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DESENVOLVIMENTO DE SABONETE NTIMO COM EXTRATO DE Rosmarinus


officinalis L. PARA COMBATE DA Candida albicans

Isadora Cristina Gontijo Oliveira1


Larissa Costa keles de Almeida, Ma2
Vanessa Pereira Tolentino Felcio, Ma3

Resumo: A candidase vulvovaginal uma doena inflamatria causada por leveduras pato-
gnicas sendo a Candida albicans responsvel por cerca de 90% das infeces humanas. A
espcie Rosmarinus officinalis L., popularmente chamada alecrim, possui inmeras proprie-
dades, dentre elas antifngica. O presente trabalho teve por objetivo obter o extrato das folhas
de alecrim, realizar determinaes fitoqumicas qualitativas, desenvolver um sabonete lquido
ntimo e avaliar a ao do referido extrato e do sabonete ntimo contendo extrato frente
Candida albicans. O extrato hidroalcolico das folhas de Rosmarinus officinalis L. foi prepa-
rado por macerao exaustiva e aps foi utilizado no preparo de um sabonete lquido (F1).
Realizou-se tambm o preparo de uma formulao sem o extrato como branco (F2) para com-
parao. As determinaes fitoqumicas qualitativas foram realizadas para verificao da pre-
sena de taninos e flavonides. A atividade antimicrobiana foi avaliada pelo mtodo de difu-
so de gar (tcnica do poo). As anlises fitoqumicas realizadas no extrato de alecrim mos-
traram a presena de flavonides e taninos. Verificou-se que as duas formulaes provocaram
inibio do crescimento microbiano sendo maior o dimetro do halo da formulao contendo
o extrato alcolico de Rosmarinus officinalis L., evidenciando assim sua eficcia.

Palavras-Chave: Rosmarinus officinalis L.. Candida albicans. Sabonete.

1 INTRODUO

A espcie R. officinalis L., popularmente chamada alecrim, originria da Regio


Mediterrnea e cultivada em quase todos os pases de clima temperado. A planta possui porte
subarbustivo lenhoso, ereto e sem muitas ramificaes, sendo encontrado com at 1,5m de
altura. As folhas medindo cerca de 1,5 a 4cm de comprimento por 1 a 3mm de espessura apre-
sentam-se lineares, coriceas e muito aromticas, com flores de cor azul clara, pequenas com
aromas forte e agradvel (LORENZI; MATOS, 2006).
As propriedades antioxidantes do alecrim podem ser atribudas a presena do
rosmanol, diterpenos e rosmariquinonas e propriedades antimicrobianas esto relacionadas
com a presena de borneol, pinenos,cineol e cnfora (PORTE; GODOY, 2001).

1
Aluna do 8 perodo do curso de Farmcia do Centro Universitrio de Patos de Minas, formanda de 2012.
2
Professora do UNIPAM, orientadora do trabalho.
3
Professora do UNIPAM, co-orientadora do trabalho.
2

Em estudos foi observada alta sensibilidade de bactrias Gram positivas aos leos
essenciais de alecrim (borneol 26,5%, -terpineno 15,6%, -pineno 12,7%), incluindo Sta-
phylococcus aureus, Micrococcus sp. e Sarcina sp., bem como a levedura Saccharomyces
cerevisiae, porm este se mostrou pouco efetivo contra as bactrias gram negativas Pseudo-
monas fluorences, Escherichia coli e Serratia marcescens (PORTE; GODOY, 2001).
A candidase vulvovaginal (CVV) uma doena inflamatria causada por levedu-
ras patognicas. O gnero Candida apresenta diversas espcies, porm a Candida albicans a
responsvel por cerca de 90% das infeces humanas (BASTOS et al., 2003). Quando as con-
dies do hospedeiro mudam por diversos fatores, tais como diabetes, gravidez, tratamentos
prolongados com antibiticos ou corticosterides, desnutrio, baixa das defesas do indiv-
duo, uso de prtese dentria ou cardaca, contato com enfermos de candidase, at ento sa-
prfita, ou seja, faz parte da microbiota normal, torna-se patognica, multiplica-se, invade os
tecidos do hospedeiro disseminando-se at chegar a tornar-se sistmica (GARCIA; SIQUEI-
RA, 1988).
A Candida albicans existe como comensal no homem. um fungo dimorfo,
gram-positivo, que apresenta proliferao tanto em levedo como filamentosa. Estima-se que
25% de todas as mulheres adultas no mundo sero acometidas de candidase vaginal em al-
gum momento de suas vidas, sendo muitas vezes recorrente. A colonizao vaginal por Can-
dida albicans comum em mulheres no menacme (perodo de vida da mulher entre a menarca
e a menopausa), e em metade das mulheres encontrado como habitante da microbiota nor-
mal da vagina (BASTOS et al., 2003).
O presente trabalho teve por objetivo obter e avaliar o extrato de alecrim frente
Candida albicans, desenvolver o sabonete lquido ntimo e realizar determinaes fitoqumi-
cas qualitativas.
A realizao desse estudo trar grandes benefcios sade da populao como co-
nhecimento e comprovao das atividades antifngicas do alecrim, reduo do uso de medi-
camentos antifngicos, desenvolvimento de um sabonete lquido ntimo para combate da can-
didase vulvovaginal com maior potencial de estabilidade.
Quando se leva em considerao a resistncia das leveduras pertencentes ao gne-
ro Candida em relao aos antifngicos atualmente usados, pode-se inferir que a pesquisa de
busca de novos compostos antifngicos de origem vegetal mostra-se de relevante importncia.
possvel observar o potencial antibitico que os produtos vegetais possuem, e por conse-
qncia, a real possibilidade de aplicao destes produtos na preveno e tratamento de doen-
as infecciosas de origem fngica. Porm, necessrio a realizao de estudos de cunho toxi-
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colgico e clnico como suporte de segurana ao uso destes produtos como frmacos (LIMA,
et al., 2006).
Segundo o mesmo autor citado acima, o interesse em incorporar o extrato vegetal
a uma formulao de sabonete lquido est na preocupao de resistncia microbiana, pois o
nmero de microrganismos resistentes vem aumentando muito e o nmero de infeces hospi-
talares torna-se preocupante.

2 REFERENCIAL TERICO

2.1 PLANTAS MEDICINAIS

O nico recurso teraputico de diversas comunidades e grupos tnicos o prprio


conhecimento que estas possuem sobre plantas medicinais. O uso destas no tratamento e na
cura de doenas to antigo quanto espcie humana. Nas regies mais pobres e nas grandes
cidades brasileiras, plantas medicinais so vendidas em mercados e feiras populares alm de
serem encontradas nos quintais residenciais.
de grande relevncia o conhecimento sobre o uso e a eficcia de plantas medici-
nais para divulgao, pois dessa forma seus usurios mantm validadas as informaes acu-
muladas durante sculos.
No incio da dcada de 1990, a Organizao Mundial de Sade (OMS) mostrou
que 65-80% da populao dos pases considerados em desenvolvimento faziam uso de plantas
medicinais, sendo esta a nica forma de cuidado sade (VEIGA JUNIOR et al., 2005).
A dificuldade de acesso aos centros hospitalares obteno de exames e medica-
mentos so alguns dos motivos que, associados com a fcil obteno e a grande tradio do
uso de plantas medicinais, facilitam a sua utilizao pelas populaes menos favorecidas.
Pesquisa feita nos EUA em 1997 mostrou que 42% da populao havia utilizado
plantas medicinais em tratamentos mdicos alternativos pelo menos uma vez no ano de 1996,
cerca de 33,8% maior em relao ao ano de 1990, quando a mesma pesquisa foi realizada
(VEIGA JUNIOR et al., 2005).
Na Alemanha a automedicao base de plantas muito frequente utilizada pela
populao para tratar resfriados (66%), gripe (38%), doenas do trato digestivo ou intestinal
(25%), dores de cabea (25%), insnia (25%), lcera estomacal (36%), nervosismo (21%),
bronquite (15%), doenas de pele (15%), fadiga e exausto (12%) (VEIGA JUNIOR et al.,
2005).
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No Brasil, as plantas medicinais pertencentes flora nativa so utilizadas com


pouca ou nenhuma comprovao de suas propriedades farmacolgicas, propagadas por usu-
rios ou comerciantes (VEIGA JUNIOR et al., 2005).

2.2 CONSIDERAES SOBRE O ALECRIM

O alecrim da espcie R. officinalis L. uma planta pertencente famlia Lamiace-


ae (Labiatae), originria do Sul da Europa e do Norte da frica. Possui nomes populares de
alecrim-da-horta, alecrim-de jardim, alecrim-decheiro, alecrim-rosmarinho, roris marino (la-
tim), rosemary (ingls), romero (espanhol), romarin(francs), ramerino (italiano) e rosmarin
(alemo) (MAY, 2010).
A planta possui porte subarbustivo muito ramificado, sempre verde, com hastes
lenhosas, com folhas pequenas, ssseis, finas, opostas e lanceoladas, de sabor picante. A parte
inferior das folhas de cor verde acinzentada, enquanto a superior quase prateada.
A planta exala aroma forte e muito agradvel, sendo utilizada com fins culinrios,
medicinais e aromticos, sendo o leo essencial utilizado em cosmticos e perfumaria (MAY,
2010).
As partes utilizadas so folhas e flores, sendo as folhas utilizadas no preparo de
xaropes, infuso, tintura, p e leo essencial e em fitoterapia (Fotografia 1).

