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B. Jurado T., C.M. Fuertes R., G.E. Tomas Ch., E. Ramos LL., J.L. Arroyo A., J.R.

Cceres P., M.A. Inocente C., B.


Alvarado Ch., B.M. Rivera C., M. A. Ramrez O., H. Ostos F., L. Crdenas M.

Estudio fisicoqumico, microbiolgico y toxicolgico de los


polisacridos del nostoc commune y nostoc sphaericum

B. Jurado T.1, C.M. Fuertes R.2, G.E. Tomas Ch.3, E. Ramos LL.4, J.L. Arroyo A.5, J.R.
Cceres P.6, M.A. Inocente C.7, B. Alvarado Ch.8, B.M. Rivera C.9, M. A. Ramrez O.10, H.
Ostos F.11, L. Crdenas M.12

(Recibido: 26/05/2014 / Aceptado: 20/07/2014)


RESUMEN
El presente trabajo de investigacin es una contribucin al aprovechamiento industrial de las algas cianofitas
del gnero Nostoc como aditivo viscosante para la elaboracin de productos alimenticios. En el estudiose
realiz la recoleccin, estabilizacin y extraccin de polisacridos de muestras de Junn, Ancash, Cajamarca
y Pachacamac (Lima). As mismo se realiz el anlisis fisicoqumico, microbiolgico y toxicolgico, con
la finalidad de garantizar su inocuidad y seguridad para el consumo humano.Los resultados son: pH
neutro: 7,115 (N. sphaericum) y 7,679 (N. commune).El anlisis de la viscosidad de N. sphaericum dio
un mayor valor de 38,3 cps, mientras que en N. communese obtuvo 4.5 cps. El punto de gelificacin
dio un mayor valor para N. sphaericum comparado con N. commune. En el anlisis microbiolgico se
encontr ausencia de microorganismos patgenos. La dosis letal 50 en ratones fue sobre los 1500 mg/kg
para el Nostoc sphaericum en tanto que para Nostoc commune fue sobre 2000 mg/kg. Los parmetros
fisicoqumicos, microbiolgicos y toxicolgicos nos indican que los polisacridos extrados estn dentro
de los parmetros aceptables.
Palabras clave: Nostoc commune, Nostoc sphaericum, polisacridos, viscosidad, punto de gelificacin,
anlisis toxicolgico y microbiolgico.

Study physicochemical, microbiological and toxicological polysaccharides of


nostoc commune and nostoc sphaericum
ABSTRACT
The investigation is a contribution to the industrial use of algae cyanobacteria of the genus Nostoc plasticizer
additive for food processing.The study undertook the collection, stabilization and extraction of polysaccharide,
samples of Junn, Ancash, Cajamarca and Pachacamac (Lima). Also, the physicochemical, microbiological
and toxicological analysis was performed in order to ensure their safety and security for human consumption.
The results are: pH neutropH: 7.115 (N. sphaericum) and 7.679 (N. commune). Viscosity analysis N.
sphaericum gave a higher value of 38.3 cps, while the N. commune gained 4.5 cps. The gel point gave
greater value for N. sphaericum compared with N. commune. In the microbiological analysis found no
pathogenic microorganisms. The LD 50 in mice would be about 1500 mg / kg for the Nostoc sphaericum
whereas for Nostoc commune would be about 2000 mg/kg. Physiochemical parameters, microbiological
and toxicological studies indicate that polysaccharides extracted are within acceptable parameters.
Keywords: Nostoc commune, Nostocsphaericum, polysaccharides, viscosity, gel point, toxicological and
microbiological analysis.

