
dautres collections de bactries.
mthode de contrle : Qualitative.
critres : Inhibition totale.
5. Appareillage et verrerie
L'utilisation de matriel usage unique est une
alternative acceptable l'utilisation de verrerie
rutilisable, condition qu'il rpond aux exigences
spcifies.
Matriel courant de laboratoire de microbiologie et, en
particulier, ce qui suit :
5.1 Etuve, pouvant fonctionner 25 C 1 C.
5.2 Pipettes coulement total, striles, d'une capacit
nominale de 1 ml et gradues 0,1 ml.
25 Dhou El Kaada 1436
9 septembre 2015
5.3 Bain-marie, ou appareillage similaire, pouvant
fonctionner de 44 C 47 C.
5.4 pH-mtre, prcis 0,1 unit de pH 25 C.
5.5 Flacons, fioles et tubes, pour bouillir et
conserver les milieux de culture et pour effectuer des
dilutions.
5.6 Botes de petri, striles, en verre ou en plastique, de
90 mm 100 mm de diamtre.
5.7 Microscope, pour distinguer les levures des
cellules bactriennes (fond clair, grossissement de x 250
x 1000).
5.8 Etaleurs, en verre ou en plastique (de diamtre
infrieur 2 mm et de longueur 80 mm). Il convient que
le diamtre des taleurs ne dpasse pas 2 mm afin de
minimiser la quantit d'chantillon y adhrant la fin de
l'talement.
5.9 Loupe binoculaire, (grossissement x 6,5 x 50)
pour distinguer et diffrencier les colonies ou les cellules
des levures et moisissures.
6. Echantillonnage
Il convient que l'chantillon envoy au laboratoire soit
rellement reprsentatif, non endommag ou modifi lors
du transport et de l'entreposage. L'chantillon pour le
laboratoire ne doit pas tre congel.
L'chantillonnage et la prparation de l'chantillon pour
essai se font dans des conditions appropries.
7. Mode Opratoire
7.1 Prise d'essai, suspension mre et dilutions
Prparer la prise d'essai, la suspension mre (premire
dilution) et les dilutions suivantes selon des exigences
rglementaires et normatives spcifiques et appropries au
produit concern. Sauf dans le cas d'une prparation
spcifique de l'chantillon pour essai, il est recommand
d'utiliser de l'eau peptone 0,1 % (concentration en
masse) (4.1.3) comme diluant.
Utiliser un homognisateur pristaltique de prfrence
un mlangeur ou un agitateur.
En raison de la sdimentation rapide des spores dans la
pipette, maintenir la pipette (5.2) horizontale (et non
verticale) lorsqu'elle est remplie du volume appropri de
suspension mre et de dilutions.
Agiter la suspension mre et les dilutions afin
d'viter la sdimentation de particules contenant des
micro-organismes.
20
25 Dhou El Kaada 1436
9 septembre 2015 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 48
7.2 Ensemencement et incubation
7.2.1 Dans une bote de glose de DRBC (4.2.1),
transfrer avec une pipette (5.2) strile, 0,1 ml de
l'chantillon pour essai s'il est liquide ou 0,1 ml de la
suspension mre dans le cas d'autres produits.
Dans une deuxime bote de glose DRBC (4.2.1),
transfrer l'aide d'une nouvelle pipette strile 0,1 ml de
la premire dilution dcimale (10-1) (produit liquide), ou
0,1 ml de la dilution (10-2) (autres produits).
Pour faciliter le dnombrement de faibles populations
de levures et de moisissures, des volumes, jusqu' 0,3 ml
d'une dilution (10-1) de l'chantillon ou de l'chantillon
pour essai, s'il est liquide, peuvent tre rpartis dans trois
(3) botes.
Procder de la mme faon avec les dilutions suivantes
en utilisant une nouvelle pipette (5.2) strile chaque
dilution dcimale.
Note : Si la prsence de moisissures se dveloppant
rapidement est suspecte, se rfrer la mthode
horizontale pour le dnombrement des levures et
