Tcnicas de Siembra en Microorganismos

Planting techniques in Microorganisms

Laura Camila Bermdez Palomino1Francisco Javier Rivera2Wilson Ferney Osorio3

Resumen:
Es importante tener en cuenta las normas de seguridad del laboratorio y las distintas etapas para el desarrollo de
los microorganismos; primero se realiza la esterilizacin de los materiales a utilizar, se tienen en cuenta los medios
de cultivo que se van a trabajar, en este caso los 3 tipos: superficie, profundidad, triple estra; Luego de terminar
cada prueba, se realiza la debida limpieza para que no exista propagacin, contaminacin del laboratorio ni del
personal. En este laboratorio se hizo la preparacin de medios de cultivo de pollo, papaya, E. Coli y Klebsiella
(Restaurante Salud Universidad Surcolombiana) para realizar diluciones (-1,-2, -3, -5) de estas mismas y luego
usarlas en las siembras en las cajas de Petri: medio liquido agua de peptona (tamponada) y XLD.
Palabras Clave: Tamponada, Triple estra, Profundidad, Superficie

Abstract
It is important to consider the safety of the laboratory and the various stages for the development of micro-
organisms ; first sterilization of the materials used is made , taking into account the culture media that will work ,
in this case three types : surface , depth , triple groove ; After completing each test , proper cleaning is done so
that there is no spread , laboratory contamination or staff . In this lab was preparing chicken culture media , papaya
, E. coli and Klebsiella ( Restaurant Health South Colombian University ) to perform dilutions (-1 , -2 , -3 , -5 ) of
the same and then use them in sowing in Petri dishes : half liquid peptone water (buffered ) and XLD ..
Keywords: Buffered, Triple groove, Depth, Surface.

1
Estudiante de Ingeniera Agrcola. Universidad Surcolombiana Neiva. Av. Pastrana Carrera 1.
u20141127435@usco.edu.co
2
Estudiante de Ingeniera Agrcola. Universidad Surcolombiana Neiva. Av. Pastrana Carrera 1.
u2014112@usco.edu.co
3
Estudiante de Ingeniera Agrcola. Universidad Surcolombiana Neiva. Av. Pastrana Carrera 1.
u20132121341@usco.edu.co
1. Introduccin
La microbiologa se ha definido a menudo como el estudio de organismos y agentes que son demasiados
pequeos para poder observarlos con el ojo humano a simple vista. Esta ciencia se ocupa del estudio de virus,
bacterias, algas, hongos y protozoos. Sin embargo, otros miembros de estos grupos, particularmente algunos
de algas y hongos, son ms grandes y bastante visibles. Debido a la dificultad para delimitar el campo de la
microbiologa, Roger Stainer ha sugerido que se defina a esta ciencia no solo respecto del tamao de los
objetos que estudia, sino tambin teniendo en cuenta las tcnicas empleadas. En general, un microbilogo asla
primero un microorganismo especfico de una poblacin y luego lo cultiva. Por ello la microbiologa emplea
tcnicas, como la esterilizacin y el empleo de medios de cultivo que son necesarias para aislar y cultivar con
xito microorganismo (Prescott, Harley, Klein. 2002)
Es imprescindible en microbiologa la limpieza de todo el material que se va a emplear con el fin de evitar
problemas de contaminacin. El material sucio, los medios de cultivo que se han sembrado y que no van a ser
utilizados, se recomienda recogerlos en recipientes adecuados con el fin de prevenir la contaminacin del
laboratorio y del personal que trabaja en las instalaciones (Hernndez E., et al, 2006).Los programas de
seguridad e higiene son prioritarios ya que se siguen una serie de actividades previamente planeadas que
contribuyen para crear un ambiente y actitudes psicolgicas que promuevan la seguridad (Feo R.J., 2011). Es
necesario identificar todos los riesgos presentes en el laboratorio y trabajar para superar dichas deficiencias.
En algunas ocasiones, se tiene una mezcla de diferentes microorganismos y es necesario implementar ciertas
tcnicas para aislarlos. Una de estas tcnicas fue desarrollada por Robert Koch, en donde se obtiene una
colonia aislada, la cual es el crecimiento de un solo microorganismo sobre la superficie del agar (Pollack
R.A., et al., 2012. En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal planas,
que se llaman desde entonces placas de Petri, para sustituir a las clsicas bandejas de vidrio cubiertas con
campanas que se usaban hasta entonces. Actualmente se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo
diferentes.
Las tcnicas empleadas en la siembra de microorganismos son siembra en masa, triple estra y en
profundidad. Cuando se siembra en placa por extensin y en estras, se extiende una mezcla de clulas sobre
una superficie de agar, cada clula aislada se multiplicar formando una colonia independiente, cada colonia
representa un cultivo puro. Dicha colonia se toma y posteriormente se siembra por superficie haciendo la
extensin uniforme de la colonia por el medio de cultivo o se toma una muestra lquida, la cual se adiciona a
la placa que contiene el medio de cultivo y luego se extiende con ayuda de un asa. Las clulas diseminadas
sobre la superficie desarrollaran colonias aisladas, el nmero de colonias que se desarrollen corresponden al
nmero de organismos viables de la muestra, siempre y cuando se proporcionen las condiciones ptimas
para su desarrollo (Prescott, Harley, Klein. 2002)
2. Metodologa

2.1. Localizacin

Las prcticas referidas en este artculo se realizaron en la universidad Surcolombiana de Neiva-

Huila, en la facultad de ingeniera; especficamente en el laboratorio de procesos agroindustriales,
durante 3 secciones cada una de 2 horas.