1 Lab. Farmacognosia y Medicina Tradicional Instituto Investigacin en Ciencias Farmacuticas y Recursos Naturales Jan de Dios
Guevara. Facultad de Farmacia y Bioqumica, bjurado@hotmail.com
2 Lab. Qumica Orgnica IICF y RN Jun de Dios Guevara. FF y B, cfuertes@unmsm.edu.pe
3 Dpto. de Qumica Orgnica, FQIQ-UNMSM, gloriaeva7@hotmail.com
4 Lab. de Botnica - IICF y RN Jun de Dios Guevara. FF y B aqpany@yahoo.com
5 Lab. Farmacologa, Facultad de Medicina Humana, jorgeluis_arroyoacevedo@yahoo.com
6 Vicerrectorado de Investigacin, Universidad Nacional del Callao, jcaceres@unac.pe
7 Facultad Medicina Humana, USMP, ayrucosmetic@empresarios.com
8 Universidad Garcilaso de la Vega, FF y B, qfbrittalvaradochavez@hotmail.com
9 Lab. Qumica Orgnica IICF y RN Jun de Dios Guevara. FF y B, betsabeth2011@gmail.com
10 IICF y RN Jun de Dios Guevara. FFy B, martnalejandro.ramirezobregn@gmail.com
11 IICF y RN Jun de Dios Guevara. FF y B, henry_haof@hotmail.com
12 Lab. Qumica Orgnica IICF y RN Jun de Dios Guevara. FF y B, dea_air@hotmail.com

Rev. Per. Qum. Ing. Qum. Vol. 17 N. 1 , 2014. Pgs. 15-22 15


Estudio fisicoqumico, microbiolgico y toxicolgico de los polisacridos del nostoc commune y nostoc sphaericum

I. Introduccin vista fsico mantienen distribuidos uniforme-


mente los slidos y desde el punto de vista
El gnero Nostoc comprende algas Cianofi- organolptico mejoranel aspecto y la textura
tas, tales como Nostoc commune y Nostoc de los alimentos (Codex Alimentario).[3]
sphaericum, que crecen en forma silvestre
cerca de los ros, lagos y lagunas, en el La tendencia actual en la elaboracin de los
interior del pas sobre todo en la regin alimentos es el uso de los aditivos naturales,
puna. Lutgardo [1] ha extrado y caracteriza- orientado a la demanda de los consumidores.
do el polisacrido de Nostoc sphaericum, Por esta razn los esfuerzos de la investiga-
recomendando su aplicacin como aditivo cin se dirigen hacia la bsqueda de aditivos
viscosante alimentario. naturales y su introduccin al mercado.

La mayora de agentes viscosantes utilizados El objetivo del trabajo fue obtener un agente
como aditivos son sintticos, por lo cual se viscosante natural a partir de algas cianofi-
encuentra en observacin su inocuidad para el tas Nostoc commune y Nostoc sphaericum
ser humano; y varios viscosantes son dirigidos mediante la extraccin de los polisacridos
hacia determinados alimentos procesados. para una potencialaplicacin en la industria
alimentaria.
Las algas cianofitas son consumidas en
alimentos de la zona sierra de nuestro pas;
adems, se encuentra en forma silvestre. II. PARTE EXPERIMENTAL
Se considera entonces una manera natural
y econmica para obtener un aditivo visco- Recoleccin y clasificacin taxonmica.
sante que permitira reducir los costos para
la industrializacin de este insumo requerido La recoleccin se realiz en mayo, en Ca-
para la industria alimentaria y farmacutica; jamarca, Ancash, Huancayo y Lima (Pacha-
en consecuencia, beneficiara a las pobla- camac). El Museo de Historia Natural de la
ciones cercanas a las zonas donde crece Universidad Nacional Mayor de San Marcos
promoviendo as sucultivo y cosecha para realiz la clasificacin taxonmica segn el
su transformacin industrial. ordenamiento sistemtico de Guiry.

Hori[2] determin que la absorcin de los adi- Extraccin y Purificacin de polisacridos


tivos de color y volumen de sedimentacin
en el agua por las algas Nostoc commune Las muestras seleccionadas fueron alma-
presentaron un elevado volumen de sedi- cenadas a 0-3C hasta su deshidratacin
mentacin, gracias a ello sugieren que sta parcial.Luego fueron licuadas con agua
alga puede tener una importancia nutricional destilada para obtener una mejor ruptura de
como fuente de fibra diettica y como aditivo las capas de polisacridos. Luego se some-
viscosante en la elaboracin de productos ti a calentamiento a 80 C por 30 minutos.
alimenticios. Se enfro y se filtr en tela.Al filtrado se le
agreg etanol,obtenindose un precipitado
En la elaboracin de los alimentos es ne- en forma de flculo. Luego se someti a
cesario el uso de sustancias denominadas secado a 40C.Finalmente se redisolvi el
aditivos alimentarios, estas sustancias se precipitado en agua destilada y se trat con
utilizan con fines de manejo del proceso etanol 1:3, obtenindose un flculo.
tecnolgico, mejorar las caractersticas orga-
nolpticas o aumentar el tiempo de vida til.
Anlisis fisicoqumico de los polisacri-
Dentro del grupo de los aditivos alimentarios
dos de Nostoc
se encuentran los denominados viscosantes
o estabilizantes, sustancias que cumplen la - Determinacin de pH. Se disolvi el
funcin de aumentar la viscosidad de los polisacrido al 10 % en agua destilada a
alimentos, de esta forma desde el punto de 80C con agitacin constante; se enfri,

