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Caracterizacin de polmeros
Dr. Eduardo Ramrez Vargas
Actividades:
GPC
Alumnos:
Jssica Mariana Jernimo Nava
Nelson Alberto Jimnez Reyes
La cromatografa por permeacin de gel (GPC) es una tcnica analtica que separa
macromolculas disueltas por tamao con base en su elucin desde columnas
llenas de un gel poroso. Los compuestos a separar son arrastrados por la fase mvil
y se analizan por medio de un detector, s la fase mvil es un gas da lugar a
cromatografa de gases y si es lquida de lquidos. Un tipo de cromatografa liquida
es la de exclusin de tamaos o tambin denominada cromatografa de
permeacin en gel en la cual la fase estacionaria es slida. Esta tcnica lleva a
cabo la separacin de molculas en funcin de tamao, y con esto obtener la
distribucin de pesos moleculares. Esta tcnica data de la preparacin de
microesferas de geles de compuestos orgnicos y biolgicos solubles en agua, los
cuales se aplicaron a la separacin de polmeros disueltos en disolventes orgnicos
utilizando un relleno de poliestireno. En consecuencia, a esto, la tcnica se
denomin GPC.
El relleno que la columna contiene se comporta como un filtro en donde existen tres
tipos de molculas:
Molculas permeables: son aquellas de menor tamao que al atravesar el poro
quedan retenidas.
Molculas fraccionables: son de un tamao intermedio que entran de manera
parcial en el relleno poroso.
Molculas excluidas: aquellas de tamao superior al poro que no entran y pasan
rpidamente por la columna.
Para seleccionar las fases se deben tener en cuenta una serie de parmetros estos
son mostrados en el siguiente diagrama:
FASES
Mvil Estacionaria
El gel (fase estacionaria) que va en las columnas deber ser una sustancia
qumicamente inerte, mecnicamente estable, con un tamao de partcula uniforme
y con estructura de poros perfectamente reproducible. Posiblemente, los dos tipos
de materiales ms utilizados sean los geles de dextranos con enlaces cruzados y
los de poli-acrilamida. El gel de dextrano es insoluble en agua, pero hidroflico,
debido a los grupos OH residuales, lo cual hace que al ponerlo en solucin es
acuosas el gel se hinche, reteniendo entre 1 y 20 mL de agua por gramo de resina
seca. En disolventes no polares nicamente tiene lugar un ligero hinchamiento, por
lo que estas sustancias se utilizan casi exclusivamente en medio acuoso. Los geles
de poliacrilamida se comportan de forma similar a los geles de dextrano, si bien son
menos resistentes a los lcalis y los grupos amida pueden hidrolizarse a cidos
carboxlicos cuando se ponen en contacto con disolventes de pH extremos. Los
materiales descritos no son los nicos que se utilizan en cromatografa de exclusin
molecular. Los hay de naturaleza inorgnica, como el gel de slice y el vidrio poroso
y otros de naturaleza orgnica como los co-polmeros de estirenodivinilbenceno.
Estos polmeros (sin los grupos sulfnicos) se hinchan en disolventes como el
tolueno o el cloruro de metileno, y forman fases tiles para la cromatografa de
macromolculas que son solubles en disolventes orgnicos.
Columnas
Las columnas son parte importante de esta
Ilustracin 2.-Esquema de
una columna de borosilicato
de GPC.
MODELO REOLGICO SISKO
Detectores
Caractersticas:
Adecuada sensibilidad.
Estabilidad y Reproducibilidad
Respuesta lineal en un rango amplio.
Tiempo de respuesta corto.
Fiabilidad y manejo sencillo.
Respuesta semejante para todos los solutos e idealmente selectiva, no
destructivo.
Se puede hacer una divisin de los detectores en dos grandes grupos: los que
aportan informacin estructural sobre sustancias eluidas (aquellos que permiten la
obtencin de espectros de las sustancias que salen de la columna) y aquellos que
no aportan informacin estructural.
Los principales detectores usados para GPC son los que no aportan informacin
estructural entre ellos estn:
mvil deber modificarse por la presencia de cualquier soluto que tenga un ndice
de refraccin diferente de ella. Por ello, la comparacin del IR de la fase mvil pura
con el de los efluentes que salen de la columna cromatogrfica, indicar la presencia
de cualquier soluto eluido. El principal inconveniente de este tipo de detectores es
que son muy sensibles a los cambios de temperatura, la cual debe ser controlada
con fluctuaciones de 0.0001 C. Por otra parte, no resultan adecuados para
trabajar con la modalidad de elucin por gradiente.
Equipos
El sistema de elucin ms asequible inicialmente empleado fue la elucin por
gravedad. Actualmente se utilizan equipos de GPC dotados de bombas de alta
presin para hacer pasar el eluyente (y la muestra) a travs de la columna. En los
cromatogramas de exclusin, las molculas de tamaos ms grandes dan lugar a
los picos iniciales y los ms pequeos se eluyen al final. Existe una gran diversidad
de quipos de diversas marcas, con diversas funciones, detectores, etc.; Aqu se
muestran solo algunos de estos equipos.
Ilustracin 6.-Sistema de
anlisis GPC/SEC Agilent 1260
Infinity.
MODELO REOLGICO SISKO
Aplicaciones
La aplicacin ms simple de la GPC es la separacin de dos grupos de
sustancias con pesos moleculares muy diferentes, es posible separar oligmeros,
monmeros y aditivos de una disolucin polimrica compleja si las diferencias de
peso molecular entre los componentes son significativas. Es posible le eliminacin
de especies de bajo peso molecular de disoluciones que contengan molculas
grandes, mediante el paso a travs de una columna de filtracin en gel. La tcnica,
conocida como desalinizacin, es til, por ejemplo, para la separacin de
hemoglobina y cloruro sdico. Asimismo, es posible el fraccionamiento de mezclas
ms o menos complejas de diferentes materiales, como pptidos, cidos nucleicos,
enzimas, polisacridos, etc. Por otra parte, la tcnica puede usarse con fines
analticos o a escala preparativa.
MODELO REOLGICO SISKO
El tamao de las molculas est relacionado con su peso molecular, por lo que el
tiempo de elucin (o el volumen de elucin) de un determinado pico proporciona
una idea aproximada de su peso molecular. La cuantificacin se realiza a partir de
curvas de calibrado. Mediante mezclas de patrones de pesos moleculares
conocidos, se evalan los pesos moleculares que corresponden a cada tiempo (o
volumen) de retencin. Para ello, se representa el tiempo (o volumen) de retencin
en funcin del logaritmo de los pesos moleculares correspondientes como se
muestra en la ilustracin 8.
Bibliografa
https://www.malvern.com/es/products/technology/gel-permeation-
chromatography