Fotografia 1- Folhas de alecrim (Rosmarinus officinalis L.)

Fonte: BLOGSPOT, 2011.


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2.2.1 leo essencial

Os leos essenciais so misturas complexas, compostas em grande maioria de


compostos volteis mono e sesquiterpenos. De cheiro bastante agradveis e lquidos em tem-
peratura ambiente so eles os responsveis pela interao entre os vegetais e o meio no qual
habitam, atuando como atrativos de polinizadores, protetores da planta contra altas temperatu-
ras, dentre outras (SAITO; SCRAMIN, 2000).
A famlia Lamiaceae contm diferentes plantas aromticas, das quais possvel
extrair leo essencial muito cheiroso, apresentando na sua composio qumica, mistura de
hidrocarbonetos, lcoois e compostos carbonlicos (PORTE; GODOY, 2001).
O leo essencial de R. officinalis L. pode ser obtido por destilao de suas folhas e
galhos frescos e apresenta rendimento de 0,5 a 1,0%. Apresenta-se como um lquido pouco
colorido a amarelo plido, possuindo um odor agradvel e refrescante.
Os constituintes majoritrios descritos so -pineno, 1,8-cineol e cnfora e signi-
ficativas variaes na sua composio qumica esto relacionadas com a sua origem geogrfi-
ca. Alm disso, o tempo de colheita, condio dos galhos e folhas e equipamentos de destila-
o tambm apresentam papel importante na qualidade do leo obtido (ATTI-SANTOS, et
al., 2005).
O leo essencial do alecrim utilizado para preparaes de unguentos para reu-
matismo, eczema, lcera e feridas, alm de estimulante, inseticida e desodorante bucal. As
folhas so empregadas em chs de ervas com ao carminativa, gstrica, abortiva e anties-
pasmdica, misturadas junto com outras drogas para a preveno de alopcia, estimulao do
crescimento capilar e preveno de caspa e oleosidade.
A inalao ou ingesto do leo estimula o sistema nervoso central alm da ativi-
dade anticonvulsivante e hepatoprotetora que tambm foram relatadas ao vegetal (PORTE;
GODOY, 2001).

2.2.2 Composio qumica e ao farmacolgica

Como resultado de sua anlise fitoqumica identificaram no alecrim uma substn-


cia derivada do cido cafico (composto fenlico que pode agir como antioxidante e bloquear
substncias carcinognicas).
A droga extrada de unidades floridas e dessecadas contm entre 10 e 25 ml/kg de
um leo essencial, contendo como constituintes principais o alcanfor, 1-8 cineol (substncia
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em maior quantidade no alecrim), alfa- pineno, borneol e canfeno em variveis concentraes


dependendo da origem e do estado vegetativo. Os compostos fenlicos se encontram repre-
sentados por flavonides (esterides do luteol, diosmetol) e flavonas metoxiladas em C-6 e/ou
C-7 e por cidos fenlicos, sobretudo derivados caficos como o cido cafico, cido clorog-
nico e rosmarnico (BRUNETON, 2001).
O alecrim caracteriza-se, tambm, pela presena de diterpenos tricclicos como os
cidos carnoslico, carnosol (majoritrios), rosmanol, epirorosmanol, isorosmanol, rosmarini-
difenol, rosmariniquinona, rosmadiol, etc; assim como pelos triterpenos (cido urslico e ole-
anico) e amirinas. Alm destas substncias foram encontradas outras no menos importantes,
porm em propores menores; os taninos que podem desintoxicar substncias carcinognicas
e eliminar radicais livres; saponinas que so fitoqumicos que se ligam ao colesterol e as toxi-
nas do trato digestivo alm de poderem inibir a produo de clulas cancergenas e aumentar
o nvel imunolgico destas; lcool perlico um composto fitoqumico que desencadeia a morte
das clulas tumorais sem danificar as clulas sadias; flavonides compostos do tipo Ar-C3 por
condensaes sucessivas de unidades dicarbonadas, processo frequente nos vegetais. Alm
destas citadas acima ainda se encontram os alcalides que atuam como relaxantes musculares
direcionados especialmente aos msculos da pelve e abdome (BRUNETON, 2001).
Alves et al.,(2008) relatam que o leo essencial de alecrim composto principal-
mente por hidrocarbonetos monoterpnicos, steres, terpenides, flavonides, fenis, cnfora
e -cariofileno.
Em um estudo realizado foram obtidos leos essenciais de dezenove amostras de
R. officinalis L. por destilao por arraste a vapor e os leos essenciais foram avaliados quanto
composio qumica e caractersticas fsico-qumicas entre os anos de 1998 e 2000. Os ren-
dimentos de leo essencial variaram de 0,37% (mdia de 1999) a 0,49% (mdia de 1998).
Vinte componentes foram identificados nos leos essenciais, apresentando como componen-
tes majoritrios o -pineno (40,55 a 45,10%), 1,8-cineol (17,40 a 19,35%), canfeno (4,73 a
6,06%) e verbenona (2,32 a 3,86%). O estudo mostrou que no houve variaes encontradas
para os parmetros qumicos e fsico-qumicos dos leos essenciais no variaram significati-
vamente em funo do ano de produo. Os constituintes qumicos identificados esto descri-
tos na Tabela 1 (ATTI-SANTOS, et al., 2005).
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Tabela 1- Composio qumica percentual de leos essenciais de R. officinalis L..

Fonte: ATTI-SANTOS, et al., 2005.

Na indstria alimentcia o alecrim utilizado pelas propriedades antioxidantes de


seus diterpenos sendo comumente utilizado para estimular o sistema digestivo, para a falta de
apetite (inapetncia); contra azia; em problemas respiratrios e debilidade cardaca (cardiot-
nico). Alm disso, atua sobre o sistema nervoso (cansao mental) e cansao fsico graas as
suas atividades tnicas e estimulantes. anti-sptico, colagogo, diurtico, anti-espasmdico
(uso interno: vescula e duodeno), cicatrizante (uso externo), colertico, protetor heptico,
antitumoral, antidepressivo natural, carminativo e vasodilatador (LORENZI; MATOS, 2006).
Na Frana, o alecrim por via oral usado no tratamento sintomtico de transtor-
nos digestivos como: flatulncias epigstricas, digesto lenta, como facilitador das funes de
eliminao urinria e digestiva; colertico e colagogo. Em uso externo utilizado em casos de
obstruo nasal, catarros e em enxagues bucais (LORENZI; MATOS, 2006).
Em altas dosagens o alecrim pode se mostrar txico, causando abortos, sonoln-
cia, espasmo, gastrenterite, irritao nervosa e em doses ainda mais exageradas pode levar a
morte (LORENZI; MATOS, 2006).
O alecrim apresenta propriedade analgsica, espasmoltica, antiinflamatria, anti-
fngica e possvel propriedade antineoplsica, bem como atividade antimicrobiana contra
bactrias, como Staphylococcus aureus, Staphylococcus albus, Vibrio cholerae, Escherichia
coli, Lactobacillus brevis e Pseudomonas fluorescens. (ALVES, et al., 2008).
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Silva et al.(2007), avaliou a atividade antimicrobiana do extrato de R. officinalis


L. utilizando o mtodo de difuso em meio slido para verificar a concentrao inibitria m-
nima (CIM) sobre linhagens bacterianas de Streptococcus mitis ATCC 9811, Streptococcus
sanguinis ATCC 10556, Streptococcus mutans ATCC 25175, Streptococcus sobrinus ATCC
27609 e Lactobacillus casei ATCC 7469. Todas as linhagens foram sensveis ao extrato hi-
droalcolico de R. officinalis L., exceto Streptococcus mitis ATCC 9811.
O mesmo trabalho ainda relata a ao antimicrobiana nos fungos e bactrias gram-
positivas e gram-negativas, como Staphylococcus aureus, Staphylococcus albus, Vibrio
colere, Escherichia coli, Corinebacterium, Lactobacillus brevis, Pseudomonas fluorenses,
Rhodotorula glutinis, Kluyveromyces bulgaricus, Micrococcus luteus, Salmonela spp. e
Listeria monocitogens (SILVA, et al., 2007).
Em outro estudo em que se demonstrou o efeito fungisttico frente a C. albicans
foram observadas alteraes nas propriedades de membrana, o que pode ter desencadeado um
processo de inibio, sendo possivelmente uma explicao para a produo de halo de
inibio (PACKER; LUZ, 2007).
Em diversas localidades do Egito foi encontrada nos leos essenciais de alecrim,
atividade inibitria contra Candida albicans, Cryptococcus neoformans, Mycobacterium
intracellularae, porm nenhuma ao contra Staphylococcus aureus, Escherichia coli,
Pseudomona aeruginosa, Saccharomyces cerevisiae, Aspergillus flavus, Aspergillus
fumigatus e Trichophyton mentagrophytes. A atividade alta contra fungos sugere sua
utilizao nos tratamentos de meningite e em pneumonia causadas por C. neoformans, assim
como em tratamento de infeces cutneas e diarria provocadas por Candida albicans e no
tratamento de infeces sistmicas causadas por Mycobactericum intracellularae em
pacientes com AIDS.
Os principais componentes que o leo de alecrim egpcio apresentou foram:
cnfora (14,9%), pineno (9,3%) e 1,8-cineol (9,0%) (PORTE; GODOY, 2001).
Apesar do reconhecimento das propriedades antimicrobianas, o mecanismo de
ao dos extratos e/ou leos essenciais ainda no est completamente elucidado, porm
estudos tm sido conduzidos neste sentido (GARCIA, 2010).