moisissures par comptage des colonies dans les produits
activit d'eau infrieure ou gale 0.95.
7.2.2 Etaler l'inoculum sur la surface de la bote de
glose avec un taleur (5.8) strile jusqu' ce que le
liquide soit entirement absorb par le milieu.
L'ensemencement des botes par inclusion peut
galement tre utilis, mais dans ce cas, l'quivalence
des rsultats doit tre valide par rapport
l'ensemencement en surface, et la distinction et la
diffrenciation des moisissures et des levures ne sont pas
possibles.
La mthode d'talement en surface peut donner des
dnombrements suprieurs. La technique de l'inoculation
en surface facilite l'exposition maximale des cellules
l'oxygne atmosphrique et vite l'inactivation thermique
des propagules fongiques.
Les rsultats dpendent du type de champignons.
7.2.3 Incuber en arobiose les botes prpares (7.2.2),
couvercles en haut, en position droite dans l'tuve (5.1)
25 C 1 C pendant cinq (5) jours. Si ncessaire, laisser
reposer les botes de glose la lumire du jour pendant
un (1) deux (2) jours.
Il est recommand d'incuber les botes (5.6) dans un sac
plastique ouvert afin d'viter la contamination de l'tuve
en cas de dissmination des moisissures l'extrieur des
botes.
21
7.3 Comptage et slection des colonies pour
confirmation
Lire les botes entre deux (2) jours et cinq (5) jours
d'incubation. Slectionner les botes (7.2.3) contenant
moins de 150 colonies ou propagules ou germes et
compter ces colonies ou propagules ou germes.
Si l'on observe un envahissement rapide des botes,
retenir les comptages obtenus aprs deux (2) jours, puis de
nouveau aprs cinq (5) jours d'incubation.
Note 1 : Les mthodes de dnombrement des levures et
en particulier des moisissures sont imprcises du fait
qu'elles consistent en un mlange de myclium, de spores
asexus et sexus. Le nombre d'unit l'origine de la
formation de colonies dpend du degr de fragmentation
du myclium et de la proportion de spores capables de se
dvelopper sur le milieu.
Note 2 : Des comptages non linaires partir des
dilutions dcimales se produisent souvent, c'est--dire
qu'une dilution d'un facteur 10 de l'chantillon n'aboutit
gnralement pas une rduction d'un facteur 10 du
nombre de colonies la surface de la bote de Ptri. Cela
est d la fragmentation du myclium et la dispersion
des spores pendant la dilution et la comptition entre
espces lorsqu'un grand nombre de colonies sont prsentes
dans la bote de petri.
Remarque - Les spores des moisissures se
dissminent facilement dans l'air, ce titre, manipuler
les botes de petri avec prcaution pour viter leur
prolifration qui pourrait engendrer une surestimation
de la population dans l'chantillon.
Si ncessaire, effectuer un examen l'aide de la loupe
binoculaire (5.9) ou du microscope (5.7) afin de
diffrencier les cellules de levures ou de moisissures des
colonies de bactries.
Les colonies de levures et les colonies propagules de
moisissures sont comptes sparment, si ncessaire.
Pour l'identification des levures et des moisissures,
slectionner des zones de dveloppement fongique et
effectuer un prlvement pour un examen microscopique
approfondi ou un ensemencement dans des milieux
d'isolation ou d'identification appropris.
8. Expression des rsultats et limites de confiance
Les rsultats et les limites de confiance doivent tre
exprims selon les exigences gnrales et les
recommandations relatives la microbiologie des
aliments.
Compter les colonies de levures et les colonies ou
propagules de moisissures sparment, si ncessaire.
21