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Alvarado Ch., B.M. Rivera C., M. A. Ramrez O., H. Ostos F., L. Crdenas M.

midi el pH en el equipo pH METRO estudio de toxicidad a dosis repetidas fueron


HANNA MOD.: HI-8424 utilizando un adquiridas 20 ratas, siendo diez machos
electrodo de vidrio. (195 5 gramos de peso corporal) y diez
hembras (180 4 gramos de peso corporal).
- Determinacin de solubilidad. Se de- [5]
Los ratones fueron distribuidos al azar en
termin con diferentes solventes: agua
grupos de seis cada uno, se les administr
destilada fra y caliente, etanol, metanol
el extracto A (Nostoc sphaericum) por va
y diclorometano.
oral, as mismo, se administr el extracto B
- Determinacin de la viscosidad. Se (Nostoc commune) en ratones. Los anima-
prepar la muestra al 2% del polisac- les fueron observados por un perodo de 14
rido en agua destilada y se coloc en el das, registrando cualquier sntoma txico.[1]
Viscosmetro Brookfield LV.
- Punto de Gelificacin. Se obtuvo por III. Resultados y discusin
mtodo Volumtrico.
Las muestras de cushuro fueron recolecta-
das en Junn (Huancayo), Ancash (Huaraz),
Anlisis microbiolgico Cajamarca y Lima (Pachacamac). De los
Se realiz mediante el mtodo de la Inter- cuales se recolect Nostoc Tipo I y Nostoc
national Commission on Microbiological tipo II. (Fig. 1)
Specifications for Foods, of the International
Union of Microbiological Societies (ICMSF)[4]. Clasificacin taxonmica.

DIVISIN : Cianobacteria = Cyanophyta


Anlisis de metales
CLASE : Cyanophyceae
Se realizla cuantificacin de plomo, mer-
curio, arsnico, cobre, calcio, magnesio por ORDEN : Nostocales
Absorcin Atmica (AA-6700), segn los
mtodos GFAAS-USAQ-ME-15 y FAAS- FAMILIA : Nostocaceae
USAQ-ME04).Se pes aproximadamente GNERO : Nostoc
0,2 g de muestra, en un vaso de 150 mL,
se agreg 10 mL de HNO3 cc., se redujo ESPECIES : Nostoc sphaericum Vaucher ex
el volumen hasta casi sequedad, luego de Bornet & Flahualt
enfriar durante 10 minutos, se aadi 5 mL
Nostoc commune Vaucher ex Bornet & Flahualt
de HClO4 y se llev a sequedad para luego
enrasarlo en una fiola de 50 mL. Los nombres cientficos correspondientes
son (Fig. 2):
Determinacin de solvente residual de - Cushuro de Junn-Huancayo (forma es-
Etanol frica): Nostoc sphaericum
Por Cromatografa de Gases (CG). - Cushuro de Ancash- Huaraz tipo I (forma
esfrica):Nostoc sphaericum
Anlisis toxicolgico - Cushuro de Ancash- Huaraz tipo II (for-
malechuga): Nostoc commune
Para el estudio de toxicidad a dosis nica se
ha adquirido ratones machos cepa Balb C57 - Cushuro de Cajamarca - San Nicols
del Instituto Nacional de Salud, con peso pro- (formalechuga):Nostoc commune
medio de 19 2 g al inicio del experimento, - Cushuro de Lima - Pachacamac (forma
los cuales fueron mantenidos en un cuarto lechuga):Nostoc commune
a temperatura controlada de 20 2 C con
un ciclo de luz/oscuridad de 12-12 h. Para el