2.3 FUNGOS

Os fungos so microrganismos encontrados no solo, na gua, nos vegetais, no ar,


nos animais e em detritos em geral. So eucariticos, heterotrficos e com parede celular.
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Com um s ncleo so chamados leveduras e, se apresentam vrios ncleos so fungos fila-


mentosos e formam miclio.
Os fungos podem apresentar morfologia diferente devido s condies nutricio-
nais e a temperatura. Muitos deles apresentam potencial patognico para os humanos (BER-
GOLD; GEORGIADIS, 2004).
Os fungos so de uma forma geral, organismos do meio externo excetuando-se al-
gumas espcies de Candida. Desta forma, os fungos que entram em contato com o ser huma-
no e animais podem causar alguns danos, os quais podem variar de micoses superficiais be-
nignas (e.g. Piedra nigra) at micoses mais severas (e.g. murcomicoses) (LIMA, et al.,2006).
Um dos agentes responsveis por infeces fngicas so os fungos patgenos no
oportunistas como a Candida albicans, o agente etiolgico mais frequente da candidase. Ou-
tras espcies inseridas no gnero Candida (C. guilliermondii, C. krusei, C. parapsilosis, C.
stellatoidea, C. tropicallis) tambm esto envolvidas na etiologia (LIMA, et al., 2006).

2.3.1 Antifngicos

A variedade de frmacos encontrados para o tratamento de infeces fngicas sis-


tmicas bastante pequeno. Durante os ltimos anos como primeira escolha tem sido utiliza-
do a anfotericina B e os azis, principalmente cetoconazol, fluconazol e itraconazol. Estas
classes de medicamentos tm como alvo a membrana celular dos fungos. Os polienos, dentre
os quais podemos citar a anfotericina B ligam-se a uma poro esterol, basicamente ergoste-
rol, presente na membrana de fungos sensveis, formando poros ou canais e com isso h um
aumento na permeabilidade da membrana que permite o extravasamento de diversas pequenas
molculas, levando morte celular.
A anfotericina B um antibitico fungicida de largo espectro e potente, mas seu
uso implica diversos efeitos adversos significativos, como nefrotoxicidade e febre com cala-
frios, como reao aguda infuso intravenosa, j que a farmacocintica deste frmaco no
permite a administrao oral (GOODMAN; GILMAN, 1996).
Novas formulaes da anfotericina B com menos efeitos colaterais, como resulta-
do da redistribuio do frmaco nos tecidos e da seletividade de liberao foram criadas, po-
rm com preo maior do que as formulaes antigas (BERGOLD; GEORGIADIS, 2004).
Os azis so compostos totalmente sintticos, causam menos reaes adversas que
a anfotericina B, porm so menos potentes que a mesma. Podem ter ao fungisttica ou
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fungicida. Seu uso excessivo levou ao aparecimento de resistncia em espcies suscetveis e


ainda apresentam a desvantagem da resistncia cruzada (GOODMAN; GILMAN, 1996).
Outro agente antifngico sistmico utilizado o pr-frmaco flucitosina. Todos os
fungos sensveis so capazes de converter a flucitosina em 5-fluorouracila, um potente anti-
metablito. Como resultado final, a sntese de cido desoxirribonuclico dos mesmos fica
prejudicada. As clulas dos mamferos no converte a flucitosina em fluorouracila, o que
crucial para ao seletiva do composto, mas microrganismos da flora intestinal o fazem, cau-
sando certa toxicidade aos humanos. A flucitosina tem espectro de ao restrito e possui ativi-
dade clinicamente til somente contra Cryptococcus neoformans, Candida spp. e os agentes
da cromomicose . O fracasso teraputico se deve a resistncia medicamentosa que a flucitosi-
na promove (GOODMAN; GILMAN, 1996).
Para tratamento das micoses superficiais h uma grande variedade de frmacos,
alm dos polienos anfotericina B e nistatina, da flucitosina e da variedade de azis como: bi-
fonazol, clotrimazol, econazol, isoconazol, oxiconazol, sertaconazol, miconazol, terconazol e
tioconazol. Existe ainda o derivado da morfolina, amorolfina; os tiocarbamatos tolnaftato e
tolciclato; as alilaminas naftifina, terbinafina e butenafina e o composto ciclopirox, alm do
antibitico griseofulvina e dos agentes anti-infecciosos inespecficos de uso tpico como o
cido benzico, que usado em associao com o saliclico, o cido propinico e o cido un-
decilnico na forma de sal de zinco (GOODMAN; GILMAN, 1996; KOROLKOVAS, 2003).
Portanto para as infeces sistmicas os medicamentos antifngicos no satisfa-
zem a necessidade mdica, devido a problemas relacionados a espectro, potncia, segurana e
propriedades farmacocinticas dos agentes disponveis. Com o aumento na incidncia das
infeces fngicas sistmicas e o consequente aumento na mortalidade populacional relacio-
nada faz-se mais que necessrio o surgimento de novos frmacos, para um tratamento seguro
e eficaz das micoses (GOODMAN; GILMAN, 1996; KOROLKOVAS, 2003).

2.4 Candida albicans

A Candida uma levedura vegetal desprovida de clorofila. Classificada como


fungo gram positivo, dimorfo, saprfito, com virulncia limitada, desenvolve-se melhor em
pH cido entre 3,9 e 5,0 sendo encontrada na vagina em 20% de mulheres sadias e assintom-
ticas (VAL; ALMEIDA FILHO, 2001).
Existem duas formas de fungos, uma vegetativa ou de crescimento as hifas, e uma
de reproduo o esporo. Estas quando agrupadas, formam os miclios. Estes ltimos so os
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responsveis pela invaso da mucosa vaginal ocasionando o prurido (VAL; ALMEIDA FI-
LHO, 2001).
O termo Candida refere-se ao gnero sendo a espcie mais comum a albicans,
responsvel por 85% dos casos de candidase. As espcies glabrata e tropicalis correspondem
a 10 a 15%. Outras espcies menos comuns so a krusei e a lusitnia (VAL; ALMEIDA FI-
LHO, 2001).
Em mulheres da raa negra, h um maior isolamento de C. albicans. Provavel-
mente um dos fatores a condio socioeconmica, pois condies precrias de higiene e
carncia nutricional favorecem o desenvolvimento da levedura (GARCIA; SIQUEIRA, 1988).
Clinicamente, a candidase pode ser cutnea, mucosa, cutaneomucosa ou visceral.
O microrganismo cresce melhor em superfcies quentes e midas, causando frequentemente
vaginite, dermatite das fraldas e candidase oral. Essas infeces so as manifestaes usuais
da doena e, embora normalmente no apresentem ameaa vida, representam um problema
de considervel importncia social e econmica (LVARES, 2007).
Segundo o mesmo autor, formas cutaneomucosas severas so menos comuns, en-
caixando-se em duas grandes categorias como a candidase cutaneomucosa crnica e candid-
ase vaginal crnica. A primeira est geralmente associada ao enfraquecimento da resposta
imune mediada por clulas, como o observado em portadores do vrus da imunodeficincia
humana o HIV, e indivduos com defeitos imunolgicos hereditrios ou iatrognicos. A se-
gunda categoria desencadeada por fatores de risco, como gestao, uso de contraceptivos
orais, terapia com antibiticos, diabetes mellitus (DM), entre outros. A candidase dissemina-
da intensa est associada neutropenia secundria a doena granulomatosa crnica, leucemia,
terapia antineoplsica ou imunossupresso aps transplante.

2.5 MICROBIOTA E pH VAGINAL

O ph da vagina varia entre 3,8 e 4,2. A microbiota vaginal normal rica em lactobaci-
los produtores de perxido conhecidos como bacilos de Dderlein, os quais formam cido
ltico a partir do glicognio, cuja produo e secreo so estimuladas pelos estrognios. Esse
mecanismo propicia uma acidez adequada do ambiente vaginal em torno de 4,5, o que dificul-
ta a proliferao da maioria dos patgenos. A Candida exceo, pois prolifera em ambiente
cido (VAL; ALMEIDA FILHO, 2001; GARCIA, et al.,2009).
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Alm do equilbrio microbiolgico da microbiota vaginal, outros fatores contribu-


em para a defesa vaginal como a integridade da mucosa, presena das imunoglobulinas A e G
e dos polimorfonucleados e moncitos.
Entretanto, existem situaes que predispem ao aparecimento da candidase, co-
mo a gravidez, o uso de anticoncepcionais orais com altas doses de estrognio e o diabetes
que propiciam aumento na concentrao de glicognio vaginal, com conseqente acidificao
do meio e proliferao da levedura. Da mesma forma, o uso de dispositivos intrauterinos, do-
enas da tireide, obesidade, corticoterapia e drogas imunossupressoras, parecem aumentar o
risco de infeco causada por Candida (VAL; ALMEIDA FILHO, 2001).
O uso de antibiticos tambm pode atuar como fator de risco para o desenvolvi-
mento de candidase em algumas mulheres. Pelo que parece, seu uso determina reduo da
populao bacteriana vaginal normal, particularmente dos bacilos de Dderlein, diminuindo a
competio por nutrientes e facilitando a proliferao da Candida. Em contrapartida o uso de
duchas vaginais no tem relao com o aparecimento de candidase, exceto em mulheres que
apresentam predisposio forma complicada tambm denominada recorrente ou de repeti-
o. J roupas justa e o uso de absorventes no contribuem como fator de risco para a candi-
dase (VAL; ALMEIDA FILHO, 2001).