22 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 52
MINISTERE DU COMMERCE
Arrt du 19 Chaoual 1436 correspondant au 4 aot
2015 rendant obligatoire la mthode horizontale
pour le dnombrement des levures et moisissures
par comptage des colonies dans les produits dont
l'activit d'eau est infrieure ou gale 0,95.
Le ministre du commerce,
Vu le dcret prsidentiel n 15-125 du 25 Rajab 1436
correspondant au 14 mai 2015, modifi, portant
nomination des membres du Gouvernement ;
Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et la
rpression des fraudes ;
Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
du ministre du commerce ;
Vu le dcret excutif n 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 dcembre 2005 relatif
l'valuation de la conformit ;
Vu le dcret excutif n 13-328 du 20 Dhou EL Kaada
1434 correspqndant au 26 septembre 2013 fixant les
conditions et les modalits d'agrment des laboratoires au
titre de la protection du consommateur et de la rpression
des fraudes ;
Vu l'arrt du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifi et complt, relatif aux spcifications
microbiologiques de certaines denres alimentaires ;
Arrte :
Article ler. En application des dispositions de
l'article 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,
modifi et complt, susvis, le prsent arrt a pour objet
de rendre obligatoire la mthode horizontale pour le
dnombrement des levures et moisissures par comptage
des colonies dans les produits, dont l'activit d'eau est
infrieure ou gale 0,95.
Art. 2. Pour le dnombrement des levures et
moisissures par comptage des colonies dans les produits,
dont l'activit d'eau est infrieure ou gale 0,95, les
laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent
employer la mthode jointe en annexe.
Cette mthode doit tre utilise par le laboratoire
lorsqu'une expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 19 Chaoual 1436 correspondant au
4 aot 2015.
Bakhti BELAIB.
16 Dhou El Hidja 1436
30 septembre 2015
ANNEXE
METHODE HORIZONTALE POUR
LE DENOMBREMENT DES LEVURES
ET MOISISSURES PAR COMPTAGE DES
COLONIES DANS LES PRODUITS, DONT
L'ACTIVITE D'EAU EST INFERIEURE
OU EGALE A 0.95
1. DOMAINE D'APPLICATION
La prsente mthode spcifie une technique horizontale
de dnombrement des levures osmophiles et des
moisissures xrophiles dans les produits destins la
consommation humaine ou animale, dont l'activit d'eau
est infrieure ou gale 0,95 au moyen de la technique
par comptage des colonies 25 C 1C [fruits secs,
gteaux, confitures, viande sche, poisson sal, grains,
crales et produits base de crales, farines, noix,
pices et condiments, etc].
La prsente mthode ne s'applique pas aux produits
dshydrats dont l'activit d'eau est infrieure ou gale
0,60 (crales dshydrates, produits olagineux, pices,
lgumineuses, graines, poudres pour boissons
instantanes, produits anhydres pour animaux
domestiques, etc.) et ne permet pas le dnombrement des
spores de moisissures. Cette mthode ne s'applique pas
galement, l'identification de la flore fongique ou
l'examen des aliments pour la recherche de mycotoxines ;
et elle n'est pas approprie au dnombrement des
moisissures halophiles xrophiles (Polypaecilum pisce et
Basipetospora halophila), qui peuvent notamment se
trouver dans le poisson sch.
2. TERMES ET DEFINITIONS
Pour les besoins de la prsente mthode, les termes et
dfinitions suivantes s'appliquent :
2.1 Levure : Micro-organisme arobie, msophile qui,
25C et en utilisant un milieu glos dans les conditions
dcrites dans la prsente mthode, se dveloppe la
surface du milieu en formant des colonies (2.4) prsentant
le plus souvent un contour rgulier et une surface plus au
moins convexe.
Des levures se dveloppant en profondeur, plutt qu' la
surface d'un milieu, peuvent former des colonies rondes et
lenticulaires.
2.2 Moisissure : Micro-organisme arobie, msophile
filamenteux qui, la surface d'un milieu glos et dans les
conditions dcrites dans la prsente mthode, dveloppe
habituellement des propagules ou des germes (2.3) plats
ou duveteux ou des colonies (2.4) prsentant souvent des
fructifications colores et des formes de sporulation.
Des moisissures se dveloppant en profondeur, plutt
qu' la surface, d'un milieu peuvent former des colonies
rondes et lenticulaires.
22
16 Dhou El Hidja 1436
30 septembre 2015 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 52 23

