POINTE SCIENTIFIC
REACTIVOS PARA CREATININA
USO:
Para la determinacin cuantitativa de creatinina en
suero
HISTORIA DEL METODO:
En 1886 Jaffe describi un mtodo que
comprendia un filtrado libre de protenas y una
reaccin con cido picrico en solucin alcalina.
Aunque se han descrito bastantes metodos desde
entonces, la reaccin clasica de Jaffe es
ampliamente usada. En esta reaccin hacen
interferencias varias sustancias, incluyendo
protenas y glucosa.
Se han hecho modificaciones al procedimiento
para combatir las desventajas. Los procedimientos
cineticos se han hecho populares por que son
rpidos, simples y evitan interferencias, este
metodo se basa en una modificacin del
procedimiento sealado anteriormente
incorporado un surfactante y otros ingredientes
para minimizar la interferencia de protenas y los
carbohidratos.
PRINCIPIO:
Creatinina+ Picratode Sodio Alkali
Complejo Creatinina
Picrato( amarillo naranja).
La Creatinina reacciona con el cido de pcrico en
condiciones alcalinas para formar un complejo de
color que absorbe a 510 nm. La velocidad de la
formacin del color es proporcional a la creatinina
en la muestra.
REACTIVOS:
A. Acido Pcrico 20.5 mM. Surfractante,
Estabilizadores.
B. Hidrxido de sodio 1.25 M.
PRECAUCIONES:
1.- Para diagnstico "In Vitro" solamente.
2.- El Acido Pcrico es un agente altamente
oxidante, evite el contacto con la piel. Limpie
cualquier derrame ya que el vapor del cido
pcrico es explosivo.
3.- El hidrxido de sodio es un alcail, evite
ingestin y contacto.
PREPARACION DEL REACTIVO:
Combine nueve volumenes de cido pcrico y un
volumen de Hidrxido de Sodio, mezcle.
ALMACEN DEL REACTIVO:
CREATININA
1.- Ambos se almacenan a temperatura ambiente.
2.- El reactivo de trabajo es estable por mas de un
mes a temperatura ambiente si es cerrado
hermticamente.
DETERIORO DEL REACTIVO: NO USE SI:
1.- El reactivo est contaminado.
2.- Si no da los valores asignados con un suero de
control fresco.
COLECCION Y ALMACENAMIENTO DE
LA MUESTRA:
1.- Se recomienda suero.
2.- La Creatinina en suero es estable por 24 horas
a temperatura refrigerada 2-8C. por varios meses
en congelamiento a-20C.
3.- Los especmenes de orina de 24 hrs. deben
preservarse con 15 gramos de Acido Brico.
INTERFERENCIAS:
Un nmero de sustancias afectan la presicin de
la determinacin de la creatinina. ver Young.
MATERIALES:
1.-Instrumentos de pipeteo
2.- Reloj
3.- Block trmico
4.- Tubos o gradilla
5.- Vaso para combinar los reactivos (vidrio o
plstico)
6.- Espectrofotmetro con cubeta trmica.
PROCEDIMIENTO AUTOMATIZADO:
Vea las aplicaciones especificas del instrumento.
PROCEDIMIENTO MANUAL:
1.- Prepare reactivo de acuerdo a las
instrucciones.
2.- Programe la temperatura de la cuveta a 30 C.
3.- Pipetee 1.0 ml. de reactivo de trabajo en los
tubos.
4.- Ponga en cero el espectrofotmetro con el
blanco de reactivo a 510 nm.
5.- Agregue 0.05 ml (50 ul) de muestra al
reactivo, mezcle y pongalo en la cuveta.
6.- Despus de 30 segundos lea y anote la
absorbancia (A1).
7.- Despues de 30 segundos de A1 lea otra vez y
anote A2, el tiempo de A1 y A2 es 60 segundos.
8.- Calcule ABS/MIN = A2-A1 Ver clculos.
NOTA:
Si el espectro requiere de muestras de 1.0 ml. use
2.0 ml. (200 ul ) de muestra y 3.0 ml. de reactivo.
CALIBRACION:
Use un estandar acuoso Creatinina (5 mg dl) o un
suero calibrador apropiado.
CONTROL DE CALIDAD:
La reaccion debe de ser monitoreada con el uso de
control de suero normal y anormal.
CALCULOS:
El valor de la creatinina desconocido es calculado
comparando su cambio de absorbancia con el de
un estandar conocido.
2.- DiGiorgio,J.Clinical Chemistry : Principes
andTechnics 2nd Edition By Henry,R.J. et al,
Hagerstown (MD), Harper and Rowpp 541- 553
(1974)
3.- Cook,J.G.H. Ann.Clin. Biochem, 12:219
(1975)
4.- Taussky. H.H. Standard metodhs of Clinical
Chemistry vol. 3 New York Academic Press. p.
99 (1966)
5.-Heinegard, D; Tiderstorm, G; Clin. Chem Acta,
43:305 (1973)
6.- Fabiny, D.L, Ertinghausen, G; Chem 17:391
(1971)
7.- Young, D.S., et al Clin. Chem 21:1D (1975)

ABS ( desconocido)
mg / dl = conoc. de estandard mg / dl
ABS ( Es tan dard )

DONDE :
Abs . = Diferenciade Absorbancia( A2 A1)

EJEMPLO:

Abs.desc. = 0.01
Abs.est. = 0.05
Conoc.Estndar = 5mg dl
0.01
5 = 1.0mg / dl
0.05

LIMITACIONES:
Las muestras con valores sobre 25 mg dl deben de
ser diluidas 1:1, correr de nuevo los resultados
multiplicarlos por 2.

VALORES ESPERADOS:
0.04 - 1.40 mg /dl

DESEMPEO:
1.- Linearidad: 25 mg/dl

2.- Comparacin: Un estudio realizado entre este

metodo y otro similar, dio un coeficiente de
correlacin de 0.998 con con una ecuacin de
regresin de y - 1.01 x - 0.07.

3.- Precisin:

Entre pruebas
Conoc. D.E. C.V.%
1.8 0.13 7.2
7.5 0.14 1.9

Prueba a Prueba
Conoc. D.E. C.V.%
1.8 0.09 5.0
8.1 0.15 1.9

REFERENCIAS:
1.- Jaffe ,M.Z. Phisiol Chem 10:391 (1886)