2.6 VULVOVAGINITE

A vulvovaginite determinada principalmente por C. albicans uma infeco fre-


quente, predominando durante o perodo reprodutor da mulher, com menor prevalncia na
infncia, puberdade e climatrio (GARCIA; SIQUEIRA, 1988).
Nos consultrios ginecolgicos a candidase vulvovaginal uma das principais
doenas. Nos Estados Unidos, a incidncia de candidose vaginal dobrou na dcada de 90 em
relao de 80, com cerca de 13 milhes de casos ao ano. Na Inglaterra a incidncia varia
entre 28 e 37% das mulheres (SILVA et al.,2007).
As vaginites infecciosas so causadas, por bactrias, fungos leveduriformes e Tri-
chomonas vaginalis. Quadros de vulvovaginites e colonizao das mucosas so causadas por
leveduras, especialmente Candida spp. Estes microrganismos so detectados em 10% das
mulheres em pr-menopausa, 5 a 10% na menopausa e 30% das gestantes, sem necessaria-
mente terem ligao com quadros de vaginites fngicas (BOATTO et al.,2007).
Mais de 400 cepas de cndida j foram identificadas. Embora a espcie Candida
albicans seja a mais importante causadora de candidase, a incidncia de no-albicans, como
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C. tropicalis e C. glabrata, entre outras, tem crescido de maneira importante nos ltimos
anos. Na dcada de 70 as espcies no-albicans no eram encontradas em mais do que 5-10%
dos casos de infeco genital, porm na dcada de 80 os trabalhos mostravam um crescimento
desta taxa para 15 a 25%.
O aumento da incidncia dessas espcies tem importncia e relevncia, na medida
em que apresentam sintomatologia mais branda do que a C. albicans e um espectro diferente
de resistncia aos tratamentos antifngicos (ALEIXO NETO et al., 1999).
A candidase vulvovaginal foi descrita pela primeira vez na dcada de 49, por
Wilkinson, que estabeleceu uma relao entre a existncia de fungos na vagina e o apareci-
mento de vaginite. A partir desse momento, os conhecimentos foram evoluindo progressiva-
mente.
A candidase vulvovaginal ocasionada pelo crescimento anormal de fungos do
tipo leveduras na mucosa do trato genital feminino. Trata-se de uma infeco de vulva e vagi-
na, causada por leveduras comensais que habitam a vagina bem como as mucosas digestiva e
respiratria. Essas leveduras podem-se tornar patognicas quando o stio de colonizao do
hospedeiro passa a ser favorvel ao seu desenvolvimento (LVARES et al.,2007).
As manifestaes clnicas so: prurido, ardor, dispareunia e eliminao de um cor-
rimento vaginal em grumos, semelhante nata de leite. Com frequncia, a vulva e a vagina
encontram-se edemaciadas e hiperemiadas, algumas vezes acompanhadas de ardor ao urinar e
sensao de queimadura, as leses podem-se estender por perneo, regio perianal e inguinal.
O corrimento, geralmente branco, espesso e inodoro, tem aspecto farinceo nas vestes a seco.
Em alguns casos, aparecem nas paredes vaginais e colo uterino pequenos pontos branco-
amarelados. Os sintomas se intensificam no perodo pr-menstrual, quando a acidez vaginal
aumenta (LVARES et al.,2007).
A importncia do conhecimento acerca da vulvovaginite causada por Candida si-
tua-se principalmente em relao sua frequncia e sua recorrncia, pois esta pode ainda
apresentar sob a forma de candidase vaginal recorrente ou recidivante, definida como infec-
o por Candida caracterizada por quatro ou mais episdios em perodo de um ano. Ocorre
quando o fungo no completamente eliminado da vagina permanecendo baixas concentra-
es de microrganismos. Esta forma relaciona-se com fatores inerentes ao hospedeiro imuno-
lgicos ou no, e no com a virulncia do microrganismo.
J o termo reinfeco considerado quando a Candida completamente erradica-
da da vagina e novamente introduzida atravs da via sexual ou do trato gastrointestinal.
(VAL; ALMEIDA FILHO, 2001).
14

2.7 TRATAMENTO

O tratamento de candidase vaginal tem mudado e evoludo nos ltimos anos. No


h evidncias de que a Candida seja resistente aos antibiticos polinicos nem aos derivados
imidazlicos. Para a obteno de melhores resultados deve se iniciar sempre com a teraputi-
ca local, no interromper o tratamento durante o perodo menstrual, controlar os fatores pre-
disponentes e repudiar associaes medicamentosas, sobretudo com o metronidazol. Para o
sucesso teraputico o tratamento do parceiro sexual no obrigatrio, mas deve ser levado em
conta nos casos de mulheres com candida vulvovaginal recorrente (BASTOS et al., 2003).
Alm disso, necessria a realizao de uma higienizao adequada da regio e
uma boa opo a utilizao de sabonetes lquidos ntimos constitudos de misturas de tenso-
ativos, convenientemente adicionados de produtos umectantes, antisspticos, aromatizantes e
em muitos casos corados e estabilizados com antioxidantes, quelantes e at tampes.
Os sabonetes lquidos ntimos possuem vantagens de dificilmente serem contami-
nados por microrganismos, uma vez que mesmo sendo usado por vrias pessoas no sofrem
contaminao, como o sabonete comum. Alm disso, permite uma modificao em seu pH
que se deve por volta de 3,8 4,2 com o objetivo de manter as condies de pH vaginal, pre-
servando a flora normal feminina (GARCIA, et al., 2009).

2.8 SABONETE LQUIDO

Os sabonetes lquidos so de fcil aplicao pelo usurio e tem se observado, no


Brasil que estes vm tomando lugar dos sabonetes em barra comum nas prateleiras de perfu-
marias e, principalmente, nas linhas de cosmticos tradicionais do mercado brasileiro
(BLANCO, 2009).
Alm disso, apresentam como vantagens a facilidade na correo do pH com o
objetivo de manter as condies de pH vaginal (3,8 a 4,2), preservando a flora normal femini-
na, alm da minimizao de exposio ao ar, ao contrrio do sabonete em barra, o que gera
uma maior dificuldade de contaminao do produto em relao a este (GARCIA, et al., 2009).
Os sabonetes lquidos apresentam como principal caracterstica o fato de serem
composies semelhantes aos xampus, com elevadas concentraes de detergentes. Estes pro-
dutos podem ser transparentes ou perolados. A evoluo dos sabonetes lquidos permitiu que
tais produtos adquirissem valores mais amplos, como a veiculao de aditivos com funes
diversas e especficas como antispticos, anti-inflamatrios, entre outros (SOUZA, 2007).
15

Para o desenvolvimento do sabonete intimo liquido, utiliza-se o lauril ter sulfato


de sdio como um tensoativo aninico alm de ser um dos detergentes sintticos mais utiliza-
dos no preparo de sabonetes lquidos, a dietanolamida de cido graxo de coco como um so-
breengordurante e estabilizante de espuma, o cocoamido propilbetaina como um tensoativo
anftero, que melhora a qualidade espumogena e auxilia na viscosidade da composio
(GARCIA, et al., 2009), a glicerina como um umectante, o EDTA como um agente quelante,
o chemynol como um agente conservante, o cloreto de sdio como um doador de viscosidade
para a formulao e a soluo de cido ctrico como um regulador de pH. J a gua purificada
empregada como veculo (FERREIRA, 2008). Procedeu-se uma busca nas literaturas e veri-
ficou-se que no havia incompatibilidades entre os componentes.

3 MATERIAL E MTODOS

O presente trabalho foi realizado nos laboratrios de Tecnologia Farmacutica,


Controle de Qualidade, Microbiologia e Qumica do Centro Universitrio de Patos de Minas.

3.1 MATERIAL VEGETAL

As folhas da espcie vegetal R. officinalis L.(alecrim) foram coletadas s 16:00


horas do dia 8 de outubro de 2012, na cidade de Patos de Minas.

3.2 PREPARO DO MATERIAL VEGETAL

O material fresco foi lavado em gua corrente, sanitizado com gua sanitria a
10% por 15 minutos e submetido secagem por aproximadamente 24 horas temperatura
ambiente (sem presena de luz) sobre bancadas previamente limpas, sanitizadas e revestidas
com papel absorvente. Aps este processo, o material vegetal foi pesado (21,398g) e acondi-
cionado em recipientes com paredes escuras e vedado.

3.3 PREPARO DO EXTRATO

A preparao do extrato de alecrim foi realizada no Laboratrio de Tecnologia


Farmacutica do Centro Universitrio de Patos de Minas. Para a obteno do extrato foram
16

utilizados 20% da planta seca (21,398g) e 80% de soluo hidroalcolica a 70% em lcool v/v
(85,59mL). Utilizou-se processo de macerao exaustiva durante sete dias agitando-se o mate-
rial diariamente. Aps, foi realizada filtrao em papel filtro e o solvente foi eliminado utili-
zando-se um evaporador rotatrio (a 35C) do Laboratrio de Qumica Orgnica. O extrato
foi levado capela para trmino de secagem, e acondicionado em geladeira a -4C(ALVES et
al, 2008; SILVA, 2008).