Note : Il existe des formes intermdiaires des
micro-organismes. La distinction entre une levure (2.1) et
une moisissure (2.2) peut tre arbitraire.
2.3 Propagule ou germe : Entit viable, capable de se
dvelopper dans un milieu nutritif.
Exemple : Cellule vgtative, groupe de cellules, spore,
groupe de spores ou morceau de myclium fongique.
Note : il est possible d'ajouter des agents tensioactifs,
tel que le poly (oxythylne) sorbitan monoolate 0,05 %
(concentration en masse) pour rduire l'agglutination des
spores de moisissures et des conidies.
Sauf dans le cas d'une prparation spcifique de
l'chantillon pour essai, il est recommand d'utiliser de
l'eau peptone 0,1 % (concentration en masse) comme
diluant.

2.4 Colonie : Accumulation visible localise de masse 4.1.2 Composition de l'eau peptone 0,1 %
microbienne dveloppe sur ou dans un milieu nutritif (concentration en masse)
solide partir d'une cellule viable.
Digestat enzymatique de tissus 1g
2.5 levure osmophile et moisissure xrophile : animaux et vgtaux

Champignon capable de se dvelopper avec une activit Eau 1000 ml

d'eau infrieure ou gale 0,95.

3. PRINCIPE 4.1.3 Prparation de l'eau peptone 0,1 %

(concentration en masse)
3.1 Des botes de Petri prpares en utilisant un milieu Dissoudre les composants dans l'eau, en chauffant si
de culture slectif dfini sont ensemences. En fonction ncessaire. Si ncessaire, ajuster le pH (5.4) 7 0,2
du nombre de colonies attendu, une quantit spcifique de 25 C aprs strilisation.
l'chantillon pour essai (si le produit est liquide) ou de la
suspension mre (dans le cas d'autres produits) ou des 4.2 Milieu de culture
dilutions dcimales de l'chantillon ou suspension mre
est utilise. 4.2.1 Glose dichloran 18% (concentration en
masse) de glycrol (DG 18)
Des botes de Petri supplmentaires peuvent tre
ensemences dans les mmes conditions ; en utilisant des 4.2.1.1 Composition
dilutions dcimales obtenues partir de l'chantillon pour
essai ou de la suspension mre. Digestat enzymatique de casine 5g
3.2 Les botes de Petri sont ensuite incubes en D-Glucose (C6H12O6) 10 g
arobiose 25 C 1C pendant cinq (5) sept (7) jours.
Puis, si ncessaire, les botes de glose sont laisses au Phosphate monopotassique (KH2PO4) 1g
repos la lumire du jour pendant un (1) deux (2) jours.
Sulfate de magnsium (MgSO4 H2O) 0,5 g
3.3 Les colonies ou propagules sont alors comptes et,
si ncessaire (pour distinguer les colonies de levure et de Dichloran (2,6-dichloro-4-nitro-aniline) 0,002 g
bactrie), l'identit des colonies douteuses est confirme
par examen la loupe binoculaire ou au microscope. Glycrol anhydre 220 g

3.4 Le nombre de levures et de moisissures par gramme Glose 12 g 15ga

ou par millilitre d'chantillon est calcul partir du
nombre de colonies ou propagules ou germes obtenus sur Chloramphnicol 0,1 g
les botes de Petri choisies des taux de dilution
permettant d'obtenir des colonies pouvant tre Eau distille ou dionise 1000 ml
dnombres. Les moisissures et les levures sont comptes
sparment, si ncessaire. a : en fonction du pouvoir glifiant de la glose

4. DILUANT ET MILIEU DE CULTURE

4.1 Diluant
4.1.1 Gnralits
L'utilisation d'un diluant comportant une quantit
suffisante de solut [par exemple une solution de 20 %
35 % (concentration en masse) de glycrol ou de
D-glucose] est recommande pour rduire le choc
osmotique des moisissures xrophiles et des levures
osmophiles lorsque des dilutions en srie sont effectues
avant l'ensemencement.
4.2.1.2 Prparation
4.2.1.2.1 Gnralits
Mettre tous les ingrdients, except le chloramphnicol,
en suspension dans l'eau et porter bullition pour
dissoudre compltement. Si ncessaire, ajuster le pH (5.4)
5,6 0,2 25 C aprs strilisation.
Ajouter 10 ml de solution 1% (concentration en
masse) dans l'thanol de chloramphnicol et mlanger.
Rpartir le milieu dans des rcipients appropris (5.5).
Striliser l'autoclave 121C pendant 15 min.