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Estudio fisicoqumico, microbiolgico y toxicolgico de los polisacridos del nostoc commune y nostoc sphaericum

A
C
Figura 1. Recoleccin de algas Nostoc en lagunas de Huaraz(A). Cushuro tipo I (forma esfricas) (B). Cushuro tipo II (forma lechugas) (C)

CUSHURO CUSHURO ANCASH CUSHURO ANCASH CUSHURO PACHACAMAC


CUSHURO JUNN
CAJAMARCA TIPO I TIPO II LIMA

Figura 2. Muestras de cushuro recolectadas de Junn (Huancayo), Ancash (Huaraz), Cajamarca y Lima (Pachacamac)

Extraccin y Purificacin Nostoc sphaericum present: L-ramnosa,


D-fructuosa, D-xilosa y D-galactosa,
Rainer en su estudio de la investigacin polisacridos y monosacridos solubles
estructural de un polisacrido de Nostoc in- en agua caliente, fueron separados por
sulare, realizaron la extraccin, centrifugado cromatografa de intercambio aninico
y concentracin por rotavapor, el cual difiere en fracciones neutras y cidas[8]. Ade-
de nuestro mtodo ya que para el desecado ms, se prob la alta viscosidad de los
de la muestra se hizo por deshidratacin en polmeros que podran ser adecuados
fro; se realiz la seleccin, lavado y licuado para uso industrial. Coincidimos con los
como primer mtodo de extraccin.[6] resultados de estos estudios, ya que los
Li en su estudio de Actividad antioxidante y valores de viscosidad y punto de gelifi-
retencin de humedad de los polisacridos cacin de Nostoc sphaericum es mayor
del Nostoc commune, realiz al final del pro- al de Nostoc commune (Tabla 1). Tales
ceso la eliminacin de protenas mediante valores nos indican que podran mejorar
el mtodo de Sevag para purificar el polisa- la textura de los alimentos, reemplazando
crido.[7] Nuestro mtodo la purificacin se a las sustancias qumicas que le ayudan
realiz mediante precipitacin con etanol de a dar viscosidad, valorando a esta espe-
96 formando flculos blancos que luego se cie su poder como viscosante natural.[8]
llev a secar a 40 C. (Fig. 4).
Anlisis microbiolgico
Anlisis fisicoqumico: Los resultados mostraron que estn libres de
- Solubilidad.Soluble enagua destilada a microorganismos patgenos como E. coli, St.
80C e Insoluble enagua destilada fra, aureus, Salmonella sp. (Tabla 2).
etanol, metanol y diclorometano.
Tabla 1. Viscosidad y Punto de gelificacin de Nostoc
- Determinacin de pH, con potencimetro.
A Temperatura de 38 C se obtuvo pH: Nostoc Nostoc
Prueba
7,115 (N. sphaericum) y 7,279 (N. com- sphaericum commune
mune)
Viscosidad 38,3 cps 4,5 cps
- Determinacin de la Viscosidad y Punto
Esterificacin a Esterificacin a
de gelificacin.Huang determin que el Gelificacin
75,013% - T 85 8,812% - T 85

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Tabla 2. Anlisis microbiolgico de Nostoc

Pruebas Especificaciones Nostoc sphaericum Nostoc commune

Recuento total de aerobios mesfilos


-------- >1600000 ufc/ g 91500 ufc/ g
viables
Recuento de Mohos y Levaduras -------- >1600000 ufc/ g 80000 ufc/ g
Rcto. de Coliformes totales -------- <3NMP/ g <3NMP/ g
Rcto. de Enterobacterias Gram (-) -------- 1450 ufc/ g 250 ufc/ g
E. coli Ausente en 10 g. Ausente en 10 g. Ausente en 10 g.
St. aureus Ausente en 10 g. Ausente en 10 g. Ausente en 10 g.
Bacilluscereus Ausente en 10 g. Ausente en 10 g. Ausente en 10g.
Salmonellaspp. Ausente en 25 g. Ausente en 25 g. Ausente en 25 g.
Clostridium Sulfito Reductores Ausente en 10 g. Ausente en 10 g. Ausente en 10 g.