3.4 AVALIAO MICROBIOLGICA

3.4.1. Microrganismo utilizado

A cepa selecionada Candida albicans (ATCC 0031) foi obtida do Laboratrio


Universitrio de Anlises Clnicas (LUAC) do Centro Universitrio de Patos de Minas.

3.4.2. Mtodo de difuso em gar-tcnica do poo

O teste para determinao da atividade antimicrobiana foi o mtodo de difuso em


poo, em triplicata.
Procedeuse triagem da atividade antimicrobiana dos extratos de acordo com a
recomendao da National Commitee for Clinical Laboratory Standard (NCCLS, 2000). Em
cmara de fluxo laminar VECO, modelo VLF512, previamente esterilizada por radiao ul-
travioleta a suspenso fungicida foi inoculada por espalhamento sobre o gar MellerHinton.
Em seguida, foram confeccionados poos/orifcios de 5,0 mm de dimetro em pontos equidis-
tantes e foram dispensados 50,0L dos sabonetes contendo ou no o extrato de Rosmarinus
officinalis L. e do extrato puro de alecrim nos poos devidamente identificados.
As placas foram incubadas a 37C por 72 horas. Decorrido o perodo de incuba-
o, mensuraramse as zonas de inibio com o auxlio de rgua milimetrada, no que diz res-
peito ao halo (dimetro da rea com ausncia de desenvolvimento microbiano).

3.4.2.1. Preparo dos meios de cultura

3.4.2.1.1. Caldo Tioglicolato


O caldo Tioglicolato foi escolhido para o experimento por ser altamente nutritivo
e verstil. Este meio composto por: 17,0g/L de casena enzimtica hidrolisada, 3,0g/L de
17

digesto papica de farinha de soja, 6,0g/L de dextrose, 2,5g/L de cloreto de sdio, 0,5g/L de
glicolato sdico, 0,25g/L de Lcistina, 0,1g/L de sulfito de sdio e 0,7g/L de gar.
O meio de cultura foi preparado a partir de uma base desidratada disponvel co-
mercialmente (Diagnostic Thioglycollate Medium Himedia, Lote XK046, Cd. M191).
Foram dissolvidos 30 gramas da base desidratada em 1000 mL de gua destilada.
Em seguida, a mistura foi aquecida at completa dissoluo do meio. O meio dissolvido foi
acondicionado em um recipiente de vidro autoclavvel e esterilizado em autoclave a uma
presso de 1 atm e 121C de temperatura por 15 minutos. Aps a esterilizao o meio foi res-
friado a temperatura ambiente e armazenado em geladeira (de 2 a 8C) antes do uso. O pH do
meio aps o preparo (a 25C) era igual a 7,0.

3.4.2.1.2 gar MellerHinton

O gar MellerHinton foi escolhido para o experimento devido sua reprodutibi-


lidade aceitvel entre os diferentes lotes, e por permitir crescimento satisfatrio dos patge-
nos. composto por 2,0g de extrato de carne em p, 17,5g de digesto cida de casena, 1,5g
de amido e 17,0g de gar (frmula aproximada por litro). O meio de cultura foi preparado a
partir de uma base desidratada disponvel comercialmente (MuellerHinton Agar Difco,
Lote 9188947, Ref. 225250). Foram dissolvidos 38g da base desidratada em 1 litro de gua
destilada. Em seguida, homogeneizou-se a mistura e aqueceua com agitao constante duran-
te 1 minuto para a completa dissoluo do p. Procedeuse ento sua esterilizao em auto-
clave a uma presso de 1atm e 121C por 15 minutos. Imediatamente aps passar pela auto-
clave, foi resfriado em banhomaria entre 45 e 50C. Em seguida, o meio recmpreparado foi
despejado em placas de petri de fundo chato e, novamente resfriado, agora, temperatura am-
biente, para garantir uma profundidade uniforme de aproximadamente 4 mm (corresponde a
2530 mL em placas com dimetro de 100 mm). Logo aps foi armazenado na geladeira (de 2
a 8C).

3.4.2.2. Preparo do inculo

Em cmara de fluxo laminar VECO, modelo VLF512, previamente esterilizada


por radiao ultravioleta, selecionouse do frasco que continha a cepa ATCC 0031 um disco,
18

que foi removido assepticamente com uma pina flambada e resfriada, e em seguida transferi-
da para um tubo de ensaio de vidro contendo 3mL de caldo tioglicolato.
Logo, a cultura foi incubada, a 35 C, at alcanar a turbidez de uma soluo pa-
dro de McFarland 0,5. Isso resultou numa suspenso contendo aproximadamente de 1 a 2
vezes 108 UFC/mL. Para realizao dessa operao a olho nu, comparouse o tubo de inculo
com a soluo padro McFarland de 0,5.

3.5 DETERMINAES FITOQUMICAS QUALITATIVAS

3.5.1 Caracterizao de flavonides.

Para a identificao dos flavonides foram colocados 0,5g do extrato em um bquer,


adicionados cerca de 10 mL de etanol 70% e aquecidos at incio da ebulio. Em seguida,
filtrado atravs de papel de filtro. Para as reaes de identificao foram executados
diferentes testes:

3.5.1.1 Reao com hidrxidos alcalinos.

Em um tubo de ensaio contendo cerca de 10mL do extrato diludo (1:9) de modo a


apresentar uma leve colorao amarela, acrescentou-se, pelas paredes, algumas gotas de
soluo aquosa de hidrxido de sdio 1 N.

3.5.1.2 Reao com cloreto de alumnio.

Foram umedecidas reas diferentes de uma tira de papel de filtro com extrato
hidroalcolico e foi colocado sobre uma das regies umedecidas uma gota de soluo
alcolica de cloreto de alumnio (AlCl3) 5% e aps, esperou-se alguns minutos para secar.
Foi observado a intensificao de fluorescncia das duas reas sob luz ultravioleta de ondas
longas (366 nm).
19

3.5.1.3 Reao de Shinoda ou reao da cianidina.

Foram colocados 3mL do extrato alcolico em um tubo de ensaio e em seguida


adicionado 3 fragmentos de magnsio metlico, na capela, foram colocados cuidadosamente
1mL de cido clordrico concentrado.

3.5.1.4 Reao com cloreto frrico.

Em um tubo de ensaio, misturou-se 1mL do extrato vegetal e 9mL de gua destilada,


transferindo em seguida 5 mL da soluo obtida para um outro tubo de ensaio. Em um dos
tubos, foi adicionada lentamente, pela parede, uma gota de cloreto frrico a 2%, deixando o
segundo tubo ao lado, sem a adio de nenhum reagente.

3.5.2 Caracterizao de taninos

Para a extrao dos taninos foram colocados 0,5g do extrato em um bquer de 100mL
e adicionados cerca de 20 mL de gua e levado para aquecer em chapa aquecedora por 15
minutos e filtrado em seguida em papel filtro. Para as reaes de identificao foram
executados diferentes testes.

3.5.2.1 Reao com gelatina hidrolisado de protena:

Em um tubo de ensaio foram colocados 3mL do extrato tnico, e adicionados 2 gotas


de soluo de cido clordrico a 10% e em seguida gotejada (gota a gota para evitar a
redissoluo de precipitado formado) soluo aquosa de gelatina a 2,5%.

3.5.2.2 Reao com sais de ferro.

Em um tubo de ensaio foram colocados 2mL do extrato tnico e adicionados 10mL de


gua destilada. Pela parede do tubo, foram pingadas 4 gotas de cloreto frrico a 1% em meta-
nol.
20

3.5.2.3 Reao com vanilina.

Em um tubo de ensaio contendo 2mL do extrato tnico, foram adicionados 0,5mL de


vanilina a 1% (p/v) em metanol e em seguida, na capela, adicionados 1mL de cido clordrico
concentrado.

3.5.2.4 Reao com acetato de chumbo.

Em um tubo de ensaio previamente colocados 2,5mL do extrato tnico, foram adicio-


nados 5mL de soluo de cido actico a 10% e pela parede do tubo 2,5mL de soluo de
acetato de chumbo a 10%.

3.6 PREPARO DO SABONETE NTIMO COM EXTRATO DE ALECRIM

Foram preparadas duas formulaes F1 e F2 na forma de sabonete lquido utilizando


como agente antifngico o extrato gliclico de R. officinalis L. (soluo a 10% gua purifica-
da) na concentrao de 1,0%. F1 foi produzida com extrato e F2 sem o extrato (branco) ( ver
Tabela 2).
As formulaes foram preparadas no Laboratrio de Tecnologia Farmacutica toman-
do-se os cuidados com as boas prticas de fabricao segundo procedimento descrito logo
aps a tabela abaixo:
21

Tabela 2- Sabonete lquido com a presena (F1) e sem o extrato (F2) de R. officinalis L..
Constituintes F1 (%) F2 (%) Funes
Lauril ter sulfato de sdio 12,5 12,5 Tensoativo
Dietanolamida de cido graxo de 1,5 1,5 Sobreengordurante e estabilizante
coco de espuma
Cocoamidopropilbetana 1,5 1,5 Tensoativo secundrio anftero
Glicerina 1,5 1,5 Umectante
EDTA 0,05 0,05 Quelante
Chemynol 0,25 0,25 Conservante
Cloreto de sdio 2,1 2,1 Espessante
Essncia 0,025 0,025 Essncia
Corante - - Corante
Extrato de alecrim 5% - Ativo: ao antifngica
Soluo de cido ctrico qs pH 4,0 pH 4,0 Acidulante
gua purificada qsp 100,0 100,0 Veculo
Fonte: Dados obtidos durante o experimento.