23

24 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 52
Refroidir immdiatement le milieu dans un bain-marie
(5.3) maintenu une temprature comprise entre 44 C et
47 C. Rpartir ce milieu par portions de 15 ml dans des
botes de Petri striles (5.6).
Laisser le milieu se solidifier et scher, si ncessaire, la
surface des botes de Petri. Utiliser immdiatement ou
conserver dans l'obscurit, jusqu' son utilisation.
Remarque : Eviter l'exposition du milieu la
lumire, car les produits de dcomposition
cytotoxiques peuvent causer la sous-valuation de la
nycoflore dans les chantillons.
4.2.1.2.2 Addition facultative de chlorhydrate de
chlorttracycline
Lorsque la prolifration bactrienne peut poser
problme, il est recommand d'utiliser le chloramphnicol
(50 mg/l) et la chlorttracycline (50 mg/l). Dans ce cas,
prparer le milieu de base, comme dcrit ci-dessus,
(4.2.1.2), avec seulement 50 mg de chloramphnicol, le
rpartir par quantits de 100 ml et striliser. Prparer
galement une solution avec 0.1 % (concentration en
masse) de chlorhydrate de chlorttracycline dans de l'eau
(relativement instable en solution, elle doit tre prpare
extemporanment) et striliser par filtration. Juste avant
l'utilisation, ajouter 5 ml de cette solution de manire
strile 100 ml du milieu de base et verser dans les botes d'autres collections de bactries.
de Petri. La gentamicine est dconseille, car elle peut
causer l'inhibition de certaines espces de levures.
4.2.1.2.3 Addition facultative d'lments trace
Pour que les moisissures prsentent toute leur
morphologie, notamment tous les pigments qu'elles
produisent habituellement, elles ont besoin d'lments
trace qui ne sont pas prsents dans le DG 18 (4.2.1).
Pour identifier les moisissures dans ce milieu, ajouter la
solution d'lments trace suivante 1 ml par litre de spcifies.
milieu, avant passage l'autoclave :
ZnSO4, 7H2O 1g ;
Cu SO4 ,5H2O 0,5 g ;
100 ml d'eau distille ou dionise.
4.2.1.3 Essai de performance pour l'assurance de
qualit du milieu de culture
4.2.1.3.1 Gnralits
Le milieu DG 18 (4.2.1) est un milieu solide. La
productivit et la slectivit doivent tre soumises essai 5.4 pH-mtre, prcis
selon les spcifications suivantes :
4.2.1.3.2 Productivit
Incubation : cinq (5) jours 25 C 1 C.
Souches :
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763
Wallemia sebi ATCC 42694
24
16 Dhou El Hidja 1436
30 septembre 2015
Aspergillus restrictus ATCC 42693
Eurotium rubrum ATCC 42690
Ou souches enregistres comme quivalentes dans
d'autres collections fongiques.
Milieux de rfrence : milieux de culture SDA
(Sabouraud Dextrose Agar)
Mthode de contrle : quantitative
Critres : rapport de productivit, PR 0,5
Raction caractristique : colonies ou propagules ou
germes caractristiques selon chaque espce.
4.2.1.3.3 Slectivit
Incubation : cinq (5) jours 25 C l C
Souches :
Escherichia coli ATCC 25922
Ou Bacillus subtilis ATCC 6633
Ou souches enregistres comme quivalentes dans
Mthode de contrle : qualitative
Critres : inhibition totale
5. APPAREILLAGE ET VERRERIE
L'utilisation de matriel usage unique est une
alternative acceptable l'utilisation de verrerie
rutilisable, condition qu'il rpond aux exigences
Matriel courant de laboratoire de microbiologie et, en
particulier, ce qui suit :
5.1 Etuve, pouvant fonctionner 25 C 1C
5.2 Pipettes coulement total, striles, d'une capacit
nominale de 1 ml et gradues en 0,1 ml.
5.3 Bain-marie, ou appareillage similaire, pouvant
fonctionner de 44 C 47 C.
0,1 unit de pH 25 C.
5.5 Bouteilles, fioles et tubes, pour bouillir et conserver
les milieux de culture et pour effectuer des dilutions.
5.6 Botes de Petri, striles, en verre ou en plastique, de
90 mm 100 mm de diamtre.
5.7 Microscope, pour distinguer les levures de cellules
bactriennes (fond clair, grossissement de x 250 x
1000).
16 Dhou El Hidja 1436
30 septembre 2015 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 52
5.8 Etaleurs, en verre ou en plastique (diamtre
infrieur 2 mm et de longueur 80 mm). Il convient que
le diamtre des taleurs ne dpasse pas 2 mm afin de
minimiser la quantit d'chantillon y adhrant la fin de
l'talement.
5.9 Loupe binoculaire, (grossissement de x 6.5 x 50)
pour distinguer et diffrencier les colonies ou cellules des
levures et moisissures.
6. ECHANTILLONNAGE