Anlisis qumico bromatolgico Tabla 3. Anlisis de metales en los polisacridos de


Nostoc, expresados en ppm
Segn Aldave,[9] en las algas procedentes
de Huaraz los valores de protenas y sales Nostoc Nostoc
minerales son ms elevados en la masa Metales
sphaericum Commune
seca en relacin a la masa fresca. Felix Plomo 101,64 N.D.
obtuvo para Nostoc deshidratado: 29 g de
Cromo N.D. N.D.
protenas, grasa 0,5 g, hidrato de carbono
46,9, calcio 147 mg, fsforo 64 mg, hierro Cadmio N.D. N.D.
83,6 mg, sodio 1,021 mg y potasio 483 mg Mercurio 18,80 6,71
por ciento respectivamente.[10] Arsnico N.D. N.D.
Calcio 13659,55 20879,53
En nuestro estudio se utiliz muestra fresca
del gnero Nostoc y se llev a congelacin Hierro 100,09 549,07
para su deshidratacin. El contenido de Zinc 87,42 246,15
metalesestuvo dentro de los parmetros Potasio 24467,88 3299,58
normales,encontrndose calcio 20879,53 Magnesio 12010,66 3817,27
mg/L, hierro/549,07 mg/L, zinc/246,15 mg/L,
Cobre 96,35 N.D.
potasio 3299,58 mg/L y magnesio 3817,27
N.D.= No detectable
mg/L (Tabla 3).

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Estudio fisicoqumico, microbiolgico y toxicolgico de los polisacridos del nostoc commune y nostoc sphaericum

Tabla 4. Toxicidad aguda hasta los ocho das al administrar por va oral el extracto A (Nostocsphaericum) en ratones
N Tratamiento n Dosis Muertos Vivos
1 Suero fisiolgico 6 10 mL/kg 0 6
2 Extracto A 6 50 mg/kg 0 6
3 Extracto A 6 100 mg/kg 0 6
4 Extracto A 6 250 mg/kg 0 6
5 Extracto A 6 500 mg/kg 0 6
6 Extracto A 6 1000 mg/kg 0 6
7 Extracto A 6 1500 mg/kg 0 6
8 Extracto A 6 2000 mg/kg 3 a partir del octavo da 3

Tabla 5.Toxicidad aguda hasta las 48 horas al administrar por va oral el extracto B (Nostoccommune) en ratones
N Tratamiento n Dosis Muertos Vivos
1 Suero fisiolgico 6 10 mL/kg 0 6
2 Extracto B 6 250 mg/kg 0 6
3 Extracto B 6 500 mg/kg 0 6
4 Extracto B 6 1000 mg/kg 0 6
5 Extracto B 6 1500 mg/kg 0 6
6 Extracto B 6 2000 mg/kg 0 6

Tabla 6. Toxicidad a dosis repetidas al administrar por va oral el extracto A (Nostoc sphaericum) en ratas normales
hasta el octavo da de administracin
Animal de experimentacin n Tratamiento Dosis
1 Macho 5 Suero fisiolgico 4 mL/kg
2 Hembra 5 Suero fisiolgico 4 mL/kg
3 Macho 5 Extracto A 100 mg/kg
4 Hembra 5 Extracto A 100 mg/kg

Determinacin de etanol residual nes fsicas de las ratas no revelaron cambios


fisiolgicos que se relacionen con eventos
Los polisacridos de Nostoc sphaericum y de toxicidad (Tabla 6).
Nostoc commune resultaron estar libres de
solventes residuales. En la tabla 4 se observa que a partir del
octavo da han muerto tres de los ratones
Determinacin de Toxicidad machos (50%) lo que indica que la dosis letal
50 est sobre los 1500 mg/kg.
Inicialmente los animales que recibieron
dosis altas (2000 mg/kg) presentaron pi- La dosis letal 50 en ratones y por adminis-
loereccin, luego de 24 horas regresaron a tracin oral para el extracto A (polisacridos
su estado normal, en tanto que al octavo da, de Nostoc sphaericum) fue sobre los 1500
3 de los ratones que recibieron dosis altas mg/kg hasta el octavo da; en tanto que
empezaron a presentar signos de apata, para el extracto B (Nostoc commune) fue
depresin neurolgica progresiva hasta sobre 2000 mg/kg hasta las 48 horas de
llevarlos a la muerte (Tabla 4). Hasta las 48 observacin.
horas no se evidenci signos irritabilidad No se ha observado cambios fisiolgicos
neurolgica u otro que indique toxicidad, as hasta el octavo da de administracin del
como no hubo muertes por administracin extracto A (Nostoc sphaericum) en dosis
oral del extracto B(Nostoc commune) en de 100 mg/kg aplicadas en ratas normales.
tales ratones (Tabla 5).
La validacin cientfica de las plantas me-
Hasta el octavo da de administracin diaria dicinales toma gran importancia una vez
de 100 mg/kg se observ que las condicio-