1 Todos os constituintes foram pesados (Balana analtica Shimadzu modelo AY 220) em


suas devidas vidrarias.
2 Adicionou-se em um clice de vidro de 600,0mL a gua purificada por osmose reversa, o
EDTA e misturou-se at a completa dissoluo do EDTA. Adicionou-se a glicerina, o
chemynol e homogeneizou-se.
3 Foram adicionados o lauril ter sulfato de sdio, o cocoamidopropilbetana e a
dietanolamida de cido graxo de coco separadamente e em seguida foram realizadas as
homogeneizaes de maneira lenta afim de evitar a formao de espuma aps a adio de
cada componente.
4 Foi adicionado o extrato de alecrim e realizada a homogeneizao.
5 Foi adicionada a essncia e realizada a homogeneizao.
6 Foi adicionado o NaCl previamente solubilizado em parte da gua e realizada a
homogeneizao. O pH foi aferido e corrigido com a utilizao de soluo de cido ctrico a
10% para 4,0 utilizando pHmetro (Gehaka modelo PG 1800).
7 O produto foi embalado em trs frascos plsticos de 30,0 mL (trs amostras para F1 e trs
amostras para F2), vedado com tampa flip-top e em seguida foram rotulados.
22

4 RESULTADOS E DISCUSSO

O impacto das doenas infecciosas na evoluo humana de difcil avaliao, tan-


to pela sua complexidade em si, como pela escassez de dados e pontos obscuros. O interesse
em se conseguir novas formulaes com atividade antimicrobiana levou realizao de testes
em busca desta atividade com o emprego do extrato gliclico de R. officinallis L..
Os sabonetes lquidos ntimos possuem vantagens de no apresentam odores de
fundo, permitindo, ao contrrio do sabonete comum, o uso de pouco perfume, o que fator
positivo para as pessoas sensveis a componentes das essncias; so perfeitos veculos para
substncias cosmticas ou medicamentosas. Dificilmente os sabonetes lquidos ntimos so
contaminados por microrganismos; mesmo sendo usados por vrias pessoas no sofrem con-
taminao, como o sabonete comum. Alm disso, permite uma modificao em seu pH que se
deve por volta de 3,8 4,2 com o objetivo de manter as condies de pH vaginal, preservando
a flora normal feminina (GARCIA, et al., 2009).
O sabonete em barra, por sua vez, no contm o pH adequado para a regio nti-
ma. Mesmo os que se declaram neutros, em contato com a gua adquirem pH alcalino (pH
10,0 ou superior), uma vez retirado da embalagem, ele pode ficar exposto e mido, favore-
cendo a proliferao de microrganismos (GARCIA, et al., 2009).
Na formulao do sabonete foi utilizado o lauril ter sulfato de sdio como um
tensoativo aninico, a dietanolamida de cido graxo de coco como um sobreengordurante e
estabilizante de espuma, o cocoamidopropilbetana como um tensoativo anftero (GARCIA,
et al., 2009), a glicerina como um umectante, o EDTA como um agente quelante, o
chemynol como um agente conservante, o cloreto de sdio como um doador de viscosidade
para a formulao e a soluo de cido ctrico como um regulador de pH (FERREIRA, 2008).
No processo de extrao, a proporo da mistura de solventes utilizada depende
da estrutura qumica das substncias presentes na droga vegetal, classes qumicas (compostos
fenlicos, taninos, alcalides, dentre outros.) e partes da planta (folha, raiz, ramos, cascas) a
serem extradas (LEITE, 2009; TEIXEIRA, 2011).
A escolha do solvente a ser utilizado foi feita com base em estudos desenvolvidos
por Silva (2008) e Alves (2008) em trabalhos realizados para avaliao da atividade antimi-
crobiana de R. officinalis L.. Foi utilizada uma soluo hidroalcolica para extrao. Esses
solventes extraem a maioria das classes de compostos qumicos polares como flavonides,
taninos e alcalides, dentre outros (LEITE, 2009).
23

O extrato obtido, pelo processo de macerao, teve colorao marrom escuro, e


odor forte, caracterstico do alecrim. Segundo Silva, et al.(2007) o extrato obtido em seu tra-
balho foi de cor verde-oliva, com odor ctrico adocicado e sabor adstringente, levemente
amargo (TEIXEIRA, 2011).
Pelas determinaes fitoqumicas realizadas no extrato de R. officinalis L. foi de-
tectado a presena de flavonides. Segundo Favaro (2008), os flavonides so subdivididos
em 11 classes menores, sendo que as mais importantes so: flavanas, flavanonas, flavonas,
isoflavonas, flavonis e antocianinas.
A identificao dessas classes baseada em reaes coloridas em face do nmero
e posio das hidroxilas fenlicas presentes nos anis A e B do ncleo fundamental, utilizan-
do-se quase sempre a propriedade qumica dos compostos flavonodicos de formao de sais
que em meio bsico promovem a intensificao ou mesmo a modificao da cor de suas solu-
es (FALKENBERG; SANTOS; SIMES, 2001).
Para a identificao de flavonides no extrato de alecrim foram realizados quatro
testes, que consistiram das reaes com hidrxidos alcalinos, que apresentou colorao ama-
relo indicando presena de flavonides com hidroxilas fenlicas livres, reao com cloreto de
alumnio, que obteve uma fluorescncia amarelada, portanto, teste positivo para flavonas e
flavonis, reao de Shinoda (da cianidina) com desenvolvimento de colorao vermelha con-
firmando a presena de flavonis e por ltimo, reao com cloreto frrico, onde obteve uma
colorao verde escuro indicando presena de flavonis e flavanonas (Fotografias 2 e 3 ilus-
tram estas afirmaes).
Portanto, os resultados para os testes qualitativos indicam a presena de flavonis, fla-
vanonas, flavonas e flavonides com hidroxilas livres (Figura 1).

Figura 1 - Estrutura bsica das classes de flavonides identificadas no extrato de


R. Officinalis L..

O O O

OH
O O O
Flavanonas Flavonas Flavonis

Fonte: figuras criadas em programa de computador.


24

Fotografia 2- Foto da reao com hidrxidos alcalinos, reao de Shinoda (da cianidina)
e reao com cloreto frrico respectivamente.

Fonte: fotografia tirada pela prpria autora deste trabalho.

Fotografia 3 - Foto da reao com cloreto de alumnio

Fonte: fotografia tirada pela prpria autora deste trabalho.

Os flavonides so responsveis por atividades anti-inflamatrias e antimicrobia-


nas (BUSTAMANTE, 2010).
A natureza qumica complexa dos taninos dificulta sua identificao, razo pela
qual se usa para esse fim um conjunto de reaes, sendo que o resultado delas, isoladamente,
serve para caracterizar o grupo. A variao do aspecto e colorao dos precipitados formados
durante as mesmas vai depender da natureza e complexidade dos compostos tnicos presentes
na soluo. De maneira geral, os taninos so divididos em dois grandes grupos: os hidrolis-
veis e os condensados (MONTEIRO et al.,2005).
Os taninos hidrolisveis so passveis de serem degradados por hidrlise qumica
ou enzimtica nas vrias unidades estruturais que os compem. So constitudos por uma par-
te polialcolica (normalmente a glucose, mas tambm o cido qunico, outros fenis e outros
glicsidios) e por uma parte fenlica (e.g. o cido glhico) ligados atravs de uma ligao
ster.
25

Os taninos hidrolisveis podem ser divididos em taninos glhicos (galhotaninos),


em que a parte fenlica o cido glhico, e taninos elgicos (elagitaninos), em que a parte
fenlica o cido hexahidroxidifnico (que aps a hidrlise origina cido elgico). A penta-
galoilglucose (PGG) e a vescalagina so exemplos de taninos glhicos e elgicos, respectiva-
mente (Figura 2) (CARVALHO, 2007).

Figura 2- Estrutura de taninos hidrolisveis: A) tanino glhico (pentagaloilglucose),


B) taninos elgicos (vescalagina e castalagina).

Fonte: CARVALHO, 2007.


Os taninos condensados so polmeros constitudos por duas ou mais unidades de fla-
van-3-ol (Figura 3). Quando aquecidos em meio cido estes compostos originam antocianidi-
nas (reaco de Bate-Smith), da que tambm sejam conhecidos por proantocianidinas (Figura
4).
26

Figura 3 - Estrutura fundamental dos principais flavan-3-ois (flavonides) pre-


sentes na natureza.

Fonte: CARVALHO, 2007.

Figura 4- Estrutura de uma proantocianidina dimrica do tipo A (dmero A2).

Fonte: CARVALHO, 2007.

