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DESARROLLO DE MEDICAMENTOS
Genmica Estructural
Protemica Citmica
Genmica Funcional
organismos.
Genmica Estructural
Protemica Citmica
Genmica Funcional
determinadas.
El
El anlisis
anlisis citmico
citmico se
se integra
integra en
en las
las estrategias
estrategias esenciales
esenciales en
en elel
anlisis
anlisis de
de lala interaccin
interaccin xenobitico-clula
xenobitico-clula en
en investigacin
investigacin bsica,
bsica,
elel desarrollo
desarrollo industrial
industrial yy lala evaluacin
evaluacin de
de efectos
efectos teraputicos
teraputicos yy
txicos
txicosde
deproductos
productosqumicos
qumicosyybiolgicos.
biolgicos.
- Tipo salvaje
-Transfectantes y Knock-outs
- Interaccin frmaco-receptor
nucleares de esteroides
de hormona
receptores
?
HTS mediante FLIPR
Medida cintica de Ca2+ intracelular
Robotizado
1024 wells/seg
Miles de anlisis por da
Centro de Citometra y Citmica
RECEPTORES
DE QUIMIOATRAYENTES
BLT2
BLT1 RECEPTORES DE
LISOFOSFOLIPIDOS
RECEPTORES
DE QUIMIOQUINAS RECEPTORES DE
EN LEUCOCITOS PROSTANOIDES
RECEPTORES CysLT1
DE ADP Y TROMBINA CysLT2
EN PLAQUETAS
RECEPTORES
DE NUCLEOTIDOS
CD19
LN5
Linfocito B
Basfilo Macrfago
CD8+ Neutrfilo
LTs
CD4+ Eosinfilo
Linfocito T
CysLT
10
1/Vmax
VELOCIDAD (UAF/S
0
-2 -1 0 1 2 3
0 5 10 15 20 25 30 35
(LTB4)nM 1/[LTB4]
Biotransformacin de xenobiticos:
Dibencilfluoresceina
IL-
IL-2
IL-
IL-4
IL-
IL-5
IL-
IL-10
TNF-
TNF-
IFN-
IFN-
An
Anevaluation
evaluationof
ofthe
thereproducibility
reproducibilityand
andtransferability
transferabilityof
offlow
flow
cytometric and confocal microscopic endpoints in an in vitro
cytometric and confocal microscopic endpoints in an in vitro
nephrotoxicity
nephrotoxicityand
andin
invitro
vitrometabolism
metabolismmodels.
models.
An
AnEuropean
EuropeanContract
Contractsponsored
sponsoredby bythe
the
European
European Center for the Validation of AlternativeMethods
Center for the Validation of Alternative Methods(ECVAM),
(ECVAM ),
(ECVAM),
Institute
Institutefor
forHealth
Healthand
andConsumer
ConsumerProtection,
Protection,
Commission of the European Communities
Commission of the European Communities
(15348-
(15348-1999-
1999-10FIED ISP
(15348-1999-10FIED ISPES)
ES)
REPLACEMENT
Tejidos especficos
REDUCTION
Mltiples endpoints
Cuantitativas
No-invasivas
Similar fundamento biolgico
Informacin Complementaria :
Descripcin poblacional
Descripcin celular
Correlacin de parmetros
Descripcin topolgica
Ensayos Multiparamtricos
ANALISIS MULTIPARAMETRICO DE
MARCADORES DE NEFROTOXICIDAD:
NEFROTOXINAS ESTANDARD : CADMIO, CICLOSPORINA A, CIS-PLATINO
CONTROLES POSITIVOS APROPIADOS
Centro de Citometra y Citmica
LA CITOMETRIA COMO METODO ALTERNATIVO EN
TOXICOLOGIA IN VITRO
ANALISIS MULTIPARAMETRICO DE
MARCADORES DE CITOTOXICIDAD DEPENDIENTE DE 2D6:
SUSTRATOS DE CYP 2D6 : IMIPRAMINA, MIANSERINA
CONTROLES POSITIVOS APROPIADOS
Centro de Citometra y Citmica
ANALISIS
ANALISISMULTIPARAMETRICO
MULTIPARAMETRICO MUERTE CELULAR
PROLIFERACION
DE
DEMARCADORES
MARCADORES NECROSIS
CICLO CELULAR DE
DECITOTOXICIDAD
CITOTOXICIDAD APOPTOSIS
ESTRS OXIDATIVO
PROOXIDANTES
OXIDO NITRICO
GLUTATION Centro de Citometra y Citmica
LA CITOMETRIA COMO METODO ALTERNATIVO EN
TOXICOLOGIA IN VITRO
REGULACION IONICA METABOLISMO
Fluo-3, Fura Red DiBac
Sodium Green Rhodamine 123, JC-1
BCECF, SNARF Nile Red
Cyp-Mix
ANALISIS
ANALISISMULTIPARAMETRICO
MULTIPARAMETRICO MUERTE CELULAR
PROLIFERACION
DE MARCADORES
DE MARCADORES Propidium iodide
Propidium iodide DE
DECITOTOXICIDAD
CITOTOXICIDAD Annexin V-FITC
ESTRS OXIDATIVO
DHDCF, HE, DHRH123
DAF-FM
Mercury Orange Centro de Citometra y Citmica
WBC
RBC
Perxidos
Perxidos Superxido
Superxido
Superoxido
Superoxido
CD45-PC5
CD45-PC5
Perxidos
Perxidos
H2O2 NO O2.-
Control CONTROL
H2O2 H2O2
CuNO3
CuNO3+H2O2
SUPEROXIDE SUPEROXIDE
14 100
ETHIDIUM FLUORESCENCE
90
12
ETHIDIUM FLUORESCENCE (FAU)
80
10 70
IC188
60
IC188+15M
(FAU)
8
IC188 50 IC188+30M
IC5232
6 40 IC188+45M
IC188+60M
30
4
20
2 10
0 0
0 10 20
0 75 100 150 200 400
g/assay mmols H2O2 /assay
0 min 0 min
5 min 5 min
10 min 10 min
20 min 20 min
NO
O2.-
de parmetros permite:
- Induccin
- Ejecucin
- Inhibicin
- Distincin de la necrosis.
--Sistema
Sistemaen
enfase
fasede
dedesarrollo
desarrollo
--1.2 seg/muestra
1.2 seg/muestra
--Volumen
Volumendedemuestra:
muestra:hasta 10L
hasta10 L
--Muestreo automtico de microplacas
Muestreo automtico de microplacas
--Compatible
Compatiblecon
consoftware
softwareHTS
HTS