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Alvarado Ch., B.M. Rivera C., M. A. Ramrez O., H. Ostos F., L. Crdenas M.

detectada su actividad biolgica dentro del elaborados en base a los polisacridos de


desarrollo de un nuevo frmaco, porque no esta algaservira como un alimento nutritivo,
podemos limitarnos a la sabidura popular. adems de reducir grasas y colesterol.[16]
La seguridad, eficacia e inocuidad se debe
tener en cuenta porque algunas sustancias IV. CONCLUSIONES
presentes podra presentar efectos txicos
indicaron estos efectos txicos que fueron Es conveniente trabajar con las muestras de
evaluados en nuestro estudio.[11-13] Ancash (Huaraz)y Pachacamac (Lima) por
ser de fcil obtencin, en especial en Ancash,
En el anlisis toxicolgico de los polisa- donde se dedican al cultivo natural sostenible.
cridos extrados del N. sphaericum y N.
commune se emple el test de dosis lmite; Elmtodo de extraccin de los polisacridos
metodologa y diseo experimental descrito de algas cianofitas Nostoc sphaericum y
por las normas EPA (Agencia de Proteccin Nostoc commune es sencillo, de bajo costo,
Ambiental) 870.1100, OECD (Organizacin lo cual facilita la extraccin a escala industrial.
Econmica para el Comercio y Desarrollo).
Como resultado no se observ cambios Los parmetros fisicoqumicos tales como
compatibles con evidencias de toxicidad o pH, viscosidad y punto de gelificacin de-
evento adverso (tablas 4, 5 y 6); por ello la mostraron que el N.sphaericum present
dosis letal 50 (DL50) estuvo sobre los 2000 mejores valores que el N.commune.
mg/kg. Lgicamente es un indicador para Los parmetros microbiolgicos mostraron
posteriores estudios de seguridad como ausencia de microorganismos patgenos.
el conocer la toxicidad a dosis repetidas,
eventos de genotoxicidad,etc.[14-15] Los anlisis toxicolgicos realizados, toxici-
dad aguda a Dosis Letal 50 en ratones y a
Los polisacridos del N. commune present dosis repetida en ratas por va oral no mos-
un elevado poder antioxidante en la cap- traron cambios fisiolgicos que se relacione
tacin de aniones superxido y radicales con eventos de toxicidad.
hidroxilo de manera dosis-dependiente.[7]
Adems, se demostr que el tratamiento
V. AGRADECIMIENTOS
con el polisacrido puede aumentar las acti-
vidades de las enzimas antioxidantes (SOD, Proyecto subvencionado por el CONCYTEC
CAT y GPX) y disminuir el contenido de la a travs de FONDECYT (contrato de sub-
peroxidacin lipdica producto de la MDA. venciones N 282-2010-CONCYTEC-OAJ).
En conjunto, estos resultados demuestran la
potente actividad antioxidante in vitro como A los colaboradores: Q.F. Christian Palomi-
in vivo; por lo tanto proporcionan evidencia no, Lic. Qumica Mirian Palomino, Bilogo
crucial para su posible aplicacin en los ali- Christian Florin, Bilogo Mario Benavente,
mentos, industria farmacutica y cosmtica. Bilogo Jos Campos y Q.F. Rubn Flores.

Resultados de nuevos estudios Rasmussen-


VI. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
demostraron que la suplementacin en los
alimentos con N.commune redujo significa- [1] Lutgardo A., Tilln J., Cabrera Y. Toxi-
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