Os taninos so substncias fenlicas conhecidas por formarem complexos insol-


veis com protenas. Formam tambm complexos com alcalides e metais pesados e possuem
massa molecular entre 500 e 3000 daltons. Possuem propriedade secante, anti-inflamatria e
cicatrizante.
Plantas contendo taninos em geral so muito utilizadas tradicionalmente para o
tratamento de diversas enfermidades, tais como diarria, hipertenso arterial, reumatismo,
hemorragias, feridas, queimaduras, problemas gstricos, problemas renais, problemas do sis-
tema urinrio, processos inflamatrios em geral, alm de geralmente apresentarem atividade
antimicrobiana (MIGLIATO, 2009).
27

Os taninos so substncias geralmente txicas para fungos e bactrias devido a al-


gumas de suas propriedades como a inibio de enzimas extracelulares, privao de substrato,
inibio da fosforilao oxidativa, alm de mecanismos que envolvem privao de ferro.
Alm disto, a literatura revela a similaridade de ao dos taninos em comparao ao apresen-
tado pelos compostos fenlicos e bi-fenlicos sintticos, materiais estes largamente emprega-
dos como antisspticos na atualidade (SANCHES, 2004).
A identificao de taninos no extrato de alecrim foi realizada a partir da execuo
das reaes com gelatina, onde houve formao de um precipitado, indicando resultado posi-
tivo para taninos totais; reaes com sais de ferro, com presena de colorao cinza escuro,
resultado positivo para taninos hidrolisveis e condensados, reao com vanilina com resulta-
do negativo, pois no se observou o desenvolvimento de cor vermelha que indica a presena
de taninos condensados e por ltimo a reao com acetato de chumbo na qual houve formao
de um precipitado esbranquiado evidenciando assim a presena de taninos hidrolisveis (Fo-
tografia 4).

Fotografia 4- Foto da reao com gelatina, sais de ferro, vanilina e acetato de chumbo
respectivamente.

Fonte: fotografia tirada pela prpria autora deste trabalho.

O potencial antimicrobiano apresentado pelo extrato do R. officinalis L. pode estar


relacionado presena de taninos no mesmo, os quais apresentam ao antimicrobiana devido
sua capacidade de precipitar protenas (MONTEIRO, 2005).
Em estudos de atividade antimicrobiana de extratos brutos de espcies vegetais, o
potencial antimicrobiano, muitas vezes, no se deve a uma nica substncia, mas sim, a um
conjunto dessas. Um extrato bruto de uma espcie vegetal que tem efeito bactericida satisfat-
rio poderia no necessitar, portanto, de processos de isolamento de substncias ativas, redu-
28

zindo, assim, etapas qumicas e, consequentemente, custos financeiros. Isso viabiliza uma
possvel utilizao como fitoterpico (CUNHA, 2006). Por outro lado, geralmente os compos-
tos presentes em menor proporo na planta so os que apresentam melhores efeitos biolgi-
cos. A espcie R. officinalis L. (alecrim) apresentou-se positiva para taninos e flavonides,
confirmando sua caracterizao fitoqumica que registra para folhas a presena de taninos,
flavonoides (MATOS, 2000; LORENZI; MATOS, 2006).
Os resultados obtidos a partir do teste para determinao da atividade antimicro-
biana esto indicados na Tabela 3. Diante dos resultados obtidos pelo mtodo de difuso em
poo, a espcie vegetal (R. officinallis L.) avaliada apresentou potencial antimicrobiano para o
microrganismo testado C. albicans. Alguns trabalhos j foram realizados utilizando a mesma
espcie vegetal, dentre eles Cowan (1999) tambm mostrou a atividade antimicrobiana de R.
officinalis L. (alecrim).

Tabela 3- Atividade inibitria medida pelo tamanho do halo determinada pelo mtodo
de difuso em poo.
Dimetro dos halos de inibio (cm)
Anlises
F1 F2 Extrato
1 1,9 1,5 0,7
2 1,6 1,5 0,7
3 1,8 1,4 0,7
Mdia 1,77 1,47 0,7
Fonte: Resultados obtidos durante o experimento.

Verificou-se que o sabonete lquido sem o extrato (F2- branco) tambm provocou
inibio do crescimento microbiano (Fotografia 5). Isto pode ser justificado pela presena de
chemynol, o conservante utilizado na formulao que se trata de um agente conservante com
amplo espectro antimicrobiano (FERREIRA, 2008).
29

Fotografia 5 - Foto dos halos de inibio microbiana

Fonte: fotografia tirada pela prpria autora deste trabalho.

Realizou-se anlise estatstica entre os resultados de F1, F2 e o extrato e verificou-


se que os valores apresentam diferenas estatisticamente significativas ao nvel de 0,05, uma
vez que F(102,125) menor que F crtico (5,1432) (Tabela 4).

Tabela 4- Anlise estatstica entre os valores de halos de inibio apresentados por F1,
F2 e o extrato.
ANOVA
Fonte da varia-
o SQ gl MQ F valor-P F crtico
Entre grupos 1,815556 2 0,907778 102,125 2,32E-05 5,143249
Dentro dos gru-
pos 0,053333 6 0,008889

Total 1,868889 8
Fonte: Resultados obtidos durante o experimento.

Realizou-se tambm anlise estatstica entre os valores de halos de inibio apre-


sentados por F1 e F2. Os dados mostraram que houve diferenas estatisticamente significati-
vas (Tabela 5) entre os valores de halos, indicando que a adio do extrato influenciou na
ao antifngica apresentada pelo sabonete desenvolvido.
30

Tabela 5- Anlise estatstica entre os valores de halos de inibio apresentados por F1,
F2 e o extrato.
ANOVA
Fonte da varia-
o SQ gl MQ F valor-P F crtico
Entre grupos 0,135 1 0,135 10,125 0,033472 7,70865
Dentro dos gru-
pos 0,053333 4 0,013333

Total 0,188333 5
Fonte: Resultados obtidos durante o experimento.

5 CONSIDERAES FINAIS

A partir das anlises fitoqumicas qualitativas, observouse a presena de flavo-


nides (flavonas, flavonis e flavanonas) e taninos (hidrolisveis) no extrato hidroalcolico de
R. officinalis L., os quais podem influenciar na atividade antimicrobiana apresentada pelo
extrato do alecrim, uma vez que o potencial antimicrobiano de extratos vegetais, muitas ve-
zes, no se deve a uma nica substncia, mas sim, a um conjunto dessas.
A anlise microbiolgica revelou atividade antimicrobiana frente Candida albi-
cans pelo extrato, F1 e F2, mostrando o potencial do uso de sabonete ntimo na preveno
Candida albicans.
Como trabalho futuro, podemos avaliar o produto desenvolvido frente Candida
albicans em relao a um padro j estabelecido no mercado.
31

REFERNCIAS

ALEIXO NETO, A.; HAMDAN, J. S. e SOUZA, R. C.. Prevalncia de cndida na flora


vaginal de mulheres atendidas num servio de planejamento familiar. Rev. Bras. Ginecol.
Obstet.. 1999, v.21, n.8, p. 441-445. Disponvel em:<http://dx.doi.org/10.1590/S0100-
72031999000800003>. Acesso em: 23 Mai. 2012.

LVARES, C.A.; SVIDZINSKI, T.I.E. e CONSOLARO, M.E.L.. Candidase vulvovaginal:


fatores predisponentes do hospedeiro e virulncia das leveduras. J. Bras. Patol. Med. Lab..
2007, v.43, n.5, p. 319-327. Disponvel em:<http://dx.doi.org/10.1590/S1676
24442007000500004.> Acesso em: 23 Mai. 2012.

ALVES, P. M.; PEREIRA, J. V.; HIGINO, J. S.; PEREIRA, M. S. V.; QUEIROZ, L. M.


G.Atividade antimicrobiana e antiaderente in vitro do extrato de Rosmarinus officinalis linn.
(alecrim) sobre microrganismos cariognicos. Arquivos em Odontologia. v. 44, n. 2,
abril/jun, 2008.

ATTI-SANTOS, Ana Cristina et al . Physico-chemical evaluation of Rosmarinus officinalis


L. essential oils. Braz. arch. biol. technol., Curitiba, v. 48, n. 6, Nov. 2005 . Disponvel
em:<http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S151689132005000800020&lng
=en&nrm=iso>. Acesso em: 12 Mai. 2012.

BASTOS, A. M. C. ; BRAVO, R.S. ; GOULART FILHO, R. A. ; ISOLAN, T.B. ; BARRE-


TO, N.A. Perfil das mulheres com processo inflamatrio por candida em resultados de colpo-
citologia oncolgica numa clnica de dst. Jornal Brasileiro de Doenas Sexualmente
Transmissveis. Rio de Janeiro. v. 15, p. 26-38,2003.

BERGOLD, A., GEORGIADIS, S.. Novidades em frmacos antifngicos: uma reviso. Viso
Acadmica, v.5, n.2, p. 159-172. Disponvel em:
<http://ojs.c3sl.ufpr.br/ojs2/index.php/academica/article/view/562/470.> Acesso em: 23 Mai.
2012.

BLANCO, S. C. G. Efeito antimicrobiano do extrato bruto da pele de r-touro (Rana


Catesbeiana Shaw, 1802) sobre a acne vulgar uma alternativa para o desenvolvimento
local. Tese [Mestrado]. Centro Universitrio Augusto Motta. Rio de janeiro, p- 192-2009.

BOATTO, H. F. et al. Correlao entre os resultados laboratoriais e os sinais e sintomas


clnicos das pacientes com candidase vulvovaginal e relevncia dos parceiros sexuais na
manuteno da infeco em So Paulo, Brasil. Rev. Bras. Ginecol. Obstet.. 2007, v.29, n.2,
p. 80-84. Disponvel em:< http://dx.doi.org/10.1590/S0100-72032007000200004.> Acesso
em: 23 Mai. 2012.

