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INVESTIGACIN PREVIA
En esta prctica, el estudiante del curso de bioqumica de los alimentos, deber aplicar los
conocimientos tericos adquiridos en clase para explicar un fenmeno ocurrido en una situacin
real. Para esto, el estudiante deber seleccionar una matriz alimentaria y plantear una hiptesis
relacionada con el contenido de protena de este alimento y que pueda ser comprobada en el
laboratorio mediante la utilizacin del mtodo de Biuret.
Mtodo de kjeldahl
Mtodo de biuret
Mtodo de lowry
Mtodo del cido bicinconnico (BCA)
Mtodo de absorcin UV a 280nm
Mtodo de adhesin de colorante
Mtodo de bradford
Mtodo de la ninhidrina
Mtodo turbidimtrico
FUNDAMENTOS TERICOS
Las protenas son molculas de alto peso molecular, que contienen carbono, hidrgeno, oxgeno
y con frecuencia, azufre. Las unidades fundamentales de las protenas son los aminocidos,
compuestos orgnicos que contienen grupos amino y carboxilo y que por lo tanto, tienen
propiedades anfotricas; los aminocidos se unen por enlaces peptdicos para formar dipptidos,
oligopptidos y polipptidos. Se considera que las protenas estn formadas por polipptidos que
adquieren diferentes configuraciones espaciales. Las propiedades fisicoqumicas de las
protenas estn determinadas por la secuencia de aminocidos (estructura primaria), su
configuracin espacial, las fuerzas interinicas, puentes de hidrgeno (estructuras secundaria y
terciaria).
Las protenas se pueden clasificar de manera general en protenas globulares y fibrosas. Las
protenas globulares son aquellas que tienden a agregarse en formas esferoidales y no
establecen fuertes interacciones intermoleculares, como si lo hacen las protenas fibrosas. De tal
manera que las protenas globulares son solubilizadas generalmente en forma de suspensiones
coloidales.
OBJETIVOS
PALABRAS CLAVES
EQUPOS E INTRUMENTRAL
Reciba las recomendaciones acerca del manejo del espectrofotmetro y las micropipetas
Consulte la ficha de seguridad de cada reactivo
Utilice los implementos de seguridad de acuerdo con el perfil de riesgo de cada muestra
PROCEDIMIENTO
1. Prepare una dilucin de la muestra obtenida en el punto anterior tomando 100 l del
sobrenadante y mezclndolos con 900 l de solucin salina.
2. Prepare la curva de calibracin a partir de la solucin de albmina (40 mg/mL), tomando
en cada tubo de reaccin 0, 25, 125, 250, 500 y 1000 l y diluyndolos con solucin
salina hasta 1 mL, obteniendo as concentraciones de 0 (blanco), 1, 5, 10, 20 y 40
mg/mL.
3. Dispense 270 l de reactivo de Biuret en todos los pozos del plato que se vayan a
utilizar.
4. Tome 30 l, ya sea de la muestra diluida o de cada una de las concentraciones de
albmina y dispnselos en el pozo indicado.
5. Mantenga el plato en la oscuridad durante 10 minutos a temperatura ambiente mientras
se desarrolla el color del complejo Cu-Protena.
6. Lea a 540 nm
Siga este esquema para la correcta ubicacin de las muestras y el estndar en el plato.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A Blanco Blanco Blanco M3 M3 M3 M11 M11 M11 M19 M19 M19
APLICACIONES
Consulte acerca del contenido de protenas de los alimentos ms comunes de la dieta tpica de
varias regiones colombianas.
ELABOR
Julin Londoo Londoo, QF, PhD. Docente Programa de Ingeniera de Alimentos, Corporacin
Universitaria Lasallista.
BIBLIOGRAFIA
Copeland RA (2000) Methods for Protein Analysis: A Practical Guide to Laboratory Protocols, 2nd
edn. New York: Chapman and Hall.
Nielsen, S.S. 1994. Introduction to the Chemical Analysis of Foods. Ed. Jones and Bartlett
Publishers. U.S.A. pp 209-212.