Il convient qu'un chantillon reprsentatif, non
endommag ou altr au cours du transport ou de
l'entreposage, ait t envoy au laboratoire. L'chantillon
pour laboratoire ne doit pas tre congel.
7. MODE OPERATOIRE POUR LA
PREPARATION DE L'ECHANTILLON POUR
ESSAI
7.1 Prise d'essai, suspension mre et dilutions
Prparer la prise d'essai, la suspension mre (premire
dilution) et les dilutions suivantes selon les exigences
rglementaires et normatives spcifiques et appropries
aux produits concerns.
Sauf dans le cas d'une prparation spcifique de
l'chantillon pour essai, il est recommand d'utiliser de
l'eau peptone 0,1 % (concentration en masse) (4.1.3)
comme diluant. Utiliser un homognisateur pristaltique
de prfrence un mlangeur ou un agitateur.
En raison de la sdimentation rapide des spores dans la
pipette, maintenir la pipette (5.2) horizontale lorsqu'elle
est remplie du volume appropri de la suspension mre et
de dilutions.
Agiter la suspension mre et les dilutions afin d'viter la
sdimentation de particules contenant des
micro-organismes.
7.2 Ensemencement et incubation
7.2.1 Dans une bote de glose DG 18 (4.2.1), transfrer
avec une pipette (5.2) strile, 0,1 ml de l'chantillon pour
essai s'il est liquide ou 0,1 ml de la suspension mre dans
le cas d'autres produits.
Dans une deuxime bote de glose DG 18 (4.2.1),
transfrer avec une nouvelle pipette strile 0,1 ml de la
premire dilution dcimale (10-1) (produit liquide) ou 0,1
ml de la dilution (10-2) (autres produits).
Pour faciliter le dnombrement de faibles populations
de levures et de moisissures, des volumes, jusqu' 0.3 ml
d'une dilution (10-1) de l'chantillon ou de l'chantillon
pour essai, s'il est liquide, peuvent tre rpartis dans trois
(3) botes de Petri.
Procder de la mme faon avec les dilutions suivantes
en utilisant une nouvelle pipette strile chaque dilution
dcimale.
25
25
Pour les aliments solides ou particulaires, tels que les
noix ou les grains, l'ensemencement direct est
recommand.
Les chantillons de ces types de produits sont
dsinfects en surface dans une solution de 0,35 %
(1000 g/g) d'hypochlorite de sodium pendant 2 min, puis
rincs avec de l'eau distille strile, schs sur un papier
strile et placs sur un milieu glos.
7.2.2 taler le liquide sur la surface de la bote de
glose avec un taleur (5.8) strile jusqu' ce que le
liquide soit entirement absorb par les milieux.
L'ensemencement des botes par inclusion peut
galement tre utilise, mais dans ce cas, l'quivalence des
rsultats doit tre valide par rapport l'ensemencement
en surface, et la distinction et la diffrenciation des
moisissures et des levures ne sont pas possibles. La
mthode d'talement en surface peut donner des
dnombrements suprieurs. La technique de l'inoculation
en surface facilite l'exposition maximale des cellules
l'oxygne atmosphrique et vite l'inactivation thermique
des propagules fongiques. Les rsultats dpendent du type
de champignons.
7.2.3 Incuber en arobiose les botes prpares (7.2.2),
couvercles en haut, en position droite dans l'tuve (5.1)
25 C 1C pendant cinq (5) sept (7) jours. Si
ncessaire, laisser reposer les botes de glose la lumire
du jour pendant un (1) deux (2) jours.
Si la prsence de Xeromyces bisporus est suspecte,
incuber les botes pendant dix (10) jours.
Il est recommand d'incuber les botes de Petri dans un
sac plastique ouvert afin d'viter la contamination de
l'tuve en cas de dissmination des moisissures
l'extrieur des botes de Petri .
7.3 Comptage et slection des colonies pour
confirmation
Aprs la priode d'incubation spcifie, slectionner les
botes (7.2.3) contenant moins de 150 colonies ou
propagules ou germes et compter ces colonies ou
propagules ou germes.
Si on observe un envahissement rapide des botes,
compter les colonies ou propagules ou germes aprs deux
(2) jours, puis de nouveau aprs cinq (5) sept (7) jours
d'incubation.
Note 1 : Les mthodes de dnombrement des levures et
en particulier des moisissures sont imprcises du fait
qu'elles consistent en un mlange de myclium, de spores
asexus et sexus. Le nombre d'units l'origine de la
formation de colonies dpend du degr de fragmentation
du myclium et de la proportion de spores capables de se
dvelopper sur le milieu.
 16 Dhou El Hidja 1436
26 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 52 30 septembre 2015