BRUNETON, J. Farmagonosia, Fitoqumica. Plantas Medicinales. Ed.l ACRIBIA


S.A/Zaragosa, Espanha, 2. ed , 1099 pp., 2001.

BUSTAMANTE, K.G.L. et al . Avaliao da atividade antimicrobiana do extrato etanlico


bruto da casca da sucupira branca (Pterodon emarginatus Vogel) - Fabaceae. Rev. bras. plan-
tas med., Botucatu, v. 12, n. 3, set. 2010 . Disponvel em:
<http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1516-
05722010000300012&lng=pt&nrm=iso>. Acesso em: 22 Nov. 2012.
32

CARVALHO, E. B. Estudos da interao entre protenas e taninos: Influncia da pre-


sena de polissacardeos. Tese [Doutorado]. Departamento de Qumica. Faculdade de Cin-
cias da Universidade do Porto. 2007.

CENTRO UNIVERSITRIO DE PATOS DE MINAS. Manual para Normalizao de


Trabalhos Acadmicos. 4.ed. rev. ampl. Patos de Minas: UNIPAM, 2011. 48 p.

COWAN, M. M. Plant products as antimicrobial agents. Cli. Microbiol. Rev. Middletown,


v.12., n.4., p.564-582, 1999.

CUNHA, L. S. Avaliao da atividade antimicrobiana de extratos brutos de plantas do


cerrado,substancias isoladas e derivados semi sintticos frente a microrganismos bucais.
2006. 170 f. Dissertao (Mestrado em Cincias) Universidade de Franca, Franca, 2006.

FALKENBERG, M. B.; SANTOS, R. I.; SIMES, C. M. O. Introduo anlise fitoqu-


mica, in: SIMES, C. M. O.; SCHENKEL, E. P.; GOSMANN, G.; MELLO, J. C. P.;
MENTZ, L. A.; Petrovick, P. R. Farmacognosia da planta ao medicamento. 3. ed. Porto Ale-
gre/ Florianpolis: UFRGS/ UFSC, 2001. p. 229245.

FAVARO, Martha Maria Andreotti. Extrao, estabilidade e quantificao de


antocianinas de frutas tpicas brasileiras para aplicao industrial como corantes. 2008.
102 f. Dissertao (Mestrado em Qumica na rea de Qumica Analtica) Instituto de Qu-
mica, Universidade Estadual de Campinas. Campinas, 2008.

FERREIRA, A. O.. Guia Prtico da Farmcia Magistral. 3. ed. So Paulo-SP:


Pharmabooks, p. 139-140, 2008.

GARCIA, C. C.; GERMANO, C.; OSTI, N. M.; CHPRILLI, M. Desenvolvimento e avalia-


o da estabilidade fsico-qumica de formulaes de sabonete lquido ntimo acrescidas
de leo de melaleuca. 2009.

GARCIA, A. L.; SIQUEIRA, A. M. de. Isolamento, identificao e sorotipagem de candida


albicans a partir de secreo vaginal. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo. 1988, v.30, n.4, p. 270-
273. Disponvel em: <http://dx.doi.org/10.1590/S0036-46651988000400004.> Acesso em: 23
Mai. 2012.

GOODMAN & GILMAN. As Bases Farmacolgicas da Teraputica. 9a ed. Rio de Janeiro,


McGraw-Hill Interamericana editores. p.1436. 1996.

KOROLKOVAS A. Dicionrio Teraputico Guanabara. 2002/2003. 2002/2003 ed. Rio de


Janeiro, Guanabara Koogan.p.300. 2003

LEITE, J. P. V. Fitoterapia: bases cientficas e tecnolgicas. So Paulo, p. 328, 2009.

LIMA, I. O de.; OLIVEIRA, R de. A. G.; LIMA, E de. O.; FARIAS, N. M. P.; SOUZA, E. L
de. Atividade antifngica de leos essenciais sobre espcies de Cndida. Joo Pessoa-PB.
Abr./Jun. 2006.

LORENZI, H. ; MATOS, F. J. Plantas Medicinais no Brasil: Nativas e Exticas Cultiva-


das. Francisco Jos de Abreu Matos. Instituto Plantarum. Nova Odessa, 512 pp. 2006.
33

MATOS, F.J. de A. Plantas Medicinais - Guia de seleo e emprego de plantas usadas em


fitoterapia no nordeste do Brasil. 2.ed. Fortaleza: Imprensa Universitria UFC, 2000. 344p.

MAY, A. et al. Produo de biomassa e leo essencial de alecrim (Rosmarinus officinalis L.)
em funo da altura e intervalo entre cortes. Rev. bras. plantas med.. 2010, v.12, n.2, p. 195-
200. Disponvel em: <http://dx.doi.org/10.1590/S1516-05722010000200011.> Acesso em: 23
Mai. 2012.

MIGLIATO K. F. Syzygium cumini (L.) Skeels - Jambolo: estudo farmacognstico, oti-


mizao do processo extrativo, determinao da atividade antimicrobiana do extrato e
avaliao da atividade anti-sptica de um sabonete lquido contendo o referido extrato.
Dissertao [Mestrado]. Faculdade de Cincias Farmacuticas de Araraquara, UNESP; 2005.

MONTEIRO, J. M. et al . Taninos: uma abordagem da qumica ecologia. Qum. Nova, So


Paulo, v. 28, n. 5, Oct. 2005 . Disponvel em:
<http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S010040422005000500029&lng=en
&nrm=iso>. Acesso em: 22 Nov. 2012.

NATIONAL COMMITTEE OF CLINICAL LABORATORY STANDARDS (NCCLS). Per-


formance standards for antimicrobial disc susceptibility tests. WAYNE, 2000.

PACKER, J. F.; LUZ, M. M. S. Mtodo para avaliao e pesquisa da atividade


antimicrobiana de produtos de origem natural. Curitiba-PR. Jan./Mar. 2007.

PORTE, A. ; GODOY, R. L. O. Alecrim (Rosmarinus officinalis L.): Propriedades antimi-


crobiana e qumica do leo essencial. Boletim Centro de Pesquisa de Processamento de
Alimentos. Curitiba, v. 19, n. 2, p. 193-210 jul./dez., 2001.

SAITO, M. L.; SCRAMIN, S.. Plantas aromticas e seu uso na agricultura. Jaguarina:
Embrapa Meio Ambiente, 2000. 48p.

SANCHES, A.C.C. Estudo farmacognstico das cascas de Stryphnodendron obovatum


Benth., atividade antioxidante, antimicrobiana e da ao cicatrizante dos seus extratos.
Dissertao [Mestrado]. Faculdade de Cincias Farmacuticas de Araraquara, UNESP; 2004.

SILVA, C. R. G. et al. Presena de Candida nas mucosas vaginal e bucal e sua relao com
IgA salivar. Rev. Bras. Ginecol. Obstet. 2008, v.30, n.6, p. 300-305. Disponvel em:
<http://dx.doi.org/10.1590/S0100-72032008000600006>. Acesso em: 13 Abr. 2012.

SILVA, M de. S. A.; SILVA, M. A. R.; HIGINO, J. S.; PEREIRA, M. S. V. P.; CARVA-
LHO. A de. A. T. Atividade antimicrobiana e antiaderente in vitro do extrato de Rosma-
rinus offi cinalis Linn. sobre bactrias orais planctnicas. Recife-PE. Abr./Jun. 2007.

SOUZA, Tatiana M. et al., Avaliao da atividade anti-sptica de extrato seco de Stryphno-


dendron adstringens (Mart.) Coville e de preparao cosmtica contendo este extrato. Revista
Brasileira de Farmacognosia [online]. So Paulo, n.17, v.1, p.71-75. Jan./Mar. 2007.

TEIXEIRA, G. C. B., Desenvolvimento de sabonete ntimo utilizando o extrato de Rosma-


rinus officinalis. Patos de Minas, 2011. 26p.
34

VAL, I. C. C.; A. F., G. L. Abordagem atual da candidase vulvovaginal. Jornal Brasileiro


de Doenas Sexualmente Transmissveis. Rio de Janeiro. v. 13, p. 03-05,2001.

VEIGA JR, V. F. ; PINTO, A. C. ; MACIEL, M. A. M. . Plantas medicinais: Cura segura?.


Qumica Nova. So Paulo, v. 28, n. 3, mai./jun., 2005.

AGRADECIMENTOS

Agradeo a Deus por tudo, por ter me dado fora e sabedoria.


minha orientadora Prof Ma. Larissa Costa Keles de Almeida pelo apoio e ins-
pirao no amadurecimento dos meus conhecimentos e conceitos que me levaram a execuo
deste trabalho, agradeo sua disponibilidade, ateno e pacincia na orientao e incentivo
que tornaram possvel a concluso do mesmo.
co-orientadora Prof Ma. Vanessa Pereira Tolentino Felcio um muito obrigada
pelo tempo dedicado a mim e pelo acompanhamento no meu teste microbiolgico.
Prof Ma. Sandra Soares, obrigada por me disponibilizar o Laboratrio de Far-
macognosia para que eu pudesse realizar os estudos fitoqumicos.
Aos amigos do Laboratrio de Qumica, obrigada pelas amizades formadas e por
terem me recebido com carinho para que eu pudesse rotaevaporar meu extrato.

Isadora Cristina Gontijo Oliveira.