2.2. Materiales

Asa de platino
Medio cultivo fundido
Bao mara
Asa digralsky
Estufa
Termmetro
Mechero
Pipeta Pasteur
Placa Petri
Suspensin microbiana

2.3 Tcnicas De Siembra

El medio de cultivo debe atemperar de 45-50C en el bao mara (Labnet) para poder realizar una
siembra adecuada.

2.3.1. Siembra En Profundidad (Agar VRBG)

En una caja de Petri estril se adiciono 1ml de la suspensin microbiana tomada de la dilucin -4,
seguido se agrega 5ml del medio de cultivo Agar VRBG. Se homogeniza la muestra con el cultivo y
se espera a que se solidifique para despus incubarlo a temperatura ambiente. No olvidar que todo
este procedimiento se realiz en la cmara de flujo.

2.3.2. Siembra En Masa.

Se tom una muestra de una colonia de una placa con crecimiento microbiano (Bao de mujeres
facultad de ingeniera universidad Surcolombiana). Se extiende homogneamente la colonia con asa
de platino en una placa de Petri con medio de cultivo Agar Plate Count y sin crecimiento
microbiano. Se Incubo a 39 C de temperatura (termmetro digital).
Recordar que al utilizar el aza de platino se debe calentar hasta rojo vivo y si se desea volver a
utilizar se repite el calentamiento, (Ilustracin 2).
 Ilustracin 1. Siembra en Masa.

2.3.3 Siembra Triple Estra

Se Tom con el asa de platino una porcin de crecimiento microbiano y se Sembr hasta en la
mitad de una placa nueva con medio de cultivo Agar Plate Count, Se Flameo el asa de platino en el
mechero hasta que se alcanz el rojo vivo, se dej enfriar y se Realiz una estra a partir de la
siembra anterior, Flamear el asa de platino nuevamente y por ltimo se Realiz una tercera estra a
partir de la primera estra se incub a 39C de temperatura (termmetro digital).(Ilustracin 3).

Ilustracin 2. Siembra en Triple Estra.

3. Resultados

Ilustracin 3 Siembra de Pollo en AGAR por superficie -1; -3; -5

Ilustracin 4 Siembra en medio XLD en triple estra

Ilustracin 5 Siembra de Papaya a la -1; -2; -3; -5 en profundidad

Para la preparacin de los medios de cultivos, se tienen en cuenta los parmetros que se presentan en
las guas de prctica. En superficie, no se encontraron colonias aisladas para poderlas analizar debido
al crecimiento exponencial que se present, se determin incontable las colonia, para el mtodo de
triple estra, se encontr un rompimiento en el agar, lo que ocasiono que no hubieran colonias aisladas
y el crecimiento de la poblacin microbiana no se diera de forma normal. En la siembra a profundidad
se tienen colonias aisladas y en las disoluciones ms concentradas se dieron incontables.
 4. Conclusiones
Como regla fundamental de cualquier investigacin se deben seguir un manual de seguridad y
buscar el buen manejo de todos los equipos adems realizar los procedimientos segn las normas y
los protocolos.
Los medios de cultivo se pueden elaborar completamente a partir de componentes definidos
qumicamente (medios definidos o sintticos) o pueden contener constituyentes como peptonas o
levaduras; adems se tiene que utilizar dependiendo la bacteria que se va a analizar, los cultivos
puros se pueden obtener normalmente aislando clulas individuales con cualquiera de las tcnicas
de siembra: profundidad, doble capa, masa y triple estra.
Las tcnicas de siembra varan a la necesidad del investigador los resultados nos muestran que el
mtodo de profundidad es el ms eficaz al darme colonias puras para el anlisis.
Los microorganismos que crecen sobre superficies solidas tienden a formar colonias con una
morfologa distinta. Dentro de cada colonia, los microorganismos crecen normal mete con mayor
rapidez en los extremos, donde las cantidades de recursos disponibles son mayores.

5. Bibliografia

AZA, Jaime y CORES, Ana. Cocos Gram positivos . [en lnea].(2006).[consultado el 18 de

mar.2014].Disponible en < http://microral.com/12.+Cocos+Gram+positivos+I.>

NORE, Lina y POVEDA, Jeimy. Estudio comparativo de recuento rpido en el mercado y placas
petrifilmtm 3mtm para el anlisis de alimentos. Bogot, 2008. 213 p. Tesis (Carrera Microbiologa
Industrial).Pontificia Universidad Javeriana. Facultad de ciencias.

POLLACK R.A., Findlay L., Mondscheim W., Modesto R.R. 2012. Laboratory exercises in
microbiology. Fourth edition.

PRESCOTT, Harley, Klein. 2002. Microbiologa. McGraw Hill. Quinta edicin.

UNIVERSIDAD DEL CAUCA. Bacterias Anaerobias. [en lnea].(2010).[consultado el 18 de

mar.2014].Disponible en
<http://www.facultadsalud.unicauca.edu.co/documentos/Enf/BacteriasAnaerobias%20IVsem-I-
07.pdf>

MONTOYA Villafae, Hugo Humberto, 2000. Microbiologa bsica para el rea de la salud y afines.
Universidad de Antioquia. Primera Edicin.
DELAAT C. N. Adrian, 1976. Microbiologa. Nueva Editorial Interamericana, S. A. de C. V. Primera
Edicin.
PRESCOTT, Harley, Kleim. 2002. Microbiologa. McGraw Hill. Quinta Edicin.
URDANETA E., Avendao G., Rivera L., Pabn O. Procesamientos de muestras microbianas para
su posterior cultivo, tincin y observacin descriptiva de sus morfologas. [En lnea]. Disponible en
<http://es.scribd.com/doc/80466455/Articulo-Cientifico-de-Microbiologia>
POLLACK R.A., Findlay L., Mondscheim W., Modesto R.R. 2012. Laboratory exercises in
microbiology. Fourth Edition.