Note 2 : Des comptages non linaires partir des

dilutions dcimales se produisent souvent, c'est--dire
qu'une dilution d'un facteur 10 de l'chantillon n'aboutit
gnralement pas une rduction d'un facteur 10 du
nombre de colonies la surface de la bote de petri. Cela
est d la fragmentation du myclium et la dispersion
des spores pendant la dilution et la comptition entre
espces lorsqu'un grand nombre de colonies sont prsentes
dans la bote de ptri.

Remarque : les spores des moisissures se dissminent

dans l'air aisment, ce titre, manipuler les botes de
petri avec prcaution pour viter leur prolifration qui
pourrait engendrer une surestimation de la population
dans l'chantillon.

Si ncessaire, effectuer un examen l'aide de la loupe

binoculaire (5.9) ou du microscope (5.7) afin de
diffrencier les cellules de levures ou de moisissures des
colonies de bactries.

Les colonies de levures et les colonies ou les propagules

de moisissures sont comptes sparment, si ncessaire.

Pour l'identification des levures et des moisissures,

slectionner des zones de dveloppement fongique et
effectuer un prlvement pour un examen microscopique
approfondi ou un ensemencement dans des milieux
d'isolation ou d'identification appropris.

8. EXPRESSION DES RESULTATS ET LIMITES

DE CONFIANCE

Les rsultats et les limites de confiance doivent tre

exprims selon les exigences gnrales et les
recommandations relatives la microbiologie des
aliments.

26
 RPUBLIQUE ALGRIENNE DMOCRATIQUE ET POPULAIRE
__________________

MINISTRE DU COMMERCE

DIRECTION GNRALE DU CONTRLE

CONOMIQUE ET DE LA RPRESSION
DES FRAUDES

Direction des Laboratoires dEssais

et dAnalyses de la Qualit

MTHODES OFFICIELLES D'ANALYSES RELATIVES

AUX PRODUITS NON ALIMENTAIRES
 Sommaire

1. Arrt du 25 Novembre 2006 relatif la mthode de dtermination de la teneur en 01

chlore actif et en hypochlorite de sodium dans leau de javel. (JO n 13- 2007)
18 3 Safar 1428
JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 13 21 fvrier 2007

ARRETES, DECISIONS ET AVIS

MINISTERE DU COMMERCE Vu le dcret excutif n 90-39 du 30 janvier 1990,

modifi et complt, relatif au contrle de la qualit et
Arrt du 4 Dhou El Kaada 1427 correspondant au la rpression des fraudes ;
25 novembre 2006 rendant obligatoire une
mthode de dtermination de la teneur en Vu le dcret excutif n 02-453 du 17 Chaoual 1423
chlore actif et en hypochlorite de sodium dans
correspondant au 21 dcembre 2002 fixant les attributions
leau de Javel.
du ministre du commerce ;

Le ministre du commerce, Vu larrt interministriel du 16 Dhou El Kaada 1417

correspondant au 24 mars 1997 relatif aux spcifications
Vu le dcret prsidentiel n 06-176 du 27 Rabie Ethani
1427 correspondant au 25 mai 2006 portant nomination techniques et aux conditions et modalits de mise la
des membres du Gouvernement ; consommation des eaux et extraits de Javel ;

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JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 13
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Arrte :
Article 1er. En application des dispositions de
larticle 19 du dcret excutif n 90-39 du 30 janvier
1990, modifi et complt, susvis, le prsent arrt a
pour objet de rendre obligatoire une mthode de
dtermination de la teneur en chlore actif et en
lhypochlorite de sodium dans leau de Javel.
Art. 2. Pour la dtermination de la teneur en chlore
actif et en lhypochlorite de sodium dans leau de Javel,
les laboratoires du contrle de la qualit et de la rpression
des fraudes et les laboratoires agrs cet effet doivent
employer la mthode dcrite en annexe.
Cette mthode doit tre galement utilise par le
laboratoire lorsquune expertise est ordonne.
Art. 3. Le prsent arrt sera publi au Journal
officiel de la Rpublique algrienne dmocratique et
populaire.
Fait Alger, le 4 Dhou El Kaada 1427 correspondant au
25 novembre 2006.
Lachemi DJAABOUBE.
ANNEXE
METHODE DE DETERMINATION
DE LA TENEUR EN CHLORE ACTIF
ET EN HYPOCHLORITE DE SODIUM
DANS LEAU DE JAVEL
1. dfinition
1.1 Chlore actif : est la concentration de lhypochlorite
de sodium en solution. Le chlore actif est la mesure du
pouvoir oxydant des solutions dhypochlorite. Il permet de
dfinir la quantit de chlore chimiquement quivalente
loxygne qui produirait le mme effet durant la
dcomposition complte de lhypochlorite en chlorure de
sodium et en oxygne.
Une molcule dhypochlorite a une teneur en chlore
actif de 95,3 %.
1.2 Degr chloromtrique : Cest le nombre de litres de
chlore sec, 0 C et sous une pression de 1 bar (0,1 mPa)
quun litre de solution dhypochlorite de sodium 20 C
est susceptible de dgager en prsence dun acide.
Un litre de chlore gazeux 0 C et sous pression de
1 bar pse 3,17 grammes.
2. Principe
Oxydation de l'iodure de potassium en milieu actique
et titrage de l'iode libr par une solution dcinormale de
thiosulfate de sodium en prsence damidon.
3. Ractifs
Les ractifs doivent tre de puret analytique reconnue.
3.1 Acide actique glacial
3.2 Iodure de potassium (KI) pur en cristaux et exempt
diodates.
19
3.3 Thiosulfate de sodium ( Na2 S2O3 ) solution 0,1N.
Dissoudre 25 g de thiosulfate de sodium pentahydrat
( Na2 S2O3 , 5H2 O ) en cristaux frais dans un litre deau
bouillie puis refroidir.
La solution est plus stable si la verrerie est
pralablement nettoye avec de lacide sulfochromique et
rince soigneusement avec de leau distille.
Le titrage de la solution de thiosulfate de sodium est
effectu l'aide d'une solution d'iodate de potassium
(KI03) prpare comme suit :
Peser 3,567g d'iodate de potassium, exempt
dhumidit, transfrer dans une fiole de 1 litre, dissoudre
dans de leau et mlanger soigneusement : cette solution
est exactement 0,1N. Pour titrer la solution de thiosulfate
de sodium (Na2 S2O3), prendre 50 ml de la solution
diodate dj prpare, le verser dans un erlenmeyer 250
ml, diluer 100 ml avec de leau distille et ajouter 1g
diodure de potassium en cristaux. Aprs dissolution de
KI, additionner 15 ml dHCI 0,1 N et titrer
immdiatement aprs avec la solution de (Na2S2O3).
Ds que la solution vire au jaune, ajouter 1 ml de
solution damidon (indicateur) et complter le titrage
jusqu disparition de la coloration bleue.
Effectuer des titrages de la solution (Na2S2O3) au moins
une fois par mois.
La normalit de la solution (Na2S2O3) est gale :
50 . 0,1
VT
O
VT : est le volume, en millilitres, de la solution
(Na2S2O3) requis pour titrer la solution de KIO3
50 : est le volume, en millilitres, de la solution KIO3
0,1 : est la normalit de la solution KIO3
3.4 Amidon : Solution indicateur 0,5%
Mlanger 0,5 g d'amidon 5 ml d'eau froide et
ajouter 95 ml d'eau bouillie. Mlanger, refroidir et stocker
dans un flacon propre.
La solution d'amidon tant instable, la remplacer
souvent ou y ajouter l'quivalent de 0,l % d'acide
salicylique pour minimiser la dgradation.
4. APPAREILLAGE
Matriel courant de laboratoire.
5. MODE OPERATOIRE
5.1 Prparation de lchantillon
Selon la concentration initiale de la solution d' hypochlorite
de sodium, effectuer des dilutions pour obtenir une teneur
en chlore actif voisine de l chloromtrique, (par exemple
au 1/10 pour les solutions d' hypochlorite 10- 12, au 1/20
pour les solutions 18- 20 et au 1/50 pour les solutions
47- 50).
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5.2 Prise dessai Pour les diffrentes solutions d'hypochlorite de sodium

le facteur R a pour valeurs ;
Prlever l'aide d'une pipette 10 ml de la dilution
prpare en (5.1). R = 10 pour les solutions 10 - 12
R = 20 pour les solutions 18 - 20
5.3 Dosage R = 50 pour les solutions 47- 50
Dans un erlenmeyer de 250 ml, dissoudre 2 3g
d'iodure de potassium (3.2) dans 50 ml d'eau. Ajouter 10
ml d'acide actique (3.1), puis verser la prise d'essai (5.1)
dans lerlenmeyer en maintenant l'extrmit de la pipette
sous la surface du liquide.
Titrer l'iode qui se dgage en une seule tape l'aide de
la solution de thiosulfate de sodium (3.3). Quand la
solution vire du brun fonc au jaune ple (couleur paille)
ajouter 1 ml de la solution d'amidon (3.4) et continuer
titrer jusqu' disparition de la couleur bleue. Noter le
volume de thiosulfate utilis.

6. EXPRESSION DES RESULTATS

6.1 Teneur en chlore actif
6.1.1 Chlore actif, en g/l

3, 546 . N . V . R

6.1.2 Chlore actif, en pourcentage massique

3, 546 . N . V . R
1000 . d

6.2 TENEUR EN HYPOCHLORITE

6.2.1 Hypochlorite NaOCl, en g/l.

3,721 . N . V . R

6.2.2 Hypochlorite NaOCI, % massique

3,721 . N .V . R . 100
1000 . d

O :

d : est la densit 15 C de la solution d' hypochlorite

de sodium ;
N : est la normalit de la solution de thiosulfate de
sodium utilise ;
V : est le volume, en millilitres, de la solution de
thiosulfate de sodium consomm pendant le titrage ;
R : est gal au rapport Vl/V2 dans lequel V1 est le
volume, en millilitres, du matras jaug servant la
dilution et V2 le volume, en millilitres, de la solution
d'hypochlorite de sodium ayant servi la prparation de la
